JP2006328071A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006328071A5 JP2006328071A5 JP2006145605A JP2006145605A JP2006328071A5 JP 2006328071 A5 JP2006328071 A5 JP 2006328071A5 JP 2006145605 A JP2006145605 A JP 2006145605A JP 2006145605 A JP2006145605 A JP 2006145605A JP 2006328071 A5 JP2006328071 A5 JP 2006328071A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- hiv
- amino acid
- present
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 28
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 25
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 24
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 19
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 19
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 16
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 34
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 32
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 32
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 26
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 20
- -1 phenylacetamidomethyl Chemical group 0.000 description 19
- 229940021015 I.V. solution additive Amino Acids Drugs 0.000 description 17
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 17
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 15
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 15
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 10
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 description 10
- 229920000126 Latex Polymers 0.000 description 9
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- 229960002449 Glycine Drugs 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 7
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 229960004441 Tyrosine Drugs 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 6
- 230000005591 charge neutralization Effects 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 6
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 229960005261 Aspartic Acid Drugs 0.000 description 5
- 229960002989 Glutamic Acid Drugs 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 108010061543 Neutralizing Antibodies Proteins 0.000 description 5
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 5
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N Zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 5
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 5
- 230000024126 agglutination involved in conjugation with cellular fusion Effects 0.000 description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 5
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 5
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 5
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 5
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 5
- 229960001230 Asparagine Drugs 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004799 Tryptophan Drugs 0.000 description 4
- 229960002555 Zidovudine Drugs 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N methylene dichloride Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 102100013077 CD4 Human genes 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000005721 HIV Infections Diseases 0.000 description 3
- 229960000310 ISOLEUCINE Drugs 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 229960005190 Phenylalanine Drugs 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated Effects 0.000 description 3
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 3
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005565 cyclic polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 201000001820 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Chemical group 0.000 description 3
- 125000001235 proline group Chemical group [H]N1[C@@](C(=O)[*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 3
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N propionic acid Chemical compound CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N (3-nitropyridin-2-yl) thiohypochlorite Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CN=C1SCl WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710027066 ALB Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229950008138 Carmellose Drugs 0.000 description 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N Gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N HF Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N L-serine Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N N,N'-Diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N P-Toluenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N Salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N Trifluoromethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002259 anti human immunodeficiency virus agent Substances 0.000 description 2
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 2
- 125000000511 arginine group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- IYYIVELXUANFED-UHFFFAOYSA-N bromo(trimethyl)silane Chemical compound C[Si](C)(C)Br IYYIVELXUANFED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 2
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N (2S)-2-azaniumyl-3-(4-nitrophenyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSKHPKMHTQYZBB-UHFFFAOYSA-N 2-Methylpyridine Chemical class CC1=CC=CC=N1 BSKHPKMHTQYZBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUKAUDKDFVSVFT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-[4,5-bis(2-hydroxypropoxy)-2-(2-hydroxypropoxymethyl)-6-methoxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)-5-methoxyoxane-3,4-diol Chemical compound COC1C(OC)C(OC2C(C(O)C(OC)C(CO)O2)O)C(COC)OC1OC1C(COCC(C)O)OC(OC)C(OCC(C)O)C1OCC(C)O VUKAUDKDFVSVFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006479 2-pyridyl methyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C(=N1)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 102100001249 ALB Human genes 0.000 description 1
- 206010000565 Acquired immunodeficiency syndrome Diseases 0.000 description 1
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N Anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N Benzathine Chemical class C=1C=CC=CC=1CNCCNCC1=CC=CC=C1 JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098773 Bovine Serum Albumin Drugs 0.000 description 1
- 108091003117 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N Carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- DJHJJVWPFGHIPH-OODMECLYSA-N Chitin Chemical compound O[C@@H]1C(NC(=O)C)[C@H](O)OC(CO)[C@H]1COC[C@H]1C(NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](COC[C@H]2C([C@@H](O)[C@H](O)C(CO)O2)NC(C)=O)C(CO)O1 DJHJJVWPFGHIPH-OODMECLYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 229940045110 Chitosan Drugs 0.000 description 1
- 229920000453 Consensus sequence Polymers 0.000 description 1
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-MGCNEYSASA-N D-galactonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-MGCNEYSASA-N 0.000 description 1
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical class C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N Diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036947 Dissociation constant Effects 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000006922 Drug-Related Side Effects and Adverse Reaction Diseases 0.000 description 1
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035693 Fab Effects 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N Fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- UYUXSRADSPPKRZ-SKNVOMKLSA-N Glucuronolactone Chemical compound O=C[C@H](O)[C@H]1OC(=O)[C@@H](O)[C@H]1O UYUXSRADSPPKRZ-SKNVOMKLSA-N 0.000 description 1
- 229940093915 Gynecological Organic acids Drugs 0.000 description 1
- 206010061992 Haemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 Heparin Drugs 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N Heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 208000006454 Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid zwitterion Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 101700036867 LAV1 Proteins 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N Malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N Mesotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N 0.000 description 1
- VEFCXXLAPLJBFG-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethoxy-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N(OC)OC)C1=CC=CC=C1 VEFCXXLAPLJBFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-UHFFFAOYSA-N N-methylvaline Chemical compound CNC(C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091007229 NSP3 Papain-like protease domain Proteins 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N Ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- XAPRFLSJBSXESP-UHFFFAOYSA-N Oxycinchophen Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2C(C(=O)O)=C(O)C=1C1=CC=CC=C1 XAPRFLSJBSXESP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N Silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RINCXYDBBGOEEQ-UHFFFAOYSA-N Succinic anhydride Chemical compound O=C1CCC(=O)O1 RINCXYDBBGOEEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical class OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Vitamin C Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 102000024070 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091007650 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N divinylbenzene Substances C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002169 ethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000000576 food coloring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N fumaric acid Chemical compound OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 238000010358 genetic engineering technique Methods 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229950006191 gluconic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atoms Chemical group [H]* 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940071676 hydroxypropylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000001665 lethal Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000011068 load Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 229940099690 malic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- JSPCTNUQYWIIOT-UHFFFAOYSA-N piperidine-1-carboxamide Chemical compound NC(=O)N1CCCCC1 JSPCTNUQYWIIOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- MAKUBRYLFHZREJ-JWBQXVCJSA-M sodium;(2S,3S,4R,5R,6R)-3-[(2S,3R,5S,6R)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C([O-])=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O MAKUBRYLFHZREJ-JWBQXVCJSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011044 succinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N sulfonic acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960001367 tartaric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Description
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス(humanimmnodeficiency virus:HIV)の最外殻を構成するgp120分子に対して親和性を有するペプチドに関するものである。
HIV感染症に対する治療法としては、ヌクレオシド誘導体である3'-azido-2',3'-dideoxythymidine(AZT)に代表される如く、主に化学療法が用いられている。上記AZT或いはその後開発されたプロテアーゼ阻害剤による治療法によって、HIV感染者の延命効果は見られたものの、化学療法自体に起因する様々な問題は依然として回避されていない。
かかる問題としては、第1に、長期投与により慢性毒性が表れること;第2に、治療中に薬剤耐性HIV株が出現すること;第3に、延命効果が見られた患者に悪性腫瘍が多発すること;第4に、治療の最終目標である免疫応答の回復が得られないこと;第5に、治療効果のモニター方法がないこと等が挙げられる。この様に化学療法は、HIV感染を根本的に治療し得る治療法とはなり得ないことから、ワクチンの開発が期待されている。
一般にワクチンと言えば、ウイルス等の微生物を化学処理することにより、その構造を変えることなく不活性化したもの(不活性化ワクチン);病原性を失った弱毒株や天然痘ウイルスに対する牛痘ウイルス等の様に、ヒトに致死的作用を及ぼさない類似株(生ワクチン)が使用されている。しかしながら、HIVそのものは、元来弱毒株であるにもかかわらず、宿主細胞に一旦進入すると長期間滞在し得、次第に該宿主細胞の機能を破壊することが知られており、しかもHIVの宿主細胞が、主に免疫機能を司るリンパ球であること;更にHIVが凍結乾燥血液製剤を介して血友病患者に蔓延したこと等を考慮すれば、不活性化・弱毒化のいずれかの途を選択するにせよ、HIVそのものをワクチンに用いることは、安全性の面で問題が多い。
従って、HIVワクチンの開発に当たっては、ウイルス最外殻の一部を使ってペプチドワクチンを作製することにより感染を防止するのが理想的である。
この様な観点から、多くの研究者が、ウイルス最外殻を構成するgp120分子のエピトープ解析を行っており、上記gp120分子のエピトープとしてV3領域(3rd hypervariable region)に注目したが、この領域は非常に変異の激しい領域であった[Palker T.J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2709-2713,1988; Rusche J.R., et al., ibid 85:3198-3202,1988; Gouddsmit J., etal., ibid 85:4478-4482.1988; Matsushita S., et al., J Virol. 62:2107-2114,1988]。その後、この領域の一部を用いてペプチド抗原を作製し、猿を用いたHIV感染阻止実験[Emini E.A., et al., Nature 355: 728-730, 1992]が行われたが、有効な臨床結果はまだ報告されていない。
また、上記ペプチド抗原の免疫源性を高める工夫もされている(Tam et al.,特表平3-503539号)が、V3領域等のエピトープとして好適なV領域の大部分は、変異や欠失が頻繁に生じることから、所望とするワクチンを未だ得るに至っていない。
更に、V3領域の一部を抗原に作製した抗体を使って、HIVのリンパ球感染阻止を狙った所謂中和抗体の開発も行われている。例えば特願昭63−171385号公報には、上記領域の部分ペプチドを抗原として用い、マウスでモノクローナル抗体を作製し、そのFab'をタンパク質レベルで、或いは遺伝子工学的手法により結合させて、最終的にヒト抗体分子とマウス抗体分子をハイブリッドした抗HIVキメラ抗体を作製する方法が報告されている。しかしながら、この様な中和抗体にしても、HIVのリンパ球への感染阻止能は実験室レベルのものに過ぎず、実用上、有用な中和抗体は未だ得られていないのが現状である。
一方、前述した通り、化学療法では薬剤耐性や副作用発生等の問題があることから、かかる問題のない血漿交換療法により、HIVを生体から除去しようという考えもある。具体的には、血漿交換用に使われる濾過膜のポアーサイズを小さくして該HIVを除去する方法が考えられるが、HIVは約70nmとかなり小さいことから、ポアーサイズを均一にすることが困難であること;また、血漿濾過時における目詰まりが生じること等の可能性があり、その結果、濾過膜の耐圧性が劣化する等、解決すべき技術的課題が多い。そこで、HIVに特異的な親和性を持つリンパ球由来のCD4タンパク質を血漿交換用吸着担体に利用する方法も考えられるが、CD4は高圧滅菌により変性し、親和性を喪失する為、医療用具として使用することはできない。また、上記CD4に代わり、HIVに親和性のある高分子ポリマーや、色素リガンドの如く高圧滅菌耐性のものを使用する方法もあるが、これらは元々、HIVに対する特異性がない為、HIVが吸着する前に血液成分が該ポリマー等に非特異的に吸着してしまい、HIVの吸着が阻害されてしまうので使用することはできない。
この様に、HIV治療剤の開発を目的として、ワクチンや中和抗体を作製する研究が盛んに行われているが、未だ有用な治療剤は得られていない。
この様な現状に着目し、本発明者らは、抗体と同等か、或いはそれ以上にgp120に強い特異性を有し、しかも耐高圧滅菌性にも優れたペプチドを開発し、既に出願を済ませている(特願平8-351474および特願平8-351475)。このペプチドは、基本的に3個のアミノ酸配列からなるものであるが、その後の研究により、当該ペプチドのgp120に対する親和性は、それに連なるアミノ酸の種類や数により低下することが分かった。そこで、より安定性に優れたペプチドの提供が切望されている。
本発明は上記事情に着目してなされたものであり、その目的は、HIVの最外殻を構成するgp120分子に対して親和性を有しており、しかも安定性にも優れた新規なペプチド、及び該ペプチドを用いた様々な利用態様を提供することにある。
上記課題を解決することのできた本発明に係るgp120分子に対して親和性を有するペプチドとは、H−A1-A2−A3−A4−A5−R(式中、Hは、水素原子を示し、A1は、アスパラギン酸、リジン、バリン、グルタミン酸、グリシン、アスパラギン、またはチロシンの残基、A2は、バリン、アスパラギン酸、トリプトファン、リジン、フェニルアラニン、イソロイシン、ロイシン、またはチロシンの残基、A3は、リジン、バリン、アスパラギン酸、アルギニン、アラニン、またはトリプトファンの残基、A4は、アラニン、トリプトファン、グリシンの残基、A5は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、またはチロシンの残基、Rは、カルボキシル基由来のOHまたは酸アミド基由来のNH2である)で表されるペプチドであり、前記ペプチドは、表1のNo.1〜19、22〜27、表2のNo.28〜40、表4のNo.21に記載のアミノ酸配列からなるペプチドである。具体的には、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、前記ペプチドは、配列番号2〜40で示されるアミノ酸配列からなるところに要旨を有するものである。
本発明のペプチドは、上記A1、A2、A3、A4およびA5からなる5個のアミノ酸配列を基本構成とするペプチドであり、A1’−A2−A3−A4−A5−R(式中、A1’は、アスパラギン酸、リジン、バリン、グルタミン酸、グリシン、アスパラギン、またはチロシンの残基、若しくは、該アミノ酸を始端として、そのN末端側に任意のアミノ酸が配列したポリペプチド残基、A2、A3、A4、A5およびRは前と同じ意味)で表されるペプチドであって、表1のNo.20、21に記載のアミノ酸配列からなるペプチドも、本発明の一態様である。具体的には、配列番号41で示されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、前記ペプチドは、配列番号42〜43で示されるアミノ酸配列からなるペプチドも、本発明の一態様である。
また、上記のペプチドに、官能基を有する高分子化合物及び/又は医薬活性物質が結合した化合物または医薬として許容されるその塩類も本発明の範囲内に包含される。
尚、これらのペプチド性化合物や化合物を含有するものは、換言すれば、gp120に対する親和剤と呼ぶことができる。
更に、上記ペプチドまたは医薬として許容されるその塩類、並びに薬学的に許容される担体及び/又は医薬活性物質を含有する組成物も本発明の範囲内に包含される。また、上記のペプチドを用いてHIV等のウイルスを検出、診断、除去等する様々な態様(例えば、HIV診断検査薬若しくは該検査薬を含む検査キットに利用したり、HIV吸着除去剤に利用したり、血漿交換療法に利用したりする等の態様)も本発明の範囲内に包含される。
尚、本発明に用いられる「ペプチド」には、ペプチドのC末端がCOOHであるものの他、酸アミドやエステル等になっているものも含み、また、結合するアミノ酸の数にしても、特に明記しない限り、アミノ酸が10個以下のオリゴペプチドから、それ以上のポリペプチドまで包含するものとする。
また、上記ペプチドを構成するアミノ酸には、官能基を保護基で保護したアミノ酸誘導体も含まれる。この様なアミノ酸誘導体として、ペプチド骨格そのものを代えることなく側鎖の官能基が置換若しくは修飾されたもの;炭素鎖の鎖長を代えたもの等、各種アミノ酸に対応した保護アミノ酸誘導体が市販されているが、本発明では、これらの各種アミノ酸を使用することができる。例えばチロシンの誘導体として、クロル基を側鎖に持つ2,6-dichloro-L-tyrosine、フェニルアラニンの側鎖のフェニル基のp位の水酸基をニトロ基に置換したp-Nitro-L-phenylalanine、該水酸基をクロル基に置換した4-chloro-L-phenylalanine等が挙げられ、また、バリンの誘導体としては、Norvaline:N-α-L-norvaline、或いはMeVal:N-α-methyl-L-valine等が挙げられる。
上述した通り、本発明のペプチドはgp120に対し、安定して優れた親和性を有するものであり、従来の抗体分子に匹敵するだけの中和活性を持った抗HIV剤として、その凝集能を用いたHIV診断薬として、更には、抗体分子にない物理的な安定性を活用した、高圧滅菌を必要とするHIV除去用デバイス等の医療用具として、極めて有用である。
本発明者らは、従来のHIV治療剤を用いたのでは、ワクチンにしても中和抗体にしても、実用レベルの成果が何ら得られなかった理由として、生体が抗原として認識できるHIVの領域が、その最外殻を構成するgp120の変異の激しいV領域であることに最大の問題があるという観点に基づき、生体が作製する抗体に代わって、gp120に親和性を有するペプチドを得ることに着目し、鋭意検討してきた。その結果、抗体と同等か、或いはそれ以上にgp120に強い特異性を有し、しかも耐高圧滅菌性にも優れたペプチドを開発し、既に出願を済ませている(特願平8-351474および特願平8-351475)。
ところがその後の研究により、上記ペプチドのgp120に対する親和性は、それに連なるアミノ酸の種類や数により低下するという知見が得られた。そこで、より安定性に優れたペプチドを提供すべく更に検討を重ねた結果、本発明を完成したのである。
尚、本発明における「親和性」とは、静電力や、水素結合、Van der Waals力、疎水性結合等の共有結合以外の弱い相互作用が合わさった特異的な強い結合を表す。
本発明のペプチドは、上記の様に構成されており、基本的には、H−A1-A2−A3−A4−A5−R(式中、A1,A2,A3,A4,A5およびRは前と同じ意味)で表される5個のアミノ酸残基から成るペプチドである(配列番号1をご参照)。これらのペプチドは、この様に独立した分子であっても良いし、或いはポリペプチド中に、A1' −A2−A3−A4−A5のアミノ酸配列が、夫々この順序でN末端側から配されたものであっても構わない。
本発明のペプチドは、固相合成法等の公地の方法により製造することができる。例えば、A1−A2−A3−A4−A5からなるペプチドを合成する場合、A5がグリシン残基の場合は、N−保護グリシンのカルボキシル基をカルボキシル基と結合し得る官能基をカップリングさせた不溶性樹脂の様な担体に結合させた後、A2からA5までの各保護アミノ酸を固相合成法により順次結合させ、次いで、上記不溶性樹脂およびアミノ酸の保護基を脱離させることにより、所望のペプチドを得ることができる。尚、A5のアミノ酸残基のカルボキシル基末端は、フリー(即ち、Rが−OHに相当)であっても良いし、或いは酸アミド(即ち、Rが−NH2に相当)に変換されていても良い。また、A5のカルボキシル基末端は、必要に応じて該カルボキシル基に結合しているスペーサーのカルボキシル基と共に、合成高分子や生体高分子等、官能基を有する繁用の高分子化合物と結合しても良い(後記する)。尚、上記固相合成法に使用されるアミノ酸は、共通してL体であっても良いし、或いは共通してD体であっても構わない。より好ましくはL体である。
上記の場合において、固相合成法に使用される担体としては、そのアミノ基を介してC末端のN−保護グリシンのカルボキシル基、または該カルボキシル基と結合可能であり、しかも結合後に脱離可能なものであれば制限されず、例えば、クロロメチル樹脂(クロロメチル化スチレン−ジニビニルベンゼン共重合体等)やオキシメチル樹脂(オキシメチルスチレン−ジビニルベンゼン共重合体等)等が挙げられる。また、カルボキシル基と結合し得る官能基及び該カルボキシル基を有するスペーサーを介して、アミノ基を有する不溶性樹脂に結合させた4−(オキシメチル)フェニルアセタミドメチル樹脂等の樹脂、ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、アミノ基を有する不溶性樹脂であるベンズヒドリルアミン樹脂、メチルベンズヒドロキシリルアミン樹脂、アミノメチルフェノキシメチル樹脂、ジメトキシベンズヒドリルアミン(DMBHA)樹脂、およびこれらの誘導体等が挙げられる。このうち、ベンズヒドリルアミン樹脂、メチルベンズヒドロキシリルアミン樹脂、アミノメチルフェノキシメチル樹脂、およびDMBHA樹脂は、結合後、開裂することにより直接酸アミドが得られる。収率の観点からすれば、アミノメチル樹脂の使用が好ましい。
また、カルボキシル基と結合し得る官能基および該カルボキシル基を有するスペーサーとしては、例えばグリシンのカルボキシル基をp−カルボキシメチルベンジルエステルに変換し得るものが挙げられる。
また、上記「保護アミノ酸」とは、官能基を公知の方法により保護基で保護したアミノ酸を意味し、各種の保護アミノ酸が市販されている。本発明のペプチドを合成するには、以下に示す保護基のいずれかを使用するのが好ましい。
例えばアミノ酸のα−アミノ基の保護基としては、Boc(t−ブチルオキシカルボニル)またはFmoc(9−フルオレノメチルオキシカルボニル);リジンのξ−アミノ基の保護基としては、Z(ベンジルオキシカルボニル),Cl・Z(2−クロロベンジルオキシカルボニル),Boc,Npys(3−ニトロ−2−ピリジンスルフェニル);チロシンの水酸基の保護基としては、Bzl(ベンジル),Cl2・Bzl(2,6−ジクロロベンジル)或いはt−Bu(t−ブチル)が挙げられるが、該チロシンの水酸基は上記保護基で保護されていなくても良い;アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、Tos(トシル),NO2(ニトロ),Mtr(4−メトキシ−2,3,6−トリメチルベンゼンスルホニル)またはpmc(2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマンー6ースルホニル);グルタミン酸のカルボキシル基の保護基としては、Bzlエステル,t−Buエステル,cHx(エステルサイクロヘキシルエステル);グルタミンのアミド基の保護基としては、Trt(トリチル)が挙げられるが、該保護基で保護されていなくても良い;トリプトファンのインドール基の保護基としては、ホルミル基またはBocが挙げられるが、該保護基で保護されていなくても良い。これらの保護基は、ペプチドの合成条件に応じて最も適切なものを、適宜選択して使用することができる。
保護アミノ酸の結合は、通常の縮合法、例えばDCC(ジクロロヘキシカルボジイミド)法(R.B. Merrifield: Biochemistry,3,1385,1964),DICDI(ジイソプロピルカルボジイミド)法(D. Sarantakis,et al: Biochem. Biophys.Res. Commun., 73, 336, 1976),活性エステル法(F. Weygand, et al : Z. Naturforsch., B, 21, 1141, 1966),混合或いは対称酸無水物法(D. Yamashiro,et. al: Proc. Natl.Acad.Sci. USA, 71, 4945, 1945),カルボニルジイミダゾール法,DCC−HOBt(1−ヒドロキシベンゾトリアゾール)法(Keonig,W., et al.; Chem. Ber., 103: 788, 1970),ジフェニルホスホリルアジド法等に従って行うことができるが、なかでもDCC法、DCC−HOBt法、DICDI−HOBt法、対称酸無水物法を使用することが好ましい。これらの縮合反応は、通常、ジクロロメタンやジメチルホルムアミド等の有機溶媒、またはそれらの混合液中で行われる。
尚、α−アミノ基の保護基の脱離試薬としては、トリフルオロ酢酸/ジクロロメタン,HCl/ジオキサン,ピペリジン/ジメチルホルムアミド等が用いられ、使用する保護基の種類により適宜選択することができる。また、合成の各段階における縮合反応の進行の程度は、ニンヒドリン反応法(E. Kaiser, et al, Anal. Biocehm., 34: 595, 1970)により確認することができる。
この様にして、上式で表されるアミノ酸配列を有する保護ペプチド樹脂を得た後、不溶性樹脂およびアミノ酸の保護基を脱離させることにより、所望のペプチドを得ることができる。具体的には、例えば、不溶性樹脂としてクロロメチル樹脂誘導体を用いた場合にはアニソールを添加してフッ化水素で処理すれば良い。また、不溶性樹脂としてベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、DMBHA樹脂(Funakoshi, S., J.Chem.Soc.,Chem. Commun.,198:382,1988)を用いた場合には、フッ化水素、TFMSA(トリフルオロメタンスルホン酸)、TMSOTF(トリメチルシリルトリフルラート)、またはTMSBr(トリメチルシリルブロミド)等で処理することにより、該樹脂および保護基を同時に脱離させることができる。
この様にして得られたペプチドは、各種クロマトグラフィー(ゲル濾過、イオン交換、分配、吸着、逆相),電気泳動,限外濾過等の公知手段により単離精製することができる。
また本発明では、上記ペプチドを遺伝子組換え法によって得られる類似蛋白質(抗体、レセプター、酵素等の活性中心や結合ドメイン)で置換させたものも、本発明のペプチドとして用いることができる。例えば、ヒト型抗gp120抗体を遺伝子組換え法により製造する場合には、米国特許第114632号に記載の方法に準じて、ヒトイムノグロブリンのV遺伝子領域中、エピトープの認識に関係していると言われているVH31から35番までのCDR(complementaritydetermination region)−1の全領域、CDR−2のVH50から52番まで、及び/又はCDR−2のVH58から60番までの3つの超可変群(Hypervariable cluster )のアミノ酸(Ohno, S., Mori, N. & Matunaga, T.; Proc. Nat.Acad. Sci. USA, 82, 2945, 1985)に、上記本発明のペプチドを導入する等すればよい。
この様に上記本発明のペプチドを、その目的に応じて遺伝子組換え法により置換させることにより、gp120結合型の蛋白質を作製することができる。
本発明のペプチドの具体例としては例えば表1〜2に示すものが挙げられる。尚、表中の*は、後記する実施例に記載の方法に基づいて凝集試験及び中和試験を実施した場合、凝集若しくは中和が見られたことを意味する。
式中の各アミノ酸記号は、国際的に認められた三文字表示によるアミノ酸残基を示すものであり、その詳細は下記の通りである。
Tyr:チロシン
Lys:リジン
Trp:トリプトファン
Arg:アルギニン
Glu:グルタミン酸
Gln:グルタミン
His:ヒスチジン
Ala:アラニン
Phe:フェニルアラニン
Gly:グリシン
Met:メチオニン
Asp:アスパラギン酸
Asn:アスパラギン
Val:バリン
Ser:セリン
Cys:システイン
Thr:トレオニン
Ile:イソロイシン
Leu:ロイシン
Pro:プロリン
Tyr:チロシン
Lys:リジン
Trp:トリプトファン
Arg:アルギニン
Glu:グルタミン酸
Gln:グルタミン
His:ヒスチジン
Ala:アラニン
Phe:フェニルアラニン
Gly:グリシン
Met:メチオニン
Asp:アスパラギン酸
Asn:アスパラギン
Val:バリン
Ser:セリン
Cys:システイン
Thr:トレオニン
Ile:イソロイシン
Leu:ロイシン
Pro:プロリン
この様なアミノ酸配列を有するペプチドは、gp120に対して優れた親和性を有しており、以下に示す化合物または組成物の形態をとることによって、抗HIV剤として有効に用いることができる。
本発明の化合物は、上記ペプチドに、官能基を有する高分子化合物及び/又は医薬活性物質が結合したものであり、医薬として許容されるその塩類も本発明のなかに包含される。
ここで、「医薬として許容される塩類」としては、例えば以下の様な常用の無毒性の塩類が挙げられる。
(a)無機塩基等の塩基との塩として、アルカリ金属塩(例えばナトリウム塩、カリウム塩等)、アルカリ土類金属塩(例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等)、アンモニウム塩;(b)有機塩基塩等の塩基との塩として、有機アミン塩(例えばトリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、N,N' −ジベンジルエチレンジアミン塩等);(c)無機酸等の酸との塩として、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸等;(d)有機酸等の酸との塩として、有機カルボン酸(酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、サリチル酸等)、有機スルホン酸(メタンスルホン酸、p−トルエンスルホン酸等)、酸性糖(グルクロン酸、ガラクトン酸、グルコン酸、アスコルビン酸等)。
また、本発明に用いられる「官能基を有する高分子化合物」は、本発明のペプチドと結合することのできる官能基を有するものであれば特に限定されないが、例えば以下のものが挙げられる。
(1)合成高分子化合物
上記高分子化合物としては、直鎖状ポリマー、分岐状ポリマー、環状ポリマー等任意のものが用いられ、例えばポリリジン,ポリグルタミン酸等のアミノ酸ホモポリマー,或いは環状ポリアミン,サイクロデキストリン,環状ペプチドの他,ポリスチレン,ポリプロピレン,ナイロン,シリカゲル,ポリエチレングリコール,セルロース,ポリアクリルアミド等の不溶性の固相担体を使用することができる。
上記高分子化合物としては、直鎖状ポリマー、分岐状ポリマー、環状ポリマー等任意のものが用いられ、例えばポリリジン,ポリグルタミン酸等のアミノ酸ホモポリマー,或いは環状ポリアミン,サイクロデキストリン,環状ペプチドの他,ポリスチレン,ポリプロピレン,ナイロン,シリカゲル,ポリエチレングリコール,セルロース,ポリアクリルアミド等の不溶性の固相担体を使用することができる。
このうち分岐状ポリマーは、ポリマー中の分子の一部が分岐することにより、単位当たりの官能基濃度が、通常の直鎖状ポリマーよりも高いものである。例えばDenkewalter により開示されたリジンコアー等の様に、少なくとも2個以上の官能基を有するコアー分子に由来する2本以上の同一分子鎖に基づくポリマー(米国特許No.4,289,872号)、或いはTomaliaらによって提唱されている同一分子が連続的に反応することによりポリマーサイズが厳密な規則性を有するスターバーストデンドリマー(Starburst dendrimer )の様なものであっても良いし、或いは、同一/異なった分子が不連続に反応することによりサイズが不規則に形成された分子であっても構わない。また、上記直鎖状/分岐状ポリマーは、充分な大きさを有する担体分子である必要はなく、通常はコアーとは認識されない様な3個程度のモノマーを含むものも包含され、その大きさや導入数によって何ら制限されるものではない。但し、上式のペプチドを多数導入させる場合には、いずれのポリマーであっても、分岐数が多いポリマーの使用が推奨される。本発明のペプチドを上述したポリマーに結合させるに当たっては、分岐した官能基からそのまま直接的/間接的に、上記ペプチドを合成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成したペプチドを、該ポリマーの官能基に直接的/間接的にコンジュゲートしても良い。
また、環状ポリアミン,サイクロデキストリン,環状ペプチド等の環状ポリマーを結合させるに当たっては、その同一官能基から上式のペプチドを直接合成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成したペプチドを、該環状ポリマーの官能基に直接的/間接的に結合させても良い。また、シリカゲル等の不溶性担体を結合させるに当たっては、予め同一官能基を上記担体に導入した後、その官能基から直接上式のペプチドを合成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成したペプチドを、該不溶性担体の官能基に直接的/間接的にコンジュゲートしても良い。また、この同一官能基を有する担体の大きさや形状は特に限定されず、球状、中空糸状、繊維状等の形状のものを使用目的により適宜選択して使用すれば良く、大きさや形状、導入された官能基の数によって何ら制限されるものではない。
(2)生体高分子
上記生体高分子としては、例えばヘパリン、ヒアルロン酸、キトサン、キチン等の直鎖状多糖類;プロテオグリカン類,ペプチドホルモン;ゼラチン,アルブミン,抗体,抗体断片等のタンパク質等が挙げられる。
上記生体高分子としては、例えばヘパリン、ヒアルロン酸、キトサン、キチン等の直鎖状多糖類;プロテオグリカン類,ペプチドホルモン;ゼラチン,アルブミン,抗体,抗体断片等のタンパク質等が挙げられる。
このうち直鎖状ポリマーの大きさは、使用目的に応じて適宜選択すれば良く、通常はポリマーとは認識されない様な3個程度のモノマーを含むものも包含され、その大きさや官能基の数によって何ら制限されるものではない。上式のペプチドをこの直鎖状ポリマーに結合させるに当たっては、その同一官能基から上記ペプチドを直接合成して伸長させても良いし、或いは、別途新規に合成したペプチドを、該直鎖状ポリマーの官能基に直接的/間接的にコンジュゲートしても良い。
また、ペプチドホルモンやタンパク質を結合させる場合には、上式のペプチドのいずれか末端にシステインを結合させて、上記ペプチドホルモン/タンパク質中のシステイン残基とS−S結合させるか、或いは、上式のペプチドの官能基とペプチドホルモン/タンパク質中の官能基を直接的/間接的にコンジュゲートしても良い。この様に、これらの結合方法は、使用目的に応じて適宜選択することができるし、また、その種類や上式のペプチドの導入数にしても同様である。
また、本発明に用いられる医薬活性物質としては、例えば抗HIV阻害剤として知られているヌクレオシド誘導体のAZT,HIVプロテアーゼ阻害剤として知られている3,4-Dihydroxy-2,5-di[N-methyl-(2-pyridylmethyl)carbamoyl]valylamino]−1,6-diphenylhexane 等があげられる。これらの医薬活性物質は、本発明のペプチドの活性部位を避けて直接的/間接的にコンジュゲートすることにより、副作用がなく、HIVに特異的な製剤を得ることができる。従って、この様な製剤は、HIVを特異的に治癒することのできる治療剤として有用である。
更に、上述した本発明のペプチドまたは医薬として許容されるその塩類、並びに薬学的に許容される担体及び/又は医薬活性物質を含有する組成物も本発明の範囲内に包含される。
上記の「薬学的に許容される担体」としては、賦形剤(崩壊剤、滑沢剤、増量剤等)、着色料、着香料、保存料、安定剤、その他常用の担体を適宜使用することができる。具体的には、結晶セルロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、軽質無水ケイ酸、食用色素、芳香性精油類等が挙げられる。
以下実施例に基づいて本発明を詳述する。ただし、下記実施例は本発明を制限するものではなく、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施することは全て本発明の技術範囲に包含される。
合成例1:本発明ペプチドにポリエチレングリコールを結合させた化合物
ポリエチレングリコール(MW.20,000)の水酸基に無水コハク酸を反応させることによりカルボキシル基を導入した後、MBS(m−マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミド)と反応させることにより、マレイミド化したポリエチレングリコールを合成した。
ポリエチレングリコール(MW.20,000)の水酸基に無水コハク酸を反応させることによりカルボキシル基を導入した後、MBS(m−マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミド)と反応させることにより、マレイミド化したポリエチレングリコールを合成した。
それに、前記表1におけるNo.1のペプチドのC末端にシステインを導入したペプチドをペプチド結合させることにより、ペプチド−ポリエチレングリコール結合化合物を得た。得られた化合物をリン酸緩衝液で懸濁した後、gp120結合担体によるアフィニティー、及びゲルクロマトグラフィー等を行って精製した。
合成例2:本発明ペプチドに分岐状ポリマーを結合させた化合物
MAPs(Multiple antigenic peptide)のN末端アミノ酸側を前記表1におけるNo.1のペプチドで伸長し、分岐状ポリマーに結合させた化合物を得た。得られた化合物をリン酸緩衝液で懸濁した後、gp120結合担体によるアフィニティクロマトグラフィー、及びゲルクロマトグラフィー等を行って精製した。
MAPs(Multiple antigenic peptide)のN末端アミノ酸側を前記表1におけるNo.1のペプチドで伸長し、分岐状ポリマーに結合させた化合物を得た。得られた化合物をリン酸緩衝液で懸濁した後、gp120結合担体によるアフィニティクロマトグラフィー、及びゲルクロマトグラフィー等を行って精製した。
合成例3:本発明ペプチドをセファデックス6MBに結合させた吸着除去用担体
前記表1におけるNo.1のペプチドを、スペーサーを介して予め活性化されたSephadex 4Bに共有結合させ、ペプチド/Sepharose 6MB(1μmol of gp120/ml in bed volum)を作製した。未反応のペプチドは、リン酸緩衝液を用いて室温で10分間(12,000rpm)遠心し、上清を吸引除去する操作を繰り返すことにより、未反応ペプチドを除去した。
前記表1におけるNo.1のペプチドを、スペーサーを介して予め活性化されたSephadex 4Bに共有結合させ、ペプチド/Sepharose 6MB(1μmol of gp120/ml in bed volum)を作製した。未反応のペプチドは、リン酸緩衝液を用いて室温で10分間(12,000rpm)遠心し、上清を吸引除去する操作を繰り返すことにより、未反応ペプチドを除去した。
実施例1:中和活性の測定
本実施例では、表3に示す種々のペプチドを使用し、HIV−1に対する中和活性を調べた。
本実施例では、表3に示す種々のペプチドを使用し、HIV−1に対する中和活性を調べた。
具体的には、96ウエルのマイクロプレート中に、上記ペプチドを50μL;ウイルス液として、200TCID50のHTLV−III B(実験室株)、200TCID50のKK−1株(新鮮分離株,大竹徹ら、感染症雑誌、64, 1284〜1294, 1990 )を夫々50μL;および正確に段階的に2倍希釈した上記ペプチドを50μL加えて混合した。尚、陽性対照としてはAZTを使用した。
37℃で30分間反応させた後、更に3×104個のMT−4細胞浮遊液を100μL加え、湿度98%,5%CO2 の存在下にて37℃で6日間培養した。培養後、HIV−1の増殖による細胞変性効果(CPE)、即ち、薬剤を段階的に希釈して加え、感染した細胞が集合してアイランドを形成する状態(フォーカス形成)になったとき、この希釈倍率の前段階を中和活性量(感染阻止濃度)として判定した。これらの結果を表3に併記する。
表3の結果から明らかな様に、本発明の要件を満足しないペプチドはいずれもHIV−1株に対して中和活性を示さないのに対し、本発明の要件を満足するペプチドはいずれも、HIV−1株に対して優れた中和活性を示すことが分かった。また、これらの本発明ペプチドを用いれば、実験室株のみならず新鮮分離株を使用した場合にも優れた中和活性が認められることから、本発明のペプチドは、実験室レベルを超えた実用レベルでも極めて有用であることが示唆される。
実施例2:凝集試験
本実施例では、表4〜5に示すペプチドを使用し、gp120に対する親和性を凝集試験により評価した。
本実施例では、表4〜5に示すペプチドを使用し、gp120に対する親和性を凝集試験により評価した。
1%活性化ラテックスビーズ(Polyscience 社製,粒子径0.2mm)懸濁液およびアビジン(10mg/mL)を等量混和した後、37℃で1時間反応させた。反応終了後、ウシ血清アルブミン(BSA,1mg/mL)を加え、未反応活性部位のブロッキング化を37℃で30分間行った。次いで、遠心操作を繰り返すことにより未反応物を除去した後、ビオチニル化させた各ペプチド(10mg/mLのリン酸緩衝液,pH7.5)を添加し、37℃で1時間反応させることにより、抗gp120凝集検査試薬を得た。
陽性対照としては、バキュロウイルスで発現させたリコンビナントgp120を標識した金コロイド(Immuno Diagnostics, Inc.社製,粒子径30nm)を使用し、一方、陰性対照には、該当するリコンビナントgp120をリン酸緩衝液に溶解したものを使用した。
凝集板に、上記凝集検査試薬と陽性対照を夫々20μずつ加えて混和し、10分間静置した後、肉眼で凝集の有無を判定した。これらの結果を表4〜5に併記する。尚、本実施例では、陽性対照の代わりに陰性対照を使用した場合には、凝集は見られなかったことを確認している。
表4〜5の結果より、本発明のペプチドはいずれもgp120に対して優れた親和性を有することが確認された。
実施例3:本発明ペプチド中、A4及びA5の凝集能に及ぼす影響
表4におけるNo.1のペプチドの鎖長を変えて、その凝集能に及ぼす影響を調べた。尚、凝集能は、実施例2と同様にして測定した。これらの結果を表6に併記する。表中、±は「痕跡程度に凝集」を意味する。
表4におけるNo.1のペプチドの鎖長を変えて、その凝集能に及ぼす影響を調べた。尚、凝集能は、実施例2と同様にして測定した。これらの結果を表6に併記する。表中、±は「痕跡程度に凝集」を意味する。
表6より、アミノ酸数が3個しかないNo.3(A4及びA5のアミノ酸がない)、及びアミノ酸数が4個しかないNo.2(A5のアミノ酸がない)は、いずれもアミノ酸数が5個のNo.1に比べ、中和活性が著しく低下することが分かる。即ち、アミノ酸数の減少により中和活性は低下する傾向があり、なかでも、アミノ酸数が3個のNo.3では中和活性を完全に消失した。
実施例4:本発明ペプチド中、A4及びA5の凝集能に及ぼす影響
表7中、No.1のペプチドを陽性対照として用い、当該ペプチド中、A4のアミノ酸の種類を同じ疎水性アミノ酸であるプロリンに代えたペプチド(No.2)、または酸性アミノ酸であるアスパラギン酸に代えたペプチド(No.3);同様に、A5のアミノ酸の種類をプロリンに代えたペプチド(No.4)、またはグルタミン酸に代えたペプチド(No.5)を用い、これらの凝集能に及ぼす影響を実施例2と同様にして測定した。これらの結果を表7に併記する。表中、±は「痕跡程度」を意味する。
表7中、No.1のペプチドを陽性対照として用い、当該ペプチド中、A4のアミノ酸の種類を同じ疎水性アミノ酸であるプロリンに代えたペプチド(No.2)、または酸性アミノ酸であるアスパラギン酸に代えたペプチド(No.3);同様に、A5のアミノ酸の種類をプロリンに代えたペプチド(No.4)、またはグルタミン酸に代えたペプチド(No.5)を用い、これらの凝集能に及ぼす影響を実施例2と同様にして測定した。これらの結果を表7に併記する。表中、±は「痕跡程度」を意味する。
表7より、No.1においてA4及びA5のアミノ酸の種類を異なるアミノ酸数に置換すると、凝集能は陰性か、若しくは殆ど痕跡程度に低下することが分かる。これらの結果より、A4及びA5のアミノ酸の種類は凝集能の重要な影響を及ぼすことが示唆される。
実施例5:gp120に対する親和性
合成例3で作製したペプチド結合Sephadex6MBを、予め種々の濃度に調整した西洋わさび由来ペルオキシダーゼ(HRP)標識HIV−1-gp120(Immuno Diagnostic 社)及び酵素未標識HIV−1-gp120を夫々加え、Schacherd Plotを作成することにより本発明ペプチドの解離定数(kd)を求めたところ、kd=2.14×10-10Mであった。
合成例3で作製したペプチド結合Sephadex6MBを、予め種々の濃度に調整した西洋わさび由来ペルオキシダーゼ(HRP)標識HIV−1-gp120(Immuno Diagnostic 社)及び酵素未標識HIV−1-gp120を夫々加え、Schacherd Plotを作成することにより本発明ペプチドの解離定数(kd)を求めたところ、kd=2.14×10-10Mであった。
この結果より、本発明ペプチドは、抗体と同等か、若しくはそれ以上の親和性を有することが明らかである。
実施例6:gp120の認識部位
本発明ペプチドの特異性を確かめる為に、表1のNo.1のペプチドを、赤色ラテックスビーズ(ポリサイエンス社、直径200nm)に標識した「ペプチド標識ラテックスビーズ」を作製した。このラテックスビーズ液20μlに同量の偽HIV−1(gp120標識金コロイド)液を加えると、肉眼で、直ちに且つ容易に観察可能な赤色の凝集像を生じた。これに対し、金コロイドに標識していない未標識gp120液(1μg protein/ml)を加えても全く凝集しないことから、本発明ペプチドは、gp120の唯一1カ所の部位に結合することが推察された。尚、これらの結果を表8に示す。
本発明ペプチドの特異性を確かめる為に、表1のNo.1のペプチドを、赤色ラテックスビーズ(ポリサイエンス社、直径200nm)に標識した「ペプチド標識ラテックスビーズ」を作製した。このラテックスビーズ液20μlに同量の偽HIV−1(gp120標識金コロイド)液を加えると、肉眼で、直ちに且つ容易に観察可能な赤色の凝集像を生じた。これに対し、金コロイドに標識していない未標識gp120液(1μg protein/ml)を加えても全く凝集しないことから、本発明ペプチドは、gp120の唯一1カ所の部位に結合することが推察された。尚、これらの結果を表8に示す。
実施例7:特異性試験
実施例6で作製したペプチド(表1のNo.1)のラテックス凝集試験試薬「ペプチド標識ラテックスビーズ」を用い、他の病原ウイルスに対する非特異的吸着の有無を調べた。本実施例に用いたウイルスは、増悪期のC型あるいはB型肝炎患者から採取した血清、実験室株、新鮮分離株等である。また、ウイルスlysateは、予め金コロイドに標識して使用した。使用したウイルスの感染力価若しくは数、及び凝集の有無を表9に示す。
実施例6で作製したペプチド(表1のNo.1)のラテックス凝集試験試薬「ペプチド標識ラテックスビーズ」を用い、他の病原ウイルスに対する非特異的吸着の有無を調べた。本実施例に用いたウイルスは、増悪期のC型あるいはB型肝炎患者から採取した血清、実験室株、新鮮分離株等である。また、ウイルスlysateは、予め金コロイドに標識して使用した。使用したウイルスの感染力価若しくは数、及び凝集の有無を表9に示す。
表9より、本発明のペプチドによるgp120に対する親和性はHIV−1に特異的であることが分かる。
実施例8:HIV吸着カラムによる血清中のHIVの除去
合成例3で作製した本発明ペプチドで標識されたセルロース系担体を使って、HIV−1の吸着除去について検討した。ここでこの担体に標識された本発明のペプチドの導入量は、ベッド容量1mL当たり約5mgであった。
合成例3で作製した本発明ペプチドで標識されたセルロース系担体を使って、HIV−1の吸着除去について検討した。ここでこの担体に標識された本発明のペプチドの導入量は、ベッド容量1mL当たり約5mgであった。
まず、予めPBS緩衝液(pH7.2)に懸濁した上記吸着体100μl(1容)をテストチューブに入れた後、121℃で30分間高圧滅菌し、自然減圧したものを供試カラムとした。一方、HIV−1ウイルス液は、国内エイズ患者から大竹ら(感染症雑誌,64:1284-1294, 1990)が新鮮分離し、凍結保存したkk−1株を用いた。このkk−株(1×105 TCID50)を急速融解した後、超遠心機にかけ、予め非動化した培養用100%ヒト血清に懸濁したものを供試ウイルス液とした。次に、カラム中の担体1容に対して、供試ウイルス液24容をカラムに流した。添加終了後、カラムに残った未反応ウイルスを洗浄する為に、担体の5倍容の正常ヒト血清を流した。尚、ウイルス量の測定は、p24 Antigen ELISA Kit(Cellular products Inc.)を用いて測定し、キットに添付された計算式によりCut off値を求め、S/COを算出した。測定した試料は、供試試料(ウイルス液)、素通り試料、洗浄液、及び担体を可溶化して抽出した液(カラム吸着画分)であり、カラム素通り各部画分は、このうち素通り試料及び洗浄液を含む画分とした。これらの結果を表10に示す。
表10より、供試ウイルス量の約10%弱が、カラムに吸着したことが分かる。
尚、本実施例において、ウイルス量を評価するのに上記のp24量を測定する方法を採用した理由について述べる。
本実施例では、ウイルス液として患者の状態に最も近いと思われる100%ヒト血清に懸濁した新鮮分離株KK−1株を用いたが、その量を正確に評価することは極めて困難である。gp120 ELISA Kit は実験室株に使えても、HIV−1の様な新鮮分離株には使用できない。むしろ、これがこのウイルス株を使った理由でもある。従って、一次構造上コンセンサスな配列を持つコアータンパク質であるp24量をEIA法で測定するか、或いは、RT−PCR法で想定することが考えられるが、これらの方法はいずれも、分解物も含んで測定してしまうという欠点がある。前述の様に、HIVそのものが極めて不安定であり、操作中にも分単位で壊れていく為、実験に使ったウイルス液中には、ウイルス分解物が存在するのみならず、該分解物が操作中に益々増加していることも考えられるので、これらの方法を採用し、吸着量に比べ分解物の増加量が多ければ、その結果が判らないものとなる。従って、ウイルス量を正確に判定するには、感染実験による判定が望ましい。しかし、本実施例で使用した新鮮分離株KK−1は、HIV−1III B等の実験室株の様に感染が容易でないこと、とりわけ感染実験には、カラム吸着量を遙かに超える位の、非常に高濃度のウイルス液が必要であることを考慮すると、実験することは極めて困難である。そこで、ウイルス液を或る程度希釈しなければ吸着量も判りにくいことから、本実施例ではp24量を測定することにし、他のデータと比較できる様にS/COを算出することにしたのである。
実施例9:ラテックス標識ペプチドによるHIVの結合
表9のNo.2のウイルス/表1のNo.1のペプチド−ラテックスビーズによるHIVの凝集の様子を電子顕微鏡で撮影した。詳細には、実験室株HIV−1LAV1に上記凝集試験薬を加えて凝集させた後、4℃で6時間放置した。次いで、この凝集液を電子顕微鏡支持膜に載せて、酢酸ウラニルでネガティブ染色した後、観察した。参考までに、この電子顕微鏡写真を図1に示す。
表9のNo.2のウイルス/表1のNo.1のペプチド−ラテックスビーズによるHIVの凝集の様子を電子顕微鏡で撮影した。詳細には、実験室株HIV−1LAV1に上記凝集試験薬を加えて凝集させた後、4℃で6時間放置した。次いで、この凝集液を電子顕微鏡支持膜に載せて、酢酸ウラニルでネガティブ染色した後、観察した。参考までに、この電子顕微鏡写真を図1に示す。
図1より、HIVウイルスは、HIV−gp120親和性ペプチドを標識したラテックスビーズに強固に結合し、それらのビーズ同士を強固に結合して凝集していることが分かる。
Claims (5)
- 配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、
前記ペプチドは、配列番号2〜40で示されるアミノ酸配列からなるgp120に対して親和性を有するペプチド。 - 配列番号41で示されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、
前記ペプチドは、配列番号42〜43で示されるアミノ酸配列からなるgp120に対して親和性を有するペプチド。 - 請求項1または2に記載のペプチドに、官能基を有する高分子化合物および/または医薬活性物質が結合した化合物。
- 吸着除去用担体に用いられるものである請求項3に記載の化合物。
- 請求項1または2に記載のペプチドを用いたウイルス凝集診断検査薬若しくは該診断検査薬を含むキット。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006145605A JP4203082B2 (ja) | 2006-05-25 | 2006-05-25 | gp120に親和性を有するぺプチド |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006145605A JP4203082B2 (ja) | 2006-05-25 | 2006-05-25 | gp120に親和性を有するぺプチド |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000006182A Division JP4202574B2 (ja) | 2000-01-11 | 2000-01-11 | gp120に親和性を有するぺプチド |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006328071A JP2006328071A (ja) | 2006-12-07 |
JP2006328071A5 true JP2006328071A5 (ja) | 2007-04-19 |
JP4203082B2 JP4203082B2 (ja) | 2008-12-24 |
Family
ID=37550135
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006145605A Expired - Fee Related JP4203082B2 (ja) | 2006-05-25 | 2006-05-25 | gp120に親和性を有するぺプチド |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4203082B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5686360B2 (ja) * | 2009-09-28 | 2015-03-18 | 株式会社豊田中央研究所 | タンパク質集積体及びその利用 |
-
2006
- 2006-05-25 JP JP2006145605A patent/JP4203082B2/ja not_active Expired - Fee Related
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5840313A (en) | Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus | |
JP2002532387A (ja) | ペプチドリガンドを介して結合された複数の免疫原性成分を有するhbvコア抗原粒子 | |
JP2001502315A (ja) | ウイルス感染を処置するための組成物および方法 | |
JPH06501938A (ja) | ペプチドよりなるhiv複製阻害剤 | |
CA2091263C (en) | Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus | |
JPH01500432A (ja) | Aidsおよびarcのウィルス原因物質に対して免疫化するための組成物および方法 | |
AU2012362121A1 (en) | Stabilized antiviral fusion helices | |
JPH03501968A (ja) | オリゴペプチド、及びaidsまたはarcの診断及びワクチン接種を目的としたそれらの用途 | |
JP3178835B2 (ja) | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗hiv剤 | |
JPH05505188A (ja) | 合成ポリペプチド | |
US8715685B2 (en) | Stereoisomer peptides and their polymer conjugates for HIV disease | |
JP4202574B2 (ja) | gp120に親和性を有するぺプチド | |
US5346989A (en) | Peptides for use in induction of T cell activation against HIV-1 | |
JP4203082B2 (ja) | gp120に親和性を有するぺプチド | |
EP2451826A1 (en) | Alphabodies for hiv entry inhibition | |
AP502A (en) | Multiple branch peptide constructions for use against HIV. | |
JPH10212300A (ja) | ペプチドワクチン | |
ZA200305576B (en) | Peptides having affinity for the GP120 viral protein and use thereof. | |
CA2095693A1 (fr) | Polypeptides de synthese appartenant au virus de l'hepatite c (vhc) et utilisables notamment pour detecter ce dernier | |
JP2006328071A5 (ja) | ||
AU662534B2 (en) | Peptides for use in induction of T cell activation against HIV-1 | |
JPH10182696A (ja) | gp120に対して親和性を有するペプチド | |
JPH10182695A (ja) | gp120に対して親和性を有するペプチド | |
EP4242222A1 (en) | Chimeric protein comprising the receptor binding domain of the coronavirus spike protein and compositions comprising them | |
EP0284492A1 (fr) | Nouvelles fractions peptidiques inductrices d'anticorps protecteurs contre le virus de la leucémie bovine, procédé pour l'obtention de telles fractions, leurs séquences codantes et vaccins réalisés à partir de ces fractions |