JPH1029947A - 生体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤 - Google Patents
生体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤Info
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- JPH1029947A JPH1029947A JP8184835A JP18483596A JPH1029947A JP H1029947 A JPH1029947 A JP H1029947A JP 8184835 A JP8184835 A JP 8184835A JP 18483596 A JP18483596 A JP 18483596A JP H1029947 A JPH1029947 A JP H1029947A
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- remedy
- vivotoxin
- bacterial infection
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 ＲＧタンニンを有効成分とするＡＤＰ−
リボシルトランスフェラーゼ阻害剤及び生体内毒素型細
菌性腸管感染症治療剤。 【効果】 毒素原性大腸菌、サルモネラ属、病原性ビブ
リオ菌（コレラ菌、腸炎ビブリオ）、赤痢菌、カンピロ
バクター属菌などに代表される生体内毒素型細菌による
腸管感染症の治療に有効である。
リボシルトランスフェラーゼ阻害剤及び生体内毒素型細
菌性腸管感染症治療剤。 【効果】 毒素原性大腸菌、サルモネラ属、病原性ビブ
リオ菌（コレラ菌、腸炎ビブリオ）、赤痢菌、カンピロ
バクター属菌などに代表される生体内毒素型細菌による
腸管感染症の治療に有効である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は毒素原性大腸菌、サ
ルモネラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ菌、腸炎ビブリ
オ）、赤痢菌、カンピロバクター属菌などに代表される
生体内毒素型細菌による腸管感染症の治療剤に関する。
ルモネラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ菌、腸炎ビブリ
オ）、赤痢菌、カンピロバクター属菌などに代表される
生体内毒素型細菌による腸管感染症の治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】１９９０年のＷＨＯの統計によれば、世
界中の全死亡者の１／３は感染症によって占められ、そ
の中でも急性呼吸器感染症、下痢症、結核の死亡者が最
も多く、この３疾患で年間死亡者数が１０００万人に達
していると言われている。近年の国際交通の増加と高速
化により、人々の各国間の往来は益々頻繁になってきて
いる。それに伴って問題になるのは、人の移動と共に広
がる重大感染疾患の拡散である。特に発生頻度の高い、
旅行者下痢症と呼ばれる腸管感染症には、毒素原性大腸
菌、サルモネラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ菌、腸炎
ビブリオ）、赤痢菌、カンピロバクター属菌などの菌に
よる感染性疾患が挙げられる。
界中の全死亡者の１／３は感染症によって占められ、そ
の中でも急性呼吸器感染症、下痢症、結核の死亡者が最
も多く、この３疾患で年間死亡者数が１０００万人に達
していると言われている。近年の国際交通の増加と高速
化により、人々の各国間の往来は益々頻繁になってきて
いる。それに伴って問題になるのは、人の移動と共に広
がる重大感染疾患の拡散である。特に発生頻度の高い、
旅行者下痢症と呼ばれる腸管感染症には、毒素原性大腸
菌、サルモネラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ菌、腸炎
ビブリオ）、赤痢菌、カンピロバクター属菌などの菌に
よる感染性疾患が挙げられる。
【０００３】上記細菌性疾患の１つであるコレラは、Vi
brio choleraeのＯ抗原の違いによって１８０種類にも
及ぶ血清型に分けられており、このうちのＯ１血清型に
よって起こる疾患であると考えられていた。Ｏ１以外の
血清型菌は、まとめてnon−Ｏ１と通称されており、典
型的なコレラの流行を起こした報告はなかった。ところ
が、１９９２年１０月インド南部のマドラスにおいて、
Vibrio cholerae non−Ｏ１によるコレラの大流行が発
生し、この流行は瞬く間にベンガル湾沿いにカルカッタ
へも波及した。同年１２月−翌年１月にかけて、隣国の
バングラデシュにおいても、同種のnon−Ｏ１コレラ菌
によるコレラの大流行が起こった。当時Vibrio cholera
eの血清型は１３８種類報告されていたが、これらの流
行株は同一の血清型に属するものの、１３８種類のどれ
にも属さないことが明らかとなり、Ｏ１３９と分類され
た。またベンガル湾沿いに流行が拡大したことから、Be
ngalという通称名が与えられた。
brio choleraeのＯ抗原の違いによって１８０種類にも
及ぶ血清型に分けられており、このうちのＯ１血清型に
よって起こる疾患であると考えられていた。Ｏ１以外の
血清型菌は、まとめてnon−Ｏ１と通称されており、典
型的なコレラの流行を起こした報告はなかった。ところ
が、１９９２年１０月インド南部のマドラスにおいて、
Vibrio cholerae non−Ｏ１によるコレラの大流行が発
生し、この流行は瞬く間にベンガル湾沿いにカルカッタ
へも波及した。同年１２月−翌年１月にかけて、隣国の
バングラデシュにおいても、同種のnon−Ｏ１コレラ菌
によるコレラの大流行が起こった。当時Vibrio cholera
eの血清型は１３８種類報告されていたが、これらの流
行株は同一の血清型に属するものの、１３８種類のどれ
にも属さないことが明らかとなり、Ｏ１３９と分類され
た。またベンガル湾沿いに流行が拡大したことから、Be
ngalという通称名が与えられた。
【０００４】Vibrio cholerae Ｏ１３９ Bengal（Ｏ１
３９ベンガル型コレラ菌）によるコレラ流行は、わずか
半年余りでインド全土に広がり、カルカッタの市立伝染
病院の入院患者からは、一時期Vibrio cholerae Ｏ１が
まったく分離できなくなった。遺伝子解析などの成績か
ら、Ｏ１３９型菌はＯ１エルトール菌から由来したもの
であることはわかったものの、Ｏ１３９血清型に特異的
な抗原の合成を担っている遺伝子がどこに由来している
のかはまだわかっていない（Mebio,13(7), 19-23(199
6)）。
３９ベンガル型コレラ菌）によるコレラ流行は、わずか
半年余りでインド全土に広がり、カルカッタの市立伝染
病院の入院患者からは、一時期Vibrio cholerae Ｏ１が
まったく分離できなくなった。遺伝子解析などの成績か
ら、Ｏ１３９型菌はＯ１エルトール菌から由来したもの
であることはわかったものの、Ｏ１３９血清型に特異的
な抗原の合成を担っている遺伝子がどこに由来している
のかはまだわかっていない（Mebio,13(7), 19-23(199
6)）。
【０００５】コレラは、コレラ菌の感染によって生じる
激しい水様性の下痢を主体とする非常に死亡率の高い疾
患である。この水様性下痢の発生機構は次のように考え
られている。
激しい水様性の下痢を主体とする非常に死亡率の高い疾
患である。この水様性下痢の発生機構は次のように考え
られている。
【０００６】（１）経口摂取されたコレラ菌が小腸粘膜
に付着・定着する。 （２）ＣＴ（コレラトキシン）を産生する。 （３）ＣＴが腸管上皮細胞のアデニレートサイクラーゼ
を活性化する。 （４）ｃＡＭＰを上昇させる。 （５）ｃＡＭＰ依存性のＣｌ−チャネル（ＣＦＴＲ）を
介してコレラの主症状である水様性下痢を引き起こす。
に付着・定着する。 （２）ＣＴ（コレラトキシン）を産生する。 （３）ＣＴが腸管上皮細胞のアデニレートサイクラーゼ
を活性化する。 （４）ｃＡＭＰを上昇させる。 （５）ｃＡＭＰ依存性のＣｌ−チャネル（ＣＦＴＲ）を
介してコレラの主症状である水様性下痢を引き起こす。
【０００７】上記（３）のステップは、より詳細には、
コレラトキシンがＧ蛋白質をＡＤＰリボリル化し、その
下流にある情報伝達を阻害することにより、アデニレー
トサイクラーゼを活性化するものといわれている（病態
生理，14(3),181-186(1995),飯田哲也，余明順，本田武
司）。
コレラトキシンがＧ蛋白質をＡＤＰリボリル化し、その
下流にある情報伝達を阻害することにより、アデニレー
トサイクラーゼを活性化するものといわれている（病態
生理，14(3),181-186(1995),飯田哲也，余明順，本田武
司）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】このように、コレラ菌
に代表される腸管感染症原因菌が産生する毒素の活性を
阻害し、無毒化することができれば、これらの感染症の
根本的治療は可能になると考えられ、その出現が望まれ
ている。従って、本発明の目的は腸管感染症原因菌が産
生する毒素による生体内反応を阻害し、当該感染症を治
療するための医薬を提供することにある。
に代表される腸管感染症原因菌が産生する毒素の活性を
阻害し、無毒化することができれば、これらの感染症の
根本的治療は可能になると考えられ、その出現が望まれ
ている。従って、本発明の目的は腸管感染症原因菌が産
生する毒素による生体内反応を阻害し、当該感染症を治
療するための医薬を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記実情に
鑑み鋭意研究を重ねた結果、大黄、桂皮、黄連、麻黄又
はこれらの抽出物がコレラトキシンの活性を阻害・抑制
することを見出し、先に特許出願した（ＷＯ９４／０３
１９３）。その後、より安全で有効性が高く、かつ医薬
としての使用性を容易ならしめるために、上記生薬中の
有効成分を精製分離することを試みた。その結果、大黄
抽出物中のＲＧタンニンに極めて強いＡＤＰ−リボシル
トランスフェラーゼ阻害作用及びコレラトキシンに代表
される腸管感染症が産生する毒素による下痢治療作用を
見出し、またＲＧタンニンと抗生物質とを併用すれば更
に当該治療効果が向上することを見出し、本発明を完成
するに至った。
鑑み鋭意研究を重ねた結果、大黄、桂皮、黄連、麻黄又
はこれらの抽出物がコレラトキシンの活性を阻害・抑制
することを見出し、先に特許出願した（ＷＯ９４／０３
１９３）。その後、より安全で有効性が高く、かつ医薬
としての使用性を容易ならしめるために、上記生薬中の
有効成分を精製分離することを試みた。その結果、大黄
抽出物中のＲＧタンニンに極めて強いＡＤＰ−リボシル
トランスフェラーゼ阻害作用及びコレラトキシンに代表
される腸管感染症が産生する毒素による下痢治療作用を
見出し、またＲＧタンニンと抗生物質とを併用すれば更
に当該治療効果が向上することを見出し、本発明を完成
するに至った。
【００１０】すなわち、本発明はＲＧタンニンを有効成
分とするＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ阻害剤を
提供するものである。また、本発明は、ＲＧタンニンを
有効成分とする生体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤を
提供するものである。更に、本発明は、ＲＧタンニン及
び抗生物質を含有する生体内毒素型細菌性腸管感染症治
療剤を提供するものである。
分とするＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ阻害剤を
提供するものである。また、本発明は、ＲＧタンニンを
有効成分とする生体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤を
提供するものである。更に、本発明は、ＲＧタンニン及
び抗生物質を含有する生体内毒素型細菌性腸管感染症治
療剤を提供するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明に用いられるＲＧタンニン
は、自体公知の化合物であり、その薬理作用については
抗精神作用、抗攻撃的作用、鎮痛作用、抗メタンフェタ
ミン作用、抗ノルアドレナリン作用、抗ドーパミン作用
等（Jpn. J. Pharmcol., 46(Suppl.),173P(1988); Eur.
J. Pharmacol., 183(4), 1439-1440(1990)）が報告さ
れているが、ＡＤＰ−リボリルトランスフェラーゼ阻害
作用及び上記腸管感染症に対する作用については全く知
られていない。
は、自体公知の化合物であり、その薬理作用については
抗精神作用、抗攻撃的作用、鎮痛作用、抗メタンフェタ
ミン作用、抗ノルアドレナリン作用、抗ドーパミン作用
等（Jpn. J. Pharmcol., 46(Suppl.),173P(1988); Eur.
J. Pharmacol., 183(4), 1439-1440(1990)）が報告さ
れているが、ＡＤＰ−リボリルトランスフェラーゼ阻害
作用及び上記腸管感染症に対する作用については全く知
られていない。
【００１２】ＲＧタンニンは、例えば大黄の抽出物から
分離精製することができる。分離手段としては、大黄の
熱水抽出物をゲル濾過用カラム、イオン交換樹脂カラム
等に付すことにより行うのが好ましい。
分離精製することができる。分離手段としては、大黄の
熱水抽出物をゲル濾過用カラム、イオン交換樹脂カラム
等に付すことにより行うのが好ましい。
【００１３】より詳細な分離法は、次の通りである。す
なわち、大黄エキス粉末を水に溶解し、セファデックス
ＬＨ−２０カラムに注入し、水で洗浄後、５０％エタノ
ール、１００％エタノール、次いで１００％メタノー
ル、最後に、５０％アセトンで溶出を行う。ここで、水
で溶出されるのは多糖、センノシド、カテキン、ガリッ
クアシッドであり；５０％エタノールでは低分子タンニ
ン、アントラキノン、アントラキノングルコシドであ
る。１００％エタノールではリンドレイン；１００％メ
タノールでは、ＲＧタンニン；５０％アセトンでラタン
ニンが溶出される。この１００％メタノール抽出画分
（ＲＧタンニン画分）を集め、水に溶解後、これをＭＣ
Ｉ ＧＥＬ ＣＨＰ−２０Ｐカラムに負荷し、水／メタ
ノールの比率を１０：０から７：３の濃度勾配で溶出、
次いで７：３から４：６の濃度勾配で溶出後、水／メタ
ノールの比率を４：６から０：１００にまで濃度を上げ
て溶出する。最後の４：６から０：１００の溶出画分を
集め、精製ＲＧタンニンを得る。これを必要に応じて濃
縮、凍結乾燥して用いる。
なわち、大黄エキス粉末を水に溶解し、セファデックス
ＬＨ−２０カラムに注入し、水で洗浄後、５０％エタノ
ール、１００％エタノール、次いで１００％メタノー
ル、最後に、５０％アセトンで溶出を行う。ここで、水
で溶出されるのは多糖、センノシド、カテキン、ガリッ
クアシッドであり；５０％エタノールでは低分子タンニ
ン、アントラキノン、アントラキノングルコシドであ
る。１００％エタノールではリンドレイン；１００％メ
タノールでは、ＲＧタンニン；５０％アセトンでラタン
ニンが溶出される。この１００％メタノール抽出画分
（ＲＧタンニン画分）を集め、水に溶解後、これをＭＣ
Ｉ ＧＥＬ ＣＨＰ−２０Ｐカラムに負荷し、水／メタ
ノールの比率を１０：０から７：３の濃度勾配で溶出、
次いで７：３から４：６の濃度勾配で溶出後、水／メタ
ノールの比率を４：６から０：１００にまで濃度を上げ
て溶出する。最後の４：６から０：１００の溶出画分を
集め、精製ＲＧタンニンを得る。これを必要に応じて濃
縮、凍結乾燥して用いる。
【００１４】上記の大黄抽出物中の数多くの画分のう
ち、抗コレラトキシン作用は、ＲＧタンニンに特異的で
ある。
ち、抗コレラトキシン作用は、ＲＧタンニンに特異的で
ある。
【００１５】なお、ラットにＲＧタンニンを１日７．５
mg／kgと１５mg／kg投与したところ、血清中の尿素態窒
素、クレアチニン、メチルグアニジン等の変化は認めら
れなかったが、コハク酸グアニジンが有意に減少したと
報告されている（Nephrom, 58(2),155-160,1991)。
mg／kgと１５mg／kg投与したところ、血清中の尿素態窒
素、クレアチニン、メチルグアニジン等の変化は認めら
れなかったが、コハク酸グアニジンが有意に減少したと
報告されている（Nephrom, 58(2),155-160,1991)。
【００１６】ＲＧタンニンは、後記実施例に示すよう
に、優れたＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ阻害作
用及びコレラトキシンに代表される生体内毒素による下
痢抑制作用を有することから、細菌性腸管感染症治療剤
として有用である。
に、優れたＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ阻害作
用及びコレラトキシンに代表される生体内毒素による下
痢抑制作用を有することから、細菌性腸管感染症治療剤
として有用である。
【００１７】また、ＲＧタンニンに各種抗生物質を併用
することにより細菌性腸管感染症に対する治療効果は更
に増強される。ここでＲＧタンニンと併用できる抗生物
質としては、例えばナフロキサシン、エノキサシン、オ
フロキサシン、シプロキサシン、ロメフロキサシン、ト
スフロキサシン、スパフロキサシン、レボフロキサシン
等のニューキノロン系抗生物質；例えばテトラサイクリ
ン、テトラサイクリンハイドロクロライド、テトラサイ
クリンメタホスファイト、オキシテトラサイクリンハイ
ドロクロライド等のテトラサイクリン系抗生物質が例示
できる。
することにより細菌性腸管感染症に対する治療効果は更
に増強される。ここでＲＧタンニンと併用できる抗生物
質としては、例えばナフロキサシン、エノキサシン、オ
フロキサシン、シプロキサシン、ロメフロキサシン、ト
スフロキサシン、スパフロキサシン、レボフロキサシン
等のニューキノロン系抗生物質；例えばテトラサイクリ
ン、テトラサイクリンハイドロクロライド、テトラサイ
クリンメタホスファイト、オキシテトラサイクリンハイ
ドロクロライド等のテトラサイクリン系抗生物質が例示
できる。
【００１８】本発明の治療剤は、ＲＧタンニン単独又は
ＲＧタンニンと抗生物質との両者をそのまま、あるいは
これらを医薬として許容される担体と組合わせて各種の
投与形態に適した製剤とすることができる。投与形態と
しては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用
され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、懸濁
液、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤等の経
口剤；注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられる。
ＲＧタンニンと抗生物質との両者をそのまま、あるいは
これらを医薬として許容される担体と組合わせて各種の
投与形態に適した製剤とすることができる。投与形態と
しては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用
され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、懸濁
液、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤等の経
口剤；注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられる。
【００１９】医薬として許容される担体としては、例え
ばスクロース、デンプン、マンニット、ソルビット、ラ
クトース、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カ
ルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤；例えばセルロー
ス、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシ
メチルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチ
ン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、スクロー
ス、デンプン、デキストリン、マクロゴール等の結合
剤；例えばデンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒ
ドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウ
ム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤；例えばステアリン
酸マグネシウム、蔗糖脂肪酸エステル、水素添加植物
油、エアロシル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、ポ
リエチレングリコール等の滑沢剤；例えばクエン酸、メ
ントール、グリシン、オレンジ末等の矯味剤；例えば安
息香酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベ
ン、プロピルパラベン等の保存剤；例えばクエン酸クエ
ン酸ナトリウム、酢酸等の安定化剤；例えばメチルセル
ロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニ
ウム等の懸濁剤；例えばヒドロキシプロピルメチルセル
ロース等の分散剤；矯臭剤；着色剤；例えば水等の希釈
剤等の製剤化に慣用の有機又は無機の各種担体が挙げら
れる。
ばスクロース、デンプン、マンニット、ソルビット、ラ
クトース、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カ
ルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤；例えばセルロー
ス、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシ
メチルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチ
ン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、スクロー
ス、デンプン、デキストリン、マクロゴール等の結合
剤；例えばデンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒ
ドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウ
ム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤；例えばステアリン
酸マグネシウム、蔗糖脂肪酸エステル、水素添加植物
油、エアロシル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、ポ
リエチレングリコール等の滑沢剤；例えばクエン酸、メ
ントール、グリシン、オレンジ末等の矯味剤；例えば安
息香酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベ
ン、プロピルパラベン等の保存剤；例えばクエン酸クエ
ン酸ナトリウム、酢酸等の安定化剤；例えばメチルセル
ロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニ
ウム等の懸濁剤；例えばヒドロキシプロピルメチルセル
ロース等の分散剤；矯臭剤；着色剤；例えば水等の希釈
剤等の製剤化に慣用の有機又は無機の各種担体が挙げら
れる。
【００２０】本発明の治療薬の投与量は、症状の度合、
患者の全身状態、年齢、体重等に応じて十分な治療効果
を発揮し得る量であり、剤型等を考慮して適宜決定され
るものであるが、有効成分であるＲＧタンニンの量とし
ては、通常成人において１日当たり０．０１〜２００mg
／kg／日であり、好ましくは０．１〜２０mg／kg／日で
ある。また、配合剤としての抗生物質の投与量は通常用
いられている投与量を用いる。すなわち、ニューキノロ
ン系抗生物質の場合は５〜１０mg／kg／日であり、テト
ラサイクリン系の場合は２〜５mg／kg／日の割合になる
ように配合する。
患者の全身状態、年齢、体重等に応じて十分な治療効果
を発揮し得る量であり、剤型等を考慮して適宜決定され
るものであるが、有効成分であるＲＧタンニンの量とし
ては、通常成人において１日当たり０．０１〜２００mg
／kg／日であり、好ましくは０．１〜２０mg／kg／日で
ある。また、配合剤としての抗生物質の投与量は通常用
いられている投与量を用いる。すなわち、ニューキノロ
ン系抗生物質の場合は５〜１０mg／kg／日であり、テト
ラサイクリン系の場合は２〜５mg／kg／日の割合になる
ように配合する。
【００２１】
【実施例】以下、実施例を挙げて、本発明を更に詳細に
説明するが、本発明は下記実施例によって何ら限定され
るものではない。
説明するが、本発明は下記実施例によって何ら限定され
るものではない。
【００２２】参考例１ （１）大黄２４ｇに２４０ｇの精製水を加え、１００℃
で１時間加熱抽出した。得られた抽出液を濾過後、スプ
レードライして８．６ｇの乾燥エキス粉末を得た。 （２）大黄エキス粉末を水に溶解し、セファデックスＬ
Ｈ−２０カラムに注入し、水で洗浄後、５０％エタノー
ル、１００％エタノール、次いで１００％メタノール、
最後に、５０％アセトンで溶出を行った。１００％メタ
ノールで溶出される画分を集め、凍結乾燥後、再度水に
溶解した。 （３）この１００％メタノール抽出画分（ＲＧタンニン
画分）を集め、水に溶解後、これをＭＣｌ ＧＥＬ Ｃ
ＨＰ−２０Ｐラカムに負荷し、水／メタノールの比率を
１０：０から７：３の濃度勾配で溶出、次いで７：３か
ら４：６の濃度勾配で溶出後、水／メタノールの比率を
４：６から０：１００にまで濃度を上げて溶出した。最
後の４：６から０：１００の溶出画分を集め、精製ＲＧ
タンニンを得た。これを濃縮、凍結乾燥し、以下の実験
に供した。
で１時間加熱抽出した。得られた抽出液を濾過後、スプ
レードライして８．６ｇの乾燥エキス粉末を得た。 （２）大黄エキス粉末を水に溶解し、セファデックスＬ
Ｈ−２０カラムに注入し、水で洗浄後、５０％エタノー
ル、１００％エタノール、次いで１００％メタノール、
最後に、５０％アセトンで溶出を行った。１００％メタ
ノールで溶出される画分を集め、凍結乾燥後、再度水に
溶解した。 （３）この１００％メタノール抽出画分（ＲＧタンニン
画分）を集め、水に溶解後、これをＭＣｌ ＧＥＬ Ｃ
ＨＰ−２０Ｐラカムに負荷し、水／メタノールの比率を
１０：０から７：３の濃度勾配で溶出、次いで７：３か
ら４：６の濃度勾配で溶出後、水／メタノールの比率を
４：６から０：１００にまで濃度を上げて溶出した。最
後の４：６から０：１００の溶出画分を集め、精製ＲＧ
タンニンを得た。これを濃縮、凍結乾燥し、以下の実験
に供した。
【００２３】実施例１（ＡＤＰ−リポシルトランスフェ
ラーゼ阻害作用） （１）Ｇ蛋白質のＡＤＰ−リボシル化の測定：コレラト
キシン（ＣＴ）は細胞内のＧ蛋白質の１つであるＧｓα
をＡＤＰ−リボシル化することが、その主な作用である
ことが知られている。そこで、ＲＧタンニンがこのＧ蛋
白質のＡＤＰ−リボシル化を抑制するかどうかを大腸癌
由来のCaco−２細胞の膜分画を用いて検討した。
ラーゼ阻害作用） （１）Ｇ蛋白質のＡＤＰ−リボシル化の測定：コレラト
キシン（ＣＴ）は細胞内のＧ蛋白質の１つであるＧｓα
をＡＤＰ−リボシル化することが、その主な作用である
ことが知られている。そこで、ＲＧタンニンがこのＧ蛋
白質のＡＤＰ−リボシル化を抑制するかどうかを大腸癌
由来のCaco−２細胞の膜分画を用いて検討した。
【００２４】ＣＴによるＧ蛋白質のＡＤＰ−リボシル化
反応は、盛永らの報告した方法（Morinaga, N., Noda,
M. and Kato, I.,FEBS Letters, 271,211(1990)）で行
った。ヒト大腸癌由来のCaco−２細胞の膜分画を超遠心
分離により調製した。１μＭ〔α−32Ｐ〕ＮＡＤ（２μ
Ｃｉ）、１０mM チミジン，１mM ＥＤＴＡ，５mMジチ
オスレイトール（ＤＴＴ）及び５０mMのリン酸カリウム
緩衝液（pH７．５）の反応液に膜分画１００μｇとコレ
ラトキシンＡ（ＣＴＡ）２．５μｇ更にＲＧタンニンを
加えて３７℃、１時間反応させた。これをトリクロロ酢
酸で沈澱させた後、ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳
動を行った。ゲルの放射活性は、ＢＩＯ−イメージング
アナライザーで測定した。
反応は、盛永らの報告した方法（Morinaga, N., Noda,
M. and Kato, I.,FEBS Letters, 271,211(1990)）で行
った。ヒト大腸癌由来のCaco−２細胞の膜分画を超遠心
分離により調製した。１μＭ〔α−32Ｐ〕ＮＡＤ（２μ
Ｃｉ）、１０mM チミジン，１mM ＥＤＴＡ，５mMジチ
オスレイトール（ＤＴＴ）及び５０mMのリン酸カリウム
緩衝液（pH７．５）の反応液に膜分画１００μｇとコレ
ラトキシンＡ（ＣＴＡ）２．５μｇ更にＲＧタンニンを
加えて３７℃、１時間反応させた。これをトリクロロ酢
酸で沈澱させた後、ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳
動を行った。ゲルの放射活性は、ＢＩＯ−イメージング
アナライザーで測定した。
【００２５】この結果、膜分画にＣＴＡを加えると、Ｇ
ｓαのＡＤＰ−リボシル化が起こり、32Ｐの取り込みが
観察されるが、これにＲＧタンニンを加えると濃度依存
的に抑制された（図１）。更に、ＣＴＡを加えずＲＧタ
ンニンだけを加えた群をみると内在性のＡＤＰ−リボシ
ル化にはＲＧタンニンはほとんど影響を与えないことが
確認された。このことはＲＧタンニンのＣＴに対する特
異性を示している。
ｓαのＡＤＰ−リボシル化が起こり、32Ｐの取り込みが
観察されるが、これにＲＧタンニンを加えると濃度依存
的に抑制された（図１）。更に、ＣＴＡを加えずＲＧタ
ンニンだけを加えた群をみると内在性のＡＤＰ−リボシ
ル化にはＲＧタンニンはほとんど影響を与えないことが
確認された。このことはＲＧタンニンのＣＴに対する特
異性を示している。
【００２６】（２）アグマチンアッセイ法：ＣＴの基質
であるＮＡＤとアグマチン（Agmatine）との親和性につ
いてラインウィーバー・バーク（Lineweaver-Burk）の
プロットを用いて検討した。
であるＮＡＤとアグマチン（Agmatine）との親和性につ
いてラインウィーバー・バーク（Lineweaver-Burk）の
プロットを用いて検討した。
【００２７】アグマチンアッセイ法は野田等の報告した
方法（Noda, M. et al., Biochemistry,28,7636(198
9)）を用いて行った。５０mMのリン酸カリウム緩衝液
（pH７．５）、５mM ＭｇＣｌ2、１００μＭ ＧＴ
Ｐ、１００μＭ〔アデニン−14Ｃ〕ＮＡＤ（６０００cp
m）、２０mM ＤＴＴ、２０mM アグマチン及びオボア
ルブミン（０．１mg／ml）の反応液に１μｇのＣＴＡ及
び被検試料を混合し（合計量３００μｌ）、３０℃で３
時間作用させた。この反応液から５０μｌ採取し、０．
５cm×２cmのカラムに集めたダウエックス ＡＧ １−
Ｘ２（Bio Rad社製）に通して未反応の〔アデニン−14
Ｃ〕ＮＡＤを除き、形成される〔アデニン−14Ｃ〕ＡＤ
Ｐリボシル化アグマチンを測定した。この〔アデニン−
14Ｃ〕ＡＤＰリボシル化アグマチンの形成を指標に、被
検試料によるＣＴのＡＤＰ−リボシル化転移酵素活性の
阻害率を求めた。
方法（Noda, M. et al., Biochemistry,28,7636(198
9)）を用いて行った。５０mMのリン酸カリウム緩衝液
（pH７．５）、５mM ＭｇＣｌ2、１００μＭ ＧＴ
Ｐ、１００μＭ〔アデニン−14Ｃ〕ＮＡＤ（６０００cp
m）、２０mM ＤＴＴ、２０mM アグマチン及びオボア
ルブミン（０．１mg／ml）の反応液に１μｇのＣＴＡ及
び被検試料を混合し（合計量３００μｌ）、３０℃で３
時間作用させた。この反応液から５０μｌ採取し、０．
５cm×２cmのカラムに集めたダウエックス ＡＧ １−
Ｘ２（Bio Rad社製）に通して未反応の〔アデニン−14
Ｃ〕ＮＡＤを除き、形成される〔アデニン−14Ｃ〕ＡＤ
Ｐリボシル化アグマチンを測定した。この〔アデニン−
14Ｃ〕ＡＤＰリボシル化アグマチンの形成を指標に、被
検試料によるＣＴのＡＤＰ−リボシル化転移酵素活性の
阻害率を求めた。
【００２８】この結果、ＲＧタンニンはＮＡＤとＣＴの
親和性には影響を与えないが、アグマチンとの親和性を
著しく低下させていることが明らかとなった（図２）。
この事実からＲＧタンニンがＮＡＤの結合部位に何ら影
響を与えず、アグマチンあるいはＧｓαとの結合を抑制
していることが示された。更に、グラフが直線性を示す
ことから、ＲＧタンニンがＣＴの特定の部位を修飾する
ことが示された。
親和性には影響を与えないが、アグマチンとの親和性を
著しく低下させていることが明らかとなった（図２）。
この事実からＲＧタンニンがＮＡＤの結合部位に何ら影
響を与えず、アグマチンあるいはＧｓαとの結合を抑制
していることが示された。更に、グラフが直線性を示す
ことから、ＲＧタンニンがＣＴの特定の部位を修飾する
ことが示された。
【００２９】実施例２（マウス結紮腸管ループ法を用い
た抗ＣＴ活性） マウス結紮腸管ループ法は、Yamamotoらの方法（Yamamo
to,K.et al.,1979,Appl.En vironment.Microbiol.,37:1
81-186)に従って行った。
た抗ＣＴ活性） マウス結紮腸管ループ法は、Yamamotoらの方法（Yamamo
to,K.et al.,1979,Appl.En vironment.Microbiol.,37:1
81-186)に従って行った。
【００３０】この結果、図３に示すように１００ngのＣ
Ｔで起きた液体貯留は１μｇのＲＧタンニンによって完
全に抑制された。これに対し、大黄は５０μｇ以上で、
大黄の成分であるセンニダインＡは４０μｇ以上で、ま
たエピガロカテキンガレートは１００μｇ以上ではじめ
て完全に抑制した。このことから、ＲＧタンニンの抗Ｃ
Ｔ活性は大黄の５０倍であり、また大黄由来の他の成分
の５０〜１００倍以上であった。
Ｔで起きた液体貯留は１μｇのＲＧタンニンによって完
全に抑制された。これに対し、大黄は５０μｇ以上で、
大黄の成分であるセンニダインＡは４０μｇ以上で、ま
たエピガロカテキンガレートは１００μｇ以上ではじめ
て完全に抑制した。このことから、ＲＧタンニンの抗Ｃ
Ｔ活性は大黄の５０倍であり、また大黄由来の他の成分
の５０〜１００倍以上であった。
【００３１】実施例３（ウサギ結紮腸管ループ法を用い
た抗ＣＴ活性） ウサギ結紮腸管ループ法は、Gorbach S.L.等の報告した
方法（Gorbach, S. L., et al., J. Clin. Invest., 5
0,881(1971)で行った。体重２kgの雄のウサギ（日本白
色種）を用いて、４８時間絶食後、ウサギをチオペンタ
ールナトリウムにて麻酔する。開腹後、１０〜１２cmの
ループを作り、それぞれ２mlのＣＴ（２５０ng／２ml＝
１２５ng／ml）ＣＴと被検試料の混合液及びＰＢＳ
（−）を注入してから腹壁を縫合した。２４時間後、チ
オペンタールナトリウムにて麻酔死させ、再び開腹し、
ループを摘出した（２４時間放置している間は餌を与え
ず、水は自由摂取させた）。摘出したループの長さを測
り、中に貯留している液体をビーカーに入れ、重量を測
定した。
た抗ＣＴ活性） ウサギ結紮腸管ループ法は、Gorbach S.L.等の報告した
方法（Gorbach, S. L., et al., J. Clin. Invest., 5
0,881(1971)で行った。体重２kgの雄のウサギ（日本白
色種）を用いて、４８時間絶食後、ウサギをチオペンタ
ールナトリウムにて麻酔する。開腹後、１０〜１２cmの
ループを作り、それぞれ２mlのＣＴ（２５０ng／２ml＝
１２５ng／ml）ＣＴと被検試料の混合液及びＰＢＳ
（−）を注入してから腹壁を縫合した。２４時間後、チ
オペンタールナトリウムにて麻酔死させ、再び開腹し、
ループを摘出した（２４時間放置している間は餌を与え
ず、水は自由摂取させた）。摘出したループの長さを測
り、中に貯留している液体をビーカーに入れ、重量を測
定した。
【００３２】この結果、２５０ngのＣＴで起きた液体貯
留は３μｇのＲＧタンニンによって完全に抑制されるこ
とが明らかとなり（図４）、マウスのような小動物だけ
でなくウサギのような動物においてもＣＴの作用を抑制
することから、臨床における有効性が期待できる。
留は３μｇのＲＧタンニンによって完全に抑制されるこ
とが明らかとなり（図４）、マウスのような小動物だけ
でなくウサギのような動物においてもＣＴの作用を抑制
することから、臨床における有効性が期待できる。
【００３３】製剤例１ コーンスターチ ６３mg 結晶セルロース １０mg カルボキシメチルセルロースカルシウム ７mg 軽質無水ケイ酸 １０mg ステアリン酸マグネシウム １０mg ＲＧタンニン ２００mg 上記配合割合で均一に混合し、打錠機にて圧縮成型して
１錠３００mgの錠剤を調製する。
１錠３００mgの錠剤を調製する。
【００３４】製剤例２ 乳糖 ５０mg 結晶セルロース ４０mg ステアリン酸マグネシウム １０mg ＲＧタンニン ２００mg 上記の割合で均一に混合し、１カプセル当たり３００mg
のカプセル剤を調製した。
のカプセル剤を調製した。
【００３５】製剤例３ ＲＧタンニン １００mg ノルホキサシン １００mg デンプン ３００mg 乳糖 ２４０mg 結晶性セルロース ４００mg ポリビニルアルコール ６０mg
【００３６】上記配合剤１０重量部に対して蒸留水３０
重量部を加えて均一に混合した後、破砕造粒して乾燥
し、次いで篩別して直径１４１０−１７７μm の大きさ
の顆粒剤とした。
重量部を加えて均一に混合した後、破砕造粒して乾燥
し、次いで篩別して直径１４１０−１７７μm の大きさ
の顆粒剤とした。
【００３７】製剤例４ ＲＧタンニン １００mg テトラサイクリン ２００mg デンプン ２００mg 乳糖 ２４０mg 結晶性セルロース ４００mg ポリビニルアルコール ６０mg
【００３８】上記配合剤１０重量部に対して蒸留水３０
重量部を加えて均一に混合した後、破砕造粒して乾燥
し、次いで篩別して直径１４１０−１７７μm の大きさ
の顆粒剤とした。
重量部を加えて均一に混合した後、破砕造粒して乾燥
し、次いで篩別して直径１４１０−１７７μm の大きさ
の顆粒剤とした。
【００３９】
【発明の効果】ＲＧタンニンはＡＤＰ−リボシルトラン
スフェラーゼを阻害し、生体内毒素によって生じる下痢
症状の抑制効果が強いので、毒素原性大腸菌、サルモネ
ラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ菌、腸炎ビブリオ）、
赤痢菌、カンピロバクター属菌などに代表される生体内
毒素型細菌による腸管感染症の治療に有効である。
スフェラーゼを阻害し、生体内毒素によって生じる下痢
症状の抑制効果が強いので、毒素原性大腸菌、サルモネ
ラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ菌、腸炎ビブリオ）、
赤痢菌、カンピロバクター属菌などに代表される生体内
毒素型細菌による腸管感染症の治療に有効である。
【図１】Caco−２細胞の膜分画におけるコレラトキシン
（ＣＴ）によるＡＤＰ−リボシル化に対するＲＧタンニ
ンの作用を示す電気泳動の結果の写真である。
（ＣＴ）によるＡＤＰ−リボシル化に対するＲＧタンニ
ンの作用を示す電気泳動の結果の写真である。
【図２】コレラトキシンＡ（ＣＴＡ）サブユニットのＮ
ＡＤ−アグマチンＡＤＰリボシルトランスフェラーゼ活
性に対するＲＧタンニンの作用を示す図である。
ＡＤ−アグマチンＡＤＰリボシルトランスフェラーゼ活
性に対するＲＧタンニンの作用を示す図である。
【図３】マウス腸管におけるコレラトキシン（ＣＴ）に
よる体液貯留に対する大黄及びその成分の作用を示す図
である。
よる体液貯留に対する大黄及びその成分の作用を示す図
である。
【図４】ウサギ腸管におけるコレラトキシン（ＣＴ）に
よる体液貯留に対するＲＧタンニンの作用を示す生物の
形態（腸管）の写真である。
よる体液貯留に対するＲＧタンニンの作用を示す生物の
形態（腸管）の写真である。
Claims (5)
- 【請求項１】 ＲＧタンニンを有効成分とするＡＤＰ−
リボシルトランスフェラーゼ阻害剤。 - 【請求項２】 ＲＧタンニンを有効成分とする生体内毒
素型細菌性腸管感染症治療剤。 - 【請求項３】 ＲＧタンニン及び抗生物質を含有する生
体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤。 - 【請求項４】 抗生物質がニューキノロン系の抗生物質
である請求項３記載の生体内毒素型細菌性腸管感染症治
療剤。 - 【請求項５】 抗生物質がテトラサイクリン系の抗生物
質である請求項３記載の生体内毒素型細菌性腸管感染症
治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8184835A JPH1029947A (ja) | 1996-07-15 | 1996-07-15 | 生体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8184835A JPH1029947A (ja) | 1996-07-15 | 1996-07-15 | 生体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1029947A true JPH1029947A (ja) | 1998-02-03 |
Family
ID=16160148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8184835A Pending JPH1029947A (ja) | 1996-07-15 | 1996-07-15 | 生体内毒素型細菌性腸管感染症治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1029947A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000047204A1 (fr) * | 1999-02-15 | 2000-08-17 | The Nikka Whisky Distilling Co., Ltd. | Inhibiteurs de adp-ribosylation et remedes pour une infection enterique bacterienne endotoxique contenant de la proanthocyanidine comme ingredient actif |
| JP2001072596A (ja) * | 1999-09-03 | 2001-03-21 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 抗菌作用の増強方法 |
| CN111135182A (zh) * | 2018-12-19 | 2020-05-12 | 心远(广州)药物研究有限公司 | 一种抗菌产品及其制备方法和应用 |
-
1996
- 1996-07-15 JP JP8184835A patent/JPH1029947A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000047204A1 (fr) * | 1999-02-15 | 2000-08-17 | The Nikka Whisky Distilling Co., Ltd. | Inhibiteurs de adp-ribosylation et remedes pour une infection enterique bacterienne endotoxique contenant de la proanthocyanidine comme ingredient actif |
| JP2001072596A (ja) * | 1999-09-03 | 2001-03-21 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 抗菌作用の増強方法 |
| JP4542644B2 (ja) * | 1999-09-03 | 2010-09-15 | 株式会社林原生物化学研究所 | 抗菌作用の増強方法 |
| CN111135182A (zh) * | 2018-12-19 | 2020-05-12 | 心远(广州)药物研究有限公司 | 一种抗菌产品及其制备方法和应用 |
| CN111135182B (zh) * | 2018-12-19 | 2022-04-15 | 心远(广州)药物研究有限公司 | 一种抗菌产品及其制备方法和应用 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070220 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070619 |