JP2001523107A - 食品に使用するためのソルビン酸塩、ナタマイシン、およびジアルキルジカーボネートの抗菌性組合せ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ソルビン酸塩防腐剤、ナタマイシン、およびジアルキルジカーボネートを、これらの抗菌物質のそれぞれの味覚しきい値よりも低いレベルであるが、その組合せ剤が食物を腐敗させる微生物に対して効果があるように含んでいる抗菌性組合せ剤。これらの抗菌性組合せ剤は、Zygosaccharomyces bailiiのような酵母菌を含めた食物を腐敗させる微生物の影響を受けやすい飲料、特に希釈された飲料、カルシウムを強化した飲料、固形茶を含んでいる飲料、そして固形ミルクおよびタンパク質を含んでいる飲料、ならびにチーズ、ソーセージ、塗布しやすい糖衣、サラダドレッシング、マヨネーズなどの他の酸性化され、水分活性の高い食品および飲料製品を処理するのに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 食品に使用するためのソルビン酸塩、ナタマイシン、および ジアルキルジカーボネートの抗菌性組合せ剤 技術分野 本出願は、飲料、特に希釈されたジュース飲料、カルシウムを強化した飲料、 固形茶（tea solids）を含む飲料、および固形ミルク（milk solids）とタンパ ク質を含む飲料、ならびに食物を腐敗させる微生物の影響を受けやすい他の食品 に有用な抗菌性組合せ剤に関する。特に、本出願は、不快な臭いを与えないよう に、次善のレベルで既存の防腐剤から調合できる共働作用の抗菌性組合せ剤に関 する。 発明の背景 希釈されたジュース飲料製品は当技術分野ではよく知られている。冷蔵しない （例えば、周囲温度で）で貯蔵されることが意図される、希釈されたジュース飲 料に存在するのが望ましい１つの成分は、抗菌防腐剤である。食物を腐敗させる 微生物に暴露された時、希釈されたジュース飲料は、微生物の急速な成長に好適 な環境を提供できる。そのような暴露は、製造中、または包装中における、希釈 されたジュース飲料のこれら微生物による偶然の接種の結果として生ずる可能性 があるし、たまに生じる。すると、食物を腐敗させる微生物は、その希釈された ジュース飲料のジュース成分によって提供される栄養素を餌にして、急速に増殖 することができる。 ソルビン酸塩、安息香酸塩、有機酸、およびそれらの組合せのような防腐剤は 、希釈されたジュース飲料に使用されて、ある程度微生物を抑制している。微生 物の成長を抑制するのに有効なレベルで、これらの防腐剤の幾つかは、希釈され たジュース飲料に対して不快な臭いの原因となりかねないものもある。例えば、 ソルビン酸カリウムの認められた使用レベルは、約２００から約３０００ｐｐｍ の範囲にある。一般的には、ソルビン酸カリウムは、抗菌活性を保証するために 、有効な最小限よりずっと高いレベルで、希釈されたジュース飲料に含まれてい る。 しかしながら、この認められた使用範囲の上限では、ソルビン酸カリウムは希釈 されたジュース飲料に対する不快な臭いの一因となる場合がある。 その上、ソルビン酸カリウムは、飲料の加工工場に存在する可能性がある一定 の酵母菌に対しては有効ではない。特に重要なのは、Zygosaccharomyces bailii である。Zygosaccharomyces bailiiは、ソルビン酸カリウムのような弱酸性防腐 剤に対して極端に抵抗力がある、普通の食物を腐敗させる酵母菌であり、ある場 合には、法的に許容されている濃度を十分上回る防腐剤濃度に耐性がある。Cole 等の「Probability of Growth of the Spoilage Yeast Zygosaccharomy ces bail ii in a Model Fruit Drink System」,Food Microbiology，1987，4，pp.115〜19 を参照。Warthの「Transport of Benzoic and Propanoic Acids by Zygosaccharo myces bailii」，Journal of General Microbiology，1989，135，pp.1383〜9 0（Zygosaccharomyces bailiiは、ソルビン酸を含めた通常の弱酸性タイプの防 腐剤に非常に耐性がある）も参照のこと。この酵母菌は、低温殺菌を行なわなか ったか、または再汚染された化学的に防腐処理された果汁によって飲料工場に入 ることができ、そして工場の設備の様々な部分に定着して、さらに汚染と腐敗を もたらす。 ナタマイシンのような酵母菌およびかびの阻害剤が、Zygosaccharomyces bail iiのような酵母菌に対して特に有効であることが発見された。ShirkとClarkの「T he Effect of Pimaricin in Retarding the Spoilage of Fresh Orange Juice」 ，Food Technology，1963，p 108参照。ナタマイシンはまた、様々な他の腐敗有 機物を栄養源とする真菌および酵母菌、および寄生性の真菌および酵母菌に対し て有効である。１９７５年７月１日に発行された米国特許第３，８９２，８５０ 号（Struyk）を参照。しかしながら、ナタマイシンは、溶液中にある時は、むし ろ不安定である。光、過酸化物、または酸素によるナタマイシンの失活は、溶液 または懸濁液で最も速い速度で進む。例えば、６ｍｃｇ／ｍｌのナタマイシン水 溶液は、光に２４時間暴露されると微生物学的に不活性になる。ナタマイシンは 、重金属にも敏感であり、これら重金属が存在すると、その有効性の７５％まで を４時間または５時間のうちになくしてしまう場合もある。その上、ナタマイシ ンはバクテリアに対して有効ではない。１９８５年８月２０日に発行された米国 特 許第４，５３６，４９４号（Carter）を参照のこと。 ジアルキルジカーボネートも、ワイン、すぐ飲めるお茶(ready-to-drink teas )、果汁、野菜製品、医薬品、ビール等に酵母菌阻害剤として使用されているか 、または使用を示唆されている。３７ＣＦＲ§１７２．１３３を参照。１９７６ 年９月７日に発行された米国特許第３，９７９，５２４号（Bayne）、および１ ９５９年１０月２７日に発行された米国特許第２，９１０，４００号(Berhard他 )（「ピロカルボン酸エステル」とも呼ばれてもいる）も参照のこと。ジアルキル ジカーボネートは、調合されたばかりの天然濃縮飲料（single strength bevera ge）で、どんな微生物をも初期のうちに非常に有効に「殺害」してしまう。しか しながら、ジアルキルジカーボネートは、添加するとすぐに、希釈されたジュー ス飲物のような水性系によって急速に加水分解される。ジアルキルジカーボネー トの濃度が低下するので、加工中にその飲料へその後に導入されるかもしれない 微生物を殺すには、すぐに効果がなくなる。Oughの「Dimethyldicarbonate and Diethyl-dicarbonate」Antimicrobials in Foods，193，Marcel Dekker，pp343 〜368を参照。 ある種の食品用のポリリン酸塩、特にヘキサメタリン酸ナトリウムを使用する と、防腐剤が希釈されたジュース飲料中により低いレベルで使用されている場合 には、ソルビン酸カリウムのような防腐剤の効力を高めることができることが、 最近示唆された。１９９５年７月１１日に発行された米国特許第５，４３１，９ ４０号（Calderas）を参照。この文献には、比較的低い水の硬度を有する希釈さ れたジュース飲料に、ソルビン酸カリウムなどのソルビン酸塩防腐剤とともに、 ヘキサメタリン酸ナトリウムのようなポリリン酸塩を使用することが開示されて いる。しかしながら、これらのポリリン酸塩を含めることは、カルシウムを強化 した飲料、またはタンパク質、特にカゼインおよびアルブミンのようなミルクタ ンパク質を含んでいる飲料で問題を生じる場合がある。防腐剤を強化するのに十 分なレベルのポリリン酸塩を含めることはまた、存在しているどのカルシウムお よびミルクタンパク質をも取り込んで、結果として生じた複合体を析出させるこ とになる。 ソルビン酸カリウムのような防腐剤が含まれている時でさえ、希釈されたジュ ース飲料は、微生物の安定性を維持するために、依然として冷蔵が必要となるこ とがある。冷蔵された飲料には、特に店の棚に関して、特別な取り扱いが必要に なる。これはまた、これらの飲料を店へ輸送する場合に、一層高価な冷凍トラッ クおよび冷凍貨車を必要とする。 従って、（１）ソルビン酸カリウムのような既存の抗菌物質で調合できる防腐 剤系を使い、（２）Zygosaccharomyces bailiiのような酵母菌を含めた、周囲温 度での微生物の成長に対して安定であり、（３）その防腐剤系に起因する不快な 臭いを持たず、（４）カルシウムを強化でき、（５）固形ミルクを含むことがで き、（６）輸送および貯蔵中に、特別な取り扱いを必要としない、特に冷蔵を必 要としない、希釈されたジュース飲料を提供することができることが望ましい。 発明の開示 本発明は、飲料、特に希釈されたジュース飲料、カルシウムを強化した飲料、 固形茶を含んでいる飲料、および固形ミルクおよびタンパク質を含んでいる飲料 、ならびに他の酸性にした（すなわち、ｐＨが約４．６未満の）、高い水分活性 （すなわち、約０．８５ａ_wを超える）の、食物を腐敗させる微生物の影響を受 けやすい、チーズ、ソーセージ、塗布しやすい糖衣（ready-to-spread frosting s）、サラダドレッシング、マヨネーズなどの食品および飲料製品の処理に有用 な抗菌性組合せ剤に関する。本発明の抗菌性組合せ剤は、ナタマイシン、ジアル キルジカーボネート、およびソルビン酸塩防腐剤を含む。食品は、ナタマイシン 、ジアルキルジカーボネートおよびソルビン酸塩防腐剤が、これらの抗菌物質の 各々の味覚しきい値よりも低いレベルにあるが、その組合せ剤が食物を腐敗させ る微生物に対して有効であるような十分なレベルであるこれらの抗菌性組合せ剤 により処理される。 さらに、本発明は、これらの抗菌性組合せ剤で、通常の食物を腐敗させる微生 物の影響を受けやすい飲料を処理するための、好ましい方法に関する。 この方法は、以下のステップ、すなわち、 （ａ） （１）通常の、食物を腐敗させる微生物の影響を受けやすい飲料の濃縮液と 、 （２）天然濃縮飲料中に約２から約１０ｐｐｍとなるのに充分な量のナタマ イシンと、 （３）天然濃縮飲料中に約３０から約３００ｐｐｍになるのに充分な量のソ ルビン酸塩防腐剤とを含む濃縮飲料を生成するステップと、 （ｂ）天然濃縮飲料を与えるのに充分な量の源水（source of water）を、そ の濃縮飲料に加えるステップと； （ｃ）天然濃縮飲料中に約３０から約１５０ｐｐｍとなるのに充分な量のジア ルキルジカーボネートを、実質的に均一に分散させるステップとを含んでいる。 希釈されたジュース飲料、固形茶を含んでいる飲料、および固形ミルクを含ん でいる飲料を包含する、これらの抗菌性組合せ剤で処理された飲料は、周囲温度 での微生物の成長に対して安定しており、Zygosaccharomyces bailIiなどの食物 を腐敗させる通常の酵母菌の成長を特に妨害する。抗菌性組合せ剤の様々な成分 はそれらの味覚しきい値より低いレベルで存在するので、不快な臭いはこの抗菌 性組合せ剤に起因するものではない。この抗菌性組合せ剤で処理された飲料を、 カルシウムまたは他の栄養になるミネラル、ならびに固形ミルクで調合すること もできる。この抗菌性組合せ剤で処理された飲料、特に希釈されたジュース飲料 もまた、輸送および貯蔵中に冷蔵を必要としない。 発明の詳細な説明 Ａ．定義 本明細書では、「微生物の増殖」は、飲料中の飲料を腐敗させる微生物の数が 、約１０ｃｆｕ（コロニー形成単位）／ｍｌという初期の汚染レベルの後に、１ ００倍に増加するか、またはこれを超えて増えることを意味する。 本明細書では、「外界露出時間（ambient display time）」は、華氏６８度（ ２０℃）の飲料製品が、飲料を腐敗させる微生物に１０ｃｆｕ／ｍｌで汚染され た後に、微生物の増殖に効果的に抵抗できる期間を意味する。 本明細書では、用語「含む」は、様々な成分および加工ステップを、本発明の 抗菌性組合せ剤、製品および方法で共通して使用できることを意味する。従って 、用語「含む」は、より限定的な用語である「本質的にから成る」および「から 成 る」を包含している。 ここに使用される全ての量、部、割合、およびパーセンテージは、別途指定が ない限り重量による。 Ｂ．抗菌性組合せ剤 本発明で有用な抗菌性組合せ剤は、ナタマイシン、ジアルキルジカーボネート およびソルビン酸塩防腐剤の組合せ剤を含む。これらの抗菌性組合せ剤の各成分 は、それぞれの抗菌物質の味覚しきい値より低いレベルで存在する。これは、こ れらの抗菌性組合せ剤で処理された食品に与えられる不快な臭いを防ぐ。その味 覚しきい値より低いこれらの抗菌物質のレベルも、一般的には、次善のレベル、 すなわち、所定の抗菌物質についての通常の効果が最適である範囲より低いレベ ルである。しかしながら、驚いたことに、これらの３つの成分の組合せ剤は、Zy gosaccharomyces bailiiのような酵母菌を含めた食物を腐敗させる微生物の影響 を受けやすいさまざまな食品における微生物の成長に対して、その組合せ剤が効 果を持つように、互いに作用し合うということが分かった。 微生物の成長に対する抵抗性を与えるために、食品は一般に、 （ａ）約２から約１０ｐｐｍ、好ましくは約２．５から約５ｐｐｍのナタマイ シンと、 （ｂ）約３０から約１５０ｐｐｍ、好ましくは約５０から約１００ｐｐｍのジ アルキルジカーボネートと、 （ｃ）約３０から約３００ｐｐｍ、好ましくは約５０から約１５０ｐｐｍのソ ルビン酸塩防腐剤とで処理される。 本発明の使用に適しているナタマイシンは、チーズ、ソーセージ、ジュースな どの様々な食品で酵母菌およびカビの成長を防止するのに使用されている、既知 の市販されている酵母菌およびカビの阻害剤である。ナタマイシンは、Zygosacc haromyces bailiiのような酵母菌に対して特に有効である。ナタマイシンは、St reptomyces natalensis、およびS．chattanoogensisによって産生され、そして 、ピマリシン、抗生物質Ａ５２８３、テンネシチン、ＣＬ１２６２５、ミコフィ ット（Mycophyt）、ミプロジン（Myprozine）、ナタシン（Natacyn）、およびピ マフシン（Pimafucin）のような他の名前でしばしば呼ばれている。その全 てをひとまとめにして、本発明では「ナタマイシン」と呼ぶ。本発明で有用なナ タマイシンはまた、実質的にナタマイシンと同じ化学構造を持っている任意の化 合物、例えば、化学合成またはバイオテクノロジーによって生成される化合物も 含む。ただし、そのような化合物は本質的に同じカビおよび酵母菌を抑制する特 性を持っている場合に限る。ナタマイシンは、さまざまな商標で多くの会社から 入手できる。例えば、ペンシルバニア州、King of PrussiaのGist-Brocades Foo d Ingredients，Inc.からDELVOCID（登録商標）という商標で、またカリフォル ニア州、RosevilleのCultor Food Science Inc.からNATAMAX（登録商標）の商標 で入手できる。１９７５年７月１日に発行された米国特許第３，８９２，８５０ 号（Struyk他）（参照により本明細書に組み込む）を参照のこと。そこには、St reptomyces natalensisの培養によるナタマイシン（ピマリシン）の調製が記載 されている。ナタマイシンおよびその調製のさらに詳細については、Merck Inde x（第１２版、１９９６年）、９６７頁、見出し語６５１９も参照のこと。 本発明での使用に適しているジアルキルジカーボネート（「ピロカルボン酸エ ステル」とも呼ばれる）は、ワイン、すぐ飲める茶、果汁、野菜製品、医薬品、 ビールなどで酵母菌の阻害剤として使用されるか、または使用が示唆されてきた 。１９７６年２月３日に発行された米国特許第３，９３６，２６９号（Bayne） 、および１９７６年９月７日に発行された米国特許第３，９７２，５２４号（Ba yne）を参照のこと。これらのジアルキルジカーボネートは次の一般式を有する 。 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブ チル、イソブチル、アミル、シクロヘキシルなどのような、同一のまたは異なる アルキル基を表す。１９５９年１０月２７日に発行された米国特許第２，９１０ ，４００号（Koln-Stammheim他）を参照のこと。その特許を参照により本明細書 に組み込む。本発明の使用に好ましいジアルキルカーボネートはジメチルジカー ボネートである。ジメチルジカーボネートを含むジアルキルカーボネートを作成 する方法については、１９９０年５月２９日に発行された米国特許第４，９２９ ， ７４８号（Franklin）、１９９３年５月２５日に発行された米国特許第５，２１ ４，１８５号（Nishihira他）、および１９９３年７月２７日に発行された米国 特許第５，２３１，２１１号（Tang）（参照により本明細書に組み込む）を参照 のこと。 本発明で使用するのに適しているソルビン酸塩防腐剤には、ソルビン酸、なら びにソルビン酸カルシウム、ソルビン酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、およ びそれらの混合物などのソルビン酸塩が含まれる。ソルビン酸カリウムは、本発 明の使用、特に希釈されたジュース飲料、および良好な水溶解度を必要とする他 の飲料製品に対して、特に好ましい。 Ｃ．抗菌性組合せ剤で処理された食品および飲料製品 本発明の抗菌性組合せ剤は、食物を腐敗させる微生物の影響を受けやすい各種 の食品および飲料製品を処理するのに使うことができる。これらの食品および飲 料製品には、チーズ、ミルク、サワークリーム、ヨーグルト、バター、マーガリ ン、アイスクリームなどの酪農製品、サラダドレッシング、クリーマー、塗り易 い糖衣製品、マヨネーズ、ワイン、ジュース、ピューレなどの乳製品または固形 ミルクおよびタンパク質を含む食品および飲料製品、ソーセージ、ホットドッグ などの加工した肉製品、および調理していない発酵し製造した肉製品、および他 の酸性にした（すなわち、ｐＨが約４．６よりも低い）、水分活性が高い（すな わち、約０．８５ａ_wより大きい）食品および飲料製品が含まれる。これらの抗 菌性組合せ剤は、飲料製品、特に希釈されたジュース飲料、カルシウムを強化し た飲料、固形茶を含む飲料、そして固形ミルクおよびタンパク質を含む飲料に、 特に有用である。 本発明の希釈されたジュース飲料は、一般に、約０．２から約５％、好ましく は約０．５から約３％、最も好ましくは約０．８から約２％の飲料エマルジョン を含んでいる。この飲料エマルションは、曇ったエマルジョン（cloud emulsion ）または風味のあるエマルジョン（flavor emulsion）のどちらかである可能性 がある。 曇ったエマルジョン用に、その曇り剤（clouding agent）は、適切な食用グレ ードの乳化剤を使用して水中油エマルジョンとして安定化された１つまたはそれ 以上の脂肪または油を含むことができる。いろいろな脂肪または油のどれでも、 その曇り剤として使用することができるが、ただし、その脂肪または油は食物お よび飲料での使用に適している必要がある。精製され、漂白され、そして脱臭さ れて不快な臭いを除いた脂肪および油が好ましい。曇り剤として使用するのに特 に好ましいのは、感覚器の反応検査により際立った特徴のない脂肪である。これ らには、次の発生源からの脂肪が含まれる。すなわち、大豆、トウモロコシ、ベ ニバナ、ヒマワリ、綿実、カノラ、菜種のような野菜の脂肪、ココナツ、ヤシ、 およびヤシ核などの堅果の脂肪、そして合成脂肪である。適当な、脂肪、または 油の曇り剤については、１９８７年１１月１０日に発行された米国特許第４，７ ０５，６９１号（Kupper他）（参照により本明細書に組み込む）を参照。 その脂肪または油の曇り剤を水中油エマルジョンとして安定化できる任意の適 当な食物用グレードの乳化剤を使うことができる。適当な乳化剤には、アカシア ゴム（gum acacia）、変性食物デンプン（例えば、コハク酸アルケニルエステル で変性した食物デンプン）、セルロースから誘導されたアニオンポリマー（例え ば、カルボキシメチルセルロース）、ガッチゴム、変性ガッチゴム、キサンゴム 、トラガガントゴム、ガーゴム、イナゴマメゴム（locust bean gum）、ペクチ ン、およびそれらの混合物が含まれる。１９８７年１１月１０日に発行された米 国特許第４，７０５，６９１号（Kupper他）参照。その特許を参照により本明細 書に組み込む。米国特許第２，６６１，３４９号（Caldwell他）（参照により本 明細書に組み込む）に記載されているような、疎水性基ならびに親水性基を含む ように処理された変性デンプンは、本明細書で使用できる好ましい乳化剤である 。米国特許第３，４５５，８３８号（Marotta他）、および米国特許４，４６０ ，６１７号（Barndt他）（参照により本明細書に組み込む）に記載されているよ うな、コハク酸オクテニル（０ＣＳ）で変性したデンプンが、特に好ましい乳化 剤である。 曇り剤を増量剤と組み合わせて、分離して表面に上昇しないで、飲料に全体的 なまたは部分的な不透明の効果を与える飲料不透明化剤を提供することができる 。飲料不透明化剤は、ジュースを含む飲料の消費者に、外観を提供する。任意の 適当な増量用の油を、飲料不透明化剤に用いることができる。典型的な増量用の 油 には、臭素化した植物油、ウッドロジンのグリセロールエステル（エステルゴム ）、スクロースアセテートイソブチレート(sucrose acetate isobutyrate）（Ｓ ＡＩＢ）および他の蔗糖エステル、ダンマーゴム、コロホニー、エレミゴム、ま たは当業者に知られている他のものが含まれる。他の適当な増量剤には、消化す ることができない臭素化した液体ポリオールポリエステルが含まれる。１９８７ 年１１月１０日に発行された米国特許第４，７０５，６９０号（Ｂｒａｎｄ他） を参照。その特許を参照して本明細書に組み込む。 曇り剤／不透明化剤エマルジョンは、曇り剤を増量剤（不透明化剤エマルジョ ン用の）、乳化剤および水と混合することによって調製される。そのエマルジョ ンは、一般的に、約０．１から約２５％の曇り剤、約１から約２０％の増量用油 剤（不透明化剤エマルジョンの場合）、約１から約３０％の乳化剤、および約２ ５から約９７．９％の水、即ち充分な量（quantum satis.）を含んでいる。 そのエマルジョンの水に不溶の成分の粒度は、当技術分野で既知の適当な装置 を用いることによって、下げられる。懸濁液中に油を保持する乳化剤の能力は粒 度に比例するので、約０．１から約３．０ミクロンの直径を持つ粒子のエマルジ ョンが適当である。粒子は直径が約２．０ミクロン以下であることが好ましい。 実質的に全ての粒子が、１．０ミクロン以下の直径であるエマルジョンが最も好 ましい。粒度は、その混合物をホモジナイザー、コロイドミル、またはタービン 型撹拌機を通すことによって、下げられる。通常、１回または２回通せば十分で ある。１９８７年１１月１０日に発行された米国特許第４，７０５，６９１号（ Kupper他）を参照。その特許を参照により本明細書に組み込む。 飲料に有用な風味のあるエマルジョンは、飲料の風味剤（flavorants）として 使用するのに当技術分野では周知の、１つまたはそれ以上の適当な風味油、抽出 液、含油樹脂、精油などを含む。この成分はまた、果実のような自然産物を濃縮 して得られるような風味濃縮液を含むこともできる。テルペン含量の低い柑橘類 植物の油およびエキスをここに使うこともできる。適当な風味の例には、オレン ジ、レモン、ライムその他のような果樹風味、コーラ風味、茶風味、コーヒー風 味、チョコレート風味、乳製品風味、その他が含まれる。これらの風味は、精油 および抽出液のような自然の発生源から得ることができ、または合成的に調製す ることができる。その風味のあるエマルジョンは、一般に、様々な風味の混合物 を含み、そしてそれをエマルジョン、アルコール性抽出液、またはスプレードラ イされたものの形で使用することができる。風味のあるエマルジョンは、前に記 述したように、曇り剤を、増量剤と一緒にまたは増量剤なしに、含むこともでき る。１９８７年１１月１０日に発行された米国特許第４，７０５，６９１号(Kup per他)を参照。その特許を参照により本明細書に組み込む。 風味のあるエマルジョンは、一般に、風味付け油（０．００１〜２０％）を乳 化剤（１〜３０％）および水と混合することによって、曇り剤／不透明化剤エマ ルジョンと同じ方法によって調製される。（油の曇り剤が存在する場合もある） 。約０．１から約３．０ミクロンの直径を持つ粒子のエマルジョンが適当である 。粒子は、直径が約２．０ミクロン以下であることが好ましい。粒子は、直径が 約１．０ミクロン以下であるのが最も好ましい。乳化剤は、特殊化された風味油 を覆って、合体を防止し、適切な分散を維持するのを助ける。その風味のあるエ マルジョンの粘度と比重は、完成した飲料に適合するように調整される。１９８ ７年１１月１０日に発行された米国特許第４，７０５，６９１号（Kupper他）を 参照。その特許を参照により本明細書に組み込む。 本発明の希釈されたジュース飲料は、任意であるが、好ましくは、果汁、固形 茶、および果汁と固形茶の混合物から選ばれた風味固形物を含む。果汁が含まれ る時は、本発明の飲料は、０．１から約４０％、好ましくは１から約２０％、よ り好ましくは約２から約１０％、最も好ましくは約３から約６％の果汁を含むこ とができる。（ここで測定されたような、果汁の重量百分率は、天然濃縮２°〜 １６°Ｂｒｉｘ果汁に基づいている）。その果汁はピューレ、粉砕物として、ま たは天然濃縮または濃縮されたジュースとして飲料に加えることができる。約２ ０°から約８０°Ｂｒｉｘの固形物含量（主に砂糖固形物として）を持つ濃縮物 としてその果汁を加えることが、特に好ましい。 果汁は、柑橘類植物ジュース、非柑橘類植物ジュース、またはその混合物のど れであってもよく、それらは、希釈されたジュース飲料に使用されることが知ら れている。そのジュースは、リンゴ、クランベリー、洋梨、モモ、プラム、アン ズ、ネクタリン、ブドウ、サクランボ、カランツ、ラズベリー、グーズベリー、 セイヨウニワトコの実、ブラックベリー、ブルーベリー、ストローベリー、レモ ン、ライム、マンダリン、オレンジ、グレープフルーツ、クプアク（cupuacu） 、ジャガイモ、トマト、レタス、セロリ、ホウレンソウ、キャベツ、オランダガ ラシ、セイヨウタンポポ、ダイオウ、ニンジン、ビート、キュウリ、パイナップ ル、ココナッツ、ザクロ、キーウィ、マンゴー、パパイア、バナナ、スイカ、タ ンジェリン、および、カンタループメロンから得ることができる。好ましいジュ ースは、リンゴ、洋梨、レモン、ライム、マンダリン、グレープフルーツ、クラ ンベリー、オレンジ、ストローベリー、タンジェリン、ブドウ、キーウィ、パイ ナップル、パッションフルーツ、マンゴー、グアバ、ラズベリー、および、サク ランボから得られる。柑橘類植物のジュースは、グレープフルーツ、オレンジ、 レモン、ライム、およびマンダリンのジュース、ならびにマンゴー、リンゴ、パ ッションフルーツ、およびグアバから得られるジュースが好ましく、これらのジ ュースの混合物が最も好ましい。 固形茶を含む時は、本発明の飲料は、約０．０１から約１．２重量％、好まし くは約０．０５から約０．８％重量の固形茶を含むことができる。ここで使用さ れる「固形茶」という用語は、C．sinensisおよびC．assaimicaを含むツバキ属 から得られるそれらの材料を含む茶の材料、例えば、新たに集められた茶の葉、 集めた直後に乾燥された新鮮な緑茶の葉、存在するどんな酵素をも不活性化する ために乾燥する前に熱処理された新鮮な緑茶の葉、発酵していない茶、インスタ ント緑茶、および部分的に発酵した茶の葉、から抽出された固形物を意味する。 緑茶材料は、茶の葉、茶の植物の茎、および関連する他の植物材料であり、そし て紅茶を作るための実質的な発酵を受けていない材料である。茶植物のPhyllant hus属、catechu gmbir、およびUncaria科のメンバーを使うこともできる。発酵 していない茶と部分的に発酵した茶の混合物を使うことができる。 本発明の飲料に使用するための固形茶は、既知の、そして一般に行われている 固形茶の抽出方法によって得ることができる。特に好ましい固形緑茶の源は、１ ９９６年２月２６日に出願された同時係属の米国特許出願第０８／６０６，９０ ７号（Ekanayake他）に記載されている方法によって得ることができる。その特 許出願を参照により組み込む。そのように得られた固形茶は、一般に、カフェイ ン、テオブロミン、タンパク質、アミノ酸、ミネラルおよび炭水化物を含んでい る。固形茶を含んでいる適当な飲料は、１９９０年８月７日に発行された米国特 許第４，９４６，７０１号（Tsai他）に従って調製することができる。その特許 を参照により組み込む。本発明に使用するための固形緑茶の適当な源については 、１９９５年６月２６日に発行された米国特許第５，４２７，８０６号（Ekanay ake他）を参照のこと。 本発明による飲料は、固形ミルクを含むように調合することもできる。これら の固形ミルクは、全乳、スキムミルク、コンデンスミルク、および乾燥粉乳を含 めたさまざまな源から得ることができる。ここに使われているように、用語「ミ ルク」は、流体（全乳またはスキムミルク）、または脱脂粉乳（non-fat drymil k）、または水で希釈されたコンデンスミルクのような固形ミルクの水性分散物 を記述するのに使われる。含まれるミルクの量は、一般的に、約５から約９９． ８％、好ましくは約５から約７５％、より好ましくは約５から約４０％、そして 最も好ましくは約５から約１５％の範囲である。（これらの固形ミルクのレベル と相互に関係がある脱脂した固形ミルクの量は、それぞれ、飲料の約０．５から 約８．２％、約０．５から約６．２％、約０．５から約３．３％、および約０． ５から約１．２％の範囲である）。 本発明による飲料、特に希釈されたジュース飲料および固形茶を含んでいる飲 料は、キサンゴム、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸プロピレングリコ ール、ゲランゴム（gellan gum）、ガーゴム、ペクチン、トラガカントゴム、ア カシアゴム、イナゴマメゴム、アラビアゴム、ゼラチンなどの増粘剤、ならびに これら増粘剤の混合物を含むことができる。これらの増粘剤は、一般に、関係す る特定の増粘剤およびその望まれる粘度効果によって、本発明の飲料に、約０． ０７％までのレベルで含まれる。 本発明の飲料は、炭水化物甘味料、および自然のおよび／または人工のノンカ ロリー／低カロリーの甘味料を含めた１つまたはそれ以上の甘味料の効果的な量 を含むことができるし、含むのが一般的である。本発明の飲料で使われるその甘 味料の量（すなわち、「効果的な量」）は、一般に、使われる特定の甘味料およ び望まれる甘みの強さ次第である。ノンカロリー／低カロリーの甘味料について は、この量は、特定の甘味料の甘みの強さ次第で変わる。 本発明の飲料は、どの炭水化物甘味料を使っても甘くすることができるが、好 ましいのは単糖類および、または二糖類の砂糖である。砂糖で甘くされる飲料は 、一般に、約０．１から約２０％、最も好ましくは約６から約１４％の砂糖を含 む。これらの砂糖は、固体または液体の形で飲料に混ぜることができるが、しか し、一般的には、そして好ましくは、シロップとして混ぜられ、最も好ましくは 高果糖のコーンシロップのような濃縮シロップとして混ぜられる。本発明の飲料 を調製するという目的のために、これらの砂糖甘味料は、果汁成分、風味剤など のような飲料の他の成分によってある程度は与えられる場合もある。 これらの飲料に使用するのに好ましい砂糖甘味料は、蔗糖、果糖、ぶどう糖、 およびそれらの混合物である。果糖は、液体果糖、高果糖のコーンシロップ、乾 燥果糖または果糖シロップとして得られ、または供給されることができるが、高 果糖のコーンシロップとして供給されることが好ましい。高果糖のコーンシロッ プ（ＨＦＣＳ）は、ＨＦＣＳ−４２、ＨＦＣＳ−５５、およびＨＦＣＳ−９０と して市販されており、そのなかには果糖として、それぞれ、重量で４２％、５５ ％、および９０％の砂糖固形分を含んでいる。グリチルリチン、タンパク甘味料 タウマチン、例えば、１９９５年７月１８日に発行された米国特許第５，４３３ ，９６５号(Fischer他)（参照により本明細書に組み込む）に開示されているLuo Han Guoのジュース等のような自然に存在する他の甘味料またはそれらの精製し た抽出物も、本発明の飲料に使用することができる。 適当なノー／低カロリー甘味料には、サッカリン、チクロ、アセスルファム（ acesulfam）Ｋ（Sunette（商標））、Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン の低級アルキルエステル甘味料（例えば、アスパルテーム）、Brennan他への米 国特許第４，４１１，９２５号に開示されているＬ−アスパルチル−Ｄ−アラニ ンアミド、Brennan他への米国特許第４，３９９，１６３号に開示されているＬ −アスパルチル−Ｄ−セリンアミド、Brandへの米国特許第４，３３８，３４６ 号に開示されているＬ−アスパルチル−Ｌ−１−ヒドロキシメチルアルカンアミ ド甘味料、Rizziへの米国特許第４，４２３，０２９号に開示されているＬ−ア スパルチル−１−ヒドロキシエチアルカンアミド甘味料、１９８６年１月１５ 日に公開されたJ.M.Januszへの欧州特許出願第１６８,１１２号に開示されてい るＬ−アスパルチル−Ｄ−フェニルグリシンのエステルおよびアミドの甘味料、 その他、およびそれらの混合物が含まれる。特に好ましい低カロリー甘味料はア スパルテームである。 本発明の飲料は、他の防腐剤（例えば、有機酸）、着色剤などを含む他の任意 の飲料成分を含むこともできる。これらの飲料を、ビタミンとミネラルの米国の 一日の推奨摂取量（ＲＤＡ）の０から約１１０％までで強化することもできる。 ただし、そのようなビタミンおよびミネラルは、実質的に、飲料の所望の特性（ 例えば、外界露出時間）を変えないこと、そしてそのようなビタミンおよびミネ ラルは化学的にも物理的にも、飲料の他の必須の成分に影響を及ぼさないことが 必要である。ビタミンＡ（例えば、ビタミンＡパルミチン酸塩）、そのプロビタ ミン（例えば、β−カロチン）、ビタミンＢ１（例えば、チアミンＨＣｌ）、お よびビタミンＣ（すなわち、アスコルビン酸）が特に好ましいが、他のビタミン であってもよい。 本発明の飲料に含めることができるミネラルには、カルシウム、マグネシウム 、亜鉛、ヨウ素、および銅が含まれる。食品に加えるのに適しているこれらのミ ネラルの可溶性の塩、例えば、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、マレイン 酸カルシウム、クエン酸−マレイン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、クエ ン酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化亜鉛、硫 酸亜鉛、ヨウ化カリウム、および硫酸銅であれば、どれでも使うことができる。 好ましいカルシウム源は、ある種の有機酸との錯体であり、特にクエン酸−マレ イン酸カルシウムである。この好ましいカルシウムの有機酸錯体の調製は、１９ ８８年４月１２日に発行された米国特許第４，７３７，３７５号（Nakel他）に 記載されており、その特許を参照により本明細書に組み込む。 本発明の飲料は、一般に、約２から約４．５、好ましくは約２．７から約４． ２のｐＨを有する。このｐＨの範囲は、炭酸塩化されていない飲料に典型的なも のである。飲料の酸性度は、既知のおよび一般に行われている方法、例えば、食 品用の酸緩衝剤を使用して必要な範囲内に調整し、維持することができる。一般 的には、上記に引用した範囲内の飲料の酸性度は、微生物を抑制するための最大 の酸性度と所望の飲料の風味および酸味の印象についての最適な酸性度との間の バランスである。 本発明の飲料は、炭酸化されていない飲料を調合するのに一般に行われている 方法によって調製することができる。例えば、希釈されたジュース飲料を作る方 法は、１９８８年４月１２日に発行された米国特許第４，７３７，３７５号(Nak el他)に記載されており、その特許を参照により本明細書に組み込む。飲料製品 を作るための方法は、WoodroofとPhillipsの、「Beverages:Carbonated & Nonca rbonated」、AVI Publishing Co.社（１９８１年、改訂版）、およびThornerとH erzbergの、「Non-alcoholic Food Service Beverage Handbook」、AVI Publishin g Co.社（１９７８年、第２版）にも記載されている。このような方法は、ホッ トパッキングの操作または無菌包装操作を含む場合もあるが、そのような操作は 飲料の安定性または長い外界露出時間のどちらを達成するのにも必要ではない。 実際に、本発明の共同作用的な抗菌性組合せ剤の利点は、その組合せ剤を含んで いる飲料はその製品をホットパッキングを用いなくても作ることができるという ことである。 その抗菌性組合せ剤を食品または飲料に混ぜ、存在するどんな微生物も効果的 に殺すか、または微生物の成長が抑制されるようなどんな方法も適切である。本 発明による希釈されたジュース飲料を作るのに好ましい方法は次の通りである。 すなわち、ソルビン酸塩防腐剤およびナタマイシンを使用される濃縮ジュースに 添加して、天然濃縮の希釈されたジュース飲料に上記に示したレベルのこれらの 抗菌物質を提供するのに充分な量の飲料を調合する。次に、これらの抗菌成分を 持つ濃縮ジュースを、適切な割合で源水と混合するか、よくブレンドするか、ま たは別の方法で合体させて、天然濃縮の希釈されたジュース飲料を生成する。い ったん天然濃縮の希釈されたジュース飲料が調製されたら、次にジアルキルジカ ーボネートを加えて、その飲料中に実質的に均一に分散させることが好ましい。 ジアルキルジカーボネートは、調製された直後のその天然濃縮飲料のどの微生物 をも初期のうちに非常に効果的に「殺して」しまう。ジアルキルジカーボネート は水により加水分解されるので、存在するソルビン酸塩防腐剤およびナタマイシ ンが、所定期間にわたって微生物の成長を効果的に抑制することができる。 Ｅ．試験方法：外界露出時間／微生物の安定性 外界露出時間とは、華氏６８度（２０℃）で飲料製品のような食品が、食物を 腐敗させる微生物による１０ｃｆｕ／ｍｌの接種の後に、微生物の増殖に効果的 に抵抗できる期間に相当する。ここで使用されている「微生物の増殖」という用 語は、食品中の食物を腐敗させる微生物の数が、約１０ｃｆｕ／ｍｌという初期 の接種レベルの後に、１００倍に増加するか、またはこれより多くなることを意 味する。 食品の外界露出時間は、次の方法で測定することができる。Zygosaccharomyce s bailiiを含めた少なくとも４つの別の酵母菌の単離物を含む防腐剤に抵抗力の ある酵母菌の混合グループ、およびアセトバクター種などの防腐剤に抵抗力があ り、酸に耐性のある細菌の混合グループを食品に接種する。接種に利用された全 ての酵母菌および細菌を、防腐処理された果汁飲料から予め分離する。接種され た食品を華氏６８度（２０℃）に２１日間維持し、好気性平板培養を定期的に実 施する。酵母菌および細菌個体群の両方の好気性平板の計数を、ワシントン市の American Public Health Associationによる、「the Compendium of Methods fo r the Microbiological Examinations of Foods」（C．VanderzantとD．F.Spllt tstoesser編集）に記載されているように実施する。その記載内容を参照により 本明細書に組み込む。次に、これらの平板の計数を使って、その接種された飲料 中の微生物の増殖の程度を同定する。 実施例 下記に、本発明の共同作用的な抗菌性組合せ剤を使用して調製される飲料を説 明する。 実施例１ ジュースミルク飲料を次の成分から調製する。 クエン酸、ソルビン酸カリウム、ナタマイシン、およびジメチルジカーボネー トを除いて、その全ての成分（例えば、濃縮ジュース、固形ミルク、風味料、甘 味料、増粘剤など）を加えてよく混合し、その飲料を生成する。その飲料のｐＨ をクエン酸で４．１に調節し、次いで、ソルビン酸カリウムを加えてその飲料に 溶解させる。ナタマイシンの貯蔵液を水で調合してから、その飲料に加える。瓶 に詰める直前に、ジメチルジカーボネートをその飲料に均一に分散させる（添加 時点から瓶詰めして蓋をするまでの時間間隔は約２分未満である）。この調整さ れた飲料は、周囲温度で２１日間、微生物に対して安定である。 実施例２ 希釈されたジュース飲料を次の成分から調製する。 クエン酸、ソルビン酸カリウム、ナタマイシン、および、ジメチルジカーボネ ートを除いて、その全ての成分（例えば、濃縮ジュース、固形ミルク、風味料、 甘味料、増粘剤など）を加えてよく混合し、その飲料を生成する。その飲料のｐ Ｈを、クエン酸で３．２に調節し、次いで、ソルビン酸カリウムを加えてその飲 料に溶解させる。ナタマイシンの貯蔵液を水で調合してから、その飲料に加える 。瓶に詰める直前に、ジメチルジカーボネートをその飲料に均一に分散させる（ 添加時点から瓶詰めして蓋をするまでの時間間隔は約２分未満である）。その調 製された飲料は、周囲温度で２１日間、微生物に対して安定である。 実施例３ 茶の飲料を次の成分から調製する。 クエン酸、ソルビン酸カリウム、ナタマイシン、およびジメチルジカーボネー トを除いて、その全ての成分（例えば、濃縮ジュース、固形ミルク、風味料、甘 味料、増粘剤など）を加えてよく混合し、その茶の飲料を生成する。その飲料の ｐＨを、クエン酸で４．２に調節し、次いで、ソルビン酸カリウムを加えてその 飲料に溶解させる。ナタマイシンの貯蔵液を水で調合してから、その飲料に加え る。瓶に詰める直前に、ジメチルジカーボネートをその飲料に均一に分散させる （添加時点から瓶詰めして蓋をするまでの時間間隔は約２分未満である）。その 調製された飲料は、周囲温度で２１日間、微生物に対して安定である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，Ｖ Ｎ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 エカナヤケ，アシュラ. アメリカ合衆国 45249 オハイオ州 シ ンシナティー バーチバード ドライブ 8656

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．抗菌性組合せ剤であって、その抗菌性組合せ剤は、 （ａ）ナタマイシンと、 （ｂ）ジアルキルジカーボネートと、 （ｃ）ソルビン酸塩防腐剤とを含み、 （ｄ）前記ナタマイシン、ジアルキルジカーボネート、およびソルビン酸塩防 腐剤のそれぞれのレベルは、その味覚しきい値より低いが、その組合せ剤が食品 を腐敗させる微生物に対して効果を有するのに充分であることを特徴とする抗菌 性組合せ剤。 ２．該抗菌性組合せ剤は、 （ａ）約２から約１０ｐｐｍ、好ましくは約２．５から約５ｐｐｍのナタマイ シンと、 （ｂ）約３０から約１５０ｐｐｍ、好ましくは約５０から約１００ｐｐｍのジ アルキルジカーボネートと、 （ｃ）約３０から約３００ｐｐｍ、好ましくは約５０から約１５０ｐｐｍのソ ルビン酸塩とを含むことを特徴とする請求項１に記載の抗菌性組合せ剤。 ３．前記ジアルキルジカーボネートは次の一般式を有し、 上式で、Ｒ₁およびＲ₂は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブ チル、イソブチル、アミル、およびシクロヘキシルから成る群から選ばれた同一 の、または異なるアルキル基を表すことを特徴とする請求項１または２に記載の 抗菌性組合せ剤。 ４．前記ジアルキルジカーボネートがジメチルジカーボネートであることを特徴 とする請求項１、２または３に記載の抗菌性組合せ剤。 ５．前記ソルビン酸塩防腐剤は、ソルビン酸、ソルビン酸カルシウム、ソルビン 酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、およびそれらの混合物から成る群から選ば れることを特徴とする請求項１、２、３、または４に記載の抗菌性組合せ剤。 ６．通常、食物を腐敗させる微生物の影響を受けやすい食品または飲料製品であ って、該製品が請求項１、２、３、４、または５に記載の抗菌性組合せ剤の効果 的な量で処理されたことを特徴とする食品または飲料製品。 ７．チーズ、ミルク、サワークリーム、ヨーグルト、バター、マーガリン、アイ スクリーム、サラダドレッシング、クリーマー、塗布しやすい糖衣製品、マヨネ ーズ、ワイン、ジュース、ピューレ、および加工肉製品から成る群から選ばれる ことを特徴とする請求項６に記載の製品。 ８．（１）約０．２から約５％の飲料エマルジョン、 （２）約０．１から約４０％、好ましくは約２％から約１０％の果汁を含む 希釈されたジュース飲料製品であって、 その飲料に請求項１、２、３、４、または５に記載の抗菌性組合せ剤を組み入れ ることを含むことを特徴とするジュース飲料製品。 ９．該製品が、約５から約４０％、好ましくは約５から約１５％の固形ミルクを 含むことを特徴とする請求項６、７、または８に記載の製品。 １０．前記ジアルキルジカーボネートがジメチルジカーボネートであり、前記ソ ルビン酸塩防腐剤がソルビン酸カリウムであることを特徴とする請求項６、７、 ８、または９に記載の製品。 １１．前記製品が、さらに約０．０１から約１．２％、好ましくは約０．０５か ら約０．８％の固形緑茶を更に含むことを特徴とする請求項６、７、８、９、ま たは１０に記載の製品。 １２．通常、食物を腐敗させる微生物の影響を受けやすい飲料を処理する方法で あって、 （ａ） （１）通常、食物を腐敗させる微生物の影響を受けやすい飲料の濃縮液と、 （２）天然濃縮飲物中に約２から約１０ｐｐｍ、好ましくは約２．５ｐｐｍ から約５ｐｐｍとするのに充分な量のナタマイシンと、 （３）天然濃厚飲物中に約３０から約３００ｐｐｍ、好ましくは約５０ｐｐ ｍから約１００ｐｐｍとするのに充分な量のソルビン酸塩防腐剤、好ましくはソ ルビン酸カリウムとを含む濃縮飲料を生成するステップと、 （ｂ）濃縮飲料に、天然濃縮飲料を生成するのに充分な量の源水を加えるステ ップと、 （ｃ）天然濃縮飲料中に約３０から約１５０ｐｐｍ、好ましくは約５０ｐｐｍ から約１００ｐｐｍとするのに充分な量のジアルキルジカーボネート、好ましく はジメチルジカーボネートを実質的に均一に分散させるステップとを含むことを 特徴とする方法。