JP2000245490A - 新規高分子物質ａｐｒ−３の生産方法、及び生産菌の保存方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 より優れた油水分離能及びカリオン凝集活性
を有する新規高分子物質ＡＰＲ−３を安定して、収率よ
く且つ簡便に大量生産する方法を提供すること。 【解決手段】 より優れた油水分離能及びカリオン凝集
活性を有する新規高分子物質ＡＰＲ−３の生産能を有す
る微生物をサイアミン含有培地に、特に少なくとも当該
微生物一種を含む複合微生物を複合的若しくは複合培養
してＡＰＲ−３を培地中に著量生産・蓄積させる。又、
該微生物をサイアミン含有培地で保存・植えつぎを行
う。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規高分子物質
（以下、ＡＰＲ−３という）の生産方法、微生物産生凝
集剤及び排水凝集方法に関し、更に詳しくは、油水分離
能及び凝集活性を有するＡＰＲ−３の生産方法であり、
ＡＰＲ−３の特性から、油環境汚染における油除去処理
に用いる油水分離剤、活性汚泥方法における排水凝集処
理に使用する微生物産生凝集剤、並びにそれを用いる排
水処理方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から、活性汚泥方法における排水凝
集処理に使用する微生物産生凝集剤の生産方法として、
アルカリゲネス・レイタス（Alcaligenes latas）、ア
ルカリゲネス・キュピダス（Alcaligenes cupidus）、
ロドコッカス・エリスロポリス（Rhodococcus erythrop
olis）等の微生物を用いる方法が知られていた。それ
は、それらの微生物を培養して得られる培養液をそのも
のを、排水凝集処理に用いる微生物産生凝集剤とするも
のである。しかしながら、得られる培養液は凝集活性が
低いものであった。ましてや、培養液の油水分離能につ
いて試されたことはなかった。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、上記
の問題に鑑み、人と環境に優しく安全であり、且つより
優れた油水分離能及び凝集活性を有するＡＰＲ−３を、
安定して、収率よく且つ簡便に生産する方法、及び当該
方法により生産されるＡＰＲ−３を含有してなる微生物
産生凝集剤並びにそれを用いる排水処理方法を提供する
ことにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
達成のために鋭意努力した結果、特定の微生物群が、従
来知られていない高分子物質を生産すること、又、それ
らの特定微生物群をサイアミン含有培地に混合して複合
的培養、若しくは複合培養すると、その高分子物質が培
地中に安定して、著量生産・蓄積され、かつ長時間にわ
たって該物質の生産性が高いレベルで維持され、回分培
養、連続的回分培養（回分培養において培養終了時の培
養液を種培養液として次の培養に次々使用する形式の培
養方法）、連続培養が可能であること、そして、その培
養液はより優れた油水分離能及び凝集活性を有すること
等の知見を得た。本発明は、この知見に基づいて完成さ
れた。

【０００５】すなわち、本発明は、１）以下の特性を有
するＡＰＲ−３の生産能（以下、ＡＰＲ−３生産能とい
う。）を有する微生物をサイアミン含有培地に培養し、
ＡＰＲ−３を培地中に生産・蓄積させることを特徴とす
るＡＰＲ−３の生産方法を提供する。 （１）油水分離能を有する。 （２）凝集活性を有する。 （３）糖含有量（フェノール・硫酸法）：（６４±２）
重量％ （４）アミノ糖（エルソン・モーガン法）：検出されな
い。 （５）ウロン酸（カルバゾール・硫酸法）：検出されな
い。 （６）蛋白質（ニンヒドリン法）：検出されない。 （７）元素分析：炭素Ｃ＝（４０±２）％、水素Ｈ＝
（６±１）％、窒素Ｎ、リンＰ及び硫黄Ｓは痕跡。 （８）構成する糖及び有機酸の組成（モル比）：ガラク
トース１、グルコース（５．６±０．１）、コハク酸
（０．６±０．１）、ピルビン酸（２．５±０．１）。 （９）分子量：２×１０⁶以上。 （１０）粘度（ビスメトロン回転粘度計、ＳＳ−２ロー
ター、２５℃、回転数３〜６０ｒｐｍ、溶媒は純水、Ｈ
型ＡＰＲ−３の０５重量％濃度溶液）：（９，０００±
１，０００）ｃＰ。 （１１）溶媒溶解性：水に可溶、アルカリに易溶、メタ
ノール、エタノール及びアセトンに不溶。 （１２）比旋光度（２０℃）：−１７〜−１５° （１３）ＩＲスペクトル吸収帯（ｃｍ^-1）：２，７００
〜３，７００、１，７３０、１，６００、１，４００、
１，１６０。

【０００６】又、本発明は、２）サイアミン含有培地の
サイアミン濃度が２〜２０００μｇ／ｌである前記１）
記載のＡＰＲ−３の生産方法を提供する。

【０００７】又、本発明は、３）ＡＰＲ−３生産能を有
する微生物が、ＡＰＲ−３生産能を有する微生物を少な
くとも１種を含む複合微生物からなるものであり、当該
複合微生物を複合的培養若しくは複合培養する前記１）
又は２）に記載のＡＰＲ−３の生産方法を提供する。

【０００８】又、本発明は、４）ＡＰＲ−３生産能を有
する微生物が、細菌である前記１）、２）又は３）に記
載のＡＰＲ−３の生産方法を提供する。又、本発明は、
５）ＡＰＲ−３生産能を有する微生物が、ブルセラ属、
ザントモナス属、アシネトバクター属、コマモナス属、
サルモネラ属、オーレオバクテリウム属、セルロモナス
又はアグロバクテリウム属に属するものである前記
１）、２）、３）又は４）に記載のＡＰＲ−３の生産方
法を提供する。

【０００９】又、本発明は、６）ＡＰＲ−３生産能を有
する微生物の少なくとも１種を含む複合微生物が、セル
ロモナス・セルランス、アグロバクテリウム・ツメファ
シエンス及びそれらに極めて近い種に属する細菌の少な
くとも１種を含むものである前記３）に記載のＡＰＲ−
３の生産方法を提供する。

【００１０】又、本発明は、７）ＡＰＲ−３生産能を有
する微生物の少なくとも１種を含む複合微生物が、セル
ロモナス・セルランスＫＹＭ−７株、アグロバクテリウ
ム・ツメファシエンス及びそれらに極めて近い種に属す
るＫＹＭ−８株（ＦＥＲＭＰ−１６８０６）の少なくと
も１種を含むものである前記３）に記載のＡＰＲ−３の
生産方法を提供する。

【００１１】又、本発明は、８）ＡＰＲ−３生産能を有
する微生物の少なくとも１種を含む複合微生物が、セル
ロモナス・セルランスＫＹＭ−７株、アグロバクテリウ
ム・ツメファシエンス及びそれらに極めて近い種に属す
るＫＹＭ−８株の少なくとも１種を含み、且つブルセラ
属、ザントモナス属、アシネトバクター属、コマモナス
属、サルモネラ属、オーレオバクテリウム属及びセルロ
モナス属に属する微生物から選ばれる少なくとも１種を
含むものである前記３）に記載のＡＰＲ−３の生産方法
を提供する。

【００１２】又、本発明は、９）ブルセラ属に属する微
生物がブルセラｓｐ．ＫＹＭ−１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
１３３３）、ステノトロフォモナス又はザントモナスの
グループに属する微生物がＫＹＭ−２株（ＦＥＲＭ Ｐ
−１１３３４）、アシネトバクター属に属する微生物が
アシネトバクターｓｐ．ＫＹＭ−３株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１１３３５）、コマモナス属に属するコマモナス・テス
トステロニーと同種かそれに極めて近い種に属するＫＹ
Ｍ−４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３３６）、サルモネラ属
に属する微生物がサルモネラｓｐ．ＫＹＭ−５株（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１１３３７）、オーレオバクテリウム属に属
する微生物がオーレオバクテリウムｓｐ．ＫＹＭ−６株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３３８）である前記５）、又は
８）に記載のＡＰＲ−３の生産方法を提供する。

【００１３】又、本発明は、１０）前記１）、２）、
３）、４）、５）、６）、７）、８）又は９）に記載の
方法により得られる培養物からＡＰＲ−３を採取するこ
とを特徴とするＡＰＲ−３の生産方法を提供する。

【００１４】又、本発明は、１１）前記１）、２）、
３）、４）、５）、６）、７）、８）又は９）に記載の
ＡＰＲ−３生産能を有する微生物を、サイアミン含有培
地に保存することを特徴とするＡＰＲ−３生産能を有す
る微生物の保存方法を提供する。又、本発明は、１２）
サイアミン含有培地のサイアミン濃度が２〜２０００μ
ｇ／ｌである前記１１）記載のＡＰＲ−３生産能を有す
る微生物の保存方法を提供する。

【００１５】又、本発明は、１３）前記１）、２）、
３）、４）、５）、６）、７）、８）又は９）に記載の
方法により得られる培養物を主成分として含有してなる
ことを特徴とする微生物産生凝集剤を提供する。又、本
発明は、１４）カチオン性無機塩を１種以上含有する前
記１３）に記載の微生物産生凝集剤を提供する。

【００１６】又、本発明は、１５）前記１３）又は１
４）に記載の微生物産生凝集剤を懸濁物含有排水に接触
せしめることを特徴とする排水凝集処理方法を提供す
る。

【００１７】又、本発明は、１６）活性汚泥方法による
排水凝集処理方法において、前記１３）又は１４）に記
載の微生物産生凝集剤を処理系に存在させ、活性汚泥と
処理水との分離領域において、活性汚泥のバルキングを
防止することを特徴とする排水凝集処理方法を提供す
る。

【００１８】又、本発明は、１７）活性汚泥の分離領域
のｐＨを、７〜９に保持する前記１５）又は１６）に記
載の排水凝集処理方法を提供する。

【００１９】又、本発明は、１８）被処理排水が糸状菌
を発生しやすい排水である前記１５）、１６）、又は１
７）に記載の排水凝集処理方法を提供する。

【００２０】

【発明の実施の形態】次に実施形態を挙げて本発明を更
に詳しく説明する。しかし、本発明はこの実施形態によ
り何ら限定されるものではない。本発明でいうＡＰＲ−
３とは、次の特質を有する高分子物質である。

【００２１】（１）油水分離能を有する。 （２）凝集活性を有する。 （３）糖含有量（フェノール・硫酸法）：（６４±２）
重量％ （４）アミノ糖（エルソン・モーガン法）：検出されな
い。 （５）ウロン酸（カルバゾール・硫酸法）：検出されな
い。 （６）蛋白質（ニンヒドリン法）：検出されない。 （７）元素分析：炭素Ｃ＝（４０±２）％、水素Ｈ＝
（６±１）％、窒素Ｎ、リンＰ及び硫黄Ｓは痕跡。 （８）構成する糖及び有機酸の組成（モル比）：ガラク
トース１、グルコース（５．６±０．１）、コハク酸
（０．６±０．１）、ピルビン酸（２．５±０．１）。 （９）分子量：２×１０⁶以上。 （１０）粘度（ビスメトロン回転粘度計、ＳＳ−２ロー
ター、２５℃、回転数３〜６０ｒｐｍ、溶媒は純水、Ｈ
型ＡＰＲ−３の０５重量％濃度溶液）：９，０００（±
１，０００）ｃＰ。 （１１）溶媒溶解性：水に可溶、アルカリに易溶、メタ
ノール、エタノール及びアセトンに不溶。 （１２）比旋光度（２０℃）：−１７〜−１５° （１３）ＩＲスペクトル吸収帯（ｃｍ^-1）：２，７００
〜３，７００、１，７３０、１，６００、１，４００、
１，１６０。 以上の特性を有する高分子物質は現在まで知られていな
いので、当該物質は新規物質である。

【００２２】本発明において、油水分離能とは、油懸濁
水（海水も含む。）を油相と水相とに分離する能力のこ
とをいう。該油水分離能は次のようにして測定される。 Ａ）油水分離能の活性測定法 サラダ油１０ｇとノニオン系界面活性剤Ｔｗｅｅｎ８０
（和光純薬社製：ソルビタンモノオレアートのエチレン
オキシド縮合物）０．５ｇをビーカー中で２〜３分間超
音波処理してサラダ油を乳化させる。この中に撹拌しな
がら海水を加えて全量を２リットルとし、これを油懸濁
水の原水とする。

【００２３】２リットルのビーカーに原水１リットルを
移し、ｐＨを１０に調整する。この原水０．８リットル
を加圧浮上装置（宮本製作所製ＭＳ９０００）に供給す
る。更にサンプル液２０ｍｌを添加して、室温で内容物
を十分に撹拌した後、加圧水を０．３リットル添加す
る。１０〜２０分間静置後、水相のＣＯＤを重クロム酸
カリウム法で測定する。活性はそのＣＯＤ値で示され
る。そして、油水分離能は次式により計算される。 油水分離能＝（（Ａ−Ｂ）／Ａ）×１００（％）、但
し、Ａ：処理前のＣＯＤ値、Ｂ：処理後のＣＯＤ値。

【００２４】又、本発明において、凝集活性とは懸濁物
質の代表例としてカオリンを用いた。しかし懸濁物質は
カオリン以外でもよい。例えば、カオリン懸濁液中のカ
オリン懸濁物を凝集させ、上澄液をつくる活性をいう。
同様にして、排水中の懸濁物を凝集させ、上澄液をつく
る活性をいう。そして、カオリン凝集活性は次のように
して測定される。

【００２５】Ｂ）カオリン凝集活性の測定法 カオリン懸濁液（５，０００ｍｇ／ｌ）８０ｍｌを１０
０ｍｌ容メスシリンダーに分取し、これに１０重量％Ｃ
ａＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ水溶液１０ｍｌ添加した。これにサン
プル液０．１２５ｍｌを加え、ｐＨを８．０に調整し
た。そのシリンダーを室温でゆっくり撹拌し、５分間静
置した。そして、上澄液の濁度をＯＤ５５０ｎｍにて測
定した。カオリン凝集活性は次式によって計算される。 カオリン凝集活性＝（１／Ｃ）−（１／Ｄ） Ｃ：サンプル液についてのＯＤ５５０ｎｍ値 Ｄ：水（ブランク液）についてのＯＤ５５０ｎｍ値

【００２６】本発明の第一の特徴は、ＡＰＲ−３の生産
能を有する微生物の培養方法にある。即ち、本発明の微
生物をサイアミン含有の固体若しくは液体の栄養培地に
培養してＡＰＲ−３を培地中に安定して、著量生産・蓄
積させるＡＰＲ−３の生産方法である。又、その培養物
からＡＰＲ−３を採取するＡＰＲ−３の生産方法であ
る。

【００２７】サイアミン含有培地とは、培養開始から、
即ち種培養若しくは前培養から、目的のＡＰＲ−３の生
産活性を得るまで、固体若しくは液体の栄養培地中にサ
イアミンが含有していることを意味する。サイアミン濃
度は、２〜２０００μｇ／ｌの濃度、好ましくは５〜１
０００μｇ／ｌの濃度、より好ましくは５〜５００μｇ
／ｌ濃度で培地中に含有していればよい。２μｇ／ｌ以
下の場合はＡＰＲ−３生産活性が極端に低下する。２０
００μｇ／ｌ以上の場合はＡＰＲ−３生産活性がそれ以
上増加しないので、培地にそれ以上含有させることの意
味がなくなる。本発明のサイアミンとは、サイアミン自
体、サイアミン塩酸塩等のサイアミンの各種塩類、サイ
アミンの各種誘導体、サイアミン含有物などをいう。

【００２８】ＡＰＲ−３生産能を有する微生物とは、Ａ
ＰＲ−３を生産できる能力を有する微生物であればよ
く、細菌、放線菌、酵母、カビ等のどのような微生物で
も本発明に使用できる。本発明においては、特にフタル
酸を資化できる特性とスライム形成性を目安にスクリー
ニングして得られたが、スクリーニング方法等に何ら限
定されるものではない。

【００２９】又、本発明の微生物の大きな特徴は、ＡＰ
Ｒ−３生産能を有する微生物の少なくとも１種を含む複
数の微生物の混合物（以下、複合微生物という。）から
なるものである。そしてそれを複合的培養若しくは複合
培養して、ＡＰＲ−３を培養物中に著量生産・蓄積させ
る。複合微生物は、その中の各微生物を少なくとも１種
を単離できるものでもよく、単離できないものでもよ
い。要するに、複合微生物自体がＡＰＲ−３生産能を有
するものであればよい。又、当該複合微生物の中に本発
明の微生物以外のものが混入していても、ＡＰＲ−３の
生産を阻害しない限り、一向に差し支えない。このよう
な複合微生物を用いて、有用物質を生産するという発想
は本発明者らが初めて為したものである。

【００３０】ＡＰＲ−３生産能を有する微生物の中で
も、好ましいものとして細菌類を挙げることができる。
より具体的には、ブルセラ属、ステノトロフォモナス
属、ザントモナス属、アシネトバクター属、コマモナス
属、サルモネラ属、大腸菌属、オーレオバクテリウム
属、セルロモナス属及びアグロバクテリウム属に属する
微生物である。

【００３１】上記の属に属する微生物の中でも、特に好
ましい菌株として、ブルセラ属に属する微生物としてブ
ルセラｓｐ．ＫＹＭ−１株を、ステノトロフォモナス又
はザントモナスのグループに属する微生物としてＫＹＭ
−２株を、アシネトバクター属に属する微生物とそてア
シネトバクターｓｐ．ＫＹＭ−３株を、コマモナス属に
属する微生物としてコマモナス・テストステロニーと同
種かそれに極めて近いＫＹＭ−４株を、サルモネラ属に
属する微生物としてサルモネラｓｐ．ＫＹＭ−５株を、
オーレオバクテリウム属に属する微生物としてオーレオ
バクテリウムｓｐ．ＫＹＭ−６株を、セルロモナス属に
属する微生物としてセルロモナス・セルランスＫＹＭ−
７株を、そしてアグロバクテリウム属に属する微生物と
してアグロバクテリウム・ツメファシエンス若しくはそ
れに極めて近い種に属するＫＹＭ−８株等を挙げること
ができる。

【００３２】上記の微生物の中でも、ＫＹＭ−１、ＫＹ
Ｍ−２、ＫＹＭ−３、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ
−６、ＫＹＭ−７及びＫＹＭ−８の菌株番号が付された
ものは、フタル酸資化性及びスライム形成性を指標とし
て、活性汚泥及び土壌からのスクリーニングより、ＡＰ
Ｒ−３生産能を有する複合微生物として得られたもので
ある。各々、単離してその性質を調べた結果を下記の表
１〜４に示してある。各菌株は、生命工学研究所に寄託
され、ＫＹＭ−１はＦＥＲＭ Ｐ−１１３３３、ＫＹＭ
−２はＦＥＲＭ Ｐ−１１３３４、ＫＹＭ−３はＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１１３３５、ＫＹＭ−４はＦＥＲＭ Ｐ−１１
３３６、ＫＹＭ−５はＦＥＲＭ Ｐ−１１３３７、ＫＹ
Ｍ−６はＦＥＲＭ Ｐ−１１３３８、ＫＹＭ−７はＦＥ
ＲＭ Ｐ−１１３３９、ＫＹＭ−８はＦＥＲＭ Ｐ−１
６８０６の番号が付されている。

【００３３】表１

【００３４】表２

【００３５】表３

【００３６】表４

【００３７】上記のＫＹＭ菌株を、表１〜４に記載の形
態学的及び生理学的性質に基づいて、Bergey's Manual
of Systematic Bacteriology（第１巻、第２巻、第３
巻、第４巻）に記載の分類基準に従って、同定すると、
ＫＹＭ−１は、シュドモナス・ファギー（Pseudomonas
faagi）、ＫＹＭ−２は、ステノトロフォモナス・マル
トフィリア（Xanthomonas maltophilia）、ＫＹＭ−３
は、アセネトバクター・カルコアセティカス（Acinetob
actor calcoaceticus）、ＫＹＭ−４は、ブルクホルデ
リア・セパシア（Burkholderia cepacia）、ＫＹＭ−５
は、ハフニア・アルベイア（Hafnia alveia）、ＫＹＭ
−６は、コリネバクテリウム・アクアチクム（Coryneba
cterium aquaticum）、ＫＹＭ−７は、セルロモナス・
カルタエ（Cellulomonas cartae）、ＫＹＭ−８は、ア
グロバクテリウム・リゾゲネス（Agrobacterium rhizog
enes）に属する菌株である。尚、ブルクホルデリア・セ
パシアは、旧名称シュドモナス・セパシアとされ、ハフ
ニア・アルベイアは、旧名称サルモネラｓｐ．とされ、
そしてセルロモナス・カルタエは、旧名称オエルスコビ
ア属とされていた（再分類され現名称となっている）。

【００３８】しかしながら、最近、１６Ｓ ｒＤＮＡの
塩基配列の相同性から、微生物を発生系統的に同定・分
類する方法が行なわれている（日本微生物生態学会報
（Bulletin of Japanese Society of Microbial Ecolog
y）、１０巻、１１９〜１３６ページ、１９９５年、同
報、１０巻、３１〜４２ページ、１９９５年）。上記の
菌株をこの方法で解析し、その結果を表５に記載した。
表５より同定・分類すると：

【００３９】表５ に属する菌株である。尚、上記の１６Ｓ ｒＤＮＡ解析
法によると、サルモネラ属と大腸菌属に属する微生物
は、同一属の微生物と見做されている。その故に本発明
の微生物は、サルモネラ属又は大腸菌属のどちらの属に
属する微生物でもよい。

【００４０】以上の結果より、本発明の菌株は、ＫＹＭ
−１は、ブルセラｓｐ．又はシュドモナス・ファギー、
ＫＹＭ−２は、ステノトロホモナスｓｐ．又はザントモ
ナス・マルトフィリア、ＫＹＭ−３は、アセネトバクタ
ー・カルコアセティカス、ＫＹＭ−４は、コマモナス・
テストステロニー又はブルクホルデリア・セパシア、Ｋ
ＹＭ−５は、サルモネラｓｐ．又はハフニア・アルベイ
ア、ＫＹＭ−６は、オーレオバクテリウムｓｐ．又はコ
リネバクテリウム・アクアチクム、ＫＹＭ−７は、セル
ロモナス・セルランス又はセルロモナス・カルタエ、Ｋ
ＹＭ−８は、アグロバクテリウム・ツメファシエンス
（Agrobacterium tumefaciens）又はアグロバクテリウ
ム・リゾゲネスに属する菌株である。

【００４１】本発明において、総合的に検討した結果、
ＫＹＭ−１株は、ブルセラｓｐ．に属する菌株、ＫＹＭ
−２株は、ステノトロフォモナス又はザントモナスのグ
ループに属する菌株、ＫＹＭ−３株は、アシネトバクタ
ーｓｐ．属に属する菌株、ＫＹＭ−４株は、コマモナス
・テストステロニーと同種かそれに極めて近い種に属す
る菌株、ＫＹＭ−５株は、サルモネラ又は大腸菌のグル
ープに属する菌株（本発明においては簡便化のためサル
モネラ属という。）、ＫＹＭ−６株は、オーレオバクテ
リウムｓｐ．に属する菌株、ＫＹＭ−７株は、セルロモ
ナス・セルランス若しくはそれに極めて近い種に属する
菌株、又、ＫＹＭ−８株は、アグロバクテリウム・ツメ
ファシエンス若しくはそれに極めて近い種に属する菌株
であると判断した。

【００４２】ＫＹＭ−１〜ＫＹＭ−７菌株は公知菌株で
あるが、ＫＹＭ−８菌株は新規微生物菌株である。それ
故、それは本発明の一実施形態である。以上のことか
ら、本発明の方法で使用する微生物は、ＡＰＲ−３生産
能を有する微生物であればよく、上記のような具体的な
菌名をもって制限されるものではない。

【００４３】本発明において、好ましい実施形態とし
て、ＡＰＲ−３生産能を有する微生物を培養するにあた
り、サイアミン含有培地にＡＰＲ−３生産能を有する微
生物を、それら微生物の少なくとも１種を含む複合微生
物を複合的培養若しくは複合培養することである。それ
故、複合微生物とは、少なくとも上記の属に属する微生
物の中の１種を含む。その中でも特に好ましい実施形態
は、少なくともアグロバクテリウム属に属する微生物及
び／又はセルロモナス属に属する微生物を含むものであ
る。

【００４４】本発明における複合微生物は、ブルセラｓ
ｐ．ＫＹＭ−１株、ステノトロフォモナス又はザントモ
ナスのグループに属するＫＹＭ−２株、アシネトバクタ
ーｓｐ．ＫＹＭ−３、コマモナス・テストステロニーと
同種か極めて近いＫＹＭ−４、サルモネラ属に属するい
ずれかの微生物、オーレオバクテリウム属に属するいず
れかの微生物及びセルロモナス属に属するいずれかの微
生物からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物
と、アグロバクテリウム・ツメファシエンス若しくはそ
れに極めて近いＫＹＭ−８との組合せを含む。

【００４５】若しくは、ブルセラｓｐ．ＫＹＭ−１株、
ステノトロフォモナス又はザントモナスのグループに属
するＫＹＭ−２株、アシネトバクターｓｐ．ＫＹＭ−
３、コマモナス・テストステロニーと同種か極めて近い
ＫＹＭ−４、サルモネラ属に属するいずれかの微生物及
びオーレオバクテリウム属に属するいずれかの微生物か
らなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物と、セル
ロモナス属に属するＫＹＭ−７株との組合せを含む。

【００４６】更に特に好ましい実施形態は、上記の組合
せの中でも、サルモネラ属に属するいずれかの微生物が
ＫＹＭ−５株、オーレオバクテリウム属に属するいずれ
かの微生物がＫＹＭ−６株、セルロモナス属に属するい
ずれかの微生物がＫＹＭ−７株である。

【００４７】上記の組合せの詳しい具体例として一例を
挙げるならば、次の如くである。 （ａ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７ （ｂ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−１ （ｃ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５ （ｄ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ−
４ （ｅ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ−
４、ＫＹＭ−１ （ｆ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−６、ＫＹＭ−
５、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−３、ＫＹＭ−２、ＫＹＭ−１ （ｇ）ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−４ （ｈ）ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−１ （ｉ）ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ−４、 （ｊ）ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−
１

【００４８】本発明で使用する微生物の中でも、ＫＹＭ
−１株〜ＫＹＭ−８株の微生物は、単独の状態又は上記
のいずれの組合せの複合状態で、寒天培地上で、又、液
体培地中でスライムを形成するフロック状態になる。そ
して、フロック状態のまま、植えつぐことも、保存する
こともできる。又、便利に種培養菌として用いることも
できる。それで、上記の組合せの微生物の中でも、
（ｆ）、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、
（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）及び（ｊ）は各々、Ｒ−３菌、
Ｒ−４菌、Ｒ−５菌、Ｒ−６菌、Ｒ−７菌、Ｒ−８菌、
Ｒ−９菌、Ｒ−１０菌、Ｒ−１１菌及びＲ−１２菌と略
称される。

【００４９】上記の菌は、寒天培地上でスライムを形成
する。しかし、このスライム形成は本発明を何ら限定す
るものではない。尚、これらの組合せの菌株を用いて培
養を行なう場合は、寒天培地上でスライムを形成させ、
スライム形成微生物を種菌として用いると便利である。

【００５０】本発明では、上記の本発明の微生物の植え
つぎ、連続植えつぎ、又は保存にあたり、使用する培地
として、液体培地、又寒天培地などの固体培地のどちら
も採用出来る。そして十分な生育量を得ることが出来
る。しかしながら、本培養におけるＡＰＲ−３の生産活
性を良好に得るには、上記の培地にもサイアミンを含有
させることが好適である。そのサイアミンの濃度は、２
〜２０００μｇ／ｌ、好ましくは５〜１０００μｇ／ｌ
である。２μｇ／ｌ以下の場合は、ＡＰＲ−３生産活性
が極端に低下する。２０００μｇ／ｌ以上の場合はＡＰ
Ｒ−３生産活性がそれ以上増加しない。それでそれ以上
の含有は意味がないものとなる。更に良好なＡＰＲ−３
生産活性を得るには、サイアミン含有培地で培養した菌
体を、グリセロール、グルコース、マルトース、トレハ
ロース等の糖類、又ＤＭＳＯ（ジメチルスルホオキシ
ド）等、好ましくは１０重量％マルトースを含む液体培
地中ないし溶液中又は緩衝液中に保存することが好適で
ある。そしてそれらの糖類の濃度は５〜１５重量％であ
る。保存温度は−１００℃〜−３０℃、好ましくは−１
００℃〜−４０℃、特に好ましくは−９０℃〜−６０℃
である。

【００５１】本発明の微生物を培養するにあたり、使用
する培地は、本発明の微生物の栄養培地で、かつサイア
ミン含有培地であればどのようなものでもよく、特に制
限されない。そして、通常の公知の方法に従って調製す
ることができる。例えば、その組成は、炭素源として、
デンプン、廃糖蜜、デキストリン、サッカロース、マル
トース、マンニット、グルコース及びフラクトース等、
窒素源として、硫安、塩安、尿素、肉エキス、ペプトン
及び酵母エキス等、無機塩類として、リン酸塩、マグネ
シウム塩、食塩、鉄塩及びマンガン塩等、ビタミン類と
して、サイアミンの他各種ビタミン類、酵母エキス、コ
ーンステープリカー及び廃糖蜜等が適当量含有していれ
ばよい。

【００５２】上記の炭素原の中でもデンプン、マンニッ
トは好ましいものとして挙げることができ、培地中に占
める量として０．０１〜３０重量％、好ましくは、０．
１〜２０重量％で使用する。ｐＨは５〜９位の範囲に調
整すればよい。固体培地又は液体培地の種類は問われな
い。尚、農産物廃棄物、食品産業廃棄物、発酵廃液及び
残渣類、都市ゴミ類等も炭素源、有機窒素源及びサイア
ミン及びその他のビタミン類等として使用することがで
きる。培養は、振盪、通気撹拌等の操作で、２０〜４０
℃で２〜１５日間行なえばよい。そして回分培養、連続
的回分培養、或いは連続培養等の培養方法が採用でき
る。前培養なしの方法或いは前培養ありの方法等、どち
らも採用できる。特に、本発明の方法は、連続的回分培
養、連続培養などの培養方法において好適に用いられ
る。即ち、培養途中でサイアミンが消費されつくすと、
本発明微生物のＡＰＲ−３生産能が低下するからであ
る。

【００５３】上記の如くして培地中に生産されたＡＰＲ
−３は、アセトン、エタノール等の有機溶媒を用いる沈
殿法、ゲル濾過法、ゲルクロマトグラフィー法、イオン
クロマトグラフィー法、膜濃縮法、膜濾過法、cetylpyr
idium chloride（ＣＰＣ）等の塩基性物質とＡＰＲ−３
との複合体形成による沈殿物法等を適当に組み合わせる
ことにより、培養液中から採取することができる。

【００５４】採取されたものは適当な溶媒又は溶液に溶
かすか、乾燥するかして、又、適当な付加剤又は添加剤
等を添加して、環境汚染の油除去処理等において使用す
る油水分離剤及び排水処理において使用する微生物産生
凝集剤として使用することができる。又、本発明の微生
物の培養物をそのまま油水分離剤及び微生物産生凝集剤
とすることもできる。本発明において、培養物とは培養
物自体の他に培養物の各種処理物をも含むものとする。
例えば、培養液自体及びその濃縮物若しくはその乾燥
物、、培養液から菌体を除いた上澄液及びその濃縮物若
しくはその乾燥物、菌体自体及びその懸濁物若しくはそ
の乾燥物等である。そして、カルシウム、鉄、アルミニ
ウム等のカチオン性無機塩を１種以上含有してなる微生
物産生凝集剤は、凝集活性が向上するので好ましい添加
剤の一つである。本発明の微生物産生凝集剤は、それを
懸濁物含有度が高い排水に接触せしめると、特に処理効
果が上がる。又、活性汚泥方法による排水処理におい
て、バルキング又は／及び糸状菌が発生し易い排水若し
くは排水処理槽に本発明剤を適用すると処理効果が一層
高まる。そして当該方法に本発明剤を適用する場合に活
性汚泥の分離領域のｐＨを、７〜９に保持するとその処
理効果は更に高まり、かつ安定化する。

【００５５】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説
明する。尚、文中「％」とあるのは特に断りの無い限り
重量基準である。 実施例１：本発明で使用する混合菌であるＲ−３菌の培
養 本発明で使用する菌の種培養及び本培養に用いる培地の
組成（％）： デンプン＝１％ Ｋ₂ＨＰＯ₄＝０．５％ ＫＨ₂ＰＯ₄＝０．２％ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ＝０．０２％ （ＮＨ_４）₂ＳＯ₄＝０．０５％ 酵母エキス＝０．０５％ サイアミン塩酸塩＝２００μｇ／ｌ 蒸溜水＝残り ｐＨ ７．０（３Ｎ ＫＯＨで調整） 殺菌条件：１２１℃（達温）及び１５〜２０分間

【００５６】Ｒ−３菌を、サイアミン塩酸塩が０．１ｍ
ｇ／ｌ含有する肉汁寒天平板培地に３０℃で５日間培養
した。当該菌の１白金耳を液体培地８０ｍｌ（５００ｍ
ｌ容振盪フラスコ）に添加し、３０℃で２日間培養し種
培養を調製した。尚、ロータリーシェイカーを用いて当
該フラスコを振盪した。当該培養液（６０ｍｌ）を５リ
ットル容ジャーファメンター（培地３リットル）に添加
し、３０℃で３リットル／ｍｉｎの通気量で、７日間撹
拌（２００〜４００ｒｐｍ）しながら培養した。生育度
（ＯＤ３１０ｎｍにおける濁度にて測定）、油水分離能
及びカオリン凝集活性ともに３日間で最高値に達した
後、若干減少傾向を示した。培養液の粘度は最後まで増
加した。生育度１６．５（３１０ｎｍにおける濁度測
定）、カオリン凝集活性２７７、粘度１，２００（ｃ
Ｐ）なる培養液を得た。尚、粘度はビスメトロン回転粘
度計を用い、ＳＳ−２ローター使用し、２５℃及び回転
数３〜６０ｒｐｍの条件で測定した。

【００５７】実施例２：ＡＰＲ−３の分離精製 実施例１のようにしてＲ−３菌を培養して得た培養液３
リットルを純水１２リットルで希釈し、菌体を遠心分離
（２８，０００Ｇ及び３０ｍｉｎ）で除去し、その後、
膜濃縮機を使用して２リットルまで濃縮した。当該濃縮
液に２倍容のエタノールを添加し、繊維状の沈殿物（Ａ
ＰＲ−３）を析出させた。当該沈殿物を遠心分離で採取
し、シリカゲル入りのデシケーターの中で、一晩減圧乾
燥した。９．２ｇの粗ＡＰＲ−３を得た（対デンプン収
率＝３０．５％）。

【００５８】５００ｍｇの当該粗ＡＰＲ−３を蒸溜水１
００ｍｌに溶解した。次、これに２％cetylpyridium ch
loride（ＣＰＣ）溶液５０ｍｌを撹拌しながら添加し、
数時間静置し、ＡＰＲ−３とＣＰＣの複合体の沈殿物を
形成させた。当該複合体の沈殿物を遠心分離により集
め、０．５モルの食塩水に溶解した。これに２倍容のエ
タノールを添加し、繊維状の沈殿物を得た。当該沈殿物
をエタノール及びアセトンで各々５回洗浄した後、上記
のようにして減圧乾燥した。純度検定で９８％以上のＡ
ＰＲ−３（３８０ｍｇ）のを得た（対デンプン収率、２
１．０％）。このことから、Ｒ−３菌の培養液には約２
ｍｇ／ｍｌのＡＰＲ−３が生産されていることが分か
る。

【００５９】上記の純度検定は次のようにして行なっ
た。上記の如くして精製されたＡＰＲ−３を、０．５Ｎ
のＮａＯＨ水溶液で加水分解し、脱アセチル化した。得
られた脱アセチル化ＡＰＲ−３について、酢酸セルロー
ス膜を支持体として電気泳動を行った。その結果、当該
ＡＰＲ−３は陽極側に移動し、単一のスポットを与えた
（図１参照）。よって当該ＡＰＲ−３は純粋なものと判
断した。

【００６０】実施例３：ＡＰＲ−３の特質 上記の精製ＡＰＲ−３について分析した。 １．全糖 フェノール・硫酸法により測定した。その結果、６４
（±２）％であった。 ２．アミノ糖 エルソン・モーガン法により定性分析を行った。アミノ
糖は検出されなかった。 ３．ウロン酸 カルバゾル・硫酸法により検出を試みたが、検出されな
かった。

【００６１】４．蛋白質 ニンヒドリン法により検出を試みたが、検出されなかっ
た。 ５．元素分析 炭素Ｃ＝４０（±２）％、水素Ｈ＝６（±１）％、窒素
Ｎ、痕跡、リンＰ、痕跡、硫黄、痕跡。

【００６２】６．構成糖 上記の精製ＡＰＲ−３を２Ｍのトリフルオロ酢酸で４時
間加水分解した。 定性分析：当該加水分解物について、次の条件で薄層ク
ロマトグラフィーを行った。その結果、グルコース及び
ガラクトースのみが検出された。条件：プレート＝シリ
カゲル６０（０．５Ｍ ＮａＨ_２ＰＯ₄）、展開相＝イ
ソプロピルアルコール：アセトン：０．１Ｍ乳酸（２：
２：１ 重量比）。

【００６３】定量分析：上記加水分解物について、ＴＭ
Ｓ誘導体を調製して、次の条件でガスクロマトグフィー
による分析を行った。その結果、ＡＰＲ−３は、ガラク
トース１モルに対してグルコース５．６（±０．１）モ
ルの割合で構成されていることが判明した。条件：装置
＝島津（Shimadzu）ＧＣ−１５Ａ、検出器＝ＦＩＤ、カ
ラム＝Hicap-CBPI（OV-1 chemical bonding）キャピラ
リーカラム。

【００６４】７．構成有機酸 ＡＰＲ−３を、２Ｎの硫酸溶液で１００℃で２時間加水
分解した。この加水分解物について、構成有機酸の薄層
クロマトグラフィーによる定性及び同定分析を次の条件
で行なった。その結果コハク酸とピルビン酸が検出され
た。

【００６５】定性分析：プレート＝セルロースＦ２５４
Ｓ又はシリカゲルＦ２５４、展開相＝ブタノール：ギ
酸：水（４：１．５：１ 重量比）又はアミルアルコー
ル：０．２５Ｍアンモニア（２：１ 重量比）。

【００６６】定量分析：ＡＰＲ−３を２Ｍトリフルオロ
酢酸溶液で１００℃で４時間加水分解し、その加水分解
物をメチル化した。それをガスクロマトグラフィーで定
量した。その結果、コハク酸とピルビン酸が、構成糖で
あるガラクトース１モルに対して各々０．６（±０．
１）モル及び２．５（±０．１）モル含まれていること
が分かった。

【００６７】８．分子量 脱アセチル化したＡＰＲ−３について、トヨパールＨＷ
７５Ｆゲルカラムを使用するゲルクロマトグラフィーで
ＡＰＲ−３の分子量を求めた（図２参照）。ブルーデキ
ストランよりも先にＡＰＲ−３のピークが出現するの
で、分子量は２×１０⁶以上であると判断された。

【００６８】９．比旋光度 比旋光度は−１７〜−１５°であった。 １０．ＩＲスペクトル 図３に当該スペクトルを示した。２，７００〜３，７０
０ｃｍ^-1に水酸基の吸収、１７００ｃｍ^-1及び１，１６
０ｃｍ^-1にカルボキシルエステル結合の吸収、そして
１，６００ｃｍ^-1及び１，４００ｃｍ^-1にイオン化カル
ボキシル基の吸収を示した。

【００６９】１１．溶媒に対する溶解性 水に可溶、アルカリに易溶、メタノール及びアセトンに
不溶であった。 １２．粘度特性 ビスメトロン回転粘度計で、ＳＳ−２ ローターを使用
し、２５℃及び回転数３〜６０ｒｐｍの条件で測定し
た。対照物質としてザンサンガムを用いた。ＡＰＲ−３
はＮａ型（塩）、Ｃａ型（塩）及びＨ型（フリー型）に
して測定した。ザンサンガム及びＡＰＲ−３の濃度は
０．５重量％溶液とした。その結果を図４に示した。い
ずれの型のＡＰＲ−３もザンサンガムと同様に、シュー
ドプラスチック流動特性を示した。又、ザンサンガムよ
りも高粘度であった。以上の特性を有する高分子物質
は、現在まで発見されていないので、新規物質と認定し
た。

【００７０】実施例４ 実施例１で得たＡＰＲ−３の粉末について、ＡＰＲ−３
溶液（５０ｍｇ／１ｍｌ蒸留水）を調製し、その内の２
０ｍｌを使用して、上記の油水分離能測定法により測定
し、下記表６の通りの結果を得た。

【００７１】表６ 表６から分かるように、本発明のＡＰＲ−３は油水分離
能を有することは明らかである。又、下記の比較例実験
の表６から分かるように、公知のロードコッカス・エリ
スロポレスＫＲ−２５６−２（ＦＥＲＭ Ｐ Ｎｏ．３
９２３）のものより高活性を有する。

【００７２】実施例５ Ｒ−３菌をＲ−４菌に代えること、及び培地にサイアミ
ンを添加すること（以下、サイアミン含有系という。）
並びに添加しないこと（以下、サイアミン非含有系とい
う。）以外は、実施例１と同様に培養し、その培養の経
時変化を調べた。その結果を図５及び６に示した。尚、
図５はサイアミン含有系のものであり、図６はサイアミ
ン非含有系のものである。図５及び６から分かるよう
に、サイアミン非含有系では培養３日目でカオリン凝集
活性は最高値に達し、その後減少傾向を示した。又、粘
度（ｃＰ）は培養４日目で最高値に達し、その後減少傾
向を示した。しかし、サイアミン含有系では、培養３日
頃からカオリン凝集活性及び粘度（ｃＰ）の増加率が減
少するものの、カオリン凝集活性及び粘度（ｃＰ）の値
が減少することはなかった。尚、活性は培養液の上澄液
について測定した。ＡＰＲ−３生産能を有しないが、微
生物産生凝集剤を生産することが知られているロードコ
ッカス・エリスロポレスＫＲ−２５６−２（ＦＥＲＭ
Ｐ−３９２３）を対照菌株として採用し、Ｒ−４菌のサ
イアミン含有系と同様の条件で培養した結果を図７に示
した（比較例１参照）。図５、６及び７から分かるよう
に、Ｒ−４菌は、カオリン凝集活性及び粘度（ｃＰ）が
格段に高い培養液を生産すること、又、サイアミン含有
系は、非含有系のものより培養液のカオリン凝集活性及
び粘度（ｃＰ）が高く、且つ培養の安定性が優れている
が分かる。尚、生育度は３１０ｎｍにおける濁度測定に
よった。

【００７３】比較例１ ロードコッカス・エリスロポレスＫＲ−２５６−２（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−３９２３）を、実施例１と同様な条件で培
養して得た培養液の上澄液について、膜濃縮により２５
倍の濃縮を行い、ＡＰＲ−３溶液（５０ｍｇ／１ｍｌ蒸
留水）の調製条件と同様なものにした。実施例４と同様
の条件で油水分離能を測定し、下記表７の結果を得た。

【００７４】表７

【００７５】実施例６ Ｒ−３菌の代わりに、ＫＹＭ−１、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ
−５、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−８及びそれらを図７に示し
たような組み合わせた混合菌及び混合菌であるＲ−３〜
Ｒ−１２を用いて、実施例１と同条件で培養した。そし
て、図８のような結果を得た。本実施例においては、各
活性が粘度と相関する故、活性を粘度測定で行った。粘
度測定条件は実施例１と同様である。これから、本発明
の複合微生物は、ＡＰＲ−３の生産により効果的である
ことが分かる。そして、ＫＹＭ−７又は／及びＫＹＭ−
８を含む複合微生物が特に効果的であることが分かる。

【００７６】実施例７ 実施例１で使用した培地において、酵母エキスの代わり
にポリペプトン（商標名）（第五栄養化学ＫＫの製品）
を０．５％を添加すること、サイアミン塩酸塩を添加す
ること又は添加しないこと、本発明の微生物としてＲ−
３菌からＲ−４菌に変更すること、及び培養を回分培養
方法から連続的回分培養方法に変更すること以外は実施
例１と同様に培養して、ＡＰＲ−３の生産を行った。本
実施例は連続的回分培養方法であるので、種培養は第一
回目の培養においては実施例１と同様に行い、接種も実
施例１と同様に行ったが、第二回目からは、前回培養終
了時の培養液を種培養液として利用した。そして接種量
は１０容量％とした。その結果を表８に示した。なお、
データーは回分培養第５回目の培養１０日後の結果のも
のである。

【００７７】表８ このデーターからサイアミン添加すなわち培地のサイア
ミン含有がＡＰＲ−３の生産に必須であることが分か
る。

【００７８】実施例８ Ｒ−３菌をＲ−４菌に代えること及びサイアミンの濃度
を表９記載のように変えること以外は、実施例１と同様
にしてＡＰＲ−３生産を行った。その結果を表９に示
す。なお、ＡＰＲ−３の生産量は培養液の粘度（ｍＰａ
・Ｓ）と相関するので、ＡＰＲ−３の生産量を粘度で示
した。

【００７９】表９ このデーターから分かるように、サイアミン含有培地の
サイアミン濃度は２〜２０００μｇ／ｌの範囲でＡＰＲ
−３生産に効果的であることが分かる。

【００８０】

【発明の効果】本発明方法によって、油水分離能及びカ
オリン凝集活性を有するＡＰＲ−３を、本発明の微生物
を用いて、安定して、収率よく、且つ、簡便に大量生産
することが可能となった。本発明方法によって得られる
培養物は、ＡＰＲ−３を高濃度で含有するので、そのま
ま又は濃縮、乾燥等の処理をするかして、排水処理若し
くは油汚染環境における凝集剤、油水分離剤として用い
ることが出来ようになった。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＡＰＲ−３の電気泳動パターン。

【図２】 ＡＰＲ−３のゲルクマトグラフィーパター
ン。

【図３】 ＡＰＲ−３のＩＲスペクトル。

【図４】 ＡＰＲ−３の粘度特性。

【図５】 Ｒ−４菌における、サイアミン含有系の培養
の経時変化。

【図６】 Ｒ−４菌における、サイアミン非含有系の培
養の経時変化。

【図７】 ロードコッカス・エリスロポレスＫＲ−２５
６−２（ＦＥＲＭ Ｐ−３９２３）菌株における、サイ
アミン含有系の培養の経時変化。

【図８】 本発明のＫＹＭ−８菌、ＡＰＲ−３生産能を
有するＫＹＭ各菌及びそれらの混合菌であるＲ−３〜Ｒ
−１２菌の活性比較。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 倉根 隆一郎 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 金川 貴博 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 鎌形 洋一 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 花田 智 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 蔵田 信也 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境エ ンジニアリング株式会社内 (72)発明者 山田 一隆 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境エ ンジニアリング株式会社内 (72)発明者 横幕 豊一 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境エ ンジニアリング株式会社内 (72)発明者 小山 修 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境エ ンジニアリング株式会社内 (72)発明者 古庄 健太 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境エ ンジニアリング株式会社内 Ｆターム(参考） 4B064 AF11 BA16 BB05 BB06 BB15 BB16 BE01 BH01 BH02 CA02 CC03 CC09 CD12 DA17 4B065 AA01X AA04X AA11X AA46X AA56X AC14 BA22 BB20 CA22 CA54 4D015 BA05 BA10 BB05 CA12 DB34 EA02 EA15

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の特性を有する新規高分子物質（以
   下、ＡＰＲ−３という。）の生産能（以下、ＡＰＲ−３
   生産能という。）を有する微生物をサイアミン含有培地
   に培養し、ＡＰＲ−３を培地中に生産・蓄積させること
   を特徴とするＡＰＲ−３の生産方法。 （１）油水分離能を有する。 （２）凝集活性を有する。 （３）糖含有量（フェノール・硫酸法）：（６４±２）
   重量％ （４）アミノ糖（エルソン・モーガン法）：検出されな
   い。 （５）ウロン酸（カルバゾール・硫酸法）：検出されな
   い。 （６）蛋白質（ニンヒドリン法）：検出されない。 （７）元素分析：炭素Ｃ＝（４０±２）％、水素Ｈ＝
   （６±１）％、窒素Ｎ、リンＰ及び硫黄Ｓは痕跡。 （８）構成する糖及び有機酸の組成（モル比）：ガラク
   トース１、グルコース（５．６±０．１）、コハク酸
   （０．６±０．１）、ピルビン酸（２．５±０．１）。 （９）分子量：２×１０⁶以上。 （１０）粘度（ビスメトロン回転粘度計、ＳＳ−２ロー
   ター、２５℃、回転数３〜６０ｒｐｍ、溶媒は純水、Ｈ
   型ＡＰＲ−３の０．５重量％濃度溶液）：（９，０００
   ±１，０００）ｃＰ。 （１１）溶媒溶解性：水に可溶、アルカリに易溶、メタ
   ノール、エタノール及びアセトンに不溶。 （１２）比旋光度（２０℃）：−１７〜−１５° （１３）ＩＲスペクトル吸収帯（ｃｍ^-1）：２，７００
   〜３，７００、１，７３０、１，６００、１，４００、
   １，１６０。
2. 【請求項２】 サイアミン含有培地のサイアミン濃度が
   ２〜２０００μｇ／ｌである請求項１に記載のＡＰＲ−
   ３の生産方法。
3. 【請求項３】 ＡＰＲ−３生産能を有する微生物が、Ａ
   ＰＲ−３生産能を有する微生物を少なくとも１種を含む
   複合微生物からなるものであり、当該複合微生物を複合
   的培養若しくは複合培養する請求項１又は２に記載のＡ
   ＰＲ−３の生産方法。
4. 【請求項４】 ＡＰＲ−３生産能を有する微生物が、細
   菌である請求項１、２又は３に記載のＡＰＲ−３の生産
   方法。
5. 【請求項５】 ＡＰＲ−３生産能を有する微生物が、ブ
   ルセラ属、ザントモナス属、アシネトバクター属、コマ
   モナス属、サルモネラ属、オーレオバクテリウム属、セ
   ルロモナス又はアグロバクテリウム属に属するものであ
   る請求項１、２、３又４に記載のＡＰＲ−３の生産方
   法。
6. 【請求項６】 ＡＰＲ−３生産能を有する微生物の少な
   くとも１種を含む複合微生物が、セルロモナス・セルラ
   ンス、アグロバクテリウム・ツメファシエンス及びそれ
   らに極めて近い種に属する細菌の少なくとも１種を含む
   ものである請求項３に記載のＡＰＲ−３の生産方法。
7. 【請求項７】 ＡＰＲ−３生産能を有する微生物の少な
   くとも１種を含む複合微生物が、セルロモナス・セルラ
   ンスＫＹＭ−７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３３９）、アグ
   ロバクテリウム・ツメファシエンス及びそれらに極めて
   近い種に属するＫＹＭ−８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８０
   ６）の少なくとも１種を含むものである請求項３に記載
   のＡＰＲ−３の生産方法。
8. 【請求項８】 ＡＰＲ−３生産能を有する微生物の少な
   くとも１種を含む複合微生物が、セルロモナス・セルラ
   ンスＫＹＭ−７株、アグロバクテリウム・ツメファシエ
   ンス及びそれらに極めて近い種に属するＫＹＭ−８株の
   少なくとも１種を含み、且つブルセラ属、ザントモナス
   属、アシネトバクター属、コマモナス属、サルモネラ
   属、オーレオバクテリウム属及びセルロモナス属に属す
   る微生物から選ばれる少なくとも１種を含むものである
   請求項３に記載のＡＰＲ−３の生産方法。
9. 【請求項９】 ブルセラ属に属する微生物がブルセラｓ
   ｐ．ＫＹＭ−１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３３３）、ステ
   ノトロフォモナス又はザントモナスのグループに属する
   微生物がＫＹＭ−２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３３４）、
   アシネトバクター属に属する微生物がアシネトバクター
   ｓｐ．ＫＹＭ−３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３３５）、コ
   マモナス属に属するコマモナス・テストステロニーと同
   種かそれに極めて近い種に属するＫＹＭ−４株（ＦＥＲ
   Ｍ Ｐ−１１３３６）、サルモネラ属に属する微生物が
   サルモネラｓｐ．ＫＹＭ−５株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３
   ３７）、オーレオバクテリウム属に属する微生物がオー
   レオバクテリウムｓｐ．ＫＹＭ−６株（ＦＥＲＭ Ｐ−
   １１３３８）である請求項５、又は８に記載のＡＰＲ−
   ３の生産方法。
10. 【請求項１０】 請求項１、２、３、４、５、６、７、
    ８、又は９に記載の方法により得られる培養物からＡＰ
    Ｒ−３を採取することを特徴とするＡＰＲ−３の生産方
    法。
11. 【請求項１１】 請求項１、２、３、４、５、６、７、
    ８、又は９に記載のＡＰＲ−３生産能を有する微生物
    を、サイアミン含有培地に保存することを特徴とするＡ
    ＰＲ−３生産能を有する微生物の保存方法。
12. 【請求項１２】 サイアミン含有培地のサイアミン濃度
    が２〜２０００μｇ／ｌである請求項１１に記載のＡＰ
    Ｒ−３生産能を有する微生物の保存方法。
13. 【請求項１３】 請求項１、２、３、４、５、６、７、
    ８、又は９に記載の方法により得られる培養物を主成分
    として含有してなることを特徴とする微生物産生凝集
    剤。
14. 【請求項１４】 カチオン性無機塩を１種以上含有する
    請求項１３に記載の微生物産生凝集剤。
15. 【請求項１５】 請求項１３又は１４に記載の微生物産
    生凝集剤を懸濁物含有排水に接触せしめることを特徴と
    する排水凝集処理方法。
16. 【請求項１６】 活性汚泥方法による排水凝集処理方法
    において、請求項１３、又は１４に記載の微生物産生凝
    集剤を処理系に存在させ、活性汚泥と処理水との分離領
    域において、活性汚泥のバルキングを防止することを特
    徴とする排水凝集処理方法。
17. 【請求項１７】 活性汚泥の分離領域のｐＨを、７〜９
    に保持する請求項１５又は１６に記載の排水凝集処理方
    法。
18. 【請求項１８】 被処理排水が糸状菌を発生しやすい排
    水である請求項１５、１６、又は１７に記載の排水凝集
    処理方法。