JP4187057B2 - 核酸合成法 - Google Patents
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PCR反応液(50μl)にヒトクエン酸処理したヒト血漿を1μl添加し、PCRを行った。また、PUC18プラスミドDNA3fgをPCR反応液(50μl)に添加し鋳型DNAとした。PCRのプライマーはPUC18プラスミドDNAのplus鎖の塩基配列をもつオリゴヌクレオチド(RV−M;配列番号1)及びminus 鎖の塩基配列をもつオリゴヌクレオチド(M13−47;配列番号2)であり、配列は次の通りである。この2種類のプライマーを用いたPCRの結果、150bp の増幅産物を得ることができる。
RV−M: 5'GAGCGGATAACAATTTCACACAGG3'
M13−47:5'CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC3'
本例は、実験例1で増幅効率の良かったヘパリン0.8μg/mlを反応液に加えた場合と加えない場合において、血液を段階希釈してPCRを行った実験である。反応に用いたPCR反応液の組成およびPCRの条件、PCR後の電気泳動の条件は実験例1と同様である。
GH20:5'GAAGAGCCAAGGACAGGTAC3'
GH21:5'GGAAAATAGACCAATAGGCAG3'
本例は、PCR反応液(50μl)にヒト血清を1μl添加し、PCRを行った。また、PUC18プラスミドDNA3fgをPCR反応液(50μl)に添加し鋳型DNAとした。PCRのプライマーは実験例1と同様にRV−M、M13−47を用いた。0.0023ng から 100μg までの様々な量のデキストランサルフェイト(平均分子量5、500)を添加して、ヒト血清によるPCR反応の阻害をデキストランサルフェイトが抑制し、反応を回復させる効果を検討した。反応に用いたPCR反応液の組成およびPCR後の電気泳動の条件は実験例1と同様である。PCRは94℃、4分30秒間のプレヒーティングの後、94℃を30秒間、58℃を1分間、72℃を1分間の条件で40サイクル、最後に72℃のポリメライゼーションを7分間行った。実験結果(電気泳動図)を図3に示す。
Claims (1)
- 血液、血漿、血清由来の試料中の目的とする遺伝子をPCR法によって増幅する核酸合成法において、遺伝子増幅反応液に血液、血漿、血清由来の試料及び0.049μg/ml〜7.8μg/mlのデキストランサルフェイト及びその塩を添加することを特徴とする核酸合成法。
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