JP2001220399A - 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーおよびその用途 - Google Patents
糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーおよびその用途Info
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- JP2001220399A JP2001220399A JP2000353275A JP2000353275A JP2001220399A JP 2001220399 A JP2001220399 A JP 2001220399A JP 2000353275 A JP2000353275 A JP 2000353275A JP 2000353275 A JP2000353275 A JP 2000353275A JP 2001220399 A JP2001220399 A JP 2001220399A
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- neoglycopeptide
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Abstract
(57)【要約】
【課題】糖ペプチドもしくはネオ糖ペプチドの合成に利
用することのできるプライマー、および該プライマーを
利用した糖ペプチドもしくはネオ糖ペプチドの効率的な
製造方法を提供する。 【解決手段】高分子担体上に、一般式（Ｉ）（式中、Ｒ
1はメチレン基１〜２０個分の長さを有するリンカーを
示し、Ｒ2は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位
を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ
3は前記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない
任意のペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるい
は酸アミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が
結合したセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基
またはアスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは
側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合により任
意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残
基を示す）で表される基が結合していることを特徴とす
る糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマー。 【化１】
用することのできるプライマー、および該プライマーを
利用した糖ペプチドもしくはネオ糖ペプチドの効率的な
製造方法を提供する。 【解決手段】高分子担体上に、一般式（Ｉ）（式中、Ｒ
1はメチレン基１〜２０個分の長さを有するリンカーを
示し、Ｒ2は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位
を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ
3は前記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない
任意のペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるい
は酸アミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が
結合したセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基
またはアスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは
側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合により任
意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残
基を示す）で表される基が結合していることを特徴とす
る糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマー。 【化１】
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、糖ペプチドあるい
はネオ糖ペプチド製造に有用な高分子プライマー、該プ
ライマーを利用した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
の製造方法および該プライマーの製造に有用な重合性芳
香族アミノ酸誘導体に関する。
はネオ糖ペプチド製造に有用な高分子プライマー、該プ
ライマーを利用した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
の製造方法および該プライマーの製造に有用な重合性芳
香族アミノ酸誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】糖は核酸や蛋白質と並んで生体を構成す
る主要な成分であるが、核酸や蛋白質と比べ、その構造
あるいは機能はあまりよく理解されていない。糖は、通
常糖鎖と呼ばれる重合体を形成し、さらにそれらが蛋白
質や脂質と結合して糖蛋白質、糖脂質あるいはプロテオ
グリカンと総称される極めて複雑な複合分子を形成して
いる。さらに、核酸あるいは蛋白質がその構成単位であ
るヌクレオチドあるいはアミノ酸が直線的に結合した高
分子であるのに対して、糖鎖は分子内に複数の分岐点が
あるばかりでなく、その構成単位である単糖の結合様式
も多様であるため、その構造は核酸や蛋白質と比較にな
らないほど複雑である。これら構造の複雑さは、この分
野の研究を遅らせている大きな原因の一つとなっている
る主要な成分であるが、核酸や蛋白質と比べ、その構造
あるいは機能はあまりよく理解されていない。糖は、通
常糖鎖と呼ばれる重合体を形成し、さらにそれらが蛋白
質や脂質と結合して糖蛋白質、糖脂質あるいはプロテオ
グリカンと総称される極めて複雑な複合分子を形成して
いる。さらに、核酸あるいは蛋白質がその構成単位であ
るヌクレオチドあるいはアミノ酸が直線的に結合した高
分子であるのに対して、糖鎖は分子内に複数の分岐点が
あるばかりでなく、その構成単位である単糖の結合様式
も多様であるため、その構造は核酸や蛋白質と比較にな
らないほど複雑である。これら構造の複雑さは、この分
野の研究を遅らせている大きな原因の一つとなっている
【０００３】しかし、近年糖鎖が細胞認識、免疫、分
化、受精、老化、ガン化などに関与することが徐々にわ
かってくるにつれて、非常に注目される研究分野となっ
てきた。このような現状より、天然の構造を有する糖鎖
や新規な糖鎖を合成する試みが盛んになされている。ま
た、最近では糖鎖構造が天然には存在しない糖ペプチド
や糖鎖構造は天然に存在するものであってもペプチドと
の結合様式が天然のものとは異なる糖ペプチドあるいは
適当なスペーサーを介して糖鎖とペプチドを結合させた
糖ペプチドなどのような非天然型の糖ペプチド（ネオ糖
ペプチド）を合成し、天然の糖ペプチドとは異なるある
いは天然の糖ペプチドにはない生理活性を見出そうとす
る研究も盛んに行われている。例えば、本発明者らは、
下記式７（式中、Ａｃはアセチル基を示す）で示される
ネオ糖ペプチドは、セレクチンとインテグリン両方に結
合できるサイトを有したユニークな化合物であり、該ネ
オ糖ペプチドのオリゴ糖部分であるシアリルルイスＸよ
りも強くＰ−セレクチンやＬ−セレクチンと結合するこ
とができ、該ネオ糖ペプチドのペプチド部分であるＡｒ
ｇ（アルギニン）−Ｇｌｙ（グリシン）−Ｇｌｕ（グル
タミン酸）−Ｓｅｒ（セリン）よりも強くインテグリン
β１とそのモノクローナル抗体との結合を阻害すること
ができることを既に報告している(Chem. Commun., 143
5, (1999))。上記ネオ糖ペプチドは、ペプチド部分を液
相法で有機合成化学的手法により、オリゴ糖部分は糖転
移酵素を用いた酵素法により合成しているが、反応を１
つ行うごとに分離精製を行っているため、煩雑な操作と
長い時間が必要である。
化、受精、老化、ガン化などに関与することが徐々にわ
かってくるにつれて、非常に注目される研究分野となっ
てきた。このような現状より、天然の構造を有する糖鎖
や新規な糖鎖を合成する試みが盛んになされている。ま
た、最近では糖鎖構造が天然には存在しない糖ペプチド
や糖鎖構造は天然に存在するものであってもペプチドと
の結合様式が天然のものとは異なる糖ペプチドあるいは
適当なスペーサーを介して糖鎖とペプチドを結合させた
糖ペプチドなどのような非天然型の糖ペプチド（ネオ糖
ペプチド）を合成し、天然の糖ペプチドとは異なるある
いは天然の糖ペプチドにはない生理活性を見出そうとす
る研究も盛んに行われている。例えば、本発明者らは、
下記式７（式中、Ａｃはアセチル基を示す）で示される
ネオ糖ペプチドは、セレクチンとインテグリン両方に結
合できるサイトを有したユニークな化合物であり、該ネ
オ糖ペプチドのオリゴ糖部分であるシアリルルイスＸよ
りも強くＰ−セレクチンやＬ−セレクチンと結合するこ
とができ、該ネオ糖ペプチドのペプチド部分であるＡｒ
ｇ（アルギニン）−Ｇｌｙ（グリシン）−Ｇｌｕ（グル
タミン酸）−Ｓｅｒ（セリン）よりも強くインテグリン
β１とそのモノクローナル抗体との結合を阻害すること
ができることを既に報告している(Chem. Commun., 143
5, (1999))。上記ネオ糖ペプチドは、ペプチド部分を液
相法で有機合成化学的手法により、オリゴ糖部分は糖転
移酵素を用いた酵素法により合成しているが、反応を１
つ行うごとに分離精製を行っているため、煩雑な操作と
長い時間が必要である。
【化７】
【０００４】一般に糖ペプチドの合成は、Ｆｍｏｃ−ア
ミノ酸（アミノ基を９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル基で保護したアミノ酸、以下９−フルオレニルメ
チルオキシカルボニル基をＦｍｏｃと略する）とともに
Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−γ−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミニル）−Ｌ
−アスパラギン（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（βＡｃ3ＧｌｃＮ
Ａｃ）−ＯＨ）、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（３，４，６−ト
リ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクトサミ
ニル）−Ｌ−セリン（Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（αＡｃ3Ｇａ
ｌＮＡｃ）−ＯＨ）、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（３，４，６
−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクト
サミニル）−Ｌ−トレオニン（Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（αＡ
ｃ3ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ）などのＦｍｏｃ−グリコシ
ルアミノ酸を用い、ペプチド自動合成装置で基本となる
ペプチド部分を固相担体上に合成し、固相担体よりペプ
チド部分を遊離させ、一旦精製した後、有機化学的な合
成手法により一つずつ糖鎖を伸長させていくという方法
が用いられ、ネオ糖ペプチドも同様の方法が用いられ
る。そのため、糖鎖の伸長には多くの時間と煩雑な操作
が必要となる。そこで、ペプチド部分のみならず、オリ
ゴ糖鎖部分も自動合成可能になれば非常に有用である。
核酸や蛋白質については自動合成技術が確立されてお
り、このことによりこの分野の研究が著しく進歩したこ
とは誰もが認めるところであり、糖鎖についてもその自
動合成技術の確立は切望されている。
ミノ酸（アミノ基を９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル基で保護したアミノ酸、以下９−フルオレニルメ
チルオキシカルボニル基をＦｍｏｃと略する）とともに
Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−γ−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミニル）−Ｌ
−アスパラギン（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（βＡｃ3ＧｌｃＮ
Ａｃ）−ＯＨ）、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（３，４，６−ト
リ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクトサミ
ニル）−Ｌ−セリン（Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（αＡｃ3Ｇａ
ｌＮＡｃ）−ＯＨ）、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（３，４，６
−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクト
サミニル）−Ｌ−トレオニン（Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（αＡ
ｃ3ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ）などのＦｍｏｃ−グリコシ
ルアミノ酸を用い、ペプチド自動合成装置で基本となる
ペプチド部分を固相担体上に合成し、固相担体よりペプ
チド部分を遊離させ、一旦精製した後、有機化学的な合
成手法により一つずつ糖鎖を伸長させていくという方法
が用いられ、ネオ糖ペプチドも同様の方法が用いられ
る。そのため、糖鎖の伸長には多くの時間と煩雑な操作
が必要となる。そこで、ペプチド部分のみならず、オリ
ゴ糖鎖部分も自動合成可能になれば非常に有用である。
核酸や蛋白質については自動合成技術が確立されてお
り、このことによりこの分野の研究が著しく進歩したこ
とは誰もが認めるところであり、糖鎖についてもその自
動合成技術の確立は切望されている。
【０００５】これまでに糖鎖の自動合成を試みたいくつ
かの報告があり、その手法は大きく分けて２つある。１
つは化学合成によるものであるが、糖残基と糖残基を立
体選択的に結合させる方法が十分確立されておらず、さ
らに保護基を結合させたり、あるいは脱離させたりと工
程が煩雑であるという問題がある。もう１つは酵素合成
によるものであり、保護基を必要とせず、また糖残基と
糖残基を立体選択的に結合させることができるので化学
合成に比べ、非常に有利であり、近年いくつかの方法が
提案されるようになってきた。これには、最近各種糖転
移酵素の遺伝子が単離され、遺伝子組換え技術による糖
転移酵素の大量生産が可能になってきたという背景があ
る。
かの報告があり、その手法は大きく分けて２つある。１
つは化学合成によるものであるが、糖残基と糖残基を立
体選択的に結合させる方法が十分確立されておらず、さ
らに保護基を結合させたり、あるいは脱離させたりと工
程が煩雑であるという問題がある。もう１つは酵素合成
によるものであり、保護基を必要とせず、また糖残基と
糖残基を立体選択的に結合させることができるので化学
合成に比べ、非常に有利であり、近年いくつかの方法が
提案されるようになってきた。これには、最近各種糖転
移酵素の遺伝子が単離され、遺伝子組換え技術による糖
転移酵素の大量生産が可能になってきたという背景があ
る。
【０００６】そのような例としては、U. Zehaviらは、
アミノエチル基あるいはアミノヘキシル基を結合させた
ポリアクリルアミドゲルを固相担体とした糖転移酵素に
よる固相合成を報告している(Carbohydr. Res., 124, 2
3 (1983), Carbohydr. Res.,228, 255 (1992), React.
Polym., 22, 171 (1994), Carbohydr. Res., 265, 161
(1994))。この方法は、適当な単糖を４−カルボキシ−
２−ニトロベンジルグリコシドとした後、上記担体のア
ミノ基と直接あるいはスペーサーを介して結合させたも
のをプライマーとして、糖転移酵素により糖鎖伸長反応
を行ない、その後光分解により伸長させた糖鎖を遊離さ
せるというものである。しかしながら、糖転移収率は５
０％程度であり十分なものとは言えない。また、この方
法で得られるのはオリゴ糖であって糖ペプチドではな
い。
アミノエチル基あるいはアミノヘキシル基を結合させた
ポリアクリルアミドゲルを固相担体とした糖転移酵素に
よる固相合成を報告している(Carbohydr. Res., 124, 2
3 (1983), Carbohydr. Res.,228, 255 (1992), React.
Polym., 22, 171 (1994), Carbohydr. Res., 265, 161
(1994))。この方法は、適当な単糖を４−カルボキシ−
２−ニトロベンジルグリコシドとした後、上記担体のア
ミノ基と直接あるいはスペーサーを介して結合させたも
のをプライマーとして、糖転移酵素により糖鎖伸長反応
を行ない、その後光分解により伸長させた糖鎖を遊離さ
せるというものである。しかしながら、糖転移収率は５
０％程度であり十分なものとは言えない。また、この方
法で得られるのはオリゴ糖であって糖ペプチドではな
い。
【０００７】その他の例として、C.-H. Wongらは、アミ
ノ化シリカに下記化８（式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｏ
ｃはｔ−ブトキシカルボニル基を示す）の基を結合させ
たものをプライマーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸
長させた後、α−キモトリプシンの加水分解作用を利用
し伸長させた糖鎖を糖ペプチドの形で切り出す方法を報
告している(J. Am. Chem. Soc., 116, 1136 (1994))。
得られる糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギ
ン）−Ｇｌｙ（グリシン）−Ｐｈｅ（フェニルアラニ
ン）である。しかしながら、糖転移酵素による糖鎖伸長
反応の収率は５５〜６５％であり、とても十分なものと
は言えない。
ノ化シリカに下記化８（式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｏ
ｃはｔ−ブトキシカルボニル基を示す）の基を結合させ
たものをプライマーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸
長させた後、α−キモトリプシンの加水分解作用を利用
し伸長させた糖鎖を糖ペプチドの形で切り出す方法を報
告している(J. Am. Chem. Soc., 116, 1136 (1994))。
得られる糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギ
ン）−Ｇｌｙ（グリシン）−Ｐｈｅ（フェニルアラニ
ン）である。しかしながら、糖転移酵素による糖鎖伸長
反応の収率は５５〜６５％であり、とても十分なものと
は言えない。
【０００８】
【化８】
【０００９】また、C.-H. Wongらは、固相担体であるア
ミノ化シリカに結合させる基を下記化９（式中、Ａｃは
アセチル基を示す）に改良し、糖転移酵素により糖鎖を
伸長させた後、ヒドラジン分解により糖鎖を遊離させる
方法を報告しており、酵素による糖転移反応をほぼ定量
的に行うことができたとも報告している(J. Am. Chem.
Soc., 116, 11315 (1994))。しかしながら、この方法で
得られる糖鎖化合物は糖ペプチドではない。
ミノ化シリカに結合させる基を下記化９（式中、Ａｃは
アセチル基を示す）に改良し、糖転移酵素により糖鎖を
伸長させた後、ヒドラジン分解により糖鎖を遊離させる
方法を報告しており、酵素による糖転移反応をほぼ定量
的に行うことができたとも報告している(J. Am. Chem.
Soc., 116, 11315 (1994))。しかしながら、この方法で
得られる糖鎖化合物は糖ペプチドではない。
【００１０】
【化９】
【００１１】また、M. Meldal らは、ジアミノ化ポリエ
チレングリコールのモノおよびジアクリロイル化体の重
合体に、下記化１０（式中、Ａｃはアセチル基を示す）
の基を結合させたものをプライマーとし、糖転移酵素を
用いて糖鎖を伸長させた後、トリフロロ酢酸により糖鎖
を遊離させる方法を報告しており、糖転移反応もほぼ定
量的に進行したと報告している(J. Chem. Soc., Chem.
Commun., 1849 (1994)) 。しかし、この方法で得られる
糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギン）−Ｇ
ｌｙ（グリシン）であり、糖ペプチドと呼ぶにはあまり
に短い。また、Ｃ末側のグリシン残基はグリシンアミド
残基となっており、場合によってはグリシンアミド残基
をグリシン残基へ変換する必要がある。
チレングリコールのモノおよびジアクリロイル化体の重
合体に、下記化１０（式中、Ａｃはアセチル基を示す）
の基を結合させたものをプライマーとし、糖転移酵素を
用いて糖鎖を伸長させた後、トリフロロ酢酸により糖鎖
を遊離させる方法を報告しており、糖転移反応もほぼ定
量的に進行したと報告している(J. Chem. Soc., Chem.
Commun., 1849 (1994)) 。しかし、この方法で得られる
糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギン）−Ｇ
ｌｙ（グリシン）であり、糖ペプチドと呼ぶにはあまり
に短い。また、Ｃ末側のグリシン残基はグリシンアミド
残基となっており、場合によってはグリシンアミド残基
をグリシン残基へ変換する必要がある。
【００１２】
【化１０】
【００１３】さらに、C.-H. Wongらは、アミノ化シリカ
を固相担体として下記化１１（式中、Ｆｍｏｃは９−フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル基を示す）の基を導
入したものをプライマーとし、これにＦｍｏｃ−アミノ
酸およびＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（βＧｌｃＮＡｃ）−ＯＨを
用いてペプチド鎖を伸長させ、次いでペプチド鎖上の保
護基を脱離させ、その後上述のＮ−アセチルグルコサミ
ン残基に糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させ、テトラキ
ストリフェニルホスフィンパラジウムで処理することに
より固相担体上で合成した糖ペプチドを遊離させる方法
を報告している(J. Am. Chem. Soc., 119, 8766 (199
7))。この方法で得られる糖ペプチドのペプチド鎖はア
ミノ酸残基８つからなっており、ペプチド鎖としては十
分な長さを有しているが、得られた糖ペプチドの最初に
固相担体に導入したアミノ酸に対する収率は１０％以下
であり、十分なものとは言えない。収率が低い原因の一
つとして、用いた固相担体がペプチド自動合成にはあま
り適したものでないことが挙げられる。ペプチドの自動
合成は通常有機溶媒中で行われ、糖転移酵素による糖鎖
合成は通常水溶液中で行われるため、それぞれの反応で
求められる担体の性質は異なり、一つの担体上でペプチ
ドも糖鎖も自動合成するのは困難である。
を固相担体として下記化１１（式中、Ｆｍｏｃは９−フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル基を示す）の基を導
入したものをプライマーとし、これにＦｍｏｃ−アミノ
酸およびＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（βＧｌｃＮＡｃ）−ＯＨを
用いてペプチド鎖を伸長させ、次いでペプチド鎖上の保
護基を脱離させ、その後上述のＮ−アセチルグルコサミ
ン残基に糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させ、テトラキ
ストリフェニルホスフィンパラジウムで処理することに
より固相担体上で合成した糖ペプチドを遊離させる方法
を報告している(J. Am. Chem. Soc., 119, 8766 (199
7))。この方法で得られる糖ペプチドのペプチド鎖はア
ミノ酸残基８つからなっており、ペプチド鎖としては十
分な長さを有しているが、得られた糖ペプチドの最初に
固相担体に導入したアミノ酸に対する収率は１０％以下
であり、十分なものとは言えない。収率が低い原因の一
つとして、用いた固相担体がペプチド自動合成にはあま
り適したものでないことが挙げられる。ペプチドの自動
合成は通常有機溶媒中で行われ、糖転移酵素による糖鎖
合成は通常水溶液中で行われるため、それぞれの反応で
求められる担体の性質は異なり、一つの担体上でペプチ
ドも糖鎖も自動合成するのは困難である。
【００１４】
【化１１】
【００１５】S. Rothらは、特表平５−５００９０５号
公報に以下のような方法を開示している。まず、糖転移
酵素の糖受容体を固相担体に結合させ、これをアフィニ
ティ吸着体とし、この糖受容体と結合することのできる
糖転移酵素を含む組織抽出液を接触させることにより、
糖転移酵素をアフィニティ吸着体に結合させる。次い
で、この糖転移酵素が結合したアフィニティ吸着体をこ
の糖転移酵素が糖供与体として利用できる糖ヌクレオチ
ドを含む溶液と接触させることにより、糖転移酵素をア
フィニティ吸着体から遊離させるとともに糖受容体に糖
残基を一つ伸長させる。さらに、この糖残基が一つ伸長
した糖受容体と結合することのできる糖転移酵素を含む
組織抽出液を接触させ、同様のことを繰り返し所望の糖
鎖を固相担体上に合成するというものである。しかしな
がら、この方法の有用性あるいはネオ糖ペプチド合成へ
の適用を示す具体的なデータは示されておらず、得られ
た糖鎖を固相担体から遊離させる方法も開示されていな
い。
公報に以下のような方法を開示している。まず、糖転移
酵素の糖受容体を固相担体に結合させ、これをアフィニ
ティ吸着体とし、この糖受容体と結合することのできる
糖転移酵素を含む組織抽出液を接触させることにより、
糖転移酵素をアフィニティ吸着体に結合させる。次い
で、この糖転移酵素が結合したアフィニティ吸着体をこ
の糖転移酵素が糖供与体として利用できる糖ヌクレオチ
ドを含む溶液と接触させることにより、糖転移酵素をア
フィニティ吸着体から遊離させるとともに糖受容体に糖
残基を一つ伸長させる。さらに、この糖残基が一つ伸長
した糖受容体と結合することのできる糖転移酵素を含む
組織抽出液を接触させ、同様のことを繰り返し所望の糖
鎖を固相担体上に合成するというものである。しかしな
がら、この方法の有用性あるいはネオ糖ペプチド合成へ
の適用を示す具体的なデータは示されておらず、得られ
た糖鎖を固相担体から遊離させる方法も開示されていな
い。
【００１６】さらに、本発明者らがポリアクリルアミド
のアミド態窒素原子に、下記化１２（式中、Ａｃはアセ
チル基を示す）に示した基を結合させたものをプライマ
ーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させた後、α−
キモトリプシンの加水分解作用を利用して伸長させた糖
鎖を切り出す方法を報告している(Tetrahedron Lett.,
35, 5657 (1994))。しかしながら、本方法で得られるの
は６−アミノヘキサノール配糖体であり、糖ペプチドで
はない。
のアミド態窒素原子に、下記化１２（式中、Ａｃはアセ
チル基を示す）に示した基を結合させたものをプライマ
ーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させた後、α−
キモトリプシンの加水分解作用を利用して伸長させた糖
鎖を切り出す方法を報告している(Tetrahedron Lett.,
35, 5657 (1994))。しかしながら、本方法で得られるの
は６−アミノヘキサノール配糖体であり、糖ペプチドで
はない。
【００１７】
【化１２】
【００１８】本発明の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用プライマーの合成には本発明のアクリルアミド
誘導体が有用であるが、アクリロイル基がスペーサーを
介してＮ末端のアミノ酸残基のアミノ基に結合したよう
な糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドはこれまでに知ら
れてはいない。D. C. Jacksonらはアクリロイル基がア
ミノヘキサノイル基を介してＮ末端のアミノ酸残基のア
ミノ基に結合したようなペプチド誘導体を(J. Am. Che
m. Sci., 119, 1183 (1997))、遠藤らはアクリロイル基
がアミノラウリロイル基を介してＮ末端のアミノ酸残基
のアミノ基に結合したようなペプチド誘導体(J. Polym.
Sci. PartA Polym. Chem., 35, 1679 (1998))を報告し
ている。また、これらの誘導体は一旦アミノヘキサノイ
ル化あるいはアミノラウリロイル化されたペプチドを合
成した後に、アクリロイル化という方法で得ている。本
発明のアクリルアミド誘導体の合成には、重合性芳香族
アミノ酸誘導体が有用であるが、これまでに知られてい
る重合性アミノ酸誘導体としては、Ｎ−アクリロイルフ
ェニルアラニン、Ｎ−アクリロイルバリンなどがある
が、これらはいずれもアミノ酸のアミノ基をアクリル酸
クロリドなどで直接アクリロイル化したものであり、ア
クリロイル基とアミノ酸のアミノ基との間にスペーサー
はない。
ド合成用プライマーの合成には本発明のアクリルアミド
誘導体が有用であるが、アクリロイル基がスペーサーを
介してＮ末端のアミノ酸残基のアミノ基に結合したよう
な糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドはこれまでに知ら
れてはいない。D. C. Jacksonらはアクリロイル基がア
ミノヘキサノイル基を介してＮ末端のアミノ酸残基のア
ミノ基に結合したようなペプチド誘導体を(J. Am. Che
m. Sci., 119, 1183 (1997))、遠藤らはアクリロイル基
がアミノラウリロイル基を介してＮ末端のアミノ酸残基
のアミノ基に結合したようなペプチド誘導体(J. Polym.
Sci. PartA Polym. Chem., 35, 1679 (1998))を報告し
ている。また、これらの誘導体は一旦アミノヘキサノイ
ル化あるいはアミノラウリロイル化されたペプチドを合
成した後に、アクリロイル化という方法で得ている。本
発明のアクリルアミド誘導体の合成には、重合性芳香族
アミノ酸誘導体が有用であるが、これまでに知られてい
る重合性アミノ酸誘導体としては、Ｎ−アクリロイルフ
ェニルアラニン、Ｎ−アクリロイルバリンなどがある
が、これらはいずれもアミノ酸のアミノ基をアクリル酸
クロリドなどで直接アクリロイル化したものであり、ア
クリロイル基とアミノ酸のアミノ基との間にスペーサー
はない。
【００１９】
【発明が解決しようとする課題】上述したように、これ
までに種々のペプチド鎖を有する糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチドを合成するためのプライマーや該プライマ
ーを利用した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドの製造
方法は知られていない。本発明の目的は、糖ペプチドあ
るいはネオ糖ペプチドの合成に利用できるプライマーお
よび該プライマーを利用した糖ペプチドあるいはネオ糖
ペプチドの製造方法を提供することにある。また、該プ
ライマーの合成に有用な重合性芳香族アミノ酸誘導体を
提供することにある。
までに種々のペプチド鎖を有する糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチドを合成するためのプライマーや該プライマ
ーを利用した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドの製造
方法は知られていない。本発明の目的は、糖ペプチドあ
るいはネオ糖ペプチドの合成に利用できるプライマーお
よび該プライマーを利用した糖ペプチドあるいはネオ糖
ペプチドの製造方法を提供することにある。また、該プ
ライマーの合成に有用な重合性芳香族アミノ酸誘導体を
提供することにある。
【００２０】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を解決するために鋭意検討した結果、新規な糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチド合成用プライマーを合成し、
これに適当な糖ヌクレオチド類の共存下、糖転移酵素を
作用させることにより、糖ヌクレオチド類より該プライ
マーに糖残基を転移させ、適当な回数この糖転移反応を
繰り返した後、必要に応じて副生したヌクレオチド類や
未反応の糖ヌクレオチド類などを除去し、特定のプロテ
アーゼを該プライマーに作用させ、糖鎖が伸長した該プ
ライマーより糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離
させることにより、上記問題点を解決できることを見出
し、本発明を完成するに至った。
点を解決するために鋭意検討した結果、新規な糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチド合成用プライマーを合成し、
これに適当な糖ヌクレオチド類の共存下、糖転移酵素を
作用させることにより、糖ヌクレオチド類より該プライ
マーに糖残基を転移させ、適当な回数この糖転移反応を
繰り返した後、必要に応じて副生したヌクレオチド類や
未反応の糖ヌクレオチド類などを除去し、特定のプロテ
アーゼを該プライマーに作用させ、糖鎖が伸長した該プ
ライマーより糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離
させることにより、上記問題点を解決できることを見出
し、本発明を完成するに至った。
【００２１】すなわち、本発明は以下のような構成から
なる。 （１）高分子担体上に、一般式（Ｉ）（式中、Ｒ1はメ
チレン基１〜２０個分の長さを有するリンカーを示し、
Ｒ2は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位を有す
るアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ3は前
記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない任意の
ペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるいは酸ア
ミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が結合し
たセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基または
アスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは側鎖官
能基にリンカーを介してグリコシド結合により任意の単
糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残基を示
す）で表される基が結合していることを特徴とする糖ペ
プチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマ
ー。
なる。 （１）高分子担体上に、一般式（Ｉ）（式中、Ｒ1はメ
チレン基１〜２０個分の長さを有するリンカーを示し、
Ｒ2は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位を有す
るアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ3は前
記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない任意の
ペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるいは酸ア
ミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が結合し
たセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基または
アスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは側鎖官
能基にリンカーを介してグリコシド結合により任意の単
糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残基を示
す）で表される基が結合していることを特徴とする糖ペ
プチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマ
ー。
【化１３】 （２）Ｒ3がアミノ酸残基２〜３０個よりなるペプチド
残基である（１）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
合成用高分子プライマー。 （３）Ｒ1が一般式（II）（式中、ＸはＯ、ＣＨ2、Ｃ＝
ＯまたはＮＨを示し、かつＸを介して高分子担体と結合
しており、ｎは１〜１８の整数を示す）で表される基で
ある（１）または（２）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペ
プチド合成用高分子プライマー。
残基である（１）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
合成用高分子プライマー。 （３）Ｒ1が一般式（II）（式中、ＸはＯ、ＣＨ2、Ｃ＝
ＯまたはＮＨを示し、かつＸを介して高分子担体と結合
しており、ｎは１〜１８の整数を示す）で表される基で
ある（１）または（２）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペ
プチド合成用高分子プライマー。
【化１４】 （４）側鎖官能基に結合したリンカーがメチレン基１〜
２０個分の長さを有し、任意の単糖残基が結合したアミ
ノ酸残基がセリン、トレオニン、リジン、アスパラギン
酸、グルタミン酸、アスパラギンまたはグルタミン残基
である（１）〜（３）のいずれかのネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマー。 （５）側鎖官能基に結合したリンカーが一般式（III）
（式中、ＹはＯ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、かつＹを介
してアミノ酸残基の側鎖官能基と結合しており、ｎは１
〜１８の整数を示す）で表される基である（１）〜
（４）のいずれかのネオ糖ペプチド合成用高分子プライ
マー。
２０個分の長さを有し、任意の単糖残基が結合したアミ
ノ酸残基がセリン、トレオニン、リジン、アスパラギン
酸、グルタミン酸、アスパラギンまたはグルタミン残基
である（１）〜（３）のいずれかのネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマー。 （５）側鎖官能基に結合したリンカーが一般式（III）
（式中、ＹはＯ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、かつＹを介
してアミノ酸残基の側鎖官能基と結合しており、ｎは１
〜１８の整数を示す）で表される基である（１）〜
（４）のいずれかのネオ糖ペプチド合成用高分子プライ
マー。
【化１５】 （６）高分子担体がアクリルアミド類、メタクリルアミ
ド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン類、脂
肪酸ビニルエステル類などのビニル化合物の重合体また
は共重合体である（１）〜（５）のいずれかの糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー。 （７）Ｒ2が芳香族アミノ酸残基であり、Ｒ3が芳香族ア
ミノ酸を含まない任意のペプチド残基であり、その残基
中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合により
任意の単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残
基、グルタミン残基またはアスパラギン残基を含むペプ
チド残基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリ
コシド結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残
基を含むペプチド残基である（１）〜（６）のいずれか
の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマー。 （８）一般式（IV）（式中、Ｒ4は炭素数１〜１８のア
ルキレン基を示し、Ｒ5は特定のプロテアーゼにより開
裂できる部位を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残
基を示し、Ｒ6は前記プロテアーゼにより開裂できる部
位を含まない任意のペプチド残基であり、その残基中に
ＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合により任意
の単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残基、グ
ルタミン残基またはアスパラギン残基を含むペプチド残
基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド
結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含
むペプチド残基を示す）で表されることを特徴とするア
クリルアミド誘導体。
ド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン類、脂
肪酸ビニルエステル類などのビニル化合物の重合体また
は共重合体である（１）〜（５）のいずれかの糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー。 （７）Ｒ2が芳香族アミノ酸残基であり、Ｒ3が芳香族ア
ミノ酸を含まない任意のペプチド残基であり、その残基
中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合により
任意の単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残
基、グルタミン残基またはアスパラギン残基を含むペプ
チド残基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリ
コシド結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残
基を含むペプチド残基である（１）〜（６）のいずれか
の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマー。 （８）一般式（IV）（式中、Ｒ4は炭素数１〜１８のア
ルキレン基を示し、Ｒ5は特定のプロテアーゼにより開
裂できる部位を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残
基を示し、Ｒ6は前記プロテアーゼにより開裂できる部
位を含まない任意のペプチド残基であり、その残基中に
ＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合により任意
の単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残基、グ
ルタミン残基またはアスパラギン残基を含むペプチド残
基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド
結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含
むペプチド残基を示す）で表されることを特徴とするア
クリルアミド誘導体。
【化１６】 （９）Ｒ6がアミノ酸残基２〜３０個よりなるペプチド
残基である（８）のアクリルアミド誘導体。 （１０）側鎖官能基に結合したリンカーがメチレン基１
〜２０個分の長さを有し、任意の単糖残基が結合したア
ミノ酸残基がセリン、トレオニン、リジン、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、アスパラギンまたはグルタミン残
基である（８）または（９）のアクリルアミド誘導体。 （１１）側鎖官能基に結合したリンカーが一般式（V）
（式中、ＡはＯ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、かつＡを介
してアミノ酸残基の側鎖官能基と結合しており、ｎは１
〜１８の整数を示す）で表される基である（８）〜（１
０）のいずれかのアクリルアミド誘導体。
残基である（８）のアクリルアミド誘導体。 （１０）側鎖官能基に結合したリンカーがメチレン基１
〜２０個分の長さを有し、任意の単糖残基が結合したア
ミノ酸残基がセリン、トレオニン、リジン、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、アスパラギンまたはグルタミン残
基である（８）または（９）のアクリルアミド誘導体。 （１１）側鎖官能基に結合したリンカーが一般式（V）
（式中、ＡはＯ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、かつＡを介
してアミノ酸残基の側鎖官能基と結合しており、ｎは１
〜１８の整数を示す）で表される基である（８）〜（１
０）のいずれかのアクリルアミド誘導体。
【化１７】 （１２）Ｒ5が芳香族アミノ酸残基であり、Ｒ6が芳香族
アミノ酸を含まない任意のペプチド残基であり、その残
基中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合によ
り任意の単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残
基、グルタミン残基またはアスパラギン残基を含むペプ
チド残基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリ
コシド結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残
基を含むペプチド残基である（８）〜（１１）のいずれ
かのアクリルアミド誘導体。 （１３）（８）〜（１１）のいずれかの少なくとも１種
類のアクリルアミド誘導体および少なくとも１種類のビ
ニル系単量体とを含む共重合体からなることを特徴とす
る糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマー。 （１４）（１２）の少なくとも１種類のアクリルアミド
誘導体および少なくとも１種類のビニル系単量体とを含
む共重合体からなることを特徴とする糖ペプチドあるい
はネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー。 （１５）ビニル系単量体がアクリルアミド類、メタクリ
ルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン
類、脂肪酸ビニルエステル類からなる群より選ばれる
（１３）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマー。 （１６）ビニル系単量体がアクリルアミド類、メタクリ
ルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン
類、脂肪酸ビニルエステル類からなる群より選ばれる
（１４）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマー。 （１７）アミノ基が一般式（VI）（式中、Ｒ7は炭素数
１〜１８のアルキレン基を示し、Ｒ8はＨまたはＣＨ3を
示す）で表される基でアシル化された重合性芳香族アミ
ノ酸誘導体。
アミノ酸を含まない任意のペプチド残基であり、その残
基中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合によ
り任意の単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残
基、グルタミン残基またはアスパラギン残基を含むペプ
チド残基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリ
コシド結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残
基を含むペプチド残基である（８）〜（１１）のいずれ
かのアクリルアミド誘導体。 （１３）（８）〜（１１）のいずれかの少なくとも１種
類のアクリルアミド誘導体および少なくとも１種類のビ
ニル系単量体とを含む共重合体からなることを特徴とす
る糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマー。 （１４）（１２）の少なくとも１種類のアクリルアミド
誘導体および少なくとも１種類のビニル系単量体とを含
む共重合体からなることを特徴とする糖ペプチドあるい
はネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー。 （１５）ビニル系単量体がアクリルアミド類、メタクリ
ルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン
類、脂肪酸ビニルエステル類からなる群より選ばれる
（１３）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマー。 （１６）ビニル系単量体がアクリルアミド類、メタクリ
ルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン
類、脂肪酸ビニルエステル類からなる群より選ばれる
（１４）の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマー。 （１７）アミノ基が一般式（VI）（式中、Ｒ7は炭素数
１〜１８のアルキレン基を示し、Ｒ8はＨまたはＣＨ3を
示す）で表される基でアシル化された重合性芳香族アミ
ノ酸誘導体。
【化１８】 （１８）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（１）〜（７）および（１３）〜
（１６）のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下
に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチド
より糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに転移させる工程、および、（Ｂ）
工程（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ2中の特
定の部位を開裂させることのできるプロテアーゼを作用
させることにより糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むことを特徴とす
る糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する方法。 （１９）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（１）〜（７）および（１３）〜
（１６）のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下
に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチド
より糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに転移させる工程、（Ｂ）工程
（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させ
る工程、（Ｃ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類
や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、
（Ｄ）工程（Ａ）ないし工程（Ｃ）を複数回繰り返した
後、複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチド
あるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ
2中の特定の部位を開裂させることのできるプロテアー
ゼを作用させることにより糖鎖糖鎖が伸長した糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むこ
とを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製
造する方法。 （２０）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（７）、（１４）および（１６）
のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用
高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下に糖転移
酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドより糖残
基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子
プライマーに転移させる工程、および、（Ｂ）工程
（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプチドあるいはネオ
糖ペプチド合成用高分子プライマーに、α−キモトリプ
シンを作用させ、芳香族アミノ酸残基のカルボキシル基
側のペプチド結合を加水分解することにより糖鎖が伸長
した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工
程、を含むことを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖
ペプチドを製造する方法。 （２１）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（７）、（１４）および（１６）
のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用
高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下に糖転移
酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドより糖残
基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子
プライマーに転移させる工程、（Ｂ）工程（Ａ）を１回
または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程、
（Ｃ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類や未反応
の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、（Ｄ）工
程（Ａ）ないし工程（Ｃ）を複数回繰り返した後、複数
の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、α−キモト
リプシンを作用させ、芳香族アミノ酸残基のカルボキシ
ル基側のペプチド結合を加水分解することにより糖鎖が
伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させ
る工程、を含むことを特徴とする糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチドを製造する方法。 （２２）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（８）〜（１２）のいずれかに記
載のアクリルアミド誘導体をペプチド自動合成装置を利
用して得る工程、（Ｂ）得られたアクリルアミド誘導体
と少なくとも１種類のビニル系単量体を共重合させ、
（１３）〜（１６）のいずれかの糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチド合成用高分子プライマーを得る工程、
（Ｃ）得られた糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下に糖転
移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドより、
糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマーに転移させる工程、（Ｄ）工程（Ｃ）を
１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程、
（Ｅ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類や未反応
の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、（Ｆ）工
程（Ｃ）ないし工程（Ｅ）を複数回繰り返した後、複数
の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ2中の特
定の部位を開裂させることのできるプロテアーゼを作用
させることにより糖鎖糖鎖が伸長した糖ペプチドあるい
はネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むことを特徴
とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する方
法。 （２３）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（１２）のアクリルアミド誘導体
をペプチド自動合成装置を利用して得る工程、（Ｂ）得
られたアクリルアミド誘導体と少なくとも１種類のビニ
ル系単量体を共重合させ、（１４）または（１６）の糖
ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマ
ーを得る工程、（Ｃ）得られた糖ペプチドあるいはネオ
糖ペプチド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチド
の存在下に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌク
レオチドより、糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペ
プチド合成用高分子プライマーに転移させる工程、
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖
を伸長させる工程、（Ｅ）必要に応じて、副生したヌク
レオチド類や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工
程、および、（Ｆ）工程（Ｃ）ないし工程（Ｅ）を複数
回繰り返した後、複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長し
た糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマーに、α−キモトリプシンを作用させ、芳香族アミ
ノ酸残基のカルボキシル基側のペプチド結合を加水分解
することにより糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネオ
糖ペプチドを遊離させる工程、を含むことを特徴とする
糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する方法。
方法であって、（Ａ）（１）〜（７）および（１３）〜
（１６）のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下
に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチド
より糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに転移させる工程、および、（Ｂ）
工程（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ2中の特
定の部位を開裂させることのできるプロテアーゼを作用
させることにより糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むことを特徴とす
る糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する方法。 （１９）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（１）〜（７）および（１３）〜
（１６）のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下
に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチド
より糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに転移させる工程、（Ｂ）工程
（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させ
る工程、（Ｃ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類
や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、
（Ｄ）工程（Ａ）ないし工程（Ｃ）を複数回繰り返した
後、複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチド
あるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ
2中の特定の部位を開裂させることのできるプロテアー
ゼを作用させることにより糖鎖糖鎖が伸長した糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むこ
とを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製
造する方法。 （２０）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（７）、（１４）および（１６）
のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用
高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下に糖転移
酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドより糖残
基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子
プライマーに転移させる工程、および、（Ｂ）工程
（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプチドあるいはネオ
糖ペプチド合成用高分子プライマーに、α−キモトリプ
シンを作用させ、芳香族アミノ酸残基のカルボキシル基
側のペプチド結合を加水分解することにより糖鎖が伸長
した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工
程、を含むことを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖
ペプチドを製造する方法。 （２１）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（７）、（１４）および（１６）
のいずれかの糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用
高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下に糖転移
酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドより糖残
基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子
プライマーに転移させる工程、（Ｂ）工程（Ａ）を１回
または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程、
（Ｃ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類や未反応
の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、（Ｄ）工
程（Ａ）ないし工程（Ｃ）を複数回繰り返した後、複数
の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、α−キモト
リプシンを作用させ、芳香族アミノ酸残基のカルボキシ
ル基側のペプチド結合を加水分解することにより糖鎖が
伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させ
る工程、を含むことを特徴とする糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチドを製造する方法。 （２２）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（８）〜（１２）のいずれかに記
載のアクリルアミド誘導体をペプチド自動合成装置を利
用して得る工程、（Ｂ）得られたアクリルアミド誘導体
と少なくとも１種類のビニル系単量体を共重合させ、
（１３）〜（１６）のいずれかの糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチド合成用高分子プライマーを得る工程、
（Ｃ）得られた糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下に糖転
移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドより、
糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマーに転移させる工程、（Ｄ）工程（Ｃ）を
１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程、
（Ｅ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類や未反応
の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、（Ｆ）工
程（Ｃ）ないし工程（Ｅ）を複数回繰り返した後、複数
の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ2中の特
定の部位を開裂させることのできるプロテアーゼを作用
させることにより糖鎖糖鎖が伸長した糖ペプチドあるい
はネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むことを特徴
とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する方
法。 （２３）糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法であって、（Ａ）（１２）のアクリルアミド誘導体
をペプチド自動合成装置を利用して得る工程、（Ｂ）得
られたアクリルアミド誘導体と少なくとも１種類のビニ
ル系単量体を共重合させ、（１４）または（１６）の糖
ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマ
ーを得る工程、（Ｃ）得られた糖ペプチドあるいはネオ
糖ペプチド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチド
の存在下に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌク
レオチドより、糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペ
プチド合成用高分子プライマーに転移させる工程、
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖
を伸長させる工程、（Ｅ）必要に応じて、副生したヌク
レオチド類や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工
程、および、（Ｆ）工程（Ｃ）ないし工程（Ｅ）を複数
回繰り返した後、複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長し
た糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プラ
イマーに、α−キモトリプシンを作用させ、芳香族アミ
ノ酸残基のカルボキシル基側のペプチド結合を加水分解
することにより糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネオ
糖ペプチドを遊離させる工程、を含むことを特徴とする
糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する方法。
【００２２】
【発明の実施の形態】本発明の糖ペプチドあるいはネオ
糖ペプチド合成用プライマーは、高分子担体上に上記一
般式（Ｉ）で表される基が結合している。式中、Ｒ1は
メチレン基１〜２０個分の長さを有するリンカーを示
し、Ｒ2は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位を
有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ3
は前記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない任
意のペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるいは
酸アミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が結
合したセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基ま
たはアスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは側
鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合により任意
の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残基
を示す。Ｒ1のメチレン基１〜２０個分の長さを有する
リンカーとしては、例えば上記一般式（II）（式中、Ｘ
はＯ、ＣＨ2、Ｃ＝ＯまたはＮＨを示し、かつＸを介し
て高分子担体と結合しており、ｎは１〜１８の整数を示
す）で表される基が例示され、具体的には下記に示すよ
うなものが例示される。
糖ペプチド合成用プライマーは、高分子担体上に上記一
般式（Ｉ）で表される基が結合している。式中、Ｒ1は
メチレン基１〜２０個分の長さを有するリンカーを示
し、Ｒ2は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位を
有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ3
は前記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない任
意のペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるいは
酸アミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が結
合したセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基ま
たはアスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは側
鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合により任意
の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残基
を示す。Ｒ1のメチレン基１〜２０個分の長さを有する
リンカーとしては、例えば上記一般式（II）（式中、Ｘ
はＯ、ＣＨ2、Ｃ＝ＯまたはＮＨを示し、かつＸを介し
て高分子担体と結合しており、ｎは１〜１８の整数を示
す）で表される基が例示され、具体的には下記に示すよ
うなものが例示される。
【００２３】
【化１９】
【００２４】Ｒ2の特定のプロテアーゼにより開裂でき
る部位を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基とし
ては、例えば特定のプロテアーゼがα−キモトリプシン
のときにはフェニルアラニン、トリプトファン、チロシ
ンなどの芳香族アミノ酸残基、プロリン特異的プロテア
ーゼのときにはプロリン残基、トリプシンのときはアル
ギニンやリジンなどの塩基性アミノ酸残基、ファクター
ＸａのときはＩｌｅ（イソロイシン）−Ｇｌｕ（グルタ
ミン酸）またはＡｓｐ（アスパラギン酸）−Ｇｌｙ（グ
リシン）−Ａｒｇ（アルギニン）残基、エンテロキナー
ゼのときはＡｓｐ（アスパラギン酸）−Ａｓｐ（アスパ
ラギン酸）−Ａｓｐ（アスパラギン酸）−Ａｓｐ（アス
パラギン酸）−Ｌｙｓ（リジン）残基などが挙げられ
る。
る部位を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基とし
ては、例えば特定のプロテアーゼがα−キモトリプシン
のときにはフェニルアラニン、トリプトファン、チロシ
ンなどの芳香族アミノ酸残基、プロリン特異的プロテア
ーゼのときにはプロリン残基、トリプシンのときはアル
ギニンやリジンなどの塩基性アミノ酸残基、ファクター
ＸａのときはＩｌｅ（イソロイシン）−Ｇｌｕ（グルタ
ミン酸）またはＡｓｐ（アスパラギン酸）−Ｇｌｙ（グ
リシン）−Ａｒｇ（アルギニン）残基、エンテロキナー
ゼのときはＡｓｐ（アスパラギン酸）−Ａｓｐ（アスパ
ラギン酸）−Ａｓｐ（アスパラギン酸）−Ａｓｐ（アス
パラギン酸）−Ｌｙｓ（リジン）残基などが挙げられ
る。
【００２５】Ｒ3の前記プロテアーゼにより開裂できる
部位を含まない任意のペプチド残基としては、前記プロ
テアーゼにより開裂できる部位を有するアミノ酸残基あ
るいはペプチド残基を除く任意のアミノ酸残基から構成
されていれば特に制限はなく、また、構成するアミノ酸
残基は分子内にアミノ基とカルボキシル基を有するもの
であれば特に制限はなく、Ｇｌｙ（グリシン）、Ａｌａ
（アラニン）、Ｖａｌ（バリン）、Ｌｅｕ（ロイシ
ン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｔｙｒ（チロシン）、
Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、
Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｌｙｓ（リジン）、Ａｒｇ
（アルギニン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｃｙｓ（シス
テイン）、Ｍｅｔ（メチオニン）、Ｓｅｒ（セリン）、
Ｔｈｒ（トレオニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ｇｌ
ｎ（グルタミン）あるいはＰｒｏ（プロリン）残基など
のα−アミノ酸残基あるいはβ−Ａｌａ残基のようなβ
−アミノ酸残基などが例示される。また、アミノ酸残基
はＤ体、Ｌ体いずれでもよいが、Ｌ体の方が好ましい。
さらに、上述したアミノ酸残基２〜３０個からなるペプ
チド残基が好ましい。４〜２０個からなるペプチド残基
がさらに好ましい。リンカーを介してグリコシド結合で
単糖残基を結合させる側鎖官能基を有するアミノ酸残基
としては、リンカーを介してグリコシド結合で単糖残基
を結合させることのできる側鎖官能基を有するものであ
れば特に制限はないが、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓ
ｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎまたはＧｌｎ残基が好ましい。
部位を含まない任意のペプチド残基としては、前記プロ
テアーゼにより開裂できる部位を有するアミノ酸残基あ
るいはペプチド残基を除く任意のアミノ酸残基から構成
されていれば特に制限はなく、また、構成するアミノ酸
残基は分子内にアミノ基とカルボキシル基を有するもの
であれば特に制限はなく、Ｇｌｙ（グリシン）、Ａｌａ
（アラニン）、Ｖａｌ（バリン）、Ｌｅｕ（ロイシ
ン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｔｙｒ（チロシン）、
Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、
Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｌｙｓ（リジン）、Ａｒｇ
（アルギニン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｃｙｓ（シス
テイン）、Ｍｅｔ（メチオニン）、Ｓｅｒ（セリン）、
Ｔｈｒ（トレオニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ｇｌ
ｎ（グルタミン）あるいはＰｒｏ（プロリン）残基など
のα−アミノ酸残基あるいはβ−Ａｌａ残基のようなβ
−アミノ酸残基などが例示される。また、アミノ酸残基
はＤ体、Ｌ体いずれでもよいが、Ｌ体の方が好ましい。
さらに、上述したアミノ酸残基２〜３０個からなるペプ
チド残基が好ましい。４〜２０個からなるペプチド残基
がさらに好ましい。リンカーを介してグリコシド結合で
単糖残基を結合させる側鎖官能基を有するアミノ酸残基
としては、リンカーを介してグリコシド結合で単糖残基
を結合させることのできる側鎖官能基を有するものであ
れば特に制限はないが、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓ
ｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎまたはＧｌｎ残基が好ましい。
【００２６】アミノ酸残基の側鎖官能基にリンカーを介
してグリコシド結合した単糖残基としては、特に制限は
ないが、ガラクトース残基、マンノース残基、Ｎ−アセ
チルグルコサミン残基、Ｎ−アセチルガラクトサミン残
基、グルコース残基、シアル酸残基などが例示され、こ
れら単糖残基はα結合、β結合いずれの結合様式で結合
していても構わない。ここで、シアル酸とはノイラミン
酸のアシル誘導体の総称であり、Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、９−Ｏ−アセチル
−Ｎ−アセチルノイラミン酸などが含まれる。
してグリコシド結合した単糖残基としては、特に制限は
ないが、ガラクトース残基、マンノース残基、Ｎ−アセ
チルグルコサミン残基、Ｎ−アセチルガラクトサミン残
基、グルコース残基、シアル酸残基などが例示され、こ
れら単糖残基はα結合、β結合いずれの結合様式で結合
していても構わない。ここで、シアル酸とはノイラミン
酸のアシル誘導体の総称であり、Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、９−Ｏ−アセチル
−Ｎ−アセチルノイラミン酸などが含まれる。
【００２７】リンカーとしては、アミノ酸残基と単糖残
基を結合させることのできるものであれば特に制限はな
いが、メチレン基１〜２０個分の長さを有しているもの
が好ましく、さらに上記一般式（III）（式中、Ｙは
Ｏ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、かつＹを介してアミノ酸
残基の側鎖官能基と結合しており、ｎは１〜１８の整数
を示す）で表される基が好ましい。具体的には、下記に
示されるようなものが例示される。
基を結合させることのできるものであれば特に制限はな
いが、メチレン基１〜２０個分の長さを有しているもの
が好ましく、さらに上記一般式（III）（式中、Ｙは
Ｏ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、かつＹを介してアミノ酸
残基の側鎖官能基と結合しており、ｎは１〜１８の整数
を示す）で表される基が好ましい。具体的には、下記に
示されるようなものが例示される。
【００２８】
【化２０】
【００２９】本発明の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用プライマーとしては、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は任
意に組み合わせることができる。
ド合成用プライマーとしては、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は任
意に組み合わせることができる。
【００３０】本発明で用いることのできる高分子担体
は、一般式（Ｉ）で表される基を結合させることがで
き、かつ結合後以下で述べるような糖転移酵素の作用に
より一般式（Ｉ）で表される基の糖残基にさらなる糖残
基を転移させることのできるものであれば特に制限はな
く、例えば、アクリルアミド類、メタクリルアミド類、
アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン類、脂肪酸ビ
ニルエステル類などのビニル化合物の重合体または共重
合体などが挙げられる。アクリルアミド類としてはアク
リルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミドやＮ−イソプロ
ピルアクリルアミドなどのＮ−アルキルアクリルアミド
などが例示される。メタクリルアミド類としては、メタ
クリルアミド、Ｎ−メチルメタクリルアミドやＮ−エチ
ルメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミ
ドなどのＮ−アルキルメタクリルアミドなどが例示され
る。アクリル酸類としては、アクリル酸やアクリル酸メ
チル、アクリル酸エチル、アクリル酸ヒドロキシエチ
ル、アクリル酸ジメチルアミノエチルなどのアクリル酸
エステルなどが例示される。メタクリル酸類としてはメ
タクリル酸やメタクリル酸メチル、メタクリル酸エチ
ル、メタクリル酸ヒドロキシエチル、メタクリル酸ジメ
チルアミノエチルなどのメタクリル酸エステルなどが例
示される。スチレン類としては、スチレン、ｐ−ヒドロ
キシスチレン、ｐ−ヒドロキシメチルスチレンなどが例
示される。脂肪酸ビニルエステルとしては、酢酸ビニ
ル、酪酸ビニルなどが例示される。また、本発明中の脂
肪酸ビニルエステルの重合体あるいは共重合体には、重
合反応後アルカリなどによりエステル結合を全部あるい
は一部加水分解したものも含まれる。
は、一般式（Ｉ）で表される基を結合させることがで
き、かつ結合後以下で述べるような糖転移酵素の作用に
より一般式（Ｉ）で表される基の糖残基にさらなる糖残
基を転移させることのできるものであれば特に制限はな
く、例えば、アクリルアミド類、メタクリルアミド類、
アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン類、脂肪酸ビ
ニルエステル類などのビニル化合物の重合体または共重
合体などが挙げられる。アクリルアミド類としてはアク
リルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミドやＮ−イソプロ
ピルアクリルアミドなどのＮ−アルキルアクリルアミド
などが例示される。メタクリルアミド類としては、メタ
クリルアミド、Ｎ−メチルメタクリルアミドやＮ−エチ
ルメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミ
ドなどのＮ−アルキルメタクリルアミドなどが例示され
る。アクリル酸類としては、アクリル酸やアクリル酸メ
チル、アクリル酸エチル、アクリル酸ヒドロキシエチ
ル、アクリル酸ジメチルアミノエチルなどのアクリル酸
エステルなどが例示される。メタクリル酸類としてはメ
タクリル酸やメタクリル酸メチル、メタクリル酸エチ
ル、メタクリル酸ヒドロキシエチル、メタクリル酸ジメ
チルアミノエチルなどのメタクリル酸エステルなどが例
示される。スチレン類としては、スチレン、ｐ−ヒドロ
キシスチレン、ｐ−ヒドロキシメチルスチレンなどが例
示される。脂肪酸ビニルエステルとしては、酢酸ビニ
ル、酪酸ビニルなどが例示される。また、本発明中の脂
肪酸ビニルエステルの重合体あるいは共重合体には、重
合反応後アルカリなどによりエステル結合を全部あるい
は一部加水分解したものも含まれる。
【００３１】ここでいう高分子担体は水不溶性、水溶性
いずれであってもよいが、水溶性の方が好ましい。一般
的な分子量は約１００００〜約５００００００であり、
好ましくは２００００〜２００００００、より好ましく
は５００００〜１００００００である。その形態は、水
不溶性担体の場合、ビーズ状、繊維状、膜状、フィルム
状などが挙げられるが、特に制限されない。
いずれであってもよいが、水溶性の方が好ましい。一般
的な分子量は約１００００〜約５００００００であり、
好ましくは２００００〜２００００００、より好ましく
は５００００〜１００００００である。その形態は、水
不溶性担体の場合、ビーズ状、繊維状、膜状、フィルム
状などが挙げられるが、特に制限されない。
【００３２】本発明の高分子担体上に一般式（Ｉ）で表
される基が結合している糖ペプチドあるいはネオ糖ペプ
チド合成用高分子プライマーは、ラジカル重合やアニオ
ン重合などの手法を用い、一般式（Ｉ）で表される基を
有する重合性モノマーを重合させたり、他の重合性モノ
マーと共重合させることにより得ることができ、通常ペ
ルオキソ二硫酸アンモニウムなどを触媒とするラジカル
重合で得ることができる。一般式（Ｉ）で表される基を
有する重合性モノマーとしては、例えば、上記一般式
（IV）（式中、Ｒ4は炭素数１〜１８のアルキレン基を
示し、Ｒ5は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位
を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ
6は前記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない
任意のペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるい
は酸アミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が
結合したセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基
またはアスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは
側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合により任
意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残
基を示す）で表されるようなアクリルアミド誘導体など
が挙げられる。また、上記重合性モノマーとビニル系モ
ノマーとの共重合比に特に制限はないが、上記重合性モ
ノマー：ビニル系モノマー＝１：１〜１：１００が好ま
しく、さらに重合性モノマー：ビニル系モノマー＝１：
４〜１：５０が好ましい。
される基が結合している糖ペプチドあるいはネオ糖ペプ
チド合成用高分子プライマーは、ラジカル重合やアニオ
ン重合などの手法を用い、一般式（Ｉ）で表される基を
有する重合性モノマーを重合させたり、他の重合性モノ
マーと共重合させることにより得ることができ、通常ペ
ルオキソ二硫酸アンモニウムなどを触媒とするラジカル
重合で得ることができる。一般式（Ｉ）で表される基を
有する重合性モノマーとしては、例えば、上記一般式
（IV）（式中、Ｒ4は炭素数１〜１８のアルキレン基を
示し、Ｒ5は特定のプロテアーゼにより開裂できる部位
を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、Ｒ
6は前記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まない
任意のペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基あるい
は酸アミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基が
結合したセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残基
またはアスパラギン残基を含むペプチド残基、あるいは
側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合により任
意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド残
基を示す）で表されるようなアクリルアミド誘導体など
が挙げられる。また、上記重合性モノマーとビニル系モ
ノマーとの共重合比に特に制限はないが、上記重合性モ
ノマー：ビニル系モノマー＝１：１〜１：１００が好ま
しく、さらに重合性モノマー：ビニル系モノマー＝１：
４〜１：５０が好ましい。
【００３３】また、高分子担体の側鎖官能基に一般式
（Ｉ）で表される基を結合させることによっても得るこ
とができる。例えば、塩化アクリロイルあるいはＮ−ア
クリロキシスクシンイミドとアクリルアミドとの共重合
体に一般式（VII）（式中、Ｒ9は炭素数１〜１８のアル
キレン基を示し、Ｒ10は特定のプロテアーゼにより開裂
できる部位を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基
を示し、Ｒ11は前記プロテアーゼにより開裂できる部位
を含まない任意のペプチド残基であり、その残基中にＯ
Ｈ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合により任意の
単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残基、グル
タミン残基またはアスパラギン残基を含むペプチド残
基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド
結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含
むペプチド残基を示す）で表される化合物を反応させる
ことによって得ることができる。
（Ｉ）で表される基を結合させることによっても得るこ
とができる。例えば、塩化アクリロイルあるいはＮ−ア
クリロキシスクシンイミドとアクリルアミドとの共重合
体に一般式（VII）（式中、Ｒ9は炭素数１〜１８のアル
キレン基を示し、Ｒ10は特定のプロテアーゼにより開裂
できる部位を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基
を示し、Ｒ11は前記プロテアーゼにより開裂できる部位
を含まない任意のペプチド残基であり、その残基中にＯ
Ｈ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合により任意の
単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン残基、グル
タミン残基またはアスパラギン残基を含むペプチド残
基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド
結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含
むペプチド残基を示す）で表される化合物を反応させる
ことによって得ることができる。
【００３４】
【化２１】
【００３５】上記一般式（IV）で表されるアクリルアミ
ド誘導体は、ペプチド自動合成装置を利用して合成する
ことができる。ここでは、Ｒ5が芳香族アミノ酸残基で
あり、Ｒ6が芳香族アミノ酸を含まない任意のペプチド
残基であり、その残基中にＯＨ基あるいは酸アミド基に
グリコシド結合により任意の単糖残基が結合したセリン
残基、トレオニン残基、グルタミン残基またはアスパラ
ギン残基を含むペプチド残基、あるいは側鎖官能基にリ
ンカーを介してグリコシド結合により任意の単糖残基が
結合したアミノ酸残基を含むペプチド残基である場合に
ついて述べる。まず、適当な固相担体上でアミノ酸を伸
長させ、芳香族アミノ酸残基を含まない任意のペプチド
であり、その残基中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリ
コシド結合により任意の単糖残基が結合したセリン残
基、トレオニン残基、グルタミン残基またはアスパラギ
ン残基を含むペプチド残基、あるいは側鎖官能基にリン
カーを介してグリコシド結合により任意の単糖残基が結
合したアミノ酸残基を含むペプチドを固相担体上で合成
する。そして、アミノ基が一般式（VI）（式中、Ｒ7は
炭素数１〜１８のアルキレン基を示し、Ｒ8はＨまたは
ＣＨ3を示す）で表される基でアシル化された芳香族ア
ミノ酸誘導体を用いてペプチド鎖を伸長させた後、適当
な方法で固相担体より伸長させたペプチドの遊離および
ペプチド鎖あるいは単糖残基上の保護基を脱離させるこ
とにより得ることができる。
ド誘導体は、ペプチド自動合成装置を利用して合成する
ことができる。ここでは、Ｒ5が芳香族アミノ酸残基で
あり、Ｒ6が芳香族アミノ酸を含まない任意のペプチド
残基であり、その残基中にＯＨ基あるいは酸アミド基に
グリコシド結合により任意の単糖残基が結合したセリン
残基、トレオニン残基、グルタミン残基またはアスパラ
ギン残基を含むペプチド残基、あるいは側鎖官能基にリ
ンカーを介してグリコシド結合により任意の単糖残基が
結合したアミノ酸残基を含むペプチド残基である場合に
ついて述べる。まず、適当な固相担体上でアミノ酸を伸
長させ、芳香族アミノ酸残基を含まない任意のペプチド
であり、その残基中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリ
コシド結合により任意の単糖残基が結合したセリン残
基、トレオニン残基、グルタミン残基またはアスパラギ
ン残基を含むペプチド残基、あるいは側鎖官能基にリン
カーを介してグリコシド結合により任意の単糖残基が結
合したアミノ酸残基を含むペプチドを固相担体上で合成
する。そして、アミノ基が一般式（VI）（式中、Ｒ7は
炭素数１〜１８のアルキレン基を示し、Ｒ8はＨまたは
ＣＨ3を示す）で表される基でアシル化された芳香族ア
ミノ酸誘導体を用いてペプチド鎖を伸長させた後、適当
な方法で固相担体より伸長させたペプチドの遊離および
ペプチド鎖あるいは単糖残基上の保護基を脱離させるこ
とにより得ることができる。
【００３６】
【化２２】
【００３７】用いることのできる固相担体としては、ペ
プチド伸長反応を行うことができ、結合している糖残基
の分解なしに固相担体からペプチドを遊離させることが
できるものであれば特に限定されず、例えば２−クロロ
トリチル樹脂などが挙げられる。また、ペプチド鎖の伸
長はその操作の中で結合している糖残基が分解しない方
法であれば特に限定されず、一般的にペプチド自動合成
装置で用いられている試薬および方法で行うことができ
る。例えばＦｍｏｃ−アミノ酸などのＮ−保護アミノ酸
を用い、ＤＣＣ法、対称酸無水物法、活性エステル法な
どの方法により縮合させることにより行うことができ
る。側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合で任
意の単糖残基が結合したアミノ酸残基をペプチド鎖に導
入するときは、通常のＮ−保護アミノ酸の代わりにＯＨ
基がアセチル基などの保護基で保護された単糖残基がリ
ンカーを介して結合した相当するＮ−保護アミノ酸を用
いればよい。アミノ基が一般式（VI）で表されるで表さ
れる基でアシル化された芳香族アミノ酸誘導体も通常の
Ｎ−保護アミノ酸同様の方法で導入することができる。
プチド伸長反応を行うことができ、結合している糖残基
の分解なしに固相担体からペプチドを遊離させることが
できるものであれば特に限定されず、例えば２−クロロ
トリチル樹脂などが挙げられる。また、ペプチド鎖の伸
長はその操作の中で結合している糖残基が分解しない方
法であれば特に限定されず、一般的にペプチド自動合成
装置で用いられている試薬および方法で行うことができ
る。例えばＦｍｏｃ−アミノ酸などのＮ−保護アミノ酸
を用い、ＤＣＣ法、対称酸無水物法、活性エステル法な
どの方法により縮合させることにより行うことができ
る。側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合で任
意の単糖残基が結合したアミノ酸残基をペプチド鎖に導
入するときは、通常のＮ−保護アミノ酸の代わりにＯＨ
基がアセチル基などの保護基で保護された単糖残基がリ
ンカーを介して結合した相当するＮ−保護アミノ酸を用
いればよい。アミノ基が一般式（VI）で表されるで表さ
れる基でアシル化された芳香族アミノ酸誘導体も通常の
Ｎ−保護アミノ酸同様の方法で導入することができる。
【００３８】単糖残基が結合したＮ−保護アミノ酸ある
いは側鎖官能基に単糖残基がリンカーを介して結合した
Ｎ−保護アミノ酸は、一般的な有機合成化学的手法で得
ることができる。ＯＨ基に単糖残基が結合したＮ−保護
ＳｅｒあるいはＴｈｒは、例えば単糖残基がＮ−アセチ
ルグルコサミン残基の場合、ＢＦ3−エーテル錯体をプ
ロモーターとしてＺ−Ｓｅｒ（アミノ基をベンジルオキ
シカルボニル基で保護したＳｅｒ）あるいはＺ−Ｔｈｒ
とトリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミンを縮
合させ、必要に応じてＮ−保護基をＺ基からＦｍｏｃ基
などに変換することにより得ることができる。酸アミド
基に単糖残基が結合したＮ−保護Ａｓｎは、例えば単糖
残基がＮ−アセチルグルコサミン残基の場合、トリ−Ｏ
−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニルアミンとＮ−
保護ＡｓｐベンジルエステルをＮ−エトキシカルボニル
−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン存在下縮合
させ、その後ベンジルエステルを水素化分解により除去
することにより得ることができる。次いで、単糖残基が
Ｎ−アセチルグルコサミン残基、リンカーが−ＮＨ−
（ＣＨ2）6−Ｏ−、アミノ酸残基がＡｓｐの場合、Ｎ−
保護Ａｓｐベンジルエステルと６−アミノヘキサノール
をＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジ
ヒドロキノリン（以下、ＥＥＤＱと略する）存在下縮合
させた後、２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセ
チル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）−
［２，１−ｄ］−２−オキサゾリンと先に側鎖カルボキ
シル基に６−アミノヘキサノールを縮合させたＮ−保護
ＡｓｐベンジルエステルをＤＬ−カンファー−１０−ス
ルホン酸（以下、ＣＳＡと略する）存在下縮合させ、そ
の後ベンジルエステルを水素化分解することにより除去
することにより得ることができる。また、単糖残基がＮ
−アセチルグルコサミン残基、リンカーが−ＣＯ−（Ｃ
Ｈ2）6−Ｏ−、アミノ酸残基がＬｙｓ残基の場合、２−
メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１，２−
ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）−［２，１−ｄ］
−２−オキサゾリンと６−ヒドロキシカプロン酸をＣＳ
Ａ存在下縮合させた後、ベンジルエステルを水素化分解
し、その後適当な縮合剤を用い、Ｎ−保護Ｌｙｓと縮合
させることにより得ることができる。さらに、単糖残基
がＮ−アセチルグルコサミン残基、リンカーが−Ｏ−
（ＣＨ2）12−Ｏ−、アミノ酸残基がＳｅｒあるいはＴ
ｈｒ残基の場合、Ｚ−Ｓｅｒベンジルエステル（アミノ
基をベンジルオキシカルボニル基で保護したＳｅｒ）あ
るいはＺ−Ｔｈｒベンジルエステルと１２−クロロドデ
カノールベンジルエステルをＮａＨなどの強塩基存在下
で縮合させた後、接触還元によりＺ基およびベンジル基
を除去し、アミノ基を再度Ｆｍｏｃ基で保護する。さら
に、２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−
１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）−［２，
１−ｄ］−２−オキサゾリンとＣＳＡ存在下縮合させる
ことにより得ることができる。
いは側鎖官能基に単糖残基がリンカーを介して結合した
Ｎ−保護アミノ酸は、一般的な有機合成化学的手法で得
ることができる。ＯＨ基に単糖残基が結合したＮ−保護
ＳｅｒあるいはＴｈｒは、例えば単糖残基がＮ−アセチ
ルグルコサミン残基の場合、ＢＦ3−エーテル錯体をプ
ロモーターとしてＺ−Ｓｅｒ（アミノ基をベンジルオキ
シカルボニル基で保護したＳｅｒ）あるいはＺ−Ｔｈｒ
とトリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミンを縮
合させ、必要に応じてＮ−保護基をＺ基からＦｍｏｃ基
などに変換することにより得ることができる。酸アミド
基に単糖残基が結合したＮ−保護Ａｓｎは、例えば単糖
残基がＮ−アセチルグルコサミン残基の場合、トリ−Ｏ
−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニルアミンとＮ−
保護ＡｓｐベンジルエステルをＮ−エトキシカルボニル
−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン存在下縮合
させ、その後ベンジルエステルを水素化分解により除去
することにより得ることができる。次いで、単糖残基が
Ｎ−アセチルグルコサミン残基、リンカーが−ＮＨ−
（ＣＨ2）6−Ｏ−、アミノ酸残基がＡｓｐの場合、Ｎ−
保護Ａｓｐベンジルエステルと６−アミノヘキサノール
をＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジ
ヒドロキノリン（以下、ＥＥＤＱと略する）存在下縮合
させた後、２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセ
チル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）−
［２，１−ｄ］−２−オキサゾリンと先に側鎖カルボキ
シル基に６−アミノヘキサノールを縮合させたＮ−保護
ＡｓｐベンジルエステルをＤＬ−カンファー−１０−ス
ルホン酸（以下、ＣＳＡと略する）存在下縮合させ、そ
の後ベンジルエステルを水素化分解することにより除去
することにより得ることができる。また、単糖残基がＮ
−アセチルグルコサミン残基、リンカーが−ＣＯ−（Ｃ
Ｈ2）6−Ｏ−、アミノ酸残基がＬｙｓ残基の場合、２−
メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１，２−
ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）−［２，１−ｄ］
−２−オキサゾリンと６−ヒドロキシカプロン酸をＣＳ
Ａ存在下縮合させた後、ベンジルエステルを水素化分解
し、その後適当な縮合剤を用い、Ｎ−保護Ｌｙｓと縮合
させることにより得ることができる。さらに、単糖残基
がＮ−アセチルグルコサミン残基、リンカーが−Ｏ−
（ＣＨ2）12−Ｏ−、アミノ酸残基がＳｅｒあるいはＴ
ｈｒ残基の場合、Ｚ−Ｓｅｒベンジルエステル（アミノ
基をベンジルオキシカルボニル基で保護したＳｅｒ）あ
るいはＺ−Ｔｈｒベンジルエステルと１２−クロロドデ
カノールベンジルエステルをＮａＨなどの強塩基存在下
で縮合させた後、接触還元によりＺ基およびベンジル基
を除去し、アミノ基を再度Ｆｍｏｃ基で保護する。さら
に、２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−
１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）−［２，
１−ｄ］−２−オキサゾリンとＣＳＡ存在下縮合させる
ことにより得ることができる。
【００３９】アミノ基が一般式（VI）で表される基でア
シル化された重合性芳香族アミノ酸誘導体は、一般的な
有機合成化学的な手法で合成することができる。芳香族
アミノ酸残基がフェニルアラニンであるときを例に挙げ
ると、フェニルアラニンエチルエステルにω−アクリロ
イルアミノ脂肪酸を縮合後、エチルエステルを加水分解
することにより得ることができる。フェニルアラニンエ
チルエステルとω−アクリロイルアミノ脂肪酸との縮合
は、フェニルアラニンエチルエステルとω−アクリロイ
ルアミノ脂肪酸とを縮合させることができる方法であれ
ば特に制限はなく、通常ペプチド結合形成に用いられる
縮合剤、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、カ
ルボジイミダゾール、１−エトキシカルボニル−２−エ
トキシ−１，２−ジヒドロキシキノリン、ジフェニルホ
スホリルアジドなどの存在下両者を接触させることによ
り縮合させることができる。
シル化された重合性芳香族アミノ酸誘導体は、一般的な
有機合成化学的な手法で合成することができる。芳香族
アミノ酸残基がフェニルアラニンであるときを例に挙げ
ると、フェニルアラニンエチルエステルにω−アクリロ
イルアミノ脂肪酸を縮合後、エチルエステルを加水分解
することにより得ることができる。フェニルアラニンエ
チルエステルとω−アクリロイルアミノ脂肪酸との縮合
は、フェニルアラニンエチルエステルとω−アクリロイ
ルアミノ脂肪酸とを縮合させることができる方法であれ
ば特に制限はなく、通常ペプチド結合形成に用いられる
縮合剤、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、カ
ルボジイミダゾール、１−エトキシカルボニル−２−エ
トキシ−１，２−ジヒドロキシキノリン、ジフェニルホ
スホリルアジドなどの存在下両者を接触させることによ
り縮合させることができる。
【００４０】糖ペプチドを樹脂から遊離させる方法とし
ては、結合している糖残基の分解なしに固相担体からペ
プチドを遊離させることができる方法であれば特に限定
されず、例えば２−クロロトリチル樹脂の場合、５０％
トリフロロ酢酸、１％１，２−エタンジチオール、１％
チオアニソール、５％フェノールを含むジクロロメタン
中室温で数時間反応させることにより遊離させることが
できる。通常、ペプチドを遊離させる条件でペプチド鎖
上のアミノ酸残基の側鎖官能基に結合した保護基も脱離
することができる。
ては、結合している糖残基の分解なしに固相担体からペ
プチドを遊離させることができる方法であれば特に限定
されず、例えば２−クロロトリチル樹脂の場合、５０％
トリフロロ酢酸、１％１，２−エタンジチオール、１％
チオアニソール、５％フェノールを含むジクロロメタン
中室温で数時間反応させることにより遊離させることが
できる。通常、ペプチドを遊離させる条件でペプチド鎖
上のアミノ酸残基の側鎖官能基に結合した保護基も脱離
することができる。
【００４１】糖残基の保護基は、糖ペプチドを樹脂から
遊離させるときに除去できる場合は糖ペプチドの遊離と
同時に脱保護を行い、除去できない場合は糖ペプチドを
樹脂から遊離させた後、保護基に応じた方法で除去すれ
ばよく、例えばアセチル基の場合、糖ペプチドを樹脂か
ら遊離させた後、メタノール中で水酸化ナトリウムなど
のアルカリにより加水分解することにより除去すること
ができる。
遊離させるときに除去できる場合は糖ペプチドの遊離と
同時に脱保護を行い、除去できない場合は糖ペプチドを
樹脂から遊離させた後、保護基に応じた方法で除去すれ
ばよく、例えばアセチル基の場合、糖ペプチドを樹脂か
ら遊離させた後、メタノール中で水酸化ナトリウムなど
のアルカリにより加水分解することにより除去すること
ができる。
【００４２】一般式（VII）で表される化合物は、一般
式（IV）で表されるアクリルアミド誘導体を合成すると
きに、アミノ基が一般式（VI）で表される基でアシル化
された芳香族アミノ酸誘導体の代わりに、例えば一般式
（VIII）（式中、Ｒ12は炭素数１〜１８のアルキレン基
を示し、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル基を示す）で表される基でアシル化された芳香族
アミノ酸誘導体を用いることにより得ることができる。
式（IV）で表されるアクリルアミド誘導体を合成すると
きに、アミノ基が一般式（VI）で表される基でアシル化
された芳香族アミノ酸誘導体の代わりに、例えば一般式
（VIII）（式中、Ｒ12は炭素数１〜１８のアルキレン基
を示し、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル基を示す）で表される基でアシル化された芳香族
アミノ酸誘導体を用いることにより得ることができる。
【００４３】
【化２３】
【００４４】本発明の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ドを製造する方法は、（Ａ）上記糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチ
ドの存在下に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌ
クレオチドより、糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖
ペプチド合成用高分子プライマーに転移させる工程、お
よび、（Ｂ）工程（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプ
チドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー
に、特定のプロテアーゼを作用させて、糖鎖が伸長した
糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工程を
含む。
ドを製造する方法は、（Ａ）上記糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチ
ドの存在下に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌ
クレオチドより、糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖
ペプチド合成用高分子プライマーに転移させる工程、お
よび、（Ｂ）工程（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプ
チドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー
に、特定のプロテアーゼを作用させて、糖鎖が伸長した
糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工程を
含む。
【００４５】また、本発明の糖ペプチドあるいはネオ糖
ペプチドを製造する方法は、（Ａ）上記糖ペプチドある
いはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、糖ヌク
レオチドの存在下に糖転移酵素を作用させることによ
り、糖ヌクレオチドより、糖残基を該糖ペプチドあるい
はネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに転移させる
工程、（Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返し
て、糖鎖を伸長させる工程、（Ｃ）必要に応じて、副生
したヌクレオチド類や未反応の糖ヌクレオチド類を除去
する工程、および、（Ｄ）工程（Ａ）ないし工程（Ｃ）
を複数回、繰り返した後、複数の糖残基が転移して糖鎖
が伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマーに、特定のプロテアーゼを作用させて、
糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊
離させる工程を含む。
ペプチドを製造する方法は、（Ａ）上記糖ペプチドある
いはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、糖ヌク
レオチドの存在下に糖転移酵素を作用させることによ
り、糖ヌクレオチドより、糖残基を該糖ペプチドあるい
はネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに転移させる
工程、（Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返し
て、糖鎖を伸長させる工程、（Ｃ）必要に応じて、副生
したヌクレオチド類や未反応の糖ヌクレオチド類を除去
する工程、および、（Ｄ）工程（Ａ）ないし工程（Ｃ）
を複数回、繰り返した後、複数の糖残基が転移して糖鎖
が伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマーに、特定のプロテアーゼを作用させて、
糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊
離させる工程を含む。
【００４６】糖ヌクレオチドより高分子プライマーへの
糖の転移は、通常高分子プライマーと糖ヌクレオチドと
を含む中性の緩衝液中で、１０〜６０℃、好ましくは２
０〜４０℃で、１〜１２０時間、好ましくは２〜７２時
間、糖転移酵素と接触させることにより行われる。
糖の転移は、通常高分子プライマーと糖ヌクレオチドと
を含む中性の緩衝液中で、１０〜６０℃、好ましくは２
０〜４０℃で、１〜１２０時間、好ましくは２〜７２時
間、糖転移酵素と接触させることにより行われる。
【００４７】本発明で用いる糖転移酵素は、糖ヌクレオ
チド類を糖供与体として利用できるものであればよく特
に限定されない。このような酵素としてLeloir経路の糖
転移酵素類が挙げらる。例えば、ガラクトース転移酵
素、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、Ｎ−アセチル
ガラクトサミン転移酵素、フコース転移酵素、シアル酸
転移酵素、マンノース転移酵素、キシロース転移酵素、
グルクロン酸転移酵素などが挙げられる。
チド類を糖供与体として利用できるものであればよく特
に限定されない。このような酵素としてLeloir経路の糖
転移酵素類が挙げらる。例えば、ガラクトース転移酵
素、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、Ｎ−アセチル
ガラクトサミン転移酵素、フコース転移酵素、シアル酸
転移酵素、マンノース転移酵素、キシロース転移酵素、
グルクロン酸転移酵素などが挙げられる。
【００４８】本発明で用いる糖ヌクレオチド類は、上記
酵素が利用できるものであれば特に限定されない。例え
ば、ウリジン−５’−ジリン酸ガラクトース、ウリジン
−５’−ジリン酸−Ｎ−アセチルグルコサミン、ウリジ
ン−５’−ジリン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン、ウ
リジン−５’−ジリン酸グルクロン酸、ウリジン−５’
−ジリン酸キシロース、グアノシン−５’−ジリン酸フ
コース、グアノシン−５’−ジリン酸マンノース、シチ
ジン−５’−モノリン酸−Ｎ−アセチルノイラミン酸お
よびこれらのナトリウム塩などが挙げられる。
酵素が利用できるものであれば特に限定されない。例え
ば、ウリジン−５’−ジリン酸ガラクトース、ウリジン
−５’−ジリン酸−Ｎ−アセチルグルコサミン、ウリジ
ン−５’−ジリン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン、ウ
リジン−５’−ジリン酸グルクロン酸、ウリジン−５’
−ジリン酸キシロース、グアノシン−５’−ジリン酸フ
コース、グアノシン−５’−ジリン酸マンノース、シチ
ジン−５’−モノリン酸−Ｎ−アセチルノイラミン酸お
よびこれらのナトリウム塩などが挙げられる。
【００４９】また、反応液中には必要に応じて金属塩を
添加してもよい。添加できる金属イオンとしては、例え
ば、マグネシウム、マンガン、コバルト、ニッケル、
銅、亜鉛などがあり、通常塩化物等の形で添加すること
ができる。
添加してもよい。添加できる金属イオンとしては、例え
ば、マグネシウム、マンガン、コバルト、ニッケル、
銅、亜鉛などがあり、通常塩化物等の形で添加すること
ができる。
【００５０】必要に応じて副生したヌクレオチド類や未
反応の糖ヌクレオチド類などを除去する方法は、高分子
プライマーとヌクレオチド類および糖ヌクレオチド類な
どとを分離できる方法であれば特に限定されない。例え
ば、水溶性高分子プライマーの場合はゲルろ過クロマト
グラフィーなどにより、また、水不溶性高分子プライマ
ーの場合は高分子プライマーを水あるいは適当な緩衝液
で洗浄することにより除去することができる。
反応の糖ヌクレオチド類などを除去する方法は、高分子
プライマーとヌクレオチド類および糖ヌクレオチド類な
どとを分離できる方法であれば特に限定されない。例え
ば、水溶性高分子プライマーの場合はゲルろ過クロマト
グラフィーなどにより、また、水不溶性高分子プライマ
ーの場合は高分子プライマーを水あるいは適当な緩衝液
で洗浄することにより除去することができる。
【００５１】糖鎖の伸長したプライマーからの糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチドの遊離は、用いるプロテアー
ゼに応じて適した条件で行えばよく、例えばα−キモト
リプシンを用いる場合、中性の緩衝液中で、１０〜６０
℃、好ましくは２０〜４０℃で、１〜７２時間、好まし
くは２〜２４時間、接触させることにより行われる。得
られた糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドは、各種カラ
ムクラマトグラフィーなどの一般的な精製方法により分
離精製することができる。
ドあるいはネオ糖ペプチドの遊離は、用いるプロテアー
ゼに応じて適した条件で行えばよく、例えばα−キモト
リプシンを用いる場合、中性の緩衝液中で、１０〜６０
℃、好ましくは２０〜４０℃で、１〜７２時間、好まし
くは２〜２４時間、接触させることにより行われる。得
られた糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドは、各種カラ
ムクラマトグラフィーなどの一般的な精製方法により分
離精製することができる。
【００５２】
【実施例】以下に、実施例により本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるもので
はない。
説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるもので
はない。
【００５３】参考例１ ６−アクリロイルアミノカプロ
ン酸の合成 ６−アミノカプロン酸３０．０ｇを１．２７Ｍ水酸化ナ
トリウム水溶液１８０ｍｌに溶解し、塩化アクリロイル
２３．２ｍｌを１０ｍｌのテトラヒドロフランに溶かし
たものを氷冷下で滴下した。このとき、ｐＨ８〜９にな
るように４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いて調整し
た。滴下後、徐々に室温に戻しながら２時間撹拌した。
次いで、反応液に１Ｎ塩酸をｐＨ３になるまで加えた
後、酢酸エチルで生成物を抽出した。抽出液を水で洗浄
し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシ
ウムをろ別し、ろ液を減圧濃縮した。残渣を少量の酢酸
エチルに溶かし、ヘキサンで再結晶し、目的物１３．０
ｇを得た。
ン酸の合成 ６−アミノカプロン酸３０．０ｇを１．２７Ｍ水酸化ナ
トリウム水溶液１８０ｍｌに溶解し、塩化アクリロイル
２３．２ｍｌを１０ｍｌのテトラヒドロフランに溶かし
たものを氷冷下で滴下した。このとき、ｐＨ８〜９にな
るように４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いて調整し
た。滴下後、徐々に室温に戻しながら２時間撹拌した。
次いで、反応液に１Ｎ塩酸をｐＨ３になるまで加えた
後、酢酸エチルで生成物を抽出した。抽出液を水で洗浄
し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシ
ウムをろ別し、ろ液を減圧濃縮した。残渣を少量の酢酸
エチルに溶かし、ヘキサンで再結晶し、目的物１３．０
ｇを得た。
【００５４】参考例２ Ｎ−（６−アクリロイルアミノ
カプロイル）フェニルアラニンエチルエステルの合成 フェニルアラニンエチルエステル塩酸塩１．１５ｇと参
考例１で得た６−アクリロイルアミノカプロン酸１．１
１ｇをジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと略する）
１５ｍｌに溶解し、氷冷下撹拌しながらジフェニルホス
ホリルアジド１．６５ｇを溶かしたＤＭＦ１５ｍｌを加
え、さらにトリエチルアミン１．１１ｇを溶かしたＤＭ
Ｆ１５ｍｌを滴下した。氷冷下４時間反応させた後、室
温で２４時間反応させた。反応後、ベンゼン：酢酸エチ
ル＝１：１の混合溶媒４５０ｍｌを加え、５％塩酸、
水、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、
飽和食塩水の順に有機層を洗浄した。無水硫酸ナトリウ
ムで有機層を乾燥させた後、減圧濃縮し、残渣をベンゼ
ンで再結晶し、目的物１．３５ｇを得た。
カプロイル）フェニルアラニンエチルエステルの合成 フェニルアラニンエチルエステル塩酸塩１．１５ｇと参
考例１で得た６−アクリロイルアミノカプロン酸１．１
１ｇをジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと略する）
１５ｍｌに溶解し、氷冷下撹拌しながらジフェニルホス
ホリルアジド１．６５ｇを溶かしたＤＭＦ１５ｍｌを加
え、さらにトリエチルアミン１．１１ｇを溶かしたＤＭ
Ｆ１５ｍｌを滴下した。氷冷下４時間反応させた後、室
温で２４時間反応させた。反応後、ベンゼン：酢酸エチ
ル＝１：１の混合溶媒４５０ｍｌを加え、５％塩酸、
水、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、
飽和食塩水の順に有機層を洗浄した。無水硫酸ナトリウ
ムで有機層を乾燥させた後、減圧濃縮し、残渣をベンゼ
ンで再結晶し、目的物１．３５ｇを得た。
【００５５】参考例３ Ｎ−（６−アクリロイルアミノ
カプロイル）トリプトファンエチルエステルの合成 フェニルアラニンエチルエステル塩酸塩１．１５ｇの代
わりにトリプトファンエチルエステル塩酸塩１．３４ｇ
を用いて、参考例２と同様に行い、目的物１．４４ｇを
得た。
カプロイル）トリプトファンエチルエステルの合成 フェニルアラニンエチルエステル塩酸塩１．１５ｇの代
わりにトリプトファンエチルエステル塩酸塩１．３４ｇ
を用いて、参考例２と同様に行い、目的物１．４４ｇを
得た。
【００５６】実施例１ Ｎ−（６−アクリロイルアミノ
カプロイル）フェニルアラニンの合成 １Ｎ水酸化ナトリウムを含むメタノール５０ｍｌ中に参
考例２で得たＮ−（６−アクリロイルアミノカプロイ
ル）フェニルアラニンエチルエステル０．７２ｇを加
え、室温で４時間撹拌した。反応後、Ｈ+型陽イオン交
換樹脂Dowex50W（ダウケミカル社製）を加え中和した
後、ろ過によりイオン交換樹脂を除き、ろ液を減圧乾固
し、目的物０．６５ｇを得た。
カプロイル）フェニルアラニンの合成 １Ｎ水酸化ナトリウムを含むメタノール５０ｍｌ中に参
考例２で得たＮ−（６−アクリロイルアミノカプロイ
ル）フェニルアラニンエチルエステル０．７２ｇを加
え、室温で４時間撹拌した。反応後、Ｈ+型陽イオン交
換樹脂Dowex50W（ダウケミカル社製）を加え中和した
後、ろ過によりイオン交換樹脂を除き、ろ液を減圧乾固
し、目的物０．６５ｇを得た。
【００５７】実施例２ Ｎ−（６−アクリロイルアミノ
カプロイル）トリプトファンの合成 参考例２で得たＮ−（６−アクリロイルアミノカプロイ
ル）フェニルアラニンエチルエステル０．７２ｇの代わ
りに、参考例３で得たＮ−（６−アクリロイルアミノカ
プロイル）トリプトファンエチルエステル０．８ｇを用
いて、実施例１と同様に行い、目的物０．７３ｇを得
た。
カプロイル）トリプトファンの合成 参考例２で得たＮ−（６−アクリロイルアミノカプロイ
ル）フェニルアラニンエチルエステル０．７２ｇの代わ
りに、参考例３で得たＮ−（６−アクリロイルアミノカ
プロイル）トリプトファンエチルエステル０．８ｇを用
いて、実施例１と同様に行い、目的物０．７３ｇを得
た。
【００５８】参考例４ ２−メチル−（３，４，６−ト
リ−Ｏ−アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グル
コピラノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリンの合成 ２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセ
チル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシド６．０ｇを
１，２−ジクロロエタン４０ｍｌに溶かし、ここにトリ
メチルシリルトリフロロメタンスルホン酸３．２ｍｌを
加え、５０℃で７時間撹拌しながら反応させた。反応
後、室温まで冷却した後、トリエチルアミン１０．８ｍ
ｌを加えた。反応液を減圧濃縮し、これをシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（溶出液：トルエン：酢酸エチ
ル：トリエチルアミン＝１００：２００：１）を用いて
目的物を分離し目的物を５．０ｇ得た。
リ−Ｏ−アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グル
コピラノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリンの合成 ２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセ
チル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシド６．０ｇを
１，２−ジクロロエタン４０ｍｌに溶かし、ここにトリ
メチルシリルトリフロロメタンスルホン酸３．２ｍｌを
加え、５０℃で７時間撹拌しながら反応させた。反応
後、室温まで冷却した後、トリエチルアミン１０．８ｍ
ｌを加えた。反応液を減圧濃縮し、これをシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（溶出液：トルエン：酢酸エチ
ル：トリエチルアミン＝１００：２００：１）を用いて
目的物を分離し目的物を５．０ｇ得た。
【００５９】参考例５ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
グルタミン酸α−ベンジルエステルγ−６−ヒドロキシ
ヘキシルアミドの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグルタミン酸ベンジルエ
ステル３．７ｇと６−アミノヘキサノール１．３ｇをベ
ンゼン：エタノール＝１：１の混合溶媒２０ｍｌに溶解
し、ＥＥＤＱ２．５ｇを加えて、室温で２４時間撹拌し
た。反応後、反応液を減圧乾固し、残渣をベンゼンで再
結晶し、目的物４．０ｇを得た。Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニルグルタミン酸α−ベンジルエステルγ−６−ヒ
ドロキシヘキシルアミドは下記構造式（式中、Ａｃはア
セチル基、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を示す）を
有する。
グルタミン酸α−ベンジルエステルγ−６−ヒドロキシ
ヘキシルアミドの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグルタミン酸ベンジルエ
ステル３．７ｇと６−アミノヘキサノール１．３ｇをベ
ンゼン：エタノール＝１：１の混合溶媒２０ｍｌに溶解
し、ＥＥＤＱ２．５ｇを加えて、室温で２４時間撹拌し
た。反応後、反応液を減圧乾固し、残渣をベンゼンで再
結晶し、目的物４．０ｇを得た。Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニルグルタミン酸α−ベンジルエステルγ−６−ヒ
ドロキシヘキシルアミドは下記構造式（式中、Ａｃはア
セチル基、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を示す）を
有する。
【００６０】
【化２４】
【００６１】参考例６ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
グルタミン酸α−ベンジルエステルγ−６−Ｏ−
（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル）ヘキシルアミドの合成 参考例４で得た２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラ
ノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリン１．３ｇと参
考例５で得たＮ−ベンジルオキシカルボニルグルタミン
酸α−ベンジルエステルγ−６−ヒドロキシヘキシルア
ミド３．８ｇをジクロロエタン２５ｍｌに溶解させ、７
０℃に保ちながらＣＳＡをｐＨ２〜３になるまで加え
た。３０分間反応させた後、室温まで冷却し、反応液を
クロロホルムで希釈して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
で２回洗浄した。有機溶媒層を無水硫酸マグネシウムで
一晩乾燥させた。セライトろ過により硫酸マグネシウム
を除去し、ろ液を減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（移動相：クロロホルム）で目的物２．
０ｇを単離した。Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグルタ
ミン酸α−ベンジルエステルγ−６−Ｏ−（３’，
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル）ヘキシルアミドは下記構造式（式中、Ａｃは
アセチル基、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を示す）
を有する。
グルタミン酸α−ベンジルエステルγ−６−Ｏ−
（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル）ヘキシルアミドの合成 参考例４で得た２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラ
ノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリン１．３ｇと参
考例５で得たＮ−ベンジルオキシカルボニルグルタミン
酸α−ベンジルエステルγ−６−ヒドロキシヘキシルア
ミド３．８ｇをジクロロエタン２５ｍｌに溶解させ、７
０℃に保ちながらＣＳＡをｐＨ２〜３になるまで加え
た。３０分間反応させた後、室温まで冷却し、反応液を
クロロホルムで希釈して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
で２回洗浄した。有機溶媒層を無水硫酸マグネシウムで
一晩乾燥させた。セライトろ過により硫酸マグネシウム
を除去し、ろ液を減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（移動相：クロロホルム）で目的物２．
０ｇを単離した。Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグルタ
ミン酸α−ベンジルエステルγ−６−Ｏ−（３’，
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル）ヘキシルアミドは下記構造式（式中、Ａｃは
アセチル基、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を示す）
を有する。
【００６２】
【化２５】
【００６３】参考例７ Ｎ−（９−フルオレニルメチル
オキシカルボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル）ヘキシルアミドの合成 参考例６で得たＮ−ベンジルオキシカルボニルグルタミ
ン酸α−ベンジルエステルγ−６−Ｏ−（３’，４’，
６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ル）ヘキシルアミド１．６ｇをメタノール５０ｍｌに溶
解させ、１０％パラジウム−炭素１００ｍｇを加え、水
素気流下５０℃で６時間撹拌した。反応後触媒をろ別
し、反応液を減圧濃縮し、残渣をベンゼン：エタノール
＝１：１の混合溶媒１００ｍｌに溶解し、ここにトリエ
チルアミン０．２５ｇを加え、ここに９−フルオレニル
メチル−Ｎ−スクシイミジルカーボネート０．６８ｇを
溶解させたアセトニトリル５ｍｌを一度に加えた。６時
間撹拌後、反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮し、エタノ
ールで再結晶し、目的物１．３ｇを得た。Ｎ−（９−フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル）グルタミン酸γ−
６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ
−アセチルグルコサミニル）ヘキシルアミドは下記構造
式（式中、Ａｃはアセチル基、Ｆｍｏｃは９−フルオレ
ニルメチルオキシカルボニル基を示す）を有する。
オキシカルボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル）ヘキシルアミドの合成 参考例６で得たＮ−ベンジルオキシカルボニルグルタミ
ン酸α−ベンジルエステルγ−６−Ｏ−（３’，４’，
６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ル）ヘキシルアミド１．６ｇをメタノール５０ｍｌに溶
解させ、１０％パラジウム−炭素１００ｍｇを加え、水
素気流下５０℃で６時間撹拌した。反応後触媒をろ別
し、反応液を減圧濃縮し、残渣をベンゼン：エタノール
＝１：１の混合溶媒１００ｍｌに溶解し、ここにトリエ
チルアミン０．２５ｇを加え、ここに９−フルオレニル
メチル−Ｎ−スクシイミジルカーボネート０．６８ｇを
溶解させたアセトニトリル５ｍｌを一度に加えた。６時
間撹拌後、反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮し、エタノ
ールで再結晶し、目的物１．３ｇを得た。Ｎ−（９−フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル）グルタミン酸γ−
６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ
−アセチルグルコサミニル）ヘキシルアミドは下記構造
式（式中、Ａｃはアセチル基、Ｆｍｏｃは９−フルオレ
ニルメチルオキシカルボニル基を示す）を有する。
【００６４】
【化２６】
【００６５】参考例８ ６−Ｏ−（３’，４’，６’−
トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カ
プロン酸ベンジルエステルの合成 参考例４で得た２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラ
ノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリン１．３ｇと６
−ヒドロキシカプロン酸ベンジルエステル１．７８ｇを
ジクロロエタン２５ｍｌに溶解させ、７０℃に保ちなが
らＣＳＡをｐＨ２〜３になるまで加えた。３０分間反応
させた後、室温まで冷却し、反応液をクロロホルムで希
釈して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄した。
有機溶媒層を無水硫酸マグネシウムで一晩乾燥させた。
セライトろ過により硫酸マグネシウムを除去し、ろ液を
減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（移動相：クロロホルム）で目的物１．３ｇを単離し
た。
トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カ
プロン酸ベンジルエステルの合成 参考例４で得た２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラ
ノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリン１．３ｇと６
−ヒドロキシカプロン酸ベンジルエステル１．７８ｇを
ジクロロエタン２５ｍｌに溶解させ、７０℃に保ちなが
らＣＳＡをｐＨ２〜３になるまで加えた。３０分間反応
させた後、室温まで冷却し、反応液をクロロホルムで希
釈して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄した。
有機溶媒層を無水硫酸マグネシウムで一晩乾燥させた。
セライトろ過により硫酸マグネシウムを除去し、ろ液を
減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（移動相：クロロホルム）で目的物１．３ｇを単離し
た。
【００６６】参考例９ Ｎ−α−（９−フルオレニルメ
チルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−（６−Ｏ−（３’，
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル）カプロイル）リジンの合成 参考例８で得た６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ
−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カプロン酸
ベンジルエステル０．５５ｇをメタノール５０ｍｌに溶
解させ、１０％パラジウム−炭素１００ｍｇを加え、水
素気流下５０℃で６時間撹拌した。反応後触媒をろ別
し、反応液を減圧濃縮し、残渣をクロロホルム２０ｍｌ
に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド０．１２ｇを
加え、氷冷下ジシクロヘキシルカルボジイミド０．２１
ｇを加え、一晩撹拌した。撹拌後、反応液をろ過し、ろ
液を減圧濃縮した。残渣をジメトキシメタン１０ｍｌに
溶解し、ここにα−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキ
シカルボニル）リジン０．３７ｇを溶解させたジメトキ
シメタン１０ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。水１
００ｍｌを加え、生じた沈殿を水、１０％炭酸水素ナト
リウム水溶液、１Ｎ塩酸、水の順に洗浄した。乾燥後、
エタノールより再結晶し、目的物０．５２ｇを得た。Ｎ
−α−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−
Ｎ−ε−（６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−ア
セチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カプロイル）リ
ジンは下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基、Ｆｍｏｃ
は９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基を示す）
を有する。
チルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−（６−Ｏ−（３’，
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル）カプロイル）リジンの合成 参考例８で得た６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ
−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カプロン酸
ベンジルエステル０．５５ｇをメタノール５０ｍｌに溶
解させ、１０％パラジウム−炭素１００ｍｇを加え、水
素気流下５０℃で６時間撹拌した。反応後触媒をろ別
し、反応液を減圧濃縮し、残渣をクロロホルム２０ｍｌ
に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド０．１２ｇを
加え、氷冷下ジシクロヘキシルカルボジイミド０．２１
ｇを加え、一晩撹拌した。撹拌後、反応液をろ過し、ろ
液を減圧濃縮した。残渣をジメトキシメタン１０ｍｌに
溶解し、ここにα−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキ
シカルボニル）リジン０．３７ｇを溶解させたジメトキ
シメタン１０ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。水１
００ｍｌを加え、生じた沈殿を水、１０％炭酸水素ナト
リウム水溶液、１Ｎ塩酸、水の順に洗浄した。乾燥後、
エタノールより再結晶し、目的物０．５２ｇを得た。Ｎ
−α−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−
Ｎ−ε−（６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−ア
セチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カプロイル）リ
ジンは下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基、Ｆｍｏｃ
は９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基を示す）
を有する。
【００６７】
【化２７】
【００６８】参考例１０ ４−ペンテニル−３’，
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミン 参考例４で得た２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラ
ノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリン３．３ｇと４
−ペンテン−１−オール１．７ｇを１，２−ジクロロエ
タン４０ｍｌに溶解し、７０℃に保ちながらＣＳＡをｐ
Ｈ２〜３になるまで加えた。３０分間反応させた後、室
温まで冷却し、反応液をクロロホルムで希釈し、飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄した。有機溶媒層を
無水硫酸マグネシウムで一晩乾燥させた。セライトろ過
により硫酸マグネシウムを除去し、ろ液を減圧濃縮し
た。シリカゲルクロマトグラフィー（移動相：クロロホ
ルム）で目的物２．５ｇを単離した。
４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコ
サミン 参考例４で得た２−メチル−（３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラ
ノ）−［２，１−ｄ］−２−オキサゾリン３．３ｇと４
−ペンテン−１−オール１．７ｇを１，２−ジクロロエ
タン４０ｍｌに溶解し、７０℃に保ちながらＣＳＡをｐ
Ｈ２〜３になるまで加えた。３０分間反応させた後、室
温まで冷却し、反応液をクロロホルムで希釈し、飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄した。有機溶媒層を
無水硫酸マグネシウムで一晩乾燥させた。セライトろ過
により硫酸マグネシウムを除去し、ろ液を減圧濃縮し
た。シリカゲルクロマトグラフィー（移動相：クロロホ
ルム）で目的物２．５ｇを単離した。
【００６９】参考例１１ ４−Ｏ−（３’，４’，６’
−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）
酪酸 過マンガン酸カリウム１．９５ｇを１７％酢酸水溶液３
５ｍｌに溶解し、参考例１０で得た４−ペンテニル−
３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチル
グルコサミン１．６ｇにさらに氷酢酸３５ｍｌに溶解さ
せたものを氷冷下撹拌しながら滴下し、３時間反応させ
た。反応後、反応液に酢酸エチル３００ｍｌを加え、さ
らに硫酸ナトリウム３．１６ｇと１Ｍ塩酸３５ｍｌを加
えて氷冷下撹拌した。有機層を分離し、飽和食塩水で洗
浄した後、硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥
後、硫酸マグネシウムをろ過により除去し、ろ液を減圧
濃縮し目的物１．５ｇを得た。
−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）
酪酸 過マンガン酸カリウム１．９５ｇを１７％酢酸水溶液３
５ｍｌに溶解し、参考例１０で得た４−ペンテニル−
３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチル
グルコサミン１．６ｇにさらに氷酢酸３５ｍｌに溶解さ
せたものを氷冷下撹拌しながら滴下し、３時間反応させ
た。反応後、反応液に酢酸エチル３００ｍｌを加え、さ
らに硫酸ナトリウム３．１６ｇと１Ｍ塩酸３５ｍｌを加
えて氷冷下撹拌した。有機層を分離し、飽和食塩水で洗
浄した後、硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥
後、硫酸マグネシウムをろ過により除去し、ろ液を減圧
濃縮し目的物１．５ｇを得た。
【００７０】参考例１２ Ｎ−α−（９−フルオレニル
メチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−（４−Ｏ−
（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル）ブタノイル）リジンの合成 参考例１１で得た４−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−
Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）酪酸０．
４３ｇをクロロホルム２０ｍｌに溶解し、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミド０．１２ｇを加え、氷冷下ジシクロヘ
キシルカルボジイミド０．２１ｇを加えて一晩撹拌し
た。撹拌後、反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残
渣をジメトキシメタン１０ｍｌに溶解し、ここにＮ−α
−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）リジン
０．３７ｇを溶解させたジメトキシメタン１０ｍｌを加
え、室温で１時間撹拌した。水１００ｍｌを加え、生じ
た沈殿を水、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、１Ｎ塩
酸、水の順に洗浄した。乾燥後、エタノールより再結晶
し目的物０．５６ｇを得た。Ｎ−α−（９−フルオレニ
ルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−（４−Ｏ−
（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル）ブタノイル）リジンは下記構造式
（式中、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル基、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
メチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−（４−Ｏ−
（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル）ブタノイル）リジンの合成 参考例１１で得た４−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−
Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）酪酸０．
４３ｇをクロロホルム２０ｍｌに溶解し、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミド０．１２ｇを加え、氷冷下ジシクロヘ
キシルカルボジイミド０．２１ｇを加えて一晩撹拌し
た。撹拌後、反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残
渣をジメトキシメタン１０ｍｌに溶解し、ここにＮ−α
−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）リジン
０．３７ｇを溶解させたジメトキシメタン１０ｍｌを加
え、室温で１時間撹拌した。水１００ｍｌを加え、生じ
た沈殿を水、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、１Ｎ塩
酸、水の順に洗浄した。乾燥後、エタノールより再結晶
し目的物０．５６ｇを得た。Ｎ−α−（９−フルオレニ
ルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−（４−Ｏ−
（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル）ブタノイル）リジンは下記構造式
（式中、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル基、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
【００７１】
【化２８】
【００７２】実施例３ アクリルアミド誘導体Ａの合成 Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）をプレロードした２−クロ
ロトリチル樹脂０．４４ｇ（樹脂１ｇあたりＳｅｒ残基
が０．２３ｍｍｏｌ結合）をプライマーとして、ＡＢＩ
社製Ａ４３３型ペプチドシンセサイザーを用い、以下に
挙げるＮ−保護アミノ酸を各々１．０ｍｍｏｌ、Ｆｍｏ
ｃ／ＤＣＣ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的のアクリル
アミド誘導体を固相担体上に合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（βＡｃ3ＧｌｃＮＡｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、実施例１で得たＮ−（６
−アクリロイルアミノカプロイル）フェニルアラニン。
５０％トリフロロ酢酸、１％１，２−エタンジチオー
ル、１％チオアニソール、５％フェノールを含むジクロ
ロメタン中室温で１時間反応させることによりペプチド
残基上の保護基を脱離させるとともに固相担体上からア
クリルアミド誘導体を遊離させた。樹脂を濾別し、減圧
濃縮後酢酸エチル−クロロホルム混合溶媒（１：１）で
希釈し、水で有機層を洗浄した。ＨＰＬＣにより（カラ
ム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ ２０ｍｍ×２５０ｍ
ｍ、移動相：Ａ：Ｂ＝１００：０（０分）〜５０：５０
（６０分）、Ａ：０．１％トリフロロ酢酸水溶液、Ｂ：
０．１％トリフロロ酢酸アセトニトリル溶液、流速；
９．０ｍｌ／分）アクリルアミド誘導体を精製した。ア
クリルアミド画分を凍結乾燥し、得られた固体にナトリ
ウムメトキシド２．２ｍｇを含むメタノール３０ｍｌを
加え、室温下２時間撹拌した。Ｈ+型陽イオン交換樹脂D
owex50W（ダウケミカル社製）を加え中和した後、ろ過
によりイオン交換樹脂を除き、ろ液を減圧乾固し、目的
物であるアクリルアミド誘導体Ａを９６ｍｇ得た。得ら
れたアクリルアミド誘導体Ａは下記構造式（式中、Ａｃ
はアセチル基を示す）を有する。
ロトリチル樹脂０．４４ｇ（樹脂１ｇあたりＳｅｒ残基
が０．２３ｍｍｏｌ結合）をプライマーとして、ＡＢＩ
社製Ａ４３３型ペプチドシンセサイザーを用い、以下に
挙げるＮ−保護アミノ酸を各々１．０ｍｍｏｌ、Ｆｍｏ
ｃ／ＤＣＣ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的のアクリル
アミド誘導体を固相担体上に合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（βＡｃ3ＧｌｃＮＡｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、実施例１で得たＮ−（６
−アクリロイルアミノカプロイル）フェニルアラニン。
５０％トリフロロ酢酸、１％１，２−エタンジチオー
ル、１％チオアニソール、５％フェノールを含むジクロ
ロメタン中室温で１時間反応させることによりペプチド
残基上の保護基を脱離させるとともに固相担体上からア
クリルアミド誘導体を遊離させた。樹脂を濾別し、減圧
濃縮後酢酸エチル−クロロホルム混合溶媒（１：１）で
希釈し、水で有機層を洗浄した。ＨＰＬＣにより（カラ
ム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ ２０ｍｍ×２５０ｍ
ｍ、移動相：Ａ：Ｂ＝１００：０（０分）〜５０：５０
（６０分）、Ａ：０．１％トリフロロ酢酸水溶液、Ｂ：
０．１％トリフロロ酢酸アセトニトリル溶液、流速；
９．０ｍｌ／分）アクリルアミド誘導体を精製した。ア
クリルアミド画分を凍結乾燥し、得られた固体にナトリ
ウムメトキシド２．２ｍｇを含むメタノール３０ｍｌを
加え、室温下２時間撹拌した。Ｈ+型陽イオン交換樹脂D
owex50W（ダウケミカル社製）を加え中和した後、ろ過
によりイオン交換樹脂を除き、ろ液を減圧乾固し、目的
物であるアクリルアミド誘導体Ａを９６ｍｇ得た。得ら
れたアクリルアミド誘導体Ａは下記構造式（式中、Ａｃ
はアセチル基を示す）を有する。
【００７３】
【化２９】
【００７４】実施例４ アクリルアミド誘導体Ｂの合成 実施例３で用いたプライマーに、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、参
考例７で得たＮ−（９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，４’，６’
−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）
ヘキシルアミド、実施例１で得たＮ−（６−アクリロイ
ルアミノカプロイル）フェニルアラニンを実施例３と同
様の方法で順次縮合し、目的のアクリルアミド誘導体Ｂ
を９７ｍｇ得た。得られたアクリルアミド誘導体Ｂは下
記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、参
考例７で得たＮ−（９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，４’，６’
−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）
ヘキシルアミド、実施例１で得たＮ−（６−アクリロイ
ルアミノカプロイル）フェニルアラニンを実施例３と同
様の方法で順次縮合し、目的のアクリルアミド誘導体Ｂ
を９７ｍｇ得た。得られたアクリルアミド誘導体Ｂは下
記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
【００７５】
【化３０】
【００７６】実施例５ アクリルアミド誘導体Ｃの合成 参考例７で得たＮ−（９−フルオレニルメチルオキシカ
ルボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，４’，
６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ル）ヘキシルアミドの代わりに、参考例９で得たＮ−α
−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−
ε−（６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチ
ル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カプロイル）リジン
を用いて、実施例４と同様の反応を行い、目的物である
アクリルアミド誘導体Ｃを９７ｍｇ得た。得られたアク
リルアミド誘導体Ｃは下記構造式（式中、Ａｃはアセチ
ル基を示す）を有する。
ルボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，４’，
６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ル）ヘキシルアミドの代わりに、参考例９で得たＮ−α
−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−
ε−（６−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセチ
ル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）カプロイル）リジン
を用いて、実施例４と同様の反応を行い、目的物である
アクリルアミド誘導体Ｃを９７ｍｇ得た。得られたアク
リルアミド誘導体Ｃは下記構造式（式中、Ａｃはアセチ
ル基を示す）を有する。
【００７７】
【化３１】
【００７８】実施例６ アクリルアミド誘導体Ｄの合成 参考例７で得たＮ−（９−フルオレニルメチルオキシカ
ルボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，４’，
６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ル）ヘキシルアミドの代わりに、参考例１２で得たＮ−
α−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｎ
−ε−（４−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセ
チル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）ブタノイル）リジ
ンを用いて、実施例４と同様の反応を行い、目的物であ
るアクリルアミド誘導体Ｃを９４ｍｇ得た。得られたア
クリルアミド誘導体Ｄは下記構造式（式中、Ａｃはアセ
チル基を示す）を有する。
ルボニル）グルタミン酸γ−６−Ｏ−（３’，４’，
６’−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ル）ヘキシルアミドの代わりに、参考例１２で得たＮ−
α−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｎ
−ε−（４−Ｏ−（３’，４’，６’−トリ−Ｏ−アセ
チル−Ｎ−アセチルグルコサミニル）ブタノイル）リジ
ンを用いて、実施例４と同様の反応を行い、目的物であ
るアクリルアミド誘導体Ｃを９４ｍｇ得た。得られたア
クリルアミド誘導体Ｄは下記構造式（式中、Ａｃはアセ
チル基を示す）を有する。
【００７９】
【化３２】
【００８０】実施例７ アクリルアミド誘導体Ｅの合成 実施例１で得たＮ−（６−アクリロイルアミノカプロイ
ル）フェニルアラニンの代わりに、実施例２で得たＮ−
（６−アクリロイルアミノカプロイル）トリプトファン
を用いて、実施例４と同様の反応を行い、目的物である
アクリルアミド誘導体Ｅを９７ｍｇ得た。得られたアク
リルアミド誘導体Ｅは下記構造式（式中、Ａｃはアセチ
ル基を示す）を有する。
ル）フェニルアラニンの代わりに、実施例２で得たＮ−
（６−アクリロイルアミノカプロイル）トリプトファン
を用いて、実施例４と同様の反応を行い、目的物である
アクリルアミド誘導体Ｅを９７ｍｇ得た。得られたアク
リルアミド誘導体Ｅは下記構造式（式中、Ａｃはアセチ
ル基を示す）を有する。
【００８１】
【化３３】
【００８２】実施例８ 高分子プライマーＡの合成 実施例３で得たアクリルアミド誘導体Ａ６０ｍｇをジメ
チルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと略する）２ｍｌに
溶解させ、これにアクリルアミド３５．５ｍｇを水１ｍ
ｌに溶かしたものを加えた。続いて、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン７．５μｌ、過硫
酸アンモニウム４．５ｍｇを加え、５０℃で２４時間共
重合させた。反応溶液は減圧濃縮し、ＤＭＳＯを留去し
てからセファデックスＧ−２５（ファルマシア社製）カ
ラムクロマトグラフィー（移動相；１０ｍＭ酢酸アンモ
ニウム）で分離し、目的物の溶出画分を凍結乾燥し、目
的物である高分子プライマーＡ（分子量約４００００
０）を９０ｍｇ得た。得られたポリマー中の糖ペプチド
が結合したアクリルアミド誘導体Ａ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率
は９モル％であった。
チルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと略する）２ｍｌに
溶解させ、これにアクリルアミド３５．５ｍｇを水１ｍ
ｌに溶かしたものを加えた。続いて、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン７．５μｌ、過硫
酸アンモニウム４．５ｍｇを加え、５０℃で２４時間共
重合させた。反応溶液は減圧濃縮し、ＤＭＳＯを留去し
てからセファデックスＧ−２５（ファルマシア社製）カ
ラムクロマトグラフィー（移動相；１０ｍＭ酢酸アンモ
ニウム）で分離し、目的物の溶出画分を凍結乾燥し、目
的物である高分子プライマーＡ（分子量約４００００
０）を９０ｍｇ得た。得られたポリマー中の糖ペプチド
が結合したアクリルアミド誘導体Ａ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率
は９モル％であった。
【００８３】
【化３４】
【００８４】実施例９ 高分子プライマーＢの合成 実施例３で得たアクリルアミド誘導体Ａ６０ｍｇの代わ
りに、実施例４で得たアクリルアミド誘導体Ｂ６１ｍｇ
を用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物である
高分子プライマーＢ（分子量約４５００００）を９１ｍ
ｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結合し
たアクリルアミド誘導体Ｂ残基は下記構造式（式中、Ａ
ｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９モル％
であった。
りに、実施例４で得たアクリルアミド誘導体Ｂ６１ｍｇ
を用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物である
高分子プライマーＢ（分子量約４５００００）を９１ｍ
ｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結合し
たアクリルアミド誘導体Ｂ残基は下記構造式（式中、Ａ
ｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９モル％
であった。
【００８５】
【化３５】
【００８６】実施例１０ 高分子プライマーＣの合成 実施例３で得たアクリルアミド誘導体Ａ６０ｍｇの代わ
りに、実施例５で得たアクリルアミド誘導体Ｃ６２．５
ｍｇを用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物で
ある高分子プライマーＣ（分子量約４９００００）を９
３ｍｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結
合したアクリルアミド誘導体Ｃ残基は下記構造式（式
中、Ａｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９
モル％であった。
りに、実施例５で得たアクリルアミド誘導体Ｃ６２．５
ｍｇを用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物で
ある高分子プライマーＣ（分子量約４９００００）を９
３ｍｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結
合したアクリルアミド誘導体Ｃ残基は下記構造式（式
中、Ａｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９
モル％であった。
【００８７】
【化３６】
【００８８】実施例１１ 高分子プライマーＤの合成 実施例３で得たアクリルアミド誘導体Ａ６０ｍｇの代わ
りに、実施例６で得たアクリルアミド誘導体Ｄ６１ｍｇ
を用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物である
高分子プライマーＤ（分子量約４５００００）を９１ｍ
ｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結合し
たアクリルアミド誘導体Ｄ残基は下記構造式（式中、Ａ
ｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９モル％
であった。
りに、実施例６で得たアクリルアミド誘導体Ｄ６１ｍｇ
を用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物である
高分子プライマーＤ（分子量約４５００００）を９１ｍ
ｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結合し
たアクリルアミド誘導体Ｄ残基は下記構造式（式中、Ａ
ｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９モル％
であった。
【００８９】
【化３７】
【００９０】実施例１２ 高分子プライマーＥの合成 実施例３で得たアクリルアミド誘導体Ａ６０ｍｇの代わ
りに、実施例７で得たアクリルアミド誘導体Ｅ６２ｍｇ
を用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物である
高分子プライマーＥ（分子量約４２００００）を９１ｍ
ｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結合し
たアクリルアミド誘導体Ｅ残基は下記構造式（式中、Ａ
ｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９モル％
であった。
りに、実施例７で得たアクリルアミド誘導体Ｅ６２ｍｇ
を用いて、実施例８と同様の反応を行い、目的物である
高分子プライマーＥ（分子量約４２００００）を９１ｍ
ｇ得た。得られたポリマー中のネオ糖ペプチドが結合し
たアクリルアミド誘導体Ｅ残基は下記構造式（式中、Ａ
ｃはアセチル基を示す）を有し、その含有率は９モル％
であった。
【００９１】
【化３８】
【００９２】実施例１３ β１，４−ガラクトース転移
酵素による高分子プライマーＡへのガラクトースの転移 牛乳由来β１，４−ガラクトース転移酵素（シグマ社
製）１Ｕ、ウリジン−５’−ジリン酸ガラクトース二ナ
トリウム１５．９ｍｇ、塩化マンガン１０ｍＭおよびα
−ラクトアルブミン０．２６ｍｇ／ｍｌを含む５０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）２ｍｌに、実施例８
で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇを加え、３７℃で４
８時間反応させた。反応後、反応液からセファデックス
Ｇ−２５（ファルマシア社製）カラムクロマトグラフィ
ー（移動相；１０ｍＭ酢酸アンモニウム）により生成物
画分を分離し、凍結乾燥することにより生成物３６ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中の糖ペプチドが
結合したアクリルアミド誘導体Ａ残基は下記構造式（式
中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
酵素による高分子プライマーＡへのガラクトースの転移 牛乳由来β１，４−ガラクトース転移酵素（シグマ社
製）１Ｕ、ウリジン−５’−ジリン酸ガラクトース二ナ
トリウム１５．９ｍｇ、塩化マンガン１０ｍＭおよびα
−ラクトアルブミン０．２６ｍｇ／ｍｌを含む５０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）２ｍｌに、実施例８
で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇを加え、３７℃で４
８時間反応させた。反応後、反応液からセファデックス
Ｇ−２５（ファルマシア社製）カラムクロマトグラフィ
ー（移動相；１０ｍＭ酢酸アンモニウム）により生成物
画分を分離し、凍結乾燥することにより生成物３６ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中の糖ペプチドが
結合したアクリルアミド誘導体Ａ残基は下記構造式（式
中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
【００９３】
【化３９】
【００９４】実施例１４ α２，３−シアル酸転移酵素
による高分子プライマーＡへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 ラット由来α２，３−シアル酸転移酵素０．１Ｕ、シチ
ジン−５’−モノリン酸−Ｎ−アセチルノイラミン酸二
ナトリウム１４ｍｇ、ウシ血清アルブミン８ｍｇ、塩化
マンガン１．２ｍｇ、仔ウシ由来アルカリフォスファタ
ーゼ２０Ｕを含む５０ｍＭカコジル酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．４）２ｍｌに実施例１３で得たガラクトース
が転移したプライマーＡ３１ｍｇを加え、３７℃で７２
時間反応させた。反応後、反応液からセファデックスＧ
−２５（ファルマシア社製）カラムクロマトグラフィー
（移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム）により生成物を
分離し、凍結乾燥することにより生成物２７ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中の糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ａ
残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を
有する。
による高分子プライマーＡへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 ラット由来α２，３−シアル酸転移酵素０．１Ｕ、シチ
ジン−５’−モノリン酸−Ｎ−アセチルノイラミン酸二
ナトリウム１４ｍｇ、ウシ血清アルブミン８ｍｇ、塩化
マンガン１．２ｍｇ、仔ウシ由来アルカリフォスファタ
ーゼ２０Ｕを含む５０ｍＭカコジル酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．４）２ｍｌに実施例１３で得たガラクトース
が転移したプライマーＡ３１ｍｇを加え、３７℃で７２
時間反応させた。反応後、反応液からセファデックスＧ
−２５（ファルマシア社製）カラムクロマトグラフィー
（移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム）により生成物を
分離し、凍結乾燥することにより生成物２７ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中の糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ａ
残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を
有する。
【００９５】
【化４０】
【００９６】実施例１５ α１，３−フコース転移酵素
による高分子プライマーＡへのフコースの転移 ヒト由来α１，３−フコース転移酵素０．０８Ｕ、グア
ノシン−５’−ジリン酸フコース二ナトリウム９ｍｇ、
塩化マンガン１５ｍＭ、仔ウシ由来アルカリフォスファ
ターゼ２０Ｕを含む１００ｍＭカコジル酸緩衝液（ｐＨ
６．５）に実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸
が転移したプライマー２４ｍｇを加え、３７℃で７２時
間反応させた。反応後、反応液からセファデックスＧ−
２５（ファルマシア社製）カラムクロマトグラフィー
（移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム）により生成物を
分離し、凍結乾燥することにより生成物２０ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
フコースが転移した生成物であることを確認した。フコ
ースが転移したポリマー中の糖ペプチドが結合したアク
リルアミド誘導体Ａ残基は下記構造式（式中、Ａｃはア
セチル基を示す）を有する。
による高分子プライマーＡへのフコースの転移 ヒト由来α１，３−フコース転移酵素０．０８Ｕ、グア
ノシン−５’−ジリン酸フコース二ナトリウム９ｍｇ、
塩化マンガン１５ｍＭ、仔ウシ由来アルカリフォスファ
ターゼ２０Ｕを含む１００ｍＭカコジル酸緩衝液（ｐＨ
６．５）に実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸
が転移したプライマー２４ｍｇを加え、３７℃で７２時
間反応させた。反応後、反応液からセファデックスＧ−
２５（ファルマシア社製）カラムクロマトグラフィー
（移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム）により生成物を
分離し、凍結乾燥することにより生成物２０ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
フコースが転移した生成物であることを確認した。フコ
ースが転移したポリマー中の糖ペプチドが結合したアク
リルアミド誘導体Ａ残基は下記構造式（式中、Ａｃはア
セチル基を示す）を有する。
【００９７】
【化４１】
【００９８】実施例１６ 糖鎖の伸長した高分子プライ
マーＡからのα−キモトリプシンによる糖ペプチドの切
り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇ、α−キモトリプシン０．６ｍｇを８０ｍＭトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．８、０．１Ｍ塩化カルシウム
含有）２ｍｌに溶かし、４０℃で２４時間反応させた。
反応液をセファデックスＧ−２５（ファルマシア社製）
カラムクロマトグラフィー（移動相：１０ｍＭ酢酸アン
モニウム）により生成物画分を分離し、凍結乾燥するこ
とにより生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−
ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式（式
中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認し
た。
マーＡからのα−キモトリプシンによる糖ペプチドの切
り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇ、α−キモトリプシン０．６ｍｇを８０ｍＭトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．８、０．１Ｍ塩化カルシウム
含有）２ｍｌに溶かし、４０℃で２４時間反応させた。
反応液をセファデックスＧ−２５（ファルマシア社製）
カラムクロマトグラフィー（移動相：１０ｍＭ酢酸アン
モニウム）により生成物画分を分離し、凍結乾燥するこ
とにより生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−
ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式（式
中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認し
た。
【００９９】
【化４２】
【０１００】実施例１７ β１，４−ガラクトース転移
酵素による高分子プライマーＢへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例９で得た高分子プライマーＢ３９ｍｇを用い
て、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３７ｍｇを
得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｂ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
酵素による高分子プライマーＢへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例９で得た高分子プライマーＢ３９ｍｇを用い
て、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３７ｍｇを
得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｂ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
【０１０１】
【化４３】
【０１０２】実施例１８ α２，３−シアル酸転移酵素
による高分子プライマーＢへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例１７で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＢ３１ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２７ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｂ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
による高分子プライマーＢへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例１７で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＢ３１ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２７ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｂ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
【０１０３】
【化４４】
【０１０４】実施例１９ α１，３−フコース転移酵素
による高分子プライマーＢへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例１８で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＢ２４ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｂ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
による高分子プライマーＢへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例１８で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＢ２４ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｂ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
【０１０５】
【化４５】
【０１０６】実施例２０ 糖鎖の伸長した高分子プライ
マーＢからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例１９で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＢ２０ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
マーＢからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例１９で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＢ２０ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
【０１０７】
【化４６】
【０１０８】実施例２１ β１，４−ガラクトース転移
酵素による高分子プライマーＣへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例１０で得た高分子プライマーＣ３９ｍｇを用
いて、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３７ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｃ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
酵素による高分子プライマーＣへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例１０で得た高分子プライマーＣ３９ｍｇを用
いて、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３７ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｃ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
【０１０９】
【化４７】
【０１１０】実施例２２ α２，３−シアル酸転移酵素
による高分子プライマーＣへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例２１で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＣ３２ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２８ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｃ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
による高分子プライマーＣへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例２１で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＣ３２ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２８ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｃ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
【０１１１】
【化４８】
【０１１２】実施例２３ α１，３−フコース転移酵素
による高分子プライマーＣへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例２２で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＣ２４ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｃ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
による高分子プライマーＣへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例２２で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＣ２４ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｃ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
【０１１３】
【化４９】
【０１１４】実施例２４ 糖鎖の伸長した高分子プライ
マーＣからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例２３で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＣ２０ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
マーＣからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例２３で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＣ２０ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
【０１１５】
【化５０】
【０１１６】実施例２５ β１，４−ガラクトース転移
酵素による高分子プライマーＤへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例１１で得た高分子プライマーＤ３９ｍｇを用
いて、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３７ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｄ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
酵素による高分子プライマーＤへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例１１で得た高分子プライマーＤ３９ｍｇを用
いて、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３７ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｄ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
【０１１７】
【化５１】
【０１１８】実施例２６ α２，３−シアル酸転移酵素
による高分子プライマーＤへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例２５で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＤ３１ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２７ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｄ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
による高分子プライマーＤへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例２５で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＤ３１ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２７ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｄ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
【０１１９】
【化５２】
【０１２０】実施例２７ α１，３−フコース転移酵素
による高分子プライマーＤへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例２６で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＤ２４ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｄ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
による高分子プライマーＤへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例２６で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＤ２４ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｄ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
【０１２１】
【化５３】
【０１２２】実施例２８ 糖鎖の伸長した高分子プライ
マーＤからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例２３で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＤ２０ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
マーＤからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例２３で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＤ２０ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１２ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
【０１２３】
【化５４】
【０１２４】実施例２９ β１，４−ガラクトース転移
酵素による高分子プライマーＥへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例１２で得た高分子プライマーＥ４０ｍｇを用
いて、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３９ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｅ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
酵素による高分子プライマーＥへのガラクトースの転移 実施例８で得た高分子プライマーＡ３８ｍｇの代わり
に、実施例１２で得た高分子プライマーＥ４０ｍｇを用
いて、実施例１３と同様の反応を行い、生成物３９ｍｇ
を得た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定
し、ガラクトースが転移した生成物であることを確認し
た。ガラクトースが転移したポリマー中のネオ糖ペプチ
ドが結合したアクリルアミド誘導体Ｅ残基は下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有する。
【０１２５】
【化５５】
【０１２６】実施例３０ α２，３−シアル酸転移酵素
による高分子プライマーＥへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例２５で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＥ３２ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２８ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｅ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
による高分子プライマーＥへのＮ−アセチルノイラミン
酸の転移 実施例１３で得たガラクトースが転移した高分子プライ
マーＡ３１ｍｇの代わりに、実施例２５で得たガラクト
ースが転移した高分子プライマーＥ３２ｍｇを用いて、
実施例１４と同様の反応を行い、生成物２８ｍｇを得
た。得られた生成物のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、
Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移した生成物であること
を確認した。Ｎ−アセチルノイラミン酸が転移したポリ
マー中のネオ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導
体Ｅ残基は下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示
す）を有する。
【０１２７】
【化５６】
【０１２８】実施例３１ α１，３−フコース転移酵素
による高分子プライマーＥへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例３０で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＥ２５ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｅ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
による高分子プライマーＥへのフコースの転移 実施例１４で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した
高分子プライマーＡ２４ｍｇの代わりに、実施例３０で
得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移した高分子プライ
マーＥ２５ｍｇを用いて、実施例１５と同様の反応を行
い、生成物２０ｍｇを得た。得られた生成物のＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルを測定し、フコースが転移した生成物であ
ることを確認した。フコースが転移したポリマー中のネ
オ糖ペプチドが結合したアクリルアミド誘導体Ｅ残基は
下記構造式（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有す
る。
【０１２９】
【化５７】
【０１３０】実施例３２ 糖鎖の伸長した高分子プライ
マーＥからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例２３で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＥ２１ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１３ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
マーＥからのα−キモトリプシンによるネオ糖ペプチド
の切り出し 実施例１５で得た糖鎖の伸長した高分子プライマーＡ２
０ｍｇの代わりに、実施例２３で得た糖鎖の伸長した高
分子プライマーＥ２１ｍｇを用いて、実施例１６と同様
の反応を行い、生成物１３ｍｇを得た。得られた生成物
のＨ−ＮＭＲスペクトルを測定し、生成物が下記構造式
（式中、Ａｃはアセチル基を示す）を有することを確認
した。
【０１３１】
【化５８】
【０１３２】
【発明の効果】上述したように、本発明における高分子
プライマーを用いることにより、糖ペプチドもしくはネ
オ糖ペプチドの合成を、従来の方法と比べてきわめて効
率的に行うことが可能となった。
プライマーを用いることにより、糖ペプチドもしくはネ
オ糖ペプチドの合成を、従来の方法と比べてきわめて効
率的に行うことが可能となった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｐ 21/06 Ｃ１２Ｐ 21/06 （出願人による申告）国等の委託研究の成果に係る特許 出願（平成12年度新エネルギー・産業技術総合開発機構 「グリコクラスター制御生体分子合成技術」委託研究、 産業活力再生特別措置法第30条の適用を受けるもの) (72)発明者 西村 紳一郎 北海道札幌市中央区北９条西16丁目１−１ −302 (72)発明者 山田 久里子 北海道札幌市北区麻生町７丁目１−１− 311
Claims (23)
- 【請求項１】 高分子担体上に、一般式（Ｉ）（式中、
Ｒ1はメチレン基１〜２０個分の長さを有するリンカー
を示し、Ｒ2は特定のプロテアーゼにより開裂できる部
位を有するアミノ酸残基あるいはペプチド残基を示し、
Ｒ3は前記プロテアーゼにより開裂できる部位を含まな
い任意のペプチド残基であり、その残基中にＯＨ基ある
いは酸アミド基にグリコシド結合により任意の単糖残基
が結合したセリン残基、トレオニン残基、グルタミン残
基またはアスパラギン残基を含むペプチド残基、あるい
は側鎖官能基にリンカーを介してグリコシド結合により
任意の単糖残基が結合したアミノ酸残基を含むペプチド
残基を示す）で表される基が結合していることを特徴と
する糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プ
ライマー。 【化１】 - 【請求項２】 Ｒ3がアミノ酸残基２〜３０個よりなる
ペプチド残基である請求項１記載の糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー。 - 【請求項３】 Ｒ1が一般式（II）（式中、ＸはＯ、Ｃ
Ｈ2、Ｃ＝ＯまたはＮＨを示し、かつＸを介して高分子
担体と結合しており、ｎは１〜１８の整数を示す）で表
される基である請求項１または２に記載の糖ペプチドあ
るいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマー。 【化２】 - 【請求項４】 側鎖官能基に結合したリンカーがメチレ
ン基１〜２０個分の長さを有し、任意の単糖残基が結合
したアミノ酸残基がセリン、トレオニン、リジン、アス
パラギン酸、グルタミン酸、アスパラギンまたはグルタ
ミン残基である請求項１〜３のいずれかに記載のネオ糖
ペプチド合成用高分子プライマー。 - 【請求項５】 側鎖官能基に結合したリンカーが一般式
（III）（式中、ＹはＯ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、か
つＹを介してアミノ酸残基の側鎖官能基と結合してお
り、ｎは１〜１８の整数を示す）で表される基である請
求項１〜４のいずれかに記載のネオ糖ペプチド合成用高
分子プライマー。 【化３】 - 【請求項６】 高分子担体がアクリルアミド類、メタク
リルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレ
ン類、脂肪酸ビニルエステル類などのビニル化合物の重
合体または共重合体である請求項１〜５のいずれかに記
載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プ
ライマー。 - 【請求項７】 Ｒ2が芳香族アミノ酸残基であり、Ｒ3が
芳香族アミノ酸を含まない任意のペプチド残基であり、
その残基中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結
合により任意の単糖残基が結合したセリン残基、トレオ
ニン残基、グルタミン残基またはアスパラギン残基を含
むペプチド残基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介し
てグリコシド結合により任意の単糖残基が結合したアミ
ノ酸残基を含むペプチド残基である請求項１〜６のいず
れかに記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用
高分子プライマー。 - 【請求項８】 一般式（IV）（式中、Ｒ4は炭素数１〜
１８のアルキレン基を示し、Ｒ5は特定のプロテアーゼ
により開裂できる部位を有するアミノ酸残基あるいはペ
プチド残基を示し、Ｒ6は前記プロテアーゼにより開裂
できる部位を含まない任意のペプチド残基であり、その
残基中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシド結合に
より任意の単糖残基が結合したセリン残基、トレオニン
残基、グルタミン残基またはアスパラギン残基を含むペ
プチド残基、あるいは側鎖官能基にリンカーを介してグ
リコシド結合により任意の単糖残基が結合したアミノ酸
残基を含むペプチド残基を示す）で表されることを特徴
とするアクリルアミド誘導体。 【化４】 - 【請求項９】 Ｒ6がアミノ酸残基２〜３０個よりなる
ペプチド残基である請求項８に記載のアクリルアミド誘
導体。 - 【請求項１０】 側鎖官能基に結合したリンカーがメチ
レン基１〜２０個分の長さを有し、任意の単糖残基が結
合したアミノ酸残基がセリン、トレオニン、リジン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギンまたはグル
タミン残基である請求項８または９に記載のアクリルア
ミド誘導体。 - 【請求項１１】 側鎖官能基に結合したリンカーが一般
式（V）（式中、ＡはＯ、ＮＨまたはＣ＝Ｏを示し、か
つＡを介してアミノ酸残基の側鎖官能基と結合してお
り、ｎは１〜１８の整数を示す）で表される基である請
求項８〜１０のいずれかに記載のアクリルアミド誘導
体。 【化５】 - 【請求項１２】 Ｒ5が芳香族アミノ酸残基であり、Ｒ6
が芳香族アミノ酸を含まない任意のペプチド残基であ
り、その残基中にＯＨ基あるいは酸アミド基にグリコシ
ド結合により任意の単糖残基が結合したセリン残基、ト
レオニン残基、グルタミン残基またはアスパラギン残基
を含むペプチド残基、あるいは側鎖官能基にリンカーを
介してグリコシド結合により任意の単糖残基が結合した
アミノ酸残基を含むペプチド残基である請求項８〜１１
のいずれかに記載のアクリルアミド誘導体。 - 【請求項１３】 請求項８〜１１のいずれかに記載の少
なくとも１種類のアクリルアミド誘導体および少なくと
も１種類のビニル系単量体とを含む共重合体からなるこ
とを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマー。 - 【請求項１４】 請求項１２に記載の少なくとも１種類
のアクリルアミド誘導体および少なくとも１種類のビニ
ル系単量体とを含む共重合体からなることを特徴とする
糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライ
マー。 - 【請求項１５】 ビニル系単量体がアクリルアミド類、
メタクリルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、
スチレン類、脂肪酸ビニルエステル類からなる群より選
ばれる請求項１３記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプ
チド合成用高分子プライマー。 - 【請求項１６】 ビニル系単量体がアクリルアミド類、
メタクリルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、
スチレン類、脂肪酸ビニルエステル類からなる群より選
ばれる請求項１４記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプ
チド合成用高分子プライマー。 - 【請求項１７】 アミノ基が一般式（VI）（式中、Ｒ7
は炭素数１〜１８のアルキレン基を示し、Ｒ8はＨまた
はＣＨ3を示す）で表される基でアシル化された重合性
芳香族アミノ酸誘導体。 【化６】 - 【請求項１８】 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを
製造する方法であって、（Ａ）請求項１〜７および１３
〜１６のいずれかに記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペ
プチド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存
在下に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオ
チドより糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
合成用高分子プライマーに転移させる工程、および、
（Ｂ）工程（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプチドあ
るいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ2
中の特定の部位を開裂させることのできるプロテアーゼ
を作用させることにより糖鎖が伸長した糖ペプチドある
いはネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むことを特
徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製造する
方法。 - 【請求項１９】 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを
製造する方法であって、（Ａ）請求項１〜７および１３
〜１６のいずれかに記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペ
プチド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存
在下に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオ
チドより糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
合成用高分子プライマーに転移させる工程、（Ｂ）工程
（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させ
る工程、（Ｃ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類
や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、
（Ｄ）工程（Ａ）ないし工程（Ｃ）を複数回繰り返した
後、複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチド
あるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ
2中の特定の部位を開裂させることのできるプロテアー
ゼを作用させることにより糖鎖糖鎖が伸長した糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むこ
とを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製
造する方法。 - 【請求項２０】 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを
製造する方法であって、（Ａ）請求項７、１４および１
６のいずれかに記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下
に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチド
より糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに転移させる工程、および、（Ｂ）
工程（Ａ）で得た糖残基が転移した糖ペプチドあるいは
ネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、α−キモト
リプシンを作用させ、芳香族アミノ酸残基のカルボキシ
ル基側のペプチド結合を加水分解することにより糖鎖が
伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させ
る工程、を含むことを特徴とする糖ペプチドあるいはネ
オ糖ペプチドを製造する方法。 - 【請求項２１】 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを
製造する方法であって、（Ａ）請求項７、１４および１
６のいずれかに記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチ
ド合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下
に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチド
より糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに転移させる工程、（Ｂ）工程
（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させ
る工程、（Ｃ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類
や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、
（Ｄ）工程（Ａ）ないし工程（Ｃ）を複数回繰り返した
後、複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチド
あるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、α
−キモトリプシンを作用させ、芳香族アミノ酸残基のカ
ルボキシル基側のペプチド結合を加水分解することによ
り糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを
遊離させる工程、を含むことを特徴とする糖ペプチドあ
るいはネオ糖ペプチドを製造する方法。 - 【請求項２２】 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを
製造する方法であって、（Ａ）請求項８〜１２のいずれ
かに記載のアクリルアミド誘導体をペプチド自動合成装
置を利用して得る工程、（Ｂ）得られたアクリルアミド
誘導体と少なくとも１種類のビニル系単量体を共重合さ
せ、請求項１３〜１６のいずれかに記載の糖ペプチドあ
るいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーを得る工
程、（Ｃ）得られた糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在下に
糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドよ
り、糖残基を該糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成
用高分子プライマーに転移させる工程、（Ｄ）工程
（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させ
る工程、（Ｅ）必要に応じて、副生したヌクレオチド類
や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工程、および、
（Ｆ）工程（Ｃ）ないし工程（Ｅ）を複数回繰り返した
後、複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した糖ペプチド
あるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに、Ｒ
2中の特定の部位を開裂させることのできるプロテアー
ゼを作用させることにより糖鎖糖鎖が伸長した糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むこ
とを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製
造する方法。 - 【請求項２３】 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを
製造する方法であって、（Ａ）請求項１２に記載のアク
リルアミド誘導体をペプチド自動合成装置を利用して得
る工程、（Ｂ）得られたアクリルアミド誘導体と少なく
とも１種類のビニル系単量体を共重合させ、請求項１４
または１６に記載の糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド
合成用高分子プライマーを得る工程、（Ｃ）得られた糖
ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマ
ーに、糖ヌクレオチドの存在下に糖転移酵素を作用させ
ることにより、糖ヌクレオチドより、糖残基を該糖ペプ
チドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーに
転移させる工程、（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以
上繰り返して糖鎖を伸長させる工程、（Ｅ）必要に応じ
て、副生したヌクレオチド類や未反応の糖ヌクレオチド
類を除去する工程、および、（Ｆ）工程（Ｃ）ないし工
程（Ｅ）を複数回繰り返した後、複数の糖残基が転移し
て糖鎖が伸長した糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合
成用高分子プライマーに、α−キモトリプシンを作用さ
せ、芳香族アミノ酸残基のカルボキシル基側のペプチド
結合を加水分解することにより糖鎖が伸長した糖ペプチ
ドあるいはネオ糖ペプチドを遊離させる工程、を含むこ
とを特徴とする糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチドを製
造する方法。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2000353275A JP2001220399A (ja) | 1999-11-25 | 2000-11-20 | 糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド合成用高分子プライマーおよびその用途 |
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|---|---|---|---|
| JP33485399 | 1999-11-25 | ||
| JP33485299 | 1999-11-25 | ||
| JP34221499 | 1999-12-01 | ||
| JP11-342214 | 1999-12-01 | ||
| JP11-334852 | 1999-12-01 | ||
| JP11-334853 | 1999-12-01 | ||
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001220399A true JP2001220399A (ja) | 2001-08-14 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001220399A (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004099271A1 (ja) * | 2003-05-08 | 2004-11-18 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 糖鎖含有水溶性ポリマー化合物 |
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2000
- 2000-11-20 JP JP2000353275A patent/JP2001220399A/ja active Pending
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| CN114989337A (zh) * | 2022-04-19 | 2022-09-02 | 上海应用技术大学 | 一种侧链含缬氨酸和甘露糖聚合物及其制备方法 |
| CN114989337B (zh) * | 2022-04-19 | 2023-05-30 | 上海应用技术大学 | 一种侧链含缬氨酸和甘露糖聚合物及其制备方法 |
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