JP2001172112A

JP2001172112A - 植物の活性付与剤、その製造方法と、活性付与方法及び活性促進剤並びにその施用方法

Info

Publication number: JP2001172112A
Application number: JP2000015680A
Authority: JP
Inventors: Yasuharu Sasaki; 康晴佐々木
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1999-04-08
Filing date: 2000-01-25
Publication date: 2001-06-26
Also published as: CN1350541A; US6753295B1; KR20020008829A; CA2369974A1; EP1180523A1; AU3671700A; EP1180523A4; WO2000061591A1; KR100665539B1

Abstract

(57)【要約】【課題】この発明は、トリコデルマハルジアナム
ＳＫ−５−５菌の生成物による植物への活性付与及び
その促進を目的としたものである。【解決手段】この発明は、トリコデルマハルジアナ
ムＳＫ−５−５菌を固体培地で培養して、その生成物
を抽出し、又は前記菌の分生胞子を施用することによ
り、植物の活性付与及びその促進の目的を達成すること
ができた。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、トリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５（Trichoderuma hurzianu
m SK-5-5）菌の培地から抽出した糸状菌及び細菌に抗菌
性を有する物質を得ることを目的とした植物の活性付与
剤及びその製造方法に関する。

【０００２】また他の発明は、トリコデルマハルジア
ナムＳＫ−５−５菌の分生胞子の生成する物質によっ
て植物の根、茎、葉等に病原菌に対する抵抗性を付与す
ることを目的とした植物の活性付与方法及び植物の活性
促進剤並びにその施用方法に関する。

【０００３】

【従来の技術】トリコデルマ菌は、微生物農薬として病
害防除に実用化されている糸状菌であり、Trichoderuma
lignourum がタバコの白絹病の防除用農薬として登録
されている（農薬登録 No.7023）。また英国、フランス
でもTrichoderuma hurzianumを有効成分とする野菜の立
枯病、苗腐病に有効な微生物農薬（F-ｓtop）が登録さ
れている。

【０００４】近来減農薬・生態系保全型の病害防除の必
要性が強く唱えられ、特に生物防除方法は環境負荷の影
響が少ないと考えられるので、精力的に研究が進められ
ている。

【０００５】植物の根や根圏から分離される細菌や、菌
類の中には植物の生育を促進するものがあり、それぞれ
植物生育促進根圏（plant growth-promoting rhizobact
eria：ＰＧＰＲ)、植物生育促進菌類（plant growth-pr
omoting fungi：ＰＧＰＦ)と呼ばれている。

【０００６】前記有用根圏微生物であるＰＧＰＲ、ＰＧ
ＰＦは植物の生育を促進するのみならず、各種の土壌病
害を抑制することも知られている。また最近では、土壌
病害のみならず、地上病害も抑制する事実も明らかにさ
れ、前記ＰＧＰＲ、ＰＧＰＦは、植物の全身抵抗性の誘
導が関わっていることが見出されたと紹介されている
（１９９９年６月号、今月の農業誌）。

【０００７】またコウライシバから分離選抜したPhom
a，Trichoderma, Fusarium，Penicillium，Sterileなど
の菌が、キュウリにおける炭そ病に対し、誘導抵抗性を
示すことが報告されている（１９９９年６月号、今月の
農業誌）。

【０００８】

【発明により解決しようとする課題】この発明は、植物
病原菌に抗菌性を有する物質を得ることを課題として研
究しており、北海道十勝地方の土壌からTrichoderuma h
urzianum ＳＫ−５−５(トリコデルマハルジアナム
ＳＫ−５−５)菌を分離した。この菌は、植物病原菌の
８０％を占めるとされる土壌伝染性病原糸状菌に対して
広く拮抗性を示す菌であり、現在芝のブラウンバッチ、
ラージバッチなどの Rhizoctonia類に微生物農薬（生菌
製剤）として開発中のものである。前記トリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５菌の拮抗作用は、相手菌糸に
接触し、コイリングをする事により、細胞質凝集を促し
死滅させるものである。その外観的観察経過より見てペ
ニシリアム（Penicillium sp）等が生産する抗生物質の
ような培地上で阻止円を示すほど活性が高いものではな
く、菌糸同志の接触により発現するものと推定される。

【０００９】前記細胞質凝集作用が、トリコデルマハ
ルジアナムＳＫ−５−５菌の生産する何らかの物質に
よってもたらされると考えられ、これを究明することを
第一の課題としたものである。

【００１０】なお、この発明で用いるトリコデルマハ
ルジアナムＳＫ−５−５菌は、日本国内工業技術院微
生物工業研究所に受託番号「微工研菌寄第１３３２７
号」として寄託されている。微工研は、当該原寄託より
ブダペスト条約に基づく寄託への移管請求を行ない、受
託番号ＢＰ−４３４６が付与されている。

【００１１】前記従来のＰＧＰＲ、ＰＧＰＦは、特定植
物（例えばキュウリ）に対し、炭そ病についての有効性
を示すもので、今後研究の結果、その使用方法の改善な
どにより、他の植物、病原菌に対して有効なことが判明
する可能性はあるとしても、未だ具体的植物、病原菌に
対しては今後の課題とされている。

【００１２】然し乍ら単に病原菌を殺菌するという従来
の生物農薬の思考形態が、植物の根茎に亘り抵抗性を付
与する方向に変りつつあることは、今後の植物栽培上重
要な示唆を含むものである。

【００１３】この発明は、トリコデルマハルジアナム
ＳＫ-５−５菌について、各種実験を重ねている間
に、前記生物農薬の将来性と合致することに想到し、更
に使用方法、対象植物等を選定、研究の結果、この発明
を完成したのである。将来の植物栽培に多大の影響を与
えるものとして、この発明はきわめて有望であり、将来
の農業等を支える重要な手段の１つとなることに疑はな
い。

【００１４】

【課題を解決する為の手段】この発明は、トリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５菌の生産する物質によ
り、細胞凝集作用（抗菌性）がもたらされるものと推定
し、前記菌を培養、精製、同定した所、糸状菌又は細菌
に抗菌性を有する物質を得たのである。

【００１５】また他の発明は、植物栽培に際し、トリコ
デルマハルジアナムＳＫ−５−５菌の分生胞子を覆
土中に共存させて増殖させることにより、その生成物質
により、各種植物の根茎活性を付与し、耐菌性を向上さ
せることが判明し、前記従来の問題点を発展的に改善さ
せて、実用性を確立したものである。

【００１６】即ち活性付与剤の発明は、トリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５菌を固体培地で培養し、抽
出した物質であって、糸状菌に抗菌力を有することを特
徴とした植物の活性付与剤である。また他の発明は、ト
リコデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌を液体培地で
培養し、抽出した物質であって、細菌の一種（Staphylo
coccus aureus 209p）に抗菌力を有することを特徴とし
た植物の活性付与剤である。

【００１７】次に製造方法の発明は、トリコデルマハ
ルジアナムＳＫ−５−５菌を固体培地に植菌し、２５
℃〜３０℃で７日〜１５日間静置培養した後、抽出し
て、前記の活性付与剤を得ることを特徴とした植物の活
性付与剤の製造方法であり、またトリコデルマハルジ
アナムＳＫ−５−５菌を液体培地に植菌し、２５℃〜
３０℃で４日〜１０日間振盪培養した後、抽出して、前
記の活性付与剤を得ることを特徴とした植物の活性付与
剤の製造方法である。

【００１８】この発明において、使用する固体培地とし
て、米培地を用いた。米培地は、米１００％、大豆かす
３％、滅菌水１０％よりなる固定培地であって、培養中
に培地の表面が乾燥しないよう、滅菌水を添加した。

【００１９】この発明において、使用する液体培地は、
グルコース３．０％〜５．０％、ポリペプトン０．５
％、Ｎａｃｌ０．８％、酵母エキス０．２％、炭酸カル
シウム１．０％である。

【００２０】前記のように固定培地と、液体培地によれ
ば、夫々の特性により、異なる物質を生成することが明
らかとなった。このような結果についてのメカニズムは
明らかでないが、トリコデルマハルジアナムＳＫ−
５−５菌に対する刺激その他の作用の相違、かつ培地構
成物質に関する特性により、異なる物質を生成するもの
であって、前記米培地及び液体培地以外の成分の培地で
あっても同様の物質を生成することは十分考えられ、か
つ生成効率向上等今後の研究課題は多大である。

【００２１】次に活性付与方法の発明は、植物栽培に際
し、トリコデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌の分生
胞子に施用手段を付加し、前記植物に活性を付与する覆
土中に共存させることを特徴とした植物の活性付与方法
であり、植物栽培に際し、トリコデルマハルジアナム
ＳＫ−５−５菌の分生胞子に施用手段を付加し、前記
植物に活性を付与する覆土中に共存させて増殖させ、糸
条菌に抗菌力を有する物質の生産を持続させることを特
徴とした植物の活性付与方法である。また植物栽培に際
し、トリコデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌の分
生胞子に施用手段を付加し、前記植物に活性を付与する
覆土中に共存させると共に、前記分生胞子の増殖促進条
件を付与することを特徴とした植物の活性付与方法であ
り、分生胞子の施用手段は、植物の種子処理、覆土と分
生胞子との混和、分生胞子の散布、潅水又は埋設したも
のである。更に増殖促進条件は、土壌温度を１５℃〜３
０℃とし、水分を３０％以上としたものであり、他の増
殖促進条件は、土壌に増殖可能な通気性又は含気性を付
与するものである。

【００２２】次に他の発明は、多孔性セラミックス粒子
その他の担体に、トリコデルマハルジアナムＳＫ−
５−５菌の分生胞子を付着させたことを特徴とする植物
の活性促進剤であり、無菌処理した無機質粒子に、トリ
コデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌の分生胞子を
混合し、又はトリコデルマハルジアナムＳＫ−５−
５菌を付着させ、前記無機質粒子と他の粒子とを混合し
たことを特徴とする植物の活性促進剤である。またトリ
コデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌の分生胞子を
培養し、これを培地と共に適量宛分離し、無菌の多孔質
粒子に栄養分（例えばキトサン）と共に付着させた後、
所定量宛包装したことを特徴とする植物の活性促進剤で
あり、トリコデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌の
分生胞子を液体培地で増殖させ、これを無菌の多孔質粒
子に栄養分と共に付着させた後、多孔質粒子を所定量宛
包装したことを特徴とする植物の活性促進剤である。

【００２３】また他の発明は、前記記載の植物の活性促
進剤を、育苗土壌に混入し、又は育苗時に土壌に散布或
いは舗場に散布することを特徴とした植物の活性促進剤
の施用方法である。この場合の活性促進剤の使用量は、
トリコデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌５×１０^４
／ｇ〜５×１０^９／ｇを１ｍ^２当り５ｇ〜１００ｇ散布
又は栽培土１ｍ^３当り５ｇ〜１００ｇ混入するものであ
る。前記発明における植物は、てん菜、メロン、トウモ
ロコシ、水稲、キャベツ及びタマネギなどであり、根、
茎、葉及び実を採取する植物について、何れも有効であ
ることが確認され、その効果も収量増加、糖度増加その
他の有為性が明確になった。

【００２４】前記の発明におけるトリコデルマハルジ
アナムＳＫ−５−５菌の分生胞子を培養し、その単離
精製物を検討した所、ＵＶ吸収スペクトラム、質量分析
及びＮＭＲ測定結果より、Aib（α-Aminoisobutyric ac
id）を含むPolypeptideの、Peptibols系と判断した。Pe
ptibols系抗生物質はアミノ酸配列の中に α-Aminoiso
butyric acid（Aib）を含んでおり、Ｎ末端がAcetyl基
で、Ｃ末端が Amino alcohol結合であることが特徴であ
る（多くは Phenylalaniol基でおわる）。なお今回の精
製物、Ａ成分、Ｂ成分、Ｄ成分は質量分析より一部のア
ミノ酸配列を下記のように推定し、その部分構造を既存
のPeptibols のアミノ酸配列と検索した結果、一致する
物が無く、新規 Peptibols系であると推定した。Ｅはア
ミノ酸配列の推定が困難であるため判断できなかった。

【００２５】ＵＶ吸収波長：４成分とも末端吸収Ａ成分＝１９３３Ｂ成分＝１９４９または１９６４Ｄ成分＝１８１０Ｅ成分＝１８２９推定構造：Ａ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Aib-Aib-Gln-A
ib-Aib-...... Ｂ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Val-Aib-Gln-Aib-Aib
-...... Ｄ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Aib-..... 前記のように生成物質は新規配列のアミノ酸と認められ
るが、植物の根より吸収されて、茎及び葉に至り、つい
で消失する。従って収穫時の植物には、根、茎、葉共に
残留の有無は不明であるけれども、当初（発芽以後の幼
茎等）植物に吸収された段階で、植物のＤＮＡに何等か
の変化を与えるものか、残留するものと推定される。何
故ならば、一旦抗菌性を取得した植物は、根茎等の分裂
生成に拘らず抗菌性の持続が認められるからである。従
って免疫性付与（活性付与）と類似であり、育苗時又は
比較的若い植物（実質的に植物の増殖時）に施用すれ
ば、再使用の必要性が認められないのは、一旦活性がで
きると、その植物の一生に亘り効力が持続されるからで
ある。

【００２６】この発明のトリコデルマハルジアナム
ＳＫ−５−５菌の分生胞子は、植物の苗の時、又は播種
時に覆土中に混入すると、前記分生胞子の増殖に伴って
生成物質も増加し、これが根から吸収されて茎葉に至
り、全体に活性が付与されるので（恰も免疫性付与の如
く）、植物が生長して根又は実などを採取する時期（例
えば播種後１ヶ月〜６ヶ月後）になっても、前記抗菌性
は保たれることが確認された。従って多くの植物は、一
回の処理（散布その他の手段）によって活性が付与され
てその目的を十分達成することができた。

【００２７】この発明における分生胞子の担体は、多孔
質セラミックス粒子（例えば麦飯石の粒子）であって、
これをキトサン液に浸漬し、水分を蒸発したものであ
る。前記粒子の大きさについて特定はないが、取扱いの
容易性から直径０．５ｍｍ〜５ｍｍ位が好ましい。前記
担体は、多孔質セラミックス粒子（天然又は人工）に限
定されることなく、分生胞子に悪影響がない物は使用す
ることができる。

【００２８】前記セラミックス粒子に予め培養したトリ
コデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌を５×１０^４
／ｇ〜５×１０^９／ｇ宛付着させ、これを１ｍ^２当り５
ｇ〜１００ｇ宛散布する。この場合に、水と共に散布す
る場合もあるが、潅水するのは、水分付与を目的とする
場合と、分生胞子を均等に浸透させて、土壌中に均等に
分布させる為に用いる場合とがある。

【００２９】前記トリコデルマハルジアナムＳＫ−
５−５菌の量を５×１０^４／ｇ未満にした場合に、前記
菌の繁殖が阻害されなければ、増殖されるが、何等かの
理由により増殖しない場合があるので、一応の目途とし
た。然し乍ら菌の増殖は環境によって著しく相違するの
で、施用後の環境整備によっては更に少量（例えば５ｇ
未満）の菌でも植物の生育に合せて増殖し、必要量の生
産物質を得ることは可能と考えられる。

【００３０】一方菌量の上限を５×１０^９／ｇ以下とし
たのは、前記生産物質の関係から不必要と考えたからで
ある。菌の増殖条件が悪い場合には、比較的高濃度の施
用を要するが、５×１０^９／ｇを越える必要はないと考
えられる。この発明におけるトリコデルマハルジアナ
ムＳＫ−５−５菌は通常分生胞子として与えるが、施
用時の環境が厳しい場合（例えば高温時、寒冷時）には
厚膜胞子として与える方が好ましい場合もある。

【００３１】前記発明において、トリコデルマハルジ
アナムＳＫ−５−５菌を固体培地又は液体培地又はそ
の他の培地で培養し、その生成物を抽出して、これを植
物の活性付与剤として施用する場合には、例えば０．１
〜１ｇ／ｍ^２必要となる。

【００３２】また分生胞子を散布する場合には、当該分
生胞子の増殖下限菌数（例えば５×１０^９／ｇ）が必要
である。

【００３３】この発明の植物の活性付与剤は、菌の時に
１回施用するだけで、爾後収穫まで施用する必要はな
い。この点は一般農薬と異なり、そのメカニズムは不明
であるが、植物のＤＮＡに何等かの影響を与え、又は生
成物質が植物の根、茎、葉に微量残留して、前記特性を
発揮するものと推定される。

【００３４】前記において、分生胞子を施用する場合に
は、舗場などで、分生胞子が十分増殖し、飽和に達した
ならば、分生胞子は急速に活力を失い、遂には消滅する
ことが確認された。尤も一部分分生胞子が残留している
ことも考えられ、増殖条件が良好になれば再び増殖する
場合も有り得る。

【００３５】前記発明においては、トリコデルマハル
ジアナムＳＫ−５−５を固体培地又は液体培地で培養
し、その生成物質中Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ成分について単
離精製したが、活性物質は、新規アミノ酸配列をもつ新
規物質で、その分子量は、Ａ成分＝１９２，Ｂ成分＝２
０６，Ｃ成分＝１６８，Ｄ_１＝１５４，Ｄ_２＝２２０で
あって、当該アミノ酸又はその周辺物が植物の活性化に
有効であろうと推定される。

【００３６】そこでトリコデルマハルジアナムＳＫ
−５−５菌の分生胞子を所定濃度（例えば１ｇ中５×１
０^５以上）以上で施用（土壌に混用、又は根物の根圏に
散布）することにより、所期の目的を達成することが確
認されている。恐らく、植物により最適の成分又は混用
比があるに違いない。

【００３７】そこで前記トリコデルマハルジアナム
ＳＫ−５−５菌を従来法によって多量培養し、その生成
物質を抽出精製して植物の活性付与剤を得ることができ
る。前記生成物質は、前記Ａ成分、Ｂ成分、Ｃ成分、Ｄ
成分及びＥ成分が判明している。

【００３８】前記発明は、各種植物について有効である
が、実験の結果（実験中も含む）によれば、水稲、トウ
モロコシ、てん菜、メロン、馬鈴薯、さつまいも、いち
ご、玉ねぎ、キャベツなどに有効なことが確認された。

【００３９】

【発明の実施の形態】この発明は、トリコデルマハル
ジアナムＳＫ−５−５菌を固体培地又は液体培地で培
養して抗生物質を生成することを特徴とした植物の活性
付与剤である。

【００４０】また製造方法の発明は、トリコデルマハ
ルジアナムＳＫ−５−５菌を米培地などの固体培地又
は液体培地に植菌し、所定温度（例えば２５℃〜３０
℃）で、所定時間（例えば４日〜３０日）間培養した
後、精製、抽出することを特徴とした植物の活性付与剤
の製造方法である。

【００４１】また活性付与方法の発明はトリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５菌の分生胞子を根圏付近の
覆土中に共存させるものである。この場合に前記分生胞
子は多孔性セラミックス粒子を担体とする。このように
すれば、散布の容易性と、十分な酸素の補給性を確保す
ることができるので好ましく、前記多孔性セラミックス
粒子にキトサンその他、分生胞子の増殖時に必要な栄養
分を補給することが一層好ましい。前記のようにすれ
ば、分生胞子の増殖を円滑かつ確実にすることができる
ので、必然的に有用物質の単離生成物も多くなる。

【００４２】次に活性付与剤の発明は、土壌中の増殖環
境を良好にする為に、土壌温度を１５℃〜３０℃とし、
水分を３０％以上とするが、その他の雑菌処理について
は必要性がない場合もある。更に施用方法の発明は、種
子への付着、散布、土壌との混和、散布潅水による浸透
などがある。

【００４３】

【実施例１】（供試菌名称）Trichoderuma hurzianum S
K-5-5（トリコテ゛ルマハルシ゛アナム SK-5-5）供試菌は97年1月北海
道グリーン興産より寒天培地のスラント1本を受領し
た。供試菌は下記の斜面培地に植菌し、２８℃で５日間
培養後、冷蔵にて保存した。

【００４４】寒天斜面培地組成オートミール５．０％シュクロース５．０％寒天１．０％２８℃、５日間培養後冷蔵保存

【００４５】（培養）培養は５００ｍｌ三角フラスコを
用い、米培地（Ａ培地）と液体培地（Ｂ培地Ｉ）の２種
類で行った。Ａ培地の条件は、２８℃で静置培養（培養
途中に滅菌水１０ｍｌを添加）とし、Ｂ培地Ｉの培養
は、２８℃で270rpmの振盪培養をした。培地組成：Ａ培地米１００％大豆かす３％滅菌水１０％培地組成：Ｂ培地Ｉグルコース５．０％ポリペプトン０．５％ＮａＣｌ０．８％酵母エキス０．２％炭酸カルシウム１．０％

【００４６】（検定法）検定は、すべてペーパーディス
ク平板法によるin vitroで行い、供試菌には下記の菌を
用いた。

【００４７】(1) Rhizoctonia solani（AG-1IA）検定用培地にはＰＤＡ（Nissui）1.3%、Chloramphenico
l 0.002%の組成からなる培地を用いた。Rhizoctonia の
菌糸の先端をコルクボーラーで抜いたものを平板培地の
中央にのせ、ブロスを染み込ませたペーパーディスクを
置き菌糸の伸長の様子を観察した。

【００４８】(2) Botrytis cinerea 検定用培地にはPotato-extract 20.0%、Sucrose 2.0%、
寒天1.5%の組成からなる培地を用いた。検定はペーパー
ディスクに試料をのせ風乾後シャーレにのせた。シャー
レをインキュベーターに入れて培養し、ペーパーディス
クの周りに阻止円が形成されているか否かを観察した。

【００４９】(3) 抗菌スペクトラム検定菌抗菌スペクトラムを下記の検定菌を用いて測定した。 Bacillus subtilis ATCC6633 Micrococcus luters ATCC6633 Staphylococcus aureus 209P Escherichia coli NIHJ Saccharomyces cerevisiae SHY3 Candida albicans M9001 Candida pseudotropicalis M9035 Cryptococcus neoformans M9010 Debaryomyces hansenii M9011 Trigonopsis variabilis M9031 Schizosaccharomyces pombe M9025 Hansenula schneggi IAM4269

【００５０】（培養法） (1) Ａ培地培養法 Rhizoctonia solani（AG-1IA）活性成物糸状菌Rhizoctonia solani（AG-1IA）に対するＡ培地の
培養抽出液活性物の単離精製。Ａ培地（米培地１kg）５
００ｍｌの三角フラスコ１本に米１００ｇと大豆かす３
ｇを加え、同じ条件のもの１０本分の培地を調製した。
滅菌後エーゼで植菌して、２８℃１０日間（菌がよく増
殖するように途中何度かフラスコを振る。また培地の表
面が乾いてきたら滅菌水を添加する。）静置培養後、５
０％アセトン水を２リットル加え抽出をした。ここで培
養物５０％アセトン抽出液２リットルを得た。

【００５１】(2) Ｂ培地培養法 Staphylococcus aureus 209P 活性成物細菌Staphylococcus aureus 209Pに対するＢ培地培養抽
出液中活性物の単離精製。

【００５２】

【表１】

【００５３】液体培地であるＢ培地Ｉの抗細菌活性成分
をより多く生産する目的で培地組成の窒素源と炭素源の
割合が異なるＩ〜ＩＶの４種を比較検討した。各培地５
００ｍｌ三角フラスコ２本を用い、培養５日間後培養液
を５倍濃縮に調製し、検定に用いた。

【００５４】(3) Ｂ培地Ｉ培養法培地検討の結果よりＢ培地Ｉで精製用培養を行ったＢ培地（グルコース５．０％、ポリペプトン０．５
％、ＮａＣｌ０．８％、酵母エキス０．２％、炭酸
カルシウム１．０％）５００ｍｌ三角フラスコに、１
００ｍｌの培地を調製した。滅菌後植菌し、２８℃、５
日間、振盪培養を行った。計１．５リットルの培養液と
等量のアセトンを加え、５０％アセトン抽出液３リット
ルを得た。

【００５５】（精製法） (1) Ａ培地培養抽出物精製法Ａ培地培養５０％アセトン抽出液２リットルのアセトン
留去後、１リットルをＨＰ−２０−Sephadex カラム（6
0.0cm×4.5cm φ）に全量を通過吸着させた。等量の水
で洗浄後、等量の５０％アセトン、次いで等量の１００
％アセトンで溶離させた。それぞれの分画を検定菌Rhiz
octonia solani（AG-1IA）で検定後、活性物質が１００
％アセトン溶離部に溶離されていることを確認した。続
いて１００％アセトン溶離部１リットルを濃縮し、1098
mgの粗精製物を得て、その中の１００ｍｇを展開溶媒メ
タノール系のＬＨ−２０カラムにかけた（100.0cm×2.0
cmφ）。分画をアッセイし、活性分画を確認した。これ
ら活性分画を回収後シリカゲルＴＬＣ（酢酸エチル：酢
酸：水＝５：１：１）で展開し、モリブデン硫酸呈色反
応をしたところ、Ｒｆ＝０．３付近にスポットが検出さ
れた。同時に不活性分画の展開部にはこれらのスポット
は検出されなかった。このことから活性物はＲｆ＝０．
３付近に検出されるスポットと推定し、さらに精製を進
めた。シリカゲルＰＴＬＣ展開（酢酸エチル：酢酸：水
＝５：１：１）、かき取りメタノール抽出後、ＨＰＬＣ
を用いて単離精製をした。単離精製物は器機分析を実施
し同定をした（図３１）。

【００５６】(2) Ｂ培地Ｉ培養抽出物精製法Ｂ培地培養５０％アセトン抽出液３リットルのアセトン
留去後（１．５リットル）、活性炭吸着カラム（60.0cm
×2.0cm φ）に全量１．５リットルを通過、吸着させ
た。等量の水で洗浄後、等量の５０％アセトン、続いて
等量の１００％アセトンで溶離させた。各分画を検定菌
Staphylococcus aureus 209Pを用いて検定した結果、１
００％アセトン溶離部に活性物質が溶離されていること
が確認された。１００％アセトン溶離部１．５リットル
を濃縮し、酢酸エチルで分配抽出を行い、次いでメタノ
ールを展開溶媒とするＬＨ−２０を実施し、ＨＰＬＣで
単離精製を行った。単離精製物は機器分析を実施し同定
をした（図３２）。

【００５７】（単離精製物生物活性法） (1) Ａ培地単離精製物評価法４成分の生物評価法検定用培地にはＰＤＡ（Nissui） 1.3%、Cholorampheni
col 0.002%の組成からなる培地を用いた。Rhizoctonia
solani（AG-1IA）の菌糸の先端をコルクボーラーで抜い
たものを平板培地の中央に乗せ、サイドに調製した単離
物質を染み込ませたペーパーディスクを置き菌糸の伸長
の様子を観察した。

【００５８】(2) Ｂ培地Ｉ単離精製物評価物Ｃ成分の生物評価（ＭＷ１６８）単離精製したＣ成分（MW:168）は新規物であり、きわめ
て単純な構造を保持している。母核としての興味が持た
れた為生物評価を拡大して実施した。

【００５９】(3) バクテリア属の評価 Bioassay 試験菌を加えた寒天培地をシャーレに入れ固める。その
上に試料を含むペーパーディスクをのせ、37℃で18時間
培養した後、発育阻止円の形成を確認する。

【００６０】(a) 使用菌株 Staphylococcus aureus 209P、Pseudomonas syringal
（タバコ野火病菌）、Xanthomonoas Campestris pv.cit
ri（カンキツかいよう病）、Erwinia sp（ウメかいよう
病）の４菌株を用いた。

【００６１】(b) 使用培地前培養にはブイヨン培地（DIFCO）を用い、一晩培養
後、×10² に希釈し、これを上層の培地０．５％に混
ぜ、菌測定培地には MYCIN AGAR （ミクニ化学）を用い
た。上層 − MYCIN AGAR 1.5%（ミクニ化学）＋ブイヨン２
％培地（DIFCO）にて一晩培養した培養液×10² に希釈
したものを０．５％加える。下層 − MYCIN AGAR 2.0%（ミクニ化学）

【００６２】(c) 抗菌測定ペーパーディスクに1000pppm,500ppm,250ppmに調製した
単離精製物を染み込ませ、風乾後シャーレに乗せ、37℃
で18時間培養し、発育阻止円の形成の有無を観察した。

【００６３】(4) ブドウ球菌に対する抗菌力（ＭＩＣ）
の測定 (a) 使用菌株 S.aureusu 209P JC−1，第１Ｇ保存の臨床分離黄色ブド
ウ球菌２０株（ＭＳＳＡ，ＭＲＳＡ各１０株）及び基
準菌株である E.coli NIHJ JC−2の計２２株を用いた。

【００６４】(b) 使用抗菌薬 MW:168、methicllin（DMPPC，注射用スタフシリン、Lo
t.No.FSB 19,900μg/mg、萬有製薬）、vancomycin （V
CM,Lot.No.41H0457,10750SIGMA）

【００６５】(c) 使用培地抗菌力測定にはMueller-Hinton agar （MIA:Difco）を
用い前培養には、Mueller Hinton broth（MHB:Difco）
を用いた。

【００６６】(d) 抗菌力測定使用菌株に対する各薬剤の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）
は日本化学療法学会標準法に準拠し、寒天平板希釈法に
て測定した。菌株はＭＨＡに塗抹し、３７℃で一晩培養
して生育したコロニーをＭＨＢにて３７℃で一晩培養
し、その菌液を１００倍希釈（E.Coliのみ１０００倍希
釈）したものを接種菌液とした。

【００６７】（結果） (1) 検定菌の結果Ａ培地とＢ培地Ｉの培養液活性は表２の通りである。抗
菌スペクトラムを下記の検定菌を用いて測定した。

【００６８】

【表２】

【００６９】Ａ培地の培養抽出液中の検定の結果、Rhiz
octonia solani（AG-1IA）の菌糸がＡ培地培養抽出物の
ペーパーディスクを避けている様子が観察された。本菌
が生産するＡ培地培養液中の活性物が、菌糸の成長を妨
げる物質を生産していると推察した。このためＡ培地培
養液中より、Rhizoctonia solani（AG-1IA）に阻害活性
を示す物質を指標に単離精製を試みた。

【００７０】またＢ培地Ｉの培養抽出液中の検定の結
果、Botrytis cinerea、Rhizoctoniasolaniに活性は確
認されず、バクテリアにのみ発育阻止円の形成が確認さ
れた。このことは、本菌は拮抗作用以外の抗菌力がある
と見られ、抗生物質を生産している可能性が考えられ
た。特にStaphylococcus aureus 209Pに形成された発育
阻止円はクリアーであった為、Ｂ培地Ｉではバクテリア
Staphylococcus aureus 209Pに対する活性物質を指標に
単離精製を実施することにした。Ａ培地培養物とＢ培地
Ｉ培養物の抗菌スペクトラムは異なっており、それぞれ
系統の異なるものを生産していると思われた。それぞれ
の活性物を単離精製することとした。

【００７１】(2) 培養の結果 (a) Ａ培地培養結果Ａ培地（米培地１kg）５００ｍｌの三角フラスコ１０
本分を２８℃で１０日間、静置培養し、培養物５０％ア
セトン抽出液２リットルを得た。

【００７２】(b) Ｂ培地検討と培養結果表１に表したＢ培地ＩとＢ培地ＩＩに活性が認められ、
Ｂ培地Ｉにより強い活性が認められた本菌は、窒素源が
少ない条件で活性物を生産することが確認された。この
結果よりＢ培地Ｉを用いて２８℃で５日間、振盪培養を
した。

【００７３】(3) 精製結果 (a) Ａ培地培養精製結果シリカゲルＰＴＬＣ処理後の活性分画を粗精製物とし
て、ＨＰＬＣ（0.05%TFA含 MeOH/H₂O）で純度の確認を
行った。分析では０分から３０分にかけてメタノール０
％から１００％のグラジエントをかけ、さらに３０分か
ら１００％メタノールで流速１ml/minで分析したとこ
ろ、ＲＴ（リテションタイム）32.5分（Fr65）で検出さ
れた（図１）。一見、単一物質のピークが検出されたか
のように思われたが、拡大することにより複数ピークの
存在が明らかとなった（図２）。ＲＴの速い方からＡ，
Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅと称し（図２）、そのうちの４成分を単
離精製した。単離精製物の成分と量は、Ａ成分 7.2mg，
Ｂ成分12.1mg，Ｄ成分 3.5mg，Ｅ成分 4.5mgであった。
ピークＣは量が少量であり、精製は断念した。

【００７４】(b) Ｂ培地Ｉ培養精製結果それぞれの分画のアッセイより活性Fr41〜54に活性があ
ることを確認し回収した。ＨＰＬＣ（0.05%TFA含 MeOH
/H₂O）分取、分析を行い検出されたピークのＲＴの速い
方からＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅと数え、５成分の存在を確認
した。このうちＣ成分 8.1mg単離精製することが出来
た。

【００７５】(4) 機器分析の結果 (a) Ａ培地単離精製物ＵＶ吸収スペクトラム、質量分析及びＮＭＲ測定結果
（図３〜１４）より、Aib（α-Aminoisobutyric acid）
を含むPolypeptideの、Peptibols系と判断した。Peptib
ols系抗生物質はアミノ酸配列の中に α-Aminoisobutyr
ic acid（Aib）を含んでおり、Ｎ末端がAcetyl基で、Ｃ
末端が Amino alcohol結合であることが特徴である（多
くは Phenylalaniol基でおわる）。なお今回の精製物、
Ａ成分、Ｂ成分、Ｄ成分は質量分析より一部のアミノ酸
配列を下記のように推定し、その部分構造を既存のPept
ibols のアミノ酸配列と検索した結果、一致する物が無
く、新規 Peptibols系であると推定した。Ｅはアミノ酸
配列の推定が困難であるため判断できなかった。

【００７６】ＵＶ吸収波長：４成分とも末端吸収（図
３、図６、図９、図１２）Ａ成分＝１９３３（図５）Ｂ成分＝１９４９または１９６４（図８）Ｄ成分＝１８１０（図１１）Ｅ成分＝１８２９（図１４）推定構造Ａ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Aib-Aib-Gln-Aib-Aib-... Ｂ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Val-Aib-Gln-Aib-Aib-...
Ｄ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Aib-...

【００７７】(b) Ｂ培地Ｉ（液体培地）活性物機器分析の結果Ｃ成分は、分子量１６８（C₈H₈O₄）の新
規物質であることが推定された。他の成分について単離
精製は非常に困難であり、不可能と判断したが、LC/MS
を実施した。Ａ成分のＵＶ吸収波長は末端であった（図
１５）。ＨＰＬＣの条件はカラムCapcel pac C18 UG120
（2×150mm）を用い、１％酢酸：アセトニトリル＝９
８：２、流速0.2ml/min、温室の条件で分析した。Ａ成
分は、ＲＴ７．４８分に検出された（図１６）。Ａ成分
が検出された分画の質量分析の結果、分子量は１９２で
あることを推定した（図１７）。同じくＢ成分について
も同様の分析をしたところＢ成分もＵＶ吸収波長が末端
（図１８）で、ＨＰＬＣのＲＴ１２、４５分に検出さ
れた（図１９）。質量分析の結果、分子量は２０６であ
ることを推定した（図２０）。Ｃ成分は単離精製が可能
であった分画である。Ｃ成分のＵＶ吸収波長は２７０ｎ
ｍ（図２１）で、ＨＰＬＣのＲＴは１５．９２分に検出
された（図２２）。質量分析の結果、分子量は１６８で
あることを推定した（図２３、２４）。また溶媒CD₃OD
で溶解し、ＮＭＲを測定（図２５）、解析したところ五
員環を含み、共役結合をもつ新規物質であることが推定
された。推定構造を図２６に示した。Ｄ成分はＵＶ吸収
波長が２３０ｎｍ付近にあり（図２７）、ＨＰＬＣのＲ
Ｔは３０．２８分に検出された（図２８）。しかし再度
ＨＰＬＣを実施し、ＵＶスペクトラム検出器の波長を末
端と２３０ｎｍで分析した結果、ＲＴ０．６分の差で２
成分（Ｄ１，Ｄ２）存在していることが確認された（図
２９）。それぞれの質量分析の結果、ＲＴの速いＵＶ吸
収が２３０ｎｍのものは分子量１５４であった（Ｄ
１）。たまＲＴが０．６分遅れて検出される成分の分子
量は２２０であることを推定した（Ｄ２）（図３０）。
これらの分子量の明らかとなった成分を分子量の少ない
順にならべると１５４（Ｄ１），１６８（Ｃ），１９２
（Ａ），２０６（Ｂ），２２０（Ｄ２）であることが確
認された。

【００７８】(5) 生物評価結果 (a) Ａ培地培養単離精製物生物評価結果４成分の生物評価結果Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ成分について5000ppmから希釈し、5000p
pm，2500ppm，1250ppm，625ppmで検定した。結果Ａ成
分、Ｅ成分は1250ppmまで Rhizoctonia solaniの菌糸の
伸長を阻害しおり、Ｂ成分、Ｄ成分は625ppmまでRhizoc
tonia solaniの菌糸の伸長を阻害しているのが確認され
た。

【００７９】(b) Ｂ培地Ｉ培養単離精製物生物評価結
果 (イ) バクテリア属の評価結果Ｂ培養物（MW168）のバクテリアに対する生物活性は発
育阻止円が形成されていなかったことから抗菌力は無い
か、弱いものと考えられた。

【００８０】(ロ) ブドウ球菌に対する抗菌力（ＭＩＣ）
の測定結果は表３の通りである。

【００８１】表３に示したようにＢ培養物（MW168）は
今回測定した濃度において抗菌力を示さず、ブドウ球菌
に対する抗菌力は無いか極めて弱いものと考えられた。

【００８２】

【表３】

【００８３】考察Ａ培地培養物より単離精製した成分からは、Ａｉｂ（α-
Aminoisobutyric acid）を含むPeptibols系のもの４成
分を単離することが出来た。Trichodermaが生産する Pe
ptibols系のものは幾つかすでに報告されているが、今
回単離精製したものは、それらのものとは一致しなかっ
た。また、それぞれの成分のアミノ酸配列の結果、３成
分が新規の配列であることが推定された。（Ｅ成分のみ
配列を測定するのが不可能だった）さらにin vitro試験
ではRhizoctonia solani（AG-1IA）の菌糸を阻害してい
る様子が観察された。この結果から本菌の米培養抽出物
中にRhizoctonia solani（AG-1IA）に対する菌糸伸長阻
害物質が生産されていることが明らかとなった。本菌の
拮抗作用である相手菌糸との接触により発現する細胞質
凝集を促し死滅させる物質そのものであるという断言は
まだ出来ないが、本菌の米培養抽出物中に菌糸成長伸長
抑制物が生産されていることは明らかである。

【００８４】またＢ培地Ｉ培養より単離精製した成分は
MW:168の新規物（3(3-hydroxy-cyclopropene 5-one-2y
l)2-propenoic asid）であり、Bioassay を幾つか実施
したが活性は無いか、きわめて弱いものと判断した。お
そらく活性本体はMW:168周辺化合物であり、MW:168は活
性物の副成物であると推測している。またMW:168周辺化
合物の分子量はMW:154、MW:192、MW:206、MW:220であ
り、分子量の差がそれぞれ１４であることがわかる。こ
れはメチル基一個分と同量であり、メチル基の増減によ
る活性の違いも考えられる。またMW:168は新規な構造を
保持しているが、構造検索より類似していた化合物が幾
つか報告されていた。その中でMW:168に一番近い構造で
あったもの（図３３）は、鳥取大学のＰＧＲ活性スクリ
ーニングで見出されたものであり、糸状菌Penicillium
valiabile SOPPより代謝され単離精製されたと報告さ
れ、Ｃ₈Ｈ₈Ｏ₅ （MW:198）の組成式で表されている新規
物質であるが、活性は弱いものと報告されている。

【００８５】

【実施例２】この発明の植物の活性促進剤をぎんがメロ
ンについて農地で施用した所、次の結果を得た。

【００８６】実施場所北海道常呂郡訓子府町弥生田川農園実施期間平成１１年４月２３日〜同年７月２９日実施条件アグロミックＳＫ−１０（トリコデルマハ
ルジアナムＳＫ−５−５菌の商標、以下同じ）を５０
ｇ／ｍ^２の割合でメロン床土に散布した。直径１〜２ｍ
ｍの麦飯石に、５×１０^７／ｇの分生胞子を付着させて
あった。試験区、対照区共に２００ｍ^２で、両区の相違
は、アグロミックＳＫ−１０の散布の有無だけであっ
た。農薬、追肥は一切しなかった。

【００８７】前記アグロミックＳＫ−１０を平成１１年
４月２３日散布、平成１１年４月２６日定植、平成１１
年７月２９日収穫を開始した。ぎんがメロンの平均重量
と糖度は表４の通りである。

【００８８】

【表４】

【００８９】調査経過の特徴（1）初期段階の特徴として、根の活着が顕著で葉形
が大きく茎が太い上に花めが大きい。（2）中間階段の特徴は、つる（ヘタ）の状態がガッチ
リして対照区と大きな格差があり、勿論農薬の使用は一
切無く苗の立枯れ、つる割れ病、つる枯れ病の兆候も無
かった。（3）収穫時の特徴としては、果実が大きく形が揃っ
ており、ネットは太くて、張りは抜群であった。（4）食味検査について、果実全体に糖度が等しく、
外皮ぎりぎりまで果肉が柔らかく、糖分が高く、しかも
さらっとして上品な味覚である（対照区のメロンとは確
実に格差を生じた）。（5）果実がしまっており、収穫後相当長期（対照区
の１．５倍以上）の保存が可能であった。

【００９０】

【実施例３】実施場所明治製菓株式会社生物科学研究所実施期間平成１１年４月〜同年８月実施条件４月６日播種４月８日〜２２日発芽、育苗５月７日定植、アグロミックＳＫ−１０の散布２×１０
^７／ｇ、３０〜４０ｇ／ｍ^２６月４日〜７日交配７月１２日〜２３日収穫前記中適宜施肥、潅水した。前記実施により、表５の結
果を得た。

【００９１】

【表５】

【００９２】結果糖度は施用区の方が１．５％高かった。ＳＫ−１０施用
によりショ糖量が上昇し、ブドウ糖、果糖が抑制され
た。ＳＫ−１０の一度の施用により糖度が向上したこと
は、根圏における相互作用により光合成産物の転流その
他活性が付与された結果である。

【００９３】

【実施例４】この発明の植物の活性促進剤をてん菜につ
いて施用した所、次の結果を得た。

【００９４】実施場所北海道斜里町朱丹実施期間平成１１年３月１２日〜同年１０月７日実施条件ポット上部土約３０ｋｇに対し、アグロミッ
クＳＫ−５５（トリコデルマハルジアナムＳＫ−５
−５菌の商標）相当量を混和処理した。分生胞子は２×
１０^８／ｇ以上であった。覆土に対し殺菌処理なし。菌
定着の為に３月下旬〜４月中旬、週一回程度潅水を実施
した。７月３０日アグロミックＳＫ−５５の１００倍液
を株元と葉面に２リットル／ｍ^２噴霧散布した。処理区
と対照区との相違は、殺菌処理しないことと、アグロミ
ックＳＫ−５５の処理をしないことであり、施肥量、施
肥方法その他一切同一とした。

【００９５】結果上記実施について、平成１０年７月２９日収
穫した所、表６の実数、表７の比率の結果を得た。

【００９６】

【表６】

【００９７】

【表７】

【００９８】前記実施例によれば、根重が３２％増加
し、糖量が４０％増加している。従って同一面積で４０
％増収したことになり、大変な成果である。

【００９９】前記実施例によれば、発芽時の混和と、７
月３０日にアグロミックＳＫ−５５の散布で、収量の
著しい増加が認められたことは、アグロミックＳＫ−
５５により、てん菜の根茎を活性化し、これにより養分
吸収その他が合理的、かつ強力になり、細胞分裂も順調
になったものと推定される。

【０１００】てん菜の場合にも種子の処理、土壌混和、
中間散布など、今後は施用量と時機を研究することによ
り、更なる利点が浮上する可能性がある。

【０１０１】

【実施例５】この発明の植物の活性促進剤を水稲につい
て施用した所、次の結果を得た。

【０１０２】実施場所北海道札幌市清田（佐々木農園）北海道夕張郡田仁町（樋山農園）北海道雨竜郡北竜町（高橋農園）実施期間平成１１年５月６日〜同年９月１６日実施条件品種名ほしのゆめ、きらら３９７アグロミックＳＫ−１０（トリコデルマハルジアナム
ＳＫ−５−５菌の商標）散布量Ａ… ５０ｇ／ｍ^２、分生子２×１０^８／ｇＢ…１００ｇ／ｍ^２、分生子２×１０^８／ｇ対照区には、タチガレンエース液を散布し、追肥した
（従来法）以外は同一である。

【０１０３】前記の条件で、水稲栽培した所、表８（佐
々木農園）、表９（樋山農園）、表１０（高橋農園）の
結果を得た。

【０１０４】

【表８】

【０１０５】

【表９】

【０１０６】

【表１０】

【０１０７】前記実施例によれば、きらら３９７の場合
に、蛋白質で、慣行区に比べて４〜６ポイント下がり、
アミロースで１〜３ポイントの差が確認された（１ポイ
ントは０．５とされる）。

【０１０８】そこで味度を測定した所、平均９１．０で
あった。一方市販の味が良いと言われる米について測定
した所、８８．０が最高であったから、現時点で最高の
味度を示したものということができる。

【０１０９】前記結果より判断するに、水稲の活性化に
より、病原菌、害虫を忌避した低農薬有機農法であり、
植物本来の力を引出して味覚を改善するのみならず収穫
量も増加（２０〜５０％）するなどの特徴が確認され
た。

【０１１０】

【実施例６】この発明の植物の活性促進剤をトウモロコ
シについて施用した所、次の結果を得た。

【０１１１】実施場所明治製菓株式会社生物科学研究所実施期間平成１１年４月〜同年８月３０日使用菌：アグロミックＳＫ−１０（２×１０^７／ｇ）施用法：発芽第２週目に、土壌散布、潅水１５０ｍｌ
／ｐｏｔ施用説明前記条件のもとに、表１１の施用設計に基づ
き施用した。

【０１１２】

【表１１】

【０１１３】前記により栽培し、収穫した所、表１２の
結果を得た。

【０１１４】

【表１２】

【０１１５】前記のように、果実の肥大効果と、糖度の
向上が認められた。施用量の多少による有為差は殆ど認
められなかった。即ち２０ｇ／ｍ^２の施用量と、２００
ｇ／ｍ^２の施用量との間に差がないということになり、
トウモロコシの場合には、発芽後１回の施用で活性付与
が行われることにより収穫まで継続するものと推定され
る。

【０１１６】従ってアグロミックＳＫ−１０により、生
成される新アミノ酸の量が活性を付与するのに十分であ
るならば、施用量は２０ｇ／ｍ^２以下でも十分効力を発
揮し得ることになる。

【０１１７】前記理由により、土壌がアグロミックＳＫ
−１０の増殖に必要な条件を有する場合には、２０ｇ／
ｍ^２以下でも十分効力を有するものと認められる。恐ら
く増殖可能な条件の下限によって定まるであろう。そこ
で発芽後一定期間、アグロミックＳＫ−１０の増殖条件
のもとにトウモロコシを育成する方法も考えられる。

【０１１８】

【実施例７】アグロミックＳＫ−１０（トリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５の商標）をたまねぎ育苗床
土に施用し、その苗及び定植後の生育促進効果を以下の
ように調査した。

【０１１９】（1）試験材料： (a) 供試種子：スーパーハイゴールドの薬剤処理してい
ない種子 (b) 供試資材：アグロミックＳＫ−１０（Trichoderma
harzianum ＳＫ−５−５の５×１０^８ＣＦＵの生菌剤、
北海道グリーン興産株式会社提供）（c）供試場所：千葉県木更津市下郡今間（2）試験方法： (a) 苗床の準備：育苗床は千葉県下の山砂土で、前作は
スイートコーンを栽培した圃場を用いた。ｐHは６．０
前後の弱酸性土壌であったので、ｐHの調整を兼ねて消
石灰１ｍ^２あたり５０ｇ、完熟堆肥（牛糞主体のモミガ
ラ入り堆肥）１ｋｇ、ＣＤＵ２０ｇをアグロミックＳＫ
−１０散布施用１５日前に施肥し、耕耘した。

【０１２０】(b) アグロミックＳＫ−１０施用および方
法：施用日：平成１１年９月１１日準備した育苗床に、供試資材アグロミックＳＫ−１０粒
剤を播種４日前に１ｍ ^２あたり５０ｇ散布し、表層３−
５ｃｍの深さによく混和し、水道水を用いて、土壌水分
が多湿にならないように（手で握りしめて団子になる程
度の湿り程度、即ち糸状菌を増殖培養のための最適湿度
条件）に留意して散水を行なった。

【０１２１】（c）播種およびアグロミックＳＫ−１０
の施用後の管理：播種日：平成１１年９月１５日残暑の厳しい、高温・乾燥であるので、トリコデルマ菌
が育苗床土に増殖・定着を良くし、たまねぎの出芽を良
くするために、できるだけ地温を２０℃〜２５℃程度に
保ち、且つ水分条件の安定を図るように、両区ともライ
麦ワラを２〜３ｃｍの厚さに敷き、その上に寒冷紗をか
けた。

【０１２２】たまねぎの種子は、すじまきで５０ｃｍ間
に７０粒程度を播種し、覆土後、適度の散水を行なっ
て、出芽が始まるまで、上記方法で被覆した。

【０１２３】出芽後は敷きワラを除去し、寒冷紗トンネ
ル被覆を１ヶ月程度行なった。定植に備えるために、前
記トンネル被覆を取り除き、堆肥と混合したＣＤＵ化成
肥料を１ｍ^２あたり２０ｇ程度、条間に浅く中耕して施
肥した。苗の大きさは径０．５〜０．６ｃｍ×葉丈５〜
６ｃｍ程度の充熟した苗を作ることを目標にして育苗し
た。

【０１２４】（d）定植：定植日：平成１１年１１月７日（播種後５３日目）本圃の土壌は沖積土、ｐHは６．０程度の弱酸性土壌
で、さつまいもの後作。消石灰１０ａあたり６０ｋｇ、
完熟堆肥５００ｋｇ、骨粉６０ｋｇ、米粕６０ｋｇを堆
肥とよく混和して施用し、耕耘した。一週間後に畦幅１
ｍ・３条植の畦を作り、ＣＤＵ２０ｋｇと過燐酸石灰１
０ｋｇを完熟堆肥３００ｋｇによく混和して、溝施肥し
た。苗は大きさの順に株間１５ｃｍに施肥溝に定植し
た。

【０１２５】（3）調査結果： (a) 出芽および生育状況：出芽では無処理区、処理区と
も、ほとんど差は無かったが、一週間後にわずかながら
無処理区で苗立ち枯れが発生した。その後の生育では、
２５日目ごろまで差は認められなかったが、トンネル除
去・追肥後（播種後３５日目）より、処理区で葉色が濃
くなり、目視でも生育が旺盛となり、差が認められるよ
うになった。

【０１２６】(b) 苗の生育調査： (イ) 定植前の苗の生育状況：調査日平成１１年１１月７
日（播種後５３日目）詳細なデータは表１３に示した。

【０１２７】良苗（大および中苗本数）は処理区７８％
で、無処理区では６５％であった。アグロミックＳＫ−
１０の施用によって良苗比率が１３％増加した。苗径が
０．７ｍｍ以上の苗はなかった。促進効果について、表
１３で示すとおり、アグロミックＳＫ−１０処理区では
生育指数が大きくなり、生育が旺盛で、根量も多くなっ
た。生育促進率を比較すると、ＳＫ−１０処理区は、無
処理区より２７％の生育増加が認められた。

【０１２８】(ロ) 定植後の生育調査：越冬前の生育状況
について調査した。

【０１２９】調査方法：図３４の方法で調査した。

【０１３０】結果：詳細な結果は表１４のとおりであ
る。

【０１３１】アグロミックＳＫ−１０処理区は、無処理
区と比較して、出葉枚数で０．４枚多く、生育促進率は
１５２．５％、バルブ径１５４．７％の増加率となっ
た。目視による観察でも、明らかに生育促進効果が認め
られた。アグロミックＳＫ−１０処理区は、無処理区と
比較して、根量が多く、根張りも良く、根に良く土が付
着し、根毛も多かった。またアグロミックＳＫ−１０処
理区において、葉面積とバルブ径は相関関係が認められ
た（図３５、表１５、表１６）。

【０１３２】

【表１３】

【０１３３】

【表１４】

【０１３４】

【表１５】

【０１３５】

【表１６】

【０１３６】

【実施例８】アグロミックＳＫ−１０をキャベツ育苗床
土に施用し、その苗及び定植後の生育促進効果を以下の
ように調査した。

【０１３７】（1）使用材料： (a) 供試種子：薬剤処理していない種子 (b) 供試資材：アグロミックＳＫ−１０（トリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５の５×１０^８ＣＦＵ、北
海道グリーン興産株式会社提供）（2）実施場所：千葉県成田市吉田農園（3）施用概要：（a）施用日：平成１１年９月１５日（b）播種日：平成１１年９月１９日 (c) 床土：ｐH６．０前後の砂壌土を中性に調整する
為、消石灰を１ｍ^２あたり５０ｇ位散布した。これに完
熟堆肥を１ｍ^２当り１ｋｇ、２週間前に施肥し、耕耘し
た。

【０１３８】播種前にアグロミックＳＫ−１０を、１ｍ
^２あたり５０ｇ位散布した。ついで表層５ｃｍ位を土壌
混和させ、１ｍ^２あたり３リットル位散水したが、土壌水分
は多湿にならない程度とした（手で握りしめて団子にな
る程度）。

【０１３９】（2）調査日：平成１１年１２月２３日
（播種後９４日）前記調査日において、処理区は葉色濃く、厚葉でしまり
がよく、結球性が速いことが認められた。

【０１４０】

【発明の効果】この発明によれば、トリコデルマハル
ジアナムＳＫ−５−５菌を固形培地に培養した場合に
は、表２のように、糸状菌について抗菌性を示すことが
認められた。

【０１４１】またトリコデルマハルジアナムＳＫ−
５−５菌を液体培地で培養した場合には表２のようにバ
クテリアに有効であるものと認められた。

【０１４２】この発明によれば、植物の生育初期に、床
土等にトリコデルマハルジアナムＳＫ−５−５菌を適
量宛混入することにより、又は生育時の散布など根圏に
施用することにより、植物を活性化してその根・茎・葉
を改善し、罹病防止、病原菌に対する耐性を付与するこ
とができる。これにより生育時の発病を激減させるのみ
ならず、植物の生育を促進し、増収を図り、糖度を向上
させるなどの諸効果がある。

【０１４３】然して前記効果は、前記トリコデルマハ
ルジアナムＳＫ−５−５菌の分生胞子の生成物質（例
えば新規アミノ酸）によるものと推定されるが、前記分
生胞子は増殖後、また前記生成物質は、植物の成長終期
には何れも消失するものと認められるので、如何なる意
味の影響もなく、かつ連続使用についても何等の悪影響
も見られない効果がある。更に前記生成物質は新規アミ
ノ酸及びその周辺物質と認められるから、植物の葉、茎
などに微量残留しても無害である。

【０１４４】またこの発明のトリコデルマハルジアナ
ムＳＫ−５−５菌は、土壌中で増殖するので、環境条
件が増殖に適する場合には、当初の散布濃度が不十分の
場合であっても、増殖により必要量の生成物質を補給
し、所期の目的を達成した後、自然消滅する特性が認め
られ、人体への影響はもとより、土壌、植物その他環境
破壊などのおそれは皆無である。更に連作不良の作物に
ついても、連作の不利は解消されるものと推定された。

【図面の簡単な説明】

【図１】この発明の菌のＡ培地培養におけるＨＰＬＣ分
析グラフ。

【図２】同じく図１の拡大グラフ。

【図３】同じくＡ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図４】同じくＡ成分の¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）を示
すグラフ。

【図５】（ａ）、（ｂ）同じくＡ成分の質量分析測定の
グラフ。

【図６】同じくＢ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図７】同じくＢ成分の ¹Ｈ−ＮＭＲを示すグラフ。

【図８】（ａ）、（ｂ）同じくＢ成分の質量分析測定の
グラフ。

【図９】同じくＤ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図１０】同じくＤ成分の ¹Ｈ−ＮＭＲを示すグラフ。

【図１１】（ａ）、（ｂ）同じくＤ成分の質量分析測定
のグラフ。

【図１２】同じくＥ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図１３】同じくＥ成分の ¹Ｈ−ＮＭＲを示すグラフ。

【図１４】（ａ）、（ｂ）同じくＥ成分の質量分析測定
のグラフ。

【図１５】同じくＡ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図１６】同じくＡ成分のＨＰＬＣを示すグラフ。

【図１７】同じく図１６の検出されたＡピークの質量分
析のグラフ。

【図１８】同じくＢ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図１９】同じくＢ成分のＨＰＬＣを示すグラフ。

【図２０】同じく図１９の検出されたＡピークの質量分
析のグラフ。

【図２１】同じくＣ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図２２】同じくＣ成分のＨＰＬＣを示すグラフ。

【図２３】同じく図２２の検出されたＡピークの質量分
析のグラフ。

【図２４】同じくＣ成分の質量分析グラフ。

【図２５】同じくＣ成分のピークの¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃
ＯＤ）を示すグラフ。

【図２６】同じくＣ成分の構造図。

【図２７】同じくＤ成分のＵＶ吸収波長を示すグラフ。

【図２８】同じくＤ成分のＨＰＬＣを示すグラフ。

【図２９】（ａ）同じくＵＶλ２３０ｎｍで検出された
Ｄ１成分を示すグラフ。（ｂ）同じくＵＶが末端吸収でＤ１成分とＲＴ０．６差
で検出されたＤ２成分を示すグラフ。

【図３０】（ａ）同じく図２９で検出されたＤ１成分の
質量分析を示すグラフ。（ｂ）同じく図２９で検出されたＤ２成分の質量分析を
示すグラフ。

【図３１】同じく米培地の培養抽出物精製経過の系統
図。

【図３２】同じくＢ培地Ｉの培養抽出物精製経過の系統
図。

【図３３】同じく新規物質（ＭＷ：１９８）１、２、３
の誘導体の構造図。

【図３４】同じくたまねぎに施用した際、越冬前の生育
調査部の説明図。

【図３５】同じくたまねぎのバルブ径と葉面積の相関
図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 1/02 (Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:885）Ｃ１２Ｒ 1:885）Ｆターム(参考） 4B064 AD55 AG01 BH04 BH06 BH07 CA05 DA02 DA12 4B065 AA70X BA22 CA10 CA24 CA47 4H011 AA01 AB04 BA01 BB06 BB19 BB21 BC20 DA02 DC10 DD04 DH11

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】トリコデルマハルジアナムＳＫ−５
−５菌を固体培地で培養して抽出した物質であって、糸
状菌に抗菌力を有することを特徴とした植物の活性付与
剤。
【請求項２】トリコデルマハルジアナムＳＫ−５
−５菌を液体培地で培養して抽出した物質であって、細
菌の一種（Staphylococcus aureus 209p）に抗菌力を有
することを特徴とした植物の活性付与剤。
【請求項３】抽出した物質は、下記Ａ成分、Ｂ成分、
Ｃ成分及びＤ成分としたことを特徴とする請求項１又は
２記載の植物の活性付与剤。Ａ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Aib-Aib-Gln-Aib-Aib-...
であって分子量１９２Ｃ成分：【化1】 ...であって分子量１６８Ｂ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Val-Aib-Gln-Aib-Aib-...
であって分子量２０６Ｄ成分：Ac-Aib-Ala-Aib-Aib-Aib-... であって分子量
１５４又は２２０
【請求項４】トリコデルマハルジアナムＳＫ−５
−５菌を固体培地に植菌し、２５℃〜３０℃で７日〜１
５日間静置培養した後、抽出して請求項１記載の物質を
得ることを特徴とした植物の活性付与剤の製造方法。
【請求項５】トリコデルマハルジアナムＳＫ−５
−５菌を液体培地に植菌し、２５℃〜３０℃で４日〜１
０日間振盪培養した後、抽出して請求項２記載の物質を
得ることを特徴とした植物の活性付与剤の製造方法。
【請求項６】植物栽培に際し、トリコデルマハルジ
アナムＳＫ−５−５菌の分生胞子に施用手段を付加
し、前記植物に活性を付与することを特徴とした植物の
活性付与方法。
【請求項７】植物栽培に際し、トリコデルマハルジ
アナムＳＫ−５−５菌の分生胞子に施用手段を付加
し、前記植物に活性を付与する物質を生産させることを
特徴とした植物の活性付与方法。
【請求項８】植物栽培に際し、トリコデルマハルジ
アナムＳＫ−５−５菌の分生胞子に施用手段を付加
し、前記植物に活性を付与する物質を生産させると共
に、前記分生胞子の増殖促進条件を付加することを特徴
とした植物の活性付与方法。
【請求項９】分生胞子の施用手段は、分生胞子を植物
の種子へ付着処理し、覆土と分生胞子とを混和し、又は
分生胞子の適量を散布して、潅水又は埋設することを特
徴とした請求項６、７、８の何れか１項記載の植物の活
性付与方法。
【請求項１０】増殖促進条件は、土壌温度を１５℃〜
３０℃とし、水分を３０％以上としたことを特徴とする
請求項８記載の植物の活性付与方法。
【請求項１１】増殖促進条件は、土壌に増殖可能な通
気性又は含気性を付与することを特徴とした請求項７記
載の植物の活性付与方法。
【請求項１２】無菌処理した多孔性セラミックス粒子
その他の担体粒子に、トリコデルマハルジアナムＳ
Ｋ−５−５菌の分生胞子を付着させたことを特徴とする
植物の活性促進剤。
【請求項１３】無菌処理した無機質粒子に、トリコデ
ルマハルジアナムＳＫ−５−５菌の分生胞子を混合
し、又はＳＫ−５−５菌を付着させた無機質粒子と、他
の粒子とを混合したことを特徴とする植物の活性促進
剤。
【請求項１４】トリコデルマハルジアナムＳＫ−
５−５菌の分生胞子を培養し、これを培地と共に適量宛
分離し、無菌の多孔質粒子及び栄養分よりなる増量材と
混合した後、所定量宛包装したことを特徴とする植物の
活性促進剤。
【請求項１５】トリコデルマハルジアナムＳＫ−
５−５菌の分生胞子を液体培地で増殖させた後、所定量
宛包装したことを特徴とする植物の活性促進剤。
【請求項１６】請求項１１、１２、１３の何れか１項
記載の植物の活性促進剤を、育苗土壌に混入し、又は育
苗時に、土壌に散布、或いは舗場に散布することを特徴
とした植物の活性促進剤の施用方法。
【請求項１７】活性促進剤の使用量は、トリコデルマ
ハルジアナムＳＫ−５−５菌の５×１０^４／ｇ〜５
×１０^９／ｇを１ｍ^２当り５ｇ〜１００ｇ散布し、又は
栽培土１ｍ^３当り５ｇ〜１００ｇ混入することを特徴と
した請求項１６記載の植物の活性促進剤の施用方法。