JP2001517679A

JP2001517679A - アンチトロンビンｉｉｉの精製方法

Info

Publication number: JP2001517679A
Application number: JP2000512865A
Authority: JP
Inventors: イェンドラ・リンナウ; エルンスト・ヘッツル; ハー・ペーター・マティーセン; ジルヴィア・ネップル; ヴォルフガング・シェーンホーファー; ハンス−ペーター・シュヴァルツ
Original assignee: バクスター・アクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1997-09-19
Filing date: 1998-09-17
Publication date: 2001-10-09
Also published as: NO20001414L; SK4012000A3; ATA159497A; WO1999015562A1; AT405739B; BR9812229A; HUP0003671A1; NO20001414D0; CA2303924A1; US6395880B1; AU9244898A; EP1015491A1; AU742861B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヘパリン／ＡＴＩＩＩまたはへパリノイド／ＡＴＩＩＩ複合体をアニオン交換物質に吸着させた後、ＡＴＩＩＩの溶出によって開裂させることにより、該複合体を含有する出発物質からアンチトロンビンＩＩＩを精製する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、アンチトロンビンＩＩＩの新規精製方法に関する。

【０００２】アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）は、トロンビン、ＩＸa、Ｘa、ＸＩa
、およびＸＩＩa因子を阻害することにより凝固阻害剤としてはたらく血漿タンパク質である。

【０００３】ＡＴＩＩＩ欠乏症または遺伝性血栓発現傾向は、減少したＡＴＩＩＩの形成
に起因する血栓症および塞栓症の傾向を有する常染色体優性遺伝の疾患である。

【０００４】後天性ＡＴＩＩＩ欠乏症は、例えば播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、敗血症、肝硬変またはネフローゼ症候群に伴って起こり得る。

【０００５】ＡＴＩＩＩ欠乏の症状は、心臓弁プロテーゼ、術後の血栓塞栓合併症の場合において、エストロゲン療法において、またはアスパラギナーゼ療法においても
起こり得る。

【０００６】ＡＴＩＩＩは、ヘパリンおよびヘパリノイドに対する親和性が高いので、純粋なアンチトロンビンＩＩＩ調製物を製造する場合には、ヘパリンまたはへパリ
ノイドを分離することが必要である。

【０００７】ＥＰ０３０７００２Ａ１によれば、このＡＴＩＩＩ／ヘパリンまたはＡＴＩＩＩ／へパリノイド複合体の開裂はそれぞれ、固定化したプロタミンにより行い、ヘパリンを固定化したプロタミンに結合させ、ＡＴＩＩＩを上清から回収する。固定化プロタミンによる処理の前に、ＡＴＩＩＩ／ヘパリンまたはＡＴＩＩＩ／へパリノイド複合体をそれぞれ、pＨ７.５の食塩水を用い、イオン交換物質に吸着させ、溶出することにより、望ましくないタンパク質から精製
する。イオン交換クロマトグラフィーによりこの複合体は開裂せず、望ましくな
い付随のタンパク質の分離が達成され、このような複合体自体は変化することな
く吸着されたままであることが分かった。

【０００８】ＡＴＩＩＩを精製するためのさらに可能な方法は、ヘパリン−セファロースを用いるアフィニティークロマトグラフィーによるものである。

【０００９】例えば、Prep.Biochem.13(1)(1983),pp.1-20には、ＡＴＩＩＩを精製するための方法が記載されており、最初に、ＡＴＩＩＩをヘパリンセファロースを用いてアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、次いでイオン交換クロマ
トグラフィーおよびゲルクロマトグラフィーにより精製する。ＡＴＩＩＩはヘパリン−セファロースからpＨ７.４で溶出する。イオン交換クロマトグラフィー
は、ＤＥＡＥ−セファロースにより行われており、ＡＴＩＩＩは pＨ８.６で結
合している。

【００１０】 Thrombosis Research 5 (1974),pp.431-452にも、ヘパリン−セファロースを用いたＡＴＩＩＩの精製が記載されており、吸着はpＨ８.５にて、脱着、即ち固定化されたヘパリンとＡＴＩＩＩの複合体の開裂はpＨ７.５にて行われている。その後のＤＥＡＥ−セファデックスを用いたイオン交換クロマトグラフィー
では、ＡＴＩＩＩは pＨ８.０で結合し、 pＨ７.４で溶出された。

【００１１】同様の方法が、ＤＥ２２４３６８８に記載されている。この公報にも、架橋されたヘパリン−アガロースゲルによるＡＴＩＩＩの精製が開示されており、ヘパリンゲルへの吸着はpＨ８.５で、脱着、即ち固定化されたヘパリンからの
ＡＴＩＩＩの開裂はpＨ７.３で行われている。

【００１２】本発明は、ヘパリンおよびへパリノイドをそれぞれ、可能な限り含まないよう
にＡＴＩＩＩが回収されるようにすることによって、アンチトロンビンＩＩＩ調製物を高純度および高収率で製造するための、新しい方法を提供するという目
的に基づいている。

【００１３】本発明によれば、この目的は、ＡＴＩＩＩ／ヘパリンまたはＡＴＩＩＩ／ヘ
パリノイド複合体を含む出発物質から、ＡＴＩＩＩを精製するための方法であって、ＡＴＩＩＩ／ヘパリンまたはＡＴＩＩＩ／ヘパリノイド複合体をアニオ
ン交換物質に吸着させ、次いでその吸着させた複合体からＡＴＩＩＩを開裂させて溶出することを特徴とする方法によって達成される。この開裂で、ヘパリン
がアニオン交換物質に残る。即ち、ＡＴＩＩＩの選択的溶出が起こる。

【００１４】好ましくは、本発明に従う開裂は、ｐＨ８.５〜１０.５の範囲の緩衝液で行う
。

【００１５】意外にも、ヘパリン／ＡＴＩＩＩまたはへパリノイド／ＡＴＩＩＩ複合体の
開裂はそれぞれ、アニオン交換クロマトグラフィーの過程において可能であり、
これは８.５よりも高いpＨにおいてさえ可能であることが分かった。

【００１６】アニオン交換物質から、ＡＴＩＩＩをヘパリンに対して選択的に溶出させることができること、即ちヘパリンの吸着物質への結合（その結合はヘパリン−セ
ファロースとは対照的に共有結合でない）はそのままとして、ＡＴＩＩＩとヘパリンもしくはへパリノイドとの間の複合体形成をそれぞれ開裂することができ
ることが分かった。先行技術では、本来そのようなpＨでは、ＡＴＩＩＩのヘパ
リンへの親和性が非常に高いと考えられており（Thrombosis Research (1974)ま
たはＤＥ２２４３６８８参照）、共有結合させたヘパリンについてさえ、複
合体の開裂（即ち、固定化されたヘパリンからのＡＴＩＩＩの開裂）は常に低いpＨの値で行われていたが、吸着されたＡＴＩＩＩ／ヘパリンまたはＡＴＩＩＩ／へパリノイド複合体からのＡＴＩＩＩの選択的溶出がアニオン交換クロマトグラフィーにより可能であるこということが判明したのである。

【００１７】しかしながら、本発明の範囲内において、非常に高いpＨ値でも、ヘパリンがアニオン交換物質に結合したままで複合体の開裂を達成し得ることが分かった。

【００１８】好ましくは、本発明に従う方法では、溶出を１５〜５０ｍＳの伝導度を有する
緩衝液により行う。そのような伝導度で最適な選択性の溶出が達成される。即ち
、この伝導度は、複合体の実質的に完全な開裂が十分に可能である一方、ヘパリ
ンまたはへパリノイドがそれぞれ一緒に溶出するほど高くない伝導度である。吸
着および脱着の条件はそれぞれ、一般に、使用するアニオン交換物質に依存し、
実質的に伝導度と緩衝液の pＨ値との相関関係にある。

【００１９】特に、 pＨと伝導度との間の相互依存性は、例えば２０ｍＳ付近の低い伝導度
では、緩衝液のpＨも例えば８.５と低くなるというものであり、その逆もまた同
様である。緩衝液として、例えばＴris、リン酸、またはグリシンを含有する溶液を使用する。

【００２０】好ましくは、吸着の前に、ヘパリンまたはへパリノイドをそれぞれ、３０〜３
０００Ｕ／ｍLの量で混合する。これにより、出発物質中のすべてのＡＴＩＩＩ
を確実に複合体として存在させ、遊離のＡＴＩＩＩの存在による収率の損失をなくす。

【００２１】好ましくは、本発明に従う方法は、２段階のクロマトグラフィー精製で行い、
第１の段階では、複合体をアニオン交換物質に吸着させ、６.０〜７.５の pＨ範
囲で安定な複合体を溶出させる。次いで、本発明の複合体の吸着、複合体からの
ＡＴＩＩＩの開裂または溶出を行う。pＨ値が８.５〜１０.５の場合、溶出時に
、緩衝液を好ましくは高い伝導度、例えば１０〜６０ｍＳ、好ましくは１５〜５
０ｍＳ、最も好ましくは２０〜３５ｍＳに調整する。

【００２２】ＡＴＩＩＩは治療剤として好ましく使用されるので、多くの場合、ウイルス不活化の処理が必要である。ＡＴＩＩＩは遊離した形態よりも複合体の形態での方が安定であるため、この処理は、好ましくはＡＴＩＩＩ／ヘパリンまたはＡＴＩＩＩ／へパリノイド複合体の段階で行う。好ましくは、ウイルス不活化の処理は、２段階、即ち２つの独立したウイルス不活化法でも行われる。

【００２３】この不活化処理は、好ましくは界面活性剤および／または熱処理、例えば固体
状態での熱処理、特にＥＰ−０１５９３１１、ＥＰ−０５１９９０１または
ＥＰ−０６７４５３１に記載の蒸気処理により確実にする。

【００２４】ウイルスの不活化のための方法にはさらに、化学的または化学的／物理的方法
、例えばＷＯ９４／１３３２９、ＤＥ４４３４５３８またはＥＰ−０１３１７４０（溶媒）に記載のカオトロピック物質または光不活化による処理が含まれる。

【００２５】ナノフィルトレーションもまた、ウイルスを減少させるための、本発明の範囲
に含まれる好ましい方法である。

【００２６】アニオン交換物質としては、原則として、ヘパリンまたはへパリノイドに対し
親和性を有するすべてのアニオン交換物質が使用できる。例えば、ジエチルアミ
ノエチル基を有するセルロースベースのアニオン交換物質（ＤＥＡＥ−セファセ
ル（商標）、ＤＥ３２、ＤＥ５２など、またはＥｘｐｒｅｓｓＩｏｎＤ（すべてWhatman製））またはＣＨ₂Ｎ⁺（ＣＨ₃）₃基を有するセルロースベースのアニオン交換物質（ＱＡ５２またはＥｘｐｒｅｓｓＩｏｎＱ（Whatman製））、ジエチルアミノエチル基を有する架橋されたデキストランに基づくアニオン交換
物質（ＤＥＡＥ−セファデックス（商標））、ジエチルアミノエチル基を有する
アガロースベースのアニオン交換物質（ＤＥＡＥ−セファロースＣＬ６Ｂ（商標）、ＤＥＡＥ−セファロースＦａｓｔＦｌｏｗ（商標））、ジエチル−［２
−ヒドロキシプロピル］−アミノエチル基を有する架橋されたデキストランに基
づくアニオン交換物質（ＱＡＥ−セファデックス（商標））、ＣＨ₂Ｎ⁺（ＣＨ₃ ）₃基を有するアガロースに基づくアニオン交換物質（Ｑ−セファロースＦａｓ
ｔＦｌｏｗ（商標）、Ｑ−セファロースＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（商標）、Ｑ−セファロースＢｉｇＢｅａｄｓ（商標））またはアガロースとデ
キストランの共重合体に基づくアニオン交換物質（Ｑ−セファロースＸＬ）（すべてファルマシア製）、機能性アニオン交換物質としてＮ−アクリロイル−２
−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１,３−プロパンジオールとジエチルアミノエチル基を有するアニオン性アクリル誘導体との共重合反応により製造された球
形のクロマトグラフィーゲル（ＤＥＡＥ−Ｔris−Acryl（商標））、架橋された
デキストランマトリックス内に多孔性シリカゲルが包埋された、反応性のジエチ
ルアミノエチルアニオン交換基を有する非圧縮性のシリカ−デキストランマトリ
ックス（ＤＥＡＥ−Ｓｐｈｅｒｏｄｅｘ（商標））、強固なポリスチレン粒子で
できており、強力なアニオン交換活性を有する４級アミン基を有するヒドロゲル
で孔が充填されたゲル（Ｑ−Ｈｙｐｅｒ−Ｄ（商標））（すべてＳｅｐｒａｃｏ
ｒ製）；Ｎ⁺（Ｃ₂Ｈ₅）₂またはＮ⁺（ＣＨ₃）₃基を有する強固なマクロ細孔を有する親水性表面（ＭａｃｒｏｐｒｅｐＤＥＡＥ（商標）、Ｍａｃｒｏｐｒｅｐ
Ｑ（商標）（すべてＢｉｏＲａｄ製））；ジエチルアミノエチル−ジエチル−（
２−ヒドロキシプロピル）−アミノエチルおよびＣＨ₂Ｎ⁺（ＣＨ₃）₃基を有する
アニオン交換物質（ＤＥＡＥ−トヨパール（商標）、ＱＡＥ−トヨパール（商標
）、トヨパールスーパー−Ｑ（商標）（すべてTosohass製））、多孔性のポリメタクリレート／ポリアクリレートゲルからなるアニオン交換樹脂（プロテイン
ＰＡＫＤＥＡＥ（商標）（Waters製））；オリゴエチレングリコール−ジメチルアクリレート、グリシジル−メタクリレートおよびペンタエリスリトールジメ
チルアクリレートからなる親水性表面を有する共重合体に基づくアニオン交換物
質（ＦｒａｃｔｏｇｅｌＥＭＤ−ＴＭＡＥ（商標）、ＦｒａｃｔｏｇｅｌＥＭ
Ｄ−ＤＥＡＥ（商標）、ＦｒａｃｔｏｇｅｌＥＭＤ−ＤＭＡＥ（商標））、耐圧性の球形多孔質クロマトグラフィー粒子でできたシリカゲルに基づくアニオン
交換樹脂（Ｌｉｃｒｏｓｐｈｅｒ１０００ＴＭＡＥ（商標）、Ｌｉｃｒｏｓｐ
ｈｅｒ１０００ＤＥＡＥ（商標）、Ｌｉｃｒｏｓｐｈｅｒ４０００ＤＭＡＥ
（商標）（すべてMERCK製））などである。

【００２７】本発明による方法の特に好ましい態様では、ヒト血漿またはＡＴＩＩＩ含有血漿画分をヘパリンまたはへパリノイドと混合し、ＡＴＩＩＩ／へパリンまたはＡＴＩＩＩ／へパリノイド複合体を形成し、この複合体を、感染因子の不活化のための熱処理に付する。この処理は、場合により安定化有機多価塩、例えば
クエン酸塩および／または硫酸アンモニウムなどの存在下で、好ましくは４０〜
７０℃の温度範囲にて３〜３０時間行うが、６０℃付近の温度で約１０時間の処
理が特に好ましい。

【００２８】本発明に従う方法では、好ましくはヒト血漿またはＡＴＩＩＩを含有する（ヒト）血漿画分、好ましくはクリオプレシピテート除去血漿またはＣｏｈｎ画分
好ましくはＣｏｈｎ画分ＩＶを出発物質とする。

【００２９】本発明を、以下の実施例によってさらに詳しく説明するが、これに限定されな
い。

【００３０】実施例１クリオプレシピテート除去血漿９３.２Ｌを、ヘパリン７.５×１０⁶Ｕと混合し、１／２時間撹拌し、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ５０（ファルマシア製）を
１Ｌあたり１ｇ混合した。ゲルを分離し、次いで結合しなかったタンパク質をク
エン酸緩衝化ＮaＣl溶液（１g／ＬＮaＣl、 pＨ７.５）により除き、ＡＴＩＩ
Ｉ／へパリン複合体を、伝導度４４ｍＳ、 pＨ７.５の緩衝液で溶出することにより回収した。次いで、この溶液を、安定化有機多価塩（１６０ｇ／ＬＮa−ク
エン酸）の存在下で６０℃に１０時間加熱して、存在し得る病原性微生物を不活
化した。

【００３１】形成した沈殿は、遠心または濾過により分離し、捨てた。透明な溶液を、再び
緩衝化してpＨ９.０、伝導度１２.２ｍＳにした。ＡＴＩＩＩ／へパリン複合体
を、１０００ｍLのＱ−セファロースＦａｓｔＦｌｏｗ（商標）（ファルマシア製）からなるクロマトグラフィーカラムに結合させ、 pＨ９.０、伝導度２６ｍＳの緩衝液でＡＴＩＩＩを選択的に溶出した。

【表１】

【００３２】実施例２：（現時点において出願人が考える発明の最良の実施形態）クリオプレシピテートおよびプロトロンビン複合体を除去したのち、血漿２４
.５Ｌをヘパリン１.８５×１０⁶Ｕと混合した。１Ｌあたり、ＤＥ５２セルロース（Whatman製）１５ｇを使用してＡＴＩＩＩ／へパリン複合体を吸着させ、生
成物を伝導度４５ｍＳ、pＨ８.０の緩衝液で溶出することにより回収した。低温
殺菌（６０℃、１０時間）後、溶液を再び緩衝化し、米国特許第４,５４０,５７
３号に従って、２５℃にて、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）×１００（ポリエチレングリ
コール−tert−オクチルフェニルエーテル、Ｔｗｅｅｎ（商標）８０（ポリオキ
シエチレンソルビタン−モノ−オレエート）並びにトリ−（ｎ−ブチル）ホスフ
ェート（ＴＮＢＰ）で処理した。

【００３３】ＡＴＩＩＩを、２５ｍLのＱ−セファロースＦａｓｔＦｌｏｗ（商標）カラ
ム（ファルマシア製）により、クロマトグラフィー精製し、pＨ９.８、伝導度２
３ｍＳの緩衝液で溶出することにより回収した。超遠心および透析濾過により、
ＡＴＩＩＩを１００Ｕ／ｍLに調整した後、無菌条件での濾過により容器に入れ
、所望により凍結乾燥した。凍結乾燥後の結果ＡＴＩＩＩ９６Ｕ／ｍL ヘパリン０.８Ｕ／ｍL ＡＴＩＩＩ／タンパク６.２Ｕ／ｍL トリトン、Ｔｗｅｅｎ、ＴＮＢＰ＜検出限界ＡＴＩＩＩのヘパリン結合＞９５％＊）＊）ヨーロッパ薬局方による

【００３４】実施例３：Ｑ−セファロースの代わりにトヨパール（商標）Ｑ−６５０Ｔｈ（商標）（Ｔ
ｏｓｏＨａａｓ）を用い、実施例２を反復した。結果（溶出液）ＡＴＩＩＩ４.５Ｕ／ｍL ヘパリン０.１Ｕ／ｍL ＡＴＩＩＩ／タンパク３.２Ｕ／ｍL

【００３５】実施例４：Ｑ−セファロースの代わりにＥｘｐｒｅｓｓＩｏｎＱ（Whatman）を用い、実施例２を反復した。結果（溶出液）ＡＴＩＩＩ８.０Ｕ／ｍL ヘパリン０.８Ｕ／ｍL ＡＴＩＩＩ／タンパク５.５Ｕ／ｍL

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ジルヴィア・ネップルオーストリア、アー−1030ヴィーン、リューデンガッセ19／15番 (72)発明者ヴォルフガング・シェーンホーファーオーストリア、アー−3100ザンクト・ペールテン、リンゲルナッツガッセ５／ツェー１番 (72)発明者ハンス−ペーター・シュヴァルツオーストリア、アー−1180ヴィーン、シンドラーガッセ32番

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アンチトロンビンＩＩＩ／ヘパリンまたはアンチトロンビン
ＩＩＩ／ヘパリノイド複合体を含む出発物質から、それぞれアンチトロンビンＩ
ＩＩを精製する方法であって、複合体をアニオン交換物質に吸着させ、アンチト
ロンビンＩＩＩを溶出によって複合体から分離することを特徴とする方法。
【請求項２】溶出を、ｐＨ８.５〜１０.５の範囲の緩衝液で行うことを特
徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】溶出用の緩衝液が、１０〜６０ｍＳ、好ましくは１５〜５０
ｍＳ、最も好ましくは２０〜３５ｍＳの伝導度を有することを特徴とする、請求
項１または２に記載の方法。
【請求項４】３０〜３０００Ｕ／ｍLの量のヘパリンまたはへパリノイドを、アンチトロンビンＩＩＩを含有する出発物質と混合し、アンチトロンビンＩ
ＩＩ／ヘパリンまたはアンチトロンビンＩＩＩ／へパリノイド複合体を形成させ
ることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】アンチトロンビンＩＩＩ／ヘパリンまたはアンチトロンビン
ＩＩＩ／へパリノイド複合体を、第１の段階において複合体をアニオン交換物質
に吸着させ６.０〜７.５の pＨ範囲で溶出する２段階のクロマトグラフィー精製
に付することを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】ウイルス不活化工程を設けることを特徴とする、請求項１〜
５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】ヒト血漿またはアンチトロンビンＩＩＩ含有血漿画分をヘパ
リンまたはへパリノイドと混合し、それぞれヘパリン／アンチトロンビンＩＩＩ
またはへパリノイド／アンチトロンビンＩＩＩ複合体を形成させ、この複合体を
、感染因子の不活化のために、場合により安定化有機多価塩、好ましくはクエン
酸塩および／または硫酸アンモニウムの存在下で、４０〜７０℃の温度範囲にて
３〜３０時間、好ましくは６０℃付近の温度で１０時間、熱処理に付することを
特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】ヒト血漿またはアンチトロンビンＩＩＩを含む血漿画分、好
ましくはクリオプレシピテート除去血漿を出発物質することを特徴とする、請求
項１〜７のいずれかに記載の方法。