JP2000097938A - 毛髪の鑑別法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は毛髪が毛周期のどの周期の状態にあ
るかを、簡易且つ正確に鑑別する方法を提供することを
課題とする。 【解決手段】 ＦＧＦ−５に結合しＦＧＦ−５Ｓに結合
しない抗体と、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５に結合する
抗体を用いた皮膚切片の免疫染色により、毛包周辺系に
おけるＦＧＦ−５Ｓの発現を指標して毛髪を鑑別する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、毛髪を鑑別する方
法に関する。詳しくは、本発明は、毛髪が毛周期のどの
周期の状態にあるかを鑑別する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】毛成長の因子やメカニズムを知ること
は、近年増大している、薄毛や脱毛などの処置や対策な
どを知る上で非常に重要なことである。この為、毛成長
の因子が種々研究されているが、未だ解明されていな
い。従って、この様な毛成長のメカニズムを明らかにす
ることが望まれていた。この中で、本発明者らがこれま
で行ってきた研究では、ＦＧＦ−５（線維芽細胞増殖因
子５）を介して、マクロファージが毛成長の制御に関与
している可能性が高いことを見いだしている。尚、ヒ
ト、マウス及びラット由来のＦＧＦ−５について、その
アミノ酸配列及びｍＲＮＡの塩基配列は既に知られてい
る（Zhan X. et al. Mol.Cell.Biol.8:3487-3495,1988,
Haub O. et at. Proc. Natl. Acad. USA 87:8022-802
6,1996, Hattori Y. et al. Biochim. Biophys Acta 13
06:33-33,1996）。

【０００３】一方、ＦＧＦ−５の関連物質としては、Ｆ
ＧＦ−５遺伝子の産物であって、選択的スプライシング
により、エクソン２の全体とエクソン３の大部分にあた
る領域が欠落したＦＧＦ−５Ｓが存在することが知られ
ているが、このＦＧＦ−５Ｓについてはその役割等は未
だ明らかにされていない。更に、生体内に於けるその存
在位置も明確には知られていない。尚、ＦＧＦ−５Ｓの
アミノ酸配列については既に知られている。

【０００４】しかし、ＦＧＦ−５Ｓが毛包に於いて存在
し、毛包周辺系付近のマクロファージ中に存在している
ＦＧＦ−５とともに毛成長をコントロールしていること
は全く知られていない。

【０００５】また、毛の成長する基本的生理変化は毛周
期と呼ばれる生理現象であるが、毛は常に成長している
のではなく、一定の周期で成長、退化・中間、休止、へ
と移行して成長が停止し、脱落し再び成長へ移る。頭毛
では成長期２〜６年、中間期約２週間、休止期３〜４ヶ
月である。そして、毛包ごとに独立した周期で活動し、
成人頭毛は全体の８５％〜９０％が成長期、１％が中間
期、９〜１４％が休止期の毛である。特定の脱毛症は毛
周期の異常によることも分かっている。

【０００６】従って、毛髪が毛周期のどの周期の状態に
あるかを鑑別することは、成長期にある毛と中間期、休
止期にある毛の比率等を知ることが出来、脱毛を防止
し、発毛を促進させる上で極めて重要である。しかし、
従来は、抜毛により得た毛根像から毛周期の百分率を調
べることにより、脱毛症等の診断等が行なわれていたた
め、充分な結果が得られなかった。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、脱毛を防止
し、また、発毛を促進する情報を提供するために、毛髪
が毛周期のどの周期の状態にあるかを、簡易且つ正確に
鑑別する方法を提供することを課題とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため、鋭意研究を重ねた結果、毛包における
ＦＧＦ−５Ｓが、毛包周辺に存在するマクロファージが
発現しているＦＧＦ−５とともに、毛成長のコントロー
ルに関わっていることを見いだし、本発明を完成させる
に至った。

【０００９】すなわち本発明は、以下のとおりである。 （１）毛包周辺系におけるＦＧＦ−５Ｓの発現を指標と
することを特徴とする毛髪の鑑別法。 （２）毛包周辺系の組織が、毛包であることを特徴とす
る（１）の方法。 （３）ＦＧＦ−５Ｓの発現を、ＦＧＦ−５Ｓに結合する
抗体を用いて検出することを特徴とする（１）の方法。 （４）更に、ＦＧＦ−５の発現を指標とすることを特徴
とする（１）の方法。 （５）ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５の発現を、ＦＧＦ−
５Ｓ及びＦＧＦ−５に対する親和性が異なる少なくとも
２種類の抗体を用いて検出することを特徴とする前記
（４）の方法。 （６）前記抗体が、ＦＧＦ−５に結合しＦＧＦ−５Ｓに
結合しない抗体と、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５に結合
する抗体である（５）の方法。 （７）前記ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５の検出を、前記
抗体を用いた皮膚切片における比較染色により行う
（６）の方法。 （８）ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５の発現を、皮膚切片
中のＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５のそれぞれをコードす
るｍＲＮＡを、これらのｍＲＮＡを区別し得る核酸プロ
ーブを用いてイン・サイチュウハイブリダイゼーション
により検出することを特徴とする（４）の方法。 （９）毛包周辺系におけるＦＧＦ−５Ｓの発現を指標と
して毛髪を鑑別するためのキット。 （１０）ＦＧＦ−５に結合しＦＧＦ−５Ｓに結合しない
抗体と、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５に結合する抗体と
を含む、毛髪の鑑別用キット。

【００１０】尚、本発明においては、「毛包周辺」と
は、毛包および毛包の周辺の皮膚の部分をいう。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、毛包周辺系におけるＦＧＦ−５Ｓの発現を指
標とすることを特徴とする毛髪の鑑別法である。

【００１２】ＦＧＦ−５Ｓは、ＦＧＦ−５遺伝子から発
現するタンパク質であって、ＦＧＦ−５のエクソン２が
欠落したｍＲＮＡによりコードされており、ＦＧＦ−５
より、短いことが知られている。ヒト由来のＦＧＦ−５
Ｓのアミノ酸配列は、鈴木らによって報告されており
（第７０回日本生化学大会発表抄録集ｐ７７８、１９９
７)、その正確な機能は知られていないが、ＦＧＦ−５
と関連が極めて深いものと考えられる。

【００１３】上記ＦＧＦ−５Ｓの発現は、ＦＧＦ−５Ｓ
に結合する抗体や、ＦＧＦ−５ＳのｍＲＮＡに結合する
ＲＮＡプローブまたはＤＮＡプローブを使用することに
より、検出することが出来る。

【００１４】まず、本発明のうち、抗体を用いる実施の
形態について詳述する。本発明においてＦＧＦ−５Ｓの
検出は、ＦＧＦ−５Ｓに結合する抗体を用いて行う。該
抗体は、ＦＧＦ−５Ｓ又はその部分ペプチドで動物を免
疫することにより得られる。該抗体を用いてＦＧＦ−５
Ｓを検出するには、通常の抗原−抗体反応を利用した免
疫法による抗原の検出に用いられる技術を採用すること
ができる。

【００１５】本発明の方法においては、ＦＧＦ−５Ｓの
発現に加えて、さらにＦＧＦ−５の発現を指標とするこ
とが好ましい。この場合、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５
のそれぞれの発現は、分別して検出できることが好まし
い。具体的には、これらの発現は、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦ
ＧＦ−５に対する親和性が異なる少なくとも２種類の抗
体を用いて検出することができる。前記抗体としてより
具体的には、ＦＧＦ−５に結合しＦＧＦ−５Ｓに結合し
ない抗体（以下、「ＦＧＦ−５特異的抗体」ともいう）
と、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５に結合する抗体（以
下、「抗ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−５抗体」ともいう）が
挙げられる。ＦＧＦ−５特異的抗体と抗ＦＧＦ−５Ｓ・
ＦＧＦ−５抗体は、毛髪の鑑別用のキットを構成するこ
とができる。

【００１６】ＦＧＦ−５特異的抗体は、ＦＧＦ−５には
存在し、ＦＧＦ−５Ｓには存在しないアミノ酸配列、例
えばＦＧＦ−５のエクソン２のアミノ酸配列を有するペ
プチドを免疫源として、調製することができる。また、
抗ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−５抗体は、ＦＧＦ−５及びＦ
ＧＦ−５Ｓに共通するアミノ酸配列を有するペプチド、
例えばＦＧＦ−５Ｓを免疫源として、調製することがで
きる。

【００１７】ＦＧＦ−５及びＧＦ−５Ｓは、既にそのア
ミノ酸配列やＤＮＡ配列が知られているので、ペプチド
シンセサイザーで部分ペプチドを合成するか、または、
ＤＮＡシンセサイザーを用いてＦＧＦ−５又はＦＧＦ−
５Ｓもしくはこれらの部分ペプチドをコードするＤＮＡ
を合成した後、この合成ＤＮＡをベクターに挿入し、こ
れを大腸菌等の宿主に導入し、部分ペプチドや全タンパ
クを生産させる。これらのペプチド又はタンパク質は、
そのまま、あるいはキーホール・リンペットのヘモシア
ニンなどと結合させて免疫源とし、動物を感作させ、こ
の動物より血清を採取し抗血清を得てもよいし、さら
に、この動物から脾臓細胞を取り出し、ミエローマ等の
癌細胞と融合させ、上記ペプチド又はタンパク質に結合
するモノクロナール抗体を産生するハイブリドーマ細胞
株を選び出し、これを培養してモノクローナル抗体を産
生させてもよい。ハイブリドーマ及びモノクローナル抗
体の調製については、Kohler, Milstein, Nature,256:4
95-492 (1975)等の文献に記載されている。本発明にお
いては、抗体はモノクローナル抗体であることが好まし
い。

【００１８】上記のようなＦＧＦ−５特異的抗体及び抗
ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−５抗体を用いることにより、Ｆ
ＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５のそれぞれの発現を分別して
検出することができる。これらの抗体を用いてＦＧＦ−
５Ｓ及びＦＧＦ−５を検出するには、通常の抗原−抗体
反応を利用した免疫法による２種類の抗原の検出に用い
られる技術を採用することができる。

【００１９】上記免疫法として具体的には、前記抗体を
用いた皮膚切片における比較染色により行う方法が挙げ
られる。すなわち、両抗体を用いて皮膚切片を免疫染色
した後、ＦＧＦ−５特異的抗体により染色される部位は
ＦＧＦ−５が存在していることがわかる。また、ＦＧＦ
−５特異的抗体によっては染色されず、抗ＦＧＦ−５Ｓ
・ＦＧＦ−５抗体により染色される部位は、ＦＧＦ−５
Ｓが存在していることがわかる。

【００２０】免疫染色は、上記抗体に標識物質を結合さ
せ、該標識物質を検出する直接法でもよいし、上記抗体
に結合し、標識物質で標識された二次抗体を用いる間接
法でもよい。標識物質としては、蛍光物質を用いる蛍光
抗体法でもよいし、酵素（ワサビペルオキシダーゼ、ア
ルカリホスファターゼ等）を用い、酵素反応により基質
を発色させる酵素抗体法でもよい。また、標識物質とし
て、ビオチンを用い、これに酵素等を結合させたアビジ
ンもしくはストレプトアビジンを結合させることによっ
ても、抗体を検出することができる。さらに、¹³⁵Ｉ等
の等のラジオアイソトープを用いてもよい。また、二次
抗体としては、ＦＧＦ−５特異的抗体又は抗ＦＧＦ−５
Ｓ・ＦＧＦ−５抗体の調製に用いた動物のイムノグロブ
リンに結合する抗体を用いる。多種の標識化抗イムノグ
ロブリンが市販されているので、それらを用いることも
できる。

【００２１】免疫染色による皮膚組織の染色は、通常、
皮膚組織の固定化、切片の作製、免疫反応、標識物質の
検出の手順で行うことができる。間接法では、免疫反応
は、試料と一次抗体（ＦＧＦ−５特異的抗体又は抗ＦＧ
Ｆ−５Ｓ・ＦＧＦ−５抗体）との反応、二次抗体との反
応とからなる。

【００２２】組織の固定化は、通常の固定の方法により
行うことができる。即ち、被検動物の背部皮膚を摂取
し、ホルマリン等で固定する。切片を作製する方法に
は、凍結切片法とパラフィン包理法とがあるが、より薄
い切片を作製できるという点からはパラフィン包理法の
ほうが好ましい。免疫反応は、抗体の濃度、反応時間、
ブロッキング溶液の濃度を調節することで、適宜最適な
条件を決定することができる。また、免疫組織学的染色
を行った後に、ヘマトキシリン染色等で細胞核を染める
ことも可能である。

【００２３】皮膚切片の試料は、それぞれの抗体を異な
る蛍光を発色する物質で標識した場合は単一の試料を用
いて行うことも可能であるが、隣接する切片を用いて複
数の試料を作製し、一つの試料につき一種類の抗体を用
いてそれぞれ免疫染色してもよい。

【００２４】次に、本発明のうち、イン・サイチュウ
（in situ）ハイブリダイゼーション法による実施の形
態について詳述する。この実施の形態においてＦＧＦ−
５Ｓの発現は、ＦＧＦ−５ＳをコードするｍＲＮＡに結
合する核酸プローブを用いて行う。該プローブは、ＦＧ
Ｆ−５ＳをコードするｍＲＮＡ又はその一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を有するＤＮＡ又はＲＮＡである。
該プローブを用いてＦＧＦ−５Ｓを検出するには、通常
のハイブリダイゼーションによる核酸の検出に用いられ
る技術を採用することができる。

【００２５】本態様においても、ＦＧＦ−５Ｓの発現に
加えて、さらにＦＧＦ−５の発現を指標とすることが好
ましい。この場合も、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５のそ
れぞれの発現は、分別して検出できることが好ましい。
具体的には、これらの発現は、ＦＧＦ−５ｍＲＮＡに結
合しＦＧＦ−５ＳｍＲＮＡに結合しないプローブ（以
下、「ＦＧＦ−５特異的プローブ」ともいう）と、ＦＧ
Ｆ−５ＳｍＲＮＡ及びＦＧＦ−５ｍＲＮＡに結合するプ
ローブ（以下、「ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−５プローブ」
ともいう）が挙げられる。プローブは、ＦＧＦ−５Ｓｍ
ＲＮＡ及びＦＧＦ−５ｍＲＮＡの塩基配列は知られてい
るので、その配列に基づいてオリゴヌクレオチドを化学
合成することによって、作製することができる。

【００２６】ハイブリダイゼーンションの方法は特に制
限されないが、ＦＧＦ−５Ｓ又はＦＧＦ−５の発現分布
を知るためには、in situハイブリダイゼーション法が
好ましい。この方法は組織中にｍＲＮＡを保ったまま組
織切片を作製し、切片上でプローブとｍＲＮＡとのハイ
ブリダイゼーションを行うものである。プローブの標識
には¹³⁵Ｉ等のラジオアイソトープを用いる方法と非放
射性物質を用いた方法があるが、いずれであってもよ
い。非放射性物質を用いる方法としては、ジゴキシゲニ
ン（ＤＩＧ）等を標識物質として用いる方法が例示でき
る。

【００２７】in situハイブリダイゼーションは、通
常、組織切片の作製、該切片とプローブとのインキュベ
ーション（ハイブリダイゼーション）、洗浄、標識物質
の検出の手順で行うことができる。

【００２８】皮膚切片の作製は、上記の抗体を使用した
比較染色法と同様である。例えば、調製した切片をのせ
たスライドグラスをドライヤーで乾かし、タンパク質の
変性、核酸の固定などの通常の前処理を行う。そして、
使用直前に予め一本鎖に熱変性させたＤＮＡ等を含むハ
イブリダイゼーション溶液をプローブと混ぜ、該混合液
に前記スライドグラスを浸漬する。その後、ＳＳＣ等の
洗浄液を使用して数回プローブ溶液を洗浄する。そし
て、反応を停止したあとで水で洗い、水性封入剤で水性
封入し、標識物質を検出する。最後に組織の染色を行う
ことにより、組織を眺めながらハイブリダイゼーション
の結果を検討することも可能である。

【００２９】なお、これらの条件は、発色結果に基づい
て適宜条件に変更を加えることで、最適な条件を決定す
ることができる。

【００３０】

【実施例】以下実施例を挙げて本発明を更に具体的に説
明する。 （１）ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５の調製 ＦＧＦ−５Ｓは、次のようにして調製した。ＦＧＦ−５
Ｓとマルトースバインディングプロテインとの融合タン
パク質を発現するように、ＦＧＦ−５ＳをコードするＤ
ＮＡをベクター（ｐＭＡＬ−ｃ２）のＥｃｏＲＩ部位に
挿入し、得られた組換えベクター（ｐＭＡＬ／ｈｕｍＦ
ＧＦ５Ｓ）で大腸菌（E.coli BL21株)を形質転換した。

【００３１】上記形質転換体を培養し、isopropylthiog
alactoside添加により発現した融合タンパクを、アミロ
ース（アミロースレジン：New England BioLabs 製、Be
verly, MA）にバインディングさせ、１０ｍＭマルトー
スでリリースさせ、特異的なプロテアーゼであるファク
ターＸａでマルトースバインディングプロテインとＦＧ
Ｆ−５Ｓを分離した後、アミロースカラム（アミロース
レジン：New EnglandBioLabs 製、Beverly, MA）を用い
てマルトースバインディングプロテインを除去し、ＦＧ
Ｆ−５Ｓを得た。

【００３２】ＦＧＦ−５については、公知のアミノ酸配
列を基にして、配列番号１に示す合成ペプタイドを作製
した。尚、配列番号１のアミノ酸配列は、ＦＧＦ−５の
エクソン３のアミノ酸配列の一部である。

【００３３】配列番号１に示すアミノ酸配列のうち、Ｎ
末端のシステインはもともとの当該部分のアミノ酸配列
には含まれないが、キーホール・リンペットのヘモシア
ニンを結合するために付与した。ＦＧＦ−５の部分ペプ
タイドは、抗原としてモノクローナル抗体の作製に用い
た。即ち、前記ペプタイド１００μｇとフロインドの完
全アジュバントとを乳化し、ＢＡＬＢ／ｃマウスに静脈
注射した。更に１週間後と２週間後に１００μｇの抗原
とフロインドの不完全アジュバントとを静脈注射した。
４週間後には５０μｇの抗原を生理食塩水に溶解し静脈
注射した。これらの感作したマウスより脾臓細胞を取り
出し、ミエローマ細胞Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５と融合さ
せ、ＦＧＦ−５特異的モノクローナル抗体を産生するハ
イブリドーマを選び出し、これを培養してモノクローナ
ル抗体を得た。

【００３４】一方、抗ＦＧＦ−５・ＦＧＦ−５Ｓモノク
ローナル抗体は、ＦＧＦ−５Ｓ全タンパクを抗原とし、
他は基本的にＦＧＦ−５特異的モノクローナル抗体と同
様の方法で得た。尚、配列番号２、３及び４に、ラット
のＦＧＦ−５塩基配列、ＦＧＦ−５のアミノ酸配列及び
ＦＧＦ−５Ｓのアミノ酸配列をそれぞれ示す。

【００３５】（２）皮膚切片の染色 ウィスター系ラットの背部皮膚を採取し、ホルマリン固
定後、脱水しパラフィン包埋した。これを切り出し切片
を作製し、ゼラチンコートしたスライドグラス上にマウ
ントし、キシレンで脱パラフィンし、エタノール系列で
水和した。このようなスライドグラスを２枚用意した。
一方のスライドグラスをＦＧＦ−５特異的モノクローナ
ル抗体を用いて、他方のスライドグラスを抗ＦＧＦ−５
Ｓ・ＦＧＦ−５モノクローナル抗体を用いて、それぞれ
処理した。これらの試料をアビジン−ビオチンイムノペ
ルオキシダーゼ法により染色した。即ち、ビオチン結合
ヤギ抗マウス抗体（Chemicon,Temecula,CA)およびペル
オキシダーゼ結合ストレプトアビジン（ニチレイ）溶液
に、前記スライドグラスを順次浸漬した後、基質溶液
[ジアミノベンジジン(SAB-PO(M)キット、ニチレイ）]に
浸漬して、発色させた。このようにして、ＦＧＦ−５特
異的抗体或いは抗ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−５抗体が結合
した位置を検知した。

【００３６】（３）結果 図１、図２の染色結果より、抗ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−
５モノクローナル抗体では毛包のコルテックスおよび皮
膚のマクロファージ様細胞が染色され、ＦＧＦ−５特異
的モノクローナル抗体では皮膚のマクロファージ様の細
胞のみが染色された。これより、ＦＧＦ−５は皮膚のマ
クロファージ様の細胞に存在し、ＦＧＦ−５Ｓは毛包の
コルテックスに存在することがわかる。

【００３７】更に図１からは、毛成長周期の移行に伴い
毛包のコルテックスの染色強度が変化していることが分
かり、ＦＧＦ−５Ｓの発現量の変化が毛成長に関与して
いることがわかる。即ち、毛成長周期の成長期で毛包の
コルテックス周辺でのＦＧＦ−５Ｓの発現量が増加して
いき、成長期後期（図１−ｂ）でＦＧＦ−５の発現量が
最大となり、その後退行期で減少していくのが分かる。
またすでに知られているように、ＦＧＦ−５陽性マクロ
ファージ様細胞は、毛成長周期の移行に伴いその局在位
置を変化させており、これら２種類のタンパクはそれぞ
れ別の役割を担いながら毛成長に関与していることもわ
かる。

【００３８】

【発明の効果】本発明によれば、毛髪が毛周期のどの周
期の状態にあるかを、簡易且つ正確に鑑別することがで
きる。その結果、脱毛を防止し、また、発毛を促進する
情報を提供することができると期待される。

【００３９】

【配列表】 Sequence Listing <110> 工業技術院長 佐藤 壮郎 ポーラ化成工業株式会社 今村 亨 <120> 毛髪の鑑別法 <130> P-5867 <141> 1998-9-22 <160> 1 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Cys Thr Tyr Ala Ser Ala Ile His Arg Thr Glu Lys Thr Gly 1 5 10 <210> 2 <211> 801 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <221> CDS <222> (1)..(798) <400> 2 atgagcctgt ccttgctctt cctcatcttc tgcagccacc tgatcctcag cgctccggct 60 caaggggaga agcgtctcac tcccgaaggg caacccgcgc ctcctaggaa cccgggagac 120 tccagcggca gccggggcag aagtagcgcg acgtttgctt cgtcttctgc ctcttcccca 180 gtcgcagctt ctccgggcag ccaaggaagc ggctcggagc acagcagttt ccagtggagc 240 ccttcggggc gccggaccgg cagcctgtac tgcagagtgg gcatcggttt ccatctgcag 300 atctacccgg atggcaaagt caatggatcc cacgaagcca gtgtgttaag tattttggaa 360 atatttgctg tgtctcaggg gattgtagga atacgaggag ttttcagcaa caaattttta 420 gcgatgtcaa aaaaaggaaa actccatgca agtgccaaat ttacagatga ctgtaagttc 480 agggagagat tccaagaaaa cagctataat acctatgcgt cagcgattca cagaactgaa 540 aagacaggcc gggagtggta tgtggccctg aacaagagag ggaaagccaa aagaggctgc 600 agcccacggg tcaaacccca gcacgtctcc acccacttcc tacccaggtt caagcagtcc 660 gagcaaccgg aactttcctt caccgtcact gttccagaaa agaaaaagcc acctaggccc 720 tggaaaccaa aggttcccct gtcgccatct cgtagaagcc ccagtccagt gaagtacaga 780 ctgaagtttc gcttcggatg a 801 <210> 3 <211> 266 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 3 Met Ser Leu Ser Leu Leu Phe Leu Ile Phe Cys Ser His Leu Ile Leu 1 5 10 15 Ser Ala Pro Ala Gln Gly Glu Lys Arg Leu Thr Pro Glu Gly Gln Pro 20 25 30 Ala Pro Pro Arg Asn Pro Gly Asp Ser Ser Gly Ser Arg Gly Arg Ser 35 40 45 Ser Ala Thr Phe Ala Ser Ser Ser Ala Ser Ser Pro Val Ala Ala Ser 50 55 60 Pro Gly Ser Gln Gly Ser Gly Ser Glu His Ser Ser Phe Gln Trp Ser 65 70 75 80 Pro Ser Gly Arg Arg Thr Gly Ser Leu Tyr Cys Arg Val Gly Ile Gly 85 90 95 Phe His Leu Gln Ile Tyr Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly Ser His Glu 100 105 110 Ala Ser Val Leu Ser Ile Leu Glu Ile Phe Ala Val Ser Gln Gly Ile 115 120 125 Val Gly Ile Arg Gly Val Phe Ser Asn Lys Phe Leu Ala Met Ser Lys 130 135 140 Lys Gly Lys Leu His Ala Ser Ala Lys Phe Thr Asp Asp Cys Lys Phe 145 150 155 160 Arg Glu Arg Phe Gln Glu Asn Ser Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Ala Ile 165 170 175 His Arg Thr Glu Lys Thr Gly Arg Glu Trp Tyr Val Ala Leu Asn Lys 180 185 190 Arg Gly Lys Ala Lys Arg Gly Cys Ser Pro Arg Val Lys Pro Gln His 195 200 205 Val Ser Thr His Phe Leu Pro Arg Phe Lys Gln Ser Glu Gln Pro Glu 210 215 220 Leu Ser Phe Thr Val Thr Val Pro Glu Lys Lys Lys Pro Pro Arg Pro 225 230 235 240 Trp Lys Pro Lys Val Pro Leu Ser Pro Ser Arg Arg Ser Pro Ser Pro 245 250 255 Val Lys Tyr Arg Leu Lys Phe Arg Phe Gly 260 265 <210> 4 <211> 121 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 4 Met Ser Leu Ser Leu Leu Phe Leu Ile Phe Cys Ser His Leu Ile Leu 1 5 10 15 Ser Ala Pro Ala Gln Gly Glu Lys Arg Leu Thr Pro Glu Gly Gln Pro 20 25 30 Ala Pro Pro Arg Asn Pro Gly Asp Ser Ser Gly Ser Arg Gly Arg Ser 35 40 45 Ser Ala Thr Phe Ala Ser Ser Ser Ala Ser Ser Pro Val Ala Ala Ser 50 55 60 Pro Gly Ser Gln Gly Ser Gly Ser Glu His Ser Ser Phe Gln Trp Ser 65 70 75 80 Pro Ser Gly Arg Arg Thr Gly Ser Leu Tyr Cys Arg Val Gly Ile Gly 85 90 95 Phe His Leu Gln Ile Tyr Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly Ser His Glu 100 105 110 Ala Ser Val Leu Ser Gln Ile Tyr Arg 115 120

【図面の簡単な説明】

【図１】 抗ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−５モノクローナル
抗体による毛包コルテックスの染色像の顕微鏡写真であ
る。ａは成長期初期、ｂは成長期中期、ｃは退行期初
期、ｄは退行期中期、ｅは退行期終期、ｆは休止期の状
態を、また、ｇはネガティブ・コントロールを示す。

【図２】 抗ＦＧＦ−５Ｓ・ＦＧＦ−５モノクローナル
抗体（ａ）、およびＦＧＦ−５特異的モノクローナル抗
体（ｂ）による皮膚マクロファージ様細胞の染色像の顕
微鏡写真である。

【図３】 ラット由来のＦＧＦ−５ｃＤＮＡの塩基配
列、ＦＧＦ−５タンパク質のアミノ酸配列およびＦＧＦ
−５Ｓタンパク質のアミノ酸配列である。これらの配列
は、配列番号２、配列番号３および配列番号４に記載し
た配列にそれぞれ対応する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (74)上記２名の代理人 100089244 弁理士 遠山 勉 （外２名） (72)発明者 今村 亨 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 小澤 和夫 千葉県柏市豊四季台３−１−61−207 (72)発明者 鈴木 誓吾 茨城県つくば市千現２−12−４ 豊コーポ 112号室 (72)発明者 鈴木 聡 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560 ポーラ 化成工業株式会社中央研究所内 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BA13 BB14 BB20 BB22 BB24 BB28 BB30 BB35 BB48 CB01 CB09 CB16 DA13 DA14 DA36 FA16 FB01 FB02 FB03 FB07 FB16 GC12

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 毛包周辺系におけるＦＧＦ−５Ｓの発現
   を指標とすることを特徴とする毛髪の鑑別法。
2. 【請求項２】 毛包周辺系の組織が、毛包であることを
   特徴とする請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 ＦＧＦ−５Ｓの発現を、ＦＧＦ−５Ｓに
   結合する抗体を用いて検出することを特徴とする請求項
   １記載の方法。
4. 【請求項４】 更に、ＦＧＦ−５の発現を指標とするこ
   とを特徴とする請求項１記載の方法。
5. 【請求項５】 ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５の発現を、
   ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５に対する親和性が異なる少
   なくとも２種類の抗体を用いて検出することを特徴とす
   る請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】 前記抗体が、ＦＧＦ−５に結合しＦＧＦ
   −５Ｓに結合しない抗体と、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−
   ５に結合する抗体である請求項５記載の方法。
7. 【請求項７】 前記ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５の検出
   を、前記抗体を用いた皮膚切片における比較染色により
   行う請求項６記載の方法。
8. 【請求項８】 ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５の発現を、
   皮膚切片中のＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５のそれぞれを
   コードするｍＲＮＡを、これらのｍＲＮＡを区別し得る
   核酸プローブを用いてイン・サイチュウハイブリダイゼ
   ーションにより検出することを特徴とする請求項４記載
   の方法。
9. 【請求項９】 毛包周辺系におけるＦＧＦ−５Ｓの発現
   を指標として毛髪を鑑別するためのキット。
10. 【請求項１０】ＦＧＦ−５に結合しＦＧＦ−５Ｓに結合
    しない抗体と、ＦＧＦ−５Ｓ及びＦＧＦ−５に結合する
    抗体とを含む、毛髪の鑑別用キット。