JPWO2006030840A1 - ムチン型ペプチドの合成法とｍｕｃ１関連糖ペプチド - Google Patents

ムチン型ペプチドの合成法とｍｕｃ１関連糖ペプチド Download PDF

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Abstract

本発明の課題は、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類を製造する際のプライマーとして有用な新規化合物、およびそのプライマーを使用して糖ペプチドを製造する方法を提供することにある。末端にアルデヒド基またはケトン基を有し、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む新規な糖ペプチド誘導体（式（Ｉ）で表される化合物）およびこれをプライマーとして使用する糖ペプチドの簡易な製造方法を提供することにより、上記課題が解決される。

Description

本発明は、糖ペプチドを製造する際のプライマーとして有用な新規化合物、およびそのプライマーを使用して糖ペプチドを製造する方法に関する。本発明はまた、その製造方法によって得られる糖ペプチド類に関する。
糖鎖は核酸やタンパク質と並んで生体を構成する主要成分であり、生体のエネルギー源としてよく知られているが、近年、生体内の情報伝達、タンパク質の品質管理、構造安定化、タンパク質輸送のための標識など、様々な高次機能を担っていることが明らかとなってきた。しかしながら、糖鎖は核酸やタンパク質に比べ、一般的な調製法が確立されておらず、さらに糖鎖の機能は脂質やタンパク質などと結合した複合糖質として機能していることが多いため、その構造情報を含めた機能の研究は未解明部分が極めて多い。また、タンパク質の研究分野でも糖鎖と共にその機能を果たしていると思われるものが多数見つかっているが、その詳細な機構の研究は現状ではきわめて困難である。
これらの研究を推し進め、さらに医薬などへと活用するためには糖鎖単独ではなく複合糖質の状態で均一な試料を調製する必要がある。特に糖ペプチドに関しては糖鎖とペプチド双方が極めて多様性に富んでいるため、必要となった構造をそのつど天然物から調達することは事実上不可能であり、その迅速な製造法の開発が期待されている。共通の手順で多様な構造を作成するという作業は近年発達したコンビナトリアルケミストリーに代表されるように、化学合成法が得意とする技術である。このような背景に基づき、これまで様々な糖ペプチド製造法が検討されてきたが、いまだに実用的な製造法は報告されていない。その主な理由、原料となる糖アミノ酸の調製が煩雑であり多彩な糖鎖構造を有する糖アミノ酸を揃えることが困難であること、大きい糖鎖構造を有する糖アミノ酸は立体障害が大きいためその収率および反応速度が遅いこと、さらに糖ペプチド構築後に化学合成法で糖鎖を伸張することは反応性および位置・立体制御の点から難しいこと、が挙げられる。すなわち、現在の技術では反応収率が低い上に調製に要する時間が長く、さらに、糖ペプチド合成はその合成原料の調製自体が難しいため、必要な糖鎖構造を迅速に調製するオーダーメードな製造や、糖ペプチドおよび糖タンパク質の網羅的機能解析に必要とされている複雑な糖鎖構造を含む糖ペプチドライブラリーの構築は極めて困難である。
一般に糖ペプチドの合成は、Ｆｍｏｃ−アミノ酸（アミノ基を９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基で保護したアミノ酸、以下９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基をＦｍｏｃと略する）とともにＦｍｏｃグリコシルアミノ酸を用い、ペプチド自動合成装置で基本となるペプチド部分を固相担体上に合成し、固相担体よりペプチド部分を遊離させ、一旦精製した後、有機化学的なまたは酵素的な合成手法によりひとつずつ糖鎖を伸長させていくという方法が用いられる。このため、糖鎖の伸長には煩雑な操作と長い時間が必要である。そこで、ペプチド部分のみならず、オリゴ糖鎖部分も自動合成になれば糖ペプチド合成の迅速化およびライブラリー作成において非常に有用である。核酸やタンパク質については自動合成技術が確立されており、このことによりこれらの分野の研究が著しく進歩したことは誰もが認めるところであり、糖鎖についてもその自動合成技術の確立は切望されている。
これまでに糖ペプチドのライブラリー合成を志向した研究に関しいくつかの報告があり、いずれもペプチド部分の合成はＲ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの方法に基づいた固相化学合成法で行われている。一方、オリゴ糖鎖側の合成手法は大きく分けて２つある。ひとつは化学合成法によるものであるが、当残基と糖残基を立体選択的に結合させる方法が十分確立されておらず、さらに保護基を結合させたりあるいは脱離させたりと工程が煩雑であるという問題がある。もうひとつは酵素合成によるものであり、保護基を必要とせず、また糖残基と糖残基を立体選択的に結合させることができるので化学合成に比べ、非常に有利であり、近年いくつかの高分子担体と組み合わせる自動合成可能な方法が提案されるようになって来た。これには、最近各種糖転移酵素の遺伝子が単離され、遺伝子組換え技術による糖転移酵素の大量生産が可能になってきたという背景がある。
そのような例としては、Ｕ．Ｚｅｈａｖｉらは、アミノエチル基またはアミノヘキシル基を結合させたポリアクリルアミドゲルを固相担体とした糖転移酵素による固相合成を報告している（非特許文献１〜４参照）。この方法は適当な単糖を４−カルボキシ−２−ニトロベンジルグリコシドとした後、上記担体のアミノ基と直接またはスペーサーを介して結合させたものをプライマーとして、糖転移酵素により糖鎖伸長反応を行い、その後、光分解により伸長させた糖鎖を遊離させるというものである。しかしながら、糖転移収率は５０％程度であり十分なものとはいえない。また、この方法で得られるのはオリゴ糖であって糖ペプチドではない。
その他の例として、Ｃ．−Ｈ．Ｗｏｎｇらは、アミノ化シリカに糖ペプチドを結合させたものをプライマーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させた後、α−キモトリプシンの加水分解作用を利用し、伸長させた糖鎖を糖ペプチドの形で切り出す方法を報告している。（非特許文献５参照）。得られる糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギン）−Ｇｌｙ（グリシン）−Ｐｈｅ（フェニルアラニン）と短く、さらに、糖転移酵素による糖鎖伸長反応の収率は５５〜６５％であり、とても十分なものとはいえない。
また、Ｃ．−Ｈ．Ｗｏｎｇらは、固相担体であるアミノ化シリカに結合させる基を改良し、糖転移酵素により糖鎖を伸長した後、ヒドラジン分解により糖鎖を遊離させる方法を報告しており、酵素による糖転移反応をほぼ定量的に行うことができたとも報告している（非特許文献６参照）。しかしながら、この方法で得られる糖鎖化合物は糖ペプチドではない。
さらに、Ｃ．−Ｈ．Ｗｏｎｇらは、アミノ化シリカを固相担体とした非特許文献７のプライマーにＦｍｏｃアミノ酸およびＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（βＧｌｃＮＡｃ）−ＯＨを用いてペプチド鎖を伸長させ、次いでペプチド鎖上の保護基を脱離させ、その後上述のＮ−ＧｌｃＮＡｃ残基に糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させ、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウムで処理することにより固相担体上で合成した糖ペプチドを遊離させる方法を報告している（非特許文献７参照）。この方法で得られる糖ペプチド鎖はアミノ酸残基８つからなっており、ペプチド鎖としては十分な長さを有しているが、得られた糖ペプチドは最初に固相担体に導入したアミノ酸に対する収率が１０％以下であり、十分なものとはいえない。また、ペプチド合成と糖鎖合成を通じて未反応物などの不純物が蓄積するため、ペプチド鎖と糖鎖構造がそれぞれ複雑になると目的物の単離精製が困難になる。さらに、ペプチドの自動合成は通常有機溶媒中で、糖転移酵素による糖鎖合成は通常水溶液中で行われ、それぞれの反応で求められる担体の性質は異なるため、ひとつの担体上でペプチドも糖鎖も自動合成することは困難である。
また、Ｍ．Ｍｅｌｄａｌらは、ジアミノ化ポリエチレングリコールのモノおよびジアクリロイル化体の重合体に、糖ペプチド誘導体を結合させたものをプライマーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させた後、トリフルオロ酢酸により糖鎖を遊離させる方法を報告している（非特許文献８参照）。しかし、この方法で得られる糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギン）−Ｇｌｙ（グリシン）であり、糖ペプチドと呼ぶにはあまりに短い。また、Ｃ末端のグリシン残基はグリシンアミド残基となっており、場合によってはグリシンアミド残基をグリシン残基に変換する必要がある。
Ｓ．Ｒｏｔｈらは、特許文献１に以下のような方法を開示している。まず、糖転移酵素の糖受容体を固相担体に結合させ、これをアフィニティ吸着体とし、この糖受容体と結合することのできる糖転移酵素を含む組織抽出液を接触させることにより、糖転移酵素をアフィニティ吸着体に結合させる。次いで、この糖転移酵素が結合したアフィニティ吸着体をこの糖転移酵素が糖供与体として利用できる糖ヌクレオチドを含む溶液と接触させることにより、糖転移酵素をアフィニティ吸着体から遊離させるとともに糖受容体に糖残基をひとつ伸長させる。さらにこの糖残基がひとつ伸長した糖受容体と結合することのできる糖転移酵素を含む組織抽出液を接触させ、同様のことを繰り返し所望の糖鎖を固相担体上に合成するというものである。しかしながら、この方法の有用性あるいは非天然型の糖ペプチド合成への適用を示す具体的なデータは示されておらず、得られた糖鎖を固相担体から遊離させる方法も開示されていない。
西村らは、糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド（非天然型の糖ペプチド）の合成に利用できるプロテアーゼ切断型プライマーおよびそのプライマーを利用した糖ペプチドの製造方法、ならびにそのプライマーの合成に有用な重合性芳香族アミノ酸誘導体を開示している（特許文献２参照）。しかし、この方法は糖残基を有するペプチドをラジカル重合しているためラジカルに弱い硫黄原子を含む糖ペプチドの調製が難しく、ペプチド合成後にカラム精製、重合操作など煩雑な操作が含まれており、固相ペプチド化学合成から酵素による糖鎖伸長反応への切り替えに時間がかかるという問題を残している。
このように、装置化および精製が簡易で糖ペプチドを迅速かつ収率よく製造するためのプライマーはいまだに存在せず、化学法によるペプチド自動合成と酵素法による糖鎖自動合成を効率的に結びつけることのできる新しい技術は、ポストゲノム、ポストプロテオミクスを担うグライコミクス、グライコプロテオミクスの時代において非常に重要であり、その開発は渇望されている。実際にここに例示した装置化を志向した糖ペプチド合成法では糖ペプチドライブラリーと呼べる多品種合成や複雑な天然型糖鎖または複数の糖鎖を含む糖ペプチド合成例はない。
ムチンは、気管、胃腸などの消化管、生殖腺などの内腔を覆う粘液の主要な糖タンパク質である。ＭＵＣ１は、上皮細胞の膜結合糖タンパク質であり、詳細に検討された最初のムチンである。ＭＵＣ１はＯ−結合型糖鎖の付加しうるセリンおよびスレオニンを含むアミノ酸配列の繰り返しであるタンデムリピート（ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ）という特徴的な構造をもつ巨大な細胞表面分子である。糖鎖の付加はすべてのセリンおよびスレオニンに起こるのではなく、糖鎖の伸張度も多様であることから、同じアミノ酸配列を有していたとしても機能の異なる数多くの糖タンパク質が存在しうる。
ＭＵＣ１は、癌化の進行と共にその発現レベルが変化することが報告されている（非特許文献９：Ｎａｋａｍｏｒｉ，Ｓ．；Ｏｔａ，Ｄ．Ｍ．；Ｋａｒｅｎ，Ｒ．；Ｓｈｉｒｏｔａｎｉ，Ｋ．；Ｉｒｉｍｕｒａ，Ｔ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９９４，１０６，３５３−３６１．）。例えば結腸直腸癌では進行段階の原発腫瘍や転移病巣でＭＵＣ１の発現上昇が認められている。さらにＭＵＣ１のグリコシレーションの度合い（糖鎖の導入個所）および糖鎖構造が、正常上皮由来のものと癌細胞由来のものとで異なるという報告例（非特許文献１０：Ｌｌｏｄ，Ｋ．Ｏ．；Ｂｕｒｃｈｅｌｌ，Ｊ．；Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ，Ｖ．；Ｙｉｎ，Ｂ．Ｗ．Ｔ．；Ｔａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ，Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，２７１，３３３２５−３３３３４．；特許文献１１：Ｈａｎｉｓｃｈ，Ｆ．−Ｇ．；Ｍuｌｌｅｒ，Ｓ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，１０，４３９−４４９．）は数多い。例えば、正常細胞ではグリコシル化されているペプチドであっても、癌細胞ではグリコシル化されずに細胞表面に露出する場合がある。そのような場合は露出したペプチド部分がエピトープとなる。これらの露出したエピトープが、肺癌、乳癌、結腸癌、膵癌由来の上皮細胞株の細胞膜に見いだされている。具体的には、乳癌の患者から単離された細胞傷害性Ｔリンパ球はＭＵＣ１タンパク質のグリコシル化を受けていないペプチドを認識する。一方、癌関連糖鎖抗原であるＴｎ、Ｔのような母核構造及びそれらにシアル酸が結合したシアリルＴｎ、シアリルＴ、さらにシアリルルイスＡ抗原、シアリルルイスＸ抗原が癌細胞膜のムチンや癌患者血清中のムチンに見いだされている。
近年、このような癌化に伴うＭＵＣ１の特異的な変化をターゲットとした創薬・診断薬への応用が注目されている（非特許文献１２：Ｋｏｇａｎｔｙ，Ｒ．Ｒ．；Ｒｅｄｄｉｓｈ，Ｍ．Ｒ．；Ｌｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ，Ｂ．Ｍ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ，１９９６，１，１９０−１９８．）。例えば、Ｂｉｏｍｉｒａ−Ｍｅｒｃｋ 社は、リポソーマル製剤において、ＭＵＣ１癌ムチンの２５アミノ酸のシーケンスを取り入れた合成ＭＵＣ１ペプチドワクチン：「Ｌ−ＢＬＰ２５」を開発中であり、肺癌、前立腺癌をターゲットにＰｈａｓｅＩＩ臨床試験を実施中である。さらにＢｉｏｍｉｒａ−Ｍｅｒｃｋ社は、癌細胞上のムチンに特異的に発現したＳＴｎ（二糖体）をターゲットとした合成ＳＴｎに抗体の産生やＴ−細胞反応を刺激するＫＬＨ（Ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）をキャリアタンパクとして結合させた合成ワクチン：「Ｔｈｅｒａｔｏｐｅ」を乳癌、直腸癌を対象にＰｈａｓｅＩＩＩ臨床開発中である。
特表平５−５００９０５号公報 特開２００１−２２０３９９ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１２４，２３（１９８３） Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，２２８，２５５（１９９２） Ｒｅａｃｔ．Ｐｏｌｙｍ．，２２，１７１（１９９４） Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，２６５，１６１（１９９４） Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１６、１１３６（１９９４） Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１６、１１３１５（１９９４） Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１９、８７６６（１９９７） Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１８４９（１９９４） Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１０６，３５３−３６１（１９９４） Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，３３３２５−３３３３４（１９９６） Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１０，４３９−４４９（２０００） ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ，１，１９０−１９８（１９９６）
本発明の課題は、糖ペプチドを製造する際のプライマーとして有用な新規化合物、およびそのプライマーを使用して糖ペプチドを製造する方法を提供し、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用な、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類を製造することにある。
本発明者らは鋭意検討した結果、末端にアルデヒド基またはケトン基を有し、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む新規な糖ペプチド誘導体は、そのアルデヒド基またはケトン基を介して所定の担体に強固に結合させることができ、しかもこの結合はプロテアーゼによる加水分解条件下において分解しないため、糖ペプチドの製造に適したプライマーとして機能すること、ならびにこのプライマーを使用することにより、従来は多段階の精製を要していた糖ペプチドの精製を簡易にし、糖ペプチドを迅速かつ収率よく製造できることを見出し、上記課題を解決した。
本発明はまた、上記プライマーを用いた糖ペプチドの製造方法により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類が合成できることを見出し、本発明を完成した。
本発明のＭＵＣ１およびＭＵＣ１ペプチドライブラリーは、ＭＵＣ１の機能解明に有効であり、またそこから得られる知見を基にした新たな創薬の可能性が考えられる。糖ペプチドを用いた研究として、例えば、糖ペプチドライブラリーの固定化・チップ化、抗体反応スクリーニング、特異抗体の探索、抗原−抗体反応における構造活性相関調査、特異性・選択性の高いモノクローナル抗体の作成、さらに抗体医薬、糖ペプチドを用いたワクチン療法等への展開が考えられる。
このように、本発明では以下を提供する。
（１）以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３ （Ｉ）
（式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表す）で表される、化合物。
（２）上記Ａ２は、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基である、（１）に記載の化合物。
（３）上記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、項目（１）に記載の化合物。
（４）項目（１）に記載の化合物と、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、が反応して得られる、化合物。
（５）上記担体は、以下：
ａ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するビニル系単量体の重合体もしくは共重合体、または保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するポリエーテル類；
ｂ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するシリカ担体、樹脂担体、磁性ビーズまたは金属担体；ならびに
ｃ）以下の式：
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６１）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６２）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６３）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６４）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６５）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６６）、
（式中、Ｒ３はヒドロキシル基またはアミノ基を表し、Ｌｙｓはリジンを表し、Ｃｙｓはシステインを表す）、
（式中、ｎは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）
で表される化合物、からなる群から選択される、項目（４）に記載の化合物。
（６）以下の式：
Ａ４−Ｎ＝Ｃ（−Ｘ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３ （ＩＩ）
［式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基であり；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し；
Ａ４は、以下の式：
（式中、ｓは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）で表される基である］
で表される化合物。
（７）上記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、項目（６）に記載の化合物。
（８）以下の工程：
（Ａ）項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去す
る工程；および
（Ｄ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（９）以下の工程：
（Ａ）項目（４）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１０）以下の工程：
（Ａ）項目（４）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１１）以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１２）以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１３） 以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；および
（Ｄ）工程（Ｃ）で得た糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１４） 以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１５）上記工程（Ａ）のケト酸またはアルデヒド酸が、以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ （ＩＩＩ）
（式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す）で表される化合物である、項目（１１）または（１２）に記載の方法。
（１６）以下の工程：
（Ａ）項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基
、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；および
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１７）以下の工程：
（Ａ）項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（１８）以下の式：
（配列番号２０）
（配列番号４０）
または
（配列番号４１）
（式中、Ｘ１〜Ｘ５は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
で表される化合物［式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、単糖または糖鎖を表す；Ａｃはアセチル］を表し；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す）で表される糖ペプチド。
ここで、式：
で表される基は、
で表される基を意味し、式：
で表される基は、
で表される基を意味する。
（１９）以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む可溶性担体とを反応させ、再沈澱、ゲルろ過、または限外ろ過などにより工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に可溶性結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
（Ｆ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物を、ケト酸またはアルデヒド酸を表面に結合した非可溶性担体と反応させ、その表面に固定する工程；および
（Ｇ）必要に応じ糖鎖の伸長反応に使用した試薬および酵素を除去する工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（２０）以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む可溶性担体とを反応させ、再沈澱、ゲルろ過、または限外ろ過などにより工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に可溶性結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
（Ｆ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物を、ケト酸またはアルデヒド酸を表面に結合した非可溶性担体と反応させ、その表面に固定する工程；
（Ｇ）必要に応じ糖鎖の伸長反応に使用した試薬および酵素を除去する工程；および
（Ｈ）工程（Ｆ）で固定化した糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（２１）上記の工程（Ａ）および（Ｆ）のケト酸またはアルデヒド酸が、それぞれ以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ （ＩＩＩ）
（式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す）で表される化合物である、項目（１９）または（２０）に記載の方法。
（２１）
前記糖ペプチドが、以下の式：
（配列番号２０）
（式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される糖ペプチドである、項目（８）〜（１７）、（１９）、または（２０）のいずれか１項に記載の方法。
（２２）
前記糖ペプチドが、以下の式：
（配列番号４１）
（式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される糖ペプチドである、項目（８）〜（１７）、（１９）、または（２０）のいずれか１項に記載の方法。
（２３）
式：
（配列番号２０）
（式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される、項目１８に記載の糖ペプチド。
（２４）
式：
（配列番号４１）
（式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される、項目１８に記載の糖ペプチド。
本発明では糖ペプチド合成において比較的調製が簡単な１から３糖程度を含む糖アミノ酸を使用し、ペプチド合成後に糖鎖伸長を行うことにより、複雑な糖鎖を有する糖ペプチド合成を可能とすると共に、糖鎖伸長反応の中間体となる各糖鎖構造のライブラリー調製までを可能とする。また、糖鎖伸長反応は水溶性高分子上に糖ペプチドを担持して行うため、反応の加速効果および分子操作の簡素化が可能となり、糖鎖伸長反応の自動化が可能となる。これにより、従来の技術では極めて困難であった簡単な糖鎖構造から複雑な糖鎖構造までを網羅的に有する糖ペプチドのライブラリー調製が可能となる。例えば、本発明により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類を合成することができる。
得られた糖ペプチドライブラリーは構造解析、生化学試験の標準サンプルとして使用可能である。また、この糖ペプチドライブラリーをチップ上に配置し、糖ペプチド認識タンパク質の検出、病理診断、細胞接着配列の検索、細胞増殖・アポトーシスなどに関連する配列解析などを網羅的に行うことが可能になる。
図１Ａ−Ｄは、本発明における糖ペプチド糖鎖伸長反応および糖鎖切り出しの反応例を示す。 図１Ａ−Ｄは、本発明における糖ペプチド糖鎖伸長反応および糖鎖切り出しの反応例を示す。 図１Ａ−Ｄは、本発明における糖ペプチド糖鎖伸長反応および糖鎖切り出しの反応例を示す。 図１Ａ−Ｄは、本発明における糖ペプチド糖鎖伸長反応および糖鎖切り出しの反応例を示す。 図２は、分注装置を用いた化合物（９７）〜（１６２）のコンビナトリアル合成の概念図を示す。
配列表の説明
配列番号１〜２０：ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１の１１残基の部分アミノ酸配列
配列番号２１〜４０：ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１の１８残基の部分アミノ酸配列
配列番号４１〜６０：ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１の２０残基の部分アミノ酸配列
配列番号６１〜６６：化合物に含まれる担体に含まれるアミノ酸配列の例
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。
（用語）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
本明細書において「糖アミノ酸」とは、糖残基とアミノ酸残基とが結合したものを意味し、「糖アミノ酸残基」と互換可能に用いられる。
本明細書において「実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基」とは、上記項目（４）で表されるような化合物をプロテアーゼで処理しても糖アミノ酸部分がプロテアーゼにより５０％以上切断されない糖アミノ酸残基、好ましくは２０％以上切断されない糖アミノ酸残基を指す。
本明細書において「糖ペプチド残基」とは、少なくとも１個の糖アミノ酸を含むペプチド残基を意味し、「糖ペプチド」と互換可能に用いられる。
上記糖ペプチド残基に含まれる糖アミノ酸を構成する糖残基としては、特に制限はないが、単糖から３糖または単糖から３糖の誘導体が好ましく、単糖または単糖の誘導体がさらに好ましく用いられる。
本明細書において「糖鎖」とは、単位糖（単糖および／またはその誘導体）が１つ以上連なってできた化合物をいう。単位糖が２つ以上連なる場合は、各々の単位糖同士の間は、グリコシド結合による脱水縮合によって結合する。このような糖鎖としては、例えば、生体中に含有される多糖類（グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸ならびにそれらの複合体および誘導体）の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されない。したがって、本明細書では、糖鎖は、「多糖（ポリサッカリド）」、「糖質」、「炭水化物」と互換可能に使用され得る。また、特に言及しない場合、本明細書において「糖鎖」は、糖鎖および糖鎖含有物質の両方を包含することがある。
本明細書において「単糖」とは、これより簡単な分子に加水分解されず、少なくとも１つの水酸基および少なくとも１つのアルデヒド基またはケトン基を含む、ポリヒドロキシアルデヒドまたはポリヒドロキシケトンならびにその誘導体をいう。通常単糖は、一般式ＣｎＨ２ｎＯｎで表されるがそれらに限定されず、フコース（デオキシヘキソース）、Ｎ
−アセチルグルコサミンなども含まれる。ここで、上の式において、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９および１０であるものを、それぞれジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトース、ノノースおよびデコースという。一般に鎖式多価アルコールのアルデヒドまたはケトンに相当するもので、前者をアルドース、後者をケトースという。
本明細書において特に言及するときは、「単糖の誘導体」は、置換されていない単糖上の一つ以上の水酸基が別の置換基に置換され、結果生じる物質をいう。そのような単糖の誘導体としては、カルボキシル基を有する糖（例えば、Ｃ−１位が酸化されてカルボン酸となったアルドン酸（例えば、Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルコン酸）、末端のＣ原子がカルボン酸となったウロン酸（Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルクロン酸）、アミノ基またはアミノ基の誘導体（例えば、アセチル化されたアミノ基）を有する糖（例えば、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンなど）、アミノ基およびカルボキシル基を両方とも有する糖（例えば、Ｎ−アセチルノイラミン酸（シアル酸）、Ｎ−アセチルムラミン酸など）、デオキシ化された糖（例えば、２−デオキシ−Ｄ−リボース）、硫酸基を含む硫酸化糖、リン酸基を含むリン酸化糖などがあるがそれらに限定されない。本明細書では、単糖という場合は、上記誘導体も包含する。あるいは、ヘミアセタール構造を形成した糖において、アルコールと反応してアセタール構造のグリコシドもまた、単糖の範囲内にある。
本発明の糖ペプチド残基を構成する「アミノ酸残基」は分子内にアミノ基とカルボキシル基を有するものであれば特に制限はなく、Ｇｌｙ（グリシン）、Ａｌａ（アラニン）、Ｖａｌ（バリン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｔｙｒ（チロシン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｌｙｓ（リジン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｃｙｓ（システイン）、Ｍｅｔ（メチオニン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ｇｌｎ（グルタミン）またはＰｒｏ（プロリン）残基などのα−アミノ酸残基あるいはβ−Ａｌａ残基のようなβ−アミノ酸残基などが例示される。また、アミノ酸残基はＤ体、Ｌ体いずれでもよいが、Ｌ体の方が好ましい。糖ペプチド残基としては、上述したアミノ酸残基または２〜３０個からなる糖ペプチド残基が好ましい。４〜２０個からなる糖ペプチド残基がさらに好ましい。
上で定義した本発明の糖アミノ酸は、上に列挙したアミノ酸残基と糖残基とが理論上結合することができればその組み合わせに特に制限はないが、好ましい組み合わせとして、Ａｓｎ−（ＣＨ２）ｎ−１αＧｌｃＮＡｃ、Ａｓｎ−（ＣＨ２）ｎ−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｇｌｎ−（ＣＨ２）ｎ−１αＧｌｃＮＡｃ、Ｇｌｎ−（ＣＨ２）ｎ−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧｌｃＮＡｃ、Ａｓｎ−１αＧｌｃＮＡｃ、Ａｓｎ−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ、Ａｓｎ−１αＧａｌＮＡｃ、Ａｓｎ−１βＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧｌｃ、Ｓｅｒ−１βＧｌｃ、Ｔｈｒ−１αＧｌｃ、Ｔｈｒ−１βＧｌｃ、Ａｓｎ−１αＧｌｃ、Ａｓｎ−１βＧｌｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌ、Ｓｅｒ−１βＧａｌ、Ｔｈｒ−１αＧａｌ、Ｔｈｒ−１βＧａｌ、Ａｓｎ−１αＧａｌ、Ａｓｎ−１βＧａｌ、Ｓｅｒ−１αＭａｎ、Ｓｅｒ−１βＭａｎ、Ｔｈｒ−１αＭａｎ、Ｔｈｒ−１βＭａｎ、Ａｓｎ−１αＭａｎ、Ａｓｎ−１βＭａｎ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１βＧａｌ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１βＧａｌ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１βＧａｌ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１βＧａｌ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ（３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ（３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ６−１βＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ６−１αＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ６−１αＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ６−１αＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ６−１αＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌ、Ｓｅｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌ、Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌ、Ｔｈｒ−１βＧａｌＮＡｃ３−１αＧａｌ、Ａｓｎ−１αＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ、Ａｓｎ−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ、Ａｓｎ−１αＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ、Ａｓｎ−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ、Ａｓｎ−１αＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ６−１αＭａｎ、Ａｓｎ−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ６−１αＭａｎ、Ａｓｎ−１αＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ３−１αＭａｎ、Ａｓｎ−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ３−１αＭａｎ、Ａｓｎ−１αＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ（３−１αＭａｎ）６−１αＭａｎ、Ａｓｎ−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＭａｎ（３−１αＭａｎ）６−１αＭａｎ、Ｓｅｒ−１αＸｙｌ、Ｓｅｒ−１βＸｙｌ、Ｔｈｒ−１αＸｙｌ、Ｔｈｒ−１βＸｙｌ、Ｓｅｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ、Ｓｅｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ、Ｔｈｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ、Ｔｈｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ、Ｓｅｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ、Ｓｅｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ、Ｔｈｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ、Ｔｈｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ、Ｓｅｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ、Ｓｅｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ、Ｔｈｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ、Ｔｈｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ、Ｓｅｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１αＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１αＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１αＧｌｃＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１αＧｌｃＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ３−１αＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１βＧａｌＮＡｃ、Ｓｅｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１βＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１αＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１βＧａｌＮＡｃ、Ｔｈｒ−１βＸｙｌ４−１βＧａｌ３−１βＧａｌ３−１βＧｌｃＡ４−１βＧａｌＮＡｃが挙げられる。ここで、ｎは１〜１０の整数を表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、Ｇｌｃはグルコースを表し、Ｍａｎはマンノースを表し、Ｘｙｌはキシロースを表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンを表し、ＧａｌＮＡｃはＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンを表す。
本明細書において「Ｎ末端」とは、ペプチド主鎖の末端に位置する置換されていてもよいアミノ基を意味する。
本明細書において「Ｃ末端」とは、ペプチド主鎖の末端に位置する置換されていてもよいカルボキシル基を意味する。
本明細書において「側鎖」とは、ペプチド主鎖の延びる方向と直交する方向にペプチド主鎖から延びた官能基またはその官能基を含む部分を意味する。
本明細書において「プライマー」とは、酵素反応において反応開始のきっかけをつくる作用を有する物質を意味する。
本明細書において「転移酵素」とは、基転移反応を触媒する酵素の総称をいう。本明細書において、「転移酵素」は「トランスフェラーゼ」と互換可能に使用され得る。基転移反応は、以下の式（１）：
Ｘ−Ｙ＋Ｚ−Ｈ ⇔ Ｘ−Ｈ＋Ｚ−Ｙ （１）
に示すように、一つの化合物（供与体）から基Ｙが他の化合物（受容体）に転移する形で行われる。
本明細書において「糖転移酵素」とは、糖（上記式（１）の基Ｙに相当；単位糖または糖鎖）をある場所（上記式（１）の化合物Ｘ−Ｙに相当）から別の場所（上記式（１）の化合物Ｚ−Ｈに相当）へと転移させるよう触媒する作用を有する酵素をいう。糖転移酵素としては、例えば、ガラクトース転移酵素、グルコ−ス転移酵素、シアル酸転移酵素、マンノ−ス転移酵素、フコ−ス転移酵素、キシロ−ス転移酵素、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、およびＮ−アセチルガラクトサミン転移酵素などが挙げられるがそれらに限定されない。
本発明において「糖鎖伸長反応」とは、上で定義した糖転移酵素の存在下で糖鎖の鎖長が伸長する反応をいう。
本明細書において使用される用語「生体分子」とは、生体に関連する分子をいう。そのような生体分子を含む試料を、本明細書において特に生体試料ということがある。本明細書において「生体」とは、生物学的な有機体をいい、動物、植物、菌類、ウイルスなどを含むがそれらに限定されない。従って、生体分子は、生体から抽出される分子を包含するが、それに限定されず、生体に影響を与え得る分子であれば生体分子の定義に入る。そのような生体分子には、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、糖ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、糖ヌクレオチド、核酸（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡのようなＤＮＡ、ｍＲＮＡのようなＲＮＡを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子など）、これらの複合分子などが包含されるがそれらに限定されない。本明細書では、生体分子は、好ましくは、糖鎖または糖鎖を含む複合分子（例えば、糖タンパク質、糖脂質など）であり得る。
そのような生体分子の供給源としては、生物由来の糖鎖が結合または付属する材料であれば特にその由来に限定はなく、動物、植物、細菌、ウイルスを問わない。より好ましくは動物由来生体試料が挙げられる。好ましくは、例えば、全血、血漿、血清、汗、唾液、尿、膵液、羊水、髄液等が挙げられ、より好ましくは血漿、血清、尿が挙げられる。生体試料には個体から予め分離されていない生体試料も含まれる。例えば外部から試液が接触可能な粘膜組織、あるいは腺組織、好ましくは乳腺、前立腺、膵臓に付属する管組織の上皮が含まれる。
本明細書において使用される用語「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチ
ド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の１または２以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然のアミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。
本明細書において、「糖ヌクレオチド」とは、上で定義した糖残基が結合したヌクレオチドを意味し、本発明で用いる糖ヌクレオチドは、上記酵素が利用できるものであれば特に限定されない。例えば、ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース、ウリジン−５’−二リン酸−Ｎ−アセチルグルコサミン、ウリジン−５’−二リン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン、ウリジン−５’−二リン酸グルクロン酸、ウリジン−５’−二リン酸キシロース、グアノシン−５’−二リン酸フコース、グアノシン−５’−二リン酸マンノース、シチジン−５’−モノリン酸−Ｎ−アセチルノイラミン酸およびこれらのナトリウム塩などが挙げられる。
（有機化学）
有機化学については、例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒ．Ｔ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｒ．Ｎ．Ｂｏｙｄ ５ｔｈ ｅｄ．（１９８７年）などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
本明細書においては、特に言及がない限り、「置換」は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。
本明細書において「アルキル」とは、メタン、エタン、プロパンのような脂肪族炭化水素（アルカン）から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣｎＨ２ｎ＋１−で表される（ここで、ｎは正の整数である）。アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得る。本明細書において「置換されたアルキル」とは、１つ以上の水素原子が各々独立して以下に規定する置換基によって置換されたアルキルをいう。これらの具体例は、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１１アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ２５アルキルまたはＣ１〜Ｃ３０アルキルであり得る。ここで、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキルとは、炭素原子を１〜１０個有する直鎖または分枝状のアルキルを意味し、メチル（ＣＨ３−）、エチル（Ｃ２Ｈ５−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘキシル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘプチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−オクチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ノニル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−デシル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２などが例示される。
本明細書において「アリール」とは、親である芳香環系の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって誘導される、６〜３０個の炭素原子の一価芳香族炭化水素ラジカルをいう。代表的なアリール基としては、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書において「発色団」とは、紫外光または可視光領域に吸収帯を有する官能基、または紫外光または可視光領域の電磁波で励起され可視光領域の放射光を発する官能基をいう。例えば、ニトロ基、ベンジル基、チオフェニル基、パラニトロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基、ダンシル基、２−アミノベンジル基、フルオロセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）基、４−メトキシ−β−ナフチルアミド基などをが挙げられるが、これに限定されない。
本明細書において「ケト酸」とは、カルボキシル基とケトンのカルボニル基とをもつ化合物の総称をいう。
本明細書において「アルデヒド酸」とは、カルボキシル基とアルデヒドのカルボニル基とをもつ化合物の総称をいう。
このようなケト酸またはアルデヒド酸は、例えば、Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ（ＩＩＩ）（式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；ｎは０〜２０の整数を表し；Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す）で表される化合物である。
本明細書において「保護反応」とは、Ｂｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル基）のような保護基を、保護が所望される官能基に付加する反応をいう。保護基により官能基を保護することによって、より反応性の高い官能基の反応を抑制し、より反応性の低い官能基のみを反応させることができる。
本明細書において「脱保護反応」とは、Ｂｏｃのような保護基を脱離させる反応をいう。脱保護反応としては、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）による反応およびＰｄ／Ｃを用いる還元反応のような反応が挙げられる。
本明細書において「保護基」としては、例えば、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブチルジメチル基、シリル基、トリメチルシリルエチル基、Ｎ−フタルイミジル基、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、カルバメート基などが代表的な保護基として挙げられる。保護基は、例えば、アミノ基、カルボキシル基などの反応性の官能基を保護するために用いることができる。反応の条件や目的に応じ、種々の保護基を使い分けることができる。アミノオキシ基およびＮ−アルキルアミノオキシ基の保護基として、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基またはそれらの誘導体が好ましい。
本発明の各方法において、目的とする生成物は、反応液から夾雑物（未反応減量、副生成物、溶媒など）を、当該分野で慣用される方法（例えば、抽出、蒸留、洗浄、濃縮、沈澱、濾過、乾燥など）によって除去した後に、当該分野で慣用される後処理方法（例えば、吸着、溶離、蒸留、沈澱、析出、クロマトグラフィーなど）を組み合わせて処理して単離し得る。
（本明細書において用いられる一般技術）
本明細書において使用される技術は、そうではないと具体的に指示しない限り、当該分野の技術範囲内にある、有機化学、生化学、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝学および関連する分野における周知慣用技術を使用する。そのような技術は、例えば、以下に列挙した文献および本明細書において他の場所おいて引用した文献においても十分に説明されている。
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒおよびその３ｒｄ Ｅｄ．（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．，ＮＹ，１０１５８（２０００）；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．（１９９０）．ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）．ＰＣＲ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｓｎｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）．ＰＣＲ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ： Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９８５）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９９０）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．（１９９１）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃ ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ａｄａｍｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）．Ｔｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ；Ｓｈａｂａｒｏｖａ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２３０、２４２、２４７、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９４；別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７；畑中、西村ら、糖質の科学と工学、講談社サイエンティフィク、１９９７；糖鎖分子の設計と生理機能 日本化学会編、学会出版センター、２００１などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
（好ましい実施形態の説明）
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は本明細書の記載を参酌して、本発明の範囲内で改変を行うことができるのは明らかである。
１つの局面において、本発明は、以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３ （Ｉ）
（式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；ｎは０〜２０の整数を表し；Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表す）で表される、化合物を提供する。これをプライマーとして使用することにより、従来は多段階の精製を要していた糖ペプチドの精製が簡易となり、糖ペプチドを迅速かつ収率よく製造できる。本発明の上記式（Ｉ）の化合物は、末端にアルデヒド基またはケトン基を必ず有するため、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と反応させることにより、上記式（Ｉ）の化合物を担体上に担持し、高分子プライマーとして使用することができる。この反応によって得られる結合は、後のプロテアーゼによる加水分解条件下（ｐＨ条件など）で分解しない強固な結合であるため、加水分解の精製が非常に簡易で済むという利点がある。
本発明における加水分解で用いられるプロテアーゼと、このプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基（Ａ２）との組み合わせは、プロテアーゼによる加水分解が起こり得るｐＨ領域で、上記式（Ｉ）の化合物の少なくとも上記末端アルデヒドまたはケトン基と上記担体との反応によって生じる結合が分解しないような組み合わせであれば何でも良い。Ａ１のポリペプチドの一部または全部およびＡ２のアミノ酸残基からなるペプチドを認識するプロテアーゼも使用し得る。このような組み合わせとしては、例えば、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼ（グルタミニダーゼ）と、このプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基との組み合わせ；アスパラギニルエンドペプチターゼとＡｓｎ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（アスパラギン（Ａｓｎ）のＣ末端を切断する。）；アルギニルエンドペプチターゼとＡｒｇ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（アルギニン（Ａｒｇ）のＣ末端を切断する。）；アクロモバクタープロテアーゼ Ｉとリジン（Ｌｙｓ）（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（リジン（Ｌｙｓ）のＣ末端を切断する。）；トリプシンと、アルギニン（Ａｒｇ）またはリジン（Ｌｙｓ）（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（Ａｒｇを認識した場合アルギニン（Ａｒｇ）のＣ末端を切断し、リジン（Ｌｙｓ）を認識した場合リジン（Ｌｙｓ）のＣ末端を切断する。）；キモトリプシンと、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＴｒｐ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（Ｐｈｅを認識した場合フェニルアラニン（Ｐｈｅ）のＣ末端を切断し、Ｔｙｒを認識した場合チロシン（Ｔｙｒ）のＣ末端を切断し、Ｔｒｐを認識した場合トリプトファン（Ｔｒｐ）のＣ末端を切断する。）；Ｖ８プロテアーゼとＧｌｕ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（グルタミン酸（Ｇｌｕ）のＣ末端を切断する。）；第Ｘａ因子（ファクターＸａ）と、−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−（認識部位、本明細書の定義に従えば、認識部位（Ａ２）は、アルギニン（Ａｒｇ）であり、−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−はＡ１の末端である；これは、アルギニン（Ａｒｇ）のＣ末端を切断する。）との組み合わせ；ならびにエンテロキナーゼと−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−（認識部位、本明細書の定義に従えば、認識部位（Ａ２）は、リジン（Ｌｙｓ）であり、−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−はＡ１の末端である；これは、リジン（Ｌｙｓ）のＣ末端を切断する。）。このような組み合わせとして、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼ（グルタミニダーゼ（例えば、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のグルタミン酸残基特異的なプロテアーゼ（ＢＬａｓｅ：塩野義製薬社製）））と、このプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基との組み合わせが好ましい。ＢＬａｓｅは、特開平４−１６６０８５（特許第３０４６３４４号）に記載される方法によって、生産することができる。ＢＬａｓｅは、バシラス属菌、特にバシラス リケニホルミスＡＴＣＣ １４５８０株により生産される。本菌株はアメリカンタイプ カルチャー コレクション（ＡＴＣＣ）から入手できる。必要に応じて、バシラス リケニホルミス ＡＴＣＣ １４５８０株のゲノムＤＮＡは，該菌株の培養細胞から既知の方法（Ｍ．Ｓｔａｈｌら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１５４，４０６−４１２（１９８３））に従って調製することができる。
本発明の好ましい実施形態において、上記式（Ｉ）の化合物に含まれるＡ３の少なくとも一部は、以下の配列番号１〜６０：
ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号１）、
ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡ（配列番号２）、
ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰ（配列番号３）、
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧ（配列番号４）、
ＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳ（配列番号５）、
ＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴ（配列番号６）、
ＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡ（配列番号７）、
ＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰ（配列番号８）、
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰ（配列番号９）、
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号１０）、
ＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨ（配列番号１１）、
ＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番号１２）、
ＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１３）、
ＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号１４）、
ＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ（配列番号１５）、
ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡ（配列番号１６）、
ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰ（配列番号１７）、
ＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤ（配列番号１８）、
ＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（配列番号１９）、
ＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲ（配列番号２０）、
ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰ（配列番号２１）、
ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰ（配列番号２２）、
ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号２３）、
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨ（配列番号２４）、
ＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番号２５）、
ＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号２６）、
ＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号２７）、
ＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ（配列番号２８）、
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡ（配列番号２９）、
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰ（配列番号３０）、
ＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤ（配列番号３１）、
ＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（配列番号３２）、
ＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲ（配列番号３３）、
ＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号３４）、
ＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡ（配列番号３５）、
ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰ（配列番号３６）、
ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧ（配列番号３７）、
ＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳ（配列番号３８）、
ＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴ（配列番号３９）、
ＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡ（配列番号４０）、
ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号４１）、
ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨ（配列番号４２）、
ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番号４３）、
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号４４）、
ＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号４５）、
ＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ（配列番号４６）、
ＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡ（配列番号４７）、
ＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰ（配列番号４８）、
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤ（配列番号４９）、
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（配列番号５０）、
ＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲ（配列番号５１）、
ＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号５２）、
ＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡ（配列番号５３）、
ＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰ（配列番号５４）、
ＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧ（配列番号５５）、
ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳ（配列番号５６）、
ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴ（配列番号５７）、
ＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡ（配列番号５８）、
ＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰ（配列番号５９）、および
ＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰ（配列番号６０）、
に示されるアミノ酸配列からなる群から選択される、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来のアミノ酸配列を有する。さらに、配列番号４１〜６０のいずれかのアミノ酸配列が２回または３回繰り返した配列を含むムチン型タンパク質由来のアミノ酸配列であってもよい。
本発明で用いることのできる高分子担体は、式（Ｉ）で表される基を結合させることができ、かつ結合後以下で述べるような糖転移酵素の作用により式（Ｉ）で表される基の糖残基にさらなる糖残基を転移させることのできるものであれば特に制限はなく、例えば、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するビニル系単量体の重合体または共重合体（上記ビニル系単量体としては、アクリルアミド類、メタクリルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン類、脂肪酸ビニルエステル類などが挙げられる）あるいは保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得るポリエーテル類；保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するシリカ担体、樹脂担体、磁性ビーズまたは金属担体（例えば、以下の式：
で表されるシリカ担体、樹脂担体および磁性ビーズ、金属担体［式中、○は、シリカ、樹脂、磁性ビーズ、金属担体を表す］が挙げられる）；ならびにペプチド合成で使用するＭａｐｓ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｓｔｅｍｓ）法と類似した担体；例えば、以下の式：
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６１）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６２）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６３）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６４）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６５）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６６）、
（式中、Ｒ３はヒドロキシル基またはアミノ基を表し、Ｌｙｓはリジンを表し、Ｃｙｓはシステインを表す）
で表される化合物などが挙げられる。
上記の保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するビニル系単量体の重合体または共重合体は、無置換のビニル系単量体の重合体または共重合体の少なくとも一部を保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基で置換する方法、あるいは保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するビニル系単量体を重合または共重合する方法によって、調製される。
上記のアクリルアミド類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、アクリルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミドやＮ−イソプロピルアク
リルアミドなどのＮ−アルキルアクリルアミドなどが例示される。
上記のメタクリルアミド類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、メタクリルアミド、Ｎ−メチルメタクリルアミドやＮ−エチルメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミドなどのＮ−アルキルメタクリルアミドなどが例示される。
上記のアクリル酸類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、アクリル酸やアクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸ヒドロキシエチル、アクリル酸ジメチルアミノエチルなどのアクリル酸エステルなどが例示される。
上記のメタクリル酸類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、メタクリル酸やメタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル、メタクリル酸ヒドロキシエチル、メタクリル酸ジメチルアミノエチルなどのメタクリル酸エステルなどが例示される。
上記のスチレン類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、スチレン、ｐ−ヒドロキシスチレン、ｐ−ヒドロキシメチルスチレンなどが例示される。
上記の脂肪酸ビニルエステルとしては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、酢酸ビニル、酪酸ビニルなどが例示される。また、本発明中の脂肪酸ビニルエステルの重合体あるいは共重合体には、重合反応後アルカリなどによりエステル結合を全部あるいは一部加水分解したものも含まれる。
上記のポリエーテル類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得るポリエチレングリコール、あるいは保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得るアルキル、アリール基で置換されたポリエチレングリコール等が例示される。
ここでいう高分子担体は水不溶性、水溶性いずれであってもよいが、水溶性の方が好ましい。一般的な分子量は約１００００〜約５００００００であり、好ましくは２００００〜２００００００、より好ましくは５００００〜１００００００である。その形態は、水不溶性担体の場合、ビーズ状、繊維状、膜状、フィルム状などが挙げられるが、特に制限されない。
さらに好ましい担体としては、以下の式：
で表される高分子担体が挙げられる。ここで、ｎは１〜１５の整数であり、好ましくは１〜１０であり、より好ましくは１〜５である。ｘ：ｙの比率は１：０〜１：１０００であり、好ましくは１：０〜１：１００である。高分子担体の分子量は、約１００００〜約５００００００であり、好ましくは２００００〜２００００００、より好ましくは５００００〜１００００００である。
別の好ましい実施形態において、本発明は、以下の式：
Ａ４−Ｎ＝Ｃ（−Ｘ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３ （ＩＩ）
［式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基であり；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し；
Ａ４は、以下の式：
（式中、ｓは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）で表される基である］
で表される化合物を提供する。
別の局面において、本発明は、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）に記載の化合物を含む、糖アミノ酸または糖ペプチドを製造するためのプライマー用組成物を提供する。
糖ペプチドを製造するためのプライマーとして有用な本発明の化合物の合成および精製は、以下の手順：
１）保護アミノ酸（プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む）、予め合成した保護基を有する糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖・アミノ酸保護体）を合成する（必要に応じて、アミノ酸カップリング反応の各工程の後にキャッピング反応、すなわちアミノ酸カップリング未反応物を不活化する反応を行う）；
２）酸処理によって、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを固相担体から遊離させると同時にアミノ酸側鎖の保護基を脱保護する（酸処理によってアミノ酸側鎖の保護基が脱離しない場合は、別途脱保護反応により該保護基を脱保護すればよい）；
３）反応液、もしくはエーテル沈殿法によって得た混合物をＨＰＬＣによって精製し、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖保護体）を単離する；
４）糖鎖の保護基の脱保護をする；
５）ＨＰＬＣで精製し、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを単離する
との手順で行われる。この方法は、糖アミノ酸を含まないペプチドの合成においても、適用可能であり、その場合、４）の工程は省かれる。
このようにして得られた末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドから高分子プライマーの合成および精製は、以下：
６）上記で得られた糖ペプチドと高分子担体とを反応させる；
７）ゲル濾過カラムクロマトグラフィーによって精製し、高分子プライマーを得る、
との手順で行われる。
本発明の化合物の別の一般的な合成および精製は、以下：
１）保護アミノ酸（プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む）、予め合成した保護基を有する糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖・アミノ酸保護体）を合成する（必要に応じて、アミノ酸カップリング反応の各工程の後にキャッピング反応、すなわちアミノ酸カップリング未反応物を不活化する反応を行う）；
２）酸処理によって、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを固相担体から遊離させると同時にアミノ酸側鎖の保護基を脱保護する（酸処理によってアミノ酸側鎖の保護基が脱離しない場合は、別途脱保護反応により該保護基を脱保護すればよい）；
３）糖鎖の保護基の脱保護をする；
４）３）の糖ペプチドを含む反応液に高分子担体を導入して選択的に糖ペプチドと反応させる；
５）担体に結合した糖ペプチドをゲル濾過もしくは透析、限外濾過等によって精製する；
６）担体に結合した糖ペプチドをプロテアーゼにより加水分解し、糖ペプチドを遊離させ、担体を除き、目的の糖ペプチドを単離する、
との手順で行われる。
この手順によれば、各工程を単離せず、ワンポットで高分子プライマーまで導くこどができる。このようにして得られた末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドから高分子プライマーの合成および精製は、以下：
１）保護アミノ酸（プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む）、予め合成した保護基を有する糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖・アミノ酸保護体）を合成する（必要に応じて、アミノ酸カップリング反応の各工程の後にキャッピング反応、すなわちアミノ酸カップリング未反応物を不活化する反応を行う）；
２）酸処理によって、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを固相担体から遊離させると同時にアミノ酸側鎖の保護基を脱保護する（酸処理によってアミノ酸側鎖の保護基が脱離しない場合は、別途脱保護反応により該保護基を脱保護すればよい）；
３）糖鎖の保護基の脱保護をする；
４）３）の糖ペプチドを含む反応液に高分子担体を導入して選択的に糖ペプチドと反応させる；
５）担体に結合した糖ペプチドをゲル濾過もしくは透析、限外濾過等によって精製し、プライマーを得る、
との手順で行われる。
好ましい実施形態において、上記手順１）で使用されるケト酸またはアルデヒド酸は、
以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ （ＩＩＩ）
（式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す）で表される化合物である。
１つの好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）上記項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む（例えば、図１参照）。
本発明で用いる糖転移酵素は、糖ヌクレオチド類を糖供与体として利用できるものであればよいが、好ましい例として、β１，４−ガラクトース転移酵素、α−１，３−ガラクトース転移酵素、β１，４−ガラクトース転移酵素、β１，３−ガラクトース転移酵素、β１，６−ガラクトース転移酵素、α２，６−シアル酸転移酵素、α１，４−ガラクトース転移酵素、セラミドガラクトース転移酵素、α１，２−フコース転移酵素、α１，３−フコース転移酵素、α１，４−フコース転移酵素、α１，６−フコース転移酵素、α１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、α１，６−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、β１，４−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、ポリペプチドＮ−アセチルガラクトサミン転移酵素、β１，４−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，２−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，３−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，６−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、α１，４−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，４−マンノース転移酵素、α１，２−マンノース転移酵素、α１，３−マンノース転移酵素、α１，４−マンノース転移酵素、α１，６−マンノース転移酵素、α１，２−グルコース転移酵素、α１，３−グルコース転移酵素、α２，３−シアル酸転移酵素、α２，８−シアル酸転移酵素、α１，６−グルコサミン転移酵素、α１，６−キシロース転移酵素、βキシロース転移酵素（プロテオグリカンコア構造合成酵素）、β１，３−グルクロン酸転移酵素、ヒアルロン酸合成酵素、他の糖ヌクレオチドを糖ドナーとして用いる糖転移酵素およびドルコールリン酸型糖ドナーを用いる糖転移酵素が挙げられる。
別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（４）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む。さらに、糖ペプチドを単離する工程を含んでいてもよい。本製造法においては、目的の糖ペプチドと担体を含む糖ペプチド以外の副生成物を容易に分離し得る。
さらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（４）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包む。
なおさらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む。
他の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包む。
さらに他の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の
化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；および
（Ｄ）工程（Ｃ）で得た糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む。
なおさらに他の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包む。
別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；および
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程、
を含む。
さらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を含む。
なおさらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む可溶性担体とを反応させ、再沈澱、ゲルろ過、または限外ろ過などにより工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に可溶性結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
（Ｆ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物を、ケト酸またはアルデヒド酸を表面に結合した非可溶性担体と反応させ、その表面に固定する工程；および
（Ｇ）必要に応じ糖鎖の伸長反応に使用した試薬および酵素を除去する工程、
を含む。
さらにまた別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む可溶性担体とを反応させ、再沈澱、ゲルろ過、または限外ろ過などにより工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に可溶性結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
（Ｆ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物を、ケト酸またはアルデヒド酸を表面に結合した非可溶性担体と反応させ、その表面に固定する工程；
（Ｇ）必要に応じ糖鎖の伸長反応に使用した試薬および酵素を除去する工程；および
（Ｈ）工程（Ｆ）で固定化した糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を含む。
本発明の糖ペプチドの製造方法において、前述の糖転移酵素を用いた一連の反応は、必要に応じて、反応部の温度制御が可能な分注装置（分注器）等を用いて自動化して行うことができる。
（ムチン型糖ペプチド）
本発明は、上で説明した新規プライマーおよびこれを使用した糖ペプチドの製造方法により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類を合成することができる。ムチン型糖ペプチド類の例としては、以下の式：
（配列番号２０）
（配列番号４０）
または
（配列番号４１）
（式中、Ｘ１〜Ｘ５は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
で表される化合物［式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、単糖または糖鎖を表す；Ａｃはアセチル］を表し；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す）で表される糖ペプチドが挙げられる。
上記Ｒ１およびＲ２が糖鎖を表す場合、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、以下：
からなる群から選択される。
（医薬およびそれを用いる治療、予防など）
別の局面において、本発明は、本発明の製造方法によって得られた糖ペプチド（例えば、ムチン型糖ペプチド）を含む医薬（例えば、ワクチン等の医薬品、健康食品、残さタンパク質又は脂質は抗原性を低減した医薬品）に関する。この医薬は、薬学的に受容可能なキャリアなどをさらに含み得る。本発明の医薬に含まれる薬学的に受容可能なキャリアとしては、当該分野において公知の任意の物質が挙げられる。
そのような適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的アジュバント挙げられるがそれらに限定されない。代表的には、本発明の医薬は、単離された多能性幹細胞、またはその改変体もしくは誘導体を、１つ以上の生理的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤とともに含む組成物の形態で投与される。例えば、適切なビヒクルは、注射用水、生理的溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらには、非経口送達のための組成物に一般的な他の物質を補充することが可能である。
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性であり、そして以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））。
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０−８．５のＴｒｉｓ緩衝剤またはｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。
本発明の医薬は、経口的または非経口的に投与され得る。あるいは、本発明の医薬は、静脈内または皮下で投与され得る。全身投与されるとき、本発明において使用される医薬は、発熱物質を含まない、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学的に受容可能な組成物の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業者は、容易に行うことができる。本明細書において、投与方法は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内投与、患部への局所投与、皮膚投与など）であり得る。そのような投与のための処方物は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。
本発明の医薬は、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤（日本薬局方第１４版またはその最新版、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０などを参照）と、本発明の製造方法によって得られた、所望の程度の純度を有する糖ペプチド（例えば、ムチン型糖ペプチド）を含む組成物とを混合することによって、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態で調製され保存され得る。
本発明の処置方法において使用される糖ペプチド（例えば、ムチン型糖ペプチド）を含む組成物の量は、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明の処置方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）の投与が挙げられる。１週間−１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。
以上のように本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明はこの実施形態に限定して理解されるべきものではない。本発明は、特許請求なお範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施できることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきである。
本明細書で用いられる略語は、以下のような意味を有する。
以下の実施例より本研究をさらに詳細に説明するが、本研究はこれらに限定されるものではない。
本実施例で用いられる略語は、以下の様な意味を有する。
ＤＭＦ ＝ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ＤＣＭ ＝ ジクロロメタン、
ＨＯＢＴ ＝ Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
ＨＢＴＵ＝１−（ビス（ジメチルアミノ）メチレン）−ベンゾトリアゾリウム ３−オキシド ヘキサフルオロリン酸塩、
ＤＩＥＡ ＝ ジイソプロピルエチルアミン、
Ｂｏｃ基＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、
Ｆｍｏｃ基＝９−フルオレニルメトキシカルボニル基、
Ｐｂｆ基＝２，２，４，６，７ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル基、
Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アラニン、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グリシン、
Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリン、
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎγ−（２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル）−Ｌ−アルギニン、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸 β−ｔ−ブチルエステル、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸 β−ｔ−ブチルエステル、
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−バリン、
Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ｉｍ−トリチル−Ｌ−ヒスチジン、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−トレオニン、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−セリン、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｌ−トレオニン、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｌ−セリン、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−｛Ｏ−（２’，３，’４，’６’−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１’→３）−Ｏ−［２”−アセトアミド−３”，４”，６”−トリ−Ｏ−アセチル−２”−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１”→６）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−Ｌ−スレオニン、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−｛Ｏ−（２’，３，’４，’６’−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１’→３）−Ｏ−［２”−アセトアミド−３”，４”，６”−トリ−Ｏ−アセチル−２”−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１”→６）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−Ｌ−セリン、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ６）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−［Ｏ−（２”−アセトアミド−３”，４”，６”−トリ−Ｏ−アセチル−２”−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１”→６）−２−アセトアミド−４，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル］−Ｌ−スレオニン、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ６）−ＯＨ ＝ Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−［Ｏ−（２”−アセトアミド−３”，４”，６”−トリ−Ｏ−アセチル−２”−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１”→６）−２−アセトアミド−４，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル］−Ｌ−セリン。
（実施例１：Ｎ末端にケトン誘導体を有するＭＵＣ１関連糖ペプチド誘導体（１）〜（１２）の合成）
（１．１ 化合物（１）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、１０％アセトニトリル水溶液に溶解し逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの５％から６０％のグラジエント）により精製して化合物（１）を８．５ｍｇ得た（収率２８％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２３６０．５、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２３６２．４）。
（１．２ 化合物（２）の合成）
化合物（１）をメタノール７ｍｌに溶解し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを１２．０に調整した。随時０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを調節しながら、反応終了まで２時間撹拌した。反応終了後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの０％から６０％のグラジエント）により精製して化合物（２）を２．２ｍｇ得た（収率８１％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０６６．２、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０６８．１）。
（１．３ 化合物（３）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（３）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、１０％アセトニトリル水溶液に溶解し固体を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの１０％から７０％のグラジエント）により精製して化合物（３）を１６ｍｇ得た（収率１８％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０１８．３４０、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０２１．０）。
（１．４ 化合物（４）の合成）
化合物（３）をメタノール５ｍｌに溶解し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを１２．０に調整した。随時０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを調節しながら、反応終了まで２時間撹拌した。反応終了後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの０％から６０％のグラジエント）により精製して化合物（４）を６．８ｍｇ得た（収率６２％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４７２．９５２、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４７４．５）。
（１．５ 化合物（５）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（５）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、１０％アセトニトリル水溶液に溶解し固体を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの１０％から７０％のグラジエント）により精製して化合物（５）を９．８ｍｇ得た（収率７％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０１８．４、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０２１．０）。
（１．６ 化合物（６）の合成）
化合物（５）をメタノール５ｍｌに溶解し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを１２．０に調整した。随時０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを調節しながら、反応終了まで２時間撹拌した。反応終了後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの０％から６０％のグラジエント）により精製して化合物（６）を４．４ｍｇ得た（収率５６％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４７２．９５２、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４７４．５）。
（１．７ 化合物（７）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（７）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、１０％アセトニトリル水溶液に溶解し固体を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの１０％から７０％のグラジエント）により精製して化合物（７）を１１．３ｍｇ得た（収率１２％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０１８．６０２、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０２１．０）。
（１．８ 化合物（８）の合成）
化合物（７）をメタノール５ｍｌに溶解し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを１２．０に調整した。随時０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを調節しながら、反応終了まで２時間撹拌した。反応終了後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの０％から６０％のグラジエント）により精製して化合物（８）を５．６ｍｇ得た（収率６２％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４７３．３２８、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４７４．５）。
（１．９ 化合物（９）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ６）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（９）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、１０％アセトニトリル水溶液に溶解し固体を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの１０％から７０％のグラジエント）により精製して化合物（９）を１７ｍｇ得た（収率１７％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３０６．３、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３０８．３）。
（１．１０ 化合物（１０）の合成）
化合物（９）をメタノール５ｍｌに溶解し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを１２．０に調整した。随時０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを調節しながら、反応終了まで２時間撹拌した。反応終了後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの０％から６０％のグラジエント）により精製して化合物（１０）を５．６ｍｇ得た（収率４０％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２６７５．５、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２６７７．７）。
（１．１１ 化合物（１１）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ６）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ６）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１１）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、１０％アセトニトリル水溶液に溶解し固体を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの１０％から７０％のグラジエント）により精製して化合物（１１）を２４ｍｇ得た（収率２２％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５９３．４、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５９４．５）。
（１．１２ 化合物（１２）の合成）
化合物（３）をメタノール５ｍｌに溶解し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを１２．０に調整した。随時０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを調節しながら、反応終了まで２時間撹拌した。反応終了後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ２０×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの０％から６０％のグラジエント）により精製して化合物（１２）を６．２ｍｇ得た（収率３１％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８７９．５９７、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８８０．９）。
（実施例２：Ｎ末端にケトン誘導体を有するＭＵＣ１関連糖ペプチド誘導体に対する糖転移反応およびプロテアーゼによる選択的切断反応）
（２．１ 化合物（１３）、（１４）の合成）
２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）、０．２０Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），１ｍＭ 糖ペプチド誘導体（２）を含む５０μｌの反応液を２５℃で４５分間攪拌した。反応液の一部を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの５％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（１３）を得た［転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。転移化合物の同定はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって化合物（１３）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２２８．６、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２３０．３）を確認することで行った。
上述の反応液１０μｌにバシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のグルタミン酸残基特異的なプロテアーゼ（ＢＬａｓｅ：塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液２μｌを加え、２５℃で４５分間攪拌した。転移化合物の同定は反応液をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって分析し、化合物（１４）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１８４０．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１８４１．９）を確認することで行った。
（２．２ 化合物（１５）、（１６）の合成）
２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，７４ｍＵ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１７．５ｍＵ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、５ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、１ｍＭ 糖ペプチド誘導体（１３）を含む５０μｌの反応液を２５℃で４時間攪拌した。反応液の一部を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの５％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（１５）を得た［転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。転移化合物の同定はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって化合物（１５）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８１１．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８１２．８）を確認することで行った。
上述の反応液５μｌにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２５℃で１４時間攪拌した。反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの５％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（１６）を得た［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。転移化合物の同定はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって化合物（１６）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４２３．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４２４．４）を確認することで行った。
（実施例３：糖ペプチド合成用高分子プライマーの合成と糖鎖伸長反応）
（３．１ 化合物（１８）、（Ａ）の合成）
２．５ｍＭ 糖ペプチド誘導体（２）、５ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）、１２．５ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）の反応液３６０μｌを室温で８時間攪拌した。反応液をゲルろ過［Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−４：溶出液２５ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）］で精製し、化合物（１８）の凍結乾燥体４．２ｍｇを得た［化合物（２）の捕捉率９５％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。
得られた糖ペプチド誘導体化合物（１８）の５ｍＭ水溶液５μｌを分取し、これにミリＱ水１９μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（１７７）を得た［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（Ａ）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１６７８．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１６７９．７）。
（３．２ 化合物（１９）、（１４）、（Ｂ）、（１６）の合成）
２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）、０．２０Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），１ｍＭ 糖ペプチド誘導体（１８）を含む５０μｌの反応液を２５℃で３０分間攪拌して化合物（１９）を含む反応液を得た。反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２５℃で攪拌した。反応液をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ分析し、化合物（１４）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１８４１．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１８４１．９）を確認した。
５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、１０ｍＭ 塩化マンガン、化合物（１８）と化合物（１９）の混合物１ｍＭ（１８＋１９：推定）を含む２００μｌの混合液を、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．２０Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）を含む３００μｌの混合液へ添加し（総量５００μｌ）２５℃で２時間攪拌した。この反応液のうち４００μｌを、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液、５ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、７４ｍＵ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１７．５ｍＵ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）を含む２００μｌ混合液へ添加して（総量６００μｌ）２５℃で６時間以上攪拌することによって化合物（Ｂ）を含む反応液を得た。転移化合物および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント））により精製して化合物（１６）を得ることにより行った。化合物（２５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４２３．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４２４．４）。
（３．３ 化合物（２０）、（２１）の合成）
２．５ｍＭ 糖ペプチド誘導体（４）、５ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）の反応液８００μｌを１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ５．１とし、室温で１８時間攪拌した。反応液をゲルろ過［Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−４：溶出液２５ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）］で精製し、化合物（２０）の凍結乾燥体４．２ｍｇを得た［化合物（４）の捕捉率９５％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。
糖ペプチド誘導体化合物（２０）の５ｍＭ水溶液５μｌを分取し、これにミリＱ水１９μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント））により精製して化合物（２１）を得た。［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（２１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８５．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８６．１）。
（３．４ 化合物（２２）〜（２５）の合成）
反応部の温度制御が可能な分注装置を用いて以下の糖転移酵素を用いた一連の反応を自動化して行った。
５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．２０Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），１ｍＭ 糖ペプチド誘導体（１８）を含む５００μｌの反応液を２５℃で２時間反応させ化合物（２２）を含む反応液を得た［転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。転移化合物および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（２４）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（２４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４８．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４８．２）。一方、ガラクトース転移反応後の反応液を４００μｌ分取し、５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）２０μｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液６０μｌ，３．７Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１２μｌ、０．８８Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１２μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）６０μｌ，ミリＱ水３６μｌの混合液（総量２００μｌ）を加え、２５℃で４時間させて化合物（２３）を含む反応液を得た［転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。転移化合物および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（２５）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（２５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２９．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８３０．８）。
（３．５ 化合物（２６）、（２７）の合成）
２．５ｍＭ 糖ペプチド誘導体（６）、５ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）の反応液３２４μｌを１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ５．３とし、室温で５時間攪拌した。反応液をゲルろ過［Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−４：溶出液２５ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）］で精製し、化合物（２６）の凍結乾燥体３．７ｍｇを得た［化合物（６）の捕捉率９５％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。
糖ペプチド誘導体化合物（２６）の５ｍＭ水溶液５μｌを分取し、これにミリＱ水１９μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント））により精製して化合物（２７）を得た。［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（２７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８４．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８６．１）。
（３．６ 化合物（２８）〜（３１）の合成）
反応部の温度制御が可能な分注装置を用いて以下の糖転移酵素を用いた一連の反応を自動化して行った。
５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．２０Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），１ｍＭ 糖ペプチド誘導体（２６）を含む５００μｌの反応液を２５℃で２時間反応させ、化合物（２８）を含む反応液を得た［転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。転移化合物（２８）および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（３０）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（３０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４７．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４８．２）。また、ガラクトース転移反応後の反応液を４００μｌ分取し、５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）２０μｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液６０μｌ，３．７Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１２μｌ、０．８８Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１２μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）６０μｌ，ミリＱ水３６μｌの混合液（総量２００μｌ）を加え、２５℃で４時間反応させ、化合物（２９）を含む反応液を得た［転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。転移化合物（２９）および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（３１）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（３１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２７．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８３０．８）。
（３．７ 化合物（３２）、（３３）の合成）
３．３ｍＭ 糖ペプチド誘導体（８）、６．７ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）の反応液３２４μｌを１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ５．０とし、室温で６時間攪拌した。反応液をゲルろ過［Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−４：溶出液２５ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）］で精製し、化合物（３２）の凍結乾燥体５．６ｍｇを得た［化合物（８）の捕捉率９５％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。
糖ペプチド誘導体化合物（３２）の５ｍＭ水溶液５μｌを分取し、これにミリＱ水１９μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント））により精製して化合物（３３）を得た。［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（３３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８５．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８６．１）。
（３．８ 化合物（３４）〜（４１）の合成）
反応部の温度制御が可能な分注装置を用いて以下の糖転移酵素を用いた一連の反応を自動化して行った。
５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．２０Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），１ｍＭ 糖ペプチド誘導体（３２）を含む７００μｌの反応液を２５℃で２時間反応させた。転移化合物（３４）および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から１５％のグラジエント）により精製して化合物（３８）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）、転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（３８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４６．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４８．２）。また、ガラクトース転移反応後の反応液を３００μｌ分取し、５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１５μｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液４５μｌ，０．８８Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）９μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）４５μｌ，ミリＱ水３６μｌの混合液（総量１５０μｌ）に加え、２５℃で４時間反応させた。転移化合物（３５）および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から１５％のグラジエント）により精製して化合物（３９）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）、転移率８５％以上（ＨＰＬＣ）］。また、未反応化合物（３４）に由来する化合物（３８）が１０％程度得られた。化合物（３９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５３７．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５３９．５）。続いて、α２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素反応後の反応液を２００μｌ分取し、５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１０μｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液１０μｌ，３．７Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）６μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）３０μｌ，ミリＱ水４４μｌの混合液（総量１００μｌ）を加え、２５℃で６時間反応させた。転移化合物（３７）および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から１５％のグラジエント）により精製して化合物（４１）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）、転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（４１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２８．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８３０．８）。
一方、ガラクトース転移反応後の反応液を別途３００μｌ分取し、５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１５μｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液４５μｌ，３．７Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）９μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）４５μｌ，ミリＱ水３６μｌの混合液（総量１５０μｌ）に加え、２５℃で４時間反応させた。転移化合物（３６）および転移率の同定は糖転移反応液２０μｌを分取し、これにミリＱ水４μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から１５％のグラジエント）により精製して化合物（４０）を得ることにより行った［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）、転移率８５％以上（ＨＰＬＣ）］。また、化合物（４１）が１０％程度得られた事から、シアル酸転移反応の際、モノシアリル化体（３６）と同時にジシアリル化体（４１）が１０％程度生成することが確認された。化合物（４０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５３８．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５３９．５）。続いて、α２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素反応後の反応液を２００μｌ分取し、５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１０μｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液１０μｌ，０．８８Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）６μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）３０μｌ，ミリＱ水４４μｌの混合液（総量１００μｌ）を加え、２５℃で６時間攪拌した。転移化合物（３７）および転移率の同定は概記の方法に従ってＢＬａｓｅ処理体（４１）の確認により行った。［収率９０％以上（ＨＰＬＣ）、転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（４１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２８．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８３０．８）
（３．９ 化合物（４２）、（４３）の合成）
３．３ｍＭ 糖ペプチド誘導体（１０）、６．７ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）の反応液３６０μｌを１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ５．３とし、室温で６時間攪拌した。反応液をゲルろ過［Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−４：溶出液２５ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）］で精製し、化合物（４２）の凍結乾燥体７．０ｍｇを得た［化合物（１０）の捕捉率９５％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。
実施例（３．７）と同様に化合物（４２）に対するＢＬａｓｅ反応を行い、化合物（４３）を得た［反応率９０％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。転移化合物の同定はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって化合物（４３）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２８７．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２８９．３）を確認することで行った。
（３．１０ 化合物（４４）〜（５１）の合成）
実施例（３．８）の操作に従い、化合物（４４）、（４５）、（４６）、および（４７）を（３．１０ 化合物（４４）〜（５１）の合成）に示した連続反応により調製した。生成物および糖転移反応率の確認はＢＬａｓｅによるペプチド鎖の特的切断反応により得られた化合物（４８）、（４９）、（５０）、および（５１）をそれぞれ以下のとおり逆相ＨＰＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ分析することによって行った。
化合物（４８）：収率９０％以上、転移率９５％以上、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２６１２．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２６１３．６。
化合物（４９）：収率９０％以上、転移率９０％以上［未反応化合物（４４）に由来する化合物（４８）が５％程度確認された］、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９０３．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９０４．８）。
化合物（５０）：収率９０％以上、転移率９５％以上、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１９４．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１９６．１）。
化合物（５１）：収率９０％以上、転移率９５％以上、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４９３．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４８７．３）。
（３．１１ 化合物（５２）、（５３）の合成）
２．５ｍＭ 糖ペプチド誘導体（１２）、５．０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）の反応液４００μｌを１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ５．３とし、室温で６時間攪拌した。反応液をゲルろ過［Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−４：溶出液２５ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）］で精製し、化合物（５２）の凍結乾燥体６．３ｍｇを得た［化合物（１２）の捕捉率９５％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。
実施例（３．７）と同様に化合物（５２）に対するＢＬａｓｅ反応を行い、化合物（５３）を得た［反応率９０％以上（ＧＰＣ−ＨＰＬＣ）］。転移化合物の同定はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって化合物（５３）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４９０．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４９２．５）を確認することで行った。
（３．１２ 化合物（５４）〜（６１）の合成）
実施例（３．８）の操作に従い、化合物（５４）、（５５）、（６６）、および（５７）を（３．１０ 化合物（４４）〜（５１）の合成）に示した連続反応により調製した。生成物および糖転移反応率の確認はＢＬａｓｅによるペプチド鎖の特的切断反応により得られた化合物（５８）、（５９）、（６０）、および（６１）をそれぞれ以下のとおり逆相ＨＰＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ分析することによって行った。
化合物（５８）：収率９０％以上、転移率９５％以上、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９７６．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９７８．９。
化合物（５９）：収率９０％以上、転移率９５％以上、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［
Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２６８．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７０．２）。
化合物（６０）：収率９０％以上、転移率９５％以上、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５７．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５２．７）。
化合物（６１）：収率９０％以上、転移率９５％以上、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１４７．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１４３．９）。
（３．１３ ワンポット反応を用いた化合物（６２）〜（６９）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ６）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち６１．３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ相当）を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（６２）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール２．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液４０μｌを添加し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）２ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液を添加し、室温で１０時間攪拌させて化合物（６３）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、２．５ｍｌの反応液（６．２５μｍｏｌ相当）を限外濾過フィルター３０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に約４００μｌへ濃縮した。そこへ６２５μｌの水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（６４）とした。
上記の１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（６４）３μｌを分取し、これに酢酸アンモニウム緩衝液１１μｌ、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２５℃で１０分間攪拌した。反応液をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって分析し［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８５．１）を確認することによって化合物（６７）の生成を確認した。
５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．２０Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），１ｍＭ 糖ペプチド誘導体（６４）を含む１００μｌの反応液を２５℃で２時間反応させた。反応液の一部をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって分析し、［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４０８．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４０９．４）を確認することによって化合物（６８）の生成を確認した。一方、ガラクトース転移反応後の反応液を６０μｌ分取し、５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）２μｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液２μｌ，３．７Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１．２μｌ、０．８８Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１．２μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）６μｌ，ミリＱ水７．６μｌの混合液（総量２０μｌ）を加え、２５℃で反応させた。以上のガラクトース転移反応からの反応を２バッチ行い、シアル酸転移反応後混合した。この反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ ３０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、ＵＦＣ３ＬＴＫＯＯ）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子（６６）を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（６６）水溶液を得た。その後、化合物（６６）を含むフィルター保持液にＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液２μｌを加え、再び限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ ３０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、ＵＦＣ３ＬＴＫＯＯ）で遠心濾過した。得られた濾液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３ ４．６×２５０ｍｍカラム、移動層Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（６９）を得た［転移率９５％以上（ＨＰＬＣ）］。化合物（６９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２８９．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２８３．１）。
（３．１４ 樹脂担体を用いた化合物（７０）〜（７８）、（２１）、（２４）、（２５）の合成）
Ａｍｉｎｏ ＰＥＧＡ ｒｅｓｉｎ（ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製）５０ｍｇ（３μｍｏｌアミノ基相当）を担体としてＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法でＢｏｃ−ａｍｉｎｏ-ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄとカップリングした。得られた樹脂を５０％ＴＦＡ水溶液中、室温で１時間攪拌してＢｏｃ保護基を脱離させ、樹脂を水洗、さらに５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）で洗浄して未乾燥化合物（７０）８５ｍｇを得た。この未乾燥樹脂（７０）６２ｍｇ（２．２μｌ）を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）４０μｌへスラリー化させ、さらに５ｍＭ化合物（４）水溶液４０μｌ（合成法上記参照）を添加した。室温で１９時間攪拌した後、樹脂を濾別し、得られた樹脂を２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄して未乾燥化合物（７１）７７ｍｇを得た。この化合物の同定は、樹脂（７１）の一部を２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）にスラリー化させ、そこへＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液２μｌを加えて１時間攪拌し、反応液の上澄み液をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって分析して化合物（２１）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８５．７、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２０８６．１）を確認することによって行った。
この得られた未乾燥化合物（７１）に対して５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）５０μｌ、４Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）２５μｌ、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ、シグマ社製）水溶液５０μｌ、１００ｍＭ 塩化マンガン５０μｌ、５０ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）５０μｌ、ミリＱ水２７５μｌの混合液（総量５００μｌ）を添加して２５℃で２時間攪拌した。その後反応液に５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１０μｌ、３．７Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１２μｌ、０．８８Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１２μｌ、５０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）６０μｌ，ミリＱ水６μｌの混合液（総量１００μｌ）を添加して１８時間攪拌した。その後０．８８Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１２μｌをさらに添加し、３時間攪拌後、反応液スラリー１５０μｌをフィルターで濾別し、得られた樹脂を２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、５０％アセトニトリル水溶液、さらに２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄した。この樹脂の一部を２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）５０μｌにスラリー化させ、そこへＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液３μｌを加えて攪拌した。反応液の上澄み液をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳによって分析し、化合物（２４）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４７．６、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２２４８．２）、化合物（７７）もしくは化合物（７８）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５３８．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５３９．５）、化合物（２５）に由来する［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８３０．１、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８３０．８）を確認した。
（３．１５ ワンポット反応を用いた化合物（７９）〜（８１）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち０．０１ｍｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２．５時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（７９）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、３時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸水溶液を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液１ｍｌを添加し、室温で２４時間攪拌させて化合物（８０）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．０ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（８１）とした。高分子（８１）の同定は、以下の（３．２１）において生成物（１０２）が得られることによって行った。
（３．１６ ワンポット反応を用いた化合物（８２）〜（８４）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち０．０１ｍｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２．５時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（８２）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、３時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸水溶液を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液１ｍｌを添加し、室温で２４時間攪拌させて化合物（８３）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．０ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（８４）とした。高分子（８４）の同定は、以下の（３．２２）において生成物（１１３）が得られることによって行った。
（３．１７ ワンポット反応を用いた化合物（８５）〜（８７）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち０．０１ｍｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２．５時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（８５）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、３時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸水溶液を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液１ｍｌを添加し、室温で２４時間攪拌させて化合物（８６）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．０ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（８７）とした。高分子（８７）の同定は、以下の（３．２３）において生成物（１２４）が得られることによって行った。
（３．１８ ワンポット反応を用いた化合物（８８）〜（９０）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち０．０１ｍｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２．５時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（８８）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、２時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸水溶液を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液１ｍｌを添加し、室温で２４時間攪拌させて化合物（８９）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．０ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（９０）とした。高分子（９０）の同定は、以下の（３．２４）において生成物（１３５）が得られることによって行った。
（３．１９ ワンポット反応を用いた化合物（９１）〜（９３）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち０．０１ｍｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２．５時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（９１）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、３時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸水溶液を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液１ｍｌを添加し、室温で２４時間攪拌させて化合物（９２）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．０ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（９３）とした。高分子（９３）の同定は、以下の（３．２５）において生成物（１４６）が得られることによって行った。
（３．２０ ワンポット反応を用いた化合物（９４）〜（９６）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち０．０１ｍｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２．５時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（９４）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、３時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸水溶液を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液１ｍｌを添加し、室温で２４時間攪拌させて化合物（９５）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．０ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（９６）とした。高分子（９６）の同定は、以下の（３．２６）において生成物（１５７）が得られることによって行った。
（３．２１ （９７）〜（１０７）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（８１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｂ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｃ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｄ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｅ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、４ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，００
０ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（９７）〜（１０１）の水溶液を各々得た。その後、化合物（９７）〜（１０１）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（８１）水溶液１００μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１０２）〜（１０７）を得た。化合物（１０２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８２．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８１．９）、化合物（１０３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４４．７（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４３．９）、化合物（１０４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．７（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．０）、化合物（１０５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１０６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．５（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１０７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．１）。
（３．２２ （１０８）〜（１１８）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃２４時間反応させた。
Ａ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（８４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｂ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｃ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｄ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｅ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、４ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，００
０ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（１０８）〜（１１２）の水溶液を各々得た。その後、化合物（１０８）〜（１１２）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（８４）水溶液１００μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１１３）〜（１１８）を得た。化合物（１１３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８２．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８１．９）、化合物（１１４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４４．７（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４３．９）、化合物（１１５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．０）、化合物（１１６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．５（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１１７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．５（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１１８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．１）。
（３．２３ （１１９）〜（１２９）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃２４時間反応させた。
Ａ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（８７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｂ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｃ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｄ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｅ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、４ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（８７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，００
０ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（１１９）〜（１２３）の水溶液を各々得た。その後、化合物（１１９）〜（１２３）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（８７）水溶液１００μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１２４）〜（１２９）を得た。化合物（１２４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８２．２（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８１．９）、化合物（１２５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４４．５（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４３．９）、化合物（１２６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．４（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．０）、化合物（１２７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．４（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１２８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１２９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．１（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．０）。
（３．２４ （１３０）〜（１４０）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃２４時間反応させた。
Ａ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（９０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｂ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｃ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｄ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｅ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、４ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，００
０ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（１３０）〜（１３４）の水溶液を各々得た。その後、化合物（１３０）〜（１３４）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（９０）水溶液１００μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１３５）〜（１４０）を得た。化合物（１３５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８２．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８１．９）、化合物（１３６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４４．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４３．９）、化合物（１３７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．０）、化合物（１３８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１３９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．４（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１４０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．１）。
（３．２５ （１４１）〜（１５１）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃２４時間反応させた。
Ａ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（９３）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｂ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９３）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｃ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９３）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｄ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９３）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｅ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、４ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９３）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，００
０ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（１４１）〜（１４５）の水溶液を各々得た。その後、化合物（１４１）〜（１４５）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（９３）水溶液１００μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１４６）〜（１５１）を得た。化合物（１４６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８２．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８１．９）、化合物（１４７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４４．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４３．９）、化合物（１４８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．０）、化合物（１４９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．４（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１５０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１５１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．１）。
（３．２６ （１５２）〜（１６２）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃２４時間反応させた。
Ａ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（９６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｂ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｃ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｄ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液；
Ｅ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、４ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（９６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，００
０ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（１５２）〜（１５６）の水溶液を各々得た。その後、化合物（１５２）〜（１５６）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（９６）水溶液１００μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１５７）〜（１６２）を得た。化合物（１５７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８２．３（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８８１．９）、化合物（１５８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４４．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４３．９）、化合物（１５９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１７３．０）、化合物（１６０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．５（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１６１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．５（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３３５．０）、化合物（１６２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．２（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２６．１）。
（３．２７．１ ワンポット反応を用いた化合物（１６３）〜（１６５）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１２ｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ３ＧａｌＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ６）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、樹脂を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１６３）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール６．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、３時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、Ｈ＋型陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８（ダウケミカル社製）を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）３．０ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液３０ｍｌを添加し、室温で１４時間攪拌させて化合物（１６４）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｐ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．５ｍｌになるように水を加えることによって２０ｍＭ（固相合成からの糖ペプチド理論含量）高分子（１６５）とした。高分子（１６５）の同定は、以下の（３．２８）において生成物（１７１）が得られることによって行った。
（３．２７．２ （１６６）〜（１７６）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（１６５）（固相合成からの理論含量で８ｍＭ）を含む１５０μｌの反応液；Ｂ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１６５）（固相合成からの理論含量で８ｍＭ）を含む１５０μｌの反応液；
Ｃ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、５ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１６５）（固相合成からの理論含量で８ｍＭ）を含む１５０μｌの反応液；
Ｄ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０７４Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、５ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１６５）（固相合成からの理論含量で８ｍＭ）を含む１５０μｌの反応液；
Ｅ） ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０７４Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、５ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１６５）（固相合成からの理論含量で８ｍＭ）を含む１５０μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，００
０ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（１６６）〜（１７０）の水溶液を各々得た。その後、化合物（１６６）〜（１７０）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（１６５）水溶液６０μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液０．７５μｌを加え、２時間２５℃で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ-ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１７１）〜（１７６）を得た。化合物（１７１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２８８．０（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２８８．０）、化合物（１７２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６１２．５（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６１２．１）、化合物（１７３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５７９．６（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５７９．１）、化合物（１７４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９０３．２（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９０３．２）、化合物（１７５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１９４，２（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１９４．３）、化合物（１７６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４８５．２（理論値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４８５．４）。
（３．２８ 分注装置を用いた（９７）〜（１６２）のコンビナトリアル合成）
上記の（９７）〜（１６２）の化合物は分注装置を用いた自動合成を行うことができた。
下記のＰ１〜Ｐ６、Ｅ１〜Ｅ３、Ｂ１溶液を用意し、庫内温度が２５℃に設定されたＨｉｔａｃｈｉ Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ Ｌ−７２５０へ図２のようにセットした。
Ｐ１：６．６７ｍＭ 化合物（８７）（固相合成からの理論濃度）、１６．７ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｐ２：６．６７ｍＭ 化合物（９６）（固相合成からの理論濃度）、１６．７ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｐ３：６．６７ｍＭ 化合物（８４）（固相合成からの理論濃度）、１６．７ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｐ４：６．６７ｍＭ 化合物（９０）（固相合成からの理論濃度）、１６．７ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｐ５：６．６７ｍＭ 化合物（９３）（固相合成からの理論濃度）、１６．７ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｐ６：６．６７ｍＭ 化合物（８１）（固相合成からの理論濃度）、１６．７ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｅ１：２０ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．１％ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｅ２：２０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、０．１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．１％ ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｅ３：２０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、０．１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．１％ ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、
Ｂ１：０．１％ ＢＳＡ、を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）。
Ｈｉｔａｃｈｉ Ｄ−７０００ ＨＰＬＣシステムによるプログラムに従って、Ｐ１〜Ｐ６、Ｅ１〜Ｅ３、Ｂ１からＲ１〜Ｒ３０へ下記の（ａ）〜（ｅ）の反応組成になるよう分注、反応仕込みを行った。
（ａ）Ｒ１〜Ｒ６：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（Ｒ１：（８７）、Ｒ２：（９６）、Ｒ３：（８４）、Ｒ４：（９０）、Ｒ５：（９３）、Ｒ６：（８１））（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液； （ｂ）Ｒ７〜Ｒ１２：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（Ｒ７：（８７）、Ｒ８：（９６）、Ｒ９：（８４）、Ｒ１０：（９０）、Ｒ１１：（９３）、Ｒ１２：（８１））（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液； （ｃ）Ｒ１３〜Ｒ１８：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（Ｒ１３：（８７）、Ｒ１４：（９６）、Ｒ１５：（８４）、Ｒ１６：（９０）、Ｒ１７：（９３）、Ｒ１８：（８１））（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液； （ｄ）Ｒ１９〜Ｒ２４：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（Ｒ１９：（８７）、Ｒ２０：（９６）、Ｒ２１：（８４）、Ｒ２２：（９０）、Ｒ２３：（９３）、Ｒ２４：（８１））（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液； （ｅ）Ｒ２５〜Ｒ３０ ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（Ｒ２５：（８７）、Ｒ２６：（９６）、Ｒ２７：（８４）、Ｒ２８：（９０）、Ｒ２９：（９３）、Ｒ３０：（８１））（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む２５０μｌの反応液。
分注後、２５℃でそのまま２４時間反応させた。反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ移し、遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（９７）〜（１０１）、（１０８）〜（１１２）、（１１９）〜（１２３）、（１３０）〜（１３４）、（１４１）〜（１４５）、（１５２）〜（１５６）の水溶液を各々得た。その後、化合物（９７）〜（１０１）、（１０８）〜（１１２）、（１１９）〜（１２３）、（１３０）〜（１３４）、（１４１）〜（１４５）、（１５２）〜（１５６）を含むフィルター保持液１５０μｌ、さらに（８１）、（８４）、（８７）、（９０）、（９３）、（９６）の水溶液１００μｌを２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）で１５０μｌに希釈した各々の溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ １０，０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（１０２）〜（１０７）、（１１３）〜（１１８）、（１２４）〜（１２９）、（１３５）〜（１４０）、（１４６）〜（１５１）、（１５７）〜（１６２）を得た。
（３．２９ ワンポット反応を用いた化合物（１７７）〜（１７９）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５μｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１７７）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１７８）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１７９）とした。高分子（１７９）の同定は、以下の（３．５３）において生成物（２５４）が得られることによって行った。
（３．３０ ワンポット反応を用いた化合物（１８０）〜（１８２）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１８０）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１８１）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１８２）とした。高分子（１８２）の同定は、以下の（３．５４）において生成物（２６５）が得られることによって行った。
（３．３１ ワンポット反応を用いた化合物（１８３）〜（１８５）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１８３）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１８４）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１８５）とした。高分子（１８５）の同定は、以下の（３．５５）において生成物（２７６）が得られることによって行った。
（３．３２ ワンポット反応を用いた化合物（１８６）〜（１８８）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１８６）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１８７）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１８８）とした。高分子（１８８）の同定は、高分子（１８８）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３０）が得られることによって行った。
化合物（４３０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２６９．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２６８．３）。
（３．３３ ワンポット反応を用いた化合物（１８９）〜（１９１）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１８９）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１９０）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１９１）とした。高分子（１９１）の同定は、高分子（１９１）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３１）が得られることによって行った。
化合物（４３１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６３．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６１．９）。
（３．３４ ワンポット反応を用いた化合物（１９２）〜（１９４）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１９２）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１９３）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１９４）とした。高分子（１９４）の同定は、以下の（３．５６）において生成物（２８７）が得られることによって行った。
（３．３５ ワンポット反応を用いた化合物（１９５）〜（１９７）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１９５）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１９６）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１９７）とした。高分子（１９７）の同定は、以下の（３．５７）において生成物（２９８）が得られることによって行った。
（３．３６ ワンポット反応を用いた化合物（１９８）〜（２００）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１９８）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（１９９）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２００）とした。高分子（２００）の同定は、高分子（２００）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３２）が得られることによって行った。
化合物（４３２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２２．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２０．９）。
（３．３７ ワンポット反応を用いた化合物（２０１）〜（２０３）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２０１）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２０２）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２０３）とした。高分子（２０３）の同定は、高分子（２０３）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３３）が得られることによって行った。
化合物（４３３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２２．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２０．９）。
（３．３８ ワンポット反応を用いた化合物（２０４）〜（２０６）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２０４）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２０５）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２０６）とした。高分子（２０６）の同定は、高分子（２０６）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３４）が得られることによって行った。
化合物（４３４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２６９．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２６８．３）。
（３．３９ ワンポット反応を用いた化合物（２０７）〜（２０９）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２０７）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２０８）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２０９）とした。高分子（２０９）の同定は、高分子（２０９）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３５）が得られることによって行った。
化合物（４３５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６３．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６１．９）。
（３．４０ ワンポット反応を用いた化合物（２１０）〜（２１２）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２１０）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２１１）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２１２）とした。高分子（２１２）の同定は、以下の（３．５８）において生成物（３０９）が得られることによって行った。
（３．４１ ワンポット反応を用いた化合物（２１３）〜（２１５）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２１３）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２１４）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２１５）とした。高分子（２１５）の同定は、以下の（３．５９）において生成物（３２０）が得られることによって行った。
（３．４２ ワンポット反応を用いた化合物（２１６）〜（２１８）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２１６）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２１７）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２１８）とした。高分子（２１８）の同定は、以下の（３．６０）において生成物（３３１）が得られることによって行った。
（３．４３ ワンポット反応を用いた化合物（２１９）〜（２２１）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２１９）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２２０）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２２１）とした。高分子（２２１）の同定は、以下の（３．６１）において生成物（３４２）が得られることによって行った。
（３．４４ ワンポット反応を用いた化合物（２２２）〜（２２４）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２２２）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２２３）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２２４）とした。高分子（２２４）の同定は、以下の（３．６２）において生成物（３５３）が得られることによって行った。
（３．４５ ワンポット反応を用いた化合物（２２５）〜（２２７）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２２５）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２２６）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２２７）とした。高分子（２２７）の同定は、以下の（３．６３）において生成物（３６４）が得られることによって行った。
（３．４６ ワンポット反応を用いた化合物（２２８）〜（２３０）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２２８）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２２９）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２３０）とした。高分子（２３０）の同定は、以下の（３．６４）において生成物（３７５）が得られることによって行った。
（３．４７ ワンポット反応を用いた化合物（２３１）〜（２３３）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２３１）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２３２）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２３３）とした。高分子（２３３）の同定は、高分子（２３３）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３６）が得られることによって行った。
化合物（４３６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２８．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２７．３）。
（３．４８ ワンポット反応を用いた化合物（２３４）〜（２３６）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２３４）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２３５）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２３６）とした。高分子（２３６）の同定は、以下の（３．６５）において生成物（３８６）が得られることによって行った。
（３．４９ ワンポット反応を用いた化合物（２３７）〜（２３９）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２３７）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２３８）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２３９）とした。高分子（２３９）の同定は、以下の（３．６６）において生成物（３９７）が得られることによって行った。
（３．５０ ワンポット反応を用いた化合物（２４０）〜（２４２）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２４０）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２４１）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２４２）とした。高分子（２４２）の同定は、高分子（２４２）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（４３７）が得られることによって行った。
化合物（４３７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２８．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２７．３）。
（３．５１ ワンポット反応を用いた化合物（２４３）〜（２４５）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２４３）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２４４）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２４５）とした。高分子（２４５）の同定は、以下の（３．６７）において生成物（４０８）が得られることによって行った。
（３．５２ ワンポット反応を用いた化合物（２４６）〜（２４８）の合成）
Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）Ｓ ＲＡＭレジン（Ｈｉｐｅｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（０．２８ｍｍｏｌ／ｇ）7１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（Ａｃ６ｃｏｒｅ１）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ５ｃｏｒｅ３）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、得られた樹脂のうち５ｎｍｏｌ相当を９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（２４６）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液０．５ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（２４７）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２４８）とした。高分子（２４８）の同定は、以下の（３．６８）において生成物（４１９）が得られることによって行った。
以下の（３．５３）から（３．６８)は、限外濾過型ＡｃｒｏＰｒｅｐ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ−ｗｅｌｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｐｌａｔｅｓ（ＰＡＬＬ社製）９６ウェルプレートを用いて並列で実施した。
（３．５３ 化合物（２４９）〜（２５９）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（１７９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１７９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１７９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１７９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１７９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（２４９）〜（２５３）の水溶液を各々得た。その後、化合物（２４９）〜（２５３）を含むフィルター保持液、さらに（１７９）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（２５４）〜（２５９）を得た。
化合物（２５４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８７．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．２）、化合物（２５５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４９．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４８．４）、化合物（２５６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６２．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．０）、化合物（２５７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２２０．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２２２．１）、化合物（２５８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６３８．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６３９．６）、化合物（２５９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４５１３．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４５１３．４）。
（３．５４ 化合物（２６０）〜（２７０）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（１８２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（２６０）〜（２７０）の水溶液を各々得た。その後、化合物（２６０）〜（２７０）を含むフィルター保持液、さらに（１８２）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（２６５）〜（２７０）を得た。
化合物（２６５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２２．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２０．９）、化合物（２６６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８３．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８３．０）、化合物（２６７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０５．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０３．４）、化合物（２６８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６７．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６５．５）、化合物（２６９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７５．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７４．３）、化合物（２７０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５８．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５６．８）。
（３．５５ 化合物（２７１）〜（２８１）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（１８５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１８５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（２７１）〜（２７５）の水溶液を各々得た。その後、化合物（２７１）〜（２７５）を含むフィルター保持液、さらに（１８５）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（２７６）〜（２８１）を得た。
化合物（２７６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２３．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２０．９）、化合物（２７７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８３．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８３．０）、化合物（２７８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０４．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０３．４）、化合物（２７９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６７．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６５．５）、化合物（２８０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７６．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７４．３）、化合物（２８１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６５９．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６５６．８）。
（３．５６ 化合物（２８２）〜（２９２）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（１９４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（２８２）〜（２８６）の水溶液を各々得た。その後、化合物（２８２）〜（２８６）を含むフィルター保持液、さらに（１９４）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（２８７）〜（２９２）を得た。
化合物（２８７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６４．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６１．９）、化合物（２８８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８７．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．２）、化合物（２８９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５４．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５３．２）、化合物（２９０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７９．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７７．５）、化合物（２９１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６９．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６８．７）、化合物（２９２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６２．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．０）。
（３．５７ 化合物（２９３）〜（３０３）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（１９７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（１９７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（２９３）〜（２９７）の水溶液を各々得た。その後、化合物（２９３）〜（２９７）を含むフィルター保持液、さらに（１９７）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（２９８）〜（３０３）を得た。
化合物（２９８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８８．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．２）、化合物（２９９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４９．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４８．４）、化合物（３００）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６１．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．０）、化合物（３０１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２２３．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２２０．２）、化合物（３０２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６４１．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６３９．６）、化合物（３０３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４５１４．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４５１３．４）。
（３．５８ 化合物（３０４）〜（３１４）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２１２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１２）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３０４）〜（３０８）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３０４）〜（３０８）を含むフィルター保持液、さらに（２１２）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３０９）〜（３１４）を得た。
化合物（３０９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６４．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６１．９）、化合物（３１０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．２）、化合物（３１１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５４．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５３．２）、化合物（３１２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７８．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７７．５）、化合物（３１３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６９．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６８．７）、化合物（３１４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．０）。
（３．５９ 化合物（３１５）〜（３２５）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２１５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３１５）〜（３１９）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３１５）〜（３１９）を含むフィルター保持液、さらに（２１５）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３２０）〜（３２５）を得た。
化合物（３２０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８７．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．２）、化合物（３２１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４８．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４８．４）、化合物（３２２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０５９．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．０）、化合物（３２３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２２３．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２２２．１）、化合物（３２４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６４２．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３６３９．６）、化合物（３２５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４５１１．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４５１３．４）。
（３．６０ 化合物（３２６）〜（３３６）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２１８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２１８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３２６）〜（３３０）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３２６）〜（３３０）を含むフィルター保持液、さらに（２１８）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３３１）〜（３３６）を得た。
化合物（３３１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２１．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２０．９）、化合物（３３２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８３．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８３．０）、化合物（３３３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０４．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０３．４）、化合物（３３４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６６．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６５．５）、化合物（３３５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７６．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７４．３）、化合物（３３６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５８．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５６．８）。
（３．６１ 化合物（３３７）〜（３４７）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２２１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２１）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３３７）〜（３４１）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３３７）〜（３４１）を含むフィルター保持液、さらに（２２１）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３４２）〜（３４７）を得た。
化合物（３４２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２２．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２０．９）、化合物（３４３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８４．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８３．０）、化合物（３４４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０５．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４０３．４）、化合物（３４５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６７．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６５．５）、化合物（３４６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７６．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２７４．３）、化合物（３４７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５７．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８５６．８）。
（３．６２ 化合物（３４８）〜（３５８）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２２４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２４）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３４８）〜（３５２）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３４８）〜（３５２）を含むフィルター保持液、さらに（２２４）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３５３）〜（３５８）を得た。
化合物（３５３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２６９．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２６８．３）、化合物（３５４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７５７．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７５４．８）、化合物（３５５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５６１．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５９．６）、化合物（３５６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０４７．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０４６．０）、化合物（３５７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４６２５．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４６２８．５）、化合物（３５８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４９１７．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４９１９．９）。
（３．６３ 化合物（３５９）〜（３６９）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２２７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２２７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３５９）〜（３６３）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３５９）〜（３６３）を含むフィルター保持液、さらに（２２７）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３６４）〜（３６９）を得た。
化合物（３６４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６３．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６１．９）、化合物（３６５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．２）、化合物（３６６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５４．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５３．２）、化合物（３６７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７８．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７７．５）、化合物（３６８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６９．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６８．７）、化合物（３６９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．０）。
（３．６４ 化合物（３７０）〜（３８０）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２３０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３０）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３７０）〜（３７４）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３７０）〜（３７４）を含むフィルター保持液、さらに（２３０）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３７５）〜（３８０）を得た。
化合物（３７５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６３．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６１．９）、化合物（３７６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８６．２）、化合物（３７７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５５．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１５３．２）、化合物（３７８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７８．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４７７．５）、化合物（３７９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６９．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７６８．７）、化合物（３８０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６２．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４０６０．０）。
（３．６５ 化合物（３８１）〜（３９１）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２３６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３６）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３８１）〜（３８５）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３８１）〜（３８５）を含むフィルター保持液、さらに（２３６）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３８６）〜（３９１）を得た。
化合物（３８６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２９．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２７．３）、化合物（３８７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５１．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５１．６）、化合物（３８８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８１１．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８０９．８）、化合物（３８９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３６．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（３９０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３３．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（３９１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１３．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１６．６）。
（３．６６ 化合物（３９２）〜（４０２）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２３９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２３９）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（３９２）〜（３９６）の水溶液を各々得た。その後、化合物（３９２）〜（３９６）を含むフィルター保持液、さらに（２３９）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（３９７）〜（４０２）を得た。
化合物（３９７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２８．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２７．３）、化合物（３９８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５２．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５１．６）、化合物（３９９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８１１．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８０９．８）、化合物（４００）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３５．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（４０１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３５．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（４０２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１５．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１６．６）。
（３．６７ 化合物（４０３）〜（４１３）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２４５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４５）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（４０３）〜（４０７）の水溶液を各々得た。その後、化合物（４０３）〜（４０７）を含むフィルター保持液、さらに（２４５）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（４０８）〜（４１３）を得た。
化合物（４０８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２８．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２７．３）、化合物（４０９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５２．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５１．６）、化合物（４１０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８１０．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８０９．８）、化合物（４１１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３５．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（４１２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３５．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（４１３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１６．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１６．６）。
（３．６８ 化合物（４１４）〜（４２４）の合成）
下記のＡ）〜Ｅ）の反応液を２５℃で２４時間反応させた。
Ａ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ），糖ペプチド誘導体（２４８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｂ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｃ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｄ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液；
Ｅ）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、２ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、４ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（２４８）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む１００μｌの反応液。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルターで遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（４１４）〜（４１８）の水溶液を各々得た。その後、化合物（４１４）〜（４１８）を含むフィルター保持液、さらに（２４８）水溶液を２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈した溶液に、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の０．１７４ｍｇ／ｍｌ溶液１μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルターで遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（４１９）〜（４２４）を得た。
化合物（４１９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２７．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２２７．３）、化合物（４２０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５２．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５１．６）、化合物（４２１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８１０．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３８０９．８）、化合物（４２２）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３１．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（４２３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３３．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１３４．１）、化合物（４２４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１６．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４７１６．６）。
（３．６９ ワンポット反応を用いた化合物（４２５）〜（４２７）の合成）
Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＰＥＧＡ ｒｅｓｉｎ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、ｐｒｅ−ｓｗｏｌｌｅｎ ｉｎ Ｍｅｔｈａｎｏｌ、ｗｅｔ：０．０５ｍｍｏｌ／ｇ、ｄｒｙ：０．２４ｍｍｏｌ／ｇ）６１０．１ｍｇ（ｗｅｔ、３０．５iｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で１．５時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（４２５）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ジエチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ジエチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール９．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．０時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、樹脂を濾別し、濾液の溶媒を留去して残渣を５０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）３．０ｍｌへ溶解させた。この液に１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（１７）水溶液３．０ｍｌを添加し、室温で１８時間攪拌させて化合物（４２６）と化合物（１７）を反応させた。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．５ｍｌになるように水を加えることによって２０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（４２７）とした。
（３．７０ 化合物（４２８）〜（４２９）の合成）
５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１７５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１８５Ｕ／ｍｌ ラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、１０ｍＭ 塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、１０ｍＭ ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース二ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、１０ｍＭ シチジン−５’−リン酸シアル酸ナトリウム（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、糖ペプチド誘導体（４２７）（固相合成からの理論含量で４ｍＭ）を含む７ｍｌの反応液を２５℃で２４時間反応させた。
反応終了後、各々の反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)で遠心濃縮した。その後２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）を加え再度遠心分離機で濃縮することによって高分子を洗浄した。この操作を３回繰り返して化合物（４２８）の水溶液を得た。その後、化合物（４２８）を含むフィルター保持液４．２ｍｌに、ＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）の１．７４ｍｇ／ｍｌ溶液５μｌを加え、２時間室温で反応させた後、限外濾過フィルター３０Ｋ Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＩＣ製)で遠心濾過することによって目的糖ペプチドを高分子と分離し、得られた水溶液（濾液）を凍結乾燥して化合物（４２９）を１１．４ｍｇ得た。
化合物（４２９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２００．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２００．２）。
本発明によれば、従来の技術では極めて困難であった簡単な糖鎖構造から複雑な糖鎖構造までを網羅的に有する糖ペプチドのライブラリー調製が可能となる。例えば、本発明により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類を合成することができる。
得られた糖ペプチドライブラリーは構造解析、生化学試験の標準サンプルとして使用可能である。また、この糖ペプチドライブラリーをチップ上に配置し、糖ペプチド認識タンパク質の検出、病理診断、細胞接着配列の検索、細胞増殖・アポトーシスなどに関連する配列解析などを網羅的に行うことが可能になる。

Claims (20)

  1. 以下の式：
    Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３ （Ｉ）
    （式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
    ｎは０〜２０の整数を表し；
    Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
    Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；
    Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表す）で表される、化合物。
  2. 前記Ａ２は、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基である、請求項１に記載の化合物。
  3. 前記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の化合物。
  4. 請求項１に記載の化合物と、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、が反応して得られる、化合物。
  5. 前記担体は、以下：
    ａ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有する、ビニル系単量体の重合体もしくは共重合体、または保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するポリエーテル類；
    ｂ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するシリカ担体、樹脂担体、磁性ビーズまたは金属担体；ならびに
    ｃ）以下の式：
    ［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
    ［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
    ［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６１）、
    ｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
    ｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
    ｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６２）、
    ｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６３）、
    ｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｎ
    ＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６４）、
    ［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６５）、
    ［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６６）、
    （式中、Ｒ３はヒドロキシル基またはアミノ基を表し、Ｌｙｓはリジンを表し、Ｃｙｓはシステインを表す）、
    （式中、ｎは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）
    で表される化合物、からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
  6. 以下の式：
    Ａ４−Ｎ＝Ｃ（−Ｘ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３ （ＩＩ）
    ［式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
    ｎは０〜２０の整数を表し；
    Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
    Ａ２は、バシラス リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基であり；
    Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、また
    はプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し；
    Ａ４は、以下の式：
    （式中、ｓは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）で表される基である］
    で表される化合物。
  7. 前記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の化合物。
  8. 以下の工程：
    （Ａ）請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
    （Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
    （Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
    （Ｄ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
    を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
  9. 以下の工程：
    （Ａ）請求項４〜７のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖
    を伸長させた化合物を得る工程；
    （Ｂ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
    （Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程
    を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
  10. 以下の工程：
    （Ａ）請求項４〜７のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
    （Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
    （Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
    （Ｄ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
  11. 以下の工程：
    （Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
    （Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
    （Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
    （Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
    （Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
    を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
  12. 以下の工程：
    （Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
    （Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
    （Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程；
    （Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
    （Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
    （Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
  13. 前記工程（Ａ）のケト酸またはアルデヒド酸が、以下の式：
    Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ （ＩＩＩ）
    （式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
    ｎは０〜２０の整数を表し；
    Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す）で表される化合物である、請求項１１または１２に記載の方法。
  14. 以下の工程：
    （Ａ）請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
    （Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；および
    （Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
    を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
  15. 以下の工程：
    （Ａ）請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程；
    （Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、ケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
    （Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
    （Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
    を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
  16. 前記糖ペプチドが、以下の式：
    （配列番号２０）
    （式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
    ［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
    Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
    Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される糖ペプチドである、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記糖ペプチドが、以下の式：
    （配列番号４１）
    （式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
    ［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
    Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
    Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される糖ペプチドである、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
  18. 以下の式：
    （配列番号２０）
    （配列番号４０）
    または
    （配列番号４１）
    （式中、Ｘ１〜Ｘ５は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
    で表される基［式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、単糖または糖鎖を表す；Ａｃはアセチル］を表し；
    Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
    Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す）で表される糖ペプチド。
  19. 式：
    （配列番号２０）
    （式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
    ［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
    Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
    Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される、請求項１８に記載の糖ペプチド。
  20. 式：
    （配列番号４１）
    （式中、Ｘ１〜Ｘ３は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
    ［式中、Ａｃはアセチルを表す］で表される基を表し；
    Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
    Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す。ただし、Ｘ１〜Ｘ３のすべてが水素原子である場合を除く）で表される、請求項１８に記載の糖ペプチド。
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