JP3086880B2 - 油水分離剤及び油水分離方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、油水分離剤及び油
水分離方法に関し、更に詳しくは、油環境汚染における
油除去処理に用いる油水分離剤及び油水分離方法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】従来の油水分離剤は化学合成法によって
得られる凝集活性を有する高分子物質からなっている
（特開昭５０−６０４７８号公報、特開昭５１−３０５
８５号公報、特開昭５１−８５２６７号公報、特開昭６
０−２０２７８７号公報）。

【０００３】特開昭６０−２０２７８７号公報には、含
油水をｐＨ４以下に調整してアニオン系高分子凝集活性
物質を、又、ｐＨ１１以上に調整してカチオン系高分子
凝集活性物質を作用させる方法が記載されている。特開
昭５１−３０５８５号公報には、塩化カルシウム、ポリ
塩化アルミニウム、又は炭酸ソ−ダと高分子凝集活性物
質を併用してなる油水分離剤が、又、特開昭５１−８５
２６７号公報には、ミヨウバン類と高分子凝集活性物質
を併用してなる油水分離剤が提案されている。又、特開
昭６０−２０２７８７号公報には、カチオン系高分子凝
集活性物質単独を、又はカチオン系高分子凝集活性物質
とアニオン系高分子凝集活性物質を併用して、含油水に
作用させる方法が記載されている。

【０００４】上記の高分子凝集活性物質の製造工程では
環境ホルモンの発生の恐れがある。又、当該剤の中に
は、分解すると環境ホルモンの発生の恐れがあるものも
ある。これらの問題を解決する方法として、複数の微生
物が共存して生育する複合微生物により生産される天然
の凝集活性物質ＡＰＲ−３が注目れていた(Biochi.Biot
ech.Biochem.、58巻、1589〜1594頁、1994年）。当該剤
は微生物を培養して製造されるものであり、且つ分解し
ても環境ホルモンの発生の恐れが全くないものである。
しかしながら、凝集活性を有していても、海水等に応用
した場合、高活性の油水分離能を有するか、又、どのよ
うに使用したよいのか不明であった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、上記
の問題に鑑み、製造工程においても、分解生成物にも環
境ホルモン等の発生の恐れがなく、且つ海水においても
より高活性の油水分離能を有する油水分離剤及び油水分
離方法を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
達成のために鋭意努力した結果、特定の微生物が、従来
知られていない糖と有機酸とからなる高分子物質を培地
中に著量生産すること、そして、当該高分子物質は海水
においてもより高活性の油水分離能を有すること等の知
見を得た。本発明はこの知見に基づいて完成された。

【０００７】すなわち、本発明は、１）以下の（１）〜
（１０）の特性を有し、且つ油水分離能を有するＡＰＫ
−７８を主成分とすることを特徴とする油水分離剤を提
供する。 （１）アミノ糖（エルソン・モーガン法）：検出されな
い。 （２）ウロン酸（カルバゾール・硫酸法）：検出されな
い。 （３）蛋白質（ニンヒドリン法）：検出されない。 （４）元素分析：窒素Ｎ、リンＰ及び硫黄Ｓは痕跡。 （５）構成する糖及び有機酸の組成（モル比）：ガラク
トース１、グルコース８．２、コハク酸２．１±０．
４、ピルビン酸１．２。 （６）分子量：２×１０⁶以上。 （７）粘度（ビスメトロン回転粘度計、ＳＳ−２ロータ
ー、２５℃、回転数３０ｒｐｍ、溶媒は純水、Ｎａ型Ａ
ＰＫ−７８の０．５重量％濃度溶液）：２５０ｃｐ。 （８）溶媒溶解性：水に可溶、アルカリに易溶、メタノ
ール、エタノール及びアセトンに不溶。 （９）ＩＲスペクトル吸収帯（ｃｍ^-1）：２，７００〜
３，７００、１，７３０、１，６００、１，４００、
１，１６０。 （１０）図１に記載の¹ＨＮＭＲのスペクトルを有す
る。

【０００８】又、本発明は、２）ＡＰＫ−７８が、ＡＰ
Ｋ−７８生産能を有する微生物を固体培地又は液体培地
に培養して得られる培養物に含まれる高分子物質である
前記１）に記載の油水分離剤を提供する。

【０００９】又、本発明は、３）ＡＰＫ−７８が、ＡＰ
Ｋ−７８生産能を有する微生物をサイアミン又はその誘
導体を含有する培地に培養して得られる培養物である前
記２）に記載の油水分離剤を提供する。

【００１０】又、本発明は、４）ＡＰＫ−７８生産能を
有する微生物が、少なくともセルロモナス及びアグロバ
クテリウム属に属する細菌２種を含む複合微生物からな
る前記２）又は３）に記載の油水分離剤を提供する。

【００１１】又、本発明は、５）セルロモナス属に属す
る細菌がセルロモナス・セルランス、アグロバクテリウ
ム属に属する細菌が、アグロバクテリウム・テュメファ
シエンス及びそれらに極めて近い種に属する細菌である
前記４）に記載の油水分離剤を提供する。

【００１２】又、本発明は、６）セルロモナス・セルラ
ンスに属する細菌菌株がＫＹＭ−７株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１１３５８）、アグロバクテリウム・テュメファシエン
スに属する細菌菌株がＫＹＭ−８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
６８０６）である前記５）に記載の油水分離剤を提供す
る。

【００１３】又、本発明は、７）ＡＰＫ−７８が、ＡＰ
Ｋ−７８生産能を有する微生物をサイアミン又はその誘
導体を含有する培地に生育させ植え継ぎ保存したものを
培養して得られた培養物である前記２）、３）、４）、
５）、又は６）に記載の油水分離剤を提供する。

【００１４】又、本発明は、８）前記１）〜７）の何れ
か１つに記載の油水分離剤を油懸濁水と接触させること
を特徴とする油水分離方法を提供する。

【００１５】

【発明の実施の形態】次に好ましい実施形態を挙げて本
発明を更に詳しく説明する。しかし、本発明はこれらの
実施形態により何ら限定されるものではない。先ず、本
発明の実施形態の１つでもあり、且つ本発明の特徴を表
す発明の完成過程を述べる。

【００１６】本発明者らは、微生物産生の凝集活性物質
の生産を目的として、活性汚泥及び土壌から、凝集活性
物質を生産する微生物をスクリーニングして来た。その
際、フタル酸資化性及びスライム形成性を有する微生物
を指標として、微生物コロニーを選択した。その結果、
目的のコロニーを多数得た。その中の一つについて詳し
く検討した結果、８菌株から構成されていることが分か
った。その８菌株を各々ＫＹＭ−１〜ＫＹＭ−８と命名
し、その性質を調べた。その結果を表１〜表４に示し
た。そして、ＫＹＭ−３、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−５、及
びＫＹＭ−７については既に報告した（Biochi.Biotec
h.Biochem.、58巻、1589〜1594頁、1994年）。ＫＹＭ−
３、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−５、及びＫＹＭ−７からなる
群の少なくとも１菌株を含む複合微生物を培養すると、
ＡＰＲ−３と命名した凝集活性物質が生産されることを
同時に報告した。

【００１７】

【表１】

【００１８】

【表２】

【００１９】

【表３】

【００２０】

【表４】

【００２１】本発明においては、上記ＫＹＭ−３、ＫＹ
Ｍ−４、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ−７の菌株の同定を再検討
し、残りのＫＹＭ−１、ＫＹＭ−２、ＫＹＭ−６、ＫＹ
Ｍ−８についても同定を行った。

【００２２】最近、ＧＣ含量、キノンの分子種及び１６
Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列の相同性から、微生物を発生系
統的に同定・分類する方法が行なわれている（日本微生
物生態学会報（Bulletin of Japanese Society of Micr
obial Ecology）、１０巻、１１９〜１３６ページ、１
９９５年、同報、１０巻、３１〜４２ページ、１９９５
年）。上記の菌株をこの方法で解析し、その結果を表５
に記載した。

【００２３】

【表５】 上記の菌株は表記載の属に属する微生物であると同定し
た。尚、上記の１６Ｓ ｒＤＮＡ解析法によると、サル
モネラ属と大腸菌属に属する微生物は、同一属の微生物
と見做されている。その故に本発明の微生物は、サルモ
ネラ属又は大腸菌属のどちらの属に属する微生物でもよ
い。

【００２４】以上の結果より、本発明で使用する菌株
は、 ＫＹＭ−１は、ブルセラｓｐ．、 ＫＹＭ−２は、ステノトロホモナスｓｐ．、 ＫＹＭ−３は、アセネトバクター・カルコアセティカ
ス、 ＫＹＭ−４は、コマモナス・テストステロニィー、 ＫＹＭ−５は、サルモネラｓｐ．、 ＫＹＭ−６は、オーレオバクテリウムｓｐ．、 ＫＹＭ−７は、セルロモナス・セルランス又はセルロモ
ナス・カルタエ、 ＫＹＭ−８は、アグロバクテリウム・テュメファシエン
ス（Agrobacterium tumefaciens）又はアグロバクテリ
ウム・リゾゲネス に属する菌株である。

【００２５】本発明において、総合的に検討した結果、 ＫＹＭ−１株は、ブルセラｓｐ．に属する菌株、 ＫＹＭ−２株は、ステノトロフォモナスに属する菌株、 ＫＹＭ−３株は、アシネトバクターｓｐ．属に属する菌
株、 ＫＹＭ−４株は、コマモナス・テストステロニィーと同
種か極めて近い種に属する菌株、 ＫＹＭ−５株は、サルモネラ又は大腸菌のグループに属
する菌株（本発明におい ては簡便化のためサルモネラ属という。）、ＫＹＭ−６
株は、オーレオバクテリウムｓｐ．に属する菌株、 ＫＹＭ−７株は、セルロモナス・セルランス若しくはそ
れに極めて近い種に属する菌株、 ＫＹＭ−８株は、アグロバクテリウム・テュメファシエ
ンス若しくはそれに極めて近い種に属する菌株 であると判断した。

【００２６】上記の各菌株は、生命工学研究所に寄託さ
れ、ＫＹＭ−１はＦＥＲＭ Ｐ−１１３３３、ＫＹＭ−
２はＦＥＲＭ Ｐ−１１３３４、ＫＹＭ−３はＦＥＲＭ
Ｐ−１１３３５、ＫＹＭ−４はＦＥＲＭ Ｐ−１１３
３６、ＫＹＭ−５はＦＥＲＭＰ−１１３３７、ＫＹＭ−
６はＦＥＲＭ Ｐ−１１３５７、ＫＹＭ−７はＦＥＲＭ
Ｐ−１１３５８、ＫＹＭ−８はＦＥＲＭ Ｐ−１６８
０６の番号が付されている。尚、ＫＹＭ−８株の諸性質
を示す微生物は現在知られていないので、新規微生物で
ある。

【００２７】更に、上記の菌株の凝集活性物質の生産性
について詳しく再検討した。その結果、既に報告した前
記のＡＰＲ−３の糖、有機酸の組成にも誤りがあるこ
と、又、少なくともＫＹＭ−８株を、好ましくは、少な
くともＫＹＭ−８株とＫＹＭ−７株を含む複合微生物を
培養すると、分解しても環境ホルモンの発生の恐れが全
くない糖と有機酸とからなるが、ＡＰＲ−３とは全く異
なる凝集活性物質ＡＰＫ−７８を生産すること、そして
それはＡＰＲ−３よりも凝集活性が高いこと、又、海水
においてもＡＰＲ−３より高活性の油水分離能を有する
こと等を知見した。本発明はかかる知見に基づいて完成
されたものである。

【００２８】次に本発明の具体的実施形態を述べる。本
発明の第１の特徴は、次の特質を有するＡＰＫ−７８を
油水分離剤の主成分として使用することである。 （１）アミノ糖（エルソン・モーガン法）：検出されな
い。 （２）ウロン酸（カルバゾール・硫酸法）：検出されな
い。 （３）蛋白質（ニンヒドリン法）：検出されない。 （４）元素分析：窒素Ｎ、リンＰ及び硫黄Ｓは痕跡。 （５）構成する糖及び有機酸の組成（モル比）：ガラク
トース１、グルコース８．２、コハク酸２．１±０．
４、ピルビン酸１．２。 （６）分子量：２×１０⁶以上。 （７）粘度（ビスメトロン回転粘度計、ＳＳ−２ロータ
ー、２５℃、回転数３０ｒｐｍ、溶媒は純水、Ｎａ型Ａ
ＰＫ−７８の０．５重量％濃度溶液）：２５０ｃｐ。 （８）溶媒溶解性：水に可溶、アルカリに易溶、メタノ
ール、エタノール及びアセトンに不溶。 （９）ＩＲスペクトル吸収帯（ｃｍ^-1）：２，７００〜
３，７００、１，７３０、１，６００、１，４００、
１，１６０。 （１０）図１に¹ＨＮＭＲのスペクトルを示す。

【００２９】ＡＰＫ−７８は、以上の特性を有する高分
子物質であるが、前記のＡＰＲ−３の特性と比較すると
次の特性において大きく相違する。よってＡＰＫ−７８
はＡＰＲ−３とは明確に異なる物質である。 ａ）糖及び有機酸組成（モル比） ＡＰＲ−３：ガラクトース１、グルコース５．６±０．
１、フコース０．７、コハク酸０．６±０．１、ピルビ
ン酸２．５±０．１。 ＡＰＫ−７８：ガラクトース１、グルコース８．２、コ
ハク酸２．１±０．４、ピルビン酸１．２。

【００３０】ｂ）粘度（ビスメトロン回転粘度計、ＳＳ
−２ローター、２５℃、回転数３０ｒｐｍ、溶媒は純
水、Ｈ型ＡＰＲ−３又はＮａ型ＡＰＫ−７８の０．５重
量％濃度溶液） ＡＰＲ−３：１００ｃｐ。 ＡＰＫ−７８：２５０ｃｐ（ＡＰＲ−３の値の２．５
倍）。 このような特性を有する高分子物質は現在まで知られて
いないので、ＡＰＫ−７８は新規物質である。

【００３１】本発明において、油水分離能とは、油懸濁
水（海水も含む。）を油相と水相とに分離する能力のこ
とをいう。該油水分離能は次のようにして測定される。 Ａ）油水分離能の活性測定法 サラダ油１０ｇとノニオン系界面活性剤Ｔｗｅｅｎ８０
（和光純薬社製：ソルビタンモノオレアートのエチレン
オキシド縮合物）０．５ｇをビーカー中で２〜３分間超
音波処理してサラダ油を乳化させる。この中に撹拌しな
がら海水を加えて全量を２リットルとし、これを油懸濁
水の原水とする。

【００３２】２リットルのビーカーに原水１リットルを
移し、ｐＨを１０に調整する。この原水０．８リットル
を加圧浮上装置（宮本制作所製ＭＳ９０００）に供給す
る。更にサンプル液２０ｍｌを添加して、室温で内容物
を十分に撹拌した後、加圧水を０．３リットル添加す
る。１０〜２０分間静置後、水相のＣＯＤを重クロム酸
カリウム法で測定する。活性はそのＣＯＤ値で示され
る。そして、油水分離能は次式により計算される。 油水分離能＝（（Ａ−Ｂ）／Ａ）×１００（％）、但
し、Ａ：処理前のＣＯＤ値、Ｂ：処理後のＣＯＤ値）

【００３３】又、本発明において、凝集活性とは排水中
の懸濁物を凝集させ、上澄液を作る活性をいう。実際
は、懸濁物質の代表例としてカオリンを用い、カオリン
懸濁液中のカオリン懸濁物を凝集させ、上澄液を作る活
性を測定する。そして、次のようにして測定される。

【００３４】Ｂ）カオリン凝集活性の測定法 カオリン懸濁液（５，０００ｍｇ／リットル）８０ｍｌ
を１００ｍｌ容メスシリンダーに分取し、これに１０重
量％ＣａＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ水溶液１０ｍｌ添加した。これ
にサンプル液０．１２５ｍｌを加え、ｐＨを８．０に調
整した。そのシリンダーを室温でゆっくり撹拌し、５分
間静置した。そして、上澄液の濁度をＯＤ５５０ｎｍに
て測定した。カオリン凝集活性は次式によって計算され
る。 カオリン凝集活性＝（１／Ｃ）−（１／Ｄ） Ｃ：サンプル液についてのＯＤ５５０ｎｍ値 Ｄ：水（ブランク液）についてのＯＤ５５０ｎｍ値

【００３５】Ｃ）ＡＰＫ−７８の定量 ＡＰＫ−７８生産性微生物を培養して得た培養液３ｍｌ
を純水１２ｍｌで希釈し、菌体を遠心分離（２８，００
０Ｇ及び３０ｍｉｎ）で除去し、２倍容のエタノールを
添加し、繊維状の沈殿物（ＡＰＫ−７８）を析出させ
た。当該沈殿物を遠心分離で採取し、シリカゲル入りの
デシケーターの中で、一晩減圧乾燥した。乾燥物を蒸溜
水１０ｍｌに溶解し、次に、これに２％cetylpyridium
chloride（ＣＰＣ）溶液５ｍｌを撹拌しながら添加し、
数時間静置し、ＡＰＫ−７８とＣＰＣの複合体の沈殿物
を形成させた。当該複合体の沈殿物を遠心分離により集
め、０．５モルの食塩水に溶解した。これに２倍容のエ
タノールを添加し、繊維状の沈殿物を得た。当該沈殿物
をエタノール及びアセトンで各々５回洗浄した後、上記
のようにして減圧乾燥した。当該乾燥物は純度検定で９
８％以上のＡＰＫ−７８であった。それで、当該乾燥物
の重量を秤量することによりＡＰＫ−７８の定量を行っ
た。

【００３６】本発明の第２の特徴は、ＡＰＫ−７８の生
産能を有する微生物を、固体若しくは液体の栄養培地に
培養してＡＰＫ−７８を培地中に生産させ、それを採取
して油水分離剤の主成分として使用することである。Ａ
ＰＫ−７８の生産方法において、ＡＰＫ−７８の生産能
を有する微生物であれば、細菌、カビ等のどのような微
生物でも使用できる。本発明においては、特にフタル酸
を資化できる特性とスライム形成性を目安にスクリーニ
ングして得られたが、スクリーニング方法等に何ら限定
されるものではない。

【００３７】上記の微生物の中でも、好適な微生物とし
て細菌類の微生物を挙げることができる。細菌の中で
も、好適なものとして、例えば、ブルセラ属、ステノト
ロフォモナス属、アシネトバクター属、コマモナス属、
サルモネラ属、オーレオバクテリウム属、セルロモナス
属、アグロバクテリウム属に属する細菌を挙げることが
できる。

【００３８】上記の細菌の中でも、アグロバクテリウム
属に属する細菌、好ましくはアグロバクテリウム・テュ
メファシエンス若しくはそれに極めて近い種、より好ま
しくはアグロバクテリウム・テュメファシエンス（Agro
bacterium tumefaciens）ＫＹＭ−８株（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６８０６）を挙げることができる。本発明のＡＰＫ
−７８の生産性をより向上させるには、少なくともアグ
ロバクテリウム属に属する細菌からなる複合微生物を使
用することである。

【００３９】以下に、少なくともアグロバクテリウム属
に属する細菌からなる複合微生物について詳しく述べ
る。即ち、好ましい実施形態として、アグロバクテリウ
ム属に属する細菌及びセルロモナス属に属する細菌の２
種からなり、それらが共存して生育する複合微生物でＡ
ＰＫ−７８の生産性を有するものである。この複合微生
物の中でも好ましい微生物はセルロモナス属に属する何
れかの細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の細
菌と、アグロバクテリウム・テュメファシエンス若しく
はそれに極めて近い種から選ばれる細菌の組み合わせ、
又、アグロバクテリウム属に属する何れかの細菌からな
る群から選ばれる少なくとも１種の細菌と、セルロモナ
ス・セルランス若しくはそれに極めて近い細菌の組み合
わせの複合微生物を挙げることができる。

【００４０】上記の複合微生物の中でも特に好ましい微
生物は、セルロモナス属に属する何れかの細菌からなる
群から選ばれるＫＹＭ−７を始めとする少なくとも１種
の細菌と、アグロバクテリウム・テュメファシエンス
ＫＹＭ−８株の組み合わせ、又、アグロバクテリウム属
に属する何れかの細菌からなる群から選ばれるＫＹＭ−
８を始めとする少なくとも１種の細菌と、セルロモナス
・セルランス ＫＹＭ−７株の組み合わせの複合微生物
を挙げることができる。特に好適な実施形態は少なくと
もＫＹＭ−７とＫＹＭ−８とからなる複合微生物を挙げ
ることできる。

【００４１】本発明の更なる実施形態における微生物
は、ＡＰＫ−７８の生産性を阻害しな限り、公知又は未
知の如何なる微生物が上記の複合微生物に共存していて
もよい。例えば、ブルセラ属、ステノトロフォモナス
属、アシネトバクター属、コマモナス属、サルモネラ
属、及びオーレオバクテリウム属に属する細菌からなる
群から選ばれる少なくとも一種の細菌を含むものを挙げ
ることができる。

【００４２】例えば、ブルセラｓｐ．に属する細菌、ス
テノトロフォモナスｓｐ．に属する細菌、アシネトバク
ターｓｐ．属に属する細菌、コマモナス・テストステロ
ニィーと同種か極めて近い種に属する細菌、サルモネラ
属に属する細菌、オーレオバクテリウムｓｐ．に属する
細菌を挙げることができる。

【００４３】上記の好適な詳しい具体例として一例を挙
げるならば、次の如くである。 （ａ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７ （ｂ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−１ （ｃ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５ （ｄ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ−
４ （ｅ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−５、ＫＹＭ−
４、ＫＹＭ−１ （ｆ）ＫＹＭ−８、ＫＹＭ−７、ＫＹＭ−６、ＫＹＭ−
５、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−３、ＫＹＭ−２、ＫＹＭ−１

【００４４】本発明で使用する微生物の中でも、ＫＹＭ
−１株〜ＫＹＭ−８株の細菌は、単独の状態又は上記の
いずれの組合せの複合状態で、寒天培地上でスライムを
形成するフロック状態になる。そして、フロック状態の
まま、植え継ぐことも、保存することもできる。又、便
利に種培養菌として用いることもできる。それで、上記
の組合せの微生物をここでは、（ａ）、（ｂ）、
（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）は各々、Ｒ−４菌、Ｒ
−５菌、Ｒ−６菌、Ｒ−７菌、Ｒ−８菌、Ｒ−９菌と略
称する。

【００４５】これらの菌は、寒天培地上でスライムを形
成する。しかし、このスライム形成は本発明を何ら限定
するものではない。尚、これらの組合せの菌株を用いて
培養を行なう場合は、寒天培地上でスライムを形成さ
せ、スライム形成微生物を種菌として用いると便利であ
る。

【００４６】本発明において微生物を培養するにあた
り、使用する培地は、それらの微生物の栄養培地であれ
ばどのようなものでもよく、特に制限されない。そし
て、通常の公知の方法に従って調製することができる。
例えば、その組成は、炭素源として、デンプン、廃糖
蜜、デキストリン、サッカロース、マルトース、マンニ
ット、グルコース及びフラクトース等、窒素源として、
硫安、塩安、尿素、肉エキス、ペプトン及び酵母エキス
等、無機塩類として、リン酸塩、マグネシウム塩、食
塩、鉄塩及びマンガン塩等、ビタミン源類として、酵母
エキス、コーンステープリカー及び廃糖蜜等が適当量含
有していればよい。

【００４７】上記のビタミン源類として好適なものは、
サイアミン又はその誘導体又はそれらを含有するもの挙
げることができる。このサイアミン又はその誘導体が培
養中に培地に存在していると、ＡＰＫ−７８を生産する
複合微生物におけるＡＰＫ−７８の生産性が向上維持さ
れる。特に種培養において、種培地にサイアミン又はそ
の誘導体が存在していると、ＡＰＫ−７８の生産性が向
上する。又、連続培養においても、その培地にサイアミ
ン又はその誘導体が存在していると、ＡＰＫ−７８の生
産性が向上維持される。

【００４８】又、ＡＰＫ−７８生産性を有する微生物を
培地に植え継ぎ保存するには、サイアミン又はその誘導
体を含有する培地に生育させることが好適である。上記
のサイアミン又はその誘導体の濃度はサイアミンとして
２〜２０００μｇ／ｌ、好ましくは５〜１０００μｇ／
ｌ、より好ましくは５〜５００μｇ／ｌである。

【００４９】上記の炭素原の中でもデンプン、マンニッ
トは好ましいものとして挙げることができ、培地中に占
める量として０．０１〜３０重量％、好ましくは０．１
〜２０重量％で使用する。ｐＨは５〜９位の範囲に調整
すればよい。固体培地又は液体培地の種類は問われな
い。尚、農産物廃棄物、食品産業廃棄物、発酵廃液及び
残渣類、都市ゴミ類等も炭素源、有機窒素源及びビタミ
ン類等として使用することができる。培養は、振盪、通
気撹拌等の操作で、２０〜４０℃で２〜１５日間行なえ
ばよい。そして回分或いは連続等の培養方法が採用でき
る。前培養なしの方法或いは前培養ありの方法等、どち
らも採用できる。

【００５０】上記の如くして培地中に生産されたＡＰＫ
−７８は、アセトン、エタノール等の有機溶媒を用いる
沈殿法、ゲル濾過法、ゲルクロマトグラフィー法、イオ
ンクロマトグラフィー法、膜濃縮法、膜濾過法、cetylp
yridium chloride（ＣＰＣ）等の塩基性物質とＡＰＫ−
７８との複合体形成による沈殿物法等を適当に組み合わ
せることにより、培養液中から採取することができる。

【００５１】以上の方法からＡＰＫ−７８は生産される
ので化学合成法から生産され、凝集活性を有する高分子
の油水分離剤とは異なって、その生産工程において環境
ホルモン等は一切生成しない。又、糖と有機酸から構成
されるので分解しても環境ホルモン等は生成する恐れが
ない。

【００５２】更に、本発明で用いるＡＰＫ−７８は、カ
ルボキシル基を有するのでアニオン系高分子物質である
が、公知の油水分離剤（特開昭６０−２０２７８７号公
報、特開昭５１−３０５８５号公報、特開昭５１−８５
２６７号公報、特開昭５０−６０４７８号公報）とは異
なって、海水においては他の薬剤を併用することなく単
独で高い油水分離能を有するので、単独で高活性の油水
分離剤とすることができる。被処理海水のｐＨは無調整
若しくは６以上でよいが、好ましくは９以上、１１以
下、特に好ましくは９．５以上、１０．５以下である。
１１を越えると活性が低下する。上記のような条件で本
発明の油水分離剤と被処理水を接触させればよい。上記
のような油水分離剤は現在まで知られていない。

【００５３】採取されたＡＰＫ−７８は適当な溶媒又は
溶液に溶かすか、乾燥するかして、又、適当な付加剤又
は添加剤等を添加して、環境汚染の油除去処理等におい
て使用する油水分離剤として使用することができる。
又、本発明の微生物の培養物をそのまま油水分離剤とす
ることもできる。本発明において、培養物とは培養物の
他に培養処理物をも含むものとする。例えば、培養液自
体、それの乾燥物、濃縮物、培養液から菌体を除いた上
澄液、菌体自体及びそれらの乾燥物及び濃縮物等であ
る。

【００５４】

【実施例】次に実施例及び比較例を挙げて本発明を更に
具体的に説明する。尚、文中「％」とあるのは特に断り
の無い限り重量基準である。 実施例１：本発明で使用する混合菌であるＲ−４菌の培
養 本発明で使用する菌の種培養及び本培養に用いる培地の
組成（％）： デンプン＝１％ Ｋ₂ＨＰＯ₄＝０．５％ ＫＨ₂ＰＯ₄＝０．２％ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ＝０．０２％ （ＮＨ₄）₂ＳＯ₄＝０．０５％ ビーフエキス（Ｄｉｆｃｏ社）＝０．０５％ サイアミン塩酸塩＝０．０１％ 蒸溜水＝残り％ ｐＨ ７．０（３Ｎ ＫＯＨで調整） 殺菌条件：１２１℃（達温）及び１５〜２０分間

【００５５】Ｒ−４菌を肉汁寒天平板培地に３０℃で５
日間培養した。当該菌の１白金耳を液体培地８０ｍｌ
（５００ｍｌ容振盪フラスコ）に添加し、３０℃で２日
間培養し種培養を調製した。尚、ロータリーシェイカー
を用いて当該フラスコを振盪した。当該培養液（６０ｍ
ｌ）を５リットル容ジャーファメンター（培地３リット
ル）に添加し、３０℃で３リットル／ｍｉｎの通気量
で、７日間撹拌（２００〜４００ｒ．ｐ．ｍ．）しなが
ら培養した。生育度（ＯＤ３１０ｎｍにおける濁度にて
測定）、油水分離能及びカオリン凝集活性ともに３日間
で最高値に達した後、若干減少傾向を示した。培養液の
粘度は最後まで増加した。生育度１４．５（６６０ｎｍ
における濁度測定）、カオリン凝集活性２３５、粘度
１，３００（ｃｐ）なる培養液を得た。尚、粘度はビス
メトロン回転粘度計を用い、ＳＳ−２ローター使用し、
２５℃及び回転数３０ｒｐｍの条件で測定した。

【００５６】実施例２：ＡＰＫ−７８の分離精製 実施例１のようにしてＲ−４菌を培養して得た培養液３
リットルを純水１２リットルで希釈し、菌体を遠心分離
（２８，０００Ｇ及び３０ｍｉｎ）で除去し、その後、
膜濃縮機を使用して２リットルまで濃縮した。当該濃縮
液に２倍容のエタノールを添加し、繊維状の沈殿物（Ａ
ＰＫ−７８）を析出させた。当該沈殿物を遠心分離で採
取し、シリカゲル入りのデシケーターの中で、一晩減圧
乾燥した。５．５ｇの粗ＡＰＫ−７８を得た（対デンプ
ン収率＝３１．３３％）。

【００５７】５００ｍｇの当該粗ＡＰＫ−７８を蒸溜水
１００ｍｌに溶解した。次に、これに２％cetylpyridiu
m chloride（ＣＰＣ）溶液５０ｍｌを撹拌しながら添加
し、数時間静置し、ＡＰＫ−７８とＣＰＣの複合体の沈
殿物を形成させた。当該複合体の沈殿物を遠心分離によ
り集め、０．５モルの食塩水に溶解した。これに２倍容
のエタノールを添加し、繊維状の沈殿物を得た。当該沈
殿物をエタノール及びアセトンで各々５回洗浄した後、
上記のようにして減圧乾燥した。純度検定で９８％以上
のＡＰＫ−７８（３６０ｍｇ）のを得た（対デンプン収
率、２２．６％）。このことから、Ｒ−４菌の培養液に
は約２．３ｍｇ／ｍｌのＡＰＫ−７８が生産されている
ことが分かる。

【００５８】上記の純度検定は次のようにして行なっ
た。上記の如くして精製されたＡＰＫ−７８を、０．５
ＮのＮａＯＨ水溶液で加水分解し、脱アセチル化した。
得られた脱アセチル化ＡＰＫ−７８について、酢酸セル
ロース膜を支持体として電気泳動を行った。その結果、
当該ＡＰＫ−７８は陽極側に移動し、単一のスポットを
与えた。よって当該ＡＰＫ−７８は純粋なものと判断し
た。

【００５９】実施例３：ＡＰＫ−７８の特質 上記の精製ＡＰＫ−７８について分析した。 １．アミノ糖 エルソン・モーガン法により定性分析を行った。アミノ
糖は検出されなかった。 ２．ウロン酸 カルバゾル・硫酸法により検出を試みたが、検出されな
かった。

【００６０】３．蛋白質 ニンヒドリン法により検出を試みたが、検出されなかっ
た。 ４．元素分析 窒素Ｎ、痕跡；リンＰ、痕跡；硫黄、痕跡。

【００６１】５．構成糖 上記の精製ＡＰＫ−７８を２Ｍのトリフルオロ酢酸で１
００℃で９時間加水分解した。加水分解後、減圧乾固し
た。それを純水に溶解し、分析した。 定性分析： 当該加水分解物について、次の条件で薄層クロマトグラ
フィーを行った。その結果、グルコース及びガラクトー
スのみが検出された。条件：プレート＝シリカゲル６０
（０．５Ｍ ＮａＨＰＯ₄）、展開相＝イソプロピルア
ルコール：アセトン：０．１Ｍ乳酸（２：２：１ 重量
比）。

【００６２】定量分析： 上記加水分解物について、次の条件でＨＰＬＣによる分
析を行った。その結果、ＡＰＫ−７８は、ガラクトース
１モルに対してグルコース８．２モルの割合で構成され
ていることが判明した。 条件：装置＝島津（Shimadzu）ＬＣ−９Ａ、検出器＝島
津分光光度計ＲＦ−５３４、カラム＝ＴＳＫ−ｇｅｌ
Ｓｕｇａｒ ＡＸＧ １５ｃｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．
（東ソ）。

【００６３】６．構成有機酸 ＡＰＫ−７８を、糖と同様に加水分解した。加水分解物
について、薄層クロマトグラフィーによる定性及び同定
分析を次の条件で行なった。その結果コハク酸とピルビ
ン酸が検出された。

【００６４】定性分析： プレート＝セルロースＦ２５４Ｓ又はシリカゲルＦ２５
４、展開相＝ブタノール：ギ酸：水（４：１．５：１
重量比）又はアミルアルコール：０．２５Ｍアンモニア
（２：１ 重量比）。

【００６５】定量分析： 加水分解物について次の条件でＨＰＬＣ分析を行った。 装置＝島津ＬＣ−７Ａ、検出器＝島津紫外分光光度計Ｓ
ＰＤ−６Ａ、カラム＝Excelpak CHA-E11 ３０ｃｍ×
７．８ｍｍＩ．Ｄ．（ＨＰ）、カラム温度＝４０℃、移
動相＝０．０１Ｍ硫酸、移動速度＝０．５ｍｌ／ｍｉ
ｎ、検出波長＝２１０ｎｍ． その結果、コハク酸とピルビン酸が、構成糖であるガラ
クトース１モルに対して各々２．１±０．４モル及び
１．２モル含まれていることが分かった。

【００６６】７．分子量 脱アセチル化したＡＰＫ−７８について、トヨパールＨ
Ｗ７５Ｆゲルカラムを使用するゲルクロマトグラフィー
でＡＰＫ−７８の分子量を求めた（図２参照）。ブルー
デキストランよりも先にＡＰＫ−７８のピークが出現す
るので、分子量は２×１０⁶以上であると判断された。

【００６７】８．ＩＲスペクトル ２，７００〜３，７００ｃｍ^-1に水酸基の吸収、１７０
０ｃｍ^-1及び１，１６０ｃｍ^-1にカルボキシルエステル
結合の吸収、そして１，６００ｃｍ^-1及び１，４００ｃ
ｍ^-1にイオン化カルボキシル基の吸収を示した。

【００６８】９．溶媒に対する溶解性 水に可溶、アルカリに易溶、メタノール及びアセトンに
不溶であった。 １０．粘度特性 ビスメトロン回転粘度計で、ＳＳ−２ ローターを使用
し、２５℃及び回転数２〜６０ｒｐｍの条件で測定し
た。対照物質として下記の比較例１で調製したＡＰＲ−
３を用いた。両物質はＮａ型（塩）にして測定した。濃
度は０．５％溶液とした。その結果を図３に示した。ど
ちらもシュードプラスチック流動特性を示した。ＡＰＫ
−７８はＡＰＲ−３よりも約２．５倍高粘度であった。

【００６９】１１．¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲ分析 条件： ｃ）¹ＨＮＭＲ 装置＝Varian社UNITY INOVA-600型、観測周波数＝５９
９．８ＭＨｚ、溶媒＝Ｄ₂Ｏ、濃度＝４．７５ｍｇ／
０．６５ｍｌ、基準＝アセトン（δＣＨ₃＝２．２２ｐ
ｐｍ）、温度＝３０℃、５０℃、観測幅＝６ｋＨｚ、デ
ータ点＝６４Ｋ、パルス幅＝４５°、パルス繰返し時間
＝７ｓｅｃ、積算回数＝３２。

【００７０】ｄ）¹³ＣＮＭＲ 装置＝JEOL GSX400型、観測周波数＝１００．５ＭＨ
ｚ、溶媒＝Ｄ₂Ｏ、濃度＝１０８．６ｍｇ／２．５ｍ
ｌ、基準＝ジオキサン（δ＝６７ｐｐｍ）、Dioxane／
Ｄ₂Ｏ溶液を測定し、基準にした。温度＝７０℃（１０
８．６ｍｇ／２．５ｍｌ溶液）、観測幅＝２０ｋＨｚ、
データ点＝３２Ｋ、パルス幅＝４５°、パルス繰返し時
間＝２ｓｅｃ、積算回数＝５４６００。 ｅ）ＤＥＰＴ（下記以外¹³ＣＮＭＲと同条件）ＤＥＰＴ
角＝１３５℃、パルス繰返し時間＝２．５ｓｅｃ、積算
回数＝８０００。

【００７１】上記のスペクトルは図１、４〜１２に示し
た。スペクトルを解析して、次の結果を得た。 （ａ）グルコース及びガラクトースの１位はβ型であ
る。 （ｂ）グルコースの結合様式はβ１−３、β１−３、β
１−４、β１−６の全てが存在する。 （ｃ）ピルビン酸は図１３のように構造で結合してい
る。 （ｄ）芳香族化合物は含まれていない。 以上の特性を有する高分子物質は、現在まで発見されて
いないので、新規物質と認定した。又、芳香族化合物は
含まれていないので、分解しても環境ホルモンを生成す
る恐れが全くない。

【００７２】比較例１ ＫＹＭ−３、ＫＹＭ−４、ＫＹＭ−５、及びＫＹＭ−７
からなる複合微生物Ｒ−３（Biochi.Biotech.Bioche
m.、58巻、1589〜1594頁、1994年）を実施例１と同様に
培養して、培養液３リットルから純度９８％以上のＡＰ
Ｒ−３を５．１３ｇ得た。ＡＰＫ−７８の収率と比較す
ると３０％少なかった。

【００７３】実施例４ 上記のＡＰＲ−３を用いて、実施例３と同様にして糖及
び有機酸の組成（モル比）を調べた結果、次の如くであ
った。 ガラクトース＝１．０、グルコース＝５．６±０．１、
フコース＝０．７、コハク酸＝０．６±０．１、ピルビ
ン酸＝２．５±０．１。 ＡＰＫ−７８とは大幅に異なるモル比且つＡＰＫ−７８
にはなかったフコースが存在していた。

【００７４】実施例５ 実施例１で得たＡＰＫ−７８及び比較例１で得たＡＰＲ
−３の粉末について、各々の溶液（５０ｍｇ／１ｍｌ）
を調製し、その内の２０ｍｌを使用して、各々について
上記の油水分離能測定法により油水分離能を測定し、下
記表６の通りの結果を得た。

【００７５】

【表６】 表６から分かるように、本発明のＡＰＫ−７８は、カル
ボキシル基を有するのでアニオン系高分子物質である
が、公知の油水分離剤と異なって、他の薬剤を併用する
ことなく単独で油水分離能を有する。又、ＡＰＲ−３の
ものより高活性を有する。

【００７６】実施例６前記の混合菌Ｒ−５菌を用いて、
実施例１と同様に培養し、その培養の経時変化を調べ
た。その結果を図１４に示した。図１４から分かるよう
に培養３日間でカオリン凝集活性は最高値に達した。
尚、活性は培養液の上澄液について測定した。ＡＰＫ−
７８生産能を有しないが、微生物産生凝集剤を生産する
ことが知られているロードコッカス・エリスロポレスＫ
Ｒ−２５６−２（ＦＥＲＭ Ｐ−３９２３）を対照菌株
として採用し、Ｒ−５菌と同様の条件で培養した結果を
図１５に示した（比較例１参照）。図１４及び図１５か
ら分かるように、Ｒ−５菌は格段に活性が高い培養液を
生産することが分かる。尚、生育度は６６０ｎｍにおけ
る濁度測定によった。又、図１５においてはロードコッ
カス・エリスロポレスＫＲ−２５６−２がＡＰＫ−７８
を生産しないので、ＡＰＫ−７８の生産量に替えて粘度
測定値をもって凝集活性物質の生産量を表示した。

【００７７】比較例２ ロードコッカス・エリスロポレスＫＲ−２５６−２（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−３９２３）を、実施例１と同様な条件で培
養して得た培養液の上澄液について、膜濃縮により２５
倍の濃縮を行い、ＡＰＫ−７８溶液（５０ｍｇ／１ｍｌ
海水）の調製条件と同様なものにした。実施例４と同様
の条件で油水分離能を測定し、下記表７の結果を得た。

【００７８】

【表７】

【００７９】実施例７ ＫＹＭ−１〜ＫＹＭ−８を図１６に示したような組み合
わせてなる複合微生物Ｒ−４〜Ｒ−９及びＫＹＭ−１〜
ＫＹＭ−８の単独菌を用いて、実施例１と同条件で培養
した。そして、図１７に示すような結果を得た。

【００８０】実施例８ Ｒ−４菌を、サイアミン添加又は無添加のニュ−トエン
トアガー（nutrient agar）（Difco）の斜面培地に５代
植え継いで、ＡＰＫ−７８の生産性を比較した。ＡＰＫ
−７８の生産性は、実施例１と同様の条件で培養して、
培養液中のＡＰＫ−７８を定量することにより行った。
その結果、添加した培地に植え継いだものは、ＡＰＫ−
７８を１６００ｍｇ／ｌ生産していたが、無添加培地に
植え継いだものは、２００ｍｇ／ｌしか生産されていな
かった。

【００８１】

【発明の効果】本発明の油水分離剤は、糖と有機酸から
構成され、環境ホルモン等の生成する恐れの全くない天
然の微生物産生の高分子物質で、海水においても活性の
高い油水分離能を有する。そして、他の薬剤を併用する
ことなく、単独で高活性の油水分離剤として使用でき
る。被処理水のｐＨを酸性とかアルカリ性に無理に調整
することなく、そのまま使用できる。それ故に、環境汚
染の油水分離処理において、又、排水処理において、そ
れらの処理を効率よく達成することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＡＰＫ−７８の¹ＨＮＭＲスペクトル

【図２】 ＡＰＫ−７８のゲルクマトグラフィーパター
ン。

【図３】 ＡＰＫ−７８及びＡＰＲ−３の粘度特性。

【図４】 ＡＰＫ−７８の¹ＨＮＭＲスペクトル。但
し、５〜３２ｐｐｍの範囲の拡大図。

【図５】 ＡＰＫ−７８の¹³ＣＮＭＲスペクトル。

【図６】 ＡＰＫ−７８の¹³ＣＮＭＲスペクトル。但
し、５５〜９０ｐｐｍの範囲の拡大図。

【図７】 ＡＰＫ−７８の¹³ＣＮＭＲスペクトル。但
し、１０〜４５ｐｐｍの範囲の拡大図。

【図８】 ＡＰＫ−７８の¹³ＣＮＭＲスペクトル。但
し、１７２〜１８６ｐｐｍ及び９６〜１１０ｐｐｍの範
囲の拡大図。

【図９】 ＡＰＫ−７８のＤＥＰＴスペクトル。

【図１０】 ＡＰＫ−７８のＤＥＰＴスペクトル。但
し、５５〜９０ｐｐｍの範囲の拡大図。

【図１１】 ＡＰＫ−７８のＤＥＰＴスペクトル。但
し、１０〜４５ｐｐｍの範囲の拡大図。

【図１２】 ＡＰＫ−７８のＤＥＰＴスペクトル。但
し、９６〜１１０ｐｐｍの範囲の拡大図。

【図１３】 ピルビン酸の結合様式

【図１４】 Ｒ−４菌の培養の経時変化。

【図１５】 ロードコッカス・エリスロポレスＫＲ−２
５６−２（ＦＥＲＭ Ｐ−３９２３）菌株の培養の経時
変化。

【図１６】 本発明で用いるＫＹＭ−８〜ＫＹＭ−７の
各単独菌、及びＡＰＫ−７８生産能を有する複合微生物
であるＲ−４〜Ｒ−９菌のＡＰＫ−７８生産性比較。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−１１３５８ 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−１６８０６ (72)発明者 倉根 隆一郎 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技 術院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 金川 貴博 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技 術院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 鎌形 洋一 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技 術院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 花田 智 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技 術院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 蔵田 信也 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境 エンジニアリング株式会社内 (72)発明者 山田 一隆 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境 エンジニアリング株式会社内 (72)発明者 横幕 豊一 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境 エンジニアリング株式会社内 (72)発明者 小山 修 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境 エンジニアリング株式会社内 (72)発明者 古庄 健太 東京都千代田区東神田１−９−８ 環境 エンジニアリング株式会社内 審査官 新見 浩一 (56)参考文献 日本農芸化学会誌，Ｖｏｌ．73，臨時 増刊号，1999年度大会講演要旨集，Ｐ. 276（Ｍａｒ．1999) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C02F 1/56 B01D 17/05 501 C12N 1/00 C12P 1/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (8)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の（１）〜（１０）の特性を有し、
   且つ油水分離能を有する新規高分子物質（以下ＡＰＫ−
   ７８という。）を主成分とすることを特徴とする油水分
   離剤。 （１）アミノ糖（エルソン・モーガン法）：検出されな
   い。 （２）ウロン酸（カルバゾール・硫酸法）：検出されな
   い。 （３）蛋白質（ニンヒドリン法）：検出されない。 （４）元素分析：窒素Ｎ、リンＰ及び硫黄Ｓは痕跡。 （５）構成する糖及び有機酸の組成（モル比）：ガラク
   トース１、グルコース８．２、コハク酸２．１±０．
   ４、ピルビン酸１．２。 （６）分子量：２×１０⁶以上。 （７）粘度（ビスメトロン回転粘度計、ＳＳ−２ロータ
   ー、２５℃、回転数３０ｒｐｍ、溶媒は純水、Ｎａ型Ａ
   ＰＫ−７８の０．５重量％濃度溶液）：２５０ｃｐ。 （８）溶媒溶解性：水に可溶、アルカリに易溶、メタノ
   ール、エタノール及びアセトンに不溶。 （９）ＩＲスペクトル吸収帯（ｃｍ^-1）：２，７００〜
   ３，７００、１，７３０、１，６００、１，４００、
   １，１６０。 （１０）図１に記載の¹ＨＮＭＲのスペクトルを有す
   る。
2. 【請求項２】 ＡＰＫ−７８が、ＡＰＫ−７８生産能を
   有する微生物を固体培地又は液体培地に培養して得られ
   る培養物に含まれる高分子物質である請求項１に記載の
   油水分離剤。
3. 【請求項３】 ＡＰＫ−７８が、ＡＰＫ−７８生産能を
   有する微生物をサイアミン又はその誘導体を含有する培
   地に培養して得られる培養物である請求項２に記載の油
   水分離剤。
4. 【請求項４】 ＡＰＫ−７８生産能を有する微生物が、
   少なくともセルロモナス及びアグロバクテリウム属に属
   する細菌２種を含む複合微生物からなる請求項２又は３
   に記載の油水分離剤。
5. 【請求項５】 セルロモナス属に属する細菌が、セルロ
   モナス・セルランス、アグロバクテリウム属に属する細
   菌がアグロバクテリウム・テュメファシエンス及びそれ
   らに極めて近い種に属する細菌である請求項４に記載の
   油水分離剤。
6. 【請求項６】 セルロモナス・セルランスに属する細菌
   菌株がＫＹＭ−７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１３５８）、ア
   グロバクテリウム・テュメファシエンスに属する細菌菌
   株がＫＹＭ−８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８０６）である
   請求項５に記載の油水分離剤。
7. 【請求項７】 ＡＰＫ−７８が、ＡＰＫ−７８生産能を
   有する微生物をサイアミン又はその誘導体を含有する培
   地に生育させ植え継ぎ保存したものを培養して得られた
   培養物である請求項２、３、４、５又は６に記載の油水
   分離剤。
8. 【請求項８】 請求項１〜７の何れか１項に記載の油水
   分離剤を油懸濁水と接触させることを特徴とする油水分
   離方法。