JP2001072596A

JP2001072596A - 抗菌作用の増強方法

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Publication number: JP2001072596A
Application number: JP25096799A
Authority: JP
Inventors: Masato Shimizu; 正登清水; Sumiko Shioda; 澄子塩田; Keiko Yasuda; 慶子安田; Hiroshi Kamibayashi; 裕始上林; Tsutomu Hatano; 力波多野; Hideyuki Ito; 秀之伊東; Tomofusa Tsuchiya; 友房土屋; Takashi Yoshida; 隆志吉田
Original assignee: Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd
Current assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Priority date: 1999-09-03
Filing date: 1999-09-03
Publication date: 2001-03-21
Anticipated expiration: 2019-09-03
Also published as: JP4542644B2

Abstract

(57)【要約】【課題】抗生物質の抗菌作用の増強方法とその用途を
提供する。【解決手段】テリマグランジンＩ及び／又はコリラジ
ンを抗生物質と併用することを特徴とする抗菌作用の増
強方法ならびに、テリマグランジンＩ及び／又はコリラ
ジンと抗生物質とを含有せしめてなる抗菌剤を提供する
ことにより解決する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗菌作用の増強方
法に関し、詳しくは、テリマグランジンＩ（ｔｅｌｌｉ
ｍａｇｒａｎｄｉｎＩ）骨格を有する化合物及び／又
はコリラジン（ｃｏｒｉｌａｇｉｎ）骨格を有する化合
物を抗生物質と併用することを特徴とする抗菌作用の増
強方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】抗生物質は感染症などの治療に有効な化
学療法剤として従来より広く使用されている。しかしな
がら、抗生物質は、医療現場等における濫用により、種
類によってはその抗生物質に対する耐性菌の出現を招く
場合があり、斯かる耐性菌に関連する問題が近年発生し
はじめている。例えば、β−ラクタム系抗生物質をはじ
めとする諸種の抗生物質に対する多剤耐性を獲得したメ
チシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ
−ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ、以下、「ＭＲＳＡ」と略記する。）が
院内感染により患者に致命的な結果をもたらしたとの報
告例もある。ＭＲＳＡを含め、抗生物質に対する耐性を
獲得した病原菌は、ヒト以外の動物、鳥類、爬虫類、魚
類などにも感染し伝搬する場合があり、抗生物質耐性菌
の問題は医療現場にとどまらず、大きな社会問題に発展
しつつある。

【０００３】このような、抗生物質に対する耐性菌に対
しては、現在のところその抗生物質とは作用機作の異な
る別の抗生物質で対処するのが一般的である。例えば、
ＭＲＳＡに対しては、一般に、ＭＲＳＡにより耐性が獲
得された抗生物質とは作用機作の異なるバンコマイシン
等の抗生物質を適用することにより対処されている。こ
のような対処方法は、その初期の段階では耐性菌の殺菌
ないしは静菌に奏効するものの、連用すると、その別の
抗生物質に対する新たな耐性菌の出現を招く場合があ
る。また、バンコマイシン等の抗生物質はヒトに対して
副作用を示す場合もある。このように、抗生物質に対す
る耐性菌に関する問題は未だ根本的には解決されていな
いというのが現状である。この問題を解決する方策のひ
とつとしては、抗生物質が、その抗生物質に対する耐性
菌に対しても効果を示すようにその抗菌作用を増強する
ことが考えられるけれども、そのような抗菌作用の増強
のための、十分に有効といえる方法は現在のところ確立
されていない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】斯かる状況に鑑み、こ
の発明の課題は、抗生物質の抗菌作用を増強する方法と
その用途を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するため、抗生物質の抗菌作用の増強能を有す
る物質を求めて植物を中心とする諸種の材料を広く検索
した。その結果、バラの花弁及びウワウルシの葉の抽出
物は抗生物質と併用した場合、その抗菌作用を顕著に増
強するという全く独自の知見を得た。引き続き本発明者
らは、該増強作用を示したこれらの抽出物を分画して、
該増強作用の本体の単離と同定を試みた。その結果、バ
ラの花弁の抽出物より該増強作用の本体のひとつとして
テリマグランジンＩ骨格を有する化合物を、ウワウルシ
の葉の抽出物より該増強作用の本体としてコリラジン骨
格を有する化合物を同定した。

【０００６】斯くして単離・同定された化合物は、いず
れも抗生物質と併用したときその抗菌作用を顕著に増強
し、とりわけ、ＭＲＳＡに対するβ−ラクタム系抗生物
質の抗菌作用を顕著に増強することが確認された。この
発明は以上の知見に基づいて完成されたものである。

【０００７】すなわち、この発明は、テリマグランジン
Ｉ骨格を有する化合物及び／又はコリラジン骨格を有す
る化合物を抗生物質と併用することを特徴とする抗菌作
用の増強方法ならびに、テリマグランジンＩ骨格を有す
る化合物及び／又はコリラジン骨格を有する化合物と抗
生物質とを含有せしめてなる抗菌剤により上記の課題を
解決するものである。

【０００８】

【発明の実施の形態】この発明はテリマグランジンＩ骨
格を有する化合物及び／又はコリラジン骨格を有する化
合物を抗生物質と併用することを特徴とする抗菌作用の
増強方法に関するものである。この発明で用いるテリマ
グランジンＩ骨格を有する化合物の具体例としては化１
で表されるテリマグランジンＩが、また、この発明で用
いるコリラジン骨格を有する化合物の具体例としては化
２で表されるコリラジンがそれぞれ挙げられる。

【０００９】

【化１】

【００１０】

【化２】

【００１１】この発明でいうテリマグランジンＩ骨格を
有する化合物及びコリラジン骨格を有する化合物とは、
上記に例示されるテリマグランジンＩ及びコリラジンそ
れぞれの誘導体であって、β−ラクタム系抗生物質など
の抗生物質の抗菌作用の増強能を有する化合物全般を意
味する。上記に例示される以外のこの発明で用い得る化
合物としては、例えば、化１又は化２における水酸基の
１個又は２個以上が、それぞれ独立に、水素原子、アル
キル基、アルコキシ基、カルボキシル基、アリール基な
どの置換基で置換された誘導体を挙げることができる。
個々のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル
基、プロピル基、イソプロピル基などが、また、個々の
アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ
基、プロポキシ基、イソプロポキシ基などが挙げられ
る。個々のアリール基としては、例えば、フェニル基、
ジフェニル基及びターフェニル基などが挙げられる。

【００１２】以上のような、この発明で用いるテリマグ
ランジンＩ骨格を有する化合物及びコリラジン骨格を有
する化合物（以下、これらの化合物から選ばれる１種又
は２種以上を単に「当該化合物」ということがある。）
は、調製方法が種々知られている場合があるので、慣用
の方法により調製されるこれらの化合物はいずれも有利
にこの発明で用いることができる。したがってこの発明
の実施において、当該化合物はその給源や調製方法によ
り限定されず、例えば、植物体など天然の給源から得ら
れたものであっても、化学合成などにより人為的に得ら
れたものであってもよい。また、この発明の実施におい
て、当該化合物は精製された実質的に単一の形態で用い
ても、また、後述する当該化合物による抗菌作用の増強
効果を実質的に消失させない範囲で他の成分との混合物
としての形態で用いてもよい。医療分野、食品分野、化
粧品分野など、ヒトに適用する場合には、天然の給源か
ら比較的高純度に精製された当該化合物を用いるのが望
ましい。テリマグランジンＩ骨格を有する化合物はバラ
の花弁をはじめとするバラの植物体に、また、コリラジ
ン骨格を有する化合物はウワウルシの葉をはじめとする
ウワウルシの植物体に比較的多く含有されるので、これ
らの給源から精製された当該化合物は医療、食品、化粧
品などの諸分野でのこの発明の実施に有利である。

【００１３】天然の給源から当該化合物を調製するに
は、配糖体を含む天然のポリフェノール類の分離・精製
に用いられる通常の手段が適宜採用される。斯かる通常
の手段としては、例えば、抽出、濃縮、濾過、分液、分
別沈澱、結晶化、分蜜、真空乾燥、凍結乾燥、吸着クロ
マトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、疎水性クロ
マトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン
交換クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーなど
が挙げられる。以上のような慣用の方法から選ばれる適
宜の方法で当該化合物の給源の抽出物を分画して生成す
る画分を、後述する抗菌作用の増強効果の判定方法に供
して所期の性質を示した画分を選択・合一し、合一した
画分を、必要に応じて、さらに適宜の方法により分画
し、生成する画分を前記と同様に選択・合一する操作を
繰り返せば、所望のレベルにまで精製された当該化合物
を得ることができる。斯くして得られる当該化合物は、
さらに必要に応じて、適宜の他の成分と混合するなどし
て組成物の形態に調製して使用することもでき、本発明
による抗菌作用の増強方法の実施分野や実施の対象とな
る微生物の種類に応じて、適宜の精製度・形態の当該化
合物の調製物を用いればよい。

【００１４】斯くして調製される当該化合物は、単独で
は、医療分野で通常用いられる慣用の抗生物質の抗菌作
用と比較すると通常明らかに弱い抗菌作用しか示さな
い。当該化合物の種類や精製度、対象とする微生物の種
類などにもよるが、当該化合物の抗菌作用を最小発育阻
止濃度（以下、「ＭＩＣ」という。）で表すと、通常、
１００μｇ／ｍｌ程度ないしはそれ以上である。当該化
合物は単独ではこのように弱い抗菌作用しか示さないけ
れども、抗生物質と併用したとき、その抗生物質の抗菌
作用を顕著に増強する能力を有している。

【００１５】この発明による抗菌作用の増強方法で用い
る抗生物質は、当該化合物の併用によりその抗菌作用が
増強されるものであればいずれでもよい。一般に抗生物
質とは、原核細胞及び真核細胞を含む微生物のいずれか
１種以上に対する殺菌作用又は静菌作用を示す物質と定
義される。この発明においては、このように定義される
抗生物質のうち、テリマグランジンＩやコリラジンなど
の当該化合物の併用によりその抗菌作用が増強されるも
のであれば、それらから適宜選ばれる１種又は２種以上
はいずれも用いることができ、化学構造や抗菌作用の作
用機作、さらには、対象となる微生物の種類により限定
されるものではない。抗菌作用の増強の効果は、対象と
する抗生物質に応じて選ばれる慣用の抗菌作用の測定系
に当該化合物を添加して抗菌作用を調べることにより確
認することができる。すなわち、斯かる測定系で抗生物
質を当該化合物と併用して求められた抗菌作用の測定値
が、同じ測定系でその抗生物質及び当該化合物をそれぞ
れ単独で用いた場合の抗菌作用の加算値を上回った場
合、換言すれば、抗生物質と当該化合物の併用により相
乗的に高まった抗菌作用が確認された場合、当該化合物
の併用によりその抗生物質の抗菌作用が増強されたと判
定される。以上述べた、この発明で用い得る抗生物質
（以下、その１種又は２種以上を単に「当該抗生物質」
ということがある。）の具体例としては、例えば、オキ
サシリン、ベンジルペニシリン、アンピシリン、セフメ
タゾール及びイミペネムをはじめとするβ−ラクタム系
抗生物質や、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサ
イクリン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン及びミ
ノサイクリンをはじめとするテトラサイクリン系抗生物
質などが挙げられる。この発明による抗菌作用の増強方
法は、β−ラクタム系抗生物質との併用によるときとり
わけ著効を発揮する。

【００１６】この発明による抗菌作用の増強方法は、当
該化合物及び／又は当該抗生物質が単独で抗菌作用を発
揮する微生物に対して、抗菌作用の増強効果を示す場合
もあるが、当該抗生物質が単独では顕著な抗菌作用を示
さない微生物に適用するととりわけ顕著な効果を発揮す
る。したがって、本発明による方法は、従来の抗生物質
では対処し得なかった微生物の殺菌ないしは静菌に極め
て有効である。当該抗生物質が単独では顕著な抗菌作用
を示さない微生物としては、例えば、当該抗生物質に対
する耐性を獲得した微生物の変異株が挙げられ、より詳
細には、当該抗生物質に対する耐性を獲得した、スタフ
ィロコッカス属又はストレプトコッカス属のグラム陽性
菌の変異株や、バクテロイデス属、フコバクテリウム
属、シュードモナス属、エシェリヒア属、エンテロバク
ター属、クレブシエラ属、セラティア属、シトロバクタ
ー属又はアシネトバクター属のグラム陰性細菌の変異株
が挙げられる。これらのうち、当該抗生物質のひとつで
あるβ−ラクタム系抗生物質をはじめとする諸種の抗生
物質に対する多剤耐性を獲得したＭＲＳＡ（スタフィロ
コッカス属）に対し、この発明による抗菌作用の増強方
法はとりわけ著効を発揮する。

【００１７】この発明でいう、当該化合物を当該抗生物
質と併用するとは、当該抗生物質を、上記で述べた微生
物による汚染・感染が懸念されるか又は確認された対象
物に適用する際に、その適用前、適用後及び／又は適用
と同時にその対象物に当該化合物を適用することを意味
する。いずれの時期の適用によっても所期の効果が得ら
れるけれども、より望ましくは、当該抗生物質の適用前
又は適用と同時に適用される。ここでいう適用とは、当
該抗生物質及び／又は当該化合物を、必要に応じて適宜
の他の成分、例えば、溶解剤、希釈剤、緩衝剤、賦形
剤、安定剤などから選ばれる１種又は２種以上との組成
物としての形態で、対象物に投与、接種、塗布、添加、
噴霧、含浸などすることを意味する。この発明による抗
菌作用の増強方法を実施し得る分野としては、例えば、
医療分野、畜産分野、水産分野、食品分野、化粧品分
野、衛生用品分野、日用品分野、建材分野、情報伝達機
器分野などが挙げられ、この発明による方法は、これら
の分野における上記で述べた微生物による汚染・感染の
予防、処置及び／又は治療に奏効する。当該抗生物質及
び当該化合物を併用する際の用量・割合は、上記で述べ
た、抗菌作用の増強効果の確認方法により求められる、
対象微生物に対して有効な両者の濃度と、適用の対象物
の種類を勘案して選択される。通常は、当該化合物及び
当該抗生物質がそれぞれ単独では抗菌作用を発揮し得な
い用量であっても、両者を併用することにより所期の抗
菌作用が得られる。使用する当該化合物ならびに当該抗
生物質の種類や実施の分野にもよるけれども、例えば、
上記のような微生物による感染症に罹患した患者に適用
する医療分野においては、患者の症状に応じて、成人患
者１人に対して、当該抗生物質を、固形物重量換算で、
１日当たり通常１ｍｇ以上、望ましくは１０ｍｇ以上、
より望ましくは１００ｍｇ以上の用量を１回又は２回以
上に分けて、連日または隔日の頻度で、患部に応じて選
択される経口、経皮、皮内、皮下、筋肉内、静脈内など
のいずれかの経路で適用し、その際に、当該化合物を、
当該抗生物質の１回当たりの適用量に対して固形物重量
比で等量以上、望ましくは２倍量以上、より望ましくは
５倍量以上に相当する量を、当該抗生物質の適用経路に
準じて適用して併用すればよい。また、ヒトを含む生体
以外の、例えば、医療関連機器等の諸物品に適用する場
合には、該物品の使用前、使用中及び／又は使用後に、
通常０．０１ｍｇ／ｍｌ以上、望ましくは０．１ｍｇ／
ｍｌ以上、より望ましくは１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度の溶
液に調製した当該抗生物質を該物品に噴霧、塗布、含浸
するなどして適用し、その際に、当該抗生物質の濃度に
対して通常等濃度以上、望ましくは２倍以上、より望ま
しくは５倍以上の濃度の溶液に調製した当該化合物を該
物品に同様に適用して併用すればよい。

【００１８】この発明は、上記で述べた当該化合物と当
該抗生物質とを含有せしめてなる抗菌剤を提供するもの
でもある。この発明の抗菌剤は、当該化合物及び当該抗
生物質がそれぞれ単独では達成し得ない、増強された抗
菌作用を発揮するので、上記で述べた、この発明による
方法を実施し得る諸分野において有利に用いることがで
きる。この発明の抗菌剤は、それぞれの使用分野におい
て増強された抗菌作用が発揮されるものであればよく、
特定の組成や形態に限定されるものではない。使用分野
にもよるが、この発明の抗菌剤は、通常、液状、懸濁
状、ペースト状又は固形状に調製され、当該抗生物質を
０．００１乃至２０％（ｗ／ｗ）、望ましくは、０．０
１乃至１０％（ｗ／ｗ）含有するとともに、当該化合物
を０．００１乃至８０％（ｗ／ｗ）、望ましくは、０．
０１乃至５０％（ｗ／ｗ）含有する。

【００１９】この発明の抗菌剤は、実質的に当該化合物
及び当該抗生物質のみからなる組成のものはもとより、
これら以外の、個々の使用分野で許容される、例えば、
担体、賦形剤、溶解剤、希釈剤、緩衝剤、安定剤、静菌
剤、着香剤、着色剤などとの組成物としての形態をも包
含する。担体ないしは賦形剤としては、澱粉、デキスト
リン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、酸化マグネ
シウム、ステアリン酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウ
ム、水酸化アルミニウム、重炭酸ナトリウム、グリセリ
ンなどが挙げられる。安定剤としては、より具体的に
は、血清アルブミンやゼラチンなどの蛋白質、グルコー
ス、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロー
ス、ソルビトール、マルチトール、マンニトール、ラク
チトールなどの糖質が挙げられる。静菌剤としては、エ
タノール、イソプロピルアルコールなどのアルコール類
や、酢酸、乳酸、安息香酸などの有機酸類が挙げられ
る。この発明の抗菌剤は、以上のような成分を配合して
なる組成物を、使用分野に応じて、注射剤、液剤、散
剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、舌下剤、点眼剤、点鼻
剤、坐剤、軟膏、ローション、スプレー、天花粉などの
形態に適宜成形して得ることができる。

【００２０】以下、実験に基づいて本発明をより詳しく
説明する。

【００２１】

【実験１】〈テリマグランジンＩ骨格を有する化合物の
併用による抗菌作用の増強〉

【００２２】

【実験１−１】〈テリマグランジンＩの精製〉バラの花
弁乾燥物約２００ｇに約４ｌの７０％アセトン／水混液
を加えて磨砕して抽出し、濾過して不溶物を除き、溶液
部をエバポレーターで濃縮した。この濃縮物に約４００
ｍｌのジエチルエーテルを加え分液ロートで抽出し水層
を回収した。この水層に約１．５ｌの酢酸エチルを加え
てさらに抽出し、酢酸エチル層を回収し、この層を減圧
濃縮したところ、酢酸エチル抽出物が固形分として１
０．２１ｇ得られた。この酢酸エチル抽出物を適量の蒸
留水に溶解した後、『ＤＩＡＩＯＮＨＰ２０ゲル』
（三菱化学株式会社製造）を充填したガラスカラム（内
径４．８ｃｍ、長さ５０ｃｍ）に負荷してゲルに吸着さ
せた後、下記表１に示す、２０％から１００％まで段階
的にメタノール濃度を高めたメタノール／水混液を順次
カラムに通液し、カラムからのそれぞれの溶出物を分画
採取した。採取したそれぞれの画分を常法により減圧濃
縮した後、β−ラクタム系抗生物質であるオキサシリン
（シグマ社販売）の抗菌作用に与えるそれぞれの画分の
併用の影響を以下のように調べた。先ず、試験株とし
て、岡山大学付属病院で単離されたＭＲＳＡの４株（Ｏ
Ｍ４８１株、ＯＭ５０５株、ＯＭ５８４株、ＯＭ６２３
株）それぞれを３２℃で好気的にミュラー・ヒントン培
地（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ培地、以下「ＭＨ培
地」と略記する。）（和光純薬販売）で増殖させた。試
験培地として、最終固形分濃度５０μｇ／ｍｌの上記の
いずれかの画分と、１，０２４μｇ／ｍｌ以下の順次段
階希釈したいずれかの濃度のオキサシリンとを含むＭＨ
培地を調製した。また、別の試験培地として、上記のい
ずれの画分も含まず、同様に段階希釈したオキサシリン
のみを含むＭＨ培地も調製した。これらの試験培地に、
先に準備した試験株のいずれかを細胞密度１０⁶乃至１
０⁷個／ｍｌとなるように加え、３２℃で好気的に２４
時間保持した。それぞれの試験培地を生理食塩水で適宜
希釈した後、ニュートリエント寒天培地（和光純薬販
売）上に塗布し、３２℃で２４時間保持した。寒天培地
上に形成したコロニーを肉眼で計測し、オキサシリンの
最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）を求めた。結果を表１に示
す。

【００２３】

【表１】

【００２４】表１に示すとおり、４０％メタノール／水
混液による溶出画分を併用したときオキサシリンは最も
低濃度でＭＲＳＡの発育を阻止した。このことから、こ
の画分がオキサシリンのＭＲＳＡに対する抗菌作用を増
強する物質を主として含有すると考えられた。

【００２５】上記の４０％メタノール／水混液による溶
出画分の一部（固形分として９９７ｍｇ）を、『Ｔｏｙ
ｏｐｅａｒｌＨＷ４０ゲル』（東ソー株式会社販
売）を充填したガラスカラム（内径２．２ｃｍ、長さ５
２ｃｍ）を用いるゲル濾過カラムクロマトグラフィーに
供して分画した。各画分を、オキサシリンの抗菌作用に
与えるそれぞれの併用の影響について上記と同様にして
試験し、オキサシリンのＭＩＣを顕著に低下させた画分
を合一し、凍結乾燥して、精製された成分を固形分重量
として３６４ｍｇ得た。得られた精製成分を、上記と同
様にして試験した。結果を表２に示す。

【００２６】

【表２】

【００２７】表２に示すとおり、バラの花弁抽出物から
上記の方法で精製された成分の併用によりオキサシリン
によるＭＲＳＡに対するＭＩＣは著しく低下した。より
詳細には、この精製成分は最終濃度５０μｇ／ｍｌでオ
キサシリンと併用すると、ＭＩＣを１／５００程度ある
いはそれ以下に低下させた。このことから、この精製成
分が抗菌作用の増強能を有していると判断された。

【００２８】常法にしたがって、重水素化アセトン中
で、周波数５００ＭＨｚで、上記で得た精製成分の¹Ｈ
−核磁気共鳴スペクトル（以下、「¹Ｈ−ＮＭＲ」と略
記する。）を調べたところ、図１に示すスペクトルが得
られた。この結果観察された化学シフトならびに水素原
子の帰属を表３に示す。

【００２９】

【表３】

【００３０】上記の結果に基づいて、本実験により得た
精製成分をテリマグランジンＩ（ｔｅｌｌｉｍａｇｒａ
ｎｄｉｎＩ）、別名、ｃｙｃｌｉｃ４，６−（４，
４’，５，５’，６，６’−ｈｅｘａｈｙｄｒｏｘｙ
［１，１'−ｂｉｐｈｅｎｙｌ］−２，２'ｄｉｃａｒｂ
ｏｘｙｌａｔｅ）２，３−ｂｉｓ（３，４，５−ｔｒｉ
ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏａｔｅ），（Ｓ）−Ｄ−Ｇｌ
ｕｃｏｓｅと同定した。本化合物の構造は化１に示して
いる。通常の高速液体クロマトグラフィーにより調べた
ところ、本実験で精製したテリマグランジンＩの純度は
約９０％であった。

【００３１】

【実験１−２】〈テリマグランジンＩの併用によるオキ
サシリンの抗菌作用の増強〉オキサシリンの抗菌作用を
増強するテリマグランジンＩによる効果を確認するため
以下の実験を行った。テリマグランジンＩは、実験１−
１の方法で精製して調製した。試験株として、ＭＲＳＡ
の単離株ＯＭ５８４株を３２℃で好気的にＭＨ培地で増
殖させた。試験培地として、ＭＨ培地、２μｇ／ｍｌの
オキサシリンを含むＭＨ培地、５０μｇ／ｍｌのテリマ
グランジンＩを含むＭＨ培地、２μｇ／ｍｌのオキサシ
リンと５０μｇ／ｍｌのテリマグランジンＩとを含むＭ
Ｈ培地を調製した。これらの試験培地に、先に準備した
試験株を細胞密度約１×１０⁷個／ｍｌとなるように加
え、３２℃で好気的に２０時間保持した。それぞれの試
験培地を生理食塩水で適宜希釈し、ニュートリエント寒
天培地（和光純薬販売）に塗布し、３２℃で２４時間保
持した。寒天培地上に形成されたコロニーを肉眼で計測
し、計測値より、試験培地中で２０時間保持した時点に
おける試験株の生菌数を求めた。結果を図２に示す。な
お、本図において、白抜き丸（○）はＭＨ培地における
ＭＲＳＡの生菌数の経時変化を、黒塗り丸（●）はオキ
サシリン（２μｇ／ｍｌ）のみを含むＭＨ培地における
ＭＲＳＡの生菌数の経時変化を、白抜き三角（△）はテ
リマグランジンI（５０μｇ／ｍｌ）のみを含むＭＨ培
地におけるＭＲＳＡの生菌数の経時変化を、黒塗り三角
（▲）はオキサシリン（２μｇ／ｍｌ）とテリマグラン
ジンＩ（５０μｇ／ｍｌ）との両者を含むＭＨ培地にお
けるＭＲＳＡの生菌数の経時変化をそれぞれ示してい
る。また、本図における縦軸は、コロニーの計測数に基
づく生菌数（コロニー・フォーミング・ユニット、図３
においては「ｃｆｕ」と表示した。）の対数値（底１
０）を示している。

【００３２】図２に示すとおり、ＭＨ培地、２μｇ／ｍ
ｌのオキサシリンのみを含むＭＨ培地、及び、５０μｇ
／ｍｌのテリマグランジンＩのみを含むＭＨ培地では、
いずれも培養２０時間後、試験株は１００倍以上の生菌
数にまで増殖したのに対して、２μｇ／ｍｌのオキサシ
リンと５０μｇ／ｍｌのテリマグランジンＩとを含むＭ
Ｈ培地中では、試験株は増殖せず死滅してゆき、２０時
間後で約１／１００の生菌数となった。これらの結果
は、オキサシリンとテリマグランジンＩは併用により相
乗的に増強された抗菌作用を発揮し、テリマグランジン
Ｉには抗生物質の抗菌作用を顕著に増強する作用がある
ことを意味している。したがって、それぞれ単独ではＭ
ＲＳＡの増殖を阻止できない程度の濃度のオキサシリン
とテリマグランジンＩであっても、これらを併用する
と、ＭＲＳＡの増殖を顕著に阻止し、さらに、死滅させ
ることができる。

【００３３】

【実験１−３】〈抗菌作用の増強に有効なテリマグラン
ジンＩの濃度〉抗生物質オキサシリンの抗菌作用の増強
に奏効するテリマグランジンＩの有効な濃度を検討する
ために、種々の濃度のテリマグランジンＩ存在下でのオ
キサシリンの抗菌作用を実験１−１の方法に準じて調べ
た。結果を表４に示す。

【００３４】

【表４】

【００３５】表４に示すとおり、いずれの試験株におい
ても、併用するテリマグランジンＩの濃度が２５μｇ／
ｍｌ以上の場合は、オキサシリン単独の系と比較して、
ＭＩＣが顕著に低下し、ＭＲＳＡに対する抗菌作用が増
強されることが判明した。これらの結果は、抗生物質オ
キサシリンと併用する場合、ＭＲＳＡの抗菌作用を発揮
するのに有効なテリマグランジンＩの濃度は、最終濃度
として約２５μｇ／ｍｌ以上であり、好ましくは３０μ
ｇ／ｍｌ以上、より好ましくは４０μｇ／ｍｌ以上であ
り、テリマグランジンＩの濃度が５０μｇ／ｍｌ以上で
は特に好ましいことが判明した。これらの結果は、この
ような濃度となるようにテリマグランジンＩを併用する
と、ＭＲＳＡに対する抗生物質の使用濃度あるいは使用
量を低減させることができることを意味している。

【００３６】

【実験１−４】〈テリマグランジンＩの併用による種々
の抗生物質の抗菌作用の増強〉本発明のテリマグランジ
ンＩによる各種の抗生物質の抗菌作用の増強効果を実験
１−１の方法に準じて調べた。抗生物質として、β−ラ
クタム系抗生物質である、オキサシリン、ベンジルペニ
シリン（米国、シグマ社販売）、アンピシリン（和光純
薬販売）、セフメタゾール（米国、シグマ社販売）、イ
ミペネム（萬有製薬販売）を用いた。試験株として、Ｍ
ＲＳＡの単離株であるＯＭ４８１株、ＯＭ５０５株、Ｏ
Ｍ５８４株、ＯＭ６２３株と、メチシリン感受性の黄色
ブドウ球菌１株（ＡＴＣＣ２１０２７）を用いた。結
果を表５に示す。なお、本表中の「単独」とは抗生物質
を単独で適用した場合を、「併用」とは最終濃度４０μ
ｇ／ｍｌのテリマグランジンＩと抗生物質とを併用して
適用した場合をそれぞれ意味する。

【００３７】

【表５】

【００３８】表５に示すとおり、いずれの抗生物質にお
いても、抗生物質を単独で適用した場合と比較すると、
抗生物質とテリマグランジンＩとの併用によって抗生物
質のＭＩＣは顕著に低下した。このことから、テリマグ
ランジンＩには、広くβ−ラクタム系の抗生物質の抗菌
作用を増強する能力があることが判明した。なお、表５
における、オキサシリン及びベンジルペニシリンを用い
た実験結果に示されるとおり、テリマグランジンＩは、
ＭＲＳＡに対する場合ほど顕著ではないものの、ＭＲＳ
Ａ以外の微生物に対する抗生物質の抗菌作用をも増強す
ることも判明した。また、データは割愛するけれども、
同様の実験により、テリマグランジンＩは、テトラサイ
クリンのＭＲＳＡに対する抗菌作用をも顕著に増強する
ことが確認された。

【００３９】

【実験２】〈コリラジン骨格を有する化合物の併用によ
る抗菌作用の増強〉４００ｍｌのウワウルシ葉抽出液
『日本薬局方ウワウルシ流エキス』（司生堂製薬株式
会社販売）をエバポレーターで濃縮・乾固して、約８．
１ｇの固形物を得た。この固形物を適量の蒸留水に溶解
させた後、『ＴｏｙｏｐｅａｒｌＨＷ４０Ｃゲル』
（東ソー株式会社販売）を充填したガラスカラム（内径
２．２ｃｍ、長さ５２ｃｍ）に負荷した後、水、２０％
メタノール／水混液、６０％メタノール／水混液、メタ
ノール、７０％アセトン／水混液を順次カラムに通液
し、カラムからのそれぞれの溶出物を分画採取した。採
取したそれぞれの画分を常法により減圧濃縮した後、そ
の一部を用いて、実験１−１に準じて、β−ラクタム系
抗生物質であるオキサシリンの抗菌作用に与えるそれぞ
れの画分の併用の影響を調べた。その結果、６０％メタ
ノール／水混液による溶出画分を併用したときオキサシ
リンのＭＲＳＡに対するＭＩＣは顕著に低下した。

【００４０】上記の６０％メタノール／水混液による溶
出画分を、常法にしたがって、『ＭＣＩＣＨＰ２０Ｐ
ゲル』（三菱化学株式会社製）による逆相カラムクロマ
トグラフィーに続いて調製用高速液体クロマトグラフィ
ーに供して分画し、実験１−１に準じて、β−ラクタム
系抗生物質であるオキサシリンの抗菌作用に与えるそれ
ぞれの画分の併用の影響を調べた。これらの画分のう
ち、オキサシリンのＭＲＳＡに対するＭＩＣをとりわけ
顕著に低下させた画分を採取し、凍結乾燥して、精製さ
れた成分を固形分重量として３６４ｍｇ得た。上記の方
法に準じて、この精製成分を最終濃度８μｇ／ｍｌ及び
１６μｇ／ｍｌで併用したときの、オキサシリンのＭＲ
ＳＡに対するＭＩＣを調べた。結果を表６に示す。

【００４１】

【表６】

【００４２】表６に示すとおり、ウワウルシの葉抽出物
から上記の方法で精製された成分の併用によりオキサシ
リンのＭＲＳＡに対するＭＩＣは著しく低下した。より
詳細には、この精製成分は最終濃度１６μｇ／ｍｌでオ
キサシリンと併用すると、オキサシリンのＭＲＳＡに対
するＭＩＣを１／５０程度あるいはそれ以下に低下させ
ることが判明した。なお、上記の方法に準じて、本実験
による精製成分の単独でのＭＲＳＡの単離株４株に対す
るＭＩＣを調べたところ、いずれの株に対しても１２８
μｇ／ｍｌ程度であった。以上の結果は、オキサシリン
の抗菌作用は上記の精製成分と併用したとき相乗的に増
強され、本実験による精製成分に抗生物質の抗菌作用の
顕著な増強作用があることを意味している。

【００４３】実験１−１に準じて、重水素化アセトン中
で、周波数５００ＭＨｚで、上記で得た精製成分の¹Ｈ
−ＮＭＲを調べたところ、図３に示すスペクトルが得ら
れた。この結果観察された化学シフトならびに水素原子
の帰属を表７に示す。

【００４４】

【表７】

【００４５】上記の結果に基づいて、本実験により得た
精製成分をコリラジン（ｃｏｒｉｌａｇｉｎ）、別名、
ｃｙｃｌｉｃ３，６−（４，４’，５，５’，６，
６’−ｈｅｘａｈｙｄｒｏｘｙ［１，１'−ｂｉｐｈｅ
ｎｙｌ］−２，２'ｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）１−
（３，４，５−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏａｔ
ｅ），β−Ｄ−Ｇｌｕｃｏｓｅと同定した。本化合物の
構造は化２に示している。通常の高速液体クロマトグラ
フィーにより調べたところ、本実験で精製したコリラジ
ンの純度は約９８％であった。

【００４６】なお、データは割愛するけれども、上記と
同様の実験により、本実験で精製・同定されたコリラジ
ンは、テトラサイクリンのＭＲＳＡに対する抗菌作用を
も顕著に増強することが確認された。

【００４７】

【実験３】〈急性毒性試験〉常法にしたがって、８週齢
のマウスに実験１及び実験２の方法で精製したテリマグ
ランジンＩ及びコリラジンのいずれかを、経皮、経口又
は腹腔内の経路で投与し急性毒性を調べた。その結果、
いずれの投与経路においても、調べた最大の投与量であ
る１００ｍｇ／ｋｇマウス体重においても死亡例は見ら
れなかった。この結果は、この発明で用いる化合物のヒ
トを含む生体への適用が安全であることを裏付けてい
る。

【００４８】以下、実施例を示してこの発明を説明する
が、この発明はこれらの実施例によって何ら制限される
ものではない。

【００４９】

【実施例１】〈錠剤〉下記の処方にしたがって、
（１）、（４）及び（５）の成分と（２）の成分の一部
を均一に混合し、圧縮成形した後、粉砕し、（３）の成
分及び（２）の成分の残量を加えて混合し、打錠機にて
圧縮成形して一錠２００ｍｇの錠剤を得た。（１）結晶トレハロース７４．５ｇ（２）ステアリン酸マグネシウム０．５ｇ（３）カルボキシメチルセルロースカルシウム５ｇ（４）アンピシリン５ｇ（５）実験１の方法で得たテリマグランジンＩ１５ｇ計１００ｇ

【００５０】本品は、ＭＲＳＡをはじめとする諸種の微
生物による口腔内における感染症を治療・予防するため
の舌下錠として、また、ＭＲＳＡをはじめとする諸種の
微生物による消化器系における感染症を治療・予防する
ための内服用錠剤などとして有利に利用できる。

【００５１】

【実施例２】〈錠剤〉下記の処方にしたがって、
（１）、（４）及び（５）の成分と（２）の成分の一部
を均一に混合し、圧縮成形した後、粉砕し、（３）の成
分及び（２）の成分の残量を加えて混合し、打錠機にて
圧縮成形して一錠２００ｍｇの錠剤を得た。（１）結晶トレハロース７４．５ｇ（２）ステアリン酸マグネシウム０．５ｇ（３）カルボキシメチルセルロースカルシウム５ｇ（４）オキサシリン１０ｇ（５）実験２の方法で得たコリラジン１０ｇ計１００ｇ

【００５２】本品は、ＭＲＳＡをはじめとする諸種の微
生物による口腔内における感染症を治療・予防するため
の舌下錠として、また、ＭＲＳＡをはじめとする諸種の
微生物による消化器系における感染症を治療・予防する
ための内服用錠剤などとして有利に利用できる。

【００５３】

【実施例３】〈軟膏〉下記の処方にしたがって、
（１）、（２）、（５）及び（６）の成分と（３）の成
分の一部を均一に混合し、圧縮成形した後、粉砕し、
（４）の成分及び（３）の成分の残量を加えて混合し、
適度の延び、付着性を示す軟膏を得た。（１）結晶マルトース５０ｇ（２）プルラン２ｇ（３）蒸留水２０ｇ（４）エタノール５ｇ（５）セフメタゾールナトリウム１ｇ（６）実験１の方法で得たテリマグランジンＩ３ｇ計８１ｇ

【００５４】本品は、ＭＲＳＡをはじめとする諸種の微
生物に対する抗菌作用のみならず、マルトースによる細
胞へのエネルギー補給作用も発揮することから、治癒期
間が短縮され、創面をきれいに治癒することのできる軟
膏として有用である。また、本品は、切り傷、火傷、口
内炎など外傷治療の促進に利用することができる。更
に、本品をソフトカプセルなどに充填、成形すれば、Ｍ
ＲＳＡをはじめとする微生物による直腸内、膣内などに
おける感染症の治療・予防のための坐薬としても有利に
利用できる。

【００５５】

【実施例４】〈軟膏〉下記の処方にしたがって、
（１）、（２）、（５）及び（６）の成分と（３）の成
分の一部を均一に混合し、圧縮成形した後、粉砕し、
（４）の成分及び（３）の成分の残量を加えて混合し、
適度の延び、付着性を示す軟膏を得た。（１）結晶マルトース５０ｇ（２）プルラン２ｇ（３）蒸留水２０ｇ（４）エタノール５ｇ（５）イミペネム１ｇ（６）実験２の方法で得たコリラジン１ｇ計７９ｇ

【００５６】本品は、ＭＲＳＡをはじめとする諸種の微
生物に対する抗菌作用のみならず、マルトースによる細
胞へのエネルギー補給作用も発揮することから、治癒期
間が短縮され、創面をきれいに治癒することのできる軟
膏として有用である。また、本品は、切り傷、火傷、口
内炎など外傷治療の促進に利用することができる。更
に、本品をソフトカプセルなどに充填、成形すれば、Ｍ
ＲＳＡをはじめとする微生物による直腸内、膣内などに
おける感染症の治療・予防のための坐薬としても有利に
利用できる。

【００５７】

【実施例５】〈抗菌スプレー〉イソプロパノール６８
重量部に、精製水２６重量部、実験１の方法で得たテ
リマグランジンＩ０．９重量部、実験２の方法で得た
コリラジン０．９重量部、オキサシリン０．２重量
部、安息香酸４重量部をそれぞれ加え、常法により分散
させて原液を得た。その後、常法にしたがって、１００
ｍｌ容スプレー容器に、この原液４０ｍｌと噴射剤とし
ての液化炭酸ガス６０ｍｌをそれぞれ充填して抗菌スプ
レーを得た。

【００５８】幅広い抗菌スペクトルを有し、かつ、オキ
サシリンの抗菌作用が増強された本品は、ＭＲＳＡを含
む微生物による汚染・感染を予防、治療又は処置するた
めの抗菌スプレーとして、医療分野、畜産分野、水産分
野、食品分野、化粧品分野をはじめとする諸種の分野で
有利に利用できる。

【００５９】

【発明の効果】以上説明したように、この発明は、抗生
物質を適用する際にテリマグランジンＩ及び／又はコリ
ラジンを併用するとその抗生物質の抗菌作用が顕著に増
強されるという全く独自の知見に基づき完成されたもの
である。この発明による抗菌作用の増強方法は、微生物
の殺菌及び／又は静菌に著効を発揮し、とりわけ、現在
までのところ根本的な対処方法が確立されていなかった
ＭＲＳＡの殺菌及び／又は静菌に著効を発揮する。この
発明による方法ならびに抗菌剤は、ＭＲＳＡを含む微生
物による汚染・感染が懸念される諸種の分野において、
その予防、治療及び／又は処置に有効である。

【００６０】斯くも顕著な効果を奏するこの発明は、斯
界に貢献すること誠に多大な、意義のある発明であると
言える。

【図面の簡単な説明】

【図１】バラの花弁より抽出・精製したテリマグラン
ジンＩの¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）を示
す図である。

【図２】ＭＲＳＡに対するオキサシリンとテリマグラ
ンジンＩによる抗菌作用の発現における相乗効果を示す
図である。

【図３】ウワウルシの葉より抽出・精製したコリラジ
ンの¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）を示す図
である。

【符号の説明】

○ ＭＨ培地におけるＭＲＳＡの生菌数の経時変化 ● オキサシリン（２μｇ／ｍｌ）のみを含むＭＨ培
地におけるＭＲＳＡの生菌数の経時変化 △ テリマグランジンＩ（５０μｇ／ｍｌ）のみを含
むＭＨ培地におけるＭＲＳＡの生菌数の経時変化 ▲ オキサシリン（２μｇ／ｍｌ）とテリマグランジ
ンＩ（５０μｇ／ｍｌ）との両者を含むＭＨ培地におけ
るＭＲＳＡの生菌数の経時変化

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者波多野力岡山県岡山市佐山2104番地の６ (72)発明者伊東秀之岡山県岡山市原尾島２丁目５番５号両備グレースマンション南館602号室 (72)発明者土屋友房岡山県岡山市津島福居１丁目７番24−５号 (72)発明者吉田隆志岡山県岡山市津高1444番地の118 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 CC04 CC08 CC15 EA07 MA02 MA04 NA05 ZB35 ZC75

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】テリマグランジンＩ骨格を有する化合物
及び／又はコリラジン骨格を有する化合物を抗生物質と
併用することを特徴とする抗菌作用の増強方法。
【請求項２】テリマグランジンＩ骨格を有する化合物
がテリマグランジンＩであり、コリラジン骨格を有する
化合物がコリラジンである、請求項１に記載の抗菌作用
の増強方法。
【請求項３】抗生物質がβ−ラクタム系抗生物質から
選ばれる１種又は２種以上である請求項１又は２に記載
の抗菌作用の増強方法。
【請求項４】 β−ラクタム系抗生物質がオキサシリ
ン、ベンジルペニシリン、アンピシリン、セフメタゾー
ル及びイミペネムである請求項３に記載の抗菌作用の増
強方法。
【請求項５】抗菌作用がメチシリン耐性黄色ブドウ球
菌に対する静菌又は殺菌作用である請求項１、２、３又
は４に記載の抗菌作用の増強方法。
【請求項６】テリマグランジンＩ骨格を有する化合物
及び／又はコリラジン骨格を有する化合物と抗生物質と
を含有せしめてなる抗菌剤。
【請求項７】テリマグランジンＩ骨格を有する化合物
がテリマグランジンＩであり、コリラジン骨格を有する
化合物がコリラジンである、請求項６に記載の抗菌剤。
【請求項８】抗生物質がβ−ラクタム系抗生物質から
選ばれる１種又は２種以上である請求項６又は７に記載
の抗菌剤。
【請求項９】 β−ラクタム系抗生物質がオキサシリ
ン、ベンジルペニシリン、アンピシリン、セフメタゾー
ル及びイミペネムである請求項８に記載の抗菌剤。
【請求項１０】メチシリン耐性ブドウ球菌に対して抗
菌作用を示す請求項６，７，８又は９に記載の抗菌剤。