JP2579217B2 - 凝固因子▲ii▼、▲vii▼、▲ix▼およびxの1または2以上を濃縮する方法 - Google Patents
凝固因子▲ii▼、▲vii▼、▲ix▼およびxの1または2以上を濃縮する方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は、凝固因子II、VII、IXおよびXをα−ヒド
ロキシルアミン基を担持するマトリックス上に吸着さ
せ、そして前記因子を溶離して、より高い比活性を有す
る調製物を得る、血漿または他の分画から得られる調製
物中の凝固因子II、VII、IXおよびXを濃縮する方法に
関する。
ロキシルアミン基を担持するマトリックス上に吸着さ
せ、そして前記因子を溶離して、より高い比活性を有す
る調製物を得る、血漿または他の分画から得られる調製
物中の凝固因子II、VII、IXおよびXを濃縮する方法に
関する。
(従来の技術並び発明が解決しようとする課題) 血友病Aの次に、血友病Bは最も普通の遺伝性血液凝
固障害である。血友病Bの患者は凝固のために必須であ
る因子IXを欠く。しかしながら、この状態は因子IXを含
有する調製物で置換することによって処置することがで
きる。凝固因子II、VII、IXおよびXについての応用の
他の分野は、遺伝の血液凝固障害、例えばポリツラウマ
チゼイション(polytraumatization)または肝臓病を伴
うビタミンK依存因子の欠乏に引き続く、散在性脈管内
凝固である。
固障害である。血友病Bの患者は凝固のために必須であ
る因子IXを欠く。しかしながら、この状態は因子IXを含
有する調製物で置換することによって処置することがで
きる。凝固因子II、VII、IXおよびXについての応用の
他の分野は、遺伝の血液凝固障害、例えばポリツラウマ
チゼイション(polytraumatization)または肝臓病を伴
うビタミンK依存因子の欠乏に引き続く、散在性脈管内
凝固である。
1954年まで、因子IXの欠乏を処置する唯一の利用可能
な手段は新鮮な凍結した血漿であった。後になされた試
みは、硫酸バリウム(Aggeler,P.M.et al.,Trans.6th C
ongress,Internat.Soc.Hematol.,NY,Grune&Stratton,1
956,490−497)またはリン酸三カルシウム(Janiakおよ
びSoulier,Thromb.et Diath.Haemorrh.8[1962],406−
424)上に吸着させることにより因子IXを濃縮すること
であった。
な手段は新鮮な凍結した血漿であった。後になされた試
みは、硫酸バリウム(Aggeler,P.M.et al.,Trans.6th C
ongress,Internat.Soc.Hematol.,NY,Grune&Stratton,1
956,490−497)またはリン酸三カルシウム(Janiakおよ
びSoulier,Thromb.et Diath.Haemorrh.8[1962],406−
424)上に吸着させることにより因子IXを濃縮すること
であった。
例えば、リン酸カルシウム、硫酸バリウム、水酸化ア
ルミニウム、およびヒドロキシアパタイトのような無機
吸着剤上への因子IXの吸着は、年が経つにつれてさらに
最適化され、そして、例えば、欧州特許第56 629号に記
載されている。この特許中で因子IXについて引用されて
いる比活性は、タンパク質の1mgにつき2.5Uである。同
一調製物は、タンパク質の1mgにつき2.0Uの因子II、1.0
Uの因子VII、および2.5Uの因子Xを含有した。凝固因子
II、VII、IXおよびXは、また、PPSB複合体である。
ルミニウム、およびヒドロキシアパタイトのような無機
吸着剤上への因子IXの吸着は、年が経つにつれてさらに
最適化され、そして、例えば、欧州特許第56 629号に記
載されている。この特許中で因子IXについて引用されて
いる比活性は、タンパク質の1mgにつき2.5Uである。同
一調製物は、タンパク質の1mgにつき2.0Uの因子II、1.0
Uの因子VII、および2.5Uの因子Xを含有した。凝固因子
II、VII、IXおよびXは、また、PPSB複合体である。
DEAEアニオン交換クロマトグラフィーは、また、1965
年以来(Tullis et al,New Engl.J.Med.273[1965],66
7−674)因子IXまたはPPSB複合体を分離するために使用
されてきている。DEAEセファデックス(Sephadex)上へ
の吸着によりPPSB複合体を分離する最適化された方法は
欧州特許第41 174号に記載されており、ここで因子IXの
比活性はタンパク質の1mgにつき2.2Uであり、因子VIIの
高度の不足を伴う。
年以来(Tullis et al,New Engl.J.Med.273[1965],66
7−674)因子IXまたはPPSB複合体を分離するために使用
されてきている。DEAEセファデックス(Sephadex)上へ
の吸着によりPPSB複合体を分離する最適化された方法は
欧州特許第41 174号に記載されており、ここで因子IXの
比活性はタンパク質の1mgにつき2.2Uであり、因子VIIの
高度の不足を伴う。
因子IXの調製物は、現在、凝固因子II、VII、IXおよ
びXの比率の変化したPPSB複合体の形態で、あるいは高
度に濃縮された因子IX濃縮物の形態で血液凝固障害の処
置に使用されている。
びXの比率の変化したPPSB複合体の形態で、あるいは高
度に濃縮された因子IX濃縮物の形態で血液凝固障害の処
置に使用されている。
すべての4つのPPSB因子は、因子IX調製物中にほぼ同
一の比率で存在しなくてはならず、現在の技術水準にお
いて血漿からそれらを吸着することは、すべての因子に
ついてタンパク質の1mgにつき約1Uの比活性を有する生
成物が得られ、費用のかかる多工程の精製方法を用いた
ときでさえ、それに応じた比率は低い。
一の比率で存在しなくてはならず、現在の技術水準にお
いて血漿からそれらを吸着することは、すべての因子に
ついてタンパク質の1mgにつき約1Uの比活性を有する生
成物が得られ、費用のかかる多工程の精製方法を用いた
ときでさえ、それに応じた比率は低い。
プロトロムプレックス(Prothromplex)S−TIM 4(I
mmuno)は、最も高度に濃縮された商業的に入手可能なP
PSB製品であり、因子VIIを別に精製し、次いでそれをPP
SB複合体中に混合することによってのみ、すべての4つ
の因子についてタンパク質の1mgにつき1Uより大きい比
活性を提供することができる。因子IXについてタンパク
質の1mgにつき10Uより大きい比活性を有する高度に濃縮
された因子IX濃縮物は、現在の技術水準において、それ
らを血漿からいくつかの段階で分画することによって得
ることができる。例は国際特許出願WO83/03760号または
ドイツ国特許第3 101 752号に記載されている。
mmuno)は、最も高度に濃縮された商業的に入手可能なP
PSB製品であり、因子VIIを別に精製し、次いでそれをPP
SB複合体中に混合することによってのみ、すべての4つ
の因子についてタンパク質の1mgにつき1Uより大きい比
活性を提供することができる。因子IXについてタンパク
質の1mgにつき10Uより大きい比活性を有する高度に濃縮
された因子IX濃縮物は、現在の技術水準において、それ
らを血漿からいくつかの段階で分画することによって得
ることができる。例は国際特許出願WO83/03760号または
ドイツ国特許第3 101 752号に記載されている。
本発明の目的は、因子IXについてタンパク質の1mgに
つき1Uの比活性を有し、そして必要に応じて、ほぼ同一
の比率で他のPPSB因子II、VIIおよびXを含有する因子I
X調製物を得る方法を提供することである。
つき1Uの比活性を有し、そして必要に応じて、ほぼ同一
の比率で他のPPSB因子II、VIIおよびXを含有する因子I
X調製物を得る方法を提供することである。
(課題を解決するための手段並びに作用、効果) この目的は、本発明によれば、凝固因子を含有する血
漿または他の分画をα−ヒドロキシルアミン基を担持す
るマトリックスで処理し、因子IXを、必要に応じて因子
II、VIIおよびXと一緒に吸着し、適当な緩衝液で洗浄
し、そして因子を溶離することによって達成される。α
−ヒドロキシルアミン基を担持するマトリックスは、I.
マツモトら、J.Biochem.87(1980)、535−540から知ら
れている方法により調製することができる。
漿または他の分画をα−ヒドロキシルアミン基を担持す
るマトリックスで処理し、因子IXを、必要に応じて因子
II、VIIおよびXと一緒に吸着し、適当な緩衝液で洗浄
し、そして因子を溶離することによって達成される。α
−ヒドロキシルアミン基を担持するマトリックスは、I.
マツモトら、J.Biochem.87(1980)、535−540から知ら
れている方法により調製することができる。
驚くべきことには、溶液のイオン強度に依存して、因
子IXまたは全体のPPSB複合体は高い収率で急速に結合
し、そして再び高い純度で溶離できることが発見され
た。
子IXまたは全体のPPSB複合体は高い収率で急速に結合
し、そして再び高い純度で溶離できることが発見され
た。
アルキルアミン基をもつが、α−ヒドロキシルアミン
基をもたないゲルを使用して因子VIIIを精製すること
は、文献から知られている(Thromb.Haemostas.[Stutt
gart]47,2[1982],124−127;欧州特許0 144 957号;Br
itish Journal of Haematology 43[1979]、669−67
4)。これらのゲルは、また、PPSB因子を結合する。吸
着は因子VIIIの場合とほぼ同一の法則に従って起こる。
基をもたないゲルを使用して因子VIIIを精製すること
は、文献から知られている(Thromb.Haemostas.[Stutt
gart]47,2[1982],124−127;欧州特許0 144 957号;Br
itish Journal of Haematology 43[1979]、669−67
4)。これらのゲルは、また、PPSB因子を結合する。吸
着は因子VIIIの場合とほぼ同一の法則に従って起こる。
マトリックスと末端アミン基との間に種々の長さの炭
素鎖を有する、上記のような既知のゲル[セファローズ
(Sepharose)]の吸着の挙動を、α−ヒドロキシルア
ミノプロピル基をもつゲル(α−ヒドロキシルアミノプ
ロピルセファロース)の吸着の挙動と比較して試験し
た。クエン酸処理した血漿の各々の50mlを水で1:3に稀
釈し、そして種々のゲルを充填した1×5cmのカラムの
クロマトグラフィーにかけた。残留血漿中の結合しなか
った凝固因子の含量を、吸着後、測定し、そして表1に
出発血漿の活性のパーセントで記載する。
素鎖を有する、上記のような既知のゲル[セファローズ
(Sepharose)]の吸着の挙動を、α−ヒドロキシルア
ミノプロピル基をもつゲル(α−ヒドロキシルアミノプ
ロピルセファロース)の吸着の挙動と比較して試験し
た。クエン酸処理した血漿の各々の50mlを水で1:3に稀
釈し、そして種々のゲルを充填した1×5cmのカラムの
クロマトグラフィーにかけた。残留血漿中の結合しなか
った凝固因子の含量を、吸着後、測定し、そして表1に
出発血漿の活性のパーセントで記載する。
表1から明らかなように、α−ヒドロキシルアミン基
を欠く純粋なアミノ−アルキル担体上へのこのような吸
着のための最適条件は、スペーサーと呼ぶものが6〜8
個の炭素原子の長さであるとき起こる。アミノヘキシル
セファロースを使用するクロマトグラフィー後のPPSB因
子の純度は、DEAEマトリックスのクロマトグラフィー後
の比活性に多少匹敵する。
を欠く純粋なアミノ−アルキル担体上へのこのような吸
着のための最適条件は、スペーサーと呼ぶものが6〜8
個の炭素原子の長さであるとき起こる。アミノヘキシル
セファロースを使用するクロマトグラフィー後のPPSB因
子の純度は、DEAEマトリックスのクロマトグラフィー後
の比活性に多少匹敵する。
アンモニアを使用する予備的エポキシ段階からのアミ
ン基をもつ担体の調製は、アミン基に加えて、α−抵抗
性ヒドロキシル基を生成する。純粋なアルキルアミンの
担体についての前述の結果により、驚くべきことには、
α−ヒドロキシルアミンの担体はPPSB因子の結合に関し
て完全に異なる挙動を示すことが発見された。
ン基をもつ担体の調製は、アミン基に加えて、α−抵抗
性ヒドロキシル基を生成する。純粋なアルキルアミンの
担体についての前述の結果により、驚くべきことには、
α−ヒドロキシルアミンの担体はPPSB因子の結合に関し
て完全に異なる挙動を示すことが発見された。
アルキルアミンの担体を使用して起こるものと対照的
に、6〜8個の炭素原子を有するスペーサーはもはや不
必要である。3個の炭素原子を有するスペーサー上のα
−ヒドロキシルアミン基は、PPSB因子の強力な吸着に導
くことさえする。
に、6〜8個の炭素原子を有するスペーサーはもはや不
必要である。3個の炭素原子を有するスペーサー上のα
−ヒドロキシルアミン基は、PPSB因子の強力な吸着に導
くことさえする。
PPSB因子は、アルキルアミン担体およびDEAEアニオン
交換体を使用して従来可能であったより、本質的に特異
的に吸着され、引き続いて大きい純度で溶離される。
交換体を使用して従来可能であったより、本質的に特異
的に吸着され、引き続いて大きい純度で溶離される。
α−ヒドロキシルアミン担体上への吸着は、現在まで
最も頻繁な媒質を構成した、DEAEアニオン交換体上へよ
りも、本質的に急速である。因子II、VII、IXおよびX
をDEAEセファロース上へ吸着させるためには約1〜4時
間を要するが、本発明に従いα−ヒドロキシルアミノプ
ロピルのゲルを比較できる試験装置において使用すると
き、この方法は5分程度に短い時間で完結する。
最も頻繁な媒質を構成した、DEAEアニオン交換体上へよ
りも、本質的に急速である。因子II、VII、IXおよびX
をDEAEセファロース上へ吸着させるためには約1〜4時
間を要するが、本発明に従いα−ヒドロキシルアミノプ
ロピルのゲルを比較できる試験装置において使用すると
き、この方法は5分程度に短い時間で完結する。
既知のDEAEアニオン交換クロマトグラフィーからの他
の差は、低いイオン強度におけるα−ヒドロキシルアミ
ンマトリックスへの因子VIIの高度に満足すべき結合、
および、タンパク質の1mgにつき1Uより大きい比活性に
ほぼ等しい高い比活性ですべてのPPSB因子の同時の溶離
である。DEAEアニオン交換クロマトグラフィーにおい
て、このような高い比活性の達成は、因子VIIのかなり
な量の損失を常に必然的に伴ってきた。実際に、これが
意味するように、因子VIIはこのような高いPPSB濃縮物
において非常に低いレベルで存在するか、あるいはそれ
は別に調製し、そして添加しなくてはならなかった。
の差は、低いイオン強度におけるα−ヒドロキシルアミ
ンマトリックスへの因子VIIの高度に満足すべき結合、
および、タンパク質の1mgにつき1Uより大きい比活性に
ほぼ等しい高い比活性ですべてのPPSB因子の同時の溶離
である。DEAEアニオン交換クロマトグラフィーにおい
て、このような高い比活性の達成は、因子VIIのかなり
な量の損失を常に必然的に伴ってきた。実際に、これが
意味するように、因子VIIはこのような高いPPSB濃縮物
において非常に低いレベルで存在するか、あるいはそれ
は別に調製し、そして添加しなくてはならなかった。
PPSB因子は、好ましくは、本発明に従いα−ヒドロキ
シルアミンの担体上にpH7.0〜7.5および7.5mS/cmより低
い電動度で吸着させる。PPSB因子は0.25〜1モルの塩化
ナトリウムを使用してそれらの因子の出発活性の80%ま
での収率で溶離することができる。
シルアミンの担体上にpH7.0〜7.5および7.5mS/cmより低
い電動度で吸着させる。PPSB因子は0.25〜1モルの塩化
ナトリウムを使用してそれらの因子の出発活性の80%ま
での収率で溶離することができる。
出発材料は血漿、血漿分画、または凝固因子を含有す
る他の溶液であることができる。
る他の溶液であることができる。
本発明による方法は、また、出発溶液が単一の因子の
みを含有する場合、個々のPPSB因子II、VIIおよびXを
得るか、あるいは濃縮するために使用することができ
る。
みを含有する場合、個々のPPSB因子II、VIIおよびXを
得るか、あるいは濃縮するために使用することができ
る。
このような濃縮されたPPSBまたは前記個々の因子を含
有する調製物に加えて、本発明に従うα−ヒドロキシル
アミン担体は、また、適当なクロマトグラフィーの条件
に暴露した血漿または血漿分画から高い因子IXの濃縮物
を調製するために使用することができる。血漿または血
漿分画をわずかに高い電動度、好ましくは12〜15mS/c
m、および好ましくは4.5〜7.7のpHにおいて吸着させる
場合、とくに因子IXはマトリックスによりいっそう特異
的に結合し、そしてタンパク質の1mgにつき10〜20Uの純
度で溶離することができる。従来、このような高い比活
性は多段階の方法でのみ、かつ本発明に従って得ること
ができる30〜40%よりかなり低い収量で得ることが可能
であった。したがって、因子II、VII、IXおよびXをα
−ヒドロキシルアミン担体上へ吸着させることは、凝固
因子IXおよびPPSB複合体の両者を収穫する技術における
かなりの進歩を表す。利点は簡単かつ急速な方法による
高い収率および高い純度である。
有する調製物に加えて、本発明に従うα−ヒドロキシル
アミン担体は、また、適当なクロマトグラフィーの条件
に暴露した血漿または血漿分画から高い因子IXの濃縮物
を調製するために使用することができる。血漿または血
漿分画をわずかに高い電動度、好ましくは12〜15mS/c
m、および好ましくは4.5〜7.7のpHにおいて吸着させる
場合、とくに因子IXはマトリックスによりいっそう特異
的に結合し、そしてタンパク質の1mgにつき10〜20Uの純
度で溶離することができる。従来、このような高い比活
性は多段階の方法でのみ、かつ本発明に従って得ること
ができる30〜40%よりかなり低い収量で得ることが可能
であった。したがって、因子II、VII、IXおよびXをα
−ヒドロキシルアミン担体上へ吸着させることは、凝固
因子IXおよびPPSB複合体の両者を収穫する技術における
かなりの進歩を表す。利点は簡単かつ急速な方法による
高い収率および高い純度である。
凝固因子の吸着は、カラムクロマトグラフィーに限定
されず、また、バッチ式で実施することができる。マト
リックスへの因子の例外的に急速な結合のために、本発
明による方法は、また、α−ヒドロキシルアミン基で変
性した膜を使用して因子を吸着させるとき、膜を通す親
和分離に適する。
されず、また、バッチ式で実施することができる。マト
リックスへの因子の例外的に急速な結合のために、本発
明による方法は、また、α−ヒドロキシルアミン基で変
性した膜を使用して因子を吸着させるとき、膜を通す親
和分離に適する。
因子II、VIIおよびXは、また、適当に予備的に精製
したまたは濃縮した溶液から対応する高い濃縮物へと精
製することができる。因子をα−ヒドロキシルアミンマ
トリックス上に吸着させる前または後に、因子をβ−プ
ロピオラクトンおよび/または紫外線で、溶媒および洗
浄剤で、あるいは低温殺菌で滅菌して、ヒト病原性ウイ
ルスを不活性化することができる。
したまたは濃縮した溶液から対応する高い濃縮物へと精
製することができる。因子をα−ヒドロキシルアミンマ
トリックス上に吸着させる前または後に、因子をβ−プ
ロピオラクトンおよび/または紫外線で、溶媒および洗
浄剤で、あるいは低温殺菌で滅菌して、ヒト病原性ウイ
ルスを不活性化することができる。
(実施例) 次の実施例によって、本発明をさらに説明する。
実施例1 α−ヒドロキシルアミノプロピル基を担持し、そして
グリシジルメタクリレート、ペンタ−エリスリトールジ
メタクリレート、およびポリビニルアルコールのコポリ
マーから成るマトリックスの25mlのカラム(Fraktogel
−TSK−Amino、メルク、ダーマシュタット)を、100ml
の緩衝液B(10ミリモルのクエン酸塩、pH7.0)で平衡
化した。
グリシジルメタクリレート、ペンタ−エリスリトールジ
メタクリレート、およびポリビニルアルコールのコポリ
マーから成るマトリックスの25mlのカラム(Fraktogel
−TSK−Amino、メルク、ダーマシュタット)を、100ml
の緩衝液B(10ミリモルのクエン酸塩、pH7.0)で平衡
化した。
350mlのクエン酸塩添加血漿を7mS/cmの電動度まで希
釈し、そしてカラムに300ml/時間の流速で移した。次い
で、このカラムを100mlの緩衝液Bで洗浄した。PPSB因
子を緩衝液B中に0.5モルの塩化ナトリウムを含むもの
を用いて溶離した。PPSB因子の収率は初期の活性の60〜
80%であった。PPSB因子の比活性は、タンパク質の1mg
につき2.1Uの因子II、1.9Uの因子VII、2.3Uの因子IX、
および2.0Uの因子Xであった。
釈し、そしてカラムに300ml/時間の流速で移した。次い
で、このカラムを100mlの緩衝液Bで洗浄した。PPSB因
子を緩衝液B中に0.5モルの塩化ナトリウムを含むもの
を用いて溶離した。PPSB因子の収率は初期の活性の60〜
80%であった。PPSB因子の比活性は、タンパク質の1mg
につき2.1Uの因子II、1.9Uの因子VII、2.3Uの因子IX、
および2.0Uの因子Xであった。
実施例2 実施例1に記載する吸着剤の20mlのカラムを、50mlの
緩衝液A(10ミリモルのクエン酸塩、10ミリモルのNa2H
PO4、および100ミリモルのNaCl、pH7.5)で平衡化し
た。13mS/cmの電動度の血漿の1000mlを300ml/時間の流
速で添加し、そして150mlの緩衝液Aで洗浄した。因子I
Xを緩衝液A中に塩化ナトリウムを0〜0.5モルの直線勾
配で含んだもの(これは、また、0.5U/mlのAT IIIおよ
び5U/mlのヘパリンを含有した)で溶離した。
緩衝液A(10ミリモルのクエン酸塩、10ミリモルのNa2H
PO4、および100ミリモルのNaCl、pH7.5)で平衡化し
た。13mS/cmの電動度の血漿の1000mlを300ml/時間の流
速で添加し、そして150mlの緩衝液Aで洗浄した。因子I
Xを緩衝液A中に塩化ナトリウムを0〜0.5モルの直線勾
配で含んだもの(これは、また、0.5U/mlのAT IIIおよ
び5U/mlのヘパリンを含有した)で溶離した。
分画中の因子IXおよびタンパク質の含量を測定した。
タンパク質の1mgにつき5Uより大きい因子IXの比活性
をもつ分画をプールした。結果はタンパク質の1mgにつ
き15Uの因子IXの比活性を示す因子IX濃縮物であった。
収率は血漿中の初期活性の40%であった。
をもつ分画をプールした。結果はタンパク質の1mgにつ
き15Uの因子IXの比活性を示す因子IX濃縮物であった。
収率は血漿中の初期活性の40%であった。
実施例3 200mlの血漿の各々を、実施例1に記載するように、
α−ヒドロキシルアミン基をもつ種々の担体のクロマト
グラフィーにかけた。担体は次の通りであった。
α−ヒドロキシルアミン基をもつ種々の担体のクロマト
グラフィーにかけた。担体は次の通りであった。
1.酢酸ビニルおよびジビニルエチレン尿素のコポリマー
[例えば、バイオシンス(Biosynth)]、 2.メタクリルアミド、N−メチレン−ビス−メタクリル
アミド、およびアリルグリシジルエーテルのコポリマー
[例えばエウペルジット(Eupergit)]、および 3.炭水化物のポリマー[例えば、セファローズ(Sephar
ose)]。
[例えば、バイオシンス(Biosynth)]、 2.メタクリルアミド、N−メチレン−ビス−メタクリル
アミド、およびアリルグリシジルエーテルのコポリマー
[例えばエウペルジット(Eupergit)]、および 3.炭水化物のポリマー[例えば、セファローズ(Sephar
ose)]。
結果は原理的には実施例1において得られたものと同
一であり、そして表2に記載する。
一であり、そして表2に記載する。
実施例4 1000mlの血漿を一夜0.25%のβ−プロピオラクトンで
pH8.0において処理し、次いで紫外線で照射した。冷た
い減菌した血漿を実施例1に記載するようにして調製し
た。60〜80%の収率において、PPBS因子の純度は実施例
1に記載する比活性に匹敵した。
pH8.0において処理し、次いで紫外線で照射した。冷た
い減菌した血漿を実施例1に記載するようにして調製し
た。60〜80%の収率において、PPBS因子の純度は実施例
1に記載する比活性に匹敵した。
実施例5 タンパク質の1mgにつき0.6Uの比活性をもつ市販のPPS
B製品の100mlを、30mlの実施例1に記載する吸着剤で実
施例2に記載するようにクロマトグラフィーにかけた。
95%の収率でタンパク質の1mgにつき10.4Uの比活性をも
つ高い因子IXの濃縮物を分離することができた。
B製品の100mlを、30mlの実施例1に記載する吸着剤で実
施例2に記載するようにクロマトグラフィーにかけた。
95%の収率でタンパク質の1mgにつき10.4Uの比活性をも
つ高い因子IXの濃縮物を分離することができた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ベルトラム アイヒェントプフ ドイツ連邦共和国 デー‐6232 バド ソデン ロセルトストラーセ 15 (56)参考文献 特開 平1−294697(JP,A) 特開 昭62−26227(JP,A) 特開 昭57−80323(JP,A)
Claims (12)
- 【請求項1】凝固因子、II、VII、IXおよびXを含有す
る溶液をα−ヒドロキシルアミン基を担持する吸着剤上
に吸着させ、必要に応じて前記吸着剤を洗浄し、そして
前記因子を溶離することを特徴とする、凝固因子II、VI
I、IXおよびXの1または2以上を濃縮する方法。 - 【請求項2】出発溶液は血漿、血漿分画、または前記因
子を含有する発酵溶液またはその分画であることを特徴
とする、上記第1項記載の方法。 - 【請求項3】α−ヒドロキシルアミン基の担体は有機ポ
リマーであることを特徴とする、上記第1または2項記
載の方法。 - 【請求項4】該ポリマー担体はグリシジルメタクリレー
ト、ペンターエリスリトールジメタクリレート、および
ポリビニルアルコールのコポリマーであることを特徴と
する、上記第1〜3項のいずれかに記載の方法。 - 【請求項5】該ポリマー担体はメタクリルアミド、N−
メチレン−ビス−メタクリルアミド、およびアリルグリ
シジルエーテルのコポリマーであることを特徴とする、
上記第1〜3項のいずれかに記載の方法。 - 【請求項6】該ポリマー担体は酢酸ビニルおよびジビニ
ルエチレン尿素のコポリマーであることを特徴とする、
上記第1〜3項のいずれかに記載の方法。 - 【請求項7】該ポリマー担体は炭水化物のポリマーであ
ることを特徴とする、上記第1〜3項のいずれかに記載
の方法。 - 【請求項8】α−ヒドロキシルアミン基の担体は無機ポ
リマーであることを特徴とする、上記第1および2項記
載の方法。 - 【請求項9】α−ヒドロキシルアミン基の担体はケイ酸
塩のマトリックスであることを特徴とする、上記第8項
記載の方法。 - 【請求項10】前記因子はカラムクロマイトグラフィー
により、バッチ式に、あるいは膜上に吸着させることを
特徴とする、上記第1〜9項のいずれかに記載の方法。 - 【請求項11】前記因子をα−ヒドロキシルアミン基の
担体上に吸着させる前または後に、前記溶液中に存在す
るウイルスを適当な手段により不活性化することを特徴
とする、上記第1〜10項のいずれかに記載の方法。 - 【請求項12】前記因子をα−ヒドロキシルアミン基の
担体上に吸着させる前または後に、前記溶液中に存在す
るウイルスをβ−プロピオラクトンおよび/または紫外
線により、溶媒および/または洗浄剤により、あるいは
低温殺菌により不活性化することを特徴とする、上記第
11項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3826792A DE3826792C1 (ja) | 1988-08-06 | 1988-08-06 | |
DE3826792.6 | 1988-08-06 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02113893A JPH02113893A (ja) | 1990-04-26 |
JP2579217B2 true JP2579217B2 (ja) | 1997-02-05 |
Family
ID=6360383
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1201463A Expired - Lifetime JP2579217B2 (ja) | 1988-08-06 | 1989-08-04 | 凝固因子▲ii▼、▲vii▼、▲ix▼およびxの1または2以上を濃縮する方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5071961A (ja) |
EP (1) | EP0354354B1 (ja) |
JP (1) | JP2579217B2 (ja) |
AT (1) | ATE104987T1 (ja) |
DE (2) | DE3826792C1 (ja) |
ES (1) | ES2055761T3 (ja) |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3914869C1 (ja) * | 1989-05-05 | 1990-08-09 | Biotest Pharma Gmbh, 6072 Dreieich, De | |
AU6067190A (en) * | 1989-07-20 | 1991-02-22 | Analytical Control Systems, Inc. | Improved stable coagulation controls |
ATE195877T1 (de) * | 1991-03-01 | 2000-09-15 | Rhone Poulenc Rorer Int | Herstellung von faktor-ix |
US5589571A (en) * | 1994-10-28 | 1996-12-31 | Cor Therapeutics, Inc. | Process for production of inhibited forms of activated blood factors |
DE19504852C2 (de) * | 1995-02-15 | 2003-01-23 | Octapharma Ag Lachen | Verfahren zur Reinigung Vitamin K-abhängiger Gerinnungsfaktoren durch Affinitäts-Chromatographie |
US5714583A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-03 | Genetics Institute, Inc. | Factor IX purification methods |
JP3023657B2 (ja) * | 1995-09-25 | 2000-03-21 | 本田技研工業株式会社 | 自動2輪車のリヤスイングアーム |
US5762757A (en) * | 1996-12-05 | 1998-06-09 | Betzdearborn Inc. | Methods for inhibiting organic contaminant deposition in pulp and papermaking systems |
FR2948665B1 (fr) | 2009-07-31 | 2011-09-23 | Lfb Biotechnologies | Procede pour la purification de proteines de la coagulation a domaine gla actives |
FR2948664B1 (fr) | 2009-07-31 | 2013-11-01 | Lfb Biotechnologies | Procede pour la purification de proteines de la coagulation a domaine gla |
JP2012050386A (ja) * | 2010-09-01 | 2012-03-15 | Kaneka Corp | 2種類以上の多孔質充填剤を充填するカラム |
JP5836577B2 (ja) * | 2010-09-14 | 2015-12-24 | 株式会社カネカ | クリングル配列を有する蛋白質またはペプチドを精製または除去するアフィニティ担体の製造方法、その精製方法、除去方法 |
AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3172210D1 (en) * | 1980-05-27 | 1985-10-17 | Miles Lab | Blood coagulation promoting product and process of preparing same |
DE3033932C2 (de) * | 1980-09-10 | 1984-05-24 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Kaltsterilisation von Blutgerinnungsfaktor VIII enthaltenden Präparaten |
US4481189A (en) * | 1982-04-14 | 1984-11-06 | New York Blood Center Inc. | Process for preparing sterilized plasma and plasma derivatives |
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