JP2002102340A - 過酸化脂質吸着材 - Google Patents
過酸化脂質吸着材Info
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- JP2002102340A JP2002102340A JP2000298993A JP2000298993A JP2002102340A JP 2002102340 A JP2002102340 A JP 2002102340A JP 2000298993 A JP2000298993 A JP 2000298993A JP 2000298993 A JP2000298993 A JP 2000298993A JP 2002102340 A JP2002102340 A JP 2002102340A
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- ldl
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Abstract
(57)【要約】
【課題】体液中の有効成分をほとんど失うことなく選択
的に酸化ＬＤＬを吸着しうる吸着材を提供する。 【解決手段】アルキル基の炭素数が２〜１６であるアル
キル化ポリアルキレンイミンを支持体に付与した吸着材
は酸化ＬＤＬを選択的に吸着するため、体液中の他の成
分をほとんど損なうことなく、酸化ＬＤＬを取り除くこ
とができる。
的に酸化ＬＤＬを吸着しうる吸着材を提供する。 【解決手段】アルキル基の炭素数が２〜１６であるアル
キル化ポリアルキレンイミンを支持体に付与した吸着材
は酸化ＬＤＬを選択的に吸着するため、体液中の他の成
分をほとんど損なうことなく、酸化ＬＤＬを取り除くこ
とができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は酸化低密度リポ蛋白
質（酸化ＬＤＬ）の吸着材に関するものである。さらに
詳しくは体液中より酸化ＬＤＬを選択的に除去し、動脈
硬化症の諸症状の軽減または進展を抑えるための吸着材
に関するものである。
質（酸化ＬＤＬ）の吸着材に関するものである。さらに
詳しくは体液中より酸化ＬＤＬを選択的に除去し、動脈
硬化症の諸症状の軽減または進展を抑えるための吸着材
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】動脈硬化症とは、動脈壁の肥厚を示し、
かつ弾力を失い硬化をきたした病変の総称であり、その
なかでも、頻度がずば抜けて高く、かつ重要な疾患が粥
状動脈硬化症であり、一般的にも動脈硬化症といえば粥
状動脈硬化症を意味することが多い。粥状動脈硬化巣の
形成に重要な役割を果たしているのが、過酸化脂質であ
る。その中でも、特に酸化ＬＤＬは様々な生物作用をも
っており、内皮細胞から一酸化窒素（ＮＯ）産生を抑制
するなどの作用以外にも、単球を内皮下に遊送、集積さ
せ、そのものをマクロファージとさせ、酸化ＬＤＬそれ
自身を取り込み泡沫細胞とさせ、動脈壁のプラーク形成
を促進するほか、内皮細胞や平滑筋細胞傷害を促進する
など、動脈硬化の発症、進展に重要な役割を果たしてい
る。従って、血中から過酸化脂質、特に酸化ＬＤＬを除
去することが望ましい。
かつ弾力を失い硬化をきたした病変の総称であり、その
なかでも、頻度がずば抜けて高く、かつ重要な疾患が粥
状動脈硬化症であり、一般的にも動脈硬化症といえば粥
状動脈硬化症を意味することが多い。粥状動脈硬化巣の
形成に重要な役割を果たしているのが、過酸化脂質であ
る。その中でも、特に酸化ＬＤＬは様々な生物作用をも
っており、内皮細胞から一酸化窒素（ＮＯ）産生を抑制
するなどの作用以外にも、単球を内皮下に遊送、集積さ
せ、そのものをマクロファージとさせ、酸化ＬＤＬそれ
自身を取り込み泡沫細胞とさせ、動脈壁のプラーク形成
を促進するほか、内皮細胞や平滑筋細胞傷害を促進する
など、動脈硬化の発症、進展に重要な役割を果たしてい
る。従って、血中から過酸化脂質、特に酸化ＬＤＬを除
去することが望ましい。
【０００３】これまで、動脈硬化症を治療する方法とし
ては外科的に狭窄した血管を押し広げたり、薬剤を用い
てＬＤＬの代謝を阻害したりするものしかなかった。前
者は、侵襲度が高く、また動脈硬化症の進展予防はでき
ない。後者はＬＤＬの代謝異常のない動脈硬化症患者に
は有効ではないという問題点があった。
ては外科的に狭窄した血管を押し広げたり、薬剤を用い
てＬＤＬの代謝を阻害したりするものしかなかった。前
者は、侵襲度が高く、また動脈硬化症の進展予防はでき
ない。後者はＬＤＬの代謝異常のない動脈硬化症患者に
は有効ではないという問題点があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題を
解決するために体液中の有効成分をほとんど失うことな
く選択的に酸化ＬＤＬを吸着しうる吸着材を提供するも
のである。
解決するために体液中の有効成分をほとんど失うことな
く選択的に酸化ＬＤＬを吸着しうる吸着材を提供するも
のである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、支持体
にアルキル基の炭素数が２以上、１６以下であるアルキ
ル化ポリアルキレンイミンが付与されていることを特徴
とする過酸化脂質吸着材によって達成される。
にアルキル基の炭素数が２以上、１６以下であるアルキ
ル化ポリアルキレンイミンが付与されていることを特徴
とする過酸化脂質吸着材によって達成される。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明についてさらに詳細
に説明する。
に説明する。
【０００７】本発明の吸着材は、支持体に酸化ＬＤＬと
選択的な親和性をもつアルキル化ポリアルキレンイミン
が付与されてなることを特徴とするものである。
選択的な親和性をもつアルキル化ポリアルキレンイミン
が付与されてなることを特徴とするものである。
【０００８】高脂血症の患者の場合には血中のＬＤＬ量
が多いため、ＬＤＬを除去してやることにより動脈硬化
の進展予防などに有効であるが、透析患者や心疾患を有
する患者の場合は、血中のＬＤＬ濃度は健常者と同レベ
ルであることが多い。また、高密度リポ蛋白質（ＨＤ
Ｌ）は動脈硬化防御因子としての機能を有するため、透
析患者や心疾患を有する患者の血中のＨＤＬ濃度を下げ
てはいけない。このように、透析患者や心疾患を有する
患者からは、過酸化脂質、特に酸化ＬＤＬを選択的に除
去することが望ましい。本発明においては、支持体表面
積１ｍ2あたりの血漿量が３．３×１０2ｍｌ／ｍ2であ
る条件で吸着材と血漿を相互作用させたときに、該血漿
中に含まれている初期濃度２μｇ／ｍｌの酸化低密度リ
ポ蛋白の吸着除去率が６０％以上、低密度リポ蛋白の吸
着除去率が２０％未満、高密度リポ蛋白の吸着除去率が
１５％未満であることを、その選択性の指標とすること
ができる。
が多いため、ＬＤＬを除去してやることにより動脈硬化
の進展予防などに有効であるが、透析患者や心疾患を有
する患者の場合は、血中のＬＤＬ濃度は健常者と同レベ
ルであることが多い。また、高密度リポ蛋白質（ＨＤ
Ｌ）は動脈硬化防御因子としての機能を有するため、透
析患者や心疾患を有する患者の血中のＨＤＬ濃度を下げ
てはいけない。このように、透析患者や心疾患を有する
患者からは、過酸化脂質、特に酸化ＬＤＬを選択的に除
去することが望ましい。本発明においては、支持体表面
積１ｍ2あたりの血漿量が３．３×１０2ｍｌ／ｍ2であ
る条件で吸着材と血漿を相互作用させたときに、該血漿
中に含まれている初期濃度２μｇ／ｍｌの酸化低密度リ
ポ蛋白の吸着除去率が６０％以上、低密度リポ蛋白の吸
着除去率が２０％未満、高密度リポ蛋白の吸着除去率が
１５％未満であることを、その選択性の指標とすること
ができる。
【０００９】本発明でいう支持体とは、アルキル化ポリ
アルキレンイミンを付与するための水に溶解しない性質
をもつ物質をいう。本発明に用いる支持体は有機性、無
機性いずれであってもよい。支持体の材料の具体例とし
ては、ポリスチレンで代表される芳香族ポリビニル化合
物、ポリスルホン、ポリエーテルイミド、ポリアミド、
ポリイミド、ポリエーテル、ポリフェニレンサルファイ
ドなどがあげられるが、目的とする酸化ＬＤＬ以外の体
液成分が吸着しにくいポリスルホンが好ましい。ここで
いう体液とは、血液、腹水、リンパ液、関節内液、その
他の生体由来の液性成分および、これらから得られた分
画成分のことを指す。
アルキレンイミンを付与するための水に溶解しない性質
をもつ物質をいう。本発明に用いる支持体は有機性、無
機性いずれであってもよい。支持体の材料の具体例とし
ては、ポリスチレンで代表される芳香族ポリビニル化合
物、ポリスルホン、ポリエーテルイミド、ポリアミド、
ポリイミド、ポリエーテル、ポリフェニレンサルファイ
ドなどがあげられるが、目的とする酸化ＬＤＬ以外の体
液成分が吸着しにくいポリスルホンが好ましい。ここで
いう体液とは、血液、腹水、リンパ液、関節内液、その
他の生体由来の液性成分および、これらから得られた分
画成分のことを指す。
【００１０】支持体にアルキル化ポリアルキレンイミン
を付与する方法としては、物理吸着による方法、イオン
結合による方法、共有結合により固定化する方法などを
用いることができる。しかしながら、吸着材の保存性、
安定性のためにはアルキル化ポリアルキレンイミンが、
支持体から脱離溶出しないことが重要であるので、強固
な固定が可能な共有結合法により付与することが望まし
い。すなわち、支持体の表面に、アルキル化ポリアルキ
レンイミンの固定化反応に用いうるアミン結合性基が存
在していると好都合である。そのようなアミン結合性基
の具体例としては、ハロメチル基、ハロアセチル基、ハ
ロアセトアミドメチル基、ハロゲン化アルキル基、エポ
キサイド基、カルボキシル基、イソシアン酸基、チオイ
ソシアン酸基、酸無水物基などがあげられる。とりわ
け、活性ハロゲン基は、製造が容易な上に反応性が高
く、固定化反応を温和な条件で行えることに加え、この
際生じる共有結合が化学的に安定なので、本発明では好
ましく用いられる。
を付与する方法としては、物理吸着による方法、イオン
結合による方法、共有結合により固定化する方法などを
用いることができる。しかしながら、吸着材の保存性、
安定性のためにはアルキル化ポリアルキレンイミンが、
支持体から脱離溶出しないことが重要であるので、強固
な固定が可能な共有結合法により付与することが望まし
い。すなわち、支持体の表面に、アルキル化ポリアルキ
レンイミンの固定化反応に用いうるアミン結合性基が存
在していると好都合である。そのようなアミン結合性基
の具体例としては、ハロメチル基、ハロアセチル基、ハ
ロアセトアミドメチル基、ハロゲン化アルキル基、エポ
キサイド基、カルボキシル基、イソシアン酸基、チオイ
ソシアン酸基、酸無水物基などがあげられる。とりわ
け、活性ハロゲン基は、製造が容易な上に反応性が高
く、固定化反応を温和な条件で行えることに加え、この
際生じる共有結合が化学的に安定なので、本発明では好
ましく用いられる。
【００１１】さらにアミン結合性基を有する支持体の材
料の具体例としては、クロロアセトアミドメチルポリス
チレン、クロロアセトアミドメチル化ポリスルホン、ク
ロロアセトアミドメチル化したポリエーテルイミドなど
があげられる。さらに、これらは有機溶媒に対して可溶
性であると成形しやすいので好ましい。中でも、クロロ
アセトアミドメチル化ポリスルホンが特に好ましい。
料の具体例としては、クロロアセトアミドメチルポリス
チレン、クロロアセトアミドメチル化ポリスルホン、ク
ロロアセトアミドメチル化したポリエーテルイミドなど
があげられる。さらに、これらは有機溶媒に対して可溶
性であると成形しやすいので好ましい。中でも、クロロ
アセトアミドメチル化ポリスルホンが特に好ましい。
【００１２】支持体の材料が高分子化合物の場合、その
分子量は、通常５０００以上、１００万以下、とりわけ
１万以上、２０万以下のものが好ましく用いられる。
分子量は、通常５０００以上、１００万以下、とりわけ
１万以上、２０万以下のものが好ましく用いられる。
【００１３】本発明でいうアルキル化ポリアルキレンイ
ミンは、ポリアルキレンイミンの窒素原子の一部をアル
キル化したものである。アルキル化は、ポリアルキレン
イミンを、ブチルブロマイド、オクチルブロマイド、ラ
ウリルブロマイドなどで代表されるハロゲン化炭化水素
の単独または混合物でアルキル化することにより行うこ
とができる。アルキル基は直鎖のものでも、分岐したも
のでもどちらでも良い。また、ポリアルキレンイミン
は、入手のしやすさから、ポリエチレンイミンが好まれ
る。このようなアルキル化ポリアルキレンイミンは、ア
ルキル基の炭素数、アルキル化率に依存して吸着性能が
変化する。
ミンは、ポリアルキレンイミンの窒素原子の一部をアル
キル化したものである。アルキル化は、ポリアルキレン
イミンを、ブチルブロマイド、オクチルブロマイド、ラ
ウリルブロマイドなどで代表されるハロゲン化炭化水素
の単独または混合物でアルキル化することにより行うこ
とができる。アルキル基は直鎖のものでも、分岐したも
のでもどちらでも良い。また、ポリアルキレンイミン
は、入手のしやすさから、ポリエチレンイミンが好まれ
る。このようなアルキル化ポリアルキレンイミンは、ア
ルキル基の炭素数、アルキル化率に依存して吸着性能が
変化する。
【００１４】本発明のアルキル化ポリアルキレンイミン
において、アルキル基の炭素数は、２以上、１６以下で
ある。アルキル基の炭素数が少なくなると酸化ＬＤＬ吸
着能が低くなる。また炭素数２０以上のアルキルハロゲ
ン化物は一般的に高価であるうえ、酸化ＬＤＬに対する
選択性が低くなる。アルキル基の炭素数は、とりわけ４
以上、１２以下が好ましい。
において、アルキル基の炭素数は、２以上、１６以下で
ある。アルキル基の炭素数が少なくなると酸化ＬＤＬ吸
着能が低くなる。また炭素数２０以上のアルキルハロゲ
ン化物は一般的に高価であるうえ、酸化ＬＤＬに対する
選択性が低くなる。アルキル基の炭素数は、とりわけ４
以上、１２以下が好ましい。
【００１５】アルキル化ポリアルキレンイミンにおい
て、アルキル化率が小さすぎると吸着能が下がり、大き
すぎると酸化ＬＤＬに対する選択性が低くなる。したが
ってアルキル化率は、２０％以上、５０％以下が好まし
い。
て、アルキル化率が小さすぎると吸着能が下がり、大き
すぎると酸化ＬＤＬに対する選択性が低くなる。したが
ってアルキル化率は、２０％以上、５０％以下が好まし
い。
【００１６】アルキル化ポリアルキレンイミンにおい
て、ポリアルキレンイミンの平均重合度は、小さすぎる
と吸着能が下がり、大きすぎると酸化ＬＤＬに対する選
択性が低くなるため、４０〜２５００が好ましく、とり
わけ２００〜７００が好ましい。
て、ポリアルキレンイミンの平均重合度は、小さすぎる
と吸着能が下がり、大きすぎると酸化ＬＤＬに対する選
択性が低くなるため、４０〜２５００が好ましく、とり
わけ２００〜７００が好ましい。
【００１７】本発明で用いられるアルキル化ポリアルキ
レンイミンの調製は、ポリアルキレンイミンの溶液に、
室温ないし１００℃以下の温度で、臭化アルキルのよう
なハロゲン化炭化水素を混合することにより容易に行う
ことができる。この反応は、エチルアルコール、イソプ
ロピルアルコール、テトラヒドロフランおよびジメチル
ホルムアミドのような極性溶媒中において、アルキル化
率が５０％以下ならば、室温でも仕込み量に対して定量
的に進行する。
レンイミンの調製は、ポリアルキレンイミンの溶液に、
室温ないし１００℃以下の温度で、臭化アルキルのよう
なハロゲン化炭化水素を混合することにより容易に行う
ことができる。この反応は、エチルアルコール、イソプ
ロピルアルコール、テトラヒドロフランおよびジメチル
ホルムアミドのような極性溶媒中において、アルキル化
率が５０％以下ならば、室温でも仕込み量に対して定量
的に進行する。
【００１８】酸化ＬＤＬの吸着材を製造するには、支持
体とアルキル化ポリアルキレンイミンを溶液にして反応
させる均一系反応の方法と、支持体の成形品にアルキル
化ポリアルキレンイミン溶液を接触させる不均一系反応
の方法がある。
体とアルキル化ポリアルキレンイミンを溶液にして反応
させる均一系反応の方法と、支持体の成形品にアルキル
化ポリアルキレンイミン溶液を接触させる不均一系反応
の方法がある。
【００１９】均一系反応による方法の一例としては、ク
ロルアセトアミドメチル化ポリスルホンの溶液中にアル
キル化ポリアルキレンイミンを適当量加えて、０〜１０
０℃の温度で反応させることにより、容易に合成するこ
とができる。このとき、アルキル化ポリアルキレンイミ
ンのアルキル化率が高いとクロルアセトアミドメチル化
ポリスルホンを溶かしている溶媒に溶けにくい。また、
アルキル化していないポリアルキレンイミンを、クロル
アセトアミドメチル化ポリスルホンと反応させるとゲル
化しやすい。したがって、低アルキル化率のアルキル化
ポリアルキレンイミンを導入したのち、さらに臭化アル
キルを添加し、目標のアルキル化率を得る方法が便利で
ある。また、均一系で反応させる場合の溶媒としては、
テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
およびメチルピロリドンなどが好ましく用いられる。
ロルアセトアミドメチル化ポリスルホンの溶液中にアル
キル化ポリアルキレンイミンを適当量加えて、０〜１０
０℃の温度で反応させることにより、容易に合成するこ
とができる。このとき、アルキル化ポリアルキレンイミ
ンのアルキル化率が高いとクロルアセトアミドメチル化
ポリスルホンを溶かしている溶媒に溶けにくい。また、
アルキル化していないポリアルキレンイミンを、クロル
アセトアミドメチル化ポリスルホンと反応させるとゲル
化しやすい。したがって、低アルキル化率のアルキル化
ポリアルキレンイミンを導入したのち、さらに臭化アル
キルを添加し、目標のアルキル化率を得る方法が便利で
ある。また、均一系で反応させる場合の溶媒としては、
テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
およびメチルピロリドンなどが好ましく用いられる。
【００２０】本発明では支持体を不均一系で表面処理す
る方法も可能で、そのためには支持体を溶かさず、アル
キル化ポリアルキレンイミンを溶かす溶媒が好ましく用
いられる。
る方法も可能で、そのためには支持体を溶かさず、アル
キル化ポリアルキレンイミンを溶かす溶媒が好ましく用
いられる。
【００２１】不均一反応の例としては、クロロアセトア
ミドメチル化ポリスルホンの繊維または中空糸などの成
形品を、アルキル化ポリアルキレンイミンのイソプロパ
ノール溶液中に浸し、０〜１００℃の温度で反応させる
ことにより容易に製造することができる。
ミドメチル化ポリスルホンの繊維または中空糸などの成
形品を、アルキル化ポリアルキレンイミンのイソプロパ
ノール溶液中に浸し、０〜１００℃の温度で反応させる
ことにより容易に製造することができる。
【００２２】本発明の吸着材は、体外循環カラム等に充
填し、体外循環治療に用いることができる。すなわち、
均一反応によって直接、繊維状や膜状などに成形した
り、またはコーティングによって成形品に固定化した
り、不均一反応によって、繊維や中空糸、ビーズなどに
固定化して用いることができる。人工腎臓用の中空糸に
アルキル化ポリアルキレンイミンを固定化することで、
尿毒素や水分などの除去という従来の機能に加え、体液
中の酸化ＬＤＬ除去という新たな機能を付加させること
もできるので好ましい。とりわけ、長期に血液透析を行
っている患者の中には、血中抗酸化作用の低下や過酸化
脂質が高値であることが確認されており、これに起因す
ると思われる長期透析患者の動脈硬化性疾患等が増加し
ているため、透析患者の体液中の酸化ＬＤＬを除去する
目的で本発明の吸着材を用いることは好ましい。
填し、体外循環治療に用いることができる。すなわち、
均一反応によって直接、繊維状や膜状などに成形した
り、またはコーティングによって成形品に固定化した
り、不均一反応によって、繊維や中空糸、ビーズなどに
固定化して用いることができる。人工腎臓用の中空糸に
アルキル化ポリアルキレンイミンを固定化することで、
尿毒素や水分などの除去という従来の機能に加え、体液
中の酸化ＬＤＬ除去という新たな機能を付加させること
もできるので好ましい。とりわけ、長期に血液透析を行
っている患者の中には、血中抗酸化作用の低下や過酸化
脂質が高値であることが確認されており、これに起因す
ると思われる長期透析患者の動脈硬化性疾患等が増加し
ているため、透析患者の体液中の酸化ＬＤＬを除去する
目的で本発明の吸着材を用いることは好ましい。
【００２３】以下、本発明の膜型吸着器の性能測定条件
を記載する。 （１）抗酸化ＬＤＬ抗体の作製 板部らが作製したものを用いた（Ｈ．Ｉｔａｂｅ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１５２７
４、１９９４）。すなわち、ヒト粥状硬化病巣ホモジェ
ネートをマウスに注射して免疫、そのマウスの脾臓から
ハイブリドーマを作製し、硫酸銅処理ＬＤＬと反応する
ものを選別した。抗体クラスは、マウスＩｇＭで、未処
理ＬＤＬ、アセチルＬＤＬ、マロンジアルデヒドＬＤＬ
とは反応しない。フォスファチジルコリンのアルデヒド
誘導体やヒドロペルオキシドを含めていくつかのフォス
ファチジルコリン過酸化反応生成物と反応する。１５０
ｍＭのＮａＣｌを含む１０ｍＭほう酸緩衝液（ｐＨ８．
５）に溶解したものを用いた（蛋白濃度０．６０ｍｇ／
ｍｌ）。 （２）酸化ＬＤＬの調製 市販のＬＤＬ（フナコシ製）を脱塩した後、０．２ｍｇ
／ｍｌとなるようにリン酸緩衝液（以下ＰＢＳという）
で希釈後、０．５ｍＭ硫酸銅水溶液を１ｗｔ％添加し、
３７℃で１６時間反応させた。２５ｍＭのエチレンジア
ミン四酢酸（以下ＥＤＴＡという）を１ｗｔ％、１０ｗ
ｔ％アジ化ナトリウムを０．０２ｗｔ％となるように添
加したものを酸化ＬＤＬ標品とした。 （３）吸着実験操作 健常者血漿（日本人、３０歳、ＬＤＬ（βリポ蛋白）濃
度２７５ｍｇ／ｄｌ，ＨＤＬ−コレステロール濃度７０
ｍｇ／ｄｌ）に上記酸化ＬＤＬを２μｇ／ｍｌとなるよ
うに添加した。
を記載する。 （１）抗酸化ＬＤＬ抗体の作製 板部らが作製したものを用いた（Ｈ．Ｉｔａｂｅ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１５２７
４、１９９４）。すなわち、ヒト粥状硬化病巣ホモジェ
ネートをマウスに注射して免疫、そのマウスの脾臓から
ハイブリドーマを作製し、硫酸銅処理ＬＤＬと反応する
ものを選別した。抗体クラスは、マウスＩｇＭで、未処
理ＬＤＬ、アセチルＬＤＬ、マロンジアルデヒドＬＤＬ
とは反応しない。フォスファチジルコリンのアルデヒド
誘導体やヒドロペルオキシドを含めていくつかのフォス
ファチジルコリン過酸化反応生成物と反応する。１５０
ｍＭのＮａＣｌを含む１０ｍＭほう酸緩衝液（ｐＨ８．
５）に溶解したものを用いた（蛋白濃度０．６０ｍｇ／
ｍｌ）。 （２）酸化ＬＤＬの調製 市販のＬＤＬ（フナコシ製）を脱塩した後、０．２ｍｇ
／ｍｌとなるようにリン酸緩衝液（以下ＰＢＳという）
で希釈後、０．５ｍＭ硫酸銅水溶液を１ｗｔ％添加し、
３７℃で１６時間反応させた。２５ｍＭのエチレンジア
ミン四酢酸（以下ＥＤＴＡという）を１ｗｔ％、１０ｗ
ｔ％アジ化ナトリウムを０．０２ｗｔ％となるように添
加したものを酸化ＬＤＬ標品とした。 （３）吸着実験操作 健常者血漿（日本人、３０歳、ＬＤＬ（βリポ蛋白）濃
度２７５ｍｇ／ｄｌ，ＨＤＬ−コレステロール濃度７０
ｍｇ／ｄｌ）に上記酸化ＬＤＬを２μｇ／ｍｌとなるよ
うに添加した。
【００２４】表面積９ｃｍ2の支持体を上記血漿０．３
ｍｌ中に３７℃、４時間静置した。（支持体表面積１ｍ
2あたりの血漿量は３．３×１０2ｍｌ／ｍ2）。
ｍｌ中に３７℃、４時間静置した。（支持体表面積１ｍ
2あたりの血漿量は３．３×１０2ｍｌ／ｍ2）。
【００２５】膜と相互作用前後の血漿中の酸化ＬＤＬ、
ＬＤＬ、ＨＤＬ濃度を定量することにより、それぞれの
吸着除去率を下記式により算出した。
ＬＤＬ、ＨＤＬ濃度を定量することにより、それぞれの
吸着除去率を下記式により算出した。
【００２６】それぞれの吸着除去率（％）＝１００×
（相互作用前の濃度−相互作用後の濃度）／相互作用前
の濃度 （４）酸化ＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ濃度の測定 抗酸化ＬＤＬ抗体をＰＢＳで５μｇ／ｍｌに希釈し、９
６穴のプレートに１００μｌ／ウェルずつ分注し、室温
で２時間震盪した後、４℃にて一晩以上壁に吸着させ
た。
（相互作用前の濃度−相互作用後の濃度）／相互作用前
の濃度 （４）酸化ＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ濃度の測定 抗酸化ＬＤＬ抗体をＰＢＳで５μｇ／ｍｌに希釈し、９
６穴のプレートに１００μｌ／ウェルずつ分注し、室温
で２時間震盪した後、４℃にて一晩以上壁に吸着させ
た。
【００２７】ウェル中の抗体溶液を捨て、１ｗｔ％Ｂｏ
ｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｍｉｎ（ＢＳＡ、”フラ
クションＶ”、生化学工業）を含むトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）を２００μｌ／ウェルずつ分注し、室温
で２時間震盪して壁をブロッキングした後、ウェル中の
ＢＳＡ溶液を捨て、酸化ＬＤＬを含んだ血漿および検量
線作成用のスタンダード（０〜２μｇ／ｍｌの酸化ＬＤ
Ｌを含むＰＢＳ緩衝液）を１００μｌ／ウェルずつ分注
した。その後、室温で３０分震盪した後、４℃で一晩放
置した。
ｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｍｉｎ（ＢＳＡ、”フラ
クションＶ”、生化学工業）を含むトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）を２００μｌ／ウェルずつ分注し、室温
で２時間震盪して壁をブロッキングした後、ウェル中の
ＢＳＡ溶液を捨て、酸化ＬＤＬを含んだ血漿および検量
線作成用のスタンダード（０〜２μｇ／ｍｌの酸化ＬＤ
Ｌを含むＰＢＳ緩衝液）を１００μｌ／ウェルずつ分注
した。その後、室温で３０分震盪した後、４℃で一晩放
置した。
【００２８】室温に戻し、ウェル中の溶液を捨て、０．
０５ｗｔ％”トゥイーン−２０”（片山化学）を含むト
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄し
た。洗浄したウェルにＰＢＳで２０００倍に希釈したヒ
ツジ抗アポＢ抗体（ＴＨＥＢＩＮＤＩＮＧ ＳＩＴＥ）
を１００μｌ／ウェルずつ分注し、室温で２時間震盪し
た後、ウェル中の抗アポＢ抗体を捨て、０．０５ｗｔ％
トゥイーン−２０を含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．
０）でウェルを３回洗浄した。洗浄したウェルに２ｗｔ
％”ブロックエース”（大日本製薬）を含むトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ８．０）で２０００倍に希釈したアルカ
リ性フォスファターゼ標識ロバ抗ヒツジＩｇＧ抗体（Ｃ
ＨＥＭＩＣＯＮ）を１００μｌ／ウェルずつ分注し、室
温で２時間震盪した。その後、ウェル中の標識抗体を捨
て、０．０５ｗｔ％”トゥイーン−２０”を含むトリス
−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄し、さ
らにトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で２回洗浄し
た。続いて、ｐ−ニトロフェニルリン酸（Ｂｏｅｈｒｉ
ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨ）の１ｍｇ／ｍ
ｌ溶液（０．０００５Ｍ ＭｇＣｌ2、１Ｍジエタノー
ルアミン緩衝液、ｐＨ９．８）を１００μｌ／ウェルず
つ分注し、適当な時間室温で反応させた後、４１５ｎｍ
の吸光度をプレートリーダーで測定した。スタンダード
の結果から検量線を引き、酸化ＬＤＬ濃度を決定した。
０５ｗｔ％”トゥイーン−２０”（片山化学）を含むト
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄し
た。洗浄したウェルにＰＢＳで２０００倍に希釈したヒ
ツジ抗アポＢ抗体（ＴＨＥＢＩＮＤＩＮＧ ＳＩＴＥ）
を１００μｌ／ウェルずつ分注し、室温で２時間震盪し
た後、ウェル中の抗アポＢ抗体を捨て、０．０５ｗｔ％
トゥイーン−２０を含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．
０）でウェルを３回洗浄した。洗浄したウェルに２ｗｔ
％”ブロックエース”（大日本製薬）を含むトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ８．０）で２０００倍に希釈したアルカ
リ性フォスファターゼ標識ロバ抗ヒツジＩｇＧ抗体（Ｃ
ＨＥＭＩＣＯＮ）を１００μｌ／ウェルずつ分注し、室
温で２時間震盪した。その後、ウェル中の標識抗体を捨
て、０．０５ｗｔ％”トゥイーン−２０”を含むトリス
−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄し、さ
らにトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で２回洗浄し
た。続いて、ｐ−ニトロフェニルリン酸（Ｂｏｅｈｒｉ
ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨ）の１ｍｇ／ｍ
ｌ溶液（０．０００５Ｍ ＭｇＣｌ2、１Ｍジエタノー
ルアミン緩衝液、ｐＨ９．８）を１００μｌ／ウェルず
つ分注し、適当な時間室温で反応させた後、４１５ｎｍ
の吸光度をプレートリーダーで測定した。スタンダード
の結果から検量線を引き、酸化ＬＤＬ濃度を決定した。
【００２９】ＬＤＬの定量はβ−リポ測定キット（和光
純薬）を用いて行った。
純薬）を用いて行った。
【００３０】ＨＤＬの定量はＨＤＬ−Ｃ測定キット（和
光純薬）を用いて行った。
光純薬）を用いて行った。
【００３１】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に
説明するが、本発明はこのような実施例に限定されるも
のではない。
説明するが、本発明はこのような実施例に限定されるも
のではない。
【００３２】実施例１ （１）支持体の作成 ニトロベンゼンと硫酸の混合溶液を０℃に冷却後、メチ
ロール−α−クロルアセトアミドを加えて溶解し、これ
を１０℃の”ユーデル”（ポリスルホン）のニトロベン
ゼン溶液に、よく撹拌しながら加えた。これを室温で３
時間撹拌した。その後、反応混合物を大過剰の冷メタノ
ール中に入れ、ポリマーを沈殿させた。沈殿物をメタノ
ールでよく洗った後、乾燥して、α−クロルアセトアミ
ドメチル化ポリスルホンを得た。
ロール−α−クロルアセトアミドを加えて溶解し、これ
を１０℃の”ユーデル”（ポリスルホン）のニトロベン
ゼン溶液に、よく撹拌しながら加えた。これを室温で３
時間撹拌した。その後、反応混合物を大過剰の冷メタノ
ール中に入れ、ポリマーを沈殿させた。沈殿物をメタノ
ールでよく洗った後、乾燥して、α−クロルアセトアミ
ドメチル化ポリスルホンを得た。
【００３３】次にこのα−クロルアセトアミドメチル化
ポリスルホンをＤＭＡｃに室温にて、２０ｗｔ％になる
ように溶解させた。その後、０．１ｍｍスペーサー付き
のガラス板に、溶液を塗布し、ドクターブレードにて平
膜に引き延ばしたものを水中（室温）に浸たし、凝固さ
せた。 （２）Ｎ−ブチル化ポリエチレンイミンの支持体への付
与 水で十分に洗浄したα−クロルアセトアミドメチル化ポ
リスルホン平膜を、平均分子量１万（平均重合度２３
３）のポリエチレンイミン／イソプロパノール溶液（ポ
リエチレンイミン濃度５ｗｔ％）に浸し、室温にて２４
時間撹拌することで、ポリエチレンイミンを平膜に共有
結合により付与した。その後、ブチル化率が３０％にな
るように臭化Ｎ−ブチルを添加し、室温にて２４時間撹
拌することで、ポリエチレンイミンにＮ−ブチル基を導
入した。反応終了後、平膜をイソプロパノールで十分に
洗浄した後、吸着実験に供した。
ポリスルホンをＤＭＡｃに室温にて、２０ｗｔ％になる
ように溶解させた。その後、０．１ｍｍスペーサー付き
のガラス板に、溶液を塗布し、ドクターブレードにて平
膜に引き延ばしたものを水中（室温）に浸たし、凝固さ
せた。 （２）Ｎ−ブチル化ポリエチレンイミンの支持体への付
与 水で十分に洗浄したα−クロルアセトアミドメチル化ポ
リスルホン平膜を、平均分子量１万（平均重合度２３
３）のポリエチレンイミン／イソプロパノール溶液（ポ
リエチレンイミン濃度５ｗｔ％）に浸し、室温にて２４
時間撹拌することで、ポリエチレンイミンを平膜に共有
結合により付与した。その後、ブチル化率が３０％にな
るように臭化Ｎ−ブチルを添加し、室温にて２４時間撹
拌することで、ポリエチレンイミンにＮ−ブチル基を導
入した。反応終了後、平膜をイソプロパノールで十分に
洗浄した後、吸着実験に供した。
【００３４】実施例２ 実施例１と同様にして、ポリエチレンイミンとして平均
分子量１万（平均重合度２３３）、ラウリル化率３０％
であるラウリル化ポリエチレンイミンが付与された平膜
を作成し、吸着実験を行った。
分子量１万（平均重合度２３３）、ラウリル化率３０％
であるラウリル化ポリエチレンイミンが付与された平膜
を作成し、吸着実験を行った。
【００３５】実験結果は表１に示した。
【００３６】比較例１ アルキル化ポリエチレンイミンを付与しないα−クロル
アセトアミドメチル化ポリスルホン平膜について、実施
例１と同様にして吸着実験を行った。
アセトアミドメチル化ポリスルホン平膜について、実施
例１と同様にして吸着実験を行った。
【００３７】比較例２ アルキル化されていない平均分子量１万（平均重合度２
３３）のポリエチレンイミンを付与した平膜について、
実施例１と同様にして吸着実験を行った。
３３）のポリエチレンイミンを付与した平膜について、
実施例１と同様にして吸着実験を行った。
【００３８】実施例１、２および比較例１、２における
酸化ＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬの吸着除去率の結果を表１
に示した。
酸化ＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬの吸着除去率の結果を表１
に示した。
【００３９】
【表１】
【００４０】
【発明の効果】本発明の吸着材は酸化ＬＤＬを選択的に
吸着するため、体液中の他の成分をほとんど損なうこと
なく、酸化ＬＤＬを取り除くことができる。
吸着するため、体液中の他の成分をほとんど損なうこと
なく、酸化ＬＤＬを取り除くことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4C077 AA12 BB03 KK13 MM05 MM06 MM09 NN07 PP08 PP12 PP13 PP15 4G066 AC14C AC26C AC27C AC31C AC33B CA20 DA11 DA12 EA04
Claims (8)
- 【請求項１】 支持体にアルキル基の炭素数が２以上、
１６以下であるアルキル化ポリアルキレンイミンが付与
されていることを特徴とする過酸化脂質吸着材。 - 【請求項２】 請求項１記載のアルキル化ポリアルキレ
ンイミンのアルキル化率が２０％以上、５０％以下であ
ることを特徴とする請求項１記載の過酸化脂質吸着材。 - 【請求項３】 請求項１記載のアルキル化ポリアルキレ
ンイミンにおいてポリアルキレンイミンの平均重合度
が、４０以上２５００以下であることを特徴とする請求
項１または２記載の過酸化脂質吸着材。 - 【請求項４】 素材表面積１ｍ2あたりの血漿量が３．
３×１０2ｍｌ／ｍ2である条件で素材と血漿を相互作用
させたときに、該血漿中に含まれている初期濃度２μｇ
／ｍｌの酸化低密度リポ蛋白の吸着除去率が６０％以上
であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載
の過酸化脂質吸着材。 - 【請求項５】 請求項４記載の条件で低密度リポ蛋白の
吸着除去率が２０％未満であることを特徴とする請求項
１〜３のいずれかに記載の過酸化脂質吸着材。 - 【請求項６】 請求項４記載の条件で高密度リポ蛋白の
吸着除去率が１５％未満であることを特徴とする請求項
１〜３のいずれかに記載の過酸化脂質吸着材。 - 【請求項７】 支持体がアミン結合性基を有するポリス
ルホンからなることを特徴とする請求項１〜６のいずれ
かに記載の過酸化脂質吸着材。 - 【請求項８】 請求項７記載のアミン結合性基がα−ク
ロロアセトアミドメチル基であることを特徴とする請求
項１〜７のいずれかに記載の過酸化脂質吸着材。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000298993A JP4783970B2 (ja) | 2000-09-29 | 2000-09-29 | 酸化低密度リポ蛋白吸着用吸着材 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000298993A JP4783970B2 (ja) | 2000-09-29 | 2000-09-29 | 酸化低密度リポ蛋白吸着用吸着材 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002102340A true JP2002102340A (ja) | 2002-04-09 |
| JP4783970B2 JP4783970B2 (ja) | 2011-09-28 |
Family
ID=18780863
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000298993A Expired - Fee Related JP4783970B2 (ja) | 2000-09-29 | 2000-09-29 | 酸化低密度リポ蛋白吸着用吸着材 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4783970B2 (ja) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53135896A (en) * | 1977-04-30 | 1978-11-27 | Unitika Ltd | Adsorbent with superior selective adsorbing property, production thereof, and adsorbing method |
| JPS60246766A (ja) * | 1984-05-23 | 1985-12-06 | 東レ株式会社 | 血液処理剤 |
| JPH03218766A (ja) * | 1990-01-23 | 1991-09-26 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 消臭用高分子及びその製造方法 |
| JPH0436300A (ja) * | 1990-05-28 | 1992-02-06 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 変性ｌｄｌの吸着体およびそれを用いる変性ｌｄｌの除去装置 |
| JPH11123329A (ja) * | 1997-10-22 | 1999-05-11 | Toray Ind Inc | 血栓形成性物質の吸着剤および体外循環カラム |
-
2000
- 2000-09-29 JP JP2000298993A patent/JP4783970B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53135896A (en) * | 1977-04-30 | 1978-11-27 | Unitika Ltd | Adsorbent with superior selective adsorbing property, production thereof, and adsorbing method |
| JPS60246766A (ja) * | 1984-05-23 | 1985-12-06 | 東レ株式会社 | 血液処理剤 |
| JPH03218766A (ja) * | 1990-01-23 | 1991-09-26 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 消臭用高分子及びその製造方法 |
| JPH0436300A (ja) * | 1990-05-28 | 1992-02-06 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 変性ｌｄｌの吸着体およびそれを用いる変性ｌｄｌの除去装置 |
| JPH11123329A (ja) * | 1997-10-22 | 1999-05-11 | Toray Ind Inc | 血栓形成性物質の吸着剤および体外循環カラム |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4783970B2 (ja) | 2011-09-28 |
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