JP2000093175A - 核酸合成法 - Google Patents
核酸合成法Info
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- JP2000093175A JP2000093175A JP10266792A JP26679298A JP2000093175A JP 2000093175 A JP2000093175 A JP 2000093175A JP 10266792 A JP10266792 A JP 10266792A JP 26679298 A JP26679298 A JP 26679298A JP 2000093175 A JP2000093175 A JP 2000093175A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＰＣＲ阻害物質の作用を抑制して、試料中の
ＤＮＡを効率よく増幅させる新規な方法を提供すること
を目的とする。 【解決手段】本発明では、試料中の目的とする遺伝子を
増幅する核酸合成法において、遺伝子増幅反応液にジチ
オスレトールを添加することにより、ＰＣＲ阻害物質の
作用を抑制する。
ＤＮＡを効率よく増幅させる新規な方法を提供すること
を目的とする。 【解決手段】本発明では、試料中の目的とする遺伝子を
増幅する核酸合成法において、遺伝子増幅反応液にジチ
オスレトールを添加することにより、ＰＣＲ阻害物質の
作用を抑制する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は核酸合成法、特に、
ポリメラーゼ連鎖反応（Polymerase Chain Reaction ：
以下ＰＣＲと略す）法による核酸合成法に関する。
ポリメラーゼ連鎖反応（Polymerase Chain Reaction ：
以下ＰＣＲと略す）法による核酸合成法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＰＣＲ法は、ＤＮＡ鎖の１本鎖への解
離、ＤＮＡ鎖の中の特定の領域をはさんだプライマーの
結合、ＤＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ合成反応を繰り
返すことによって、目的のＤＮＡ断片を数十万倍にも増
幅できる方法である。ＰＣＲ法は、マリス氏らの発明で
ある特開昭６１−２７４６９７号公報に述べられてい
る。ＰＣＲ法は種々の試料中の核酸の高感度分析法とし
て使用可能で、特に動物体液由来の試料中の核酸の分析
法に使用できる。従って、ＰＣＲ法は感染症や遺伝病や
ガンの診断等に利用される。さらに、ＰＣＲ法は移植や
親子鑑定の際のＤＮＡタイピングの検査にも適した方法
である。これらの場合末梢血液が検査対象に選ばれる場
合が多い。
離、ＤＮＡ鎖の中の特定の領域をはさんだプライマーの
結合、ＤＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ合成反応を繰り
返すことによって、目的のＤＮＡ断片を数十万倍にも増
幅できる方法である。ＰＣＲ法は、マリス氏らの発明で
ある特開昭６１−２７４６９７号公報に述べられてい
る。ＰＣＲ法は種々の試料中の核酸の高感度分析法とし
て使用可能で、特に動物体液由来の試料中の核酸の分析
法に使用できる。従って、ＰＣＲ法は感染症や遺伝病や
ガンの診断等に利用される。さらに、ＰＣＲ法は移植や
親子鑑定の際のＤＮＡタイピングの検査にも適した方法
である。これらの場合末梢血液が検査対象に選ばれる場
合が多い。
【０００３】ＰＣＲ法の１つの欠点は色素、たんぱく、
糖類あるいは未知の夾雑物が反応を阻害することであ
る。すなわち、代表的な耐熱性ＤＮＡポリメラーゼであ
るThermus aquaticus 由来のＴａｑＤＮＡポリメラーゼ
をはじめ、多くのＤＮＡポリメラーゼは、微量の体液由
来の夾雑物がＰＣＲ反応液中に混在しても、ＰＣＲが強
く阻害されることが広く知られている。
糖類あるいは未知の夾雑物が反応を阻害することであ
る。すなわち、代表的な耐熱性ＤＮＡポリメラーゼであ
るThermus aquaticus 由来のＴａｑＤＮＡポリメラーゼ
をはじめ、多くのＤＮＡポリメラーゼは、微量の体液由
来の夾雑物がＰＣＲ反応液中に混在しても、ＰＣＲが強
く阻害されることが広く知られている。
【０００４】そこで、ＰＣＲ法によるＤＮＡ増幅に先立
って、被験物から細胞、細菌、ウィルス等（以下、遺伝
子包含体と称する）を分離し、次に、その遺伝子包含体
から核酸を抽出する過程が必要となる。その方法として
は、酵素、界面活性剤、カオトロピック剤等により遺伝
子包含体を分解し、その後、フェノールあるいはフェノ
ール・クロロホルム等を用いて、遺伝子包含体の分解物
から核酸を抽出する方法が従来より使用されている。最
近では核酸抽出の過程において、イオン交換樹脂、ガラ
スフィルター、ガラスビーズあるいはタンパク凝集作用
を有する試薬等が使用されている。
って、被験物から細胞、細菌、ウィルス等（以下、遺伝
子包含体と称する）を分離し、次に、その遺伝子包含体
から核酸を抽出する過程が必要となる。その方法として
は、酵素、界面活性剤、カオトロピック剤等により遺伝
子包含体を分解し、その後、フェノールあるいはフェノ
ール・クロロホルム等を用いて、遺伝子包含体の分解物
から核酸を抽出する方法が従来より使用されている。最
近では核酸抽出の過程において、イオン交換樹脂、ガラ
スフィルター、ガラスビーズあるいはタンパク凝集作用
を有する試薬等が使用されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの方法
を用いて試料中の核酸の精製を行っても、不純物の完全
な除去は困難であり、かつ試料中の核酸の回収量が一定
しない場合も多く、このため引き続く核酸合成が、とり
わけ試料中の目的とする核酸の含量が少ない場合には、
うまくできない場合もある。また、これら精製法は操作
が煩雑で時間を要し、また操作中のコンタミネーション
の機会が高い。従って、これらの問題点を解決するため
には、より簡便で、かつ効果的な試料前処理法が望まれ
る。
を用いて試料中の核酸の精製を行っても、不純物の完全
な除去は困難であり、かつ試料中の核酸の回収量が一定
しない場合も多く、このため引き続く核酸合成が、とり
わけ試料中の目的とする核酸の含量が少ない場合には、
うまくできない場合もある。また、これら精製法は操作
が煩雑で時間を要し、また操作中のコンタミネーション
の機会が高い。従って、これらの問題点を解決するため
には、より簡便で、かつ効果的な試料前処理法が望まれ
る。
【０００６】そこで、本発明は、更に改良を加え、試料
の種類に関係なく、ＰＣＲ阻害物質の作用を抑制して、
試料中のＤＮＡを効率よく増幅させる新規な方法を提供
することを目的とする。
の種類に関係なく、ＰＣＲ阻害物質の作用を抑制して、
試料中のＤＮＡを効率よく増幅させる新規な方法を提供
することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するため、試料中の目的とする遺伝子を増幅する核酸
合成法において、遺伝子増幅反応液にジチオスレトール
を添加することを特徴とする。ここで、ジチオスレトー
ル（ＤＴＴ）は、試料に加えてから、遺伝子増幅反応液
に添加しても、遺伝子増幅反応液に直接添加してもよ
い。また、ＤＴＴは、遺伝子増幅反応液に均一に入って
いない状態（たとえば試料にＤＴＴを加えて、この試料
を反応液に攪拌せずに添加した場合など）でも同様の効
果がある。ＤＴＴは遺伝子増幅反応液中に０．１ｍＭ以
上、好ましくは０．２５ 〜２ｍＭ添加するのがよい。
決するため、試料中の目的とする遺伝子を増幅する核酸
合成法において、遺伝子増幅反応液にジチオスレトール
を添加することを特徴とする。ここで、ジチオスレトー
ル（ＤＴＴ）は、試料に加えてから、遺伝子増幅反応液
に添加しても、遺伝子増幅反応液に直接添加してもよ
い。また、ＤＴＴは、遺伝子増幅反応液に均一に入って
いない状態（たとえば試料にＤＴＴを加えて、この試料
を反応液に攪拌せずに添加した場合など）でも同様の効
果がある。ＤＴＴは遺伝子増幅反応液中に０．１ｍＭ以
上、好ましくは０．２５ 〜２ｍＭ添加するのがよい。
【０００８】本発明において、試料は生体由来試料中の
遺伝子包含体もしくは生体由来試料そのものをいい、生
体由来試料とは、動植物組織、体液、排泄物等をいい、
遺伝子包含体とは、細胞、細菌、ウィルス等をいう。体
液には血液、唾液、髄液、尿、乳が含まれ、細胞には血
液から分離した白血球が含まれるが、これらに限定され
るものではない。生体由来試料中の遺伝子包含体もしく
は生体由来試料そのものは、特別な前処理なしに直接遺
伝子増幅反応液に添加される。
遺伝子包含体もしくは生体由来試料そのものをいい、生
体由来試料とは、動植物組織、体液、排泄物等をいい、
遺伝子包含体とは、細胞、細菌、ウィルス等をいう。体
液には血液、唾液、髄液、尿、乳が含まれ、細胞には血
液から分離した白血球が含まれるが、これらに限定され
るものではない。生体由来試料中の遺伝子包含体もしく
は生体由来試料そのものは、特別な前処理なしに直接遺
伝子増幅反応液に添加される。
【０００９】遺伝子増幅反応液は、通常、ｐＨ緩衝液並
びにＭｇＣｌ２、ＫＣｌ等の塩類、プライマー、デオキ
シリボヌクレオチド類及び耐熱酵素を含むものである。
また、上記の塩類は適宜他の塩類に変更して使用されて
いる。また、ゼラチン、アルブミン等のタンパク、ジメ
チルスルホキシド、界面活性剤等種々の物質が添加され
る場合がある。
びにＭｇＣｌ２、ＫＣｌ等の塩類、プライマー、デオキ
シリボヌクレオチド類及び耐熱酵素を含むものである。
また、上記の塩類は適宜他の塩類に変更して使用されて
いる。また、ゼラチン、アルブミン等のタンパク、ジメ
チルスルホキシド、界面活性剤等種々の物質が添加され
る場合がある。
【００１０】ｐＨ緩衝液は、トリス（ヒドロキシメチ
ル）アミノメタンと塩酸、硝酸、硫酸等の鉱酸の組合せ
であり、鉱酸の中で望ましいものは塩酸である。また、
トリシン、ＣＡＰＳＯ（3ーNーCyclohexylamino −2 −hy
droxypropanesulfonic acid ）あるいはＣＨＥＳ（2ー
（Cyclohexylamino ）ethanesulfonic acid ）と苛性ソ
ーダ、苛性カリとの組み合わせによるｐＨ緩衝液等種々
のｐＨ緩衝液が使用され得る。ｐＨ調整された緩衝液
は、遺伝子増幅反応液の中で１０ｍＭから１００ｍＭの
間の濃度で使用される。
ル）アミノメタンと塩酸、硝酸、硫酸等の鉱酸の組合せ
であり、鉱酸の中で望ましいものは塩酸である。また、
トリシン、ＣＡＰＳＯ（3ーNーCyclohexylamino −2 −hy
droxypropanesulfonic acid ）あるいはＣＨＥＳ（2ー
（Cyclohexylamino ）ethanesulfonic acid ）と苛性ソ
ーダ、苛性カリとの組み合わせによるｐＨ緩衝液等種々
のｐＨ緩衝液が使用され得る。ｐＨ調整された緩衝液
は、遺伝子増幅反応液の中で１０ｍＭから１００ｍＭの
間の濃度で使用される。
【００１１】プライマーは、核酸と増幅用試薬等の存在
下に合成の開始点として働くオリゴヌクレオチドをい
う。プライマーは一本鎖であることが望ましいが、二本
鎖も使用できる。もし、プライマーが二本鎖の場合に
は、増幅反応に先立って一本鎖にすることが望ましい。
プライマーは、公知の方法により合成することができる
し、また、生物界から単離することもできる。
下に合成の開始点として働くオリゴヌクレオチドをい
う。プライマーは一本鎖であることが望ましいが、二本
鎖も使用できる。もし、プライマーが二本鎖の場合に
は、増幅反応に先立って一本鎖にすることが望ましい。
プライマーは、公知の方法により合成することができる
し、また、生物界から単離することもできる。
【００１２】耐熱酵素は、プライマー付加による核酸を
合成する酵素、あるいはかような化学合成系を意味す
る。適切な耐熱酵素としては、Ｅ．coliのＤＮＡポリメ
ラーゼＩ、Ｅ．coliのＤＮＡポリメラーゼのクレノーフ
ラグメント、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ、ＴａｑＤＮＡポ
リメラーゼ、Ｔ.litoralisＤＮＡポリメラーゼ、Ｔｔｈ
ＤＮＡポリメラーゼ、ＰｆｕＤＮＡポリメラーゼそして
逆転写酵素などがあるが、これらにのみ限定されるもの
ではない。
合成する酵素、あるいはかような化学合成系を意味す
る。適切な耐熱酵素としては、Ｅ．coliのＤＮＡポリメ
ラーゼＩ、Ｅ．coliのＤＮＡポリメラーゼのクレノーフ
ラグメント、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ、ＴａｑＤＮＡポ
リメラーゼ、Ｔ.litoralisＤＮＡポリメラーゼ、Ｔｔｈ
ＤＮＡポリメラーゼ、ＰｆｕＤＮＡポリメラーゼそして
逆転写酵素などがあるが、これらにのみ限定されるもの
ではない。
【００１３】また、本発明では遺伝子増幅反応液のｐＨ
を調節することにより、相乗効果が得られる。例えば、
ｐＨは、２５℃の温度条件下で８．１以上、好ましくは
８．５〜９．５である。また、本発明では、遺伝子増幅
反応液にポリアミンを添加してもよい。
を調節することにより、相乗効果が得られる。例えば、
ｐＨは、２５℃の温度条件下で８．１以上、好ましくは
８．５〜９．５である。また、本発明では、遺伝子増幅
反応液にポリアミンを添加してもよい。
【００１４】なお、本発明の核酸合成法の手順は、ＤＴ
Ｔを添加する以外、通常の方法と何ら変わらない。すな
わち、先ず、増幅しようとする目的の2本鎖ＤＮＡ断片
を熱変性により、1本鎖のＤＮＡにする（ディナチュレ
ーション工程）。次に増幅させたい領域を挟むプライマ
ーをハイブリダイズさせる（アニーリング工程）。次に
４種類のデオキシリボヌクレオチド類（ｄＡＴＰ、ｄＧ
ＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰ）の共存下にＤＮＡポリメラ
ーゼを作用させ、プライマーの伸長反応を行う（ポリメ
ライゼーション工程）。
Ｔを添加する以外、通常の方法と何ら変わらない。すな
わち、先ず、増幅しようとする目的の2本鎖ＤＮＡ断片
を熱変性により、1本鎖のＤＮＡにする（ディナチュレ
ーション工程）。次に増幅させたい領域を挟むプライマ
ーをハイブリダイズさせる（アニーリング工程）。次に
４種類のデオキシリボヌクレオチド類（ｄＡＴＰ、ｄＧ
ＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰ）の共存下にＤＮＡポリメラ
ーゼを作用させ、プライマーの伸長反応を行う（ポリメ
ライゼーション工程）。
【００１５】
【実施例】ＰＣＲ反応液（50μｌ）にクエン酸処理した
ヒト血液を２または１μｌ添加し、ＰＣＲを行った。Ｐ
ＣＲのプライマーはヒトのβ−グロビン遺伝子領域内に
位置するplus鎖の塩基配列をもつオリゴヌクレオチド
（ＧＨ２０）及びminus 鎖の塩基配列をもつオリゴヌク
レオチド（ＧＨ２１）であり、配列は次の通りである。
この２種類のプライマーを用いたＰＣＲの結果、４０８
bp の増幅産物を得ることができる。 ＧＨ２０：５’ＧＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＧＡＣＡＧＧＴ
ＡＣ３’ ＧＨ２１：５’ＧＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＧ
ＣＡＧ３’
ヒト血液を２または１μｌ添加し、ＰＣＲを行った。Ｐ
ＣＲのプライマーはヒトのβ−グロビン遺伝子領域内に
位置するplus鎖の塩基配列をもつオリゴヌクレオチド
（ＧＨ２０）及びminus 鎖の塩基配列をもつオリゴヌク
レオチド（ＧＨ２１）であり、配列は次の通りである。
この２種類のプライマーを用いたＰＣＲの結果、４０８
bp の増幅産物を得ることができる。 ＧＨ２０：５’ＧＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＧＡＣＡＧＧＴ
ＡＣ３’ ＧＨ２１：５’ＧＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＧ
ＣＡＧ３’
【００１６】ＰＣＲ反応液には、pH8.3 に調節した10mM
Tris-HCl、50MKCl,1.5mMMgCl2, 200 μM のdATP,dCTP,
dGTP及びdTTP, 各0.4 μM のprimer, 1.25units/50μl
のTaq DNA ポリメラーゼ（TaKaRa Taq: Takara shuzo,
Kyoto, Japan）反応液を用いた。ＰＣＲは、９４℃、３
分のプレヒーティングの後、９４℃ ３０秒間、５５℃
１分間、７２℃ １分間の条件で４０サイクル、最後に
７２℃ ７分間のポリメライゼーションを行った。ＰＣ
Ｒ終了後、反応液５μｌを用いて、２．５％アガロース
を含む、０．５μｇ/ ｍｌ臭化エチジウム添加ＴＡＥ
（40mM Tris-acetate, 1mM EDTA, pH8.0) 液中で電気泳
動を行い検出した。
Tris-HCl、50MKCl,1.5mMMgCl2, 200 μM のdATP,dCTP,
dGTP及びdTTP, 各0.4 μM のprimer, 1.25units/50μl
のTaq DNA ポリメラーゼ（TaKaRa Taq: Takara shuzo,
Kyoto, Japan）反応液を用いた。ＰＣＲは、９４℃、３
分のプレヒーティングの後、９４℃ ３０秒間、５５℃
１分間、７２℃ １分間の条件で４０サイクル、最後に
７２℃ ７分間のポリメライゼーションを行った。ＰＣ
Ｒ終了後、反応液５μｌを用いて、２．５％アガロース
を含む、０．５μｇ/ ｍｌ臭化エチジウム添加ＴＡＥ
（40mM Tris-acetate, 1mM EDTA, pH8.0) 液中で電気泳
動を行い検出した。
【００１７】ＤＴＴを反応液に直接添加して、ＰＣＲを
行ったときの増幅産物の電気泳動図を図１に示す。図中
Ｍはサイズマーカー（HincIIで切断した250ng のφ X17
4-RFDNA）、１、８はＤＴＴが０％、２、９はＤＴＴを
０．１２５ｍＭ添加、３、１０はＤＴＴを０．２５ｍＭ
添加、４、１１はＤＴＴを０．５ｍＭ添加、５、１２は
ＤＴＴを１ｍＭ添加、６、１３はＤＴＴを２ｍＭ添加、
７、１４はＤＴＴを４ｍＭ添加したものを示している。
また、１〜７は血液を２μｌ添加、８〜１４は血液を１
μｌ添加したものである。結果、ＤＴＴを添加すること
によって、ＰＣＲ増幅産物が得られることがわかった、
特にＤＴＴを１ｍＭ添加するのが良好である。
行ったときの増幅産物の電気泳動図を図１に示す。図中
Ｍはサイズマーカー（HincIIで切断した250ng のφ X17
4-RFDNA）、１、８はＤＴＴが０％、２、９はＤＴＴを
０．１２５ｍＭ添加、３、１０はＤＴＴを０．２５ｍＭ
添加、４、１１はＤＴＴを０．５ｍＭ添加、５、１２は
ＤＴＴを１ｍＭ添加、６、１３はＤＴＴを２ｍＭ添加、
７、１４はＤＴＴを４ｍＭ添加したものを示している。
また、１〜７は血液を２μｌ添加、８〜１４は血液を１
μｌ添加したものである。結果、ＤＴＴを添加すること
によって、ＰＣＲ増幅産物が得られることがわかった、
特にＤＴＴを１ｍＭ添加するのが良好である。
【００１８】
【発明の効果】本発明により、核酸の分離・精製の過程
を経ずに、血液等のＰＣＲ阻害物質を多く含んだ試料か
ら、直接、目的のＤＮＡを効率よく増幅することが可能
となった。また、本発明により、簡便、迅速に核酸合成
の操作を行えるようになり、コンタミネーションの機会
の軽減が可能となった。
を経ずに、血液等のＰＣＲ阻害物質を多く含んだ試料か
ら、直接、目的のＤＮＡを効率よく増幅することが可能
となった。また、本発明により、簡便、迅速に核酸合成
の操作を行えるようになり、コンタミネーションの機会
の軽減が可能となった。
【配列表】＜１１０＞shimadzu corp. ＜１２０＞Method for synthesis of nucleic acids ＜１３０＞９８０８０９ ＜１６０＞２ ＜２１０＞１ ＜２１１＞２４ ＜２１２＞ＤＮＡ ＜２１３＞Artificial Sequence ＜４００＞ 1 ＧＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＧＡＣＡＧＧＴＡＣ ２ ＧＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＧＣＡＧ
【図１】ＰＣＲ反応液（50μｌ）にヒトクエン酸処理し
たヒト血液を２または１μｌ、濃度の異なるＤＴＴを添
加し、ＰＣＲを行った電気泳動図
たヒト血液を２または１μｌ、濃度の異なるＤＴＴを添
加し、ＰＣＲを行った電気泳動図
Claims (4)
- 【請求項１】試料中の目的とする遺伝子を増幅する核酸
合成法において、遺伝子増幅反応液にジチオスレトール
（dithiothreitol:略称ＤＴＴ）を添加することを特徴
とする核酸合成法。 - 【請求項２】ジチオスレトールを遺伝子増幅反応液中に
０．１ｍＭ以上添加することを特徴とする請求項１記載
の核酸合成法。 - 【請求項３】試料が生体由来試料中の遺伝子包含体もし
くは生体由来試料そのものである請求項１又は２に記載
の核酸合成法。 - 【請求項４】試料である生体由来試料中の遺伝子包含体
もしくは生体由来試料そのものを直接遺伝子増幅反応液
に添加することを特徴とする請求項１〜３に記載の核酸
合成法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26679298A JP4186269B2 (ja) | 1998-09-21 | 1998-09-21 | 核酸合成法 |
| EP99118116A EP0989192A3 (en) | 1998-09-21 | 1999-09-10 | Method for synthesis of nucleic acids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26679298A JP4186269B2 (ja) | 1998-09-21 | 1998-09-21 | 核酸合成法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000093175A true JP2000093175A (ja) | 2000-04-04 |
| JP4186269B2 JP4186269B2 (ja) | 2008-11-26 |
Family
ID=17435761
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26679298A Expired - Lifetime JP4186269B2 (ja) | 1998-09-21 | 1998-09-21 | 核酸合成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4186269B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004113242A (ja) * | 2002-09-24 | 2004-04-15 | Qiagen Gmbh | 核酸の強化された共増幅 |
| JP2008531039A (ja) * | 2005-02-28 | 2008-08-14 | バイオクエスト インク | 核酸分子が含まれる直接酵素反応方法 |
| WO2023127774A1 (ja) * | 2021-12-28 | 2023-07-06 | 株式会社ダナフォーム | 遺伝子包含体の検出方法及び検出用キット |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015096063A1 (en) | 2013-12-25 | 2015-07-02 | Coyote Bioscience Co., Ltd. | Methods and systems for nucleic acid amplification |
-
1998
- 1998-09-21 JP JP26679298A patent/JP4186269B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004113242A (ja) * | 2002-09-24 | 2004-04-15 | Qiagen Gmbh | 核酸の強化された共増幅 |
| JP4675558B2 (ja) * | 2002-09-24 | 2011-04-27 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 核酸の強化された共増幅 |
| JP2008531039A (ja) * | 2005-02-28 | 2008-08-14 | バイオクエスト インク | 核酸分子が含まれる直接酵素反応方法 |
| WO2023127774A1 (ja) * | 2021-12-28 | 2023-07-06 | 株式会社ダナフォーム | 遺伝子包含体の検出方法及び検出用キット |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4186269B2 (ja) | 2008-11-26 |
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