CN107236676A - 一种对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥及其应用 - Google Patents

Abstract

为了解决青蒿幼苗生产中出现的化肥施用过多的问题，本发明提供了一种对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥，所述哈茨木霉菌肥为哈茨木霉H2菌株的菌丝体悬浮液，哈茨木霉H2菌株的特征核苷酸序列为Th101特异序列。哈茨木霉菌肥具有较强抑制病原菌的作用，可降低作物病害发生率；菌肥和化肥复配可提高化肥的利用效率，而单施化肥造成养分的流失和固定，利用率越来越低；采用菌肥生产过程无污染，可利用废物，耗能较低。化肥生产过程污染严重，且高耗能耗资源。

Description

一种对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥及其应用

技术领域

本发明涉及一种有机菌肥，更具体的说涉及一种对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥及其应用。

技术背景

有机菌肥是将一种或多种有益微生物植入有机物中制备而成的一种新型肥料，多效有机菌肥的有机物既是肥力的基础，又是有益微生物的培养基质。这种新型肥料兼具促生长、抗病、改善土质、无农残等多重优点，目前已在国内外得到大量应用，且取得了显著效果。

木霉(Trichoderma Pers.ex Fr.)属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目的黏菌种类，广泛存在于土壤、根际、叶面、种子和球茎等生态环境中。木霉菌落生长迅速，呈不定型棉絮状或致密丛束状。其表面的颜色多呈绿色。菌丝有隔分枝。厚垣孢子有或无。分生孢子梗是菌丝的短侧枝。侧枝上对称或互生分枝，形成2级和3级分枝。分枝角度为锐角或近于直角，在分枝末端形成瓶状小梗。分生孢子多为卵圆形。无色或绿色，簇生于小梗顶端。

自1932年Weindling发现木素木霉(T.lignorum)寄生于多种植物病原真菌后，木霉菌作为一类生防菌显示出巨大的应用潜力。许多研究者观察到在藻类、半知菌、子囊菌和担子菌中有木霉寄生物。木霉菌能寄生的植物病原菌包括丝核菌属(Rhimetonia)、小核菌(Selerolium)、核盘菌属(Sclerotinia)、长蠕孢属(Helminth)、镰刀菌属(Fusarium)、毛盘孢属(Colletotriehum)、轮枝孢属(Yerticillium)、黑星菌属(Venturia)、内座壳属(Endothia)、腐霉属((Pythium)、疫霉属(Phytophlhora)、闻座壳属(Diaporthe)和黑星孢属(Fusicladium)等。因此，木霉具有抗病害作用；由于它能产纤维素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、几丁质酶和蛋白酶等酶类化合物，又能合成核黄素、生产抗生素、转化甾族化合物，所以它是重要工业制剂的生产菌；木霉具有很强的分解纤维素能力，有利于作物对土壤养分的吸收利用，具有促进植物生长的作用；木霉还能降解农药，改善土质；且对环境无危害性。目前发现的木霉多种多样，包括侵占木霉(T.aggressivum)、棘孢木霉(T.asperellum)、深绿木霉(T.atroviride)、黄绿木霉(T.aureoviride)、短密木霉(T.brevicompactum)、蜡素木霉(T.cerinum)、绿孢木霉(T.chlorosporum)、橘绿木霉(T.citrinoviride)、致密木霉(T.compactum)、顶孢木霉(T.fertile)、钩状木霉(T.hamatum)、哈茨木霉(T.harzianum)、交织木霉(T.intricatum)康宁木霉(T.koningii)、拟康宁木霉(T.koningiopsis)、长枝木霉(T.longibranchiatum)、长毛木霉(T.longipile)等。总之，木霉是研发有机菌肥的优质菌种之一。

以绿色木霉为主要成分的利江牌微生物肥(绿色木霉)，是利江实业公司研制而成的一种木霉微生物肥料。该菌肥对黄瓜、芹菜、油菜等都有显著的增产作用，并且能够促进早熟，改善作物品质，还可抑制病虫害的发生。

浙江大学研发的以哈茨木霉发酵液为主要成分的微生物多效有机菌肥，对作物增产效果显著，并于1997年通过省级鉴定，获肥料登记和国家专利。所登记的高效微生物态氮由哈茨木霉深层发酵液经去渣减压浓缩精制而成。其产品经过大田试验，发现与使用传统的尿素、厩肥相比，对白菜的增产效果明显，且使用简单，在蔬菜上具有广阔的应用前景。

浙江大学生物技术研究所研制推广的威绿达(VIRIDA)菌肥以绿色木霉为主，毛壳菌、枯草芽孢杆菌为辅混配制成，主要应用于绿色蔬菜生产、旱地作物、草地保护，也可以作花卉肥料。该生物制剂以城市生活垃圾为培养基质生产而成，它既含有作物生长所需的有机和无机成分，又具有防病促进生长的作用，并且可以改良土壤，是一种多功能的生物菌肥。

可见，以木霉为主要成分的微生物肥料具有多种效果，而且符合当今农产品生产绿色环保无公害无农残及可持续发展的要求，具有广阔的市场前景。

青蒿ArtemisiaannuaL.,又名黄花蒿,是菊科一年生药用草本植物。是传统中药材，其提取物青蒿素对脑疟疾和氯喹疟疾具有高效低毒的抗疟性能,WHO已经认定复方青蒿素成药为目前最安全有效的抗疟药。目前青蒿素主要从青蒿植株中提取。青蒿原料主要来自人工栽培，因生产中长期大量施用化肥，导致土壤酸化，环境污染。亟待寻找绿色环保无农残的肥料进行替代。而我们分离出一株哈茨木霉H2菌株的液体发酵菌丝体对青蒿幼苗生长具有显著的促生作用。因此，用该菌株制作菌肥，可减少乃至完全替代青蒿幼苗生长时期化肥的施用，从而达到保护土壤和环境的目的。

发明内容

为了解决青蒿幼苗生产中出现的化肥施用过多的问题，本发明提供了一种对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥，所述哈茨木霉菌肥为哈茨木霉H2菌株的菌丝体悬浮液，哈茨木霉H2菌株的特征核苷酸序列为Th101特异序列。

所述哈茨木霉菌H2菌株从羊肚菌栽培菌袋污染霉菌中分离得到。

对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥的制备方法，包括以下步骤：

1)从多包羊肚菌栽培菌袋污染霉菌中分离出4株哈茨木霉菌；

2)从4株哈茨木霉菌中筛选出生长最旺盛H2菌株，作为哈茨木霉菌肥生产菌株

3)土豆200g切碎煮汁，汁水去渣后，加葡萄糖20g，定容至1升，高温灭菌制成培养液；

4)在培养液中接种筛选出的哈茨木霉H2菌株试管种，25℃，135rpm，黑暗，振荡培养，约5-7天，液体中长满菌球后停止培养；

5)滤出菌球，搅拌机匀浆，加清水制作菌丝体悬浮液，每1ml菌悬液含有不低于0.5g菌丝体，得到哈茨木霉菌肥。

上述对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥在青蒿幼苗种植中的应用。

本发明的有益技术效果是：化肥造成土壤板结，污染水体，且会影响药材的品质；哈茨木霉菌肥具有改善土质的作用，可提高药材品质；微生物肥不含重金属，且对重金属污染的土壤有修复作用；化肥降低作物根际菌群多样性，增加病害发生率。哈茨木霉菌肥具有较强抑制病原菌的作用，可降低作物病害发生率；菌肥和化肥复配可提高化肥的利用效率，而单施化肥造成养分的流失和固定，利用率越来越低；采用菌肥生产过程无污染，可利用废物，耗能较低。化肥生产过程污染严重，且高耗能耗资源。

具体实施方式

实施例1健壮哈茨木霉菌株的筛选

从羊肚菌菌袋污染霉菌中分离出的4株哈茨木霉菌株接种于PDA平板培养基中央，25℃，黑暗培养,每隔24h测量其菌落直径,每个处理设3次重复。结果如表1所示。

表1不同哈茨木霉菌株菌落生长速度

从表1可见，哈茨木霉H2菌株生长速度最快，选取作为菌肥生产菌株，其菌株的特异性核苷酸序如核苷酸序列表Th101特异序列所述。

实施例2哈茨木霉菌肥对青蒿幼苗的促生效果考察

1哈茨木霉菌肥制备

土豆200g切碎粒，煮汁过滤，滤液加葡萄糖20g，加水至1升，装1升三角瓶，300-400ml/瓶。高温高压灭菌。接种实施例1筛选得到的哈茨木霉H2菌株试管种，25℃，135rpm，黑暗，振荡培养。约5-7天，液体中长满菌球后，停止培养。滤出菌球，搅拌器匀浆后加清水制作菌丝体悬浮液。

2菌肥施用

3月在育苗格中培养青蒿苗，间苗后留1株/格。4月下旬，青蒿苗长至15-20厘米左右时，施用步骤1制作的菌肥。在苗根际打洞，施用菌悬液约5ml/株，盖土。部分幼苗在5月初第二次施用哈茨木霉菌肥。以施用氮磷钾复合肥100mg/株和施用清水为对照。50-60株/处理。施肥约25天后，统计苗的各项生长指标，比较不同处理的效果，结果如表2。

表2哈茨木霉菌肥对青蒿幼苗生长的影响

从以上结果可以看出，施用菌肥相对于清水对青蒿幼苗有显著的促生长作用，且其增产效果和施用复合肥没有显著差别。施用两次菌肥和一次菌肥的产量没有显著性差别，这一特点可节约肥料和人工。可见哈茨木霉菌肥可作为青蒿的苗肥，全部代替或部分代替化肥。

SEQUENCE LISTING

<110> 重庆市中药研究院

<120> 一种对青蒿幼苗有促进作用的哈茨木霉菌肥及其应用

<130> 2017

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 569

<212> DNA

<213> Th101特异序列

<400> 1

accgagttta caactcccaa acccaatgtg aacgttacca aactgttgcc tcggcgggat 60

ctctgccccg ggtgcgtcgc agccccggac caaggcgccc gccggaggac caaccaaaac 120

tcttattgta taccccctcg cgggtttttt tataatctga gccttctcgg cgcctctcgt 180

aggcgtttcg aaaatgaatc aaaactttca acaacggatc tcttggttct ggcatcgatg 240

aagaacgcag cgaaatgcga taagtaatgt gaattgcaga attcagtgaa tcatcgaatc 300

tttgaacgca cattgcgccc gccagtattc tggcgggcat gcctgtccga gcgtcatttc 360

aaccctcgaa cccctccggg gggtcggcgt tggggatcgg ccctgccttg gcggtggccg 420

tctccgaaat acagtggcgg tctcgccgca gcctctcctg cgcagtagtt tgcacactcg 480

catcgggagc gcggcgcgtc cacagccgtt aaacacccaa cttctgaaat gttgacctcg 540

gatcaggtag gaatacccgc tgaacttaa 569

Claims (4)

1.一种对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥，其特征在于：所述哈茨木霉菌肥为哈茨木霉菌H2菌株的菌丝体悬浮液，哈茨木霉H2菌株的特征核苷酸序列为Th101特异序列。

2.根据权利要求1所述的对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥，其特征在于：所述哈茨木霉H2菌株为从羊肚菌栽培菌袋污染霉菌中分离得到。

3.根据权利要求2所述的对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥，其特征在于：哈茨木霉菌肥的制备包括以下步骤：

1)从多包羊肚菌栽培菌袋污染霉菌中分离出4株哈茨木霉菌；

2)从4株哈茨木霉菌中筛选出生长最旺盛的H2菌株，作为哈茨木霉菌肥生产菌株

3)土豆200g切碎煮汁，汁水去渣后加葡萄糖20g，定容至1升，高温灭菌制成培养液；

4)在培养液中接种筛选出的哈茨木霉H2菌株试管种，25℃，135rpm，黑暗，振荡培养，约5-7天，液体中长满菌球后停止培养；

5)滤出菌球，搅拌机匀浆，加清水制作菌丝体悬浮液，每1ml菌悬液含有不低于0.5g菌丝体，得到哈茨木霉菌肥。

4.对青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥在青蒿幼苗培育中的应用。