JP2002121199A - 新規ペプチドおよびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 安全性や呈味性の点で問題がなく、且つ経済
性をも満足することができ、食品として常時摂取するこ
とができ、しかも高血圧の予防乃至治療のためのＡＣＥ
活性阻害剤として有効に作用する有用な新規なペプチ
ド、およびこうしたペプチドを製造する為の有用な方法
を提供する。 【解決手段】 本発明の新規ペプチドは、（１）Ｖａｌ
−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ、（２）Ｖａｌ−Ｇ１ｕ−Ａ１ａ、
（３）Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐのいずれかのペプチド鎖
を有するものであり、このペプチドは上記のペプチド鎖
をペプチド構成成分として有する蛋白含有物質中の蛋白
質に、エンド型プロテアーゼとエキソ型ペプチダーゼを
組合わせて作用させ、前記蛋白質を加水分解することに
よって得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、アンギオテンシン
変換酵素に対して阻害剤として作用する新規ペプチド、
およびこの様なペプチドを製造する為の有用な方法に関
するものである。

【０００２】

【従来の技術】アンギオテンシン変換酵素（以下、「Ａ
ＣＥ」と略記する）は、肺血管内皮細胞膜、腎尿細管や
小腸の刷子縁膜に豊富に存在する他、生体内に広く分布
しており、血圧降下に影響を及ぼす重要な酵素として知
られている。即ち、この酵素は、アンギオテンシンＩ(A
sp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu)を、強力な
昇圧（血圧上昇）ペプチドであるアンギオテンシンIIに
変換する作用を有するとともに、降圧（血圧降下）ペプ
チドであるブラジキニンを不活性化する作用を有し、こ
れによって血圧を上昇させるものである。従って、ＡＣ
Ｅの酵素活性を阻害する物質（以下、「ＡＣＥ活性阻害
剤」と呼ぶ）は、血圧上昇を抑制するものと考えられ
る。

【０００３】ところで、急速に進む高齢化社会の中で、
循環器系の疾患の予防が急務とされ、高血圧症はその引
き金となることから、高血圧症の予防乃至治療のため
に、上記ＡＣＥ活性阻害剤の研究開発が要望されてい
る。特に、高血圧症は、食塩摂取量の多い日本人にとっ
て最も罹患率の高い疾患の一つであり、その予防乃至治
療のために有効なＡＣＥ活性阻害剤の開発が切望されて
いる。

【０００４】ＡＣＥ活性阻害剤としては、例えばカプト
プリル等の合成物質が知られており、既に医薬品として
実用化されている。またＡＣＥ活性阻害剤の新しい合成
研究も盛んに進められている。しかしながら、こうした
合成物質では、毒性や安全性の点で不明な点も多く、こ
うした問題が生じないことが予想される天然物由来のＡ
ＣＥ活性阻害剤の開発も検討されている。

【０００５】上記の様な天然物由来のＡＣＥ活性阻害剤
としては、蛇毒ペプチドが知られているが、ＡＣＥに対
する阻害作用が弱く実用的ではないという問題がある。
こうしたことから、各種の天然物（特に天然蛋白質）を
原料とした有効成分の検索が様々行なわれている。

【０００６】こうした技術として、例えば特開平６−１
１９１号や特開昭６０−２３０８６号等には、牛乳や牛
等のカゼイン由来のペプチドがＡＣＥ活性阻害剤として
開示されており、特開平４−２８２４００号には、乳清
タンパク質由来のペプチドがＡＣＥ活性阻害剤として開
示されている。また、特開平５−１１２４６５号や特公
平７−１１６２３３号には、鰹節や鰯由来のペプチドが
ＡＣＥ活性阻害剤として開示されており、特公平７−１
１９２３４号には、オキアミ由来のペプチドがＡＣＥ活
性阻害剤として開示されている。更に、特公平７−１１
９２３４号には、鮪や鯖由来のペプチドがＡＣＥ活性阻
害剤として開示されている。とりわけ魚肉は日本人に馴
染み深いものであるが、こうした魚肉を原料としたペプ
チドでは呈味面での問題がある。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明はこうした状況
の下でなされたものであって、その目的は、安全性や呈
味性の点で問題がなく、且つ経済性をも満足することが
でき、食品として常時摂取することができ、しかも高血
圧の予防乃至治療のためのＡＣＥ活性阻害剤として有効
に作用する有用な新規なペプチド、およびこうしたペプ
チドを製造する為の有用な方法を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成し得た本
発明のペプチドとは、下記（１）〜（３）のいずれかの
アミノ酸配列を有するものである。 （１）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ （２）Ｖａｌ−Ｇ１ｕ−Ａ１ａ （３）Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ

【０００９】尚、上記において、Ｖａｌはバリン、Ｇｌ
ｕはグルタミン酸、Ｍｅｔはメチオニン、Ａ１ａはアラ
ニン、Ｌｅｕはロイシン、Ｔｒｐはトリプトファンを夫
々意味し、これらのアミノ酸はいずれも立体構造がＬ体
である。

【００１０】上記の様なペプチドを製造するに当たって
は、上記（１）〜（３）のいずれかのペプチド鎖をペプ
チド構成として有する蛋白含有物質中の蛋白質に、エン
ド型プロテアーゼとエキソ型ペプチダーゼを組合わせて
作用させ、前記蛋白質を加水分解する様にすれば良い。

【００１１】また、上記本発明の製造方法において、原
料として用いる蛋白含有物質としては、（ａ）魚肉、
（ｂ）鰹節、（ｃ）鰹煮汁等が挙げられる。

【００１２】更に、本発明のペプチドは、安全性や呈味
性の点で問題がなく、食品として常時摂取することがで
きるので、こうしたペプチドを含有させた食品として有
用に使用できる。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明者らは、多種の天然資源に
ついてこれを素材とし、ＡＣＥ活性阻害剤となり得るペ
プチドの開発について様々な角度から検討した。その結
果、日本人に馴染み深い魚肉、特に鰹節や鰹煮汁を或る
種の酵素を組み合わせて加水分解すれば、上記目的に適
う優れたＡＣＥ活性阻害を有する新規なペプチドを見出
し、本発明を完成するに至った。

【００１４】本発明に係る新規ペプチドは、そのアミノ
酸配列に基づいて、各アミノ酸を順次ペプチド結合反応
させたり、適当な複数のフラグメントを合成後、これら
を結合させる慣用的な化学合成法（液相法や固相法）に
よっても製造できるが、より好ましくは、これらのペプ
チド鎖をペプチド構成として有する蛋白質原料（蛋白含
有物質）をエンド型プロテアーゼとエキソ型ペプチダー
ゼを組み合わせて作用させ、含有する蛋白質を加水分解
する方法（酵素処理法）によって製造するのが良い。

【００１５】上記の様な酵素処理法において、原料とし
て用いる蛋白含有物質は、魚肉が代表的なものとして挙
げられるが、これに限らず本発明のアミノ酸配列（ペプ
チド鎖）をペプチド構成として有するものであれば、有
効に利用することができる。また、魚肉の中でも特に鰹
節（宗田鰹節も含む）は風味や呈味性の面で好ましい蛋
白質含有物質である。更に、鰹を缶詰や鰹節等に加工す
るときの加熱殺菌時に生じる煮汁（即ち、鰹煮汁）も安
価な蛋白質含有物質として有用である。

【００１６】次に、本発明のペプチドを酵素処理法によ
って製造する手順について説明する。原料としての蛋白
含有物質は、使用目的により加工処理された後各種固液
分離法により固形部分と液部分とに分画される。例え
ば、だし原料である鰹節の場合には、熱水抽出後、各種
の固液分離法により抽出液画分と不溶性の残渣画分に分
別される。或は、鰹節の香気成分の抽出に行われるアル
コール抽出後、各種の固液分離法により香気成分を含む
アルコール抽出画分と残渣画分に分別される。一方、か
つお煮汁を用いる場合には、目的に応じて、精製・濃縮
されるが、各段階で水溶性画分と非水溶性画分とに分別
される。

【００１７】本発明方法では、上記の様にして得られた
残渣画分若しくは非水溶性画分（以下、残渣画分で代表
する）に、エンド型プロテアーゼとエキソ型ペプチダー
ゼを組み合わせて作用させ、残渣画分中に含まれる蛋白
質を加水分解することによって、本発明ペプチドを豊富
に生成させることができる。但し、本発明方法では上記
手順に限らず、蛋白含有物質に対して固液分離を行なわ
ずにエンド型プロテアーゼとエキソ型ペプチダーゼを組
み合わせて作用させ、本発明ペプチドを生成させた後固
液分離を行ない、その後不溶性残渣を除去する様にして
も良い。

【００１８】蛋白含有物質から分別された残渣画分は、
必要に応じて水を加えた後、ＨＣ１等の酸やＮａＯＨ等
のアルカリによってｐＨを該酵素の至適範囲内に調整さ
れ、最初にエンド型プロテアーゼを加え、０．２５〜４
時間後、好ましくは、０．４〜１．５時間程度反応させ
る。その後、必要に応じて酸またはアルカリによってｐ
Ｈを次に添加するエキソ型ペプチダーゼの至適範囲内に
調整し、エキソ型プロテアーゼを加え、酵素反応を２〜
７２時間、好ましくは３〜２４時間行なう。このときの
反応温度は、該酵素の至適温度の範囲で実施する。酵素
反応終了後、９０℃で０．５〜１５分程度加熱すること
により酵素を失活させる。

【００１９】ところで、各種の固液分離操作によって溶
液部分を得ることができるが、これらの溶液部分は単独
でまたは最初の抽出液画分と混合して、本発明のペプチ
ドを豊富に含む原料溶液として利用できる。一方、同様
に、蛋白含有物質に対して固液分離を行なわずに、エン
ド型プロテアーゼとエキソ型ペプチダーゼを作用させて
から酵素を失活し、その後固液分離を行なって残渣を除
去し、得られた溶液部分画分も本発明のペプチドを豊宮
に含むので、有効に利用することができる。このとき生
成した残渣画分は更に蛋白質分解酵素を加えて加水分解
を行ない、固液分離した後その溶液部分を利用すること
もできる。また同様の操作を繰り返すこともできる。

【００２０】本発明で使用するエンド型プロテアーゼと
しては、例えばアルカラーゼ（商品名：ノボノルディス
クバイオインダストリー社製）を初め、Neutrase（商品
名：ノボノルディスクバイオインダストリー社製）、各
種オリエンターゼ（商品名：阪急共栄物産製）、ヌクレ
イシン（商品名：阪急共栄物産製）、ニューラーゼＦ、
プロテアーゼＳ「アマノ」、プロテアーゼＮ「アマ
ノ」、プロレザーＦＧ−Ｆ、パパインＷ−４０（商品
名：いずれも天野製薬製）、プロチンＡ（商品名：大和
化成製）等が挙げられる。このエンド型プロテアーゼ
は、蛋白質内部のペプチド結合に作用し、これを断片化
する酵素であり、こうした酵素をまず作用させることに
よって、蛋白質の堅固で長鎖のアミノ酸配列が柔軟でよ
り短鎖なアミノ酸配列に変わり、次段階の酵素反応を容
易にするものである。

【００２１】一方、本発明で使用するエキソ型ペプチダ
ーゼとしては、例えばウマミザイム、プロテアーゼＭ
「アマノ」、ペプチダーゼＲ（商品名：いずれも天野製
薬製）、プロチンＡ（大和化成製）等が挙げられる。こ
のエキソ型ペプチダーゼは、ペプチドのＮ末端またはＣ
末端に作用し、末端アミノ酸若しくはペプチドを逐次遊
離する酵素であり、こうした酵素を作用させることによ
って、多数の低分子量のペプチドが生成し旨味と溶解成
分量を増大することになる。即ち、エンドプロテアーゼ
とエキソペプチダーゼの適切な組合せを反応条件として
選択することによって、苦味が少なく旨味の多い呈味性
に優れた酵素分解物を得ることができるのである。

【００２２】尚、フレーバーザイム（ノボノルディスク
バイオインダストリー社製）、プロテアーゼＡ「アマ
ノ」Ｇ、プロテアーゼＰ「アマノ」（商品名：いずれも
天野製薬製）等のように、エンド型プロテアーゼとエキ
ソ型ペプチダーゼの混在した複合型蛋白質分解酵素は、
単独でもまた必要に応じてエンド型プロテアーゼまたは
エキソ型ペプチダーゼを更に加えて、使用することがで
きる。

【００２３】上記の様な酵素によって処理して得られる
溶液は、本発明のペプチドを豊富に含んだものとなり、
このペプチドは優れたＡＣＥ活性阻害を有するため、そ
のままでＡＣＥ活性阻害剤として利用することもでき
る。上記溶液より常法に従って、遠心分離、抽出、濃
縮、乾固、限外濾過、塩析、エチルアルコール沈殿、各
種クロマトグラフィー操作（イオン交換、ゲル濾過、逆
相、順相、アフィニティ等）等を行うことにより、単離
精製することができ、この精製された形態でＡＣＥ活性
阻害剤として利用することもできる。

【００２４】上記の如くして得られる本発明のペプチド
は、（１）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ、（２）Ｖａ１−Ｇ
１ｕ−Ａｌａ、（３）Ａ１ａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ（但し、
Ｖａｌ：バリン、Ｇ１ｕ：グルタミン酸、Ｍｅｔ：メチ
オニン、Ａｌａ：アラニン、Ｌｅｕ：ロイシン、Ｔｒ
ｐ：トリプトファンを夫々示す）で表されるアミノ酸配
列を有する新規なペプチドであり、そのアミノ酸配列に
基いて、特有のＡＣＥ活性阻害を有している。

【００２５】ＡＣＥ活性阻害特性は、例えばCushmanの
方法〔D.W.Cushman,H.S.Cheung，Biochemical，Pharmac
ology,20,1637,(1971)〕を改良した斉藤らの方法［斎藤
義幸、今安聰，日本農芸化学会誌，Vol.66,No.7,1081,
(1992)］に従って求められる。即ち、前記ペプチドを含
む試料６０μｌと、０．１Ｕ／ｍｌのＡＣＥ溶液（シグ
マ社製）３０μＩを、予め３７℃で３分間インキュベー
トし、これに基質として０．１Ｍホウ酸緩衝液（０．３
ＭＮａＣｌを含む、ｐＨ８．３の溶液）を用いて６．５
ｍＭに調整したＨｉｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（シグマ社製）
３００μｌを添加して反応を開始させ、３７℃で６０分
間反応後、反応物中に１Ｎ−ＨＣ１：２５０μｌを加え
て反応を停止させる。次いで、酢酸エチル１．５ｍｌを
加えて１５秒間攪拌する。更に、３０００回転で１０分
間遠心して酢酸エチル層１．０ｍｌを採取し、蒸発乾固
後、１Ｍ−ＮａＣ１水溶液３．０ｍｌを加え、抽出され
たヒプリル酸の２２８ｎｍにおける吸光度を測定し、こ
れをＡＣＥ活性阻害特性とした。このとき、盲検として
は、ＡＣＥ溶液を加える前に、１Ｎ−HＣ１を加え同様
に処理したものを用いた。また、ＡＣＥ活性阻害率を下
記式より算出した。 ＡＣＥ活性阻害率（％）＝〔（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）］
×１００（％） Ａ：試料の代わりに蒸留水を添加した場合の２２８ｎｍ
の吸光度 Ｂ：試料を添加した場合の２２８ｎｍの吸光度 Ｃ：反応開始前に予め１Ｎ−ＨＣ１を添加した場合の２
２８ｎｍ吸光度

【００２６】またペプチド量の測定は、Lowryらの方法
［O.H.Lowry,N.J.Rosenbrough,A.L.Randall,Journal of
Biological Chemistry,193,265,(1951)］に従って行な
った。検量線は、牛血清γグロブリン（和光純薬工業社
製）を用い作成した。ＡＣＥ活性阻害率は、「ＩＣ５
０」を用いて表すものとし、このＩＣ５０の値は、上記
測定法において、ＡＣＥの酵素活性を５０％阻害するに
必要な試料の濃度を示している。

【００２７】本発明のペプチドは、安全性や呈味性の点
で問題がなく、食品として常時摂取することができるの
で、こうしたペプチドを含有させた食品形態として使用
できるものであるが、こうしたペプチドを有効成分とし
て含有する医薬製剤としても有効に使用できるものであ
る。

【００２８】医薬製剤の形態で本発明のペプチドを使用
する場合には、通常、適当な製剤担体を用いて、常法に
従い適宜の医薬製剤組成物の形態に調製されて実用化で
きる。この製剤担体としては、製剤の使用形態に応じ
て、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、
崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤や、賦形剤を例
示でき、これらは得られる製剤の投与単位形態に応じて
適宜選択使用できる。

【００２９】医薬製剤の投与形態は、各種の形態が治療
目的に応じて選択でき、その代表なものとしては錠剤、
丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル
剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）等が挙げられる。
錠剤の形態に成形するに際しては、上記製剤担体として
例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、
デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロー
ス、ケイ素、リン酸カリウム等の賦形剤、水、エチルア
ルコール、プロピルアルコ−ル、単シロップ、ブドウ糖
液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセル
ロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロ
ース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロー
ス、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン
末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウ
ム等の崩壊剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エ
ステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノ
グリセリド等の界面活性剤、白糖、ステアリン、カカオ
バター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウ
ム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリ
セリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリ
ン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製
タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリ
コール等の滑沢剤等を使用できる。錠剤には、必要に応
じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン
被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二
重錠、多層錠とすることができる。

【００３０】丸剤の形態に成形するに際しては、製剤担
体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、
硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴ
ム末、トラガント末、ゼラチン、エチルアルコール等の
結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用でき
る。坐剤の形態に成形するに際しては、製剤担体として
例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコ
ール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成
グリセライド等を使用できる。カプセル剤は、常法に従
い通常本発明の有効成分化合物を上記で例示した各種の
製剤担体と混合して硬質ゼラチンカプセル、軟質ゼラチ
ンカプセル等に充填して調整される。また、必要に応じ
て着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬
品を含有させることもできる。

【００３１】医薬製剤の形態が液剤、乳剤、懸濁剤等の
注射剤として調製される場合には、これらは殺菌され且
つ血液と等張であるのが好ましく、その一形態に調製す
るに際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコー
ル、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化
イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリ
ルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エ
ステル類等を使用できる。尚、この場合等張性の溶液を
調整するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリ
ンを医薬製剤中に含有させてもよく、また通常の溶解補
助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。

【００３２】医薬製剤の形態で本発明のペプチドを使用
する場合に、該薬剤中に含有されるべき有効成分（ペプ
チド）の量は、特に限定されず適宜選択されるが、通常
０．１〜６０重量％程度が適当である。

【００３３】上記医薬製剤の投与方法は、特に制限がな
く、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾
患の程度等に応じて決定される。例えば錠剤、丸剤、液
剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤は経口投与さ
れ、注射剤は単独でまたはブドウ糖、アミノ酸等の通常
の補液と混合して静脈内投与され、更に必要に応じて単
独で筋肉内、皮内、皮下若しくは腹腔内投与され、坐剤
は直腸内投与される。

【００３４】医薬製剤としての投与量は、その用法、患
者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度により適宜選
択されるが、通常有効成分である本発明ペプチドの量
が、１日当り体重１ｋｇ当り約０．５〜２０mg程度が適
当であり、該製剤は１日に１〜４回に分けて投与するこ
とができる。

【００３５】一方、本発明のペプチドを食品形態として
実用化するに当たっては、適当な可食素材を用いて、一
般的方法に従い、例えば固形剤、液剤等の適当な各種食
品形態に賦形することができ、また通常の食品素材や加
工食品中にはその適当量を添加することもできる。その
摂取量は、特に限定されず、前記医薬製剤での投与量を
目安として適宜決定できる。このとき用いる固形剤とし
ては、だし製品、和風調味料、即席味噌汁、和風スー
プ、飲料等が挙げられ、液剤としては、液体だし、めん
つゆ類、液体調味料、和風スープ、液体飲料等が挙げら
れる。また、うどん、そば、スパゲッテイ等の小麦粉を
原料とする素材へ練り込むことや、魚肉等の練製品、各
種焼菓子、カレーを始めとしたレトルト製品等へ適量添
加することもできる。

【００３６】医薬製剤および食品形態で本発明のペプチ
ドを使用することによって、そのＡＣＥ活性阻害作用に
よって、血圧降下、ブラジキニン不活性化抑制等の効果
を発揮するので、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高
血圧等の各種高血圧の予防乃至治療に有効である。ま
た、本発明のペプチドは、これら疾患の診断や病態の治
療等に用いられる血圧降下剤、狭心症発作の閾値上昇、
心筋梗塞の減少、鬱血性心不全改善剤、糖尿病治療食等
としても利用できる。

【００３７】次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、下記実施例は本発明を限定する性質のもので
はなく、前・後記の趣旨に徴して設計変更することはい
ずれも本発明の技術的範囲に含まれるものである。

【００３８】

【実施例】実施例１ 鰹節１０ｇに水９０ｍｌを加えて十分ホモジナイスし、
１００℃で１５分間煮沸後、放置した。その後、ＮａＯ
ＨでｐＨを８．０に調整した後、ノボノルディスクバイ
オインダストリー社製のエンド型プロテアーゼであるア
ルカラーゼ［フードグレード（商品名）］を３５ｍｇ添
加し、５５℃で０．５時間加水分解を行なった。

【００３９】引き続き、ノボノルディスクバイオインダ
ストリー社製のエンド型プロテアーゼとエキソ型ペプチ
ダーゼが混在する複合型酵素であるフレーバーザイム
（商品名）を１００ｍｇ添加し、５５℃で１６時間酵素
反応を行なった。その後、９０℃で５分間加熱して酵素
を失活させた。

【００４０】冷却後遠心分離して不溶性残渣部分を除去
し、溶液部分を濃縮し、高速液体クロマトグラフィー
（イオン交換、ゲル濾過、ｐｈ−、ＣＨ−、およびＯＤ
Ｓ−カラム）によりペプチドを得た。更に、精製・単離
し、単一物質である３つのピークを確認した。単離され
た３つの物質を、気相プロテインシーケンサー（パーキ
ンエルマー社製）を用い自動エドマン分解法を適応して
アミノ酸配列を分析し下記の構造を得た。 配列番号１．Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ 配列番号２．Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｌａ 配列番号３．Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ 配列番号１〜３の各ペプチドにおけるＡＣＥ活性阻害率
を前記した方法で測定した。得られた３つのペプチドを
別途に化学合成し、その挙動、活性等をＯＤＳカラムを
用いて比較検討した。その結果、合成されたペプチドは
上記で得られたペプチドとほぼ同一であることが確認で
きた。その結果を、下記表１に示す。

【００４１】

【表１】

【００４２】実施例２ 鰹煮汁１００ｍｌを十分ホモジナイズし、１００℃で１
５分間煮沸後放置した。ＮａＯＨでｐＨ８．０に調整し
た後、エンド型プロテアーゼであるプロテアーゼＳ（商
品名：天野製薬製）を１０ｍｇ加え、４５℃で３時間加
水分解した。引き続き、エキソ型ペプチダーゼであるウ
マミザイム（商品名：天野製薬製）を２０ｍｇ加えて、
５０℃で６時間酵素反応を行った。

【００４３】９０℃で１５分問加熱し酵素を失活させた
後、冷却し遠心分離により不溶性残渣部分を除去し溶液
部分を濃縮し、以下実施例１と同様にして３つのペプチ
ドを精製・単離した。得られた３つのペプチドは、上記
の配列番号１〜３のものであることを確認した。

【００４４】実施例３ 鰹節１０ｇを粉砕した後、水９０ｍｌを加え、９７℃で
３０分間加熱した。冷却後遠心分離して抽出液と残渣部
分とに分離した。残渣部分に水８０ｍｌを加えた後、Ｎ
ａＯＨを添加することによってｐＨ８．０に調整し、ア
ルカラーゼ（商品名：ノボノルディスクバイオインダス
トリー社製）を３０ｍｇ添加し、５５℃で０．５時間反
応させた。

【００４５】引き続き、フレーバーザイム（商品名：ノ
ボノルディスクバイオインダストリー社製）を７０ｍｇ
添加し、５５℃で８時間加水分解した。９０℃で５分間
加熱し、酵素を失活させた後、冷却し遠心分離により不
溶性部分を除去し、溶液部分を濃縮後、実施例１と同様
にしてペプチドを精製・単離した。得られた３つのペプ
チドは、上記配列番号１〜３のものであることを確認し
た。

【００４６】実施例４ ５０メッシュ以下に粉砕した鰹節１０ｇに、７０％エチ
ルアルコールを６０ｍ１加えて１２時間放置した。圧搾
濾過によりエチルアルコール抽出液と残渣部分とに分別
した。残渣部分に水８０ｍｌを加えた後、ＮａＯＨ添加
によりｐＨ８．０に調整した後、プロテアーゼＳ（商品
名：天野製薬製）を６０ｍｇ加えて５０℃で４時間加水
分解した。

【００４７】更に、ウマミザイム（商品名：天野製薬
製）を５ｍｇ加えて６時間反応を行なった。９０℃で１
５分間加熱し、酵素を失活させた後、冷却し遠心分離に
より不溶性部分を除去し、溶液部分を濃縮し、実施例１
と同様にして３つのペプチドを精製・単離した。得られ
た３つのペプチドは、配列番号１〜３であることを確認
した。

【００４８】実施例５ 実施例３の条件に従い、鰹節１ｋｇを粉砕後９リットル
の水を加え、９７℃で３０分間加熱した。冷却後遠心分
離し、抽出液（Ａ）と残渣部分（Ｂ）に分離した。

【００４９】残渣部分（Ｂ）に水８リットルを加えた
後、ＮａＯＨを添加してｐＨ８．０に調整し、アルカラ
ーゼ（商品名：ノボノルディスクバイオインダストリー
社製）を３ｇ添加し、５５℃で０．５時間反応させた。

【００５０】引き続き、フレーバーザイム（商品名：ノ
ボノルディスクバイオインダストリー社製）を７ｇ添加
し、５５℃で８時間加水分解した。９０℃で５分間加熱
し、酵素を失活させた後、冷却し遠心分離により不溶性
部分を除去した。

【００５１】得られた酵素抽出液と前記抽出液（Ａ）と
を混合して、蛋白質濃度が３．０％の鰹節抽出液（Ｃ）
を１５リットル得た。得られた抽出液（Ｃ）には、上記
の３つのペプチドが豊富に含まれてることを確認した。

【００５２】上記抽出液（Ｃ）１リットルを、凍結乾燥
して蛋白質濃度が約８５％の粉末品３５ｇを得た。この
凍結乾燥粉末３５ｇに対して、グルタミン酸ナトリウム
粉末１０５ｇおよびイノシン酸１０ｇを加えて十分に混
合した。この混合物は、良好な鰹の香りのする澄明で旨
味に富んだだし調味料粉末品であった。

【００５３】次に、上記抽出液（Ｃ）７０ｍｌに対して
醤油２００ｍｌ、みりん２００ｍｌ、水１リットルを加
えて十分に攪拌し、弱火で煮、一煮立ちさせめんつゆ液
を調合した。得られためんつゆ液は、香りとだしの良く
効いた美味しいめんつゆであった。

【００５４】

【発明の効果】本発明は以上の様に構成されており、安
全性や呈味性の点で問題がなく、且つ経済性をも満足す
ることができ、食品として常時摂取することができ、し
かも高血圧の予防乃至治療のためのＡＣＥ活性阻害剤と
して有効に作用する有用な新規なペプチドが得られた。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） // Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｐ 9/12 Ａ６１Ｐ 9/12 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 伊藤 光史 福井県小浜市福谷25−13−２ 大学福谷公 舎101 Ｆターム(参考） 4B018 LE05 MD20 MD74 ME04 MF12 4B064 AG21 CA21 CC03 CD21 DA01 4C084 AA02 AA07 BA15 ZA422 ZC172 4H045 AA10 AA20 AA30 BA12 CA52 DA57 EA23 FA16 GA15 GA23 GA25

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔよりなる新規ペ
   プチド。
2. 【請求項２】 Ｖａｌ−Ｇ１ｕ−Ａ１ａよりなる新規ペ
   プチド。
3. 【請求項３】 Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐよりなる新規ペ
   プチド。
4. 【請求項４】 請求項１〜３のいずれかに記載のペプチ
   ド鎖をペプチド構成成分として有する蛋白含有物質中の
   蛋白質に、エンド型プロテアーゼとエキソ型ペプチダー
   ゼを組合わせて作用させ、前記蛋白質を加水分解するこ
   とを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の新規ペ
   プチドの製造方法。
5. 【請求項５】 蛋白含有物質として魚肉を使用する請求
   項４記載の製造方法。
6. 【請求項６】 蛋白含有物質として鰹節を使用する請求
   項４記載の製造方法。
7. 【請求項７】 蛋白含有物質として鰹煮汁を使用する請
   求項４記載の製造方法。
8. 【請求項８】 請求項１〜３にいずれかに記載のペプチ
   ドを含有する食品。