JP2005296832A - 固相自動合成装置 - Google Patents
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Abstract
【課題】 固相合成を迅速に行い、固相を迅速に洗浄し、固相を迅速に乾燥することを同時に達成し、固相自動化装置において合成や洗浄に費やす時間を短縮すること。
【解決手段】 合成反応を行うための複数の反応試薬及び溶媒の保管容器、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応管に供給するための配管、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応器に供給させるための送液手段、微小管状反応器に所望の反応試薬及び溶媒だけを供給させるための切り替えバルブ、並びに反応基質固定化用担体が充填された微小管状反応器を含む固相自動合成装置であって、前記微小管状反応器内に必要量の反応試薬を送液後、送液を停止した状態で所望の合成反応を行わせ、反応終了後、担体に固定化された反応物以外の反応試薬を溶媒にて洗浄除去できる機能を有することを特徴とする固相自動合成装置。
【選択図】 なし
【解決手段】 合成反応を行うための複数の反応試薬及び溶媒の保管容器、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応管に供給するための配管、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応器に供給させるための送液手段、微小管状反応器に所望の反応試薬及び溶媒だけを供給させるための切り替えバルブ、並びに反応基質固定化用担体が充填された微小管状反応器を含む固相自動合成装置であって、前記微小管状反応器内に必要量の反応試薬を送液後、送液を停止した状態で所望の合成反応を行わせ、反応終了後、担体に固定化された反応物以外の反応試薬を溶媒にて洗浄除去できる機能を有することを特徴とする固相自動合成装置。
【選択図】 なし
Description
本発明は、目的化合物を自動的に合成する複数個の試薬や溶媒容器と複数個の反応容器から構成される自動合成装置及びそれを用いた固相自動合成方法に関する。特に、本発明は、固相合成において目的生成物を取得する際に、過剰の試薬や溶媒が発生する無駄を抑制し、合成や洗浄の際に撹拌混合を行う動力装置を備えずに、試薬の拡散混合時間や合成反応時間や固相の洗浄時間を著しく短縮した、固相自動合成装置及びそれを用いた固相自動合成方法に関する。
製薬、バイオサイエンス又は化学などの研究分野において用いられている従来の自動合成装置は、合成反応をおこなう複数個の配列された反応容器を備えており、各反応器内に試薬や溶媒などをそれぞれ分注または送液するとともに、各反応器を冷却または加熱し、反応器内部を撹拌または反応器外部を振動することによって、各反応器内部の合成反応を促進させ、各反応器内部に生成化合物を生成するように構成されている。
従来の固相合成装置において、生成化合物を取得するまでの一連の操作を、図３を参照して説明する。複数個の配列された合成反応をおこなう各反応容器の底部には加圧通液型フィルターと、各反応容器ごとに配備された回収容器がある。図３に示すように、先ずレジン粒子を反応容器に充填する。次に所定量の試薬を反応容器に添加する。反応容器の温度を、温度調節計にて所定の温度に調節し、反応器外部を回転振動させるかあるいは反応器内部に撹拌羽根または撹拌子を設置して、撹拌操作を所定時間実施する。次に反応器内を加圧して試薬を除去し、続いて洗浄溶媒を添加してレジンを洗浄する。洗浄は残存試薬が検出されなくなるまで複数回繰り返す。次に、切り出し液を添加し、所定時間放置したのち、レジンから生成化合物を下部から抜き出す。この際反応器内を加圧して、回収容器に生成化合物を取得する。切り出し液としては、生成化合物が何かによるが、切り出し液には、強酸性溶液か強塩基性溶液が用いられる。代表的な強塩基性溶液として、ナトリウムメトキシド／メタノール溶液などが、また代表的な強酸溶液としてフッ酸やトリフルオロメタンスルホン酸など知られている。
また、このような、試薬の導入−反応−洗浄−分離及び精製−生成化合物の取得操作を自動化した自動合成装置としては固相合成と液相合成のものがあり、例えば、特許文献１及び２に記載のものが挙げられる。
しかしながら、特許文献１又は２に記されているような従来の固相自動合成装置は、図３に代表されるように、充填したレジン対し反応容器が大きく、またレジンを十分に浸漬させるために過剰量の試薬や溶媒を必要とし、そのため、よい混合を実現するために撹拌混合の動力手段を備えざるえない固相自動合成装置であった。さらに、複数個の反応容器と複数個の試薬や溶媒容器を備えた自動合成装置の場合、過剰の試薬や溶媒の量は著しいものとなり、無駄な廃液量が多く、環境負荷が高いという欠点があった。
本発明は上記した従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。即ち、本発明は、省資源・省エネルギーに関する観点から、過剰な試薬を使用せず、撹拌混合の動力手段の必要がない固相自動合成装置を提供することを解決すべき課題とした。
また、固相合成を行う場合、反応は一定温度で行うことが多く、遅い反応を扱う場合、反応を昼夜ないし数日おこなうこともある。また、固相の洗浄においても、固相のレジンの粒子径とフィルター目開きの大きさの選び方によって、洗浄溶媒の迅速かつ円滑な送液の可能性、すなわち洗浄時間の短縮の可能性が決まる。また固相レジンの乾燥操作においても乾燥の雰囲気が乾燥時間の短縮の可能性を決める。本発明においては、固相合成を迅速に行い、固相を迅速に洗浄し、固相を迅速に乾燥することを同時に達成し、固相自動化装置において合成や洗浄に費やす時間を短縮することを解決すべき課題とした、即ち、本発明は、自動合成装置の全操作時間を短縮することを解決すべき課題とした。
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、省資源・省エネルギーに関する観点から、過剰な試薬を使用せず、撹拌混合の動力手段の必要がない固相自動合成装置を提供し、ついで、本固相自動合成装置において、内部の各部分の仕様や操作性を工夫することで、固相合成を素早く行い、固相を素早く洗浄し、固相を素早く乾燥し、合成や洗浄に費やす時間を短縮することに成功した。すなわち、本発明によれば以下の発明が提供される。
（１） 合成反応を行うための複数の反応試薬及び溶媒の保管容器、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応管に供給するための配管、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応器に供給させるための送液手段、微小管状反応器に所望の反応試薬及び溶媒だけを供給させるための切り替えバルブ、並びに反応基質固定化用担体が充填された微小管状反応器を含む固相自動合成装置であって、前記微小管状反応器内に必要量の反応試薬を送液後、送液を停止した状態で所望の合成反応を行わせ、反応終了後、担体に固定化された反応物以外の反応試薬を溶媒にて洗浄除去できる機能を有することを特徴とする固相自動合成装置。
（２） 微小管状反応器の内径が０．１〜１０ｃｍであり、容量が０．５〜１０ｍｌである、（１）に記載の固相自動合成装置。
（３） 反応基質固定化用担体が樹脂である、（１）又は（２）に記載の固相自動合成装置。
（４） 反応試薬の必要量が反応管に充填された樹脂の膨潤相当量である、（３）に記載の固相自動合成装置。
（３） 反応基質固定化用担体が樹脂である、（１）又は（２）に記載の固相自動合成装置。
（４） 反応試薬の必要量が反応管に充填された樹脂の膨潤相当量である、（３）に記載の固相自動合成装置。
（５） 樹脂の膨潤が終了したことを液面センサーで検知して、送液を自動的に停止する機構を有する、（３）又は（４）に記載の固相自動合成装置。
（６） 樹脂の粒子径が、膨潤状態で２〜５００ミクロンである、（３）から（５）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（７） 多糖類合成用である、（１）から（６）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（６） 樹脂の粒子径が、膨潤状態で２〜５００ミクロンである、（３）から（５）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（７） 多糖類合成用である、（１）から（６）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（８） Ｎ個の配列された試薬及び溶媒容器群と、Ｍ個の配列された微小管状反応器群を含み、該試薬及び溶媒容器群と該微小管状反応器群との間に配置される切り替えバルブ群に関して、試薬及び溶媒容器群に接続されるＭ方切り替えバルブ群と微小管状反応器群に接続されるＮ方切り替えバルブ群（ここで、Ｍは２〜２０の整数であり、Ｎは２〜２０の整数である）を備えている、（１）から（７）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（９） Ｍ個の微小管状反応器が直列に接続されている、（８）に記載の固相自動合成装置。
（１０） 微小管状反応器の温度を調節するための温度調節部をさらに有し、該温度調節部が、初期温度と、終期温度と、初期温度と終期温度との間の昇温速度とを設定制御できる機能を有する、（１）から（９）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（９） Ｍ個の微小管状反応器が直列に接続されている、（８）に記載の固相自動合成装置。
（１０） 微小管状反応器の温度を調節するための温度調節部をさらに有し、該温度調節部が、初期温度と、終期温度と、初期温度と終期温度との間の昇温速度とを設定制御できる機能を有する、（１）から（９）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（１１） 以下のＡブロック〜Ｈブロックから構成される、（１）から（１０）の何れかに記載の固相自動合成装置。
（Ａ） ガス容器Ｂ１の不活性ガスを用いて送液操作を行う流量計ＭＦ１と乾燥操作を行う流量計ＭＦ２を備え、３方切り替えバルブＶ１３により、乾燥操作か送液操作かが選択されるＡブロック；
（Ｂ） 溶媒容器Ｂ２と溶媒容器Ｂ３からの極性溶媒及び無極性溶媒を用いて洗浄操作を行うためのポンプＰ１とポンプＰ２を備える、Ｂブロック；
（Ｃ） Ｘ個（Ｘは２〜１７の整数を示す）の反応用の試薬ボトルＢ４からＢＹ（ここで、ＹはＸ＋３で表される整数を示す）の試薬を吸引して送液する操作を行うシリンジポンプＳ４からＳＹを備え、吸引か送液かを選択するためにＸ個の３方切り替えバルブＶ１４からＶＺ（Ｚ＝Ｘ＋１３で表される整数を示す）を備える、Ｃブロック；
（Ｄ） Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、ＣブロックのＸ個の試薬群を複数の反応容器に配分するための切り替えＹ個のバルブ群Ｖ１からＶＹを備える、Ｄブロック；
（Ｅ） Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、ＣブロックのＸ個の試薬群をそれぞれ所定のＭ個（Ｍは２〜２０の整数を示す）の反応容器に供給するためのＭ個の切り替えバルブと、反応器をバイパスして上流のバルブ群を乾燥したい場合に使用するＭ個の３方切り替えバルブを備える、ブロックＥ；
（Ｆ）固相であるレジン粒子を充填したＭ個の反応容器をブロックに固定保持した部分と温度センサーと液面センサーとを備える、ブロックＦ；
（Ｇ）Ｍ個の反応容器を通液した溶媒及び各種の試薬液を回収するトラップと切り出した生成液を回収するＭ個の回収ボトルを備える、ブロックＧ；及び
（Ｈ）ＡブロックからＧブロックの流量制御、バルブ制御、温度制御及び液面制御を行うための手段を備える、Ｈブロック。
（Ａ） ガス容器Ｂ１の不活性ガスを用いて送液操作を行う流量計ＭＦ１と乾燥操作を行う流量計ＭＦ２を備え、３方切り替えバルブＶ１３により、乾燥操作か送液操作かが選択されるＡブロック；
（Ｂ） 溶媒容器Ｂ２と溶媒容器Ｂ３からの極性溶媒及び無極性溶媒を用いて洗浄操作を行うためのポンプＰ１とポンプＰ２を備える、Ｂブロック；
（Ｃ） Ｘ個（Ｘは２〜１７の整数を示す）の反応用の試薬ボトルＢ４からＢＹ（ここで、ＹはＸ＋３で表される整数を示す）の試薬を吸引して送液する操作を行うシリンジポンプＳ４からＳＹを備え、吸引か送液かを選択するためにＸ個の３方切り替えバルブＶ１４からＶＺ（Ｚ＝Ｘ＋１３で表される整数を示す）を備える、Ｃブロック；
（Ｄ） Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、ＣブロックのＸ個の試薬群を複数の反応容器に配分するための切り替えＹ個のバルブ群Ｖ１からＶＹを備える、Ｄブロック；
（Ｅ） Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、ＣブロックのＸ個の試薬群をそれぞれ所定のＭ個（Ｍは２〜２０の整数を示す）の反応容器に供給するためのＭ個の切り替えバルブと、反応器をバイパスして上流のバルブ群を乾燥したい場合に使用するＭ個の３方切り替えバルブを備える、ブロックＥ；
（Ｆ）固相であるレジン粒子を充填したＭ個の反応容器をブロックに固定保持した部分と温度センサーと液面センサーとを備える、ブロックＦ；
（Ｇ）Ｍ個の反応容器を通液した溶媒及び各種の試薬液を回収するトラップと切り出した生成液を回収するＭ個の回収ボトルを備える、ブロックＧ；及び
（Ｈ）ＡブロックからＧブロックの流量制御、バルブ制御、温度制御及び液面制御を行うための手段を備える、Ｈブロック。
（１２） Ｍ個の反応容器を同時に溶媒洗浄でき、またＭ個の反応容器を同時に乾燥することができるように、ＡブロックとＢブロックとＥブロックにさらに追加の３方切り替えバルブが備えられている、（１１）に記載の固相自動合成装置。
（１３） （１）から（１２）の何れかに記載の固相自動合成装置を用いて、固相自動合成を行う方法。
（１４） 反応試薬及び溶媒の送液を、不活性ガスを用いて圧送することにより行う、（１３）に記載の方法。
（１５） 極性溶媒と無極性溶媒を併用して洗浄を行う、（１３）又は（１４）に記載の方法。
（１４） 反応試薬及び溶媒の送液を、不活性ガスを用いて圧送することにより行う、（１３）に記載の方法。
（１５） 極性溶媒と無極性溶媒を併用して洗浄を行う、（１３）又は（１４）に記載の方法。
本発明の固相自動合成装置によれば、レジン膨潤量の反応試薬を用いることができるので、過剰な試薬の排出がなく、また撹拌など動力手段が不要である。また、効果的な極性及び無極性の洗浄溶媒を選ぶことによって、洗浄溶媒量を最小化でき、採択する反応の速度に依存するところはあるが、昇温反応により反応時間を短縮でき、適当な大きさレジンと相応のフィルターを選ぶことにより、洗浄時間が短縮され、窒素流通と真空乾燥を併用することにより乾燥時間が短縮化できる。即ち、本発明の固相自動合成装置によれば、省資源・省エネルギーを達成することが可能である。
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本発明の固相自動合成装置では、ストップドフロー反応をマイクロスケールで行うことにより、過剰の試薬を使用することなく効率よく反応を行わせることが可能である。また、自動固相合成の反応工程は煩雑であるが、自動化システムを構成しているので操作が簡単であり自動化が容易である。また、マイクロスケールで行った場合でも、必要とされる量の多糖類、ペプチドを合成するためには十分な規模である。
本発明の固相自動合成装置では、ストップドフロー反応をマイクロスケールで行うことにより、過剰の試薬を使用することなく効率よく反応を行わせることが可能である。また、自動固相合成の反応工程は煩雑であるが、自動化システムを構成しているので操作が簡単であり自動化が容易である。また、マイクロスケールで行った場合でも、必要とされる量の多糖類、ペプチドを合成するためには十分な規模である。
例えば、多糖類の合成例として、以下のようなものが挙げられる。
（１）微小管状反応器内に、アミノ基を有する樹脂を充填しておく
（２）反応器に、チオフェニル基を有する単糖カルボン酸と結合試薬とを導入する。
（３）ストップドフロー反応により、ペプチド結合で単糖を樹脂に結合させる。
（４）反応液を溶媒で洗浄除去する。
（５）反応器内に、フッ化単糖誘導体と結合試薬を導入する。
（６）ストップドフロー反応により、樹に担持された糖とフッ化単糖誘導体とを反応させて、両者をエーテル結合で結合させる。
（７）反応液を溶媒で洗浄除去する。
（８）上記（５）〜（８）の反応を繰り返し、糖鎖を成長させていく。
（１）微小管状反応器内に、アミノ基を有する樹脂を充填しておく
（２）反応器に、チオフェニル基を有する単糖カルボン酸と結合試薬とを導入する。
（３）ストップドフロー反応により、ペプチド結合で単糖を樹脂に結合させる。
（４）反応液を溶媒で洗浄除去する。
（５）反応器内に、フッ化単糖誘導体と結合試薬を導入する。
（６）ストップドフロー反応により、樹に担持された糖とフッ化単糖誘導体とを反応させて、両者をエーテル結合で結合させる。
（７）反応液を溶媒で洗浄除去する。
（８）上記（５）〜（８）の反応を繰り返し、糖鎖を成長させていく。
また、かかる装置はペプチド合成にも応用される。この場合も、アミノ基を有する樹脂、必要に応じ側鎖官能基が保護されているアミノ酸のカルボキシル基と樹脂との間にペプチド結合を形成させる反応を行う。更に、樹脂に担持されたアミノ酸のアミノ基と、次のアミノ酸のカルボキシル基を反応させてペプチド結合を形成させる。かかる反応を繰り返し、糖鎖を成長させていくことができる。
本発明で用いる反応基質固定化用担体としては、一般的には、通常、溶媒使用時にいくらか膨潤する性質を有する樹脂製のものを使用することが好ましい。但し、樹脂でも架橋度が高いもの、あるいは、シリカなどの無機担体の表面にアミノ基を化学結合させたものや、該無機担体に樹脂をコーテイングしたものなどでもよく、これらについては、溶媒に接しても殆ど膨潤しない性質のものがある。かかる反応基質固定化用担体の場合における必要反応試薬量は、担体の細孔部も含む表面を溶媒の膜で覆われる程度の量を意味する。
続いて、本発明の装置の構成を図面を参照しながら説明する。図１に実施例に関わる固相自動合成装置の全体構成を示すブロック図を示す。本実施例において、試薬及び溶媒容器群に接続されるＭ方切り替えバルブ群と反応容器群に接続されるＮ方切り替えバルブ群において、Ｍが４個、Ｎが１２個であるが、反応容器の個数Ｍと試薬容器の個数Ｎが、特にＭが４個そしてＮが１２個に限定されるものではない。
必要に応じて、多方切り替えバルブの組み合わせを増やし、反応管系列の増設と拡張が可能であり、多品種の生成物を迅速に作成する操作（ハイスループットスクリーニング）に有利である自動合成装置である。
（Ａブロック）
ガス容器Ｂ１の不活性ガスを用いて送液操作を行う流量計ＭＦ１と乾燥操作を行う流量計ＭＦ２を備える。送液操作を行う流量計の流量は１ＳＣＣＭ（standard cc/min）から１０ＳＣＣＭと低流量が好ましい。乾燥操作を行う流量計の流量は前記の流量計より大きい流量がよく、５００ＳＣＣＭから２０００ＳＣＣＭが好ましい。３方切り替えバルブＶ１３により、乾燥操作か送液操作かを選択する。
ガス容器Ｂ１の不活性ガスを用いて送液操作を行う流量計ＭＦ１と乾燥操作を行う流量計ＭＦ２を備える。送液操作を行う流量計の流量は１ＳＣＣＭ（standard cc/min）から１０ＳＣＣＭと低流量が好ましい。乾燥操作を行う流量計の流量は前記の流量計より大きい流量がよく、５００ＳＣＣＭから２０００ＳＣＣＭが好ましい。３方切り替えバルブＶ１３により、乾燥操作か送液操作かを選択する。
（Ｂブロック）
溶媒容器Ｂ２と溶媒容器Ｂ３から極性溶媒及び無極性溶媒を用いて洗浄操作を行うポンプＰ１とポンプＰ２を備える。ポンプの流量は１ｍＬ毎分から１０ｍＬ毎分が好ましい。
極性溶媒は分極率の高い溶媒であればよく、レジン中の残存試薬を効率よく洗浄する働きがある。極性溶媒として、Ｎ、Ｎ’−ジメチルホルムアミド、プロピオニトリル、アセトニトリル、メタノール、エタノール、プロパノール、Ｎ−メチルピロリドン、ＴＨＦなどが使用できる。無極性溶媒は分極率の低い溶媒であればよく、極性溶媒を置換洗浄した後の乾燥操作において、蒸発しやすい性質のものを選べば、乾燥時間が短縮できる。無極性溶媒として、ジクロルエタン、ジクロルメタンなどのハロゲン化炭化水素、ヘキサン、ヘプタンなどの脂肪族炭化水素、及びベンゼンやトルエンなどの芳香族炭化水素が好ましい。
また、レジンに水分を残存させないために、極性溶媒及び無極性溶媒のとも、脱水溶媒と呼ばれる水分が極端に除去された溶媒を使うことが好ましい。
溶媒容器Ｂ２と溶媒容器Ｂ３から極性溶媒及び無極性溶媒を用いて洗浄操作を行うポンプＰ１とポンプＰ２を備える。ポンプの流量は１ｍＬ毎分から１０ｍＬ毎分が好ましい。
極性溶媒は分極率の高い溶媒であればよく、レジン中の残存試薬を効率よく洗浄する働きがある。極性溶媒として、Ｎ、Ｎ’−ジメチルホルムアミド、プロピオニトリル、アセトニトリル、メタノール、エタノール、プロパノール、Ｎ−メチルピロリドン、ＴＨＦなどが使用できる。無極性溶媒は分極率の低い溶媒であればよく、極性溶媒を置換洗浄した後の乾燥操作において、蒸発しやすい性質のものを選べば、乾燥時間が短縮できる。無極性溶媒として、ジクロルエタン、ジクロルメタンなどのハロゲン化炭化水素、ヘキサン、ヘプタンなどの脂肪族炭化水素、及びベンゼンやトルエンなどの芳香族炭化水素が好ましい。
また、レジンに水分を残存させないために、極性溶媒及び無極性溶媒のとも、脱水溶媒と呼ばれる水分が極端に除去された溶媒を使うことが好ましい。
（Ｃブロック）
複数の反応用の試薬ボトルＢ４からＢ１２の試薬を吸引し送液する操作を行うシリンジポンプＳ４からＳ１２を備える。吸引か送液かを選択するために３方切り替えバルブＶ１４からＶ２２を備える。シリンジポンプに使用するシリンジの大きさは合成の規模に依存するが通常１ｍＬから１０ｍＬで十分である。
複数の反応用の試薬ボトルＢ４からＢ１２の試薬を吸引し送液する操作を行うシリンジポンプＳ４からＳ１２を備える。吸引か送液かを選択するために３方切り替えバルブＶ１４からＶ２２を備える。シリンジポンプに使用するシリンジの大きさは合成の規模に依存するが通常１ｍＬから１０ｍＬで十分である。
（Ｄブロック）
Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、Ｃブロックの複数の試薬群を複数の反応容器に配分するための切り替えバルブ群Ｖ１からＶ１２を備える。バルブは市販のものが使用でき、バルブの材質は耐食性かつ耐有機溶剤性のものがよく、特にテフロン（登録商標）製またはテフロン（登録商標）でコートしたＳＵＳ製が好ましい。バルブの耐圧性は０．１ＭＰａから１ＭＰａあれば十分である。またコンタミをさけるため、好ましくは死容積の小さいバルブがよい。
Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、Ｃブロックの複数の試薬群を複数の反応容器に配分するための切り替えバルブ群Ｖ１からＶ１２を備える。バルブは市販のものが使用でき、バルブの材質は耐食性かつ耐有機溶剤性のものがよく、特にテフロン（登録商標）製またはテフロン（登録商標）でコートしたＳＵＳ製が好ましい。バルブの耐圧性は０．１ＭＰａから１ＭＰａあれば十分である。またコンタミをさけるため、好ましくは死容積の小さいバルブがよい。
（Ｅブロック）
Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、Ｃブロックの複数の試薬群をそれぞれ所定の反応容器に供給するための切り替えバルブ群ＶＡ、ＶＢ、ＶＣ、ＶＤを備える。反応器をバイパスして上流のバルブ群の乾燥したい場合使用する３方切り替えバルブＶ２３からＶ２６を備える。バルブの材質と耐圧性は前記同様である。
Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、Ｃブロックの複数の試薬群をそれぞれ所定の反応容器に供給するための切り替えバルブ群ＶＡ、ＶＢ、ＶＣ、ＶＤを備える。反応器をバイパスして上流のバルブ群の乾燥したい場合使用する３方切り替えバルブＶ２３からＶ２６を備える。バルブの材質と耐圧性は前記同様である。
（Ｆブロック）
固相であるレジン粒子を充填した反応容器Ｒ１からＲ４をアルミ製ブロックに固定保持した部分と温度センサーと液面センサーを備える。
固相であるレジンの具体例としては、各種の樹脂、例えば、ポリスチレン樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、ポリエーテル系樹脂、及びそれらの複合樹脂や、または多孔質ガラス、多孔質ビーズ、キャピラリーシリカやマイクロチップなどの微細流路、セファロースなどが挙げられる。これらはいずれも、固相合成に際してリンカーやスペーサーなどを連結するための足場となる、アミノ基、ブロモメチル基、水酸基、チオール基、カルボキシル基などの官能基を有しているものであって、さらに適当な側鎖や修飾などを有するものであってよい。
固相であるレジン粒子を充填した反応容器Ｒ１からＲ４をアルミ製ブロックに固定保持した部分と温度センサーと液面センサーを備える。
固相であるレジンの具体例としては、各種の樹脂、例えば、ポリスチレン樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、ポリエーテル系樹脂、及びそれらの複合樹脂や、または多孔質ガラス、多孔質ビーズ、キャピラリーシリカやマイクロチップなどの微細流路、セファロースなどが挙げられる。これらはいずれも、固相合成に際してリンカーやスペーサーなどを連結するための足場となる、アミノ基、ブロモメチル基、水酸基、チオール基、カルボキシル基などの官能基を有しているものであって、さらに適当な側鎖や修飾などを有するものであってよい。
（Ｇブロック）
反応管Ｒ１からＲ４に通液した、溶媒及び各種の試薬液を回収するトラップと切り出した生成液を回収する回収ボトルＴ１からＴ４を備える。また不活性ガスを流しながら、真空排気による乾燥操作をおこなう真空ラインを備える。
反応管Ｒ１からＲ４に通液した、溶媒及び各種の試薬液を回収するトラップと切り出した生成液を回収する回収ボトルＴ１からＴ４を備える。また不活性ガスを流しながら、真空排気による乾燥操作をおこなう真空ラインを備える。
（Ｈブロック）
あらかじめプログラム設定されたＡブロックの流量制御、Ｂブロックの流量制御と圧力の監視、Ｃブロックの流量制御と切り替えバルブ操作、Ｄブロックの切り替えバルブ操作、Ｅブロックの切り替えバルブ操作、Ｆブロックの温度制御と温度の監視と液面制御、Ｇブロックのバルブ開閉操作と真空動力のオンオフの操作を、シーケンサーを経由しておこなう、タッチパネル型制御計またはパーソナルコンピューターを備える。
あらかじめプログラム設定されたＡブロックの流量制御、Ｂブロックの流量制御と圧力の監視、Ｃブロックの流量制御と切り替えバルブ操作、Ｄブロックの切り替えバルブ操作、Ｅブロックの切り替えバルブ操作、Ｆブロックの温度制御と温度の監視と液面制御、Ｇブロックのバルブ開閉操作と真空動力のオンオフの操作を、シーケンサーを経由しておこなう、タッチパネル型制御計またはパーソナルコンピューターを備える。
続いて、本発明の固相自動合成装置の反応工程と洗浄工程と乾燥工程の特徴について記述する。
（本発明の固相自動合成装置の反応工程における特徴）
試薬や溶媒の拡散混合時間を節約するためには、反応容器は小型であることがよく、反応管１系列の内径が１００〜１２００００ミクロン、好ましくは１０００〜１０００００ミクロンで、その長さが０．３ｍｍから３０００００ｍｍでかつその容量が１０ｍＬ以下であり、好ましくは１ｍＬ以下であり、より好ましくは０．５ｍＬである。同体積であれば、好ましくは円盤状よりは円筒状の管である反応管を採用する。
（本発明の固相自動合成装置の反応工程における特徴）
試薬や溶媒の拡散混合時間を節約するためには、反応容器は小型であることがよく、反応管１系列の内径が１００〜１２００００ミクロン、好ましくは１０００〜１０００００ミクロンで、その長さが０．３ｍｍから３０００００ｍｍでかつその容量が１０ｍＬ以下であり、好ましくは１ｍＬ以下であり、より好ましくは０．５ｍＬである。同体積であれば、好ましくは円盤状よりは円筒状の管である反応管を採用する。
また、反応試薬の使用量を必要最小量の「反応管に保持されたレジンの膨潤相当量」とし、過剰の試薬の量を用いることなく、環境負荷が少ない方法である。さらにこの方式は別の利点をもつ。すなわち、レジンは多孔質体であり、反応管に保持されたレジン内部の微小流路内で反応を実施するため、本質的に拡散混合時間ｔが短い。
ｔ＝ｒ2÷Ｄ （式１）
ｔ：拡散混合時間 ｒ：多孔質体の細孔半径 Ｄ：拡散係数
ｔ：拡散混合時間 ｒ：多孔質体の細孔半径 Ｄ：拡散係数
例えば、細孔半径が１０ミクロンの多孔質体内でのショ糖の拡散は、Ｄ＝０．５×１０-9ｍ2／ｓｅｃであり、（式１）によれば、拡散混合時間は１秒以内である。試薬の撹拌のために振動や回転などの動力をまったく用いる必要はないといえる。
本発明では、必要最小量であるレジン膨潤量の反応試薬を反応管内に保持されたレジンまで輸送するのに、窒素などの不活性ガスを用いて圧送し、レジンに液が到達し膨潤が終了したことを液面センサーで検出し、送液を停止することができる。すなわち、液面センサーを反応管の出口に設置してレジンに試薬が浸みだしてきた時点で液面を検出し、送液を停止し、不必要に試薬が供給されることを確実に防止することができる。
反応部のプログラム温度制御に関して、取り扱う反応の活性化エネルギーＥａと生成物の熱分解性を考慮して、遅い反応であれば、適切な初期温度と終期温度と保持時間と昇温速度を設定し、昇温反応を実施して、反応時間を短縮することが可能である。
ｋ（Ｔ＋△Ｔ）／ｋ（Ｔ）＝ｅｘｐ（−Ｅａ／Ｒ（１／（Ｔ＋△Ｔ）−１／Ｔ）（式２）
ｋ：１次速度定数 Ｔ：温度 △Ｔ：温度差 Ｅａ：活性化エネルギー
ｋ（Ｔ＋△Ｔ）／ｋ（Ｔ）＝ｅｘｐ（−Ｅａ／Ｒ（１／（Ｔ＋△Ｔ）−１／Ｔ）（式２）
ｋ：１次速度定数 Ｔ：温度 △Ｔ：温度差 Ｅａ：活性化エネルギー
例えば、活性化エネルギーＥａ＝５０Ｋｃａｌ／ｍｏｌの１次反応であれば、反応温度を３０℃あげることにより反応速度が約２倍となり、よって反応時間を約１／２に短縮できる。
（本発明の固相自動合成装置の洗浄工程における特徴）
レジン内に残存する試薬化合物の洗浄効果の向上させるために、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドなどの極性溶媒とジクロルエタンなどの無極性溶媒を併用する。通常レジン内に残存しやすい化合物は水などの極性を有する化合物である。これらを除去するには、極性溶媒がよい。本法においては、レジン約１００ｍｇに対し、レジン内部に浸透した試薬を最初に約２Ｌの窒素で送り追いだし、次にラインを洗浄するためにジクロルエタン等の無極性溶媒を約５ｍＬで洗い、次にレジン中の極性化合物を除去するためにＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド等の極性溶媒で約１０ｍＬで洗い、最後にジクロルエタン等の無極性溶媒を約５ｍＬで洗う。最後に無極性溶媒で洗うのは極性溶媒が一般に沸点が高く、乾燥工程での蒸発除去に時間がかかるため、乾燥時間の節約のため必要である。合計の洗浄時間は約２０分である。
レジン内に残存する試薬化合物の洗浄効果の向上させるために、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドなどの極性溶媒とジクロルエタンなどの無極性溶媒を併用する。通常レジン内に残存しやすい化合物は水などの極性を有する化合物である。これらを除去するには、極性溶媒がよい。本法においては、レジン約１００ｍｇに対し、レジン内部に浸透した試薬を最初に約２Ｌの窒素で送り追いだし、次にラインを洗浄するためにジクロルエタン等の無極性溶媒を約５ｍＬで洗い、次にレジン中の極性化合物を除去するためにＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド等の極性溶媒で約１０ｍＬで洗い、最後にジクロルエタン等の無極性溶媒を約５ｍＬで洗う。最後に無極性溶媒で洗うのは極性溶媒が一般に沸点が高く、乾燥工程での蒸発除去に時間がかかるため、乾燥時間の節約のため必要である。合計の洗浄時間は約２０分である。
また、洗浄工程においてはレジン粒子の大きさとレジンを保持するために設けられているフィルター目開きの大きさにより、閉塞や圧上昇の問題があり、迅速かつ円滑な洗浄のためには、適当な大きさを採用する必要がある。
本法においては、固相として使用するレジンの粒子径が溶媒を吸収した状態で２〜５００ミクロン、特に３０〜４００ミクロンであることが好ましい。また、レジンを反応容器内に保持する際に、使用するフィルター目開きが３０ミクロン以上、好ましくが１００ミクロン以上でレジンを流出しない大きさであるものを採用することが好ましい。市販のフィルターは、例えばＬＣ用のものは５ミクロンから２０ミクロンであり、送液にかなり圧がかかる。本法のものを使用すれば圧は０．５ＭＰａ程度である。
（本発明の固相自動合成装置の乾燥工程における特徴）
レジン中の溶媒を除去するために、Ａブロックより約２Ｌの窒素を流通するが、真空ポンプを用いて反応管内を減圧にし、乾燥を迅速におこなうことができる。乾燥時間は約３０分である。
レジン中の溶媒を除去するために、Ａブロックより約２Ｌの窒素を流通するが、真空ポンプを用いて反応管内を減圧にし、乾燥を迅速におこなうことができる。乾燥時間は約３０分である。
さらなる洗浄時間と乾燥時間の短縮の方法として、図２では、ＡブロックとＢブロックとＥブロックに追加の３方切り替えバルブＶ３５〜Ｖ４４を備えた自動合成装置を提案する。この方式では、反応容器Ｒ１〜Ｒ４を同時に溶媒洗浄操作可能であり、また同時に乾燥操作可能であるので、著しく操作時間の短縮が可能である。
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
上記した図１又は図２に記載の本発明の固相自動合成装置を用いて糖を合成する実施例を以下に示す。
１．糖鎖合成における固相自動合成装置の自動操作法
参考文献Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６、１２０７３−１２０７４（１９９４）に記載される反応の方法により、ベンジル基を保護基とする保護単糖、フェニル−１−チオ−２，３−ジベンジル−４−Ｏ−サクシニル−Ｌ−フコピラノシド（試薬Ａと略す）、３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−ガラクトピラノシルフルオライド（試薬Ｂと略す）、フェニル−１−チオ−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシド（試薬Ｃと略す）を用いて、グルコース−ガラクトース−フコースの３糖誘導体を自動合成する。
参考文献Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６、１２０７３−１２０７４（１９９４）に記載される反応の方法により、ベンジル基を保護基とする保護単糖、フェニル−１−チオ−２，３−ジベンジル−４−Ｏ−サクシニル−Ｌ−フコピラノシド（試薬Ａと略す）、３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−ガラクトピラノシルフルオライド（試薬Ｂと略す）、フェニル−１−チオ−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシド（試薬Ｃと略す）を用いて、グルコース−ガラクトース−フコースの３糖誘導体を自動合成する。
２．レジンのセットアップ
Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社のＮｏｖａｓｙｎＴＧアミノレジン（アミノ基濃度０．２９ｍｍｏｌ／ｇ）１５ｍｇを反応管Ｒ１に充填する。
Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社のＮｏｖａｓｙｎＴＧアミノレジン（アミノ基濃度０．２９ｍｍｏｌ／ｇ）１５ｍｇを反応管Ｒ１に充填する。
３．試薬のセットアップ
ボトルＢ２に脱水ジクロルエタンを２００ｍｌ、ボトルＢ３に脱水Ｎ，Ｎ‘−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦと略す）を２００ｍｌ入れる。
シリンジＳ４に、試薬Ａを５ｍｇ、Ｎ，Ｎ‘−ジイソプロピルカルボジイミド２μｌ及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール２ｍｇを脱水ＤＭＦ０．２ｍｌに溶解して充填する。
シリンジＳ５に、試薬Ｂを３ｍｇ、ジメチルジスルフィド３μｌ及びメチルトリフラート３μｌを脱水ジクロルエタン０．０５ｍｌと脱水アセトニトリル０，０５ｍｌに溶解させ、モレキュラーシーブ４Ａを２ｍｇ添加し、ろ過したたものを充填する。
シリンジＳ６に、試薬Ｃを３ｍｇ及びトリフル酸銀５ｍｇを脱水ジクロルエタン０．０６ｍｌと脱水アセトニトリル０．０６ｍｌに溶解させ、モレキュラーシーブ４Ａを４ｍｇ添加し、ろ過したものを充填する。
シリンジＳ７に、１−オクタノール８μｌ、ジメチルスルフィド３μｌ及びメチルトリフラート３μｌを脱水ジクロルエタン０．０６ｍｌと脱水アセトニトリルに溶解させ、モレキュラーシーブ４Ａを２ｍｇ添加し、ろ過したものを充填する。
シリンジＳ８に、ピリジン０．５ｍｌと無水酢酸０．５ｍｌを混合したものを充填する。
シリンジＳ９に、０．２５Ｍナトリウムメトキシド・メタノール溶液を１ｍｌ充填する。
ボトルＢ２に脱水ジクロルエタンを２００ｍｌ、ボトルＢ３に脱水Ｎ，Ｎ‘−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦと略す）を２００ｍｌ入れる。
シリンジＳ４に、試薬Ａを５ｍｇ、Ｎ，Ｎ‘−ジイソプロピルカルボジイミド２μｌ及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール２ｍｇを脱水ＤＭＦ０．２ｍｌに溶解して充填する。
シリンジＳ５に、試薬Ｂを３ｍｇ、ジメチルジスルフィド３μｌ及びメチルトリフラート３μｌを脱水ジクロルエタン０．０５ｍｌと脱水アセトニトリル０，０５ｍｌに溶解させ、モレキュラーシーブ４Ａを２ｍｇ添加し、ろ過したたものを充填する。
シリンジＳ６に、試薬Ｃを３ｍｇ及びトリフル酸銀５ｍｇを脱水ジクロルエタン０．０６ｍｌと脱水アセトニトリル０．０６ｍｌに溶解させ、モレキュラーシーブ４Ａを４ｍｇ添加し、ろ過したものを充填する。
シリンジＳ７に、１−オクタノール８μｌ、ジメチルスルフィド３μｌ及びメチルトリフラート３μｌを脱水ジクロルエタン０．０６ｍｌと脱水アセトニトリルに溶解させ、モレキュラーシーブ４Ａを２ｍｇ添加し、ろ過したものを充填する。
シリンジＳ８に、ピリジン０．５ｍｌと無水酢酸０．５ｍｌを混合したものを充填する。
シリンジＳ９に、０．２５Ｍナトリウムメトキシド・メタノール溶液を１ｍｌ充填する。
４．レジンの乾燥
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１に流せるようにバルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７を切り替え、反応管Ｒ１を真空ラインで脱気できるように、バルブＶ３１を切り替え、反応管Ｒ１に窒素を３０分間流し、アミノレジンを洗浄及び乾燥する。
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１に流せるようにバルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７を切り替え、反応管Ｒ１を真空ラインで脱気できるように、バルブＶ３１を切り替え、反応管Ｒ１に窒素を３０分間流し、アミノレジンを洗浄及び乾燥する。
５．１糖目のレジンへの結合
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ４から試薬を流せるように、バルブＶ１４，バルブＶ４、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ４より、送液流量１００μ／ｍｉｎで０．１２ｍｌ量を送液し、所定量に達したら、シリンジポンプを停止する。次に質量流量計ＭＦ１から窒素を反応管Ｒ１に流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡを切り替え、窒素を１ＳＣＣＭ以下で流し、反応試薬を反応管Ｒ１へ導く。レジンの膨潤が終了し、反応試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで反応試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、反応を行う。
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ４から試薬を流せるように、バルブＶ１４，バルブＶ４、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ４より、送液流量１００μ／ｍｉｎで０．１２ｍｌ量を送液し、所定量に達したら、シリンジポンプを停止する。次に質量流量計ＭＦ１から窒素を反応管Ｒ１に流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡを切り替え、窒素を１ＳＣＣＭ以下で流し、反応試薬を反応管Ｒ１へ導く。レジンの膨潤が終了し、反応試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで反応試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、反応を行う。
６．洗浄と乾燥
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
７．残アミノ基のキャッピング
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ８から試薬を流せるように、バルブＶ１８，バルブＶ８、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ８より、送液流量１００μ／ｍｉｎで送液し、試薬を反応管Ｒ１へ導き、試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、レジン中のアミノ基を無水酢酸でキャッピングする反応を行う。
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ８から試薬を流せるように、バルブＶ１８，バルブＶ８、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ８より、送液流量１００μ／ｍｉｎで送液し、試薬を反応管Ｒ１へ導き、試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、レジン中のアミノ基を無水酢酸でキャッピングする反応を行う。
８．洗浄と乾燥
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
９．２糖目の結合
反応管Ｒ１の温度を０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ５から試薬を流せるように、バルブＶ１５，バルブＶ５、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ５より、送液流量１００μ／ｍｉｎで０．１０ｍｌ量を送液し、所定量に達したら、シリンジポンプを停止する。次に質量流量計ＭＦ１から窒素を反応管Ｒ１に流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡを切り替え、窒素を１ＳＣＣＭ以下で流し、反応試薬を反応管Ｒ１へ導く。レジンの膨潤が終了し、反応試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで反応試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、反応を行う。
反応管Ｒ１の温度を０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ５から試薬を流せるように、バルブＶ１５，バルブＶ５、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ５より、送液流量１００μ／ｍｉｎで０．１０ｍｌ量を送液し、所定量に達したら、シリンジポンプを停止する。次に質量流量計ＭＦ１から窒素を反応管Ｒ１に流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡを切り替え、窒素を１ＳＣＣＭ以下で流し、反応試薬を反応管Ｒ１へ導く。レジンの膨潤が終了し、反応試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで反応試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、反応を行う。
１０．洗浄と乾燥
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
１１．３糖目の結合
反応管Ｒ１の温度を−１５℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ６から試薬を流せるように、バルブＶ１６，バルブＶ６、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ６より、送液流量１００μ／ｍｉｎで０．１２ｍｌ量を送液し、所定量に達したら、シリンジポンプを停止する。次に質量流量計ＭＦ１から窒素を反応管Ｒ１に流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡを切り替え、窒素を１ＳＣＣＭ以下で流し、反応試薬を反応管Ｒ１へ導く。レジンの膨潤が終了し、反応試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで反応試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、反応温度を−１５℃から２０℃に昇温速度１℃／ｈで温度を上げながら、その間１２時間静置し、反応を行う。
反応管Ｒ１の温度を−１５℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ６から試薬を流せるように、バルブＶ１６，バルブＶ６、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ６より、送液流量１００μ／ｍｉｎで０．１２ｍｌ量を送液し、所定量に達したら、シリンジポンプを停止する。次に質量流量計ＭＦ１から窒素を反応管Ｒ１に流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡを切り替え、窒素を１ＳＣＣＭ以下で流し、反応試薬を反応管Ｒ１へ導く。レジンの膨潤が終了し、反応試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで反応試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、反応温度を−１５℃から２０℃に昇温速度１℃／ｈで温度を上げながら、その間１２時間静置し、反応を行う。
１２．洗浄と乾燥
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
１３．１−オクタノールによるエステル誘導体化
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ７から試薬を流せるように、バルブＶ１７，バルブＶ７、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ７より、送液流量１００μ／ｍｉｎで送液し、試薬を反応管Ｒ１へ導き、試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、レジン中の３糖誘導体の１−オクタノール化反応を行う。
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ７から試薬を流せるように、バルブＶ１７，バルブＶ７、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ７より、送液流量１００μ／ｍｉｎで送液し、試薬を反応管Ｒ１へ導き、試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、１２時間静置し、レジン中の３糖誘導体の１−オクタノール化反応を行う。
１４．洗浄と乾燥
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
１５．切り出し
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ９から試薬を流せるように、バルブＶ１９，バルブＶ９、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ９より、送液流量１００μｌ／ｍｉｎで送液し、試薬を反応管Ｒ１へ導き、試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、２時間静置し、レジン中の３糖誘導体の切り出し反応を行う。
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１にシリンジＳ９から試薬を流せるように、バルブＶ１９，バルブＶ９、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、シリンジＳ９より、送液流量１００μｌ／ｍｉｎで送液し、試薬を反応管Ｒ１へ導き、試薬が反応管Ｒ１の出口に達し、出口に設置された液面センサーで試薬の存在を検知したら、バルブＶ１３、バルブＶ２３、バルブＶ２７を閉とし、反応管内に反応試薬を保ったまま、２時間静置し、レジン中の３糖誘導体の切り出し反応を行う。
１６．生成物の回収
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１に質量流量計ＭＦ２から窒素を流し、上記切り出し液をボトルＴ４に回収できるように、バルブＶ１３，バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、質量流量計ＭＦ２より、流量１００ｍｌ／ｍｉｎで窒素を流し、切り出し液をＴ４へ導き、回収する。
反応管Ｒ１の温度を２０℃にする。反応管Ｒ１に質量流量計ＭＦ２から窒素を流し、上記切り出し液をボトルＴ４に回収できるように、バルブＶ１３，バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、質量流量計ＭＦ２より、流量１００ｍｌ／ｍｉｎで窒素を流し、切り出し液をＴ４へ導き、回収する。
１７．操作終了後の反応管の洗浄と乾燥
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
質量流量計ＭＦ２から窒素を反応管Ｒ１からトラップボトルに流せるように、バルブＶ１３、バルブＶ１、バルブＶＡ、バルブＶ２３、バルブＶ２７、バルブＶ３１を切り替え、窒素を１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で流し、反応液をトラップボトルに回収する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを５分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。次に、ボトルＢ３からＤＭＦを流せるように、ポンプＰ３を起動し、バルブＶ３、バルブＶＡを切り替えて、ＤＭＦ流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ３を停止する。次に、ボトルＢ２からジクロルエタンを反応管Ｒ１経由でトラップボトルに流せるように、ポンプＰ２を起動し、バルブＶ２、バルブＶＡを切り替えて、ジクロルエタン流量１ｍｌ／ｍｉｎで反応管内のレジンを１０分間洗浄し、ポンプＰ２を停止する。
以上は、糖鎖の合成例であり、用いる試薬の流量および窒素の流量及び反応温度および反応時間等が、特に制約されるものではない。
Claims (15)
- 合成反応を行うための複数の反応試薬及び溶媒の保管容器、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応管に供給するための配管、該反応試薬及び溶媒を微小管状反応器に供給させるための送液手段、微小管状反応器に所望の反応試薬及び溶媒だけを供給させるための切り替えバルブ、並びに反応基質固定化用担体が充填された微小管状反応器を含む固相自動合成装置であって、前記微小管状反応器内に必要量の反応試薬を送液後、送液を停止した状態で所望の合成反応を行わせ、反応終了後、担体に固定化された反応物以外の反応試薬を溶媒にて洗浄除去できる機能を有することを特徴とする固相自動合成装置。
- 微小管状反応器の内径が０．１〜１０ｃｍであり、容量が０．５〜１０ｍｌである、請求項１に記載の固相自動合成装置。
- 反応基質固定化用担体が樹脂である、請求項１又は２に記載の固相自動合成装置。
- 反応試薬の必要量が反応管に充填された樹脂の膨潤相当量である、請求項３に記載の固相自動合成装置。
- 樹脂の膨潤が終了したことを液面センサーで検知して、送液を自動的に停止する機構を有する、請求項３又は４に記載の固相自動合成装置。
- 樹脂の粒子径が、膨潤状態で２〜５００ミクロンである、請求項３から５のいずれかに記載の固相自動合成装置。
- 多糖類合成用である、請求項１から６のいずれかに記載の固相自動合成装置。
- Ｎ個の配列された試薬及び溶媒容器群と、Ｍ個の配列された微小管状反応器群を含み、該試薬及び溶媒容器群と該微小管状反応器群との間に配置される切り替えバルブ群に関して、試薬及び溶媒容器群に接続されるＭ方切り替えバルブ群と微小管状反応器群に接続されるＮ方切り替えバルブ群（ここで、Ｍは２〜２０の整数であり、Ｎは２〜２０の整数である）を備えている、請求項１から７の何れかに記載の固相自動合成装置。
- Ｍ個の微小管状反応器が直列に接続されている、請求項８に記載の固相自動合成装置。
- 微小管状反応器の温度を調節するための温度調節部をさらに有し、該温度調節部が、初期温度と、終期温度と、初期温度と終期温度との間の昇温速度とを設定制御できる機能を有する、請求項１から９の何れかに記載の固相自動合成装置。
- 以下のＡブロック〜Ｈブロックから構成される、請求項１から１０の何れかに記載の固相自動合成装置。
（Ａ） ガス容器Ｂ１の不活性ガスを用いて送液操作を行う流量計ＭＦ１と乾燥操作を行う流量計ＭＦ２を備え、３方切り替えバルブＶ１３により、乾燥操作か送液操作かが選択されるＡブロック；
（Ｂ） 溶媒容器Ｂ２と溶媒容器Ｂ３からの極性溶媒及び無極性溶媒を用いて洗浄操作を行うためのポンプＰ１とポンプＰ２を備える、Ｂブロック；
（Ｃ） Ｘ個（Ｘは２〜１７の整数を示す）の反応用の試薬ボトルＢ４からＢＹ（ここで、ＹはＸ＋３で表される整数を示す）の試薬を吸引して送液する操作を行うシリンジポンプＳ４からＳＹを備え、吸引か送液かを選択するためにＸ個の３方切り替えバルブＶ１４からＶＺ（Ｚ＝Ｘ＋１３で表される整数を示す）を備える、Ｃブロック；
（Ｄ） Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、ＣブロックのＸ個の試薬群を複数の反応容器に配分するための切り替えＹ個のバルブ群Ｖ１からＶＹを備える、Ｄブロック；
（Ｅ） Ａブロックの不活性ガス、Ｂブロックの洗浄溶媒、ＣブロックのＸ個の試薬群をそれぞれ所定のＭ個（Ｍは２〜２０の整数を示す）の反応容器に供給するためのＭ個の切り替えバルブと、反応器をバイパスして上流のバルブ群を乾燥したい場合に使用するＭ個の３方切り替えバルブを備える、ブロックＥ；
（Ｆ）固相であるレジン粒子を充填したＭ個の反応容器をブロックに固定保持した部分と温度センサーと液面センサーとを備える、ブロックＦ；
（Ｇ）Ｍ個の反応容器を通液した溶媒及び各種の試薬液を回収するトラップと切り出した生成液を回収するＭ個の回収ボトルを備える、ブロックＧ；及び
（Ｈ）ＡブロックからＧブロックの流量制御、バルブ制御、温度制御及び液面制御を行うための手段を備える、Ｈブロック。 - Ｍ個の反応容器を同時に溶媒洗浄でき、またＭ個の反応容器を同時に乾燥することができるように、ＡブロックとＢブロックとＥブロックにさらに追加の３方切り替えバルブが備えられている、請求項１１に記載の固相自動合成装置。
- 請求項１から１２の何れかに記載の固相自動合成装置を用いて、固相自動合成を行う方法。
- 反応試薬及び溶媒の送液を、不活性ガスを用いて圧送することにより行う、請求項１３に記載の方法。
- 極性溶媒と無極性溶媒を併用して洗浄を行う、請求項１３又は１４に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004117682A JP2005296832A (ja) | 2004-04-13 | 2004-04-13 | 固相自動合成装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| JP2004117682A JP2005296832A (ja) | 2004-04-13 | 2004-04-13 | 固相自動合成装置 |
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|---|---|
| JP2005296832A true JP2005296832A (ja) | 2005-10-27 |
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| JP2004117682A Withdrawn JP2005296832A (ja) | 2004-04-13 | 2004-04-13 | 固相自動合成装置 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020157239A (ja) * | 2019-03-27 | 2020-10-01 | ヤマト科学株式会社 | 反応容器の液面制御装置 |
| JP2021065821A (ja) * | 2019-10-21 | 2021-04-30 | ヤマト科学株式会社 | 制御装置、プログラム、及び固相合成装置 |
| CN114130346A (zh) * | 2021-02-02 | 2022-03-04 | 申联生物医药（上海）股份有限公司 | 全自动固相有机合成模块化设备 |
-
2004
- 2004-04-13 JP JP2004117682A patent/JP2005296832A/ja not_active Withdrawn
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