JP2001192399A - ｇｐ１２０に親和性を有するペプチド - Google Patents
ｇｐ１２０に親和性を有するペプチドInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＨＩＶの最外殻を構成するｇｐ１２０分子に
対して親和性を有しており、しかも安定性にも優れたペ
プチドを提供する。 【解決手段】式（１）：Ｈ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−
Ａ５−Ｒ （式中、Ｈは、水素原子を示し、Ａ１は、アスパラギン
酸、リジン、バリン、グルタミン酸、グリシン、アスパ
ラギン、またはチロシンの残基、Ａ２は、バリン、アス
パラギン酸、トリプトファン、リジン、フェニルアラニ
ン、イソロイシン、ロイシン、またはチロシンの残基、
Ａ３は、リジン、バリン、アスパラギン酸、アルギニ
ン、アラニン、またはトリプトファンの残基Ａ４は、ア
ラニン、トリプトファン、グリシンの残基、Ａ５は、グ
リシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、
セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラギン、グル
タミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、フェニルア
ラニン、トリプトファン、プロリン、またはチロシンの
残基、Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまたは酸アミド
基由来のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２０に対して
親和性を有するペプチドである。
対して親和性を有しており、しかも安定性にも優れたペ
プチドを提供する。 【解決手段】式（１）：Ｈ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−
Ａ５−Ｒ （式中、Ｈは、水素原子を示し、Ａ１は、アスパラギン
酸、リジン、バリン、グルタミン酸、グリシン、アスパ
ラギン、またはチロシンの残基、Ａ２は、バリン、アス
パラギン酸、トリプトファン、リジン、フェニルアラニ
ン、イソロイシン、ロイシン、またはチロシンの残基、
Ａ３は、リジン、バリン、アスパラギン酸、アルギニ
ン、アラニン、またはトリプトファンの残基Ａ４は、ア
ラニン、トリプトファン、グリシンの残基、Ａ５は、グ
リシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、
セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラギン、グル
タミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、フェニルア
ラニン、トリプトファン、プロリン、またはチロシンの
残基、Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまたは酸アミド
基由来のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２０に対して
親和性を有するペプチドである。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト免疫不全ウイ
ルス(humanimmnodeficiency virus:ＨＩＶ)の最外殻を
構成するｇｐ１２０分子に対して親和性を有するペプチ
ドに関するものである。
ルス(humanimmnodeficiency virus:ＨＩＶ)の最外殻を
構成するｇｐ１２０分子に対して親和性を有するペプチ
ドに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＨＩＶ感染症に対する治療法としては、
ヌクレオシド誘導体である3'-azido-2',3'-dideoxythym
idine（ＡＺＴ）に代表される如く、主に化学療法が用
いられている。上記ＡＺＴ或いはその後開発されたプロ
テアーゼ阻害剤による治療法によって、ＨＩＶ感染者の
延命効果は見られたものの、化学療法自体に起因する様
々な問題は依然として回避されていない。
ヌクレオシド誘導体である3'-azido-2',3'-dideoxythym
idine（ＡＺＴ）に代表される如く、主に化学療法が用
いられている。上記ＡＺＴ或いはその後開発されたプロ
テアーゼ阻害剤による治療法によって、ＨＩＶ感染者の
延命効果は見られたものの、化学療法自体に起因する様
々な問題は依然として回避されていない。
【０００３】かかる問題としては、第１に、長期投与に
より慢性毒性が表れること；第２に、治療中に薬剤耐性
ＨＩＶ株が出現すること；第３に、延命効果が見られた
患者に悪性腫瘍が多発すること；第４に、治療の最終目
標である免疫応答の回復が得られないこと；第５に、治
療効果のモニター方法がないこと等が挙げられる。この
様に化学療法は、ＨＩＶ感染を根本的に治療し得る治療
法とはなり得ないことから、ワクチンの開発が期待され
ている。
より慢性毒性が表れること；第２に、治療中に薬剤耐性
ＨＩＶ株が出現すること；第３に、延命効果が見られた
患者に悪性腫瘍が多発すること；第４に、治療の最終目
標である免疫応答の回復が得られないこと；第５に、治
療効果のモニター方法がないこと等が挙げられる。この
様に化学療法は、ＨＩＶ感染を根本的に治療し得る治療
法とはなり得ないことから、ワクチンの開発が期待され
ている。
【０００４】一般にワクチンと言えば、ウイルス等の微
生物を化学処理することにより、その構造を変えること
なく不活性化したもの（不活性化ワクチン）;病原性を
失った弱毒株や天然痘ウイルスに対する牛痘ウイルス等
の様に、ヒトに致死的作用を及ぼさない類似株（生ワク
チン）が使用されている。しかしながら、ＨＩＶそのも
のは、元来弱毒株であるにもかかわらず、宿主細胞に一
旦進入すると長期間滞在し得、次第に該宿主細胞の機能
を破壊することが知られており、しかもＨＩＶの宿主細
胞が、主に免疫機能を司るリンパ球であること；更にＨ
ＩＶが凍結乾燥血液製剤を介して血友病患者に蔓延した
こと等を考慮すれば、不活性化・弱毒化のいずれかの途
を選択するにせよ、ＨＩＶそのものをワクチンに用いる
ことは、安全性の面で問題が多い。
生物を化学処理することにより、その構造を変えること
なく不活性化したもの（不活性化ワクチン）;病原性を
失った弱毒株や天然痘ウイルスに対する牛痘ウイルス等
の様に、ヒトに致死的作用を及ぼさない類似株（生ワク
チン）が使用されている。しかしながら、ＨＩＶそのも
のは、元来弱毒株であるにもかかわらず、宿主細胞に一
旦進入すると長期間滞在し得、次第に該宿主細胞の機能
を破壊することが知られており、しかもＨＩＶの宿主細
胞が、主に免疫機能を司るリンパ球であること；更にＨ
ＩＶが凍結乾燥血液製剤を介して血友病患者に蔓延した
こと等を考慮すれば、不活性化・弱毒化のいずれかの途
を選択するにせよ、ＨＩＶそのものをワクチンに用いる
ことは、安全性の面で問題が多い。
【０００５】従って、ＨＩＶワクチンの開発に当たって
は、ウイルス最外殻の一部を使ってペプチドワクチンを
作製することにより感染を防止するのが理想的である。
は、ウイルス最外殻の一部を使ってペプチドワクチンを
作製することにより感染を防止するのが理想的である。
【０００６】この様な観点から、多くの研究者が、ウイ
ルス最外殻を構成するｇｐ１２０分子のエピトープ解析
を行っており、上記ｇｐ１２０分子のエピトープとして
V3領域（3rd hypervariable region)に注目したが、こ
の領域は非常に変異の激しい領域であった［Palker T.
J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2709-27
13,1988; Rusche J.R., et al., ibid 85:3198-3202,19
88; Gouddsmit J., etal., ibid 85:4478-4482.1988; M
atsushita S., et al., J Virol. 62:2107-2114,198
8］。その後、この領域の一部を用いてペプチド抗原を
作製し、猿を用いたＨＩＶ感染阻止実験［Emini E.A.,
et al., Nature 355: 728-730, 1992］が行われたが、
有効な臨床結果はまだ報告されていない。
ルス最外殻を構成するｇｐ１２０分子のエピトープ解析
を行っており、上記ｇｐ１２０分子のエピトープとして
V3領域（3rd hypervariable region)に注目したが、こ
の領域は非常に変異の激しい領域であった［Palker T.
J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2709-27
13,1988; Rusche J.R., et al., ibid 85:3198-3202,19
88; Gouddsmit J., etal., ibid 85:4478-4482.1988; M
atsushita S., et al., J Virol. 62:2107-2114,198
8］。その後、この領域の一部を用いてペプチド抗原を
作製し、猿を用いたＨＩＶ感染阻止実験［Emini E.A.,
et al., Nature 355: 728-730, 1992］が行われたが、
有効な臨床結果はまだ報告されていない。
【０００７】また、上記ペプチド抗原の免疫源性を高め
る工夫もされている（Tam et al.,特表平3-503539号）
が、Ｖ３領域等のエピトープとして好適なＶ領域の大部
分は、変異や欠失が頻繁に生じることから、所望とする
ワクチンを未だ得るに至っていない。
る工夫もされている（Tam et al.,特表平3-503539号）
が、Ｖ３領域等のエピトープとして好適なＶ領域の大部
分は、変異や欠失が頻繁に生じることから、所望とする
ワクチンを未だ得るに至っていない。
【０００８】更に、Ｖ３領域の一部を抗原に作製した抗
体を使って、ＨＩＶのリンパ球感染阻止を狙った所謂中
和抗体の開発も行われている。例えば特願昭63−１7138
5号公報には、上記領域の部分ペプチドを抗原として用
い、マウスでモノクローナル抗体を作製し、そのFab'を
タンパク質レベルで、或いは遺伝子工学的手法により結
合させて、最終的にヒト抗体分子とマウス抗体分子をハ
イブリッドした抗ＨＩＶキメラ抗体を作製する方法が報
告されている。しかしながら、この様な中和抗体にして
も、ＨＩＶのリンパ球への感染阻止能は実験室レベルの
ものに過ぎず、実用上、有用な中和抗体は未だ得られて
いないのが現状である。
体を使って、ＨＩＶのリンパ球感染阻止を狙った所謂中
和抗体の開発も行われている。例えば特願昭63−１7138
5号公報には、上記領域の部分ペプチドを抗原として用
い、マウスでモノクローナル抗体を作製し、そのFab'を
タンパク質レベルで、或いは遺伝子工学的手法により結
合させて、最終的にヒト抗体分子とマウス抗体分子をハ
イブリッドした抗ＨＩＶキメラ抗体を作製する方法が報
告されている。しかしながら、この様な中和抗体にして
も、ＨＩＶのリンパ球への感染阻止能は実験室レベルの
ものに過ぎず、実用上、有用な中和抗体は未だ得られて
いないのが現状である。
【０００９】一方、前述した通り、化学療法では薬剤耐
性や副作用発生等の問題があることから、かかる問題の
ない血漿交換療法により、ＨＩＶを生体から除去しよう
という考えもある。具体的には、血漿交換用に使われる
濾過膜のポアーサイズを小さくして該ＨＩＶを除去する
方法が考えられるが、ＨＩＶは約70nmとかなり小さいこ
とから、ポアーサイズを均一にすることが困難であるこ
と；また、血漿濾過時における目詰まりが生じること等
の可能性があり、その結果、濾過膜の耐圧性が劣化する
等、解決すべき技術的課題が多い。そこで、ＨＩＶに特
異的な親和性を持つリンパ球由来のＣＤ４タンパク質を
血漿交換用吸着担体に利用する方法も考えられるが、Ｃ
Ｄ４は高圧滅菌により変性し、親和性を喪失する為、医
療用具として使用することはできない。また、上記ＣＤ
４に代わり、ＨＩＶに親和性のある高分子ポリマーや、
色素リガンドの如く高圧滅菌耐性のものを使用する方法
もあるが、これらは元々、ＨＩＶに対する特異性がない
為、ＨＩＶが吸着する前に血液成分が該ポリマー等に非
特異的に吸着してしまい、ＨＩＶの吸着が阻害されてし
まうので使用することはできない。
性や副作用発生等の問題があることから、かかる問題の
ない血漿交換療法により、ＨＩＶを生体から除去しよう
という考えもある。具体的には、血漿交換用に使われる
濾過膜のポアーサイズを小さくして該ＨＩＶを除去する
方法が考えられるが、ＨＩＶは約70nmとかなり小さいこ
とから、ポアーサイズを均一にすることが困難であるこ
と；また、血漿濾過時における目詰まりが生じること等
の可能性があり、その結果、濾過膜の耐圧性が劣化する
等、解決すべき技術的課題が多い。そこで、ＨＩＶに特
異的な親和性を持つリンパ球由来のＣＤ４タンパク質を
血漿交換用吸着担体に利用する方法も考えられるが、Ｃ
Ｄ４は高圧滅菌により変性し、親和性を喪失する為、医
療用具として使用することはできない。また、上記ＣＤ
４に代わり、ＨＩＶに親和性のある高分子ポリマーや、
色素リガンドの如く高圧滅菌耐性のものを使用する方法
もあるが、これらは元々、ＨＩＶに対する特異性がない
為、ＨＩＶが吸着する前に血液成分が該ポリマー等に非
特異的に吸着してしまい、ＨＩＶの吸着が阻害されてし
まうので使用することはできない。
【００１０】この様に、ＨＩＶ治療剤の開発を目的とし
て、ワクチンや中和抗体を作製する研究が盛んに行われ
ているが、未だ有用な治療剤は得られていない。
て、ワクチンや中和抗体を作製する研究が盛んに行われ
ているが、未だ有用な治療剤は得られていない。
【００１１】この様な現状に着目し、本発明者らは、抗
体と同等か、或いはそれ以上にｇｐ１２０に強い特異性
を有し、しかも耐高圧滅菌性にも優れたペプチドを開発
し、既に出願を済ませている（特願平8-351474および特
願平8-351475）。このペプチドは、基本的に３個のアミ
ノ酸配列からものであるが、その後の研究により、当該
ペプチドのｇｐ１２０に対する親和性は、それに連なる
アミノ酸の種類や数により低下することが分かった。そ
こで、より安定性に優れたペプチドの提供が切望されて
いる。
体と同等か、或いはそれ以上にｇｐ１２０に強い特異性
を有し、しかも耐高圧滅菌性にも優れたペプチドを開発
し、既に出願を済ませている（特願平8-351474および特
願平8-351475）。このペプチドは、基本的に３個のアミ
ノ酸配列からものであるが、その後の研究により、当該
ペプチドのｇｐ１２０に対する親和性は、それに連なる
アミノ酸の種類や数により低下することが分かった。そ
こで、より安定性に優れたペプチドの提供が切望されて
いる。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記事情に着
目してなされたものであり、その目的は、ＨＩＶの最外
殻を構成するｇｐ１２０分子に対して親和性を有してお
り、しかも安定性にも優れた新規なペプチド、及び該ペ
プチドを用いた様々な利用態様を提供することにある。
目してなされたものであり、その目的は、ＨＩＶの最外
殻を構成するｇｐ１２０分子に対して親和性を有してお
り、しかも安定性にも優れた新規なペプチド、及び該ペ
プチドを用いた様々な利用態様を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決すること
のできた本発明の第１のペプチドとは、 式（１）：Ｈ−Ａ１-Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｒ （式中、Ｈは、水素原子を示し、Ａ１は、アスパラギン
酸、リジン、バリン、グルタミン酸、グリシン、アスパ
ラギン、またはチロシンの残基、Ａ２は、バリン、アス
パラギン酸、トリプトファン、リジン、フェニルアラニ
ン、イソロイシン、ロイシン、またはチロシンの残基、
Ａ３は、リジン、バリン、アスパラギン酸、アルギニ
ン、アラニン、またはトリプトファンの残基 Ａ４は、アラニン、トリプトファン、グリシンの残基、
Ａ５は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラ
ギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、
フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、または
チロシンの残基、Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまた
は酸アミド基由来のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２
０に対して親和性を有するペプチドであるところに要旨
を有するものである。
のできた本発明の第１のペプチドとは、 式（１）：Ｈ−Ａ１-Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｒ （式中、Ｈは、水素原子を示し、Ａ１は、アスパラギン
酸、リジン、バリン、グルタミン酸、グリシン、アスパ
ラギン、またはチロシンの残基、Ａ２は、バリン、アス
パラギン酸、トリプトファン、リジン、フェニルアラニ
ン、イソロイシン、ロイシン、またはチロシンの残基、
Ａ３は、リジン、バリン、アスパラギン酸、アルギニ
ン、アラニン、またはトリプトファンの残基 Ａ４は、アラニン、トリプトファン、グリシンの残基、
Ａ５は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラ
ギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、
フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、または
チロシンの残基、Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまた
は酸アミド基由来のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２
０に対して親和性を有するペプチドであるところに要旨
を有するものである。
【００１４】即ち、本発明の第１のペプチドは、上記Ａ
１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５からなる５個のアミノ
酸配列を基本構成とするペプチドであり、この様なアミ
ノ酸配列を含むペプチドは、全て本発明の範囲に包含さ
れる。従って、 式（２）：Ａ１’−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｒ （式中、Ａ１’は、アスパラギン酸、リジン、バリン、
グルタミン酸、グリシン、アスパラギン、またはチロシ
ンの残基、若しくは、該アミノ酸を始端として、そのＮ
末端側に任意のアミノ酸が配列したポリペプチド残基、
Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５およびＲは前と同じ意味）で表
されるｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチドや、
或いは、 式（３）：Ｈ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５’−Ｒ （式中、Ａ５’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイ
シン、イソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニ
ン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、
アルギニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロ
リン、またはチロシンの残基、若しくは、該アミノ酸を
始端として、そのＣ末端側に任意のアミノ酸が配列した
ポリペプチド残基、Ｈ、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４および
Ｒは前と同じ意味）で表されるｇｐ１２０に対して親和
性を有するペプチドも、全て本発明の一態様であると言
うことができる。
１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５からなる５個のアミノ
酸配列を基本構成とするペプチドであり、この様なアミ
ノ酸配列を含むペプチドは、全て本発明の範囲に包含さ
れる。従って、 式（２）：Ａ１’−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｒ （式中、Ａ１’は、アスパラギン酸、リジン、バリン、
グルタミン酸、グリシン、アスパラギン、またはチロシ
ンの残基、若しくは、該アミノ酸を始端として、そのＮ
末端側に任意のアミノ酸が配列したポリペプチド残基、
Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５およびＲは前と同じ意味）で表
されるｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチドや、
或いは、 式（３）：Ｈ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５’−Ｒ （式中、Ａ５’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイ
シン、イソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニ
ン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、
アルギニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロ
リン、またはチロシンの残基、若しくは、該アミノ酸を
始端として、そのＣ末端側に任意のアミノ酸が配列した
ポリペプチド残基、Ｈ、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４および
Ｒは前と同じ意味）で表されるｇｐ１２０に対して親和
性を有するペプチドも、全て本発明の一態様であると言
うことができる。
【００１５】また、上記課題を解決することのできた本
発明の第２のペプチドとは、 式（４）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５−Ｒ （式中、Ｈは、 水素原子を示し、ａ１は、チロシン、
アルギニン、フェニルアラニン、グリシン、トリプトフ
ァン、ヒスチジン、またはアスパラギン酸の残基、ａ２
は、アルギニン、チロシン、トリプトファン、アラニ
ン、バリン、グルタミン、ヒスチジン、またはリジンの
残基、ａ３は、リジン、チロシン、アルギニン、グルタ
ミン酸、メチオニン、またはトリプトファンの残基、ａ
４は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロ
イシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラギ
ン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、フ
ェニルアラニン、またはトリプトファンの残基、ａ５
は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイ
シン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラギ
ン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、フ
ェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンの残
基、Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまたは酸アミド基
由来のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２０に対して親
和性を有するペプチドであるところに要旨を有するもの
である。
発明の第２のペプチドとは、 式（４）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５−Ｒ （式中、Ｈは、 水素原子を示し、ａ１は、チロシン、
アルギニン、フェニルアラニン、グリシン、トリプトフ
ァン、ヒスチジン、またはアスパラギン酸の残基、ａ２
は、アルギニン、チロシン、トリプトファン、アラニ
ン、バリン、グルタミン、ヒスチジン、またはリジンの
残基、ａ３は、リジン、チロシン、アルギニン、グルタ
ミン酸、メチオニン、またはトリプトファンの残基、ａ
４は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロ
イシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラギ
ン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、フ
ェニルアラニン、またはトリプトファンの残基、ａ５
は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイ
シン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラギ
ン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、フ
ェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンの残
基、Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまたは酸アミド基
由来のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２０に対して親
和性を有するペプチドであるところに要旨を有するもの
である。
【００１６】即ち、本発明の第２のペプチドは、上記ａ
１、ａ２、ａ３、ａ４およびａ５からなる５個のアミノ
酸配列を基本構成とするペプチドであり、この様なアミ
ノ酸配列を含むペプチドは、全て本発明の範囲内に包含
される。従って、 式（５）：ａ１’−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５−Ｒ （式中、ａ１’は、チロシン、アルギニン、フェニルア
ラニン、グリシン、トリプトファン、ヒスチジン、また
はアスパラギン酸の残基、若しくは、該アミノ酸を始端
としてそのＮ末端側に任意のアミノ酸が配列したポリペ
プチド残基、ａ２、ａ３、ａ４、ａ５およびＲは前と同
じ意味）で表されるｇｐ１２０に対して親和性を有する
ペプチドや、或いは、 式（６）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５’ （式中、ａ５’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイ
シン、イソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニ
ン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、
アルギニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリ
プトファンの残基、若しくは、該アミノ酸及びアミノ酸
誘導体を始端として、そのＣ末端側に任意のアミノ酸が
配列したポリペプチド残基、Ｈ、ａ１、ａ２、ａ３およ
びａ４は前と同じ意味）で表されるｇｐ１２０に対して
親和性を有するペプチドも、全て本発明の一態様である
と言うことができる。
１、ａ２、ａ３、ａ４およびａ５からなる５個のアミノ
酸配列を基本構成とするペプチドであり、この様なアミ
ノ酸配列を含むペプチドは、全て本発明の範囲内に包含
される。従って、 式（５）：ａ１’−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５−Ｒ （式中、ａ１’は、チロシン、アルギニン、フェニルア
ラニン、グリシン、トリプトファン、ヒスチジン、また
はアスパラギン酸の残基、若しくは、該アミノ酸を始端
としてそのＮ末端側に任意のアミノ酸が配列したポリペ
プチド残基、ａ２、ａ３、ａ４、ａ５およびＲは前と同
じ意味）で表されるｇｐ１２０に対して親和性を有する
ペプチドや、或いは、 式（６）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５’ （式中、ａ５’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイ
シン、イソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニ
ン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、
アルギニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリ
プトファンの残基、若しくは、該アミノ酸及びアミノ酸
誘導体を始端として、そのＣ末端側に任意のアミノ酸が
配列したポリペプチド残基、Ｈ、ａ１、ａ２、ａ３およ
びａ４は前と同じ意味）で表されるｇｐ１２０に対して
親和性を有するペプチドも、全て本発明の一態様である
と言うことができる。
【００１７】また、上記第１若しくは第２のペプチド
に、官能基を有する高分子化合物及び／又は医薬活性物
質が結合した化合物または医薬として許容されるその塩
類も本発明の範囲内に包含される。
に、官能基を有する高分子化合物及び／又は医薬活性物
質が結合した化合物または医薬として許容されるその塩
類も本発明の範囲内に包含される。
【００１８】尚、これらのペプチド性化合物や化合物を
含有するものは、換言すれば、ｇｐ１２０に対する親和
剤と呼ぶことができる。
含有するものは、換言すれば、ｇｐ１２０に対する親和
剤と呼ぶことができる。
【００１９】更に、上記ペプチドまたは医薬として許容
されるその塩類、並びに薬学的に許容される担体及び／
又は医薬活性物質を含有する組成物も本発明の範囲内に
包含される。また、上記のペプチドを用いてＨＩＶ等の
ウイルスを検出、診断、除去等する様々な態様（例え
ば、ＨＩＶ診断検査薬若しくは該検査薬を含む検査キッ
トに利用したり、ＨＩＶ吸着除去剤に利用したり、血漿
交換療法に利用したりする等の態様）も本発明の範囲内
に包含される。
されるその塩類、並びに薬学的に許容される担体及び／
又は医薬活性物質を含有する組成物も本発明の範囲内に
包含される。また、上記のペプチドを用いてＨＩＶ等の
ウイルスを検出、診断、除去等する様々な態様（例え
ば、ＨＩＶ診断検査薬若しくは該検査薬を含む検査キッ
トに利用したり、ＨＩＶ吸着除去剤に利用したり、血漿
交換療法に利用したりする等の態様）も本発明の範囲内
に包含される。
【００２０】尚、本発明に用いられる「ペプチド」に
は、ペプチドのＣ末端がＣＯＯＨであるものの他、酸ア
ミドやエステル等になっているものも含み、また、結合
するアミノ酸の数にしても、特に明記しない限り、アミ
ノ酸が１０個以下のオリゴペプチドから、それ以上のポ
リペプチドまで包含するものとする。
は、ペプチドのＣ末端がＣＯＯＨであるものの他、酸ア
ミドやエステル等になっているものも含み、また、結合
するアミノ酸の数にしても、特に明記しない限り、アミ
ノ酸が１０個以下のオリゴペプチドから、それ以上のポ
リペプチドまで包含するものとする。
【００２１】また、上記ペプチドを構成するアミノ酸に
は、官能基を保護基で保護したアミノ酸誘導体も含まれ
る。この様なアミノ酸誘導体として、ペプチド骨格その
ものを代えることなく側鎖の官能基が置換若しくは修飾
されたもの；炭素鎖の鎖長を代えたもの等、各種アミノ
酸に対応した保護アミノ酸誘導体が市販されているが、
本発明では、これらの各種アミノ酸を使用することがで
きる。例えばチロシンの誘導体として、クロル基を側鎖
に持つ2,6-dichloro-L-tyrosine、フェニルアラニンの
側鎖のフェニル基のｐ位の水酸基をニトロ基に置換した
p-Nitro-L-phenylalanine、該水酸基をクロル基に置換
した4-chloro-L-phenylalanine等が挙げられ、また、バ
リンの誘導体としては、Norvaline:N-α-L-norvaline、
或いはMeVal:N-α-methyl-L-valine等が挙げられる。
は、官能基を保護基で保護したアミノ酸誘導体も含まれ
る。この様なアミノ酸誘導体として、ペプチド骨格その
ものを代えることなく側鎖の官能基が置換若しくは修飾
されたもの；炭素鎖の鎖長を代えたもの等、各種アミノ
酸に対応した保護アミノ酸誘導体が市販されているが、
本発明では、これらの各種アミノ酸を使用することがで
きる。例えばチロシンの誘導体として、クロル基を側鎖
に持つ2,6-dichloro-L-tyrosine、フェニルアラニンの
側鎖のフェニル基のｐ位の水酸基をニトロ基に置換した
p-Nitro-L-phenylalanine、該水酸基をクロル基に置換
した4-chloro-L-phenylalanine等が挙げられ、また、バ
リンの誘導体としては、Norvaline:N-α-L-norvaline、
或いはMeVal:N-α-methyl-L-valine等が挙げられる。
【００２２】
【発明の実施の形態】本発明者らは、従来のＨＩＶ治療
剤を用いたのでは、ワクチンにしても中和抗体にして
も、実用レベルの成果が何ら得られなかった理由とし
て、生体が抗原として認識できるＨＩＶの領域が、その
最外殻を構成するｇｐ１２０の変異の激しいＶ領域であ
ることに最大の問題があるという観点に基づき、生体が
作製する抗体に代わって、ｇｐ１２０に親和性を有する
ペプチドを得ることに着目し、鋭意検討してきた。その
結果、抗体と同等か、或いはそれ以上にｇｐ１２０に強
い特異性を有し、しかも耐高圧滅菌性にも優れたペプチ
ドを開発し、既に出願を済ませている（特願平8-351474
および特願平8-351475）。
剤を用いたのでは、ワクチンにしても中和抗体にして
も、実用レベルの成果が何ら得られなかった理由とし
て、生体が抗原として認識できるＨＩＶの領域が、その
最外殻を構成するｇｐ１２０の変異の激しいＶ領域であ
ることに最大の問題があるという観点に基づき、生体が
作製する抗体に代わって、ｇｐ１２０に親和性を有する
ペプチドを得ることに着目し、鋭意検討してきた。その
結果、抗体と同等か、或いはそれ以上にｇｐ１２０に強
い特異性を有し、しかも耐高圧滅菌性にも優れたペプチ
ドを開発し、既に出願を済ませている（特願平8-351474
および特願平8-351475）。
【００２３】ところがその後の研究により、上記ペプチ
ドのｇｐ１２０に対する親和性は、それに連なるアミノ
酸の種類や数により低下するという知見が得られた。そ
こで、より安定性に優れたペプチドを提供すべく更に検
討を重ねた結果、本発明を完成したのである。
ドのｇｐ１２０に対する親和性は、それに連なるアミノ
酸の種類や数により低下するという知見が得られた。そ
こで、より安定性に優れたペプチドを提供すべく更に検
討を重ねた結果、本発明を完成したのである。
【００２４】尚、本発明における「親和性」とは、静電
力や、水素結合、Van der Waals力、疎水性結合等の共
有結合以外の弱い相互作用が合わさった特異的な強い結
合を表す。
力や、水素結合、Van der Waals力、疎水性結合等の共
有結合以外の弱い相互作用が合わさった特異的な強い結
合を表す。
【００２５】本発明のペプチドは、上記の様に構成され
ており、基本的には、 式（１）：Ｈ−Ａ１-Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｒ （式中、Ａ１，Ａ２，Ａ３，Ａ４，Ａ５およびＲは前と
同じ意味）或いは、 式（４）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５−Ｒ （式中、ａ１，ａ２，ａ３，ａ４，ａ５およびＲは前と
同じ意味）で表される5個のアミノ酸残基から成るペプ
チドである。これらのペプチドは、この様に独立した分
子であっても良いし、或いはポリペプチド中に、上記
のペプチドにおいては、 式（２）：Ａ１' −Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５；若しくは 式（３）：Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５'； のアミノ酸配列が、また、上記のペプチドにおいて
は、 式（５）：ａ１' −ａ２−ａ３−ａ４−ａ５；若しくは 式（６）：ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５' （式中、Ａ１' ，Ａ２，Ａ３，Ａ４，Ａ５' ，a １' ，
ａ２，ａ３，ａ４，ａ５' は夫々前と同じ意味）のアミ
ノ酸配列が、夫々この順序でＮ末端側から配されたもの
であっても構わない。勿論、そのなかには、Ａ１' −Ａ
２' −Ａ３' −Ａ４' −Ａ５' やａ１' −ａ２' −ａ
３' −ａ４' −ａ５' がこの順序で繰り返し配してなる
ペプチドも含まれる。要するに、上述した５個のアミノ
酸残基からなるペプチドを含み、ｇｐ１２０に対して親
和性を有するペプチドは、全て本発明の範囲内に包含さ
れるのである。
ており、基本的には、 式（１）：Ｈ−Ａ１-Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｒ （式中、Ａ１，Ａ２，Ａ３，Ａ４，Ａ５およびＲは前と
同じ意味）或いは、 式（４）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５−Ｒ （式中、ａ１，ａ２，ａ３，ａ４，ａ５およびＲは前と
同じ意味）で表される5個のアミノ酸残基から成るペプ
チドである。これらのペプチドは、この様に独立した分
子であっても良いし、或いはポリペプチド中に、上記
のペプチドにおいては、 式（２）：Ａ１' −Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５；若しくは 式（３）：Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５'； のアミノ酸配列が、また、上記のペプチドにおいて
は、 式（５）：ａ１' −ａ２−ａ３−ａ４−ａ５；若しくは 式（６）：ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５' （式中、Ａ１' ，Ａ２，Ａ３，Ａ４，Ａ５' ，a １' ，
ａ２，ａ３，ａ４，ａ５' は夫々前と同じ意味）のアミ
ノ酸配列が、夫々この順序でＮ末端側から配されたもの
であっても構わない。勿論、そのなかには、Ａ１' −Ａ
２' −Ａ３' −Ａ４' −Ａ５' やａ１' −ａ２' −ａ
３' −ａ４' −ａ５' がこの順序で繰り返し配してなる
ペプチドも含まれる。要するに、上述した５個のアミノ
酸残基からなるペプチドを含み、ｇｐ１２０に対して親
和性を有するペプチドは、全て本発明の範囲内に包含さ
れるのである。
【００２６】本発明のペプチドは、固相合成法等の公地
の方法により製造することができる。例えば、Ａ１−Ａ
２−Ａ３−Ａ４−Ａ５からなる本発明第１のペプチドを
合成する場合、Ａ５がグリシン残基の場合は、Ｎ−保護
グリシンのカルボキシル基をカルボキシル基と結合し得
る官能基をカップリングさせた不溶性樹脂の様な担体に
結合させた後、Ａ２からＡ５までの各保護アミノ酸を固
相合成法により順次結合させ、次いで、上記不溶性樹脂
およびアミノ酸の保護基を脱離させることにより、所望
のペプチドを得ることができる。尚、Ａ５のアミノ酸残
基のカルボキシル基末端は、フリー（即ち、Ｒが−ＯＨ
に相当）であっても良いし、或いは酸アミド（即ち、Ｒ
が−ＮＨ2に相当）に変換されていても良い。また、Ａ
５のカルボキシル基末端は、必要に応じて該カルボキシ
ル基に結合しているスペーサーのカルボキシル基と共
に、合成高分子や生体高分子等、官能基を有する繁用の
高分子化合物と結合しても良い（後記する）。尚、上記
固相合成法に使用されるアミノ酸は、共通してＬ体であ
っても良いし、或いは共通してＤ体であっても構わな
い。より好ましくはＬ体である。
の方法により製造することができる。例えば、Ａ１−Ａ
２−Ａ３−Ａ４−Ａ５からなる本発明第１のペプチドを
合成する場合、Ａ５がグリシン残基の場合は、Ｎ−保護
グリシンのカルボキシル基をカルボキシル基と結合し得
る官能基をカップリングさせた不溶性樹脂の様な担体に
結合させた後、Ａ２からＡ５までの各保護アミノ酸を固
相合成法により順次結合させ、次いで、上記不溶性樹脂
およびアミノ酸の保護基を脱離させることにより、所望
のペプチドを得ることができる。尚、Ａ５のアミノ酸残
基のカルボキシル基末端は、フリー（即ち、Ｒが−ＯＨ
に相当）であっても良いし、或いは酸アミド（即ち、Ｒ
が−ＮＨ2に相当）に変換されていても良い。また、Ａ
５のカルボキシル基末端は、必要に応じて該カルボキシ
ル基に結合しているスペーサーのカルボキシル基と共
に、合成高分子や生体高分子等、官能基を有する繁用の
高分子化合物と結合しても良い（後記する）。尚、上記
固相合成法に使用されるアミノ酸は、共通してＬ体であ
っても良いし、或いは共通してＤ体であっても構わな
い。より好ましくはＬ体である。
【００２７】上記の場合において、固相合成法に使用さ
れる担体としては、そのアミノ基を介してＣ末端のＮ−
保護グリシンのカルボキシル基、または該カルボキシル
基と結合可能であり、しかも結合後に脱離可能なもので
あれば制限されず、例えば、クロロメチル樹脂（クロロ
メチル化スチレン−ジニビニルベンゼン共重合体等）や
オキシメチル樹脂（オキシメチルスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体等）等が挙げられる。また、カルボキシ
ル基と結合し得る官能基及び該カルボキシル基を有する
スペーサーを介して、アミノ基を有する不溶性樹脂に結
合させた４−（オキシメチル）フェニルアセタミドメチ
ル樹脂等の樹脂、ベンジルオキシベンジルアルコール樹
脂、アミノ基を有する不溶性樹脂であるベンズヒドリル
アミン樹脂、メチルベンズヒドロキシリルアミン樹脂、
アミノメチルフェノキシメチル樹脂、ジメトキシベンズ
ヒドリルアミン（ＤＭＢＨＡ）樹脂、およびこれらの誘
導体等が挙げられる。このうち、ベンズヒドリルアミン
樹脂、メチルベンズヒドロキシリルアミン樹脂、アミノ
メチルフェノキシメチル樹脂、およびＤＭＢＨＡ樹脂
は、結合後、開裂することにより直接酸アミドが得られ
る。収率の観点からすれば、アミノメチル樹脂の使用が
好ましい。
れる担体としては、そのアミノ基を介してＣ末端のＮ−
保護グリシンのカルボキシル基、または該カルボキシル
基と結合可能であり、しかも結合後に脱離可能なもので
あれば制限されず、例えば、クロロメチル樹脂（クロロ
メチル化スチレン−ジニビニルベンゼン共重合体等）や
オキシメチル樹脂（オキシメチルスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体等）等が挙げられる。また、カルボキシ
ル基と結合し得る官能基及び該カルボキシル基を有する
スペーサーを介して、アミノ基を有する不溶性樹脂に結
合させた４−（オキシメチル）フェニルアセタミドメチ
ル樹脂等の樹脂、ベンジルオキシベンジルアルコール樹
脂、アミノ基を有する不溶性樹脂であるベンズヒドリル
アミン樹脂、メチルベンズヒドロキシリルアミン樹脂、
アミノメチルフェノキシメチル樹脂、ジメトキシベンズ
ヒドリルアミン（ＤＭＢＨＡ）樹脂、およびこれらの誘
導体等が挙げられる。このうち、ベンズヒドリルアミン
樹脂、メチルベンズヒドロキシリルアミン樹脂、アミノ
メチルフェノキシメチル樹脂、およびＤＭＢＨＡ樹脂
は、結合後、開裂することにより直接酸アミドが得られ
る。収率の観点からすれば、アミノメチル樹脂の使用が
好ましい。
【００２８】また、カルボキシル基と結合し得る官能基
および該カルボキシル基を有するスペーサーとしては、
例えばグリシンのカルボキシル基をｐ−カルボキシメチ
ルベンジルエステルに変換し得るものが挙げられる。
および該カルボキシル基を有するスペーサーとしては、
例えばグリシンのカルボキシル基をｐ−カルボキシメチ
ルベンジルエステルに変換し得るものが挙げられる。
【００２９】また、上記「保護アミノ酸」とは、官能基
を公知の方法により保護基で保護したアミノ酸を意味
し、各種の保護アミノ酸が市販されている。本発明のペ
プチドを合成するには、以下に示す保護基のいずれかを
使用するのが好ましい。
を公知の方法により保護基で保護したアミノ酸を意味
し、各種の保護アミノ酸が市販されている。本発明のペ
プチドを合成するには、以下に示す保護基のいずれかを
使用するのが好ましい。
【００３０】例えばアミノ酸のα−アミノ基の保護基と
しては、Ｂｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）または
Ｆｍｏｃ（９−フルオレノメチルオキシカルボニル）；
リジンのξ−アミノ基の保護基としては、Ｚ（ベンジル
オキシカルボニル），Ｃｌ・Ｚ（２−クロロベンジルオ
キシカルボニル），Ｂｏｃ，Ｎｐｙｓ（３−ニトロ−２
−ピリジンスルフェニル）；チロシンの水酸基の保護基
としては、Ｂｚｌ（ベンジル），Ｃｌ2・Ｂｚｌ（２，
６−ジクロロベンジル）或いはｔ−Ｂｕ（ｔ−ブチル）
が挙げられるが、該チロシンの水酸基は上記保護基で保
護されていなくても良い；アルギニンのグアニジノ基の
保護基としては、Ｔｏｓ（トシル），ＮＯ2（ニト
ロ），Ｍｔｒ（４−メトキシ−２，３，６−トリメチル
ベンゼンスルホニル）またはｐｍｃ（２，２，５，７，
８−ペンタメチルクロマンー６ースルホニル）；グルタ
ミン酸のカルボキシル基の保護基としては、Ｂｚｌエス
テル，ｔ−Ｂｕエステル，ｃＨｘ（エステルサイクロヘ
キシルエステル）；グルタミンのアミド基の保護基とし
ては、Ｔｒｔ（トリチル）が挙げられるが、該保護基で
保護されていなくても良い；トリプトファンのインドー
ル基の保護基としては、ホルミル基またはＢｏｃが挙げ
られるが、該保護基で保護されていなくても良い。これ
らの保護基は、ペプチドの合成条件に応じて最も適切な
ものを、適宜選択して使用することができる。
しては、Ｂｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）または
Ｆｍｏｃ（９−フルオレノメチルオキシカルボニル）；
リジンのξ−アミノ基の保護基としては、Ｚ（ベンジル
オキシカルボニル），Ｃｌ・Ｚ（２−クロロベンジルオ
キシカルボニル），Ｂｏｃ，Ｎｐｙｓ（３−ニトロ−２
−ピリジンスルフェニル）；チロシンの水酸基の保護基
としては、Ｂｚｌ（ベンジル），Ｃｌ2・Ｂｚｌ（２，
６−ジクロロベンジル）或いはｔ−Ｂｕ（ｔ−ブチル）
が挙げられるが、該チロシンの水酸基は上記保護基で保
護されていなくても良い；アルギニンのグアニジノ基の
保護基としては、Ｔｏｓ（トシル），ＮＯ2（ニト
ロ），Ｍｔｒ（４−メトキシ−２，３，６−トリメチル
ベンゼンスルホニル）またはｐｍｃ（２，２，５，７，
８−ペンタメチルクロマンー６ースルホニル）；グルタ
ミン酸のカルボキシル基の保護基としては、Ｂｚｌエス
テル，ｔ−Ｂｕエステル，ｃＨｘ（エステルサイクロヘ
キシルエステル）；グルタミンのアミド基の保護基とし
ては、Ｔｒｔ（トリチル）が挙げられるが、該保護基で
保護されていなくても良い；トリプトファンのインドー
ル基の保護基としては、ホルミル基またはＢｏｃが挙げ
られるが、該保護基で保護されていなくても良い。これ
らの保護基は、ペプチドの合成条件に応じて最も適切な
ものを、適宜選択して使用することができる。
【００３１】保護アミノ酸の結合は、通常の縮合法、例
えばＤＣＣ（ジクロロヘキシカルボジイミド）法（R.B.
Merrifield: Biochemistry,3,1385,1964），ＤＩＣＤ
Ｉ（ジイソプロピルカルボジイミド）法（D. Sarantaki
s,et al: Biochem. Biophys.Res. Commun., 73, 336, 1
976）,活性エステル法（F. Weygand, et al : Z. Natur
forsch., B, 21, 1141, 1966）,混合或いは対称酸無水
物法（D. Yamashiro,et. al: Proc. Natl.Acad.Sci. US
A, 71, 4945, 1945）,カルボニルジイミダゾール法，Ｄ
ＣＣ−ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）
法（Keonig,W., et al.; Chem. Ber., 103: 788, 197
0），ジフェニルホスホリルアジド法等に従って行うこ
とができるが、なかでもＤＣＣ法、ＤＣＣ−ＨＯＢｔ
法、ＤＩＣＤＩ−ＨＯＢｔ法、対称酸無水物法を使用す
ることが好ましい。これらの縮合反応は、通常、ジクロ
ロメタンやジメチルホルムアミド等の有機溶媒、または
それらの混合液中で行われる。
えばＤＣＣ（ジクロロヘキシカルボジイミド）法（R.B.
Merrifield: Biochemistry,3,1385,1964），ＤＩＣＤ
Ｉ（ジイソプロピルカルボジイミド）法（D. Sarantaki
s,et al: Biochem. Biophys.Res. Commun., 73, 336, 1
976）,活性エステル法（F. Weygand, et al : Z. Natur
forsch., B, 21, 1141, 1966）,混合或いは対称酸無水
物法（D. Yamashiro,et. al: Proc. Natl.Acad.Sci. US
A, 71, 4945, 1945）,カルボニルジイミダゾール法，Ｄ
ＣＣ−ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）
法（Keonig,W., et al.; Chem. Ber., 103: 788, 197
0），ジフェニルホスホリルアジド法等に従って行うこ
とができるが、なかでもＤＣＣ法、ＤＣＣ−ＨＯＢｔ
法、ＤＩＣＤＩ−ＨＯＢｔ法、対称酸無水物法を使用す
ることが好ましい。これらの縮合反応は、通常、ジクロ
ロメタンやジメチルホルムアミド等の有機溶媒、または
それらの混合液中で行われる。
【００３２】尚、α−アミノ基の保護基の脱離試薬とし
ては、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン，ＨＣｌ／ジ
オキサン，ピペリジン／ジメチルホルムアミド等が用い
られ、使用する保護基の種類により適宜選択することが
できる。また、合成の各段階における縮合反応の進行の
程度は、ニンヒドリン反応法（E. Kaiser, et al, Ana
l. Biocehm., 34: 595, 1970）により確認することがで
きる。
ては、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン，ＨＣｌ／ジ
オキサン，ピペリジン／ジメチルホルムアミド等が用い
られ、使用する保護基の種類により適宜選択することが
できる。また、合成の各段階における縮合反応の進行の
程度は、ニンヒドリン反応法（E. Kaiser, et al, Ana
l. Biocehm., 34: 595, 1970）により確認することがで
きる。
【００３３】この様にして、上式で表されるアミノ酸配
列を有する保護ペプチド樹脂を得た後、不溶性樹脂およ
びアミノ酸の保護基を脱離させることにより、所望のペ
プチドを得ることができる。具体的には、例えば、不溶
性樹脂としてクロロメチル樹脂誘導体を用いた場合には
アニソールを添加してフッ化水素で処理すれば良い。ま
た、不溶性樹脂としてベンジルオキシベンジルアルコー
ル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、ＤＭＢＨＡ樹脂
（Funakoshi, S., J.Chem.Soc.,Chem. Commun.,198:38
2,1988）を用いた場合には、フッ化水素、TFMSA（トリ
フルオロメタンスルホン酸）、ＴＭＳＯＴＦ(トリメチ
ルシリルトリフルラート）、またはTMSBr(トリメチルシ
リルブロミド）等で処理することにより、該樹脂および
保護基を同時に脱離させることができる。
列を有する保護ペプチド樹脂を得た後、不溶性樹脂およ
びアミノ酸の保護基を脱離させることにより、所望のペ
プチドを得ることができる。具体的には、例えば、不溶
性樹脂としてクロロメチル樹脂誘導体を用いた場合には
アニソールを添加してフッ化水素で処理すれば良い。ま
た、不溶性樹脂としてベンジルオキシベンジルアルコー
ル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、ＤＭＢＨＡ樹脂
（Funakoshi, S., J.Chem.Soc.,Chem. Commun.,198:38
2,1988）を用いた場合には、フッ化水素、TFMSA（トリ
フルオロメタンスルホン酸）、ＴＭＳＯＴＦ(トリメチ
ルシリルトリフルラート）、またはTMSBr(トリメチルシ
リルブロミド）等で処理することにより、該樹脂および
保護基を同時に脱離させることができる。
【００３４】この様にして得られたペプチドは、各種ク
ロマトグラフィー（ゲル濾過、イオン交換、分配、吸
着、逆相），電気泳動，限外濾過等の公知手段により単
離精製することができる。
ロマトグラフィー（ゲル濾過、イオン交換、分配、吸
着、逆相），電気泳動，限外濾過等の公知手段により単
離精製することができる。
【００３５】また本発明では、上記ペプチドを遺伝子組
換え法によって得られる類似蛋白質（抗体、レセプタ
ー、酵素等の活性中心や結合ドメイン）で置換させたも
のも、本発明のペプチドとして用いることができる。例
えば、ヒト型抗ｇｐ１２０抗体を遺伝子組換え法により
製造する場合には、米国特許第１１４６３２号に記載の
方法に準じて、ヒトイムノグロブリンのＶ遺伝子領域
中、エピトープの認識に関係していると言われているＶ
Ｈ３１から３５番までのＣＤＲ（complementaritydeter
mination region）−１の全領域、ＣＤＲ−２のＶＨ５
０から５２番まで、及び／又はＣＤＲ−２のＶＨ５８か
ら６０番までの３つの超可変群（Hypervariable cluste
r ）のアミノ酸（Ohno, S., Mori, N. & Matunaga, T.;
Proc. Nat.Acad. Sci. USA, 82, 2945, 1985）に、上
記本発明のペプチドを導入する等すればよい。
換え法によって得られる類似蛋白質（抗体、レセプタ
ー、酵素等の活性中心や結合ドメイン）で置換させたも
のも、本発明のペプチドとして用いることができる。例
えば、ヒト型抗ｇｐ１２０抗体を遺伝子組換え法により
製造する場合には、米国特許第１１４６３２号に記載の
方法に準じて、ヒトイムノグロブリンのＶ遺伝子領域
中、エピトープの認識に関係していると言われているＶ
Ｈ３１から３５番までのＣＤＲ（complementaritydeter
mination region）−１の全領域、ＣＤＲ−２のＶＨ５
０から５２番まで、及び／又はＣＤＲ−２のＶＨ５８か
ら６０番までの３つの超可変群（Hypervariable cluste
r ）のアミノ酸（Ohno, S., Mori, N. & Matunaga, T.;
Proc. Nat.Acad. Sci. USA, 82, 2945, 1985）に、上
記本発明のペプチドを導入する等すればよい。
【００３６】この様に上記本発明のペプチドを、その目
的に応じて遺伝子組換え法により置換させることによ
り、ｇｐ１２０結合型の蛋白質を作製することができ
る。
的に応じて遺伝子組換え法により置換させることによ
り、ｇｐ１２０結合型の蛋白質を作製することができ
る。
【００３７】本発明第１のペプチドの具体例としては例
えば表１〜２に示すものが、また、本発明第２のペプチ
ドの具体例としては例えば表３〜４に示すものが夫々挙
げられる。尚、表中の＊は、後記する実施例に記載の方
法に基づいて凝集試験及び中和試験を実施した場合、凝
集若しくは中和が見られたことを意味する。尚、表１の
Ｎｏ．２４は本発明第１のペプチドにも該当するし、本
発明第２のペプチドにも該当するものである。
えば表１〜２に示すものが、また、本発明第２のペプチ
ドの具体例としては例えば表３〜４に示すものが夫々挙
げられる。尚、表中の＊は、後記する実施例に記載の方
法に基づいて凝集試験及び中和試験を実施した場合、凝
集若しくは中和が見られたことを意味する。尚、表１の
Ｎｏ．２４は本発明第１のペプチドにも該当するし、本
発明第２のペプチドにも該当するものである。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】式中の各アミノ酸記号は、国際的に認めら
れた三文字表示によるアミノ酸残基を示すものであり、
その詳細は下記の通りである。 Ｔｙｒ：チロシン Ｌｙｓ：リジン Ｔｒｐ：トリプトファン Ａｒｇ：アルギニン Ｇｌｕ：グルタミン酸 Ｇｌｎ：グルタミン Ｈｉｓ：ヒスチジン Ａｌａ：アラニン Ｐｈｅ：フェニルアラニン Ｇｌｙ：グリシン Ｍｅｔ：メチオニン Ａｓｐ：アスパラギン酸 Ａｓｎ：アスパラギン Ｖａｌ：バリン Ｓｅｒ：セリン Ｃｙｓ：システイン Ｔｈｒ：トレオニン Ｉｌｅ：イソロイシン Ｌｅｕ：ロイシン Ｐｒｏ：プロリン。
れた三文字表示によるアミノ酸残基を示すものであり、
その詳細は下記の通りである。 Ｔｙｒ：チロシン Ｌｙｓ：リジン Ｔｒｐ：トリプトファン Ａｒｇ：アルギニン Ｇｌｕ：グルタミン酸 Ｇｌｎ：グルタミン Ｈｉｓ：ヒスチジン Ａｌａ：アラニン Ｐｈｅ：フェニルアラニン Ｇｌｙ：グリシン Ｍｅｔ：メチオニン Ａｓｐ：アスパラギン酸 Ａｓｎ：アスパラギン Ｖａｌ：バリン Ｓｅｒ：セリン Ｃｙｓ：システイン Ｔｈｒ：トレオニン Ｉｌｅ：イソロイシン Ｌｅｕ：ロイシン Ｐｒｏ：プロリン。
【００４３】この様なアミノ酸配列を有するペプチド
は、ｇｐ１２０に対して優れた親和性を有しており、以
下に示す化合物または組成物の形態をとることによっ
て、抗ＨＩＶ剤として有効に用いることができる。
は、ｇｐ１２０に対して優れた親和性を有しており、以
下に示す化合物または組成物の形態をとることによっ
て、抗ＨＩＶ剤として有効に用いることができる。
【００４４】本発明の化合物は、上記ペプチドに、官能
基を有する高分子化合物及び／又は医薬活性物質が結合
したものであり、医薬として許容されるその塩類も本発
明のなかに包含される。
基を有する高分子化合物及び／又は医薬活性物質が結合
したものであり、医薬として許容されるその塩類も本発
明のなかに包含される。
【００４５】ここで、「医薬として許容される塩類」と
しては、例えば以下の様な常用の無毒性の塩類が挙げら
れる。
しては、例えば以下の様な常用の無毒性の塩類が挙げら
れる。
【００４６】無機塩基等の塩基との塩として、アルカ
リ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、アル
カリ土類金属塩（例えばカルシウム塩、マグネシウム塩
等）、アンモニウム塩；有機塩基塩等の塩基との塩と
して、有機アミン塩（例えばトリエチルアミン塩、ピリ
ジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノ
ールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ' −
ジベンジルエチレンジアミン塩等）；無機酸等の酸と
の塩として、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸
等；有機酸等の酸との塩として、有機カルボン酸（酢
酸、プロピオン酸、マレイン酸、コハク酸、リンゴ酸、
クエン酸、酒石酸、サリチル酸等）、有機スルホン酸
（メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）、酸
性糖（グルクロン酸、ガラクトン酸、グルコン酸、アス
コルビン酸等）。
リ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、アル
カリ土類金属塩（例えばカルシウム塩、マグネシウム塩
等）、アンモニウム塩；有機塩基塩等の塩基との塩と
して、有機アミン塩（例えばトリエチルアミン塩、ピリ
ジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノ
ールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ' −
ジベンジルエチレンジアミン塩等）；無機酸等の酸と
の塩として、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸
等；有機酸等の酸との塩として、有機カルボン酸（酢
酸、プロピオン酸、マレイン酸、コハク酸、リンゴ酸、
クエン酸、酒石酸、サリチル酸等）、有機スルホン酸
（メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）、酸
性糖（グルクロン酸、ガラクトン酸、グルコン酸、アス
コルビン酸等）。
【００４７】また、本発明に用いられる「官能基を有す
る高分子化合物」は、本発明のペプチドと結合すること
のできる官能基を有するものであれば特に限定されない
が、例えば以下のものが挙げられる。
る高分子化合物」は、本発明のペプチドと結合すること
のできる官能基を有するものであれば特に限定されない
が、例えば以下のものが挙げられる。
【００４８】（１）合成高分子化合物 上記高分子化合物としては、直鎖状ポリマー、分岐状ポ
リマー、環状ポリマー等任意のものが用いられ、例えば
ポリリジン，ポリグルタミン酸等のアミノ酸ホモポリマ
ー，或いは環状ポリアミン，サイクロデキストリン，環
状ペプチドの他，ポリスチレン，ポリプロピレン，ナイ
ロン，シリカゲル，ポリエチレングリコール，セルロー
ス，ポリアクリルアミド等の不溶性の固相担体を使用す
ることができる。
リマー、環状ポリマー等任意のものが用いられ、例えば
ポリリジン，ポリグルタミン酸等のアミノ酸ホモポリマ
ー，或いは環状ポリアミン，サイクロデキストリン，環
状ペプチドの他，ポリスチレン，ポリプロピレン，ナイ
ロン，シリカゲル，ポリエチレングリコール，セルロー
ス，ポリアクリルアミド等の不溶性の固相担体を使用す
ることができる。
【００４９】このうち分岐状ポリマーは、ポリマー中の
分子の一部が分岐することにより、単位当たりの官能基
濃度が、通常の直鎖状ポリマーよりも高いものである。
例えばDenkewalter により開示されたリジンコアー等の
様に、少なくとも２個以上の官能基を有するコアー分子
に由来する２本以上の同一分子鎖に基づくポリマー（米
国特許Ｎo.４，２８９，８７２号）、或いはTomaliaら
によって提唱されている同一分子が連続的に反応するこ
とによりポリマーサイズが厳密な規則性を有するスター
バーストデンドリマー（Starburst dendrimer ）の様な
ものであっても良いし、或いは、同一／異なった分子が
不連続に反応することによりサイズが不規則に形成され
た分子であっても構わない。また、上記直鎖状／分岐状
ポリマーは、充分な大きさを有する担体分子である必要
はなく、通常はコアーとは認識されない様な３個程度の
モノマーを含むものも包含され、その大きさや導入数に
よって何ら制限されるものではない。但し、上式のペプ
チドを多数導入させる場合には、いずれのポリマーであ
っても、分岐数が多いポリマーの使用が推奨される。本
発明のペプチドを上述したポリマーに結合させるに当た
っては、分岐した官能基からそのまま直接的／間接的
に、上記ペプチドを合成して伸長させても良いし、或い
は、別途新規に合成したペプチドを、該ポリマーの官能
基に直接的／間接的にコンジュゲートしても良い。
分子の一部が分岐することにより、単位当たりの官能基
濃度が、通常の直鎖状ポリマーよりも高いものである。
例えばDenkewalter により開示されたリジンコアー等の
様に、少なくとも２個以上の官能基を有するコアー分子
に由来する２本以上の同一分子鎖に基づくポリマー（米
国特許Ｎo.４，２８９，８７２号）、或いはTomaliaら
によって提唱されている同一分子が連続的に反応するこ
とによりポリマーサイズが厳密な規則性を有するスター
バーストデンドリマー（Starburst dendrimer ）の様な
ものであっても良いし、或いは、同一／異なった分子が
不連続に反応することによりサイズが不規則に形成され
た分子であっても構わない。また、上記直鎖状／分岐状
ポリマーは、充分な大きさを有する担体分子である必要
はなく、通常はコアーとは認識されない様な３個程度の
モノマーを含むものも包含され、その大きさや導入数に
よって何ら制限されるものではない。但し、上式のペプ
チドを多数導入させる場合には、いずれのポリマーであ
っても、分岐数が多いポリマーの使用が推奨される。本
発明のペプチドを上述したポリマーに結合させるに当た
っては、分岐した官能基からそのまま直接的／間接的
に、上記ペプチドを合成して伸長させても良いし、或い
は、別途新規に合成したペプチドを、該ポリマーの官能
基に直接的／間接的にコンジュゲートしても良い。
【００５０】また、環状ポリアミン，サイクロデキスト
リン，環状ペプチド等の環状ポリマーを結合させるに当
たっては、その同一官能基から上式のペプチドを直接合
成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成し
たペプチドを、該環状ポリマーの官能基に直接的／間接
的に結合させても良い。また、シリカゲル等の不溶性担
体を結合させるに当たっては、予め同一官能基を上記担
体に導入した後、その官能基から直接上式のペプチドを
合成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成
したペプチドを、該不溶性担体の官能基に直接的／間接
的にコンジュゲートしても良い。また、この同一官能基
を有する担体の大きさや形状は特に限定されず、球状、
中空糸状、繊維状等の形状のものを使用目的により適宜
選択して使用すれば良く、大きさや形状、導入された官
能基の数によって何ら制限されるものではない。
リン，環状ペプチド等の環状ポリマーを結合させるに当
たっては、その同一官能基から上式のペプチドを直接合
成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成し
たペプチドを、該環状ポリマーの官能基に直接的／間接
的に結合させても良い。また、シリカゲル等の不溶性担
体を結合させるに当たっては、予め同一官能基を上記担
体に導入した後、その官能基から直接上式のペプチドを
合成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成
したペプチドを、該不溶性担体の官能基に直接的／間接
的にコンジュゲートしても良い。また、この同一官能基
を有する担体の大きさや形状は特に限定されず、球状、
中空糸状、繊維状等の形状のものを使用目的により適宜
選択して使用すれば良く、大きさや形状、導入された官
能基の数によって何ら制限されるものではない。
【００５１】（２）生体高分子 上記生体高分子としては、例えばヘパリン、ヒアルロン
酸、キトサン、キチン等の直鎖状多糖類；プロテオグリ
カン類，ペプチドホルモン；ゼラチン，アルブミン，抗
体，抗体断片等のタンパク質等が挙げられる。
酸、キトサン、キチン等の直鎖状多糖類；プロテオグリ
カン類，ペプチドホルモン；ゼラチン，アルブミン，抗
体，抗体断片等のタンパク質等が挙げられる。
【００５２】このうち直鎖状ポリマーの大きさは、使用
目的に応じて適宜選択すれば良く、通常はポリマーとは
認識されない様な３個程度のモノマーを含むものも包含
され、その大きさや官能基の数によって何ら制限される
ものではない。上式のペプチドをこの直鎖状ポリマーに
結合させるに当たっては、その同一官能基から上記ペプ
チドを直接合成して伸長させても良いし、或いは、別途
新規に合成したペプチドを、該直鎖状ポリマーの官能基
に直接的／間接的にコンジュゲートしても良い。
目的に応じて適宜選択すれば良く、通常はポリマーとは
認識されない様な３個程度のモノマーを含むものも包含
され、その大きさや官能基の数によって何ら制限される
ものではない。上式のペプチドをこの直鎖状ポリマーに
結合させるに当たっては、その同一官能基から上記ペプ
チドを直接合成して伸長させても良いし、或いは、別途
新規に合成したペプチドを、該直鎖状ポリマーの官能基
に直接的／間接的にコンジュゲートしても良い。
【００５３】また、ペプチドホルモンやタンパク質を結
合させる場合には、上式のペプチドのいずれか末端にシ
ステインを結合させて、上記ペプチドホルモン／タンパ
ク質中のシステイン残基とＳ−Ｓ結合させるか、或い
は、上式のペプチドの官能基とペプチドホルモン／タン
パク質中の官能基を直接的／間接的にコンジュゲートし
ても良い。この様に、これらの結合方法は、使用目的に
応じて適宜選択することができるし、また、その種類や
上式のペプチドの導入数にしても同様である。
合させる場合には、上式のペプチドのいずれか末端にシ
ステインを結合させて、上記ペプチドホルモン／タンパ
ク質中のシステイン残基とＳ−Ｓ結合させるか、或い
は、上式のペプチドの官能基とペプチドホルモン／タン
パク質中の官能基を直接的／間接的にコンジュゲートし
ても良い。この様に、これらの結合方法は、使用目的に
応じて適宜選択することができるし、また、その種類や
上式のペプチドの導入数にしても同様である。
【００５４】また、本発明に用いられる医薬活性物質と
しては、例えば抗ＨＩＶ阻害剤として知られているヌク
レオシド誘導体のＡＺＴ，ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤と
して知られている3,4-Dihydroxy-2,5-di[N-methyl-(2-p
yridylmethyl)carbamoyl]valylamino]−１,6-diphenylh
exane 等があげられる。これらの医薬活性物質は、本発
明のペプチドの活性部位を避けて直接的／間接的にコン
ジュゲートすることにより、副作用がなく、ＨＩＶに特
異的な製剤を得ることができる。従って、この様な製剤
は、ＨＩＶを特異的に治癒することのできる治療剤とし
て有用である。
しては、例えば抗ＨＩＶ阻害剤として知られているヌク
レオシド誘導体のＡＺＴ，ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤と
して知られている3,4-Dihydroxy-2,5-di[N-methyl-(2-p
yridylmethyl)carbamoyl]valylamino]−１,6-diphenylh
exane 等があげられる。これらの医薬活性物質は、本発
明のペプチドの活性部位を避けて直接的／間接的にコン
ジュゲートすることにより、副作用がなく、ＨＩＶに特
異的な製剤を得ることができる。従って、この様な製剤
は、ＨＩＶを特異的に治癒することのできる治療剤とし
て有用である。
【００５５】更に、上述した本発明のペプチドまたは医
薬として許容されるその塩類、並びに薬学的に許容され
る担体及び／又は医薬活性物質を含有する組成物も本発
明の範囲内に包含される。
薬として許容されるその塩類、並びに薬学的に許容され
る担体及び／又は医薬活性物質を含有する組成物も本発
明の範囲内に包含される。
【００５６】上記の「薬学的に許容される担体」として
は、賦形剤（崩壊剤、滑沢剤、増量剤等）、着色料、着
香料、保存料、安定剤、その他常用の担体を適宜使用す
ることができる。具体的には、結晶セルロース、カルメ
ロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキ
シプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル
ロース、エチルセルロース、ステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、軽質無水ケイ酸、食用色素、芳香性精油類
等が挙げられる。
は、賦形剤（崩壊剤、滑沢剤、増量剤等）、着色料、着
香料、保存料、安定剤、その他常用の担体を適宜使用す
ることができる。具体的には、結晶セルロース、カルメ
ロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキ
シプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル
ロース、エチルセルロース、ステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、軽質無水ケイ酸、食用色素、芳香性精油類
等が挙げられる。
【００５７】以下実施例に基づいて本発明を詳述する。
ただし、下記実施例は本発明を制限するものではなく、
前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施することは
全て本発明の技術範囲に包含される。
ただし、下記実施例は本発明を制限するものではなく、
前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施することは
全て本発明の技術範囲に包含される。
【００５８】
【実施例】合成例1：本発明ペプチドにポリエチレング
リコールを結合させた化合物 ポリエチレングリコール（ＭＷ．２０，０００）の水酸
基に無水コハク酸を反応させることによりカルボキシル
基を導入した後、ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）と反応させることによ
り、マレイミド化したポリエチレングリコールを合成し
た。
リコールを結合させた化合物 ポリエチレングリコール（ＭＷ．２０，０００）の水酸
基に無水コハク酸を反応させることによりカルボキシル
基を導入した後、ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）と反応させることによ
り、マレイミド化したポリエチレングリコールを合成し
た。
【００５９】それに、前記表１におけるＮｏ．1のペプ
チドのＣ末端にシステインを導入したペプチドをペプチ
ド結合させることにより、ペプチド−ポリエチレングリ
コール結合化合物を得た。得られた化合物をリン酸緩衝
液で懸濁した後、ｇｐ１２０結合担体によるアフィニテ
ィー、及びゲルクロマトグラフィー等を行って精製し
た。
チドのＣ末端にシステインを導入したペプチドをペプチ
ド結合させることにより、ペプチド−ポリエチレングリ
コール結合化合物を得た。得られた化合物をリン酸緩衝
液で懸濁した後、ｇｐ１２０結合担体によるアフィニテ
ィー、及びゲルクロマトグラフィー等を行って精製し
た。
【００６０】合成例２：本発明ペプチドにサイクロデキ
ストリンを結合させた化合物 α−サイクロデキストリンの水酸基に無水コハク酸を反
応させることによりカルボキシル基を導入した後、ＭＢ
Ｓ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド）と反応させることにより、マレイミド化した
サイクロデキストリンを合成した。
ストリンを結合させた化合物 α−サイクロデキストリンの水酸基に無水コハク酸を反
応させることによりカルボキシル基を導入した後、ＭＢ
Ｓ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド）と反応させることにより、マレイミド化した
サイクロデキストリンを合成した。
【００６１】一方、前記表３におけるＮｏ．１２のペプ
チドのＣ末端にシステインをペプチド結合させたペプチ
ドを固相合成法で合成した後、得られたペプチドと、上
記マレイミド化したサイクロデキストリンを反応させる
ことにより環状生成物を得た。
チドのＣ末端にシステインをペプチド結合させたペプチ
ドを固相合成法で合成した後、得られたペプチドと、上
記マレイミド化したサイクロデキストリンを反応させる
ことにより環状生成物を得た。
【００６２】合成例3：本発明ペプチドに分岐状ポリマ
ーを結合させた化合物（１） ＭＡＰｓ（Multiple antigenic peptide）のＮ末端アミ
ノ酸側を前記表１におけるＮｏ．１のペプチドで伸長
し、分岐状ポリマーに結合させた化合物を得た。得られ
た化合物をリン酸緩衝液で懸濁した後、ｇｐ１２０結合
担体によるアフィニティクロマトグラフィー、及びゲル
クロマトグラフィー等を行って精製した。
ーを結合させた化合物（１） ＭＡＰｓ（Multiple antigenic peptide）のＮ末端アミ
ノ酸側を前記表１におけるＮｏ．１のペプチドで伸長
し、分岐状ポリマーに結合させた化合物を得た。得られ
た化合物をリン酸緩衝液で懸濁した後、ｇｐ１２０結合
担体によるアフィニティクロマトグラフィー、及びゲル
クロマトグラフィー等を行って精製した。
【００６３】合成例４：本発明ペプチドに分岐状ポリマ
ーを結合させた化合物（２） ＭＡＰｓのＮ末端アミノ酸側を前記表３におけるＮｏ．
１２のペプチドで伸長し、分岐状ポリマーに結合させた
化合物を得た。得られた化合物をリン酸緩衝液で懸濁し
た後、ｇｐ１２０結合担体によるアフィニティクロマト
グラフィー、及びゲルクロマトグラフィー等を行って精
製した。
ーを結合させた化合物（２） ＭＡＰｓのＮ末端アミノ酸側を前記表３におけるＮｏ．
１２のペプチドで伸長し、分岐状ポリマーに結合させた
化合物を得た。得られた化合物をリン酸緩衝液で懸濁し
た後、ｇｐ１２０結合担体によるアフィニティクロマト
グラフィー、及びゲルクロマトグラフィー等を行って精
製した。
【００６４】合成例５：本発明ペプチドにＡＺＴを結合
させた化合物 ブロモ酢酸にクロロギ酸イソブチルを反応させて混合無
水とした後、これをＡＺＴの水酸基と反応させてエステ
ル化することによりブロモアセチルエステル−ＡＺＴを
合成した。
させた化合物 ブロモ酢酸にクロロギ酸イソブチルを反応させて混合無
水とした後、これをＡＺＴの水酸基と反応させてエステ
ル化することによりブロモアセチルエステル−ＡＺＴを
合成した。
【００６５】一方、前記表３におけるＮｏ．１２のペプ
チドのＣ末端にシステインをペプチド結合させたペプチ
ドを固相合成法で合成した後、得られたペプチドと、上
記のブロモアセチルエステル−ＡＺＴを反応させること
により、該ペプチドとＡＺＴの架橋生成物を得た。
チドのＣ末端にシステインをペプチド結合させたペプチ
ドを固相合成法で合成した後、得られたペプチドと、上
記のブロモアセチルエステル−ＡＺＴを反応させること
により、該ペプチドとＡＺＴの架橋生成物を得た。
【００６６】合成例６：本発明ペプチドに、不活性化し
たアルカリホスファターゼを結合した化合物 不活性化したアルカリホスファターゼ（Ａｌｐ）にＭＢ
Ｓ（ｍ−マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシン
イミド）を反応させることにより、マレイミド化したア
ルカリホスファターゼを合成した。そして、そのマレイ
ミド基にＣ末端側にシステインを導入した前記表３にお
けるＮｏ．８のペプチドを結合させ、アルカリホスファ
ターゼ結合化合物を得た。尚、アルカリホスファターゼ
の不活性化は、基質としてｐ−ニトリルフェニルリン酸
を用い、ｐ−ニトリルフェノールの生成がないことを確
かめることにより確認した。
たアルカリホスファターゼを結合した化合物 不活性化したアルカリホスファターゼ（Ａｌｐ）にＭＢ
Ｓ（ｍ−マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシン
イミド）を反応させることにより、マレイミド化したア
ルカリホスファターゼを合成した。そして、そのマレイ
ミド基にＣ末端側にシステインを導入した前記表３にお
けるＮｏ．８のペプチドを結合させ、アルカリホスファ
ターゼ結合化合物を得た。尚、アルカリホスファターゼ
の不活性化は、基質としてｐ−ニトリルフェニルリン酸
を用い、ｐ−ニトリルフェノールの生成がないことを確
かめることにより確認した。
【００６７】合成例７：本発明ペプチドをセファデック
ス６ＭＢに結合させた吸着除去用担体（１） 前記表１におけるＮｏ．１のペプチドを、スペーサーを
介して予め活性化されたSephadex ４Ｂに共有結合さ
せ、ペプチド／Sepharose ６ＭＢ（1μmol of ｇｐ１２
０/ml in bed volum）を作製した。未反応のペプチド
は、リン酸緩衝液を用いて室温で１０分間（12,000rpm)
遠心し、上清を吸引除去する操作を繰り返すことによ
り、未反応ペプチドを除去した。
ス６ＭＢに結合させた吸着除去用担体（１） 前記表１におけるＮｏ．１のペプチドを、スペーサーを
介して予め活性化されたSephadex ４Ｂに共有結合さ
せ、ペプチド／Sepharose ６ＭＢ（1μmol of ｇｐ１２
０/ml in bed volum）を作製した。未反応のペプチド
は、リン酸緩衝液を用いて室温で１０分間（12,000rpm)
遠心し、上清を吸引除去する操作を繰り返すことによ
り、未反応ペプチドを除去した。
【００６８】合成例８：本発明ペプチドをセファデック
ス６ＭＢに結合させた吸着除去用担体（２） 前記表３におけるＮｏ．１２のペプチドを、スペーサー
を介して予め活性化されたSephadex ４Ｂに共有結合さ
せ、ペプチド／Sepharose ６ＭＢ（1μmolのｇｐ１２０
/ml in bed volume）を作製した。未反応のペプチド
は、リン酸緩衝液を用いて室温で１０分間（12,000rpm)
遠心し、上清を吸引除去するという操作を繰返すことに
より除去した。
ス６ＭＢに結合させた吸着除去用担体（２） 前記表３におけるＮｏ．１２のペプチドを、スペーサー
を介して予め活性化されたSephadex ４Ｂに共有結合さ
せ、ペプチド／Sepharose ６ＭＢ（1μmolのｇｐ１２０
/ml in bed volume）を作製した。未反応のペプチド
は、リン酸緩衝液を用いて室温で１０分間（12,000rpm)
遠心し、上清を吸引除去するという操作を繰返すことに
より除去した。
【００６９】合成例９：本発明ペプチドをセファデック
ス４Ｂに結合させた吸着除去用担体 前記表３におけるＮｏ．１２のペプチドを、予め活性化
されたSephadex ４Ｂに共有結合させ、ペプチド／Sepha
rose 4B（1μmolのｇｐ１２０/ml in bed volume）を作
製した。未反応のペプチドは、リン酸緩衝液を用いて室
温で１０分間（12,000rpm)遠心し、上清を吸引除去する
という操作を繰返すことにより除去した。
ス４Ｂに結合させた吸着除去用担体 前記表３におけるＮｏ．１２のペプチドを、予め活性化
されたSephadex ４Ｂに共有結合させ、ペプチド／Sepha
rose 4B（1μmolのｇｐ１２０/ml in bed volume）を作
製した。未反応のペプチドは、リン酸緩衝液を用いて室
温で１０分間（12,000rpm)遠心し、上清を吸引除去する
という操作を繰返すことにより除去した。
【００７０】合成例１０：本発明ペプチドをセルロース
系担体に結合した吸着除去用担体 前記表３におけるＮｏ．１２のペプチドをペルオキシ化
したセルロース担体と反応させてセルロースに共有結合
させ，グリシンによってブロッキングした後、炭酸水素
ナトリウム緩衝液（ｐＨ８）およびリン酸緩衝液（ｐＨ
４）で充分洗浄し、作成した。
系担体に結合した吸着除去用担体 前記表３におけるＮｏ．１２のペプチドをペルオキシ化
したセルロース担体と反応させてセルロースに共有結合
させ，グリシンによってブロッキングした後、炭酸水素
ナトリウム緩衝液（ｐＨ８）およびリン酸緩衝液（ｐＨ
４）で充分洗浄し、作成した。
【００７１】実施例１：中和活性の測定 本実施例では、表５及び表６に示す種々のペプチドを使
用し、ＨＩＶ−１に対する中和活性を調べた。
用し、ＨＩＶ−１に対する中和活性を調べた。
【００７２】具体的には、９６ウエルのマイクロプレー
ト中に、上記ペプチドを５０μＬ；ウイルス液として、
２００ＴＣＩＤ50のＨＴＬＶ−III Ｂ（実験室株）、２
００ＴＣＩＤ50のＫＫ−１株（新鮮分離株，大竹徹ら、
感染症雑誌、64, 1284〜1294, 1990 ）を夫々５０μ
Ｌ；および正確に段階的に２倍希釈した上記ペプチドを
５０μＬ加えて混合した。尚、陽性対照としてはＡＺＴ
を使用した。
ト中に、上記ペプチドを５０μＬ；ウイルス液として、
２００ＴＣＩＤ50のＨＴＬＶ−III Ｂ（実験室株）、２
００ＴＣＩＤ50のＫＫ−１株（新鮮分離株，大竹徹ら、
感染症雑誌、64, 1284〜1294, 1990 ）を夫々５０μ
Ｌ；および正確に段階的に２倍希釈した上記ペプチドを
５０μＬ加えて混合した。尚、陽性対照としてはＡＺＴ
を使用した。
【００７３】３７℃で３０分間反応させた後、更に３×
１０4個のＭＴ−４細胞浮遊液を１００μＬ加え、湿度
９８％，５％ＣＯ2 の存在下にて３７℃で６日間培養し
た。培養後、ＨＩＶ−１の増殖による細胞変性効果（Ｃ
ＰＥ）、即ち、薬剤を段階的に希釈して加え、感染した
細胞が集合してアイランドを形成する状態（フォーカス
形成）になったとき、この希釈倍率の前段階を中和活性
量（感染阻止濃度）として判定した。これらの結果を表
５及び表６に併記する。
１０4個のＭＴ−４細胞浮遊液を１００μＬ加え、湿度
９８％，５％ＣＯ2 の存在下にて３７℃で６日間培養し
た。培養後、ＨＩＶ−１の増殖による細胞変性効果（Ｃ
ＰＥ）、即ち、薬剤を段階的に希釈して加え、感染した
細胞が集合してアイランドを形成する状態（フォーカス
形成）になったとき、この希釈倍率の前段階を中和活性
量（感染阻止濃度）として判定した。これらの結果を表
５及び表６に併記する。
【００７４】
【表５】
【００７５】
【表６】
【００７６】表５および表６の結果から明らかな様に、
本発明の要件を満足しないペプチドはいずれもＨＩＶ−
１株に対して中和活性を示さないのに対し、本発明の要
件を満足するペプチドはいずれも、ＨＩＶ−１株に対し
て優れた中和活性を示すことが分かった。尚、表５に示
す本発明ペプチドは本発明第１のペプチドを、表６に示
す本発明ペプチドは本発明第２のペプチドを夫々示す。
また、これらの本発明ペプチドを用いれば、実験室株の
みならず新鮮分離株を使用した場合にも優れた中和活性
が認められることから、本発明のペプチドは、実験室レ
ベルを超えた実用レベルでも極めて有用であることが示
唆される。
本発明の要件を満足しないペプチドはいずれもＨＩＶ−
１株に対して中和活性を示さないのに対し、本発明の要
件を満足するペプチドはいずれも、ＨＩＶ−１株に対し
て優れた中和活性を示すことが分かった。尚、表５に示
す本発明ペプチドは本発明第１のペプチドを、表６に示
す本発明ペプチドは本発明第２のペプチドを夫々示す。
また、これらの本発明ペプチドを用いれば、実験室株の
みならず新鮮分離株を使用した場合にも優れた中和活性
が認められることから、本発明のペプチドは、実験室レ
ベルを超えた実用レベルでも極めて有用であることが示
唆される。
【００７７】実施例２：凝集試験 本実施例では、表７〜１０に示すペプチドを使用し、ｇ
ｐ１２０に対する親和性を凝集試験により評価した。
ｐ１２０に対する親和性を凝集試験により評価した。
【００７８】１％活性化ラテックスビーズ（Polyscienc
e 社製，粒子径０．２ｍｍ）懸濁液およびアビジン（１
０ｍｇ／ｍＬ）を等量混和した後、３７℃で１時間反応
させた。反応終了後、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ，１
ｍｇ／ｍＬ）を加え、未反応活性部位のブロッキング化
を３７℃で３０分間行った。次いで、遠心操作を繰り返
すことにより未反応物を除去した後、ビオチニル化させ
た各ペプチド（１０ｍｇ／ｍＬのリン酸緩衝液，ｐＨ
７．５）を添加し、３７℃で１時間反応させることによ
り、抗ｇｐ１２０凝集検査試薬を得た。
e 社製，粒子径０．２ｍｍ）懸濁液およびアビジン（１
０ｍｇ／ｍＬ）を等量混和した後、３７℃で１時間反応
させた。反応終了後、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ，１
ｍｇ／ｍＬ）を加え、未反応活性部位のブロッキング化
を３７℃で３０分間行った。次いで、遠心操作を繰り返
すことにより未反応物を除去した後、ビオチニル化させ
た各ペプチド（１０ｍｇ／ｍＬのリン酸緩衝液，ｐＨ
７．５）を添加し、３７℃で１時間反応させることによ
り、抗ｇｐ１２０凝集検査試薬を得た。
【００７９】陽性対照としては、バキュロウイルスで発
現させたリコンビナントｇｐ１２０を標識した金コロイ
ド（Immuno Diagnostics, Inc.社製，粒子径３０ｎｍ）
を使用し、一方、陰性対照には、該当するリコンビナン
トｇｐ１２０をリン酸緩衝液に溶解したものを使用し
た。
現させたリコンビナントｇｐ１２０を標識した金コロイ
ド（Immuno Diagnostics, Inc.社製，粒子径３０ｎｍ）
を使用し、一方、陰性対照には、該当するリコンビナン
トｇｐ１２０をリン酸緩衝液に溶解したものを使用し
た。
【００８０】凝集板に、上記凝集検査試薬と陽性対照を
夫々２０μずつ加えて混和し、１０分間静置した後、肉
眼で凝集の有無を判定した。これらの結果を表７〜１０
に併記する。尚、本実施例では、陽性対照の代わりに陰
性対照を使用した場合には、凝集は見られなかったこと
を確認している。
夫々２０μずつ加えて混和し、１０分間静置した後、肉
眼で凝集の有無を判定した。これらの結果を表７〜１０
に併記する。尚、本実施例では、陽性対照の代わりに陰
性対照を使用した場合には、凝集は見られなかったこと
を確認している。
【００８１】
【表７】
【００８２】
【表８】
【００８３】
【表９】
【００８４】
【表１０】
【００８５】表７〜１０の結果より、本発明のペプチド
はいずれもｇｐ１２０に対して優れた親和性を有するこ
とが確認された。尚、表７及び表８に示す本発明ペプチ
ドは本発明第１のペプチドを、表９及び表１０に示す本
発明ペプチドは本発明第２のペプチドを夫々示す。
はいずれもｇｐ１２０に対して優れた親和性を有するこ
とが確認された。尚、表７及び表８に示す本発明ペプチ
ドは本発明第１のペプチドを、表９及び表１０に示す本
発明ペプチドは本発明第２のペプチドを夫々示す。
【００８６】実施例３：本発明ペプチド中、Ａ４及びＡ
５の凝集能に及ぼす影響 表７におけるＮｏ．１のペプチドの鎖長を変えて、その
凝集能に及ぼす影響を調べた。尚、凝集能は、実施例２
と同様にして測定した。これらの結果を表１１に併記す
る。表中、±は「痕跡程度に凝集」を意味する。
５の凝集能に及ぼす影響 表７におけるＮｏ．１のペプチドの鎖長を変えて、その
凝集能に及ぼす影響を調べた。尚、凝集能は、実施例２
と同様にして測定した。これらの結果を表１１に併記す
る。表中、±は「痕跡程度に凝集」を意味する。
【００８７】
【表１１】
【００８８】表１１より、アミノ酸数が３個しかないＮ
ｏ．３（ａ４及びａ５のアミノ酸がない）、及びアミノ
酸数が４個しかないＮｏ．２（ａ５のアミノ酸がない）
は、いずれもアミノ酸数が5個のＮｏ．１に比べ、中和
活性が著しく低下することが分かる。即ち、アミノ酸数
の減少により中和活性は低下する傾向があり、なかで
も、アミノ酸数が３個のＮｏ．３では中和活性を完全に
消失した。
ｏ．３（ａ４及びａ５のアミノ酸がない）、及びアミノ
酸数が４個しかないＮｏ．２（ａ５のアミノ酸がない）
は、いずれもアミノ酸数が5個のＮｏ．１に比べ、中和
活性が著しく低下することが分かる。即ち、アミノ酸数
の減少により中和活性は低下する傾向があり、なかで
も、アミノ酸数が３個のＮｏ．３では中和活性を完全に
消失した。
【００８９】実施例４：本発明ペプチド中、ａ４及びａ
５の中和活性に及ぼす影響 表９におけるＮｏ．８のペプチドの鎖長を変えて、その
中和活性に及ぼす影響を調べた。尚、中和活性は、実施
例１と同様にして測定した。これらの結果を表１２に記
載する。表中、ＮＥは「陰性」を意味する。
５の中和活性に及ぼす影響 表９におけるＮｏ．８のペプチドの鎖長を変えて、その
中和活性に及ぼす影響を調べた。尚、中和活性は、実施
例１と同様にして測定した。これらの結果を表１２に記
載する。表中、ＮＥは「陰性」を意味する。
【００９０】
【表１２】
【００９１】表１２より、アミノ酸数が３個しかないＮ
ｏ．３（ａ４及びａ５のアミノ酸がない）、及びアミノ
酸数が４個しかないＮｏ．２（ａ５のアミノ酸がない）
は、いずれもアミノ酸数が5個のＮｏ．１に比べ、中和
活性が著しく低下することが分かる。即ち、アミノ酸数
の減少により中和活性は低下する傾向があり、なかで
も、アミノ酸数が３個のＮｏ．３では中和活性を完全に
消失した。
ｏ．３（ａ４及びａ５のアミノ酸がない）、及びアミノ
酸数が４個しかないＮｏ．２（ａ５のアミノ酸がない）
は、いずれもアミノ酸数が5個のＮｏ．１に比べ、中和
活性が著しく低下することが分かる。即ち、アミノ酸数
の減少により中和活性は低下する傾向があり、なかで
も、アミノ酸数が３個のＮｏ．３では中和活性を完全に
消失した。
【００９２】実施例５：本発明ペプチド中、ａ４及びａ
５の中和活性に及ぼす影響 表１３中、Ｎｏ．１のペプチドを陽性対照として用い、
当該ペプチド中、ａ４のアミノ酸種類を同じ疎水性アミ
ノ酸であるロイシンに代えたペプチド（Ｎｏ．２）、ま
たはプロリンに代えたペプチド（Ｎｏ．３）を用い、こ
れらの中和活性に及ぼす影響を実施例１と同様にして測
定した。これらの結果を表１３に併記する。
５の中和活性に及ぼす影響 表１３中、Ｎｏ．１のペプチドを陽性対照として用い、
当該ペプチド中、ａ４のアミノ酸種類を同じ疎水性アミ
ノ酸であるロイシンに代えたペプチド（Ｎｏ．２）、ま
たはプロリンに代えたペプチド（Ｎｏ．３）を用い、こ
れらの中和活性に及ぼす影響を実施例１と同様にして測
定した。これらの結果を表１３に併記する。
【００９３】
【表１３】
【００９４】表１３より、Ｎｏ．１において、ａ４及び
ａ５のアミノ酸種類を本発明で特定するアミノ酸とは異
なる種類に置換すると、中和活性が低下または消失する
ことが分かる。これらの結果より、ａ４及びａ５のアミ
ノ酸種類は中和活性の発現に重要な影響を及ぼすことが
示唆される。
ａ５のアミノ酸種類を本発明で特定するアミノ酸とは異
なる種類に置換すると、中和活性が低下または消失する
ことが分かる。これらの結果より、ａ４及びａ５のアミ
ノ酸種類は中和活性の発現に重要な影響を及ぼすことが
示唆される。
【００９５】実施例６：本発明ペプチド中、Ａ４及びＡ
５の凝集能に及ぼす影響 表１４中、Ｎｏ．１のペプチドを陽性対照として用い、
当該ペプチド中、Ａ４のアミノ酸の種類を同じ疎水性ア
ミノ酸であるプロリンに代えたペプチド（Ｎｏ．２）、
または酸性アミノ酸であるアスパラギン酸に代えたペプ
チド（Ｎｏ．３）；同様に、Ａ５のアミノ酸の種類をプ
ロリンに代えたペプチド（Ｎｏ．４）、またはグルタミ
ン酸に代えたペプチド（Ｎｏ．５）を用い、これらの凝
集能に及ぼす影響を実施例２と同様にして測定した。こ
れらの結果を表１４に併記する。表中、±は「痕跡程
度」を意味する。
５の凝集能に及ぼす影響 表１４中、Ｎｏ．１のペプチドを陽性対照として用い、
当該ペプチド中、Ａ４のアミノ酸の種類を同じ疎水性ア
ミノ酸であるプロリンに代えたペプチド（Ｎｏ．２）、
または酸性アミノ酸であるアスパラギン酸に代えたペプ
チド（Ｎｏ．３）；同様に、Ａ５のアミノ酸の種類をプ
ロリンに代えたペプチド（Ｎｏ．４）、またはグルタミ
ン酸に代えたペプチド（Ｎｏ．５）を用い、これらの凝
集能に及ぼす影響を実施例２と同様にして測定した。こ
れらの結果を表１４に併記する。表中、±は「痕跡程
度」を意味する。
【００９６】
【表１４】
【００９７】表１４より、Ｎｏ．１においてＡ４及びＡ
５のアミノ酸の種類を異なるアミノ酸数に置換すると、
凝集能は陰性か、若しくは殆ど痕跡程度に低下すること
が分かる。これらの結果より、Ａ４及びＡ５のアミノ酸
の種類は凝集能の重要な影響を及ぼすことが示唆され
る。
５のアミノ酸の種類を異なるアミノ酸数に置換すると、
凝集能は陰性か、若しくは殆ど痕跡程度に低下すること
が分かる。これらの結果より、Ａ４及びＡ５のアミノ酸
の種類は凝集能の重要な影響を及ぼすことが示唆され
る。
【００９８】実施例７：高分子化による中和活性に及ぼ
す影響 合成例６で作製した不活性アルカリホスファターゼ（Ａ
ｌｐ）結合ペプチドのＨＩＶ中和活性を、実施例１と同
様にして測定した。尚、表３におけるＮｏ．８のペプチ
ドを陽性対照とし、未反応な不活性アルカリホスファタ
ーゼを陰性対照として用いた。これらの結果を表１５に
併記する。表中、ＮＥは「陰性」を意味する。
す影響 合成例６で作製した不活性アルカリホスファターゼ（Ａ
ｌｐ）結合ペプチドのＨＩＶ中和活性を、実施例１と同
様にして測定した。尚、表３におけるＮｏ．８のペプチ
ドを陽性対照とし、未反応な不活性アルカリホスファタ
ーゼを陰性対照として用いた。これらの結果を表１５に
併記する。表中、ＮＥは「陰性」を意味する。
【００９９】
【表１５】
【０１００】表１５より、本発明のペプチドを既知のタ
ンパク質と結合させ、高分子化を図ることにより可溶性
が高まり、中和活性も上昇することが分かる。
ンパク質と結合させ、高分子化を図ることにより可溶性
が高まり、中和活性も上昇することが分かる。
【０１０１】実施例８：複数のペプチド導入による抗体
分子様作用 ヒト血清中に、合成例２で作製したペプチド結合α−サ
イクロデキストリンを懸濁し、市販のＨＩＶ診断薬（ダ
イナボット社製「ＨＩＶ−１／ＨＩＶ−２ＥＩＡ」）で
検出できるか調べた。当該ＨＩＶ診断薬の判定原理は、
患者血清に形成された抗ＨＩＶ抗体を検出するものであ
り、特に感染初期に出現するＩｇＭ抗体を検出できるこ
とを特徴とするものである。その結果を図１に示す。
分子様作用 ヒト血清中に、合成例２で作製したペプチド結合α−サ
イクロデキストリンを懸濁し、市販のＨＩＶ診断薬（ダ
イナボット社製「ＨＩＶ−１／ＨＩＶ−２ＥＩＡ」）で
検出できるか調べた。当該ＨＩＶ診断薬の判定原理は、
患者血清に形成された抗ＨＩＶ抗体を検出するものであ
り、特に感染初期に出現するＩｇＭ抗体を検出できるこ
とを特徴とするものである。その結果を図１に示す。
【０１０２】図１に示す様に、ＨＩＶ患者血清中に存在
する抗ＨＩＶ抗体のみを検出する上記診断薬により、ヒ
ト血清中に懸濁したＨＩＶ−ｇｐ１２０に親和性を有す
るペプチドを複数個導入した結合α−デキストリンを濃
度依存的に検出できることが分かる。この結果より、本
発明のペプチドがＨＩＶに親和性を有すること、及び本
発明ペプチドを複数個導入することにより、抗体様作用
を示すことが明らかになった。
する抗ＨＩＶ抗体のみを検出する上記診断薬により、ヒ
ト血清中に懸濁したＨＩＶ−ｇｐ１２０に親和性を有す
るペプチドを複数個導入した結合α−デキストリンを濃
度依存的に検出できることが分かる。この結果より、本
発明のペプチドがＨＩＶに親和性を有すること、及び本
発明ペプチドを複数個導入することにより、抗体様作用
を示すことが明らかになった。
【０１０３】実施例９：ｇｐ１２０に対する親和性
（１） 合成例７で作製したペプチド結合Sephadex６ＭＢを、予
め種々の濃度に調整した西洋わさび由来ペルオキシダー
ゼ（ＨＲＰ）標識ＨＩＶ−１-ｇｐ１２０（Immuno Diag
nostic 社）及び酵素未標識ＨＩＶ−１-ｇｐ１２０を夫
々加え、Schacherd Plotを作成することにより本発明ペ
プチドの解離定数（ｋｄ)を求めたところ、ｋｄ＝２．
１４×１０-10Ｍであった。
（１） 合成例７で作製したペプチド結合Sephadex６ＭＢを、予
め種々の濃度に調整した西洋わさび由来ペルオキシダー
ゼ（ＨＲＰ）標識ＨＩＶ−１-ｇｐ１２０（Immuno Diag
nostic 社）及び酵素未標識ＨＩＶ−１-ｇｐ１２０を夫
々加え、Schacherd Plotを作成することにより本発明ペ
プチドの解離定数（ｋｄ)を求めたところ、ｋｄ＝２．
１４×１０-10Ｍであった。
【０１０４】この結果より、本発明ペプチドは、抗体と
同等か、若しくはそれ以上の親和性を有することが明ら
かである。
同等か、若しくはそれ以上の親和性を有することが明ら
かである。
【０１０５】実施例１０：ｇｐ１２０に対する親和性
（２） 合成例８で作製したペプチド結合Sephadex４Ｂを、予め
種々の濃度に調整したＨＲＰ標識ＨＩＶ−１-ｇｐ１２
０（Immuno Diagnostic 社）及び酵素未標識ＨＩＶ−１
-ｇｐ１２０を夫々加え、Schacherd Plotを作成するこ
とにより本発明ペプチドの解離定数（ｋｄ)を求めたと
ころ、ｋｄ＝４．９７×１０-10Ｍであった。
（２） 合成例８で作製したペプチド結合Sephadex４Ｂを、予め
種々の濃度に調整したＨＲＰ標識ＨＩＶ−１-ｇｐ１２
０（Immuno Diagnostic 社）及び酵素未標識ＨＩＶ−１
-ｇｐ１２０を夫々加え、Schacherd Plotを作成するこ
とにより本発明ペプチドの解離定数（ｋｄ)を求めたと
ころ、ｋｄ＝４．９７×１０-10Ｍであった。
【０１０６】この結果より、本発明ペプチドは、抗体と
同等か、若しくはそれ以上の親和性を有することが明ら
かである。
同等か、若しくはそれ以上の親和性を有することが明ら
かである。
【０１０７】実施例１１：ｇｐ１２０の認識部位 本発明ペプチドの特異性を確かめる為に、表１のＮｏ．
１及び表３のＮｏ．６のペプチドを、赤色ラテックスビ
ーズ（ポリサイエンス社、直径200nm）に標識した「ペ
プチド標識ラテックスビーズ」を作製した。このラテッ
クスビーズ液２０μlに同量の偽ＨＩＶ−１（ｇｐ１２
０標識金コロイド）液を加えると、肉眼で、直ちに且つ
容易に観察可能な赤色の凝集像を生じた。これに対し、
金コロイドに標識していない未標識ｇｐ１２０液（１μ
g protein／ｍｌ)を加えても全く凝集しないことから、
本発明ペプチドは、ｇｐ１２０の唯一１カ所の部位に結
合することが推察された。尚、これらの結果を表１６に
示す。
１及び表３のＮｏ．６のペプチドを、赤色ラテックスビ
ーズ（ポリサイエンス社、直径200nm）に標識した「ペ
プチド標識ラテックスビーズ」を作製した。このラテッ
クスビーズ液２０μlに同量の偽ＨＩＶ−１（ｇｐ１２
０標識金コロイド）液を加えると、肉眼で、直ちに且つ
容易に観察可能な赤色の凝集像を生じた。これに対し、
金コロイドに標識していない未標識ｇｐ１２０液（１μ
g protein／ｍｌ)を加えても全く凝集しないことから、
本発明ペプチドは、ｇｐ１２０の唯一１カ所の部位に結
合することが推察された。尚、これらの結果を表１６に
示す。
【０１０８】
【表１６】
【０１０９】実施例１２：特異性試験 実施例７で作製した２種類のペプチド（表１のＮｏ．１
及び表３のＮｏ．６）のラテックス凝集試験試薬「ペプ
チド標識ラテックスビーズ」を用い、他の病原ウイルス
に対する非特異的吸着の有無を調べた。本実施例に用い
たウイルスは、増悪期のＣ型あるいはＢ型肝炎患者から
採取した血清、実験室株、新鮮分離株等である。また、
ウイルスlysateは、予め金コロイドに標識して使用し
た。使用したウイルスの感染力価若しくは数、及び凝集
の有無を表１７に示す。
及び表３のＮｏ．６）のラテックス凝集試験試薬「ペプ
チド標識ラテックスビーズ」を用い、他の病原ウイルス
に対する非特異的吸着の有無を調べた。本実施例に用い
たウイルスは、増悪期のＣ型あるいはＢ型肝炎患者から
採取した血清、実験室株、新鮮分離株等である。また、
ウイルスlysateは、予め金コロイドに標識して使用し
た。使用したウイルスの感染力価若しくは数、及び凝集
の有無を表１７に示す。
【０１１０】
【表１７】
【０１１１】表１７より、本発明のペプチドによるｇｐ
１２０に対する親和性はＨＩＶ−１に特異的であること
が分かる。
１２０に対する親和性はＨＩＶ−１に特異的であること
が分かる。
【０１１２】実施例１３：ＨＩＶ吸着カラムによる血清
中のＨＩＶの除去 合成例９で作製した本発明ペプチド／Sepharose４B担体
を用い、ＨＩＶ−１の吸着除去能について検討した。
尚、上記担体に標識された本発明ペプチドの導入量は、
ベッド容量１ｍｌ当たり約５ｍｇであった。
中のＨＩＶの除去 合成例９で作製した本発明ペプチド／Sepharose４B担体
を用い、ＨＩＶ−１の吸着除去能について検討した。
尚、上記担体に標識された本発明ペプチドの導入量は、
ベッド容量１ｍｌ当たり約５ｍｇであった。
【０１１３】まず、予めＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）に
懸濁した上記吸着体１００μｌ（1容）をテストチュー
ブに入れた後、１２１℃で３０分間高圧滅菌し、自然減
圧したものを供試担体した。また、偽ＨＩＶ−１ウイル
スモデルとして、ｇｐ１２０のタンパク質量を１．５ｍ
ｇ／ｍＬに調整したｇｐ１２０標識金コロイド液を使用
した。この偽ＨＩＶ液を、１００％ヒト血清に懸濁した
もの（血清最終のうど９６％）を供試ウイルス液とし、
一方、同濃度の偽ＨＩＶ液をＰＢＳ緩衝液に懸濁したも
の（ｐＨ７．２，血清濃度０％）を対照液とした。抗体
１容（１００μｌ）に対し、供試ウイルス液２４容
（２．４ｍＬ）をテストチューブに添加し、３７℃に設
定した恒温水槽で２時間浸透懇話した。反応終了後、こ
のテストチューブを取出して室温に静置し、３０分後、
上澄み液を偽ウイルス未吸着サンプルとして採取した。
この様にして得られたサンプルの５４０ｎｍにおける吸
光度を比色し、血清濃度０％での吸着率１００％とした
ときの、血清濃度９４％の吸着率を算出した。これらの
結果を表１８に示す。
懸濁した上記吸着体１００μｌ（1容）をテストチュー
ブに入れた後、１２１℃で３０分間高圧滅菌し、自然減
圧したものを供試担体した。また、偽ＨＩＶ−１ウイル
スモデルとして、ｇｐ１２０のタンパク質量を１．５ｍ
ｇ／ｍＬに調整したｇｐ１２０標識金コロイド液を使用
した。この偽ＨＩＶ液を、１００％ヒト血清に懸濁した
もの（血清最終のうど９６％）を供試ウイルス液とし、
一方、同濃度の偽ＨＩＶ液をＰＢＳ緩衝液に懸濁したも
の（ｐＨ７．２，血清濃度０％）を対照液とした。抗体
１容（１００μｌ）に対し、供試ウイルス液２４容
（２．４ｍＬ）をテストチューブに添加し、３７℃に設
定した恒温水槽で２時間浸透懇話した。反応終了後、こ
のテストチューブを取出して室温に静置し、３０分後、
上澄み液を偽ウイルス未吸着サンプルとして採取した。
この様にして得られたサンプルの５４０ｎｍにおける吸
光度を比色し、血清濃度０％での吸着率１００％とした
ときの、血清濃度９４％の吸着率を算出した。これらの
結果を表１８に示す。
【０１１４】
【表１８】
【０１１５】実施例１４：ＨＩＶ吸着カラムによる血清
中のＨＩＶの除去 合成例７で作製した本発明ペプチドで標識されたセルロ
ース系担体を使って、ＨＩＶ−１の吸着除去について検
討した。ここでこの担体に標識された本発明のペプチド
の導入量は、ベッド容量１ｍＬ当たり約５ｍｇであっ
た。
中のＨＩＶの除去 合成例７で作製した本発明ペプチドで標識されたセルロ
ース系担体を使って、ＨＩＶ−１の吸着除去について検
討した。ここでこの担体に標識された本発明のペプチド
の導入量は、ベッド容量１ｍＬ当たり約５ｍｇであっ
た。
【０１１６】まず、予めＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）に
懸濁した上記吸着体１００μｌ（1容）をテストチュー
ブに入れた後、１２１℃で３０分間高圧滅菌し、自然減
圧したものを供試カラムとした。一方、ＨＩＶ−１ウイ
ルス液は、国内エイズ患者から大竹ら（感染症雑誌，6
4:1284-1294, 1990）が新鮮分離し、凍結保存したｋｋ
−１株を用いた。このｋｋ−株（１×１０5 TCID50）を
急速融解した後、超遠心機にかけ、予め非動化した培養
用１００％ヒト血清に懸濁したものを供試ウイルス液と
した。次に、カラム中の担体１容に対して、供試ウイル
ス液２４容をカラムに流した。添加終了後、カラムに残
った未反応ウイルスを洗浄する為に、担体の５倍容の正
常ヒト血清を流した。尚、ウイルス量の測定は、p24 An
tigen ELISA Kit(Cellular products Inc.)を用いて測
定し、キットに添付された計算式によりCut off値を求
め、Ｓ／ＣＯを算出した。測定した試料は、供試試料
（ウイルス液）、素通り試料、洗浄液、及び担体を可溶
化して抽出した液（カラム吸着画分）であり、カラム素
通り各部画分は、このうち素通り試料及び洗浄液を含む
画分とした。これらの結果を表１９に示す。
懸濁した上記吸着体１００μｌ（1容）をテストチュー
ブに入れた後、１２１℃で３０分間高圧滅菌し、自然減
圧したものを供試カラムとした。一方、ＨＩＶ−１ウイ
ルス液は、国内エイズ患者から大竹ら（感染症雑誌，6
4:1284-1294, 1990）が新鮮分離し、凍結保存したｋｋ
−１株を用いた。このｋｋ−株（１×１０5 TCID50）を
急速融解した後、超遠心機にかけ、予め非動化した培養
用１００％ヒト血清に懸濁したものを供試ウイルス液と
した。次に、カラム中の担体１容に対して、供試ウイル
ス液２４容をカラムに流した。添加終了後、カラムに残
った未反応ウイルスを洗浄する為に、担体の５倍容の正
常ヒト血清を流した。尚、ウイルス量の測定は、p24 An
tigen ELISA Kit(Cellular products Inc.)を用いて測
定し、キットに添付された計算式によりCut off値を求
め、Ｓ／ＣＯを算出した。測定した試料は、供試試料
（ウイルス液）、素通り試料、洗浄液、及び担体を可溶
化して抽出した液（カラム吸着画分）であり、カラム素
通り各部画分は、このうち素通り試料及び洗浄液を含む
画分とした。これらの結果を表１９に示す。
【０１１７】
【表１９】
【０１１８】表１９より、供試ウイルス量の約１０%弱
が、カラムに吸着したことが分かる。
が、カラムに吸着したことが分かる。
【０１１９】尚、本実施例において、ウイルス量を評価
するのに上記のｐ２４量を測定する方法を採用した理由
について述べる。
するのに上記のｐ２４量を測定する方法を採用した理由
について述べる。
【０１２０】本実施例では、ウイルス液として患者の状
態に最も近いと思われる１００％ヒト血清に懸濁した新
鮮分離株ＫＫ−１株を用いたが、その量を正確に評価す
ることは極めて困難である。ｇｐ１２０ ELISA Kit は
実験室株に使えても、ＨＩＶ−１の様な新鮮分離株には
使用できない。むしろ、これがこのウイルス株を使った
理由でもある。従って、一次構造上コンセンサスな配列
を持つコアータンパク質であるｐ２４量をＥＩＡ法で測
定するか、或いは、ＲＴ−ＰＣＲ法で想定することが考
えられるが、これらの方法はいずれも、分解物も含んで
測定してしまうという欠点がある。前述の様に、ＨＩＶ
そのものが極めて不安定であり、操作中にも分単位で壊
れていく為、実験に使ったウイルス液中には、ウイルス
分解物が存在するのみならず、該分解物が操作中に益々
増加していることも考えられるので、これらの方法を採
用し、吸着量に比べ分解物の増加量が多ければ、その結
果が判らないものとなる。従って、ウイルス量を正確に
判定するには、感染実験による判定が望ましい。しか
し、本実施例で使用した新鮮分離株ＫＫ−１は、ＨＩＶ
−１III Ｂ等の実験室株の様に感染が容易でないこと、
とりわけ感染実験には、カラム吸着量を遙かに超える位
の、非常に高濃度のウイルス液が必要であることを考慮
すると、実験することは極めて困難である。そこで、ウ
イルス液を或る程度希釈しなければ吸着量も判りにくい
ことから、本実施例ではｐ２４量を測定することにし、
他のデータと比較できる様にＳ／ＣＯを算出することに
したのである。
態に最も近いと思われる１００％ヒト血清に懸濁した新
鮮分離株ＫＫ−１株を用いたが、その量を正確に評価す
ることは極めて困難である。ｇｐ１２０ ELISA Kit は
実験室株に使えても、ＨＩＶ−１の様な新鮮分離株には
使用できない。むしろ、これがこのウイルス株を使った
理由でもある。従って、一次構造上コンセンサスな配列
を持つコアータンパク質であるｐ２４量をＥＩＡ法で測
定するか、或いは、ＲＴ−ＰＣＲ法で想定することが考
えられるが、これらの方法はいずれも、分解物も含んで
測定してしまうという欠点がある。前述の様に、ＨＩＶ
そのものが極めて不安定であり、操作中にも分単位で壊
れていく為、実験に使ったウイルス液中には、ウイルス
分解物が存在するのみならず、該分解物が操作中に益々
増加していることも考えられるので、これらの方法を採
用し、吸着量に比べ分解物の増加量が多ければ、その結
果が判らないものとなる。従って、ウイルス量を正確に
判定するには、感染実験による判定が望ましい。しか
し、本実施例で使用した新鮮分離株ＫＫ−１は、ＨＩＶ
−１III Ｂ等の実験室株の様に感染が容易でないこと、
とりわけ感染実験には、カラム吸着量を遙かに超える位
の、非常に高濃度のウイルス液が必要であることを考慮
すると、実験することは極めて困難である。そこで、ウ
イルス液を或る程度希釈しなければ吸着量も判りにくい
ことから、本実施例ではｐ２４量を測定することにし、
他のデータと比較できる様にＳ／ＣＯを算出することに
したのである。
【０１２１】実施例１５：ラテックス標識ペプチドによ
るＨＩＶの結合 表１７のＮｏ．２のウイルス／Ｎｏ．１のペプチド−ラ
テックスビーズによるＨＩＶの凝集の様子を電子顕微鏡
で撮影した。詳細には、実験室株ＨＩＶ−１ＬＡＶ１に
上記凝集試験薬を加えて凝集させた後、４℃で６時間放
置した。次いで、この凝集液を電子顕微鏡支持膜に載せ
て、酢酸ウラニルでネガティブ染色した後、観察した。
参考までに、この電子顕微鏡写真を図２に示す。
るＨＩＶの結合 表１７のＮｏ．２のウイルス／Ｎｏ．１のペプチド−ラ
テックスビーズによるＨＩＶの凝集の様子を電子顕微鏡
で撮影した。詳細には、実験室株ＨＩＶ−１ＬＡＶ１に
上記凝集試験薬を加えて凝集させた後、４℃で６時間放
置した。次いで、この凝集液を電子顕微鏡支持膜に載せ
て、酢酸ウラニルでネガティブ染色した後、観察した。
参考までに、この電子顕微鏡写真を図２に示す。
【０１２２】図２より、ＨＩＶウイルスは、ＨＩＶ−ｇ
ｐ１２０親和性ペプチドを標識したラテックスビーズに
強固に結合し、それらのビーズ同士を強固に結合して凝
集していることが分かる。
ｐ１２０親和性ペプチドを標識したラテックスビーズに
強固に結合し、それらのビーズ同士を強固に結合して凝
集していることが分かる。
【０１２３】
【発明の効果】上述した通り、本発明のペプチドはｇｐ
１２０に対し、安定して優れた親和性を有するものであ
り、従来の抗体分子に匹敵するだけの中和活性を持った
抗ＨＩＶ剤として、その凝集能を用いたＨＩＶ診断薬と
して、更には、抗体分子にない物理的な安定性を活用し
た、高圧滅菌を必要とするＨＩＶ除去用デバイス等の医
療用具として、極めて有用である。
１２０に対し、安定して優れた親和性を有するものであ
り、従来の抗体分子に匹敵するだけの中和活性を持った
抗ＨＩＶ剤として、その凝集能を用いたＨＩＶ診断薬と
して、更には、抗体分子にない物理的な安定性を活用し
た、高圧滅菌を必要とするＨＩＶ除去用デバイス等の医
療用具として、極めて有用である。
【図１】実施例８の結果を示すグラフである。
【図２】実施例１５の結果を示す電子顕微鏡写真であ
る。
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4C085 AA21 BA69 BB11 CC32 4H045 AA10 AA30 BA13 BA53 BA57 BA61 CA05 EA34 EA53 FA33 GA22 GA26
Claims (11)
- 【請求項１】 式（１）：Ｈ−Ａ１-Ａ２−Ａ３−Ａ４
−Ａ５−Ｒ （式中、 Ｈは、水素原子を示し、 Ａ１は、アスパラギン酸、リジン、バリン、グルタミン
酸、グリシン、アスパラギン、またはチロシンの残基、 Ａ２は、バリン、アスパラギン酸、トリプトファン、リ
ジン、フェニルアラニン、イソロイシン、ロイシン、ま
たはチロシンの残基、 Ａ３は、リジン、バリン、アスパラギン酸、アルギニ
ン、アラニン、またはトリプトファンの残基 Ａ４は、アラニン、トリプトファン、グリシンの残基、 Ａ５は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラ
ギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、
フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、または
チロシンの残基、 Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまたは酸アミド基由来
のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２０に対して親和性
を有するペプチド。 - 【請求項２】 式（２）：Ａ１’−Ａ２−Ａ３−Ａ４−
Ａ５−Ｒ （式中、 Ａ１’は、アスパラギン酸、リジン、バリン、グルタミ
ン酸、グリシン、アスパラギン、またはチロシンの残
基、若しくは、該アミノ酸を始端として、そのＮ末端側
に任意のアミノ酸が配列したポリペプチド残基、 Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５およびＲは前と同じ意味）で表
されるｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチド。 - 【請求項３】 式（３）：Ｈ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４
−Ａ５’−Ｒ （式中、 Ａ５’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イ
ソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパ
ラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニ
ン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、ま
たはチロシンの残基、若しくは、該アミノ酸を始端とし
て、そのＣ末端側に任意のアミノ酸が配列したポリペプ
チド残基、 Ｈ、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＲは前と同じ意味）
で表されるｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチ
ド。 - 【請求項４】 Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５のアミノ
酸配列を有することを特徴とするｇｐ１２０に対して親
和性を有するペプチド。 - 【請求項５】 式（４）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４
−ａ５−Ｒ （式中、 Ｈは、水素原子を示し、 ａ１は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、グ
リシン、トリプトファン、ヒスチジン、またはアスパラ
ギン酸の残基、 ａ２は、アルギニン、チロシン、トリプトファン、アラ
ニン、バリン、グルタミン、ヒスチジン、またはリジン
の残基、 ａ３は、リジン、チロシン、アルギニン、グルタミン
酸、メチオニン、またはトリプトファンの残基、 ａ４は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラ
ギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、
フェニルアラニン、またはトリプトファンの残基、 ａ５は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラ
ギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、
フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンの
残基、 Ｒは、カルボキシル基由来のＯＨまたは酸アミド基由来
のＮＨ2である）で表されるｇｐ１２０に対して親和性
を有するペプチド。 - 【請求項６】 式（５）：ａ１’−ａ２−ａ３−ａ４−
ａ５−Ｒ （式中、 ａ１’は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、
グリシン、トリプトファン、ヒスチジン、またはアスパ
ラギン酸の残基、若しくは、該アミノ酸を始端としてそ
のＮ末端側に任意のアミノ酸が配列したポリペプチド残
基、 ａ２、ａ３、ａ４、ａ５およびＲは前と同じ意味）で表
されるｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチド。 - 【請求項７】 式（６）：Ｈ−ａ１−ａ２−ａ３−ａ４
−ａ５’ （式中、 ａ５’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イ
ソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパ
ラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニ
ン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファ
ンの残基、若しくは、該アミノ酸及びアミノ酸誘導体を
始端として、そのＣ末端側に任意のアミノ酸が配列した
ポリペプチド残基、 Ｈ、ａ１、ａ２、ａ３およびａ４は前と同じ意味）で表
されるｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチド。 - 【請求項８】 ａ１−ａ２−ａ３−ａ４−ａ５のアミノ
酸配列を有することを特徴とするｇｐ１２０に対して親
和性を有するペプチド。 - 【請求項９】 請求項１〜８のいずれかに記載のペプチ
ドに、官能基を有する高分子化合物および／または医薬
活性物質が結合した化合物または医薬として認容される
その塩類。 - 【請求項１０】 吸着除去用担体に用いられるものであ
る請求項９に記載の化合物のまたは医薬として認容され
るその塩類。 - 【請求項１１】 請求項１〜８のいずれかに記載のペプ
チドを用いたウイルス凝集診断検査薬若しくは該診断検
査薬を含むキット。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000006182A JP4202574B2 (ja) | 2000-01-11 | 2000-01-11 | ｇｐ１２０に親和性を有するぺプチド |
| US09/757,655 US6827939B2 (en) | 2000-01-11 | 2001-01-11 | Peptide having an affinity for gp120 |
| US10/909,310 US7291337B2 (en) | 2000-01-11 | 2004-08-03 | Peptide having an affinity for gp120 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000006182A JP4202574B2 (ja) | 2000-01-11 | 2000-01-11 | ｇｐ１２０に親和性を有するぺプチド |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006145605A Division JP4203082B2 (ja) | 2006-05-25 | 2006-05-25 | ｇｐ１２０に親和性を有するぺプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001192399A true JP2001192399A (ja) | 2001-07-17 |
| JP4202574B2 JP4202574B2 (ja) | 2008-12-24 |
Family
ID=18534754
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000006182A Expired - Fee Related JP4202574B2 (ja) | 2000-01-11 | 2000-01-11 | ｇｐ１２０に親和性を有するぺプチド |
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|---|---|
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| JP (1) | JP4202574B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2004074516A1 (ja) * | 2003-02-20 | 2006-06-01 | 財団法人化学及血清療法研究所 | モノクローナル抗体製剤の奏効性を向上させる方法 |
| JP2008504531A (ja) * | 2004-06-24 | 2008-02-14 | ザ スクリップス リサーチ インスティテュート | 切断可能なリンカーを有するアレイ |
| JP2008539170A (ja) * | 2005-04-26 | 2008-11-13 | サンド・アクチエンゲゼルシヤフト | 親和性リガンド |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004092724A2 (en) * | 2003-04-11 | 2004-10-28 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health | Multiple antigenic peptide assay for detection of hiv or siv type retroviruses |
| CN101379077A (zh) * | 2005-12-07 | 2009-03-04 | 夏洛特·豪泽 | 因子ⅷ和因子ⅷ-类似蛋白的小肽或者拟肽亲合性配体 |
| MX337830B (es) * | 2009-04-17 | 2016-03-16 | Lipotec Sa | Peptidos utiles en el tratamiento y/o cuidado de la piel y/o cabello y su uso en composiciones cosmeticas o farmaceuticas. |
| US11649397B1 (en) * | 2022-07-27 | 2023-05-16 | Saudi Arabian Oil Company | Polyaromatic hydrocarbon-based host-guest complex for heavy crude oil viscosity reduction |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998007830A2 (en) * | 1996-08-22 | 1998-02-26 | The Institute For Genomic Research | COMPLETE GENOME SEQUENCE OF THE METHANOGENIC ARCHAEON, $i(METHANOCOCCUS JANNASCHII) |
| JPH10182696A (ja) | 1996-12-27 | 1998-07-07 | Teikoku Seiyaku Co Ltd | ｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチド |
| JPH10182695A (ja) | 1996-12-27 | 1998-07-07 | Teikoku Seiyaku Co Ltd | ｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチド |
-
2000
- 2000-01-11 JP JP2000006182A patent/JP4202574B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-01-11 US US09/757,655 patent/US6827939B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-08-03 US US10/909,310 patent/US7291337B2/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2004074516A1 (ja) * | 2003-02-20 | 2006-06-01 | 財団法人化学及血清療法研究所 | モノクローナル抗体製剤の奏効性を向上させる方法 |
| JP4922613B2 (ja) * | 2003-02-20 | 2012-04-25 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | モノクローナル抗体製剤の奏効性を向上させる方法 |
| US8332159B2 (en) | 2003-02-20 | 2012-12-11 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Method for enhancing efficacy of preparation of monoclonal antibody |
| JP2008504531A (ja) * | 2004-06-24 | 2008-02-14 | ザ スクリップス リサーチ インスティテュート | 切断可能なリンカーを有するアレイ |
| JP2008539170A (ja) * | 2005-04-26 | 2008-11-13 | サンド・アクチエンゲゼルシヤフト | 親和性リガンド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7291337B2 (en) | 2007-11-06 |
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| US20020052469A1 (en) | 2002-05-02 |
| US6827939B2 (en) | 2004-12-07 |
| JP4202574B2 (ja) | 2008-12-24 |
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