JP2001527401A - タンパク質の改良原核発現 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. wprA遺伝子またはそれの対応するプロモーター中に欠失および/または挿 入および/または変異および/または置換を有する菌株からの生来および/また は非相同および/または組換えポリペプチドの生産方法であって、ここで前記欠 失および/または挿入および/または変異および/または置換は、前記ポリペプ チドの生産を促進するようにwprA遺伝子によりコードされる遺伝子産物の生産お よび/または機能に影響を与えるようなものであり、 i 前記ポリペプチドの生産および分泌を誘導する条件下で前記株を増殖させ; そして ii 増殖培地および/または前記菌から前記ポリペプチドを回収する ことを含んで成る方法。 2. 前記菌株がグラム陽性菌である、請求項1に記載の方法。 3. 前記菌株がバシラス属の菌株である、請求項1または2に記載の方法。 4. 前記菌株がB.サチリス、B.アミロリクファシエンス、B.リヘニフォ ルミスまたはB.ステアロサーモフィラスから選択される、請求項1〜3のいず れか一項に記載の方法。 5. 前記ポリペプチドがカルボニルヒドロラーゼ、カルボヒドラーゼ、プロテ アーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、オキシドレダクターゼ、グルコア ミラーゼまたはエステラーゼから選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記 載の方法。 6. 生来、非相同または組換えタンパク質の生産が促進される程度にwprA遺伝 子によりコードされる遺伝子産物の生産および/または機能が妨げられるように 、前記wprA遺伝子が欠失および/または 置換および/または挿入および/または変異および/または置換により改変され ている、菌株。 7. 前記菌株が、前記改変前には前記wprA遺伝子に関して野性型である、請求 項6に記載の菌株。 8. 前記菌株がグラム陽性菌である、請求項6または7に記載の菌株。 9. 前記菌株がバシラス属の菌株である、請求項6〜8のいずれか一項に記載 の菌株。 10.前記改変が、前記wprA遺伝子の発現を妨げるかまたは機能的タンパク質産 物の少なくとも一部の合成を妨げるような前記wprA遺伝子中への遺伝物質の挿入 である、上記請求項のいずれか一項に記載の菌株。 11.前記wprA遺伝子が、wprA遺伝子またはWprAタンパク質のいずれかの発現を 妨げるような少なくとも1つの選択された点変異によって改変されている、請求 項6〜9のいずれか一項に記載の菌株。 12.前記改変g発現調節配列に対してである、請求項6〜9のいずれか一項に 記載の菌株。 13.前記発現調節配列がプロモーターである、請求項12に記載の菌株。 14.前記改変が、wprA遺伝子の発現を選択的に調節する誘導性プロモーターの 提供をもたらす、請求項13に記載の菌株。 15.前記菌株が、核酸塩基+154から+247までの図1に記載の配列の少なくと も一部分の欠失を含有するB.サチリスである、請求項6〜9のいずれか一項に 記載の菌株。 16.前記バシラス株が、WprA前駆体タンパク質のシグナル配列をコードするwp rA 遺伝子の部分を欠失している、請求項15に記載の菌株。 17.前記菌株が、核酸塩基+154から+1392までの図1に記載の配列の少なく とも一部分の欠失を含有するB.サチリスである、請求項6〜9のいずれか一項 に記載の菌株。 18.前記欠失が、核酸塩基+247から+1392までの図1に記載の配列の少なく とも一部分を含んで成る、請求項6〜9または17に記載の菌株。 19.前記wprA遺伝子がCWPB23をコードするwprA遺伝子の少なくとも一部分を欠 失している、請求項18に記載の菌株。 20.前記菌株が、核酸塩基+1392から+2835までの図1に記載の配列の少なく とも一部分の欠失を含有するB.サチリスである、請求項6〜9のいずれか一項 に記載の菌株。 21.前記wprA遺伝子がCWPB52をコードするwprA遺伝子の少なくとも一部分を欠 失している、請求項20に記載の菌株。 22.前記wprA遺伝子がセリンプロテアーゼをコードするwprA遺伝子の少なくと も一部分を欠失している、請求項20または21に記載の菌株。 23.前記菌株が、前記核酸塩基+247から+2835までの図1に記載の配列の少 なくとも一部分の欠失を含有するB.サチリスである、請求項6〜9のいずれか 一項に記載の菌株。 24.前記菌株かプロペプチドまたはプロテアーゼのいずれか一方または両方を コードするwprA遺伝子の部分を欠失している、請求項23に記載の菌株。
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