JP2007512821A - アミドの製造 - Google Patents
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Abstract
Description
i)ニトリルヒドラターゼ生体触媒を産生することができる微生物を用意する工程、
ii)微生物を適当な増殖培地中で培養する工程、
iii)微生物を貯蔵する工程、
iv)水性媒質中で微生物をニトリルと接触させ、そして、それによってニトリルをアミドへ変換する工程、
を含み、微生物を、活発には増殖していない遊離細胞として、水を含む貯蔵媒質中で貯蔵する方法を提供する。
1. 起源および寄託
菌株 NCIMB 41164は、本発明者らが英国、ブラッドフォードで土壌から分離して、2003年3月5日にNational Collection of Industrial and Marine Bacteria(NCIMB)に寄託し、ブダペスト条約の下に受託番号NCIMB 41164を割当てられた。
2. 形態的および培養特性
(1) 多形性の増殖
(2) 運動性:運動不能
(3) 非胞子形成菌
(4) グラム陽性
(5) 好気性
(6) 栄養寒天培地上の増殖により、30℃48時間以内にサーモンピンクの円形コロニーを生ずる。
(1)ロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164を、次の成分(g/L):リン酸水素二カリウム0.7;リン酸水素カリウム0.3;グルコース1.0;酵母エキス3.0;硫酸マグネシウム七水和物0.5;塩化コバルト六水和物0.01;尿素5.0、を含む180Lの培地を入れた280Lの発酵槽中で増殖させた。培地のpHをpH7.2に調整した。培養物を30℃で3日間増殖させた。
ロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164を、2Lエルレンマイヤーフラスコ中で5日間28℃で、180rpmで振動させながら、次の成分(g/L):リン酸水素二カリウム0.7;リン酸水素カリウム0.3;グルコース10,0;酵母エキス3.0;尿素5.0;硫酸マグネシウム七水和物0.5;塩化コバルト六水和物0.01、を含む培地中で増殖させた。細菌細胞を培養液の半分から遠心分離を用いて収穫した。培養液を2分し、半分に窒素を10分間用いて脱酸素した。脱酸素した培養液部分、酸素を含む培養液部分の両方を、4、15および25℃で1週間インキュベーションした。両部分のニトリルヒドラターゼ活性を定期的に測定した。
ロドコッカス ロドヒラスJ1を、2Lエルレンマイヤーフラスコ中、5日間28℃で180rpmで振動させながら次の成分(g/L):リン酸水素二カリウム0.5;リン酸水素カリウム0.5;グルコース20.0;ペプトン5.0;酵母エキス1.0;尿素7.5;硫酸マグネシウム七水和物0.5;塩化コバルト六水和物0.01、を含む培地中で増殖させた。培養液の半分からの細菌細胞を、遠心分離を用いて収穫した。培養液を2分し、半分を窒素を10分間用いて脱酸素した。脱酸素した培養液部分、酸素を含む培養液部分の両方を、4、15および25℃で1週間インキュベーションした。両部分のニトリルヒドラターゼ活性を定期的に測定した。結果を表2に示す。
解凍したロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164の細胞を水に再懸濁した。1週間の間ニトリルヒドラターゼ活性を測定した。測定した相対的なニトリルヒドラターゼ活性を表3に示す。
(1)ロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164を、次の成分(g/L):リン酸水素二カリウム0.7;リン酸水素カリウム0.3;グルコース10.0;酵母エキス3.0;硫酸マグネシウム七水和物0.5;尿素5.0;塩化コバルト六水和物0.01;全体で1Lとする水道水、を含む100mlの培地を含む、0.5Lのバッフル付きエルレンマイヤーフラスコ中で増殖させた。培地のpHをpH7.2に調整した。培養物を30℃で4日間増殖させた。ニトリルヒドラターゼ活性を25℃で2、3および4日間の増殖の後に測定した。
(2)(a)ロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164を、尿素をジメチル尿素と置き換えた点を除いて(1)に記述した培地で増殖させた。
(b)ロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164を、尿素をエチル尿素と置き換えた点を除いて(1)に記述した培地で増殖させた。
(c)ロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164を、2.5g/Lの尿素および2.5g/Lのジメチル尿素を5g/Lの尿素のかわりに培地に加えた点を除いて、(1)に記述した培地で増殖させた。
(d)ロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164を、2.5g/Lの尿素および2.5g/Lのエチル尿素を5g/Lの尿素のかわりに加えた点を除いて、(1)に記述した培地で増殖させた。
ニトリルヒドラターゼ活性を表4に示す。
Claims (10)
- アミドを対応するニトリルから生産する方法であって、
i)ニトリルヒドラターゼ生体触媒を産生することができる微生物を用意する工程、
ii)増殖培地中で微生物を培養する工程、
iii)微生物を貯蔵する工程、
iv)ニトリルを水性媒質中で微生物と接触させ、それによりニトリルをアミドに変換する工程、
を含み、微生物を、活発には増殖しない遊離細胞として水を含む貯蔵媒質中で貯蔵する、方法。 - 微生物を増殖培地から微生物細胞全体を含む水性ペーストの形で回収する、請求項1記載の方法。
- 微生物を増殖培地から回収し、水、生理的食塩水、生理的緩衝液および増殖培地の少なくとも1つの成分を含む水溶液からなる群より選ばれる懸濁媒質中に、微生物細胞の水性懸濁液として貯蔵する、請求項1記載の方法。
- 微生物を増殖培地中で保持する、請求項1記載の方法。
- アミドがエチレン性不飽和のアミド、好ましくはアクリルアミドまたはメタクリルアミドである、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 貯蔵媒質中に含まれる増殖培地の成分が尿素または尿素誘導体を含む、請求項1〜5のいずれかに記載の方法。
- 微生物を貯蔵媒質の凍結点より上の温度で、好ましくは0℃以上、より好ましくは4〜30℃で貯蔵する、請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- 微生物を少なくとも2日間、好ましくは3〜28日間貯蔵する、請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- 微生物がロドコッカス(Rhodococcus)属であり、好ましくはロドコッカス ロドヒラス(Rhodococcus rhodochrous)種である、請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
- 微生物がロドコッカス ロドヒラスNCIMB 41164である、請求項1〜98のいずれかに記載の方法。
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