JP2000511934A

JP2000511934A - 固相ペプチド合成用反応装置及び方法

Info

Publication number: JP2000511934A
Application number: JP10535043A
Authority: JP
Inventors: ステパニウク、ニコラス; トマジ、キース; ステイプルトン、マイケル・シー
Original assignee: マリンクロット・ケミカル・インコーポレイテッド
Priority date: 1997-02-11
Filing date: 1998-02-10
Publication date: 2000-09-12
Also published as: AU724694B2; IL126456A; HU226994B1; WO1998034633A1; CZ294838B6; US6028172A; DK0909176T3; NO984611D0; NO984611L; EP0909176A1; CA2250784C; HUP9903753A2; DE69808579T2; EP0909176A4; CZ317898A3; NZ332174A; CA2250784A1; ATE225680T1; KR100463630B1; AU6276398A

Abstract

(57)【要約】本発明は固相ペプチド合成用反応装置（１）及び前記反応装置を運転する方法を提供する。反応装置（１）は囲い（７）内で軸の周りに回転可能なバスケツト（１７）と、囲い（７）へ流体を供給し、囲い（７）からの流体を集収する受容／貯溜槽（５）とを備え、バスケツト（１７）はペプチド合成用の樹脂床が形成される穿孔した側壁（２３）を備え、反応器（７）と受容／貯溜槽（５）とは溶液が循環するループすなわち循環路を形成して、溶液の循環により反応器が溶液で溢汪されるのを防止してバスケツト（１７）が溶液中に没入しないでより少量の溶液の使用を可能とするから、より高い濃度のアミノ酸溶液を使用できる。本発明方法はバスケツト（１７）の穿孔した側壁（２３）上に一様の厚さの樹脂ケーク（Ｒ）を形成し、バスケツトを回転しながら樹脂ケークに溶液を噴霧し、溶液を樹脂ケークを通過させて貯溜槽（５）に排出させ、排出溶液を反応装置中に循環或いはリサイクルさせるか、反応装置から排出させる。次ぎの溶液を反応装置（１）に導入する前に、前の溶液を反応装置から排除して溶液へのペプチドの暴露時間を制御し易くする。

Description

【発明の詳細な説明】固相ペプチド合成用反応装置及び方法技術分野本発明は固相ペプチド合成、特に固相ペプチド合成反応装置及び現在得られる生産量及び収率より高い生産量及び高い収穫率で大規模にペプチドの固相合成を実施できる新規な固相反応装置を使用する方法に関する。背景技術本発明の装置及び方法の、オリゴヌクレオチド、オリゴデオキシヌクレオチド、オリゴリボヌクレオチド、オリゴ糖、蛋白質等のような、固体基体上での段階的合成を含む他の液体−固体反応への広範な適用は当業者に明らかであろう。固相ペプチド合成（SPPS）は1963年にメリフィールド(Merrifield)により開発された。この基本的操作は周知である。SPPS法は代表的には、ジビニルベンゼンで架橋した部分塩素化ポリスチレンのようなポリマーゲルを用いて出発する。保護されたアミノ酸のＣ−末端基を、例えばアミノ酸のベンジルエステルを用いて最初に部分塩素化ポリスチレン樹脂に結合させる。他の結合剤を使用できることは申すまでもない。ペプチドは保護されたアミノ酸を用いてそのＣ−末端から逐次的に合成される。アミノ酸のアミノ基及び全ての反応性側鎖官能基は望ましくない副反応を防止するために安定な閉塞基により保護しなければならない。閉塞基は、側鎖保護基の保護を妨害することなく、あるいはＣ−末端基と樹脂との間の結合を妨害することなくアミノ基の保護基が離脱されるように選択される。アミノ基は例えばｂｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル基）またはｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル基）により保護される。ペプチド合成は代表的には下記の操作により実施される：樹脂に結合したペプチド（ｂｏｃにより保護された）のＮ−末端基を例えばジクロロメタン（ＤＣＭ）中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）溶液中で脱閉塞される。次のアミノ酸を順次、樹脂に結合したペプチドにカツプリング剤例えばＤＣＭ／ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液中のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いてカツプリングする。活性化剤、例えば１−ヒドロキシベンゾトラゾールをカツプリング反応の反応速度及び選択率を改善しラセミ化を減少するために使用できる。反応しなかつたアミノ酸、反応剤及び副生物は洗浄及び濾過により樹脂から除去される。次に、洗浄及び濾過操作を繰り返し、ペプチドのＮ −末端基を脱閉塞し、他のペプチドをペプチド連鎖に加え、得られた系を次いで洗浄し濾過する。この操作を所望の全部のアミノ酸が所望の順序でペプチド連鎖に添加され終わるまで繰り返す。残つた閉塞基を次いでペプチドから除去し、ペプチドを樹脂から分裂してペプチドを捕集する。 SPPS法は樹脂を分散した振とうフラスコまたは撹拌フラスコ中で最初実施され、今でもなお、しばしば実施されている。樹脂を流体相に懸濁し混合するために、樹脂が吸収し或いは樹脂が保持する液体の数倍量の液体が系に必要である。すなわち、樹脂が１０ｍｌの液体を保持すると５０〜１００ｍｌの液体が樹脂を分散し懸濁するのに必要であろう。この増大した量の液体は、アミノ酸が高価であるためにコストを最小にするためには、希薄な溶液（代表的には溶液１リツトル当たりアミノ酸１５０ミリモル）を使用することになる。希薄溶液の場合には高濃度のアミノ酸を得ることは困難であるから、アミノ酸と成長するペプチド連鎖との間の迅速な化学反応を達成することは困難である。更に、樹脂をバツチ式希釈により（フラスコ中で）洗浄、濾過すると、限定された回数のバツチ式洗浄では樹脂から使用したＤＣＭ及びＴＦＡ全部を除去することは事実上不可能である。その結果、ペプチド連鎖とＤＣＭ／ＴＦＡとの接触時間を正確に制御することができなくなる。反応器の開発における多数の設計上の問題はペプチド合成に特有なものである。固相ペプチド合成に使用される樹脂は通常、架橋度が低いゲル樹脂である。これらの樹脂はある種の溶媒（例えばＤＣＭ）中では膨潤し、他の溶媒（例えばメタノール）中では収縮する。樹脂の体積はまたペプチド連鎖の長さが長くなるにつれて増大する傾向がある。更に、これらの樹脂はかなり柔らかい性質のものであり、従って物理的摩耗を受け易い。これらの特性に適応した反応器が所望される。ペプチド合成に使用したペプチド−樹脂及び溶媒及び反応剤間の暴露時間の長さも非常に重要である。樹脂に結合したペプチドの保護基離脱操作は最高の収率を得るために完全でなければならないが、生成したカルボカチオンは、望ましくない副反応が生起するのを回避するために、ペプチドと接触して残留していてはならない。不幸にして、樹脂の懸濁スラリーから溶液を排出するのに要する時間は濾過中に生成した樹脂層（樹脂床）の厚さが増すにつれて長くなる。その結果、樹脂に結合したペプチドがカルボカチオンに曝される時間は濾過床の厚さが増すと共に長くなる。その結果、ｋｇ規模の反応に要する濾過時間はベンチ規模の反応で遭遇する濾過時間より遥かに長くなるから、カルボカチオンとの反応によるペプチド損傷の危険性がバツチ量の増大と共に増大する。従って、大規模反応器は濾過時間を最短にするように設計しなければならない。この問題に対する幾つかの解決策が反応器の設計の仕方により、及び反応器の設計により許容される樹脂粒子の性質により選択できる。化学反応が生起するためには、樹脂粒子内の反応部位に反応剤種が存在しなければならない。カツプリング工程に含まれる反応は反応剤[ＤＣＣ及びカツプリング反応器のバルク液相（樹脂粒子周囲の液相）からの中間体]が樹脂の表面及び気孔を通つて内部反応部位まで浸透する速度により制限されるであろう。知られているように、樹脂、代表例としてポリスチレン樹脂は事実上多孔質球体に形成される。形成されるべきペプチド連鎖の最初のアミノ酸は樹脂母材全体に亙り内部反応部位に結合される。ペプチド連鎖は次いで反応剤種がこれらの部位に到達するから、これらの部位で成長し始める。バルク液体から樹脂内の反応部位への反応剤の物質移動速度は反応剤溶質の濃度勾配と溶媒を通る反応剤溶質の拡散係数との積に比例する［フィツクの法則（ Fick’s Law）］が、物質移動を抵抗に換算して考えるのが便宜である。不均質固−液法における物質移動抵抗は下記の２カ所で明らかに存在する：（１）樹脂粒子の表面における静止液体フイルムを横切る抵抗；及び（２）樹脂粒子の気孔内での抵抗。樹脂に対する流体速度が増大すると液体フイルムの抵抗は減少する。樹脂気孔内の物質移動抵抗を減少するためには樹脂粒子を好適には小さくし、ゲル状（すなわち５〜１００μ）にすることである。よりゲル状の樹脂を使用すると樹脂１ｇ当たり１ミリモル以上の活性部位（すなわちペプチド連鎖）の装荷を可能にし、且つ高収率及び高転化率で樹脂１ｇ当たり２〜４ミリモルのペプチド連鎖の装荷を達成できる。小さい樹脂粒子を使用すると、洗浄溶媒での効果的な母材交換がより容易になるから、樹脂の洗浄をより良く、より迅速に、より完全に容易に実施できることが期待される。更に、樹脂粒子は気孔を開放するために少量の架橋を有するのが好適である。しかし、若干の架橋は樹脂粒子に形状と強度を付与するのに必要である。０.２％〜１.０％の架橋度をもつ樹脂粒子で充分である。アミノ酸をジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）で活性化するペプチド合成方法においては、樹脂の芯部中への拡散抵抗は、カツプリング反応中に使用する溶媒であるDCM中５０％DMF溶液中に事実上不溶性のジシクロヘキシル尿素（DC U）が副生するために著しく増大する。不溶性DCUの殻体が樹脂上に形成される。このDCUの樹脂粒子上への析出は反応剤及び洗浄剤が樹脂粒子の表面から芯部に移動するのを妨害する。極端な場合には、バルク液相から遊離アミンへの拡散を不可能となし、カツプリングに利用されるｂｏｃ−アミノ酸だけがDCC添加前に樹脂内に最初に存在する物質であることが解るであろう。反応剤の樹脂内への拡散はペプチド連鎖の生成自体によつても妨害されることがある。多孔質粒子中の不均質反応は代表的には粒子の外側表面よりも内側へ放射状に成長することは一般に知られている。このことを固相合成に適用するのは合理的である。こうして、樹脂ビーズは恐らく反応したペプチドの成長する殻体と反応の生起しにくい未反応芯部とを含む。もしも遊離アミンと活性化された中間体との間の反応速度が樹脂の気孔を通る拡散速度に比して早いとすると、反応したペプチドの殻体と多分DCUとが粒子の表面から内側に放射状に成長して、樹脂粒子内の反応しにくい芯部表面上でも反応が生起するだろう。従って、反応剤は樹脂粒子の未だ反応しない芯部に到達するためにはペプチドとDCUとの益々厚い層を通つて拡散しなければならない。 DCUの沈析を解決する１つ解決案は反応系の化学反応を変えることである。DCU で塞がれた気孔を通る拡散抵抗は別の反応器中で対称酸無水物であるｏ-アシル尿素及びHOBt活性エステルを形成させ（すなわちアミノ酸を予備活性させ）、ペプチドの合成が行われる主反応器中に導入前に溶液からDCUを濾過することにより減少または除去することができる。同様な利益は、カツプリング反応中に不溶性生成物を形成しない別のカツプリング剤（例えばDIC）を使用すれば、実現できる。 DCUのような不溶性化合物の形成による閉塞を減少するのに加えて、気孔の拡散制限はより小さい粒子を使用することにより減少できる。物質移動抵抗を減少する結果として、同じ反応速度を得るためには反応剤の濃度がより低濃度であることが要求される。これは生成物１ｇ当たり必要なアミノ酸、ＨＯＢｔ及びＤＣＣの使用量が顕著に減少される。粒子内への拡散の数的解析を図３及び図４に示す。反応剤の濃度は粒子の表面で最高であり、粒子内の反応剤の濃度は時間の経過と共に反応剤が樹脂粒子中へ拡散し粒子内を流通するから上昇する。図３及び図４は時間（τ）上の濃度増大速度が樹脂粒子の表面におけるフイルムを通る物質移動係数（Ｈ）及び濃度を測定した粒子を通る相対距離ゼータ＝(ｒ／R)（Rは粒子の全体の径（粒子寸法）であり、rは粒子の中心から測定した点である）に依存することを示す。すなわち、粒子の表面ではｒ／R＝１で、粒子の中心ではｒ／R＝０である。図３における４つの曲線の各々は粒子の表面にフイルム抵抗がなかつた（H＝∞）時の所与の時間τにおける濃度曲線である。図４は図３と同様な２つの曲線を示すが、粒子表面フイルムを通る物質移動抵抗が増大（すなわちＨは減少する）ことを示す。図４の２つの曲線（H＝１及びH ＝３）を比較すると、粒子内の濃度は粒子表面フイルムの抵抗が低くなる（すなわちよりHが高くなる）とより速やかに上昇することがわかる。図３及び図４は、（粒子表面及び粒子気孔内の両方で）抵抗が顕著になると粒子内の濃度の上昇は緩やかになることを示す。このことは、粒子気孔内抵抗及び粒子外部表面フイルム抵抗の両者を減少させることが必要であり、そうすれば反応剤の粒子への及び粒子内を通る物質移動を増大させることができることを示している。樹脂に結合した遊離アミンへの反応剤の物質移動は液相中の反応剤の濃度を上昇させることにより、また気孔の長さを減少する（より小さい直径の樹脂粒子を使用して）ことにより増大させることができる。更に、樹脂表面液フイルムを通る物質移動抵抗は、球体の場合のフイルム抵抗係数は流体速度の関数であるから、樹脂粒子に対するバルク液体の速度を増すことにより減少できる。これらの拡散問題を同時に処理する反応器の設計は現在のところ入手できない。メリフィールドによる1963年における固相ペプチド合成（SPPS）の最初の開発以来、多数の革新がペプチド合成用反応器の設計に行われた。最も早い反応器は振とう式フラスコに基づくものであつたが、その後の反応器設計には撹拌槽反応器、遠心式反応器及び管状反応器が含まれる。これらの反応器のすべてが液相中に懸濁された、或いは液相で溢汪された樹脂粒子を用いて運転された。撹拌槽反応器（STR）はペプチド合成に一般に使用されているが、それらSTRにはある種の制限がある欠点がある。樹脂粒子は懸濁されているから撹拌槽反応器中の粒子に対する液体速度を増大させる機会は極度に制限される。これは懸濁粒子上を液体が移動することにより課せられた慣性力と粘性力とが液体と共に粒子をも引っ張るからである。しかし、粒子に対する流体の速度範囲は、樹脂粒子が固定されているが、液体は樹脂床を強制的に通過させられる充填床反応器では容易に増大できる。しかし、樹脂から液相を濾過することを要する撹拌槽反応器及び充填床反応器の両者の底部フリツト（焼結濾材）は濾過に要する差圧に耐えることができなければならない。反応器の寸法が大きくなるにつれて、フリツトは材料の故障を避けるために徐々に強化された材料で造らなければならない。他方、反応器の直径が一定のままなら、濾過フリツト上の樹脂層の高さはバツチ量が多くなるにつれて顕著に増大する。樹脂層の高さが増大すると液相の排出時間、濾過時間、及び反応材、反応性中間体及び溶媒への樹脂結合ペプチドの暴露時間が徐々に長くなる。これらの理由のために、濾過器を内蔵する撹拌槽反応器も充填床反応器も大規模（多重kg用）SPPS方法用の最も効率的なタイプの反応器を表すものではない。充填床反応器のような管状反応器は、反応過程における粒子寸法の変化が若干の設計上の障害を生じてきたが、依然として他の反応器に勝る利点がある。充填床反応器は洗浄操作を、充填床反応器入口と樹脂床との間の“死容積”を最小とするならば、STR中におけるように希釈操作としててはなく、置換操作として行うことを可能とする。管状反応器におけるレイノルズ数（Re）は樹脂粒子に対する液体の速度が高いと非常に大きくなる。しかし、高流速は反応器内に高圧力を創り出し、この高圧力は樹脂に有害な作用をもつ。しかし、レイノルズ数が上昇すると物質移動係数は増大するから、管状反応器は撹拌式懸濁槽反応器より物質移動に対し低い液フイルム抵抗をもつことができる。しかし、充填床の使用はそれ自体の問題をもつ。樹脂はDCMで洗浄した時に元の大きさの３倍に膨張し、メタノールで洗浄した時には元の大きさの１/３に収縮する。これは樹脂床の変化が樹脂床の全体積の９倍に達することになり、従って死体積の除去または最小化の達成は非常に困難となる。充填床は直径の大きさより遥かに高い高さをもつから著量の壁表面積をもち、このことが樹脂床の膨張及び収縮を妨げる。樹脂床が膨張すると、樹脂床は容器の壁と向かつて圧密化して樹脂粒子間の空洞空間を減少する。こうして、高圧力はすべての洗浄液を所要の時間内に樹脂床を通るように押し流すために必要である。この高圧力は樹脂粒子を損傷させて細かい粒子を造りだすこともあり、この細かい粒子は濾過器を閉塞して場合により濾過器フリツトを損傷または破壊することがある。高圧力を使用しないと、充填床を通る流れは遅くなり過ぎてペプチドが過度に長く反応し副反応を生ずることがある。ある種のアミノ酸またはペプチドカツプリング工程は反応時間に非常に敏感である。例えばアルギニンはペプチド連鎖にカツプリングしないで、それ自体で反応して環構造を形成する。従って暴露時間は非常に重要な因子である。樹脂により課せられる制限を克服した管状反応器を設計する幾つかの試みがなされた。先行技術によるこれらの試みは下記を含む：（１）樹脂の膨張に伴う問題を無視する試み：バールンダー（Verlunder）らは米国特許第4,192,798号明細書において反応器圧力降下が少なくとも１４ｋｇ／ｃｍ²（２００ｐｓｉ）、７００ｋｇ／ｃｍ²（１０，０００ｐｓｉ）まで、またはそれ以上の解決策を開示している。彼らは定量的収率を主張し、他の反応器で何時間も要した反応を分単位で完了したと主張している。このタイプの反応器の難点は樹脂の崩壊、出口フリツトの閉塞、スケールアツプに際して塔全体に亙り均一な軸方向流の維持、死体積による洗浄の非能率及び塔及び高圧ポンプのコストを含む。このタイプの反応器は本質的に工業的規模のHPLCである。（２）塔の軸方向膨張を許容する試み：バル（Ｂａｒｕ）ら、WO88/909010.6 ，ＳＵ4117080は反応器の一端を樹脂と共に浮動できる死体積ゼロの反応器を開発した。反応器の頂部ピストンに小さな錘を載せ、反応器の浮動ヘツドに一定の力を加えた。その結果、反応器を低圧力降下で運転して頂部ヘツドの周りから溶媒が溢れ出るのを回避し、出口フリツトの閉塞に非常に敏感にした。圧力降下を増大させる樹脂床または出口フリツト内で゛のDCUの蓄積は安全性と環境上の重要性をもつ。更に低圧力降下という制限は、低液体流速を必要とし、低レイノルズ数となり、液体の流れの分布が悪くなる可能性がある。低液体流速はまた反応剤及び洗浄剤への樹脂床のより長い暴露時間を生ずる。（３）剛質ポリマーにより支持されたゲルを使用する試み：アサートン（Athe rton）らJCS Chemical Communication p．1151[1981]はゲルがマクロ気孔内に含まれた剛質ポリマーを開発した。ゲルは膨潤もできるし収縮もできたが、剛質ポリマービード（粒子）の体積は一定に保たれた。その結果、高液体流速、低圧力降下及び一定樹脂体積が得られた。しかし、反応剤の拡散通路は支持体を通る反応剤のフイルム及び反応剤の支持体気孔内拡散が付加されるから、恐らく、これらの支持された樹脂型についての物質移動は低減する。その上、これらの型の樹脂は高価である。（４）死体積を許容する試み：ラプルユイ（Lapluye）及びポアツソン（Poiss on）、PCT公表公報WO92/115867号はフリツト付き端部を備えたピストン型反応器を開発した。この型の反応器では、溶媒と反応剤とを満たした大型シリンダー内を上下に往復する中空ピストン内に樹脂を置く。この型の反応器は本質上振とう式反応器または流動床反応器と同じで、ピストン反応器の混合運動は樹脂及び溶媒の密度の差を相殺すべきである。洗浄効率は小型流動床反応器中の、または攪拌槽反応器（STR）中の洗浄効率と同等かより良好であるように思われる。しかし、樹脂の嵩さに比して使用する溶媒の体積は代表的な管状反応器により必要とされる量（体積）より恐らくかなり多量である。レイノルズ数は恐らく極めて小さく、機械的構造をスケールアツプすることは困難であろう。その上、液体中を通るピストン運動により生ずる粘度消散作用により熱が発生するから、冷却用の付加的手段を必要とする。この点で、コスト、安全性、または効率において重大な制限をもたないのは管状反応器であるとは思われない。回転椀型デザインに基づく反応器も開発された。回転する椀型反応器または遠心式反応器は樹脂粒子に対する液体速度を増大することができる。ビエ（Birr）はドイツ特許第2,017,351号明細書において最初に多孔質なバスケツトに樹脂を充填し、次いでバスケツトを液体中に没入しながら中位の速度で回転させる“洗濯器”式反応器を開示している。遠心力がバスケツトの内壁上に樹脂粒子床を形成させ、形成された樹脂粒子床を通して中位程度の速度で流体の循環が起こる。椀型反応器は、樹脂床と同様に溢汪する（すなわち液体で満たされる）。液浴によりバスケツトに課せられる障害は駆動モータに高トルクを負わせることであり、また熱を発生することである。これらの理由のために、ビエ反応器の回転速度は比較的遅く、固体に対する液体の相対速度は制限されるであろう。回転速度上の制限のために頂部で薄く底部で厚い非均一樹脂層を生ずることはほとんど確実である。循環する液体は抵抗が最小の通路を進む傾向があるから、樹脂床の薄い部分を“短絡”して通るであろう。その結果、反応剤の豊富な液体と樹脂間の接触は反応器全体に亙り一定ではなくなる。その上、樹脂に対する液体の相対速度が低いことは樹脂粒子周囲の表面液フイルムを通る物質移動を低くする。最後に、回転するバスケツトを埋没するのに要する溶媒の体積量は仕込み樹脂量を浸漬するのに要する体積量に比して大量である。従って、このことがまた樹脂の全量に比して反応剤かなり大量の体積量を必要とすることになる。この大体積量の反応剤は低濃度の溶液を使用することになり、従ってより緩徐な反応速度とより長い反応時間とを生ずる。溢汪した“中空ローター”に基づく遠心式反応器の他の型はアンダーソン及びアンダーソン，米国特許第5,186,824号により開発された。アンダーソンらの反応器における液体流路は放射状ではなく軸方向であり、その幾何学的形状は液体流路の分野に関して不規則である。液体が導入される場所は最も後から添加した液体の密度に関連する液体密度に依存する。また、樹脂の膨張用の小さな余地が設けられている。膨張と収縮の結果として樹脂の液相への暴露は恐らく均一ではない。液体の完全で均一な接触とローターからの液体の完全な排出とを達成することは非常に困難であろう。本発明の開示本発明の一目的は現在得られるより高生産量及び高収率を生ずるSPPS法（固相ペプチド合成法）を実施する方法を提供するにある。本発明の他の目的はペプチド連鎖と種々の薬剤との接触時間をより正確に制御できる上記方法を提供するにある。本発明の他の目的は反応速度を増大できる上記方法を提供するにある。本発明の他の目的は使用するアミノ酸の量を増やすことなしに（そしてより少量のアミノ酸を使用して可能な限りより高いアミノ酸濃度を使用する）現在より高いアミノ酸濃度の使用を可能にする上記方法を提供するにある。本発明の他の目的は上記方法用の反応器を提供するにある。本発明の他の目的は固相を通る液体の物質移動を増進する上記方法用の反応器を提供するにある。本発明の他の目的は樹脂の膨張及び収縮を妨げることがなく、且つ樹脂の摩耗を起こさない上記方法用の反応器を提供するにある。本発明の他の目的は樹脂床の厚さが実質上一様であるから樹脂床を通る流体流が一様である上記方法用の反応器を提供するにある。本発明の他の目的は廃棄溶媒量を減少できる上記方法用の反応器を提供するにある。本発明の他の目的は遠心力により樹脂から溶媒を“絞り出す”能力をもち、それにより、また樹脂粒子の化学的収縮は成長しつつあるペプチドを凝集させ樹脂を損傷するから樹脂粒子のアルコールによる化学的収縮を排除する上記方法用の反応器を提供するにある。本発明の他の目的はペプチドの生成に有利である、種々の粒子寸法をもち種々の架橋性をもつ樹脂のより広範な選択を可能となす反応器を提供するにある。これらの目的及び他の目的は下記の発明の開示及び添付図面から当業者に明らかとなろう。本発明によれば、一般的に云つて、上記した目的を達成できる反応装置及び該反応装置を運転する方法が提供される。反応装置は囲いと該囲い内に設置された回転可能なバスケツトとを備えた反応器を含む。バスケツトは穿孔された多孔質な側壁または有孔性側壁を備え、この側壁上にペプチド合成操作中に樹脂ケークが形成される。バスケツト側壁の内面上には濾布または濾網が設置され、樹脂ケークは濾布に接して形成される。反応装置はまた反応器に導入する溶液を受取る溶液供給槽すなわち溶液受容／貯溜槽を備える。この溶液供給槽は入口及び出口を備え、溶液供給槽と反応器とは相互に連結して溶液が循環するループすなわち循環路を区画する。反応装置は反応器バスケツトが溶液中に没入しないように運転される。従って、反応器は決して溶液で溢れる、すなわち溢汪することはなく、溶液は全て樹脂ケークを通つて流れる。本反応装置は廃棄物集収器と、反応器と溶液供給槽とを相互連通する導管上の弁とを備える排除装置をも備える。弁は反応装置から第1溶液を排出させ、排出させた第1溶液を第2溶液が反応装置に導入される前に廃棄物集収器（廃棄または集収器）に向ける。排除装置は溶液供給槽（受容／貯溜槽）出口を反応器入口に連結する導管上に第1弁を備え、反応器出口を溶液供給槽（受容／貯溜槽）の入口に連結する導管上に第2弁を備える。第1弁は第1溶液の循環時間が完了したら第2溶液が溶液供給槽に導入される前に第1溶液を廃棄（集収器）に送るように操作される。第2弁は、第2溶液の循環開始時初期に樹脂床中に残留することがある第1溶液が溶液供給槽に入るのを防止するために循環する第2溶液を短時間廃棄に送る（この時点では第1溶液は第2溶液をも含む）ように操作される。好適には、反応装置はまた溶液を調製する（すなわち、アミノ酸溶液を予備活性化し、樹脂スラリーを調製する、等）調製槽をも備える。調製槽は反応器と溶液供給槽とに流体連通的に連結する。調製槽の中身溶液を溶液供給槽と反応器とに選択的に導入するように操作できる弁がある。この弁は調製槽から樹脂スラリーを直接反応器に送るように操作でき、またはアミノ酸溶液、洗浄液等を溶液供給槽に送るように操作できる。予備活性化されたアミノ酸が通される濾過手段が調製槽と溶液供給槽との間に設置される。濾過手段は活性化反応の不溶性副生物例えばDCUを濾過除去するために設置される。濾過手段バイパス導管も設置されて、洗浄液、閉塞基離脱剤等はこの濾過手段は通過しない。本発明反応装置を運転する方法は、（ａ）バスケツトを所望の回転速度で回転し、活性化樹脂のスラリーを反応器バスケツトに供給して活性化のケークをバスケツトの穿孔側壁上に実質上均一な厚さ（例えば、約２ｃｍ〜約５ｃｍの厚さ）のケークを蓄積させる。樹脂は好適には樹脂に結合した第1アミノ酸、或いは他の誘導体に変換した第1アミノ酸を含む。第1アミノ酸が樹脂に結合していない場合には第1アミノ酸はこの時点で樹脂に結合される。（ｂ）回転するバスケツトに保護基離脱剤溶液を供給して樹脂に結合したペプチドのＮ末端基の保護基を離脱させる。（ｃ）回転するバスケツトに洗浄液を供給してケークから保護基離脱溶液を洗浄除去し、そして（ｄ）ペプチド連鎖に添加すべき次のアミノ酸のアミノ酸溶液及びカツプリング剤溶液を回転するバスケツトに供給して次のアミノ酸をペプチド連鎖に付加する。上記工程（ｂ）〜（ｄ）をペプチド連鎖が完成するまで繰返す。溶液類（すなわち、保護基離脱溶液、洗浄溶液、アミノ酸溶液、及びカツプリング剤溶液）は回転するバスケツト中に、供給した前記溶液が囲い中でバスケツトの底板の上のところまで蓄積しないような速度で導入されるから、すべての溶液はバスケツトを囲む囲い内に蓄積されない。従って、バスケツトはペプチド合成の各段階中非溢汪状態にある。使用する樹脂は好適には１００μ以下の直径のポリスチレンビーズからできたもので、０.２％〜１.５％架橋度をもつものが好適である。この小ビーズ寸法とビーズ内の低％架橋度とはビーズ内の物質移動を容易にし、従って反応速度を可能な限り高めることができる。１００μより大きい樹脂ビーズもこの装置で使用できるが、その場合にはより大きい物質移動抵抗を導入することになる。バスケツトを非溢汪状態で運転できるためには、溶液の大部分を外部の受容／貯溜槽（溶液供給槽）に保持して、溶液を反応器内にポンプ輸送してケークを通過させ、次いで受容／貯溜槽に戻し、次いで、溶液を所定の時間反応器内樹脂床を貫流させ循環させる。この循環操作は必要とするのに充分な接触を与える。各段階間に（すなわち次の、或いは第2溶液の導入前に）前の、すなわち、第1 溶液を排出させて反応装置から除去して第1溶液が所望の時間より長くペプチドと接触するのを阻止する。この第1溶液排出工程は、第1溶液の循環を止めた後もバスケツトの回転を続行して排出されつつある遊離第1溶液の殆ど全部を遠心作用によりケークから強制的に排出させて受容／貯溜槽（溶液供給槽）に戻すことからなる。溶液排除工程は受容／貯溜槽（溶液供給槽）中の溶液を集収器すなわち廃棄槽に向けるように操作することからなる。第2サイクルの始発点では少量の第1溶液が樹脂中に残ることがあるから、第2 溶液を反応装置に導入する時には第2溶液の循環始発点で第2弁を短時間開いて第 2溶浦を廃棄(集収器)に向ける。ケークから強制除去されなかつた第1溶液は第2 溶液により強制排除されるか、洗浄除去される。排除操作としてだ第2弁を廃棄に開くことにより第1溶液の残留分を反応装置から除去できる。アミノ酸は予備活性化するのが好適であり、活性化工程からの不溶性副生物はアミノ酸溶液が反応系に導入される前にアミノ酸溶液から濾過除去される。図面の簡単な記載図1は本発明で使用される装置組体の概略図、図２は本発明で使用する反応器の拡大概略図、図３は物質移動に対する液体フイルム抵抗がゼロの場合の４個の時間点における粒子の中心からの距離（“ゼータ”で示す）の関数としてのｂｏｃ−アミノ酸の濃度をを示す図、図４は物質移動に対する高液体フイルム抵抗及び低液体フイルム抵抗の場合の 4個の時間点における樹脂ビーズの中心からの距離の関数として２つののｂｏｃ −アミノ酸の濃度を示す図、および図５は樹脂床を横切る圧力降下に対する樹脂を通る流れの計算値を示す曲線を示す図である。本発明を実施する最良の態様本発明の反応装置組体を説明する概略図を図１に示す。反応装置１はアミノ酸を溶解するための攪拌器を備えた調製槽３を備える。機械的攪拌器を使用するのが好適であるが、他の種類の攪拌器も使用できる。ペプチド合成中に使用する溶媒及び反応剤を順次にこの調製槽に装入し、混合し、適宜、加熱または冷却用の内部コイル（図示）または外部ジャケツトを使用して適宜所望の操作温度に調整する。調製槽3はまたアミノ酸を予備活性化するのに使用することもできる。導管４上のポンプＰ１は調製槽３から反応剤を３叉弁Ｖ１に送り、樹脂スラリー、アミノ酸溶液、または溶媒を導管６を経て受容／貯溜槽（溶液供給槽）５に輸送するか、導管８を経て反応器７に輸送する。予備活性化アミノ酸を受容／貯溜槽５に輸送する場合には、該予備活性化アミノ酸を該予備活性化アミノ酸溶液からＤＣＵのような不溶性副生物を除去するのに充分な目の細かさをもつ濾過器Ｆ１に通し、濾過した子備活性化アミノ酸を次いで導管９を経て受容／貯溜槽（溶液供給槽）５に輸送する。上述したように、ＤＣＵはペクチド連鎖に付加される次のアミノ酸を活性化した際の副生物であり、樹脂床並びに噴霧ノズルやポンプのような反応装置中の設備を詰らせることがある。従って、予備活性化アミノ酸溶液を反応器７に導入する前に濾過器Ｆ１に通してＤＣＵを除くことが好ましい。導管１１は受容／貯溜槽５の出口から反応器７の入口に通ずる。導管１１は濾過器Ｆ２、計量ポンプＰ２及び熱交換器Ｈ１を備えるのが好ましい。2個の弁Ｖ２及びＶ３がポンプＰ２の両側に備えられて反応剤を“廃棄”または“回収（集収）”に導くことができる。弁Ｖ２は濾過器Ｆ２の上流側に配置されるのが好ましい。最後に、反応器７の出口は導管１３を経て受容／貯溜槽５の入口に接続し、４番目の弁Ｖ４が導管１３に配置されて、反応剤を反応器７から“廃棄”または“ 回収（集収）”に導くことができる。図から解るように、受容／貯溜槽（溶液供給槽）５と反応器７とは導管１１及び導管１３により区画される或いは完成されるループの一部をなす。従って、受容／貯溜槽５は反応器７からの排出物を受容するのに使用でき、洗浄溶媒またはアミノ酸溶液の仕込み備蓄量が反応器に通されて排出された後にリサイクルされて貯溜される。以下に説明するように、このことが反応器に実質上液体を溜めて置かなくてもよくするものである。反応器７を図２により詳細に示す。反応器７は囲い１５を備え、この囲い１５中に回転可能なバスケツト１７が回転するために取付けられる。囲い１５は大気から閉鎖されて反応剤及び洗浄剤の蒸発を防止できることが好ましい。空間１８がバスケツト１７と囲い１５との間に区画される。バスケツト１７は軸１９上に取付けられる。軸１９は適当な大きさのモータＭに回転可能に接続されてバスケツト１７を回転させ、バスケツトの表面で少なくとも１０重力（Ｇ）の加速度を生じさせる。加速度は１５Ｇ以上であるのが好ましく、バスケツトの表面における加速度は５０Ｇ或いはそれ以上であるのが更に好ましい。バスケツトの周縁で５０Ｇの加速度を達成するためには半径１５ｃｍのバスケツトで５４６ｒｐｍの速度で回転しなければならない。達成できる加速度はローターの機械的強度及び樹脂の圧縮性により制限される。バスケツト１７は密実の底部２１、穿孔した円筒側壁２３、円筒側壁２３の頂部から内側に延びるリツプ２２を備える。円筒側壁２３の穿孔は２〜５ｍｍであるのが好適である。濾布または濾網内張り２５がバスケツト円筒側壁２３の内面上に備えられ、これら濾布または濾網内張りは樹脂Ｒが円筒側壁２３を通過するのを阻止できる細かさをもつ。濾網内張り２５は樹脂粒子の直径の約１／１０（０.１）〜１／３（０.３３）の網目寸法をもつのが好ましく、それにより樹脂ビーズはバスケツト中に保持されるが液体はバスケツトを通過させることができる。スラリー導入管２４は固相のスラリーを導入するため導管８を経て３叉弁Ｖ１に接続する。このスラリー導入管２４はその下端部にスラリーをバスケツト１７の円筒側壁２３に導くためのＬ字ベンド２６を備えるのが好ましい。バスケツトの回転により生ずる遠心力はバスケツト壁上に平滑な樹脂ケークを形成するのに一般に充分である。しかし、スラリー導入管２４は円筒側壁２３上に均一な厚さのケークを得るための機械的スラリー展延手段を備えることができ、この機械的展延手段はバスケツト円筒側壁２３から例えば軸に垂直に所望の距離まで延びる羽根を備え、この羽根はバスケツト中で放射状に動かすことができる。導管１１に接続した反応剤供給管２７はバスケツト１７中に延び、アミノ酸溶液または洗浄溶媒を回転する固体樹脂床上に一様に噴霧する多数の噴霧ノズル２９を備える。戻し導管１３によりバスケツト１７を通つた反応剤または洗浄剤は迅速に反応器７から排出されて受容／貯溜槽５に戻ることができる。このようにして、反応器７はバスケツトと接触しまたはバスケツトを埋没させる溜つた液体を含むことはない。すなわち、反応器中の流体の液位は囲い１５中でバスケツト１７の底部２１には昇らない。反応器の殻（囲い）が溢汪しないから、モータをより激しく動作させることを要する抵抗を創出する流体は存在しない。調製槽３へ所望の液量を自動的に装入するために、受容／貯溜槽５の仕込み備蓄量を監視し及び反応器７への液体の流速を監視するために、計測操作される。更に、全操作をより完全に自動化するために適宜バツチシケンサーＳを付設できる。合成反応を実時間で監視できるように、閉鎖基離脱操作や洗浄操作の進行を追跡する計測器（ＩＲ検出器のような）も備えることができる。更に、ＩＲ検出器は自動化操作の一体化部分として使用でき、未反応遊離アミンの検査はＩＲ検出器が反応の終了を示したら直ぐに実施できる。非金属性湿潤表面または高耐食性湿潤表面を使用する設計が若干の生成物には必要であることが判明した。このような場合には反応装置１の構成要素は非反応性材料で造るか、内張りすることができる。このような材料には例えば高ニツケル合金例えばヘイネスステライト社（Haynes Stellite Co.）から入手できるハリテトラフルオロエチレンフイルム、３１６ステンレス鋼がある。合成反応は下記のように行われる：樹脂及びスラリー溶媒を調製槽３に装入し、攪拌器を作動させる。樹脂スラリーに使用する樹脂ビーズ（粒子）は小さなビーズで、好適には直径が１００μ以下であり、これら樹脂ビーズは０.２％〜１. ５％架橋されている。例えば、樹脂はｂｏｃ−Pro−RCM[シグマケミカル（Sigma Chemical）から入手できるような樹脂に結合したｂｏｃ−プロリンをもつメリフィールド（Merrifield）樹脂]からなることができ、溶媒はジクロロメタン（D CM）であることができる。温度を調製槽３上の温度調整装置（TIC）により３０ ℃のような所定の温度に調整するのがよい。樹脂スラリーをかき混ぜながらバスケツト１７の回転を開始し、少なくとも１０Ｇ、好適には１５Ｇ以上、更に好適には５０Ｇまたはそれ以上の加速度を造出すように所望の回転速度（1分間当たり１０００回転）に調整する。樹脂スラリーは導管８及びスラリー導入管２４を経て反応器に直接装入する。バスケツト１７にはスラリーをバスケツト中に導入した時も液体は残らない。樹脂上に作用する遠心力によりバスケツトの内面上に比較的一様な樹脂ケークＲ（図２参照）が形成される。ケークＲは２〜６ｃｍの最初の厚さに蓄積されることが好ましい。他の厚さを使用できることは申すまでもない。残存樹脂を反応器７中に洗い流すために付加的なスラリー溶媒または濾液循環液を調製槽３に導入することができる。計量ポンプＰ２を付勢してスラリー溶媒を反応器中に通して循環して反応器中に一様なケークができるのを確保する。ケークＲが所望の厚さに達したら、３叉弁Ｖ３を廃棄に切替えポンプＰ２を受容／貯溜槽５が空になるまで運転して残りのスラリー溶媒を廃棄に輸送する。上述した羽根または刃は樹脂スラリーをバスケツト円筒側壁上に展延するのを容易にして確実に一様な厚さの樹脂層（床）を生成させる。樹脂スラリーはバスケツトの円筒側壁２３に塗布された時に、スラリーが所望の厚さより厚くなると羽根が余計のスラリーを平らに引き延ばす。しかし、そのような機械的展延装置は一般には平滑な樹脂床を造るのに必要ではない。樹脂に結合したペプチドのＮ末端基の保護基離脱溶液は調製槽３で造られる。保護基離脱溶液の例には純粋なトリフルオロ酢酸（TFA）、またはTFAとDCM（ジクロロメタン）との溶液が含まれる。保護基離脱溶液は導管６を通つて受容／貯溜槽５に輸送される。ポンプＰ２を付勢し保護基離脱溶液を受容／貯溜槽のループにより循環する。保護基離脱溶液は受容／貯溜槽５から導管１１及び反応剤供給管２７を通つて反応器中にポンプ輸送され、噴霧ノズル２９により樹脂スラリー床（樹脂床）に向けて噴射され、樹脂床を通過してバスケツト１７と囲い１５との間の空間１８に達する。保護基離脱溶液は反応器７を出て導管１３を経て受容／貯溜槽５に戻る。導管中及び樹脂床中に残ることがある残留スラリー溶媒は反応器７を出る保護基離脱溶液（centrate）の最初の部分を導管１３上の弁Ｖ４により廃棄または集収に導くことにより除去できる。これによりスラリー溶媒が受容／貯溜槽５中で保護基離脱溶液と混合するのを防止できる。スラリー溶媒の排除後、反応器７を出る残留保護基離脱溶液を受容／貯溜槽５に輸送し、更に反応器７に循環する。循環を所定時間（好適には約3分間）続ける。保護基離脱後に保護基離脱溶液を、スラリー溶媒について先に述べたように、弁Ｖ３により廃棄または集収に導く。所望により、樹脂に結合したペプチドのＮ末端基の保護基の完全な離脱を保証するために第２の保護基離脱処理を行うことができる。樹脂は、これを（例えばDCMで）洗浄して保護基離脱溶液を除去することができる。洗浄は必要量の溶媒を調製槽３に装入し、溶媒を受容／貯溜槽５にポンプＰ１で輸送し、ポンプＰ２を付勢することにより行うことができる。洗浄溶液は反応器７及び受容／貯溜槽５を所定の時間、すなわち３分間通して循環させる。前と同様に、弁Ｖ４を最初に廃棄に設定して反応装置から残つていることがある保護基離脱溶液を除く。次いで、弁Ｖ４を循環に設定して反応装置中を洗浄溶液を循環させる。洗浄が完了した後で、洗浄溶液を弁Ｖ３を通して反応系から排除する。付加的な洗浄（例えばイソプロパノールを使用して）を樹脂を収縮させるために実施してもよい。樹脂を塩基の溶液例えばジイソプロピルエチルアミン（DIEA）の溶液で約20分間洗浄することによりペプチドを脱プロトン化する。付加的なDCM洗浄をDIEA塩基を除くために実施することができる。樹脂はそれをメタノール（MeOH）またはジメチルホルムアミド（DMF）で洗浄することにより収縮させることができる。樹脂はそれをDCMで洗浄することにより膨潤させることもできる。ペプチド連鎖に付加する次のアミノ酸（例えばｂｏｃ−アルギニン）を調製槽３に装入する。アミノ酸は予備活性化したものが好適であり、調製槽３には適当な溶媒または複数種の溶媒、例えばＤＣＭ及びＤＭＦもアミノ酸を装入した時に同時に装入する。次いで、カツプリング剤、例えばDCCまたはDICも調製槽３中のアミノ酸に添加する。大部分の不溶性副生物が生成する予備活性化期間の後で、活性化アミノ酸を濾過器Ｆ１を通して受容／貯溜槽５に輸送するように弁Ｖ１を操作して活性化反応の不溶性副生物を除去する。濾過器Ｆ１は活性化反応の実質上全ての不溶性副生物を除去する細かさのものである。濾過したアミノ酸を、上述したように、カツプリングが完了するまで反応器を通して循環させる。反応中、囲いもバスケツトも反応溶液が溢汪しないから、攪拌槽反応器、振とうフラスコ式反応器の場合に必要とする液量より少ない、あるいは溢汪回転バスケツト反応器の場合に必要とする液量さえより少ない液量を必要とするに過ぎない。このように従来より少ない液量を使用できることは多量のアミノ酸を使用しないでも、従って反応操作の費用を高めることなしに、より高濃度のアミノ酸の使用を可能となす。すなわち、原料アミノ酸の使用量を増大させることなしにアミノ酸濃度を、例えば溶液１リツトル当たり３００ミリモルに増大できる。既に知られているように、反応速度は反応剤濃度の関数である。従って使用液量を少なくできることはカツプリング工程の反応速度を増大させるものである。活性化アミノ酸の温度は調製槽３で、及び活性化アミノ酸が熱交換器ＨＩを循環するときにも制御し調整できる。カツプリング反応の終点は反応器から取出した樹脂のサンプルを試験することにより確認できる。樹脂を溶媒、例えばＤＭＦで洗浄するきとができる。不溶性副生物はこれをＭｅＯＨで洗浄することにより樹脂から除去できる。メタノールはこれを溶媒、例えばＤＣＭで洗浄することにより樹脂から除去できる。この操作を次のアミノ酸についても順次に繰返す。理解できるように、濾布及びバスケツト円筒穿孔側壁は攪拌式反応器または管状SPPS反応器装置中で使用した濾過フリツトの代替物である。排出流流路中の小さくて濾布とは別の濾過フリツトの幾何学的制限がなくなるとフリツトにより反応装置に課せられた圧力制限からも反応器装置は開放される（すなわち、設計者はフリツトの損傷を心配することはない）。従って、反応装置が曝される最大圧力は樹脂ビーズの強度及び樹脂床の厚さ（圧力は樹脂ビーズを損傷したり樹脂ビーズを強く圧縮したりする程大きくはあり得ない）及びバスケツト１７の強度により調節される。各工程間において（すなわち、受容／貯溜槽５に次の溶液が装入される間）もバスケツト１７は回転し続ける。これにより前の工程の溶液は次の溶液が反応器７に導入される前に遠心力によりケークＲから速やかに除去される。更に、先に述べたように、弁Ｖ４は各サイクルの開始時に短時間“廃棄”に向けて開かれるから、これにより、バスケツトの連続した回転によりケークＲから強制的に除去されなかつた前工程溶液が続く次の工程の溶液により装置から強制的に除去されて装置を清浄にするであろう。このことは前工程の溶液はその最少量以下の量が反応装置中に残留するに過ぎないことを保証し、ペプチド連鎖の反応剤または洗浄溶液への暴露の制御を容易にする。先に述べたように、バスケツトと樹脂床とは溢汪されない。従って、バスケツト中に導入されたすべての反応剤と液体とは良好な速度でケークＲを通過する。すなわち、ケークＲを溶液が通るのをバスケツトと反応器の囲いとの間の空間１８にある液体より妨害されない。従って、ペプチドと反応剤または洗浄溶液との接触時間を、バスケツトを連続して回転させてポンプＰ２の運転期間を所定の時期に合わせることにより、注意深く且つ厳密に制御できる。粒子に対する流体の相対速度は反応装置の性能、生成物の収率及び品質に影響する設計上の変数である。反応剤または洗浄剤溶液をバスケツト１７に導入すると、液体は、先に述べたように、樹脂及び濾布を通過して囲い１５中に入つた後、循環して受容／貯溜槽に戻る。液体が反応器を出る速度が、液体が反応器に導入される速度と本質的に等しいか或いは大きい限り、反応器は液体で溢汪されない。反応器バスケツト底部と反応器囲いの底部との間の空間に依存して、液体がバスケツト底部の高さに届く前に循環サイクルを終了するように時間決めする限り液体供給速度を液体排出速度より低くすることができる。溶液が樹脂及び濾布を通過できる速度は液体が樹脂を通過するときの樹脂の抵抗（Ｋｐ）及び液体が濾布を通過するときの濾布の抵抗（Ｂ）の関数である。Ｋｐ及びＢは下記の式により計算できる： μ＝液体の粘度；Ｃ_s＝液体中の固体の濃度；Ａ＝バスケツト中で使用した濾布の面積に等しい濾過面積； ΔＰ＝樹脂床を横切る圧力降下； α＝溶液が樹脂ケークを通る時の樹脂ケークの比抵抗（m/kg）で、気孔の関数である；Ｒｍ＝溶液が炉布を通過する時の炉布の抵抗。遠心分離機中の物体に作用する力は下記の式で表わされ、ωラヂアン／秒で回転する半径Ｒの遠心分離機中の物体の加速度は下記の式により得られる：上記式は加速度を重力による加速度（９８０cm/秒²）で割ることにより重力単位で表わすことができる。樹脂床を横切る圧力降下は下記のようにして得ることができる。流体に作用する静圧は式３により表わされ、ここにＰは圧力で、Ｇは重力及びｚは流体の高さである。式３の重力加速度を式２で置換すると下記式４が得られる：樹脂床の内側半径と外側半径との間で積分すると下記の式５を生ずる：上記式は下記の変換式によりラジアン／秒の項で表わすより更に便宜な項［回転数／分（rev/min）］で表わすことができる：多孔質媒体を通る圧力降下は下記の式７で表わすことができる：ここにｑは液体の体積流速で、μは液体粘度、ｍ_cはケークの質量、αは液体の流通に対するケークの比抵抗、Ｒ_mは液体の流通に対する濾過媒体の抵抗及びＡは濾過面積である。ケークの抵抗αはケークが圧縮されると圧力の関数である。ケークの抵抗と濾過媒体の抵抗とに対する定数は一定圧力バツチ式濾過実験を行うことにより、捕集した濾液の体積で割つた濾過時間対濾液体積をプロツトすることにより得ることができ、プロツトされた線の勾配がケイクの抵抗に比例し、濾過時間の軸の切片が濾過媒体の抵抗に比例する。バスケツト１７はバスケツトの中心からリツプ２２の半径方向内縁端との距離に等しい内側半径（IR）（図２参照）と、バスケツトの中心からバスケツトの穿孔側壁２３の距離に等しい外側半径（OR）とをもつ。使用したバスケツトでは外側半径（OR）は約１５ｃｍで、リツプの巾は約７.５ｃｍであつた。従ってバスケツトの内側半径（IR）は約７.５ｃｍである。バスケツトの他の寸法もまた使用できる。反応剤溶液または洗浄溶液がバスケツト１７中に導入されると、溶液の液滴が合体して樹脂ケークの内側表面上に液体壁を形成し、この液体壁は遠心力により樹脂床を強制的に通過させられる。バスケツト中への溶液流が増加すると、液体壁の厚さも厚くなる。液体壁の厚さが充分に厚くなつてバスケツトの中心からこの液体壁の内側表面までの距離（下記表１中のR［inner］）がバスケツトの内側半径（７.５ｃｍ）より小さいと溶液はバスケツトのリツプ２２を越えて溢れでる。この状態でバスケツトは完全に溢汪状態である。下記の表１から解るように、バスケツト回転速度が５００ｒｐｍの場合、バスケットは樹脂床の厚さが５.５ｃｍに対し入口流速１０２.８ｍｌ／秒〜１１５.７ｍｌ／秒でバスケツトは溢汪し始める。樹脂床の厚さが２.５ｃｍの場合には、流速が２１７.８ｍｌ／秒〜２４４.９ｍｌ／秒でバスケツトは溢汪し始める。バスケツト回転速度が１０００ｒｐｍの場合には、流速が遥かに高くなるまでバスケツトは溢汪し始めることはない。樹脂床の厚さが５.５ｃｍの場合には液流速が４４９.８ｍｌ／秒〜５１４.１ｍｌ／秒になるまでバスケツトは溢汪し始めることはなく、樹脂床の厚さが２.５ｃｍの場合には液流速が９５２.５ｍｌ／秒〜１０８８.６ｍｌ／秒になるまでバスケツトは溢汪し始めることはない。下記表１の値は６３.６２ｃｍ²の壁面積をもつ遠心分離器に適用して実験的に得られたＫｐ及びＢの値を使用し一連の濾過計算から得られた値である。Ｋｐ及びＢの値はバスケツトと囲いとの間の空間１８に２７９.４ｍｍ（１１インチ）Ｈｇの一定の差圧Ｐ１をかけた場合に得られた値である。それにより得られた濾過パラメータを半径１５ｃｍでバスケツト壁面積１４１３ｃｍ²の遠心分離器に適用して種々の回転速度に対する液流速を計算し、圧力降下（液厚における）を得た。圧力Ｐ１と濾過面積の変化は濾過係数Ｋ及びＢに影響を与える。表１流速計算値対樹脂床を横切る圧力降下図５はバスケツト１７中の樹脂床を横切る圧力降下に対する液流速の計算値をプロツトした図である。理解されるように、溢汪が起こる前の最大液流速は樹脂床の厚さとバッスケツトのリツプ２２の半径方向の巾との関数である。従って、リツプ２２の巾を増大することにより、或いは樹脂床の厚さを減少することにより、最大液流速の可能性値を増大できる。反応器の運転は（著量の液体がリツプを越えて樹脂床をバイパスしないならば）樹脂床上の若干の表面液体により妨げられない。重要なことはバスケツトが液に没入しないことである（すなわち、バスケツト壁と囲いとの間の空間１８を充満する液体がないことである）。この若干の表面液体は回転中のバスケツト内の液体体積がそれより僅かだけも多くならないように樹脂床を通過する液流速を増大するのに役立つことができた。（バスケツトが液に没入していないから）制限を設定されないで随意に回転速度を変えることができることは、液中に没入した円筒が液体で溢汪した槽または殻中で回転しつつある時よりより高い液流速が可能となる。液と固体とが均一に接触することが反応器の効率的運転のために肝要である。樹脂と液との満足な接触は、樹脂上に一様に液体を噴霧すること、樹脂床の厚さが均一であること、及び液流速及びバスケツト回転速度を注意深く選択することにより達成できる。固体床を通る液流速は往々にして樹脂床を横切る圧力降下に直接比例し、また樹脂床の厚さに反比例する。しかし、樹脂は若干ゼラチン状であるから高遠心力は樹脂床を圧縮し、それにより樹脂床を通過する液流に対する抵抗を増大する。樹脂床が充分に高い圧力で圧縮されると、樹脂床を通る液流は減少し圧力降下は増大する。従って、液体の流れを最大にする有限の回転速度がある。上記表１は１５ｃｍの半径をもつバスケツトの５００及び１０００ｒｐｍの回転速度［これはバスケツト壁の内側表面でそれそれ４１１２３ｃｍ／秒（４１. ９Ｇ）及び１６４４９４ｃｍ／秒（１６７.８Ｇ）の加速度に相当する］を示す。しかし、遠心力による樹脂ビーズの圧縮が樹脂床を通る流体の流れを妨害するに至るまでに遥かに高い加速度に曝すことができる。ビーズの圧縮はビーズの剛性の関数であり、これはひいては樹脂の架橋度に関連する。実施例可変速モータ及びステンレス鋼バスケツトを備えたIEC遠心分離器及びCole-Palm er Masterflex Model 7518-12ゼン動（蛇腹）式ポンプを反応器として使用した。バスケツトは内径１３ｃｍで高さは５ｃｍであつた。液体を前記遠心分離器に Master Phar-Medホース、型式6485-24（このホースはバスケツトの中心部（ハブ）の頂部に液流を向けこの液流を粗大な液滴の連ながりに分割する）を通して添加した。この設計は樹脂表面を一様な液噴霧で完全にまたは充分に覆うことはできなかつた。大体の液流速は２００ｍｌ／分であつた。アミノ酸及びHOBtをDCC で予備活性化した。予備活性化アミノ酸溶液を反応器に装入する前に不溶性ＤＣＵを減圧濾過により予備活性化アミノ酸溶液から除去した。アルコール（メタノール）洗浄液は必要ではなかつた。これは予備活性化工程で大部分のDCUが除かれたからである。方法は他の点では下記表２に記載した方法と同じである。バスケツトの回転速度は５００ｒｐｍ（これは約１８.２Ｇの加速度に相当する）であつた。上記条件下で比重１.０をもつ液の厚さ１ｃｍを横切る（溢汪した）圧力降下は１６４５Ｎ／ｍ²［0.017ｋｇ／ｃｍ²（０.２４ｐｓｉ）］であつた。反応器用の遠心力分離器濾過面積は２０４ｃｍ²で、空バスケツトの最小液体空塔速度（２００ｍｌ／分の流速で）は０.９８ｃｍ／分であつた。 2組の実験を行つた。第1組みの実験は化学反応なしの樹脂の挙動を評価するために行つた。樹脂をDCMまたはDMF中に分散し、ポリプロピレンの１−３ミクロン気孔の濾布で内張りした遠心分離器に装入した。樹脂は濾布上に一様な樹脂床を形成した。この樹脂床はDCM、DMF及びMeOHに暴露すると膨潤及び収縮した。樹脂ケークは遠心分離器をの回転を止めても短時間の間剥落する傾向はなかつた。しかし、樹脂ケークは一夜放置して乾燥させると剥落する傾向があつた。樹脂ケークは乾燥すると割れたが、その割れは巾が非常に狭い傾向があつた。空洞が時により形成されたが、次の溶媒洗浄中に速やかに消失した。樹脂床の表面に液を導入すると樹脂床表面を平坦にすることが注目された。この僅かな亀裂と空洞の形成は樹脂ケークを通る液の流れに影響しなかつたと思われ、樹脂ケークを通る液流は均一であつたと思われる。洗浄操作の初期に樹脂が流出流中にも見られたが、洗浄を繰返すと流出流は速やかに透明になつた。遠心分離器内には溶媒の蓄積が事実上起こらなかつたし、またそのことが所望の限り迅速な液流との接触を行わせたから、液の循環は非常にうまく行われた。バスケツトの壁上に濾布を保持する維持リングを使用しなかつたから、液の供給工程初期及び洗浄工程の初期における遠心分離器からの固体の若干の損失は一般並みのもので、この実験において予想されたものであつた。第１実験の結果は非常に有望で反応装置の機械的実施可能性を確認した。第２実験では、ジペプチドｂｏｃ-Arg-Glyをメチルベンズヒドリルアミン（MB HA）樹脂上で合成して短鎖長ペプチド用反応装置の実施可能性を例証した。そしてループロリド（Leuprolide：pGlu-His-Trp）の最後の３種のアミノ酸をカツプリングしてループロリドを造り、中間鎖長のペプチド用反応装置への実施可能性を例証した。使用した方法を下記表２に述べる：表２固相合成法＊洗浄時間はループロリドに対しては５分間増した。最初の合成（すなわちｂｏｃ−Arg-Gly）の合成では、樹脂１ｇ当たり１ミリ当量（１meq）の蛋白質組込み率をもつＭＢＨＡ樹脂２０ｇを原料物質として使用した。ｂｏｃ−Gly６０ミリモル（３当量）、HOBt及びDCCを最初のカツプリングに使用した。アミノ酸を１５分間予備活性化し、DCUを濾過して除いた。１時間反応後に遠心分離器の回転を止め、サンプルを採取しニンヒドリン試験により遊離アミンを検査した。サンプルはニンヒドリン試験に合格した。バツチをDCM 及びTFAで閉塞基離脱処理し、一夜放置した。次のカツプリングを６０ミリモルのｂｏｃ−Arg(TOS)を用いてｂｏｃ−Glyについで上記したのと同じ操作により行つた。カツプリング反応中に１時間と２時間とで採取したサンプルはニンヒドリン試験に不合格であつた。バツチをｂｏｃ −Arg(TOS)１.５当量とHOBt及びDCCとを用いて３分間（ラクタムへの環化を最少とするために）再カツプリングを行つたところ、ニンヒドリン試験に合格した。実験の第２部分はループロリド（Leuprolide）中の３種のアミノ酸（Glu-His- Trp）を付加するにある。プレーループロリド（ポストSer）が得られた。この時点でペプチド−樹脂は樹脂１ｇ当たり０.５ミリ当量のペプチドを含有した。使用した方法は丸底フラスコと浸漬管を備えた封蜜すりガラスヘツドとからなる溶媒循環容器を付加した以外は上記表２に述べた方法と同じである。遠心分離器の頂部の開口を溝孔を切込んだプラスチツクビーカーで覆い、その溝孔に装入用ホースを挿入した。これらの改変は蒸発による溶媒の損失を減らすために行つた。新規な構成による第1カツプリングはｂｏｃ−Trpを用いるにある。サンプルは最初の１時間後にニンヒドリン試験に合格した。第２のカツプリングをｂｏｃ− His(BOM)を用いて行つた。ポンプ速度を増大し、バツチを１時間付加して反応させた。付加反応時間後に樹脂の３つのサンプルを採取した。各サンプルは樹脂ケークの頂部、中央部及び底部から採取したサンプルであり、個々に遊離アミンについて試験した。各サンプル共にニンヒドリン試験は非常に強い陽性を示した。バツチを１.５当量のｂｏｃ−His(BOM)で再カツプリングしたところ１時間後にニンビドリン試験に合格した。最終カツプリングはp-Gluを用いて行つた。バツチを１時間カツプリングしてニンヒドリン試験に合格した。乾燥したペプチド− 樹脂の最後の重量は３２ｇであつた。ペプチド−樹脂２.０ｇをエチルアミンで開裂し、保護ペプチド８０２ｍｇを生じた。得られた粗製ペプチドを逆相ＨＰＬＣで試験したところ、典型的な粗製ループロリドのピークを示した。第１組の実験の結果は、樹脂が遠心分離器の壁上に一様な樹脂床を形成したこと、樹脂がくずれ落ちる或いは脱落する傾向がないことを示した。更に、樹脂床は最少亀裂を示すに過ぎなつた。空洞や亀裂は洗浄すると見えなくなり、樹脂の通り抜けが通常極めて少なかつた。濾液中への微粉の通り抜けは、最終カツプリング工程以外は、カツプリング実験中殆ど存在しなかつた。濾過媒体を封止するより良好な方法が利用可能であり、この問題を解決するものと期待される。理解されるように、先に述べた反応器装置及びその運転方法は溶媒及び反応剤が反応器から溢汪しないように保ち、樹脂を通過する迅速な流体速度を可能にした。この装置の利点は多数あるが、以下のものを含む：活性化、カツプリング及び保護基離脱操作中のより正確な温度制御。これはバスケツトが溢汪することがなく、溢汪した囲い中にバスケツトが埋没しないから可能である。従って、制御を必要とするのは導管１１及び反応剤供給管２６における液体の温度だけである；溶媒は、STRの場合のように、囲い１５を満たす必要はなく樹脂を分散する必要もないから、溶媒の使用量を減少できる；アミノ酸の使用量が減少し、反応速度は増大する。反応速度は反応剤の濃度に比例する。溶媒量を減少できるから同じアミノ酸濃度を得るためにはアミノ酸の所要量も減少できる。アミノ酸量を減少させないとアミノ酸濃度は高くなり、従って反応速度は増大する；高度に可燃性の溶媒を排除できること。アミノ酸は予備活性化され、濾過されるから、樹脂中のDCU量は非常に少量である。その結果、メタノール洗浄またはイソプロパノール洗浄は不要である。アルコール洗浄剤の排除は樹脂床を崩壊させることがある樹脂の“絞り出し”操作を排除する。このことは各アミノ酸のペプチドへのカツプリング全所要時間を減少させる。付加的な利点として、ペプチド合成操作から求核的溶媒を排除でき、これはこれらの“反応性”化学種の不十分な除去または可能性ある異種結合汚染（cross-contamination）により課せられる危険を排除する。攪拌式反応器中の樹脂ビーズを懸濁するための攪拌器の剪断及び摩砕作用により生ずる樹脂の損傷を排除できること。樹脂はSTR反応器中におけるように攪拌による応力を受けない。従って、高速度回転する攪拌羽根先端からの樹脂ビーズ剪断破損はより少なくなる；保護基離脱反応による発熱を除去できること。循環する液体を外部熱交換器で冷却でき、従って樹脂は連続的に冷却されたDCM/TFA溶液に曝される；保護基離脱反応中の第１TFA装入により発生するカルボカチオンを迅速に除去することによりペプチドの品質及び収率を改善できること。これは洗浄液を捕集し循環するか、反応器を一度通過後廃棄できることにより達成できる；樹脂粒子寸法を小さくでき、しかもバスケツトが反応剤溶液に没入されないで自由に回転することにより管理し易い圧力降下のために安定な樹脂床中の樹脂粒子に対し相対的に高流体流速を維持できること；樹脂の予備活性化操作は濾過によりDCUの除去するから樹脂床外周液体（バルク液体）と樹脂内の反応部位との間の移動速度が改善されること；バスケツトが流体に没入しないことにより流体と樹脂床との接触時間がより短く、より制御しやすく、濾過時間がより短くなり、この濾過時間の短縮化はサイクル時間を短くしペプチド−樹脂へのTFAの暴露時間をより制御されたものとなす；樹脂断片または不溶性副生物により破損または閉塞されるようになる濾過フリツトを排除できること。既に述べたように、バスケツト１７の穿孔した円筒側壁２３が濾過フリツトの代替する；樹脂は比較的乾燥状態で洗浄溶媒間を回転されるから、より効率的洗浄が行われる。次の洗浄溶媒の最初の部分は循環しないで廃棄できる。これは、樹脂から前工程の溶媒を速やかに排除する効果がある；バスケツト上に一様に形成される樹脂ケークを備えた樹脂床が収縮及び膨潤に適応できること。円筒状反応器と異なつて樹脂床：濾過面積（すなわちバスケツト側壁）の比が小さい。上記記載は説明のためだけに記載されたものであり、本発明をこれに制限するものではない。添付請求の範囲の範囲内で種々の改変ができることは当業者に明白であろう。例えば、活性化剤としてDCCの代りにDICを置換できる。DICを使用すると樹脂を詰らせる不溶性副生物（DCUのような）を造り出さない。従って、活性化剤としてDICの使用はメタノール洗浄及び予備活性化を不要とし、このことはペプチドの合成に必要とする全時間を短くする。調製槽３はこれを反応装置から除去でき、溶液をすべて受容／貯溜槽５中で調製してもよい。これは調製槽に関連する制御を受容／貯溜槽に関連させることを必要とし、濾過器Ｆ１が導管１１または導管１１上の濾過ループ内に置かれることを必要とする。バスケツトは垂直軸の周りに水平に回転するけれども、バスケツトは水平軸の周りに（バスケツトが水平軸の側面上にあるように）回転することも、傾斜した（すなわち垂直線に対し９０度未満の角度の）軸の周りに回転することさえできる。これらの例は単に説明のためのものであるに過ぎない。

【手続補正書】【提出日】平成１０年１０月１３日（１９９８．１０．１３）【補正内容】【図１】【図２】【図３】【図４】【図５】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者ステイプルトン、マイケル・シーアメリカ合衆国、ミズーリ州、ペブリー、パネル・ドライブ 2434

Claims

【特許請求の範囲】１．囲い（１５）と、該囲いより小さい直径をもち穿孔された側壁（２３）を有し軸の周りに回転可能な、該囲い中のバスケツト（１７）と、バスケツトの外側表面と囲いの内側表面との間のバスケツトと囲いとにより区画される空間（１８）とを備えた合成反応器（７）を備えた反応装置（１）中で固相ペプチド合成反応を実施する方法であつて、該方法が（ａ）バスケツトを所望の回転速度で回転させ；樹脂のスラリーを回転する反応器のバスケツト中に供給してバスケツトの側壁上に実質上一様な厚さのケーク（Ｒ）を蓄積させ；（ｂ）回転するバスケツトに保護基離脱用溶液を供給して樹脂に結合したペプチドのＮ−末端基の保護基を離脱し；（ｃ）回転するバスケツトに１つまたはそれ以上の洗浄溶液を供給して保護基離脱用溶液をケークから洗浄し；（ｄ）ペプチド連鎖に付加する次のアミノ酸のアミノ酸溶液とカツプリング溶液とを回転するバスケツトに供給してペプチド連鎖に次のアミノ酸を付加し；（ａ）〜（ｄ）の工程をペプチド連鎖が完成するまで繰返し、上記保護基離脱用溶液、洗浄溶液、アミノ酸溶液及びカツプリング溶液の供給を回転するバスケツト中にそれらの供給した溶液が反応器の囲い中に集積してバスケツトがそれら供給した溶液中に没入しないように、ペプチド合成の各段階中にバスケツトが溢汪状態にならないように行うことを包含する固相ペプチド合成反応の実施方法。２．所望のペプチド順列の最初のアミノ酸を樹脂の活性部位に結合して樹脂に結合したペプチドを創製する、請求項１記載の方法。３．樹脂がスチレンビーズから造られる、請求項１記載の方法。４．樹脂が１００μ以下の直径をもち、０.２％〜１.５％架橋されてなる、請求項３記載の方法。５．バスケツトを回転する工程がバスケツトの壁に樹脂ケークを保持させるのに充分な遠心力を発生させるのに充分な速度でバスケツトを回転させる、請求項１記載の方法。６．バスケツトの内側表面で少なくとも約１０Ｇの遠心力を得るのに充分な速度でバスケツトを回転させる、請求項５記載の方法。７．反応装置が受容／貯溜槽（５）と、受容／貯溜槽（５）の入口と第１導管（１３）を介して囲い（１５）の出口と流体連通状態にあつて、受容／貯溜槽（５）の出口と第２導管１１を介して反応器（７）の入口（２７）と流体連通状態にある反応器（７）とを備え、該受容／貯溜槽、反応器、第１及び第２導管は１つの循環路を区画し、反応器へ溶液を供給する工程が溶液を受容／貯溜槽（５）へ供給し、次いで溶液を反応器へ転送する工程を含み、溶液をケークを強制透過して反応器空間（１８）中に移動させ、反応器空間中に移動した溶液は第１導管（１３）を経て受容／貯溜槽（５）に流れ戻る工程を包含する、請求項１記載の方法。８．溶液を回転するバスケツトに供給する工程が所定量の時間に亙り反応器− 第１導管−受容／貯溜槽−第２導管からなる循環路を循環する、請求項７記載の方法。９．第２溶液を反応器に導入する前に反応装置から第１溶液を事実上排除する工程を含む、請求項１記載の方法。１０．受容／貯溜槽（５）を集収器と連通状態に設置し、第１溶液を反応装置から排除する工程が反応器（７）中の溶液を受容／貯溜槽（５）へ輸送し、受容／貯溜槽（５）を前記集収器と連通状態にし、受容／貯溜槽の中身を集収器に輸送することを包含し、前記輸送工程が所定の期間第１溶液の循環を行つた後で且つ第２溶液の導入を始める前に所定速度でのバスケツトを回転させることからなる、請求項９記載の方法。１１．第１導管（１３）を集収器と流体連通状態にし、反応装置から第１溶液を排除する工程が更に第２溶液を反応器に供給する工程中所定の期間に亙り前記第１導管を集収器と連通状態にする工程を含む、請求項１０記載の方法。１２．溶液の温度を制御する工程を含む、請求項１記載の方法。１３．ケークを蓄積する工程がケークを２ｃｍ〜６ｃｍの厚さにケークを蓄積させることからなる、請求項１記載の方法。１４．アミノ酸を反応器に供給する前に反応器に添加するアミノ酸を予備活性化する、請求項１記載の方法。１５．予備活性化アミノ酸溶液を反応器に供給する前に該予備活性化アミノ酸溶液を濾過することにより不溶性副生物を除去する、請求項１記載の方法。１６．反応装置が反応器（７）と受容／貯溜槽（５）との間に設置された濾過器を備え、溶液が循環路を通して輸送される時に溶液を濾過する工程を含む、請求項７記載の方法。１７．反応器へ溶液を供給する工程が溶液をノズル（２９）を通して樹脂ケークに向けて噴霧することを含む、請求項１記載の方法。１８．固相ペプチド合成反応を実施する反応装置であつて、該反応装置が入口、出口、後記する囲い内に含まれる回転可能なバスケツト（１７）を備えた囲い（１５）を備えた反応器と、ペプチド合成用の溶液が導入される溶液供給槽（５）とを備え、該回転可能なバスケツトはケークが形成される多孔性側壁（２３）を備え、溶液供給槽（５）は入口と出口とを備え、該溶液供給槽の入口は第１導管１３を介して反応器出口と流体連通状態に設置され、該溶液供給槽の出口は第２導管（１１）を介して反応器の入口と流体連通状態に設置されてなり、反応装置は溶液が反応器バスケツトを埋没しないように反応器バスケツト（１７）が非溢汪状態に維持されるように運転可能である、固相ペプチド合成反応実施用反応装置。１９．ペプチド合成に使用する第２溶液を反応装置に導入する前にペプチド合成に使用する第１溶液を反応装置から実質上排除する手段を備えてなる、請求項１８記載の反応装置。２０．反応装置が集収器及び第２導管（１１）中の第１弁（Ｖ２）を備え、該第１弁（Ｖ２）は溶液供給槽を出る溶液が反応器に入る第１位置と、溶液供給槽を出る溶液が集収槽に通される第２位置とに選択的に切替可能であり、ペプチド合成に使用した第１溶液の排除装置が、溶液の循環が完了した後も反応器バスケツトを回転させて反応器バスケツト中に存在する溶液をすべて溶液供給槽すなわち受容／貯溜槽に送り、該溶液供給槽の中身を次いで前記第１弁Ｖ２を介して集収器に輸送する、反応器、溶液供給槽及び弁を備えてなる、請求項１９記載の反応装置。２１．ペプチド合成に使用した第１溶液の排除手段が更に第１導管（１３）中に第２弁（Ｖ４）を備え、該第２弁（Ｖ４）は反応器出口が溶液供給槽と連通する第１位置と、反応器出口が集収器と連通する第２位置とに選択的に切替え可能であり、反応装置は第２溶液を反応器に供給中、所定の期間第２弁（V４）を第２位置に切替えて運転される、請求項２０記載の反応装置。２２．反応装置が弁（Ｖ１）と、反応器及び溶液供給槽と流体連通状態にある調製槽（３）とを備え、該弁Ｖ１は調製槽（３）の中身を溶液供給槽及び反応器のいずれか一方に輸送するように動作可能である、請求項１８記載の反応装置。２３．調製槽（３）で樹脂スラリーが調製され、反応器がスラリー導入導管を備え、弁（Ｖ１）が前記樹脂スラリーを反応器に向けるように運転される、請求項２２記載の反応装置。２４．スラリー導入導管がスラリーを反応器バスケツトの壁に向けて供給する、請求項２３記載の反応装置。２５．スラリー導入導管が反応器バスケツトの壁上に実質上均一な厚さで実質上平坦なスラリー床を形成し易くする展延装置を備える、請求項２４記載の反応装置。２６．調製槽（３）中で溶解したアミノ酸が予備活性化され、予備活性化されたアミノ酸は弁（Ｖ１）を介して溶液供給槽に輸送される、請求項２２記載の反応装置。２７．反応装置が弁（Ｖ１）と溶液供給槽との間に設置された濾過器（Ｆ１）備え、アミノ酸溶液が濾過器（Ｆ１）を通される、請求項２６記載の反応装置。