JP2000032994A - 光学活性ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物の製造方法 - Google Patents
光学活性ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物の製造方法Info
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- C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステ
ル化合物を不斉加水分解して光学活性Ｎ−置換アゼチジ
ン−２−カルボン酸化合物を得る製造方法を提供するこ
と。 【解決手段】 アルスロバクター（Arthrobacter）属ま
たはクロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属す
る微生物由来の酵素を用いて、一般式（１） （式中、Ｒ1はアルコキシ、アルキル、アリル、アラル
キル、アリール、Ｒ2はアラルキル、アルキルカルボニ
ル、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、
アルキル、アリル、アリール基、アリールスルホニ
ル。）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カルボン酸
エステル化合物を不斉加水分解することを特徴とする一
般式（２） で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン
酸化合物の製造方法。
ル化合物を不斉加水分解して光学活性Ｎ−置換アゼチジ
ン−２−カルボン酸化合物を得る製造方法を提供するこ
と。 【解決手段】 アルスロバクター（Arthrobacter）属ま
たはクロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属す
る微生物由来の酵素を用いて、一般式（１） （式中、Ｒ1はアルコキシ、アルキル、アリル、アラル
キル、アリール、Ｒ2はアラルキル、アルキルカルボニ
ル、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、
アルキル、アリル、アリール基、アリールスルホニ
ル。）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カルボン酸
エステル化合物を不斉加水分解することを特徴とする一
般式（２） で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン
酸化合物の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、光学活性Ｎ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸化合物の製造方法および光
学活性アゼチジン−２−カルボン酸の製造方法に関す
る。
アゼチジン−２−カルボン酸化合物の製造方法および光
学活性アゼチジン−２−カルボン酸の製造方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カル
ボン酸化合物および光学活性アゼチジン−２−カルボン
酸は、医薬などの中間体として有用な化合物である。従
来、かかる光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン
酸化合物および光学活性アゼチジン−２−カルボン酸を
製造する方法としては、光学分割法と、天然物からの誘
導法が公知である。光学分割法としては、例えばγ−ブ
チロラクトンからＤＬ−Ｎ−ジフェニルメチル−アゼチ
ジン−２−カルボン酸ベンジルエステルへ誘導し、これ
を還元してＤＬ−アゼチジン−２−カルボン酸を得
（Ｒ．Ｍ．Ｒｏｄｅｂａｕｇｈ ａｎｄＮ．Ｈ．Ｃｒｏ
ｍｗｅｌｌ，ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・
ケミストリー，６，４３５〜４３７，１９６９年）、次
いでＤＬ−アゼチジン−２−カルボン酸のアミノ基をベ
ンジルオキシカルボニル化し、これをＬ−チロシンヒド
ラジドとの塩にして光学分割した後、ベンジルオキシカ
ルボニル基を除去して光学活性アゼチジン−２−カルボ
ン酸とする方法（Ｒ．Ｍ．Ｒｏｄｅｂａｕｇｈ ａｎｄ
Ｎ．Ｈ．Ｃｒｏｍｗｅｌｌ，ジャーナル・オブ・ヘテ
ロサイクリック・ケミストリー，６，９９３〜９９４，
１９６９年）が挙げられる。天然物からの誘導法として
は、例えば、Ｌ−メチオニンを出発原料としてＬ−Ｎ−
トシル−アゼチジン−２−カルボン酸へ誘導し、トシル
基を除去して光学活性アゼチジン−２−カルボン酸とす
る方法（特開昭４９−１４４５７号公報）が知られてい
る。しかし、これらの方法は工程が長く収率が低いとい
う問題があり、より簡便に光学純度よく光学活性アゼチ
ジン−２−カルボン酸あるいは光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物を製造する方法の開発が待
たれていた。
ボン酸化合物および光学活性アゼチジン−２−カルボン
酸は、医薬などの中間体として有用な化合物である。従
来、かかる光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン
酸化合物および光学活性アゼチジン−２−カルボン酸を
製造する方法としては、光学分割法と、天然物からの誘
導法が公知である。光学分割法としては、例えばγ−ブ
チロラクトンからＤＬ−Ｎ−ジフェニルメチル−アゼチ
ジン−２−カルボン酸ベンジルエステルへ誘導し、これ
を還元してＤＬ−アゼチジン−２−カルボン酸を得
（Ｒ．Ｍ．Ｒｏｄｅｂａｕｇｈ ａｎｄＮ．Ｈ．Ｃｒｏ
ｍｗｅｌｌ，ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・
ケミストリー，６，４３５〜４３７，１９６９年）、次
いでＤＬ−アゼチジン−２−カルボン酸のアミノ基をベ
ンジルオキシカルボニル化し、これをＬ−チロシンヒド
ラジドとの塩にして光学分割した後、ベンジルオキシカ
ルボニル基を除去して光学活性アゼチジン−２−カルボ
ン酸とする方法（Ｒ．Ｍ．Ｒｏｄｅｂａｕｇｈ ａｎｄ
Ｎ．Ｈ．Ｃｒｏｍｗｅｌｌ，ジャーナル・オブ・ヘテ
ロサイクリック・ケミストリー，６，９９３〜９９４，
１９６９年）が挙げられる。天然物からの誘導法として
は、例えば、Ｌ−メチオニンを出発原料としてＬ−Ｎ−
トシル−アゼチジン−２−カルボン酸へ誘導し、トシル
基を除去して光学活性アゼチジン−２−カルボン酸とす
る方法（特開昭４９−１４４５７号公報）が知られてい
る。しかし、これらの方法は工程が長く収率が低いとい
う問題があり、より簡便に光学純度よく光学活性アゼチ
ジン−２−カルボン酸あるいは光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物を製造する方法の開発が待
たれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】そこで本発明者らは、
Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物か
ら１工程で光学純度よく光学活性Ｎ−置換アゼチジン−
２−カルボン酸化合物を製造し得る方法を開発するべく
鋭意検討した結果、特定の酵素を用いることによって容
易に光学純度よく光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カ
ルボン酸化合物を製造でき、さらにＮ−置換基を脱離す
ることによって容易に光学活性アゼチジン−２−カルボ
ン酸に誘導し得ることを見い出し、本発明に至った。
Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物か
ら１工程で光学純度よく光学活性Ｎ−置換アゼチジン−
２−カルボン酸化合物を製造し得る方法を開発するべく
鋭意検討した結果、特定の酵素を用いることによって容
易に光学純度よく光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カ
ルボン酸化合物を製造でき、さらにＮ−置換基を脱離す
ることによって容易に光学活性アゼチジン−２−カルボ
ン酸に誘導し得ることを見い出し、本発明に至った。
【０００４】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、アル
スロバクター（Arthrobacter）属またはクロモバクテリ
ウム（Chromobacterium）属に属する微生物由来の酵素
を用いて、一般式（１） （式中、Ｒ1は炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲンも
しくはニトロで１個以上置換されていてもよい炭素数１
〜８のアルキル基、またはアリル基、または芳香環上に
炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、
ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されていてもよ
いアラルキル基、または芳香環上に炭素原子数１〜８の
アルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしく
はニトロで１個以上置換されていてもよいアリール基を
示し、Ｒ2は芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭素
数１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしくはニトロで１個
以上置換されていてもよいアラルキル基、または炭素数
１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしくはニトロで１個以
上置換されていてもよい炭素数１〜８のアルキルカルボ
ニル基、または芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、フェニルもしくは
ニトロで１個以上置換されていてもよいアリールカルボ
ニル基、またはハロゲン、スルホニルもしくは（芳香環
上に炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキ
シ、ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されていて
もよいアリール基）で１個以上置換されていてもよい炭
素数１〜８のアルキルオキシカルボニル基、またはアリ
ルオキシカルボニル基、または芳香環上に炭素原子数１
〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン
原子もしくはニトロで１個以上置換されていてもよいア
リールオキシカルボニル基、または炭素数１〜８のアル
コキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換されていても
よい炭素数１〜８のアルキル基、またはアリル基、また
は芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数１〜
８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換され
ていてもよいアリール基、または芳香環上に炭素原子数
１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ基、ハロ
ゲン原子もしくはニトロで１個以上置換されていてもよ
いアリールスルホニル基を示す。）で示されるＮ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物を不斉加水
分解することを特徴とする一般式（２） （式中、Ｒ2は前記と同じ意味を示し、＊は不斉炭素原
子を示す。）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−
２−カルボン酸化合物の製造方法および得られた一般式
（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カ
ルボン酸化合物のＮ−置換基を脱離させることを特徴と
する式（３） （式中、＊は不斉炭素原子を示す。）で示される光学活
性アゼチジン−２−カルボン酸の製造方法を提供するも
のである。
スロバクター（Arthrobacter）属またはクロモバクテリ
ウム（Chromobacterium）属に属する微生物由来の酵素
を用いて、一般式（１） （式中、Ｒ1は炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲンも
しくはニトロで１個以上置換されていてもよい炭素数１
〜８のアルキル基、またはアリル基、または芳香環上に
炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、
ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されていてもよ
いアラルキル基、または芳香環上に炭素原子数１〜８の
アルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしく
はニトロで１個以上置換されていてもよいアリール基を
示し、Ｒ2は芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭素
数１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしくはニトロで１個
以上置換されていてもよいアラルキル基、または炭素数
１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしくはニトロで１個以
上置換されていてもよい炭素数１〜８のアルキルカルボ
ニル基、または芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、フェニルもしくは
ニトロで１個以上置換されていてもよいアリールカルボ
ニル基、またはハロゲン、スルホニルもしくは（芳香環
上に炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキ
シ、ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されていて
もよいアリール基）で１個以上置換されていてもよい炭
素数１〜８のアルキルオキシカルボニル基、またはアリ
ルオキシカルボニル基、または芳香環上に炭素原子数１
〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン
原子もしくはニトロで１個以上置換されていてもよいア
リールオキシカルボニル基、または炭素数１〜８のアル
コキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換されていても
よい炭素数１〜８のアルキル基、またはアリル基、また
は芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数１〜
８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換され
ていてもよいアリール基、または芳香環上に炭素原子数
１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ基、ハロ
ゲン原子もしくはニトロで１個以上置換されていてもよ
いアリールスルホニル基を示す。）で示されるＮ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物を不斉加水
分解することを特徴とする一般式（２） （式中、Ｒ2は前記と同じ意味を示し、＊は不斉炭素原
子を示す。）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−
２−カルボン酸化合物の製造方法および得られた一般式
（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カ
ルボン酸化合物のＮ−置換基を脱離させることを特徴と
する式（３） （式中、＊は不斉炭素原子を示す。）で示される光学活
性アゼチジン−２−カルボン酸の製造方法を提供するも
のである。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カル
ボン酸エステル化合物において、Ｒ2で示されるＮ−置
換基としては、例えば、ベンジル基、ｐ−クロロベンジ
ル基、α−フェニルエチル基、β−フェニルエチル基、
フェニルプロピル基、ベンズヒドリル基、トリフェニル
メチル基等の、芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上
置換されていてもよいアラルキル基、あるいはアセチル
基、クロロアセチル基、トリフルオロアセチル基等の、
炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン原子、ニトロで１
個以上置換されていてもよい炭素数１〜８のアルキルカ
ルボニル基及び、ベンゾイル基、ｐ−フェニルベンゾイ
ル基等の、芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭素数
１〜８のアルコキシ、ハロゲン、フェニル、ニトロで１
個以上置換されていてもよいアリールカルボニル基等の
アシル基、あるいはｔ−ブトキシカルボニル基、トリク
ロロエチルオキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボ
ニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、２−
フェニルエチルオキシカルボニル基等の、ハロゲン、ス
ルホニル、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上
置換されていてもよいアリール基で１個以上置換されて
いてもよい炭素数１〜８のアルキルオキシカルボニル
基、あるいはアリルオキシカルボニル基、あるいは２，
４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルオキシカルボニル基
等の、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数
１〜８のアルコキシ基、ハロゲン、ニトロで１個以上置
換されていてもよいアリールオキシカルボニル基、ある
いはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピ
ル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル
基、ｔ−ブチル基等の炭素数１〜８のアルコキシ、ハロ
ゲン、ニトロで１個以上置換されていてもよい炭素原子
数１〜８のアルキル基、あるいはアリル基、あるいはフ
ェニル基等の、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキ
ル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１
個以上置換されていてもよいアリール基、あるいはｐ−
トルエンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基、メトキ
シベンゼンスルホニル基、ニトロベンゼンスルホニル基
等の、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数
１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換
されていてもよいアリールスルホニル基等が挙げられ
る。かかる置換基は、場合によっては不斉炭素原子を有
していてもよい。不斉炭素原子を有するＲ2で示される
Ｎ−置換基としては、例えば、（Ｓ）−フェニルエチル
基、（Ｒ）−フェニルエチル基等が挙げられる。
一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カル
ボン酸エステル化合物において、Ｒ2で示されるＮ−置
換基としては、例えば、ベンジル基、ｐ−クロロベンジ
ル基、α−フェニルエチル基、β−フェニルエチル基、
フェニルプロピル基、ベンズヒドリル基、トリフェニル
メチル基等の、芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上
置換されていてもよいアラルキル基、あるいはアセチル
基、クロロアセチル基、トリフルオロアセチル基等の、
炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン原子、ニトロで１
個以上置換されていてもよい炭素数１〜８のアルキルカ
ルボニル基及び、ベンゾイル基、ｐ−フェニルベンゾイ
ル基等の、芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭素数
１〜８のアルコキシ、ハロゲン、フェニル、ニトロで１
個以上置換されていてもよいアリールカルボニル基等の
アシル基、あるいはｔ−ブトキシカルボニル基、トリク
ロロエチルオキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボ
ニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、２−
フェニルエチルオキシカルボニル基等の、ハロゲン、ス
ルホニル、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上
置換されていてもよいアリール基で１個以上置換されて
いてもよい炭素数１〜８のアルキルオキシカルボニル
基、あるいはアリルオキシカルボニル基、あるいは２，
４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルオキシカルボニル基
等の、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数
１〜８のアルコキシ基、ハロゲン、ニトロで１個以上置
換されていてもよいアリールオキシカルボニル基、ある
いはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピ
ル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル
基、ｔ−ブチル基等の炭素数１〜８のアルコキシ、ハロ
ゲン、ニトロで１個以上置換されていてもよい炭素原子
数１〜８のアルキル基、あるいはアリル基、あるいはフ
ェニル基等の、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキ
ル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１
個以上置換されていてもよいアリール基、あるいはｐ−
トルエンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基、メトキ
シベンゼンスルホニル基、ニトロベンゼンスルホニル基
等の、芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数
１〜８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換
されていてもよいアリールスルホニル基等が挙げられ
る。かかる置換基は、場合によっては不斉炭素原子を有
していてもよい。不斉炭素原子を有するＲ2で示される
Ｎ−置換基としては、例えば、（Ｓ）−フェニルエチル
基、（Ｒ）−フェニルエチル基等が挙げられる。
【０００６】また、Ｒ1で示されるアルキル基として
は、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イ
ソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−
ブチル基、ｔ−ブチル基等の、炭素数１〜８のアルコキ
シ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換されていてもよい
炭素原子数１〜８のアルキル基、あるいはベンジル基、
ｐ−クロロベンジル基、α−フェニルエチル基、β−フ
ェニルエチル基、フェニルプロピル基、ベンズヒドリル
基、トリフェニルメチル基等の、芳香環上に炭素数１〜
８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、
ニトロで１個以上置換されていてもよいアラルキル基、
あるいはアリル基、あるいはフェニル基等の、芳香環上
に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコ
キシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換されていてもよ
いアリール基などが挙げられる。
は、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イ
ソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−
ブチル基、ｔ−ブチル基等の、炭素数１〜８のアルコキ
シ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換されていてもよい
炭素原子数１〜８のアルキル基、あるいはベンジル基、
ｐ−クロロベンジル基、α−フェニルエチル基、β−フ
ェニルエチル基、フェニルプロピル基、ベンズヒドリル
基、トリフェニルメチル基等の、芳香環上に炭素数１〜
８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、
ニトロで１個以上置換されていてもよいアラルキル基、
あるいはアリル基、あるいはフェニル基等の、芳香環上
に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコ
キシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換されていてもよ
いアリール基などが挙げられる。
【０００７】かかるＮ−置換アゼチジン−２−カルボン
酸エステル化合物としては、例えばＮ−ベンジルアゼチ
ジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｐ−クロロ
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−〔（Ｓ）−フェニルエチル〕−アゼチジン−２−カ
ルボン酸メチルエステル、Ｎ−〔（Ｒ）−フェニルエチ
ル〕−アゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−β−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸メチ
ルエステル、Ｎ−フェニルプロピルアゼチジン−２−カ
ルボン酸メチルエステル、Ｎ−ベンズヒドリルアゼチジ
ン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−トリフェニル
メチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−アセチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステ
ル、Ｎ−クロロアセチルアゼチジン−２−カルボン酸メ
チルエステル、Ｎ−トリフルオロアセチルアゼチジン−
２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ベンゾイルアゼチ
ジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｐ−フェニ
ルベンゾイルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステ
ル、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアゼチジン−２−カル
ボン酸メチルエステル、Ｎ−トリクロロエチルオキシカ
ルボニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボ
ン酸メチルエステル、Ｎ−ｐ−ニトロベンジルオキシカ
ルボニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−２−フェニルエチルオキシカルボニルアゼチジン−
２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−アリルオキシカル
ボニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルオキシカルボ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−
メチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−ｎ−プロピルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエ
ステル、Ｎ−イソプロピルアゼチジン−２−カルボン酸
メチルエステル、Ｎ−ｎ−ブチルアゼチジン−２−カル
ボン酸メチルエステル、Ｎ−イソブチルアゼチジン−２
−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｓｅｃ−ブチルアゼ
チジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｔ−ブチ
ルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ア
リルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−
フェニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−ｐ−トルエンスルホニルアゼチジン−２−カルボン
酸メチルエステル、Ｎ−ベンゼンスルホニルアゼチジン
−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−メトキシベンゼ
ンスルホニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステ
ル、Ｎ−ニトロベンゼンスルホニルアゼチジン−２−カ
ルボン酸メチルエステルおよび上記各化合物におけるメ
チルがエチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチ
ル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ベンジ
ル、（Ｓ）−フェニルエチル、（Ｒ）−フェニルエチ
ル、β−フェニルエチル、フェニルプロピル、ベンズヒ
ドリル、トリフェニルメチル、アリル、フェニル、ナフ
チルなどに相当する化合物などが挙げられる。
酸エステル化合物としては、例えばＮ−ベンジルアゼチ
ジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｐ−クロロ
ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−〔（Ｓ）−フェニルエチル〕−アゼチジン−２−カ
ルボン酸メチルエステル、Ｎ−〔（Ｒ）−フェニルエチ
ル〕−アゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−β−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸メチ
ルエステル、Ｎ−フェニルプロピルアゼチジン−２−カ
ルボン酸メチルエステル、Ｎ−ベンズヒドリルアゼチジ
ン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−トリフェニル
メチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−アセチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステ
ル、Ｎ−クロロアセチルアゼチジン−２−カルボン酸メ
チルエステル、Ｎ−トリフルオロアセチルアゼチジン−
２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ベンゾイルアゼチ
ジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｐ−フェニ
ルベンゾイルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステ
ル、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアゼチジン−２−カル
ボン酸メチルエステル、Ｎ−トリクロロエチルオキシカ
ルボニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボ
ン酸メチルエステル、Ｎ−ｐ−ニトロベンジルオキシカ
ルボニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−２−フェニルエチルオキシカルボニルアゼチジン−
２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−アリルオキシカル
ボニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルオキシカルボ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−
メチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ
−エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−ｎ−プロピルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエ
ステル、Ｎ−イソプロピルアゼチジン−２−カルボン酸
メチルエステル、Ｎ−ｎ−ブチルアゼチジン−２−カル
ボン酸メチルエステル、Ｎ−イソブチルアゼチジン−２
−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｓｅｃ−ブチルアゼ
チジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ｔ−ブチ
ルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−ア
リルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−
フェニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル、
Ｎ−ｐ−トルエンスルホニルアゼチジン−２−カルボン
酸メチルエステル、Ｎ−ベンゼンスルホニルアゼチジン
−２−カルボン酸メチルエステル、Ｎ−メトキシベンゼ
ンスルホニルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステ
ル、Ｎ−ニトロベンゼンスルホニルアゼチジン−２−カ
ルボン酸メチルエステルおよび上記各化合物におけるメ
チルがエチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチ
ル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ベンジ
ル、（Ｓ）−フェニルエチル、（Ｒ）−フェニルエチ
ル、β−フェニルエチル、フェニルプロピル、ベンズヒ
ドリル、トリフェニルメチル、アリル、フェニル、ナフ
チルなどに相当する化合物などが挙げられる。
【０００８】これらの一般式（１）で示されるＮ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物には、一般
式（２）において＊で示される位置に該当する不斉炭素
原子を不斉中心とする２種類の光学異性体が存在する
が、本発明の方法に用いられる一般式（１）で示される
Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物は
これらの光学異性体をそれぞれ等量ずつ含むラセミ体で
あってもよいし、一方の光学異性体を過剰に含んでいて
もよい。
アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物には、一般
式（２）において＊で示される位置に該当する不斉炭素
原子を不斉中心とする２種類の光学異性体が存在する
が、本発明の方法に用いられる一般式（１）で示される
Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物は
これらの光学異性体をそれぞれ等量ずつ含むラセミ体で
あってもよいし、一方の光学異性体を過剰に含んでいて
もよい。
【０００９】これらの一般式（１）で示されるＮ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物に対して不
斉加水分解能を有する酵素は、アルスロバクター（Arth
robacter）属またはクロモバクテリウム（Chromobacter
ium）属に属する微生物由来のものであれば特に限定さ
れない。また、これらの微生物から突然変異剤もしくは
紫外線により誘導された突然変異体を起源とする酵素、
これらの微生物が有する酵素遺伝子が導入されることに
よって形質転換された組み換え微生物が産生する酵素、
あるいは通常の遺伝子工学的手法を用いて上記酵素のア
ミノ酸配列中の特定のアミノ酸をひとつないしは複数別
のアミノ酸に置換した酵素なども含むものである。上記
酵素の例としては、例えばアルスロバクターＳＣ−６−
９８−２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１８５１）、アルスロ
バクター・エスピー（Arthrobacter sp.）ＡＴＣＣ２１
９０８株またはクロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−１株
（ＦＥＲＭＰ−１４００９）等の微生物由来の酵素が挙
げられるが、より具体的には、特開平５−５６７８７号
公報記載の公知の方法にて調製したアルスロバクターＳ
Ｃ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１８５１）由
来のエステラーゼ、特開平７−１６３３６４号公報記載
の公知の方法にて調製したクロモバクテリウムＳＣ−Ｙ
Ｍ−１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４００９）由来のエステラ
ーゼ、または特開平７−２１３２８０号公報記載の方法
により調製した部位特異的アミノ酸置換による耐熱性エ
ステラーゼ等が挙げられる。また、特にこのうち、アル
スロバクターＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１１８５１）由来のエステラーゼを用いた場合には本発
明中の一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２
−カルボン酸エステル化合物に対する不斉水解において
優れた光学選択性を示し、一般式（２）で示されるＮ−
置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物のＲ体を高い光
学純度にて得ることができる。
アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物に対して不
斉加水分解能を有する酵素は、アルスロバクター（Arth
robacter）属またはクロモバクテリウム（Chromobacter
ium）属に属する微生物由来のものであれば特に限定さ
れない。また、これらの微生物から突然変異剤もしくは
紫外線により誘導された突然変異体を起源とする酵素、
これらの微生物が有する酵素遺伝子が導入されることに
よって形質転換された組み換え微生物が産生する酵素、
あるいは通常の遺伝子工学的手法を用いて上記酵素のア
ミノ酸配列中の特定のアミノ酸をひとつないしは複数別
のアミノ酸に置換した酵素なども含むものである。上記
酵素の例としては、例えばアルスロバクターＳＣ−６−
９８−２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１８５１）、アルスロ
バクター・エスピー（Arthrobacter sp.）ＡＴＣＣ２１
９０８株またはクロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−１株
（ＦＥＲＭＰ−１４００９）等の微生物由来の酵素が挙
げられるが、より具体的には、特開平５−５６７８７号
公報記載の公知の方法にて調製したアルスロバクターＳ
Ｃ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１８５１）由
来のエステラーゼ、特開平７−１６３３６４号公報記載
の公知の方法にて調製したクロモバクテリウムＳＣ−Ｙ
Ｍ−１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４００９）由来のエステラ
ーゼ、または特開平７−２１３２８０号公報記載の方法
により調製した部位特異的アミノ酸置換による耐熱性エ
ステラーゼ等が挙げられる。また、特にこのうち、アル
スロバクターＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１１８５１）由来のエステラーゼを用いた場合には本発
明中の一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２
−カルボン酸エステル化合物に対する不斉水解において
優れた光学選択性を示し、一般式（２）で示されるＮ−
置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物のＲ体を高い光
学純度にて得ることができる。
【００１０】ここで用いられる酵素の純度あるいは形態
については特に制限されるものではなく、精製酵素、粗
酵素、微生物培養物、菌体、およびそれらの処理物など
の種々の形態で用いることができる。ここで処理物と
は、例えば、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、菌体摩
砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体抽
出物、またはアルカリ処理物等をいう。さらに、上記の
ような種々の純度あるいは形態の酵素を、例えば、シリ
カゲルやセラミックス等の無機担体、セルロース、イオ
ン交換樹脂等への吸着法、ポリアクリルアミド法、含硫
多糖ゲル法（例えばカラギーナンゲル法）、アルギン酸
ゲル法、寒天ゲル等の公知方法により固定化して用いて
もよい。
については特に制限されるものではなく、精製酵素、粗
酵素、微生物培養物、菌体、およびそれらの処理物など
の種々の形態で用いることができる。ここで処理物と
は、例えば、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、菌体摩
砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体抽
出物、またはアルカリ処理物等をいう。さらに、上記の
ような種々の純度あるいは形態の酵素を、例えば、シリ
カゲルやセラミックス等の無機担体、セルロース、イオ
ン交換樹脂等への吸着法、ポリアクリルアミド法、含硫
多糖ゲル法（例えばカラギーナンゲル法）、アルギン酸
ゲル法、寒天ゲル等の公知方法により固定化して用いて
もよい。
【００１１】これらの酵素を製造するための微生物の培
養は、いずれも通常の方法によって容易に実施すること
ができる。培地としては、通常の微生物培養に使用され
る炭素源、窒素源、無機物等を適宜含む各種の培地を使
用することができる。例えば、炭素源としては、グルコ
ース、グリセリン、有機酸、糖蜜など、窒素源として
は、ペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、大豆粉、コー
ンスティープリカー、綿実粉、乾燥酵母、カザミノ酸、
塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、尿素など、無機物としては、カリウム、ナトリウ
ム、マグネシウム、鉄、マンガン、コバルト、亜鉛等の
塩化物類、硫酸塩類、およびリン酸塩類、具体的には、
塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫
酸第一鉄、硫酸マンガン、塩化コバルト、硫酸亜鉛、リ
ン酸カリウム、リン酸ナトリウムなどを使用することが
できる。また、上記微生物の有するＮ−置換アゼチジン
−２−カルボン酸エステル化合物の不斉水解能を高める
ために、オリーブ油、トリブチリン等のトリグリセリド
を適宜培地に添加してもよい。
養は、いずれも通常の方法によって容易に実施すること
ができる。培地としては、通常の微生物培養に使用され
る炭素源、窒素源、無機物等を適宜含む各種の培地を使
用することができる。例えば、炭素源としては、グルコ
ース、グリセリン、有機酸、糖蜜など、窒素源として
は、ペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、大豆粉、コー
ンスティープリカー、綿実粉、乾燥酵母、カザミノ酸、
塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、尿素など、無機物としては、カリウム、ナトリウ
ム、マグネシウム、鉄、マンガン、コバルト、亜鉛等の
塩化物類、硫酸塩類、およびリン酸塩類、具体的には、
塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫
酸第一鉄、硫酸マンガン、塩化コバルト、硫酸亜鉛、リ
ン酸カリウム、リン酸ナトリウムなどを使用することが
できる。また、上記微生物の有するＮ−置換アゼチジン
−２−カルボン酸エステル化合物の不斉水解能を高める
ために、オリーブ油、トリブチリン等のトリグリセリド
を適宜培地に添加してもよい。
【００１２】培養は、通常、液体培養し、好気的に行う
のが良い。滅菌した上記の培地に該微生物を接種し、振
とう培養、または通気撹拌培養するのが適当である。培
養温度は、２０〜４０℃、好ましくは、２５〜３５℃
で、ｐＨは６〜８が好ましい。培養時間は、種々の条件
によって異なるが、１〜７日間程度が好ましい。
のが良い。滅菌した上記の培地に該微生物を接種し、振
とう培養、または通気撹拌培養するのが適当である。培
養温度は、２０〜４０℃、好ましくは、２５〜３５℃
で、ｐＨは６〜８が好ましい。培養時間は、種々の条件
によって異なるが、１〜７日間程度が好ましい。
【００１３】また、必要に応じて固体培養法も、Ｎ−置
換アゼチジン−２−カルボン酸化合物エステル化合物の
不斉水解能を有する微生物菌体が得られる方法であれば
適宜採用することができる。
換アゼチジン−２−カルボン酸化合物エステル化合物の
不斉水解能を有する微生物菌体が得られる方法であれば
適宜採用することができる。
【００１４】かかる酵素は目的とする一般式（２）で示
される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化
合物に応じて適宜選択される。酵素の使用量は反応時間
の遅延や選択性の低下が起こらないように適宜選択さ
れ、例えば市販品を用いる場合、その使用量は一般式
（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カルボン酸
エステル化合物に対して通常は０．００１〜５０重量
倍、好ましくは０．００２〜２０重量倍である。
される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化
合物に応じて適宜選択される。酵素の使用量は反応時間
の遅延や選択性の低下が起こらないように適宜選択さ
れ、例えば市販品を用いる場合、その使用量は一般式
（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カルボン酸
エステル化合物に対して通常は０．００１〜５０重量
倍、好ましくは０．００２〜２０重量倍である。
【００１５】一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジ
ン−２−カルボン酸エステル化合物の酵素による不斉加
水分解反応は、通常、水の存在下で行われるが、この
際、不斉加水分解に用いられる水は、緩衝水溶液であっ
てもよい。緩衝水溶液としては、例えばリン酸ナトリウ
ム水溶液、リン酸カリウム水溶液などといったリン酸ア
ルカリ金属塩水溶液などの無機酸塩の緩衝水溶液、酢酸
ナトリウム水溶液、酢酸カリウム水溶液などといった酢
酸アルカリ金属塩などの有機酸塩の緩衝水溶液などが挙
げられる。かかる水の使用量は一般式（１）で示される
Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物に
対して通常０．５モル倍以上であればよく、場合によっ
ては溶媒量用いられ、通常は１００重量倍以下である。
ン−２−カルボン酸エステル化合物の酵素による不斉加
水分解反応は、通常、水の存在下で行われるが、この
際、不斉加水分解に用いられる水は、緩衝水溶液であっ
てもよい。緩衝水溶液としては、例えばリン酸ナトリウ
ム水溶液、リン酸カリウム水溶液などといったリン酸ア
ルカリ金属塩水溶液などの無機酸塩の緩衝水溶液、酢酸
ナトリウム水溶液、酢酸カリウム水溶液などといった酢
酸アルカリ金属塩などの有機酸塩の緩衝水溶液などが挙
げられる。かかる水の使用量は一般式（１）で示される
Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物に
対して通常０．５モル倍以上であればよく、場合によっ
ては溶媒量用いられ、通常は１００重量倍以下である。
【００１６】また、本不斉加水分解は、上記のような水
または緩衝水溶液に加えて、疎水性有機溶媒、親水性有
機溶媒などの有機溶媒の共存下に行われてもよい。
または緩衝水溶液に加えて、疎水性有機溶媒、親水性有
機溶媒などの有機溶媒の共存下に行われてもよい。
【００１７】疎水性有機溶媒としては、例えばｔ−ブチ
ルメチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテ
ル類、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタ
ン、イソオクタンなどの炭化水素類などが、親水性有機
溶媒としては、例えばｔ−ブタノール、メタノール、エ
タノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールなどのア
ルコール類、テトラヒドロフランなどのエーテル類、ジ
メチルスルホキサイドなどのスルホキサイド類、アセト
ンなどのケトン類、アセトニトリルなどのニトリル類な
どがそれぞれ挙げられる。これらの疎水性有機溶媒や親
水性有機溶媒はそれぞれ単独または２種以上を組み合わ
せて用いられ、疎水性有機溶媒と親水性有機溶媒とを組
み合わせて用いてもよい。
ルメチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテ
ル類、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタ
ン、イソオクタンなどの炭化水素類などが、親水性有機
溶媒としては、例えばｔ−ブタノール、メタノール、エ
タノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールなどのア
ルコール類、テトラヒドロフランなどのエーテル類、ジ
メチルスルホキサイドなどのスルホキサイド類、アセト
ンなどのケトン類、アセトニトリルなどのニトリル類な
どがそれぞれ挙げられる。これらの疎水性有機溶媒や親
水性有機溶媒はそれぞれ単独または２種以上を組み合わ
せて用いられ、疎水性有機溶媒と親水性有機溶媒とを組
み合わせて用いてもよい。
【００１８】かかる有機溶媒を用いる場合、その使用量
は通常一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２
−カルボン酸エステル化合物に対して１００重量倍以
下、好ましくは０．１〜５０重量倍の範囲である。
は通常一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジン−２
−カルボン酸エステル化合物に対して１００重量倍以
下、好ましくは０．１〜５０重量倍の範囲である。
【００１９】不斉加水分解は、例えば水、Ｎ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸エステル化合物および酵素を混
合する方法により行われ、有機溶媒を用いる場合には該
有機溶媒中で水、一般式（１）で示されるＮ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸エステル化合物および酵素を混
合すればよい。また酵素は、これを樹脂などに固定化し
て用いてもよい。
チジン−２−カルボン酸エステル化合物および酵素を混
合する方法により行われ、有機溶媒を用いる場合には該
有機溶媒中で水、一般式（１）で示されるＮ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸エステル化合物および酵素を混
合すればよい。また酵素は、これを樹脂などに固定化し
て用いてもよい。
【００２０】反応系のｐＨは酵素による不斉加水分解が
選択性よく進行する値が適宜選択され、特に限定されな
いが、通常はｐＨ４〜１０の範囲である。反応温度は、
高すぎると酵素の安定性が低下する傾向にあり、また低
すぎると反応速度が低下する傾向にあるため、通常５〜
６５℃であり、好ましくは２０〜５０℃の範囲である。
選択性よく進行する値が適宜選択され、特に限定されな
いが、通常はｐＨ４〜１０の範囲である。反応温度は、
高すぎると酵素の安定性が低下する傾向にあり、また低
すぎると反応速度が低下する傾向にあるため、通常５〜
６５℃であり、好ましくは２０〜５０℃の範囲である。
【００２１】かかる不斉加水分解によって一般式（１）
で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステ
ル化合物の一方の光学異性体が、一般式（２）において
＊で示される位置の不斉炭素原子の周りの立体配置を維
持したまま優先的に加水分解されて、目的とする一般式
（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カ
ルボン酸化合物が生成する。
で示されるＮ−置換アゼチジン−２−カルボン酸エステ
ル化合物の一方の光学異性体が、一般式（２）において
＊で示される位置の不斉炭素原子の周りの立体配置を維
持したまま優先的に加水分解されて、目的とする一般式
（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カ
ルボン酸化合物が生成する。
【００２２】反応後の後処理は、通常、必要に応じて疎
水性有機溶媒および／または水を加えて水層と有機層に
分液することにより行われる。この操作により目的とす
る一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン
−２−カルボン酸化合物の水溶液を得ることができる。
また、樹脂等に固定化した酵素を使用した場合等、反応
液に不溶物が含まれる場合には、濾過等を行って不溶物
を除去した後に上記分液操作を行えば良い。この操作で
使用しうる疎水性有機溶媒としては例えばｔ−ブチルメ
チルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル
類、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、
イソオクタンなどの炭化水素類、ジクロロメタン、ジク
ロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、オルトジ
クロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチ
ル、酢酸メチル、酢酸ブチルなどのエステル類などが挙
げられる。また、この操作で得られる有機層には、不斉
加水分解残として一般式（１）で示されるＮ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸エステル化合物が含まれるが、
このものを酸またはアルカリ等を用いて通常の加水分解
にかければ、上記で得られたものとは逆の立体配置を有
する一般式（２）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−
カルボン酸化合物を得ることができる。
水性有機溶媒および／または水を加えて水層と有機層に
分液することにより行われる。この操作により目的とす
る一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン
−２−カルボン酸化合物の水溶液を得ることができる。
また、樹脂等に固定化した酵素を使用した場合等、反応
液に不溶物が含まれる場合には、濾過等を行って不溶物
を除去した後に上記分液操作を行えば良い。この操作で
使用しうる疎水性有機溶媒としては例えばｔ−ブチルメ
チルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル
類、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、
イソオクタンなどの炭化水素類、ジクロロメタン、ジク
ロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、オルトジ
クロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチ
ル、酢酸メチル、酢酸ブチルなどのエステル類などが挙
げられる。また、この操作で得られる有機層には、不斉
加水分解残として一般式（１）で示されるＮ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸エステル化合物が含まれるが、
このものを酸またはアルカリ等を用いて通常の加水分解
にかければ、上記で得られたものとは逆の立体配置を有
する一般式（２）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−
カルボン酸化合物を得ることができる。
【００２３】上記の酵素による不斉加水分解反応により
得られた一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸化合物の水溶液は、そのまま次
工程の式（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カ
ルボン酸の原料として使用することができるが、必要に
応じて一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物の溶液を濃縮することによ
り、一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジ
ン−２−カルボン酸化合物を取り出すことができる。得
られた一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物はさらにカラムクロマトグ
ラフィーあるいは再結晶等の操作により精製することも
できる。
得られた一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸化合物の水溶液は、そのまま次
工程の式（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カ
ルボン酸の原料として使用することができるが、必要に
応じて一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物の溶液を濃縮することによ
り、一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジ
ン−２−カルボン酸化合物を取り出すことができる。得
られた一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物はさらにカラムクロマトグ
ラフィーあるいは再結晶等の操作により精製することも
できる。
【００２４】かくして得られる一般式（２）で示される
光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物と
しては、例えば（２Ｓ）−Ｎ−ベンジルアゼチジン−２
−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｐ−クロロベンジルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−〔（Ｓ）−フ
ェニルエチル〕−アゼチジン−２−カルボン酸、（２
Ｓ）−Ｎ−〔（Ｒ）−フェニルエチル〕−アゼチジン−
２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−β−フェニルエチルア
ゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−フェニルプ
ロピルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベ
ンズヒドリルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−
Ｎ−トリフェニルメチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−アセチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−クロロアセチルアゼチジン−２−カルボ
ン酸、（２Ｓ）−Ｎ−トリフルオロアセチルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベンゾイルアゼチジ
ン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｐ−フェニルベン
ゾイルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｔ
−ブトキシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−トリクロロエチルオキシカルボニルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキ
シカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−
Ｎ−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルアゼチジン−
２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−２−フェニルエチルオ
キシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）
−Ｎ−アリルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボ
ン酸、（２Ｓ）−Ｎ−２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフ
ェニルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−メチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−エチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−ｎ−プロピルアゼチジン−２−カルボン
酸、（２Ｓ）−Ｎ−イソプロピルアゼチジン−２−カル
ボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルアゼチジン−２−カ
ルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−イソブチルアゼチジン−２−
カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブチルアゼチジ
ン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−アリルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−フェニルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｐ−トルエンスルホ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベン
ゼンスルホニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）
−Ｎ−メトキシベンゼンスルホニルアゼチジン−２−カ
ルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ニトロベンゼンスルホニルア
ゼチジン−２−カルボン酸など、あるいは（２Ｒ）−Ｎ
−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ
−ｐ−クロロベンジルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｒ）−Ｎ−〔（Ｓ）−フェニルエチル〕−アゼチジ
ン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−〔（Ｒ）−フェニ
ルエチル〕−アゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−β−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｒ）−Ｎ−フェニルプロピルアゼチジン−２−カル
ボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ベンズヒドリルアゼチジン−２
−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−トリフェニルメチルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−アセチルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−クロロアセチ
ルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−トリフ
ルオロアセチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）
−Ｎ−ベンゾイルアゼチジン−２−カルボン酸、（２
Ｒ）−Ｎ−ｐ−フェニルベンゾイルアゼチジン−２−カ
ルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−トリクロロエ
チルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｒ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアゼチジン−
２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｐ−ニトロベンジルオ
キシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）
−Ｎ−２−フェニルエチルオキシカルボニルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−アリルオキシカルボ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−２，
４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルオキシカルボニルア
ゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−メチルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−エチルアゼチ
ジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｎ−プロピルア
ゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−イソプロピ
ルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｎ−ブ
チルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−イソ
ブチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｓ
ｅｃ−ブチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−ｔ−ブチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）
−Ｎ−アリルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−フェニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−ｐ−トルエンスルホニルアゼチジン−２−カルボン
酸、（２Ｒ）−Ｎ−ベンゼンスルホニルアゼチジン−２
−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−メトキシベンゼンスルホ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ニト
ロベンゼンスルホニルアゼチジン−２−カルボン酸など
が挙げられる。
光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物と
しては、例えば（２Ｓ）−Ｎ−ベンジルアゼチジン−２
−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｐ−クロロベンジルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−〔（Ｓ）−フ
ェニルエチル〕−アゼチジン−２−カルボン酸、（２
Ｓ）−Ｎ−〔（Ｒ）−フェニルエチル〕−アゼチジン−
２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−β−フェニルエチルア
ゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−フェニルプ
ロピルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベ
ンズヒドリルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−
Ｎ−トリフェニルメチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−アセチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−クロロアセチルアゼチジン−２−カルボ
ン酸、（２Ｓ）−Ｎ−トリフルオロアセチルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベンゾイルアゼチジ
ン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｐ−フェニルベン
ゾイルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｔ
−ブトキシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−トリクロロエチルオキシカルボニルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキ
シカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−
Ｎ−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルアゼチジン−
２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−２−フェニルエチルオ
キシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）
−Ｎ−アリルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボ
ン酸、（２Ｓ）−Ｎ−２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフ
ェニルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−メチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−エチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｓ）−Ｎ−ｎ−プロピルアゼチジン−２−カルボン
酸、（２Ｓ）−Ｎ−イソプロピルアゼチジン−２−カル
ボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルアゼチジン−２−カ
ルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−イソブチルアゼチジン−２−
カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブチルアゼチジ
ン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−アリルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−フェニルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ｐ−トルエンスルホ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ベン
ゼンスルホニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ）
−Ｎ−メトキシベンゼンスルホニルアゼチジン−２−カ
ルボン酸、（２Ｓ）−Ｎ−ニトロベンゼンスルホニルア
ゼチジン−２−カルボン酸など、あるいは（２Ｒ）−Ｎ
−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ
−ｐ−クロロベンジルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｒ）−Ｎ−〔（Ｓ）−フェニルエチル〕−アゼチジ
ン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−〔（Ｒ）−フェニ
ルエチル〕−アゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−β−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｒ）−Ｎ−フェニルプロピルアゼチジン−２−カル
ボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ベンズヒドリルアゼチジン−２
−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−トリフェニルメチルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−アセチルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−クロロアセチ
ルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−トリフ
ルオロアセチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）
−Ｎ−ベンゾイルアゼチジン−２−カルボン酸、（２
Ｒ）−Ｎ−ｐ−フェニルベンゾイルアゼチジン−２−カ
ルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−トリクロロエ
チルオキシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、
（２Ｒ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアゼチジン−
２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｐ−ニトロベンジルオ
キシカルボニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）
−Ｎ−２−フェニルエチルオキシカルボニルアゼチジン
−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−アリルオキシカルボ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−２，
４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルオキシカルボニルア
ゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−メチルアゼ
チジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−エチルアゼチ
ジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｎ−プロピルア
ゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−イソプロピ
ルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｎ−ブ
チルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−イソ
ブチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ｓ
ｅｃ−ブチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−ｔ−ブチルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）
−Ｎ−アリルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−フェニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−
Ｎ−ｐ−トルエンスルホニルアゼチジン−２−カルボン
酸、（２Ｒ）−Ｎ−ベンゼンスルホニルアゼチジン−２
−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−メトキシベンゼンスルホ
ニルアゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｒ）−Ｎ−ニト
ロベンゼンスルホニルアゼチジン−２−カルボン酸など
が挙げられる。
【００２５】次にこれらの一般式（２）で示される光学
活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物のＮ−
置換基を除去すれば、目的とする式（３）で示される光
学活性アゼチジン−２−カルボン酸を得ることができ
る。
活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物のＮ−
置換基を除去すれば、目的とする式（３）で示される光
学活性アゼチジン−２−カルボン酸を得ることができ
る。
【００２６】一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2が芳
香環上に炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のア
ルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基で１個以上置換さ
れていてもよいアラルキル基、または芳香環上に炭素数
１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキシ基、ハ
ロゲン原子、ニトロ基で１個以上置換されていてもよい
アリール基で置換された炭素数１〜２のアルキルオキシ
カルボニル基の場合は、これを触媒の存在下に還元剤と
反応させることによって容易に収率よく式（３）で示さ
れる光学活性アゼチジン−２−カルボン酸に導くことが
できる。
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2が芳
香環上に炭素数１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のア
ルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基で１個以上置換さ
れていてもよいアラルキル基、または芳香環上に炭素数
１〜８のアルキル基、炭素数１〜８のアルコキシ基、ハ
ロゲン原子、ニトロ基で１個以上置換されていてもよい
アリール基で置換された炭素数１〜２のアルキルオキシ
カルボニル基の場合は、これを触媒の存在下に還元剤と
反応させることによって容易に収率よく式（３）で示さ
れる光学活性アゼチジン−２−カルボン酸に導くことが
できる。
【００２７】かかる触媒としては、接触水素添加反応に
通常使用される貴金属触媒、より具体的には、例えばパ
ラジウム、酢酸パラジウム、塩化パラジウム、酸化パラ
ジウム、水酸化パラジウムなどが挙げられ、これらは活
性炭、アルミナ等に担持されたものを用いても良い。そ
の使用量は一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換ア
ゼチジン−２−カルボン酸化合物に対して通常０．００
０１〜０．５重量倍の範囲である。
通常使用される貴金属触媒、より具体的には、例えばパ
ラジウム、酢酸パラジウム、塩化パラジウム、酸化パラ
ジウム、水酸化パラジウムなどが挙げられ、これらは活
性炭、アルミナ等に担持されたものを用いても良い。そ
の使用量は一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換ア
ゼチジン−２−カルボン酸化合物に対して通常０．００
０１〜０．５重量倍の範囲である。
【００２８】還元剤としては、例えば水素や、ヒドラジ
ンやその塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩などの塩、蟻酸やその
アンモニウム塩などがあげられる。
ンやその塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩などの塩、蟻酸やその
アンモニウム塩などがあげられる。
【００２９】反応に際して通常は溶媒が用いられ、かか
る溶媒としては、例えば水、メタノール、エタノール、
２−プロパノールなどのアルコール系溶媒、酢酸エチ
ル、酢酸メチル、酢酸ブチルなどのエステル系溶媒、ア
セトニトリルなどのニトリル系溶媒、トルエン、キシレ
ン、ベンゼンなどの芳香族炭化水素系溶媒、ヘキサン、
ヘプタンなどの脂肪族炭化水素系溶媒、ジクロロメタ
ン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、
オルトジクロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素系溶
媒、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、ｔ−ブ
チルメチルエーテルなどのエーテル系溶媒、アセトアミ
ド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、 Ｎ，Ｎ−ジメチ
ルアセトアミドなどのアミド系溶媒などが挙げられる。
これらの溶媒はそれぞれ単独もしくは２種以上を混合し
て用いられ、その使用量は一般式（２）で示される光学
活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物に対し
て通常２〜１００重量倍の範囲である。
る溶媒としては、例えば水、メタノール、エタノール、
２−プロパノールなどのアルコール系溶媒、酢酸エチ
ル、酢酸メチル、酢酸ブチルなどのエステル系溶媒、ア
セトニトリルなどのニトリル系溶媒、トルエン、キシレ
ン、ベンゼンなどの芳香族炭化水素系溶媒、ヘキサン、
ヘプタンなどの脂肪族炭化水素系溶媒、ジクロロメタ
ン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、
オルトジクロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素系溶
媒、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、ｔ−ブ
チルメチルエーテルなどのエーテル系溶媒、アセトアミ
ド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、 Ｎ，Ｎ−ジメチ
ルアセトアミドなどのアミド系溶媒などが挙げられる。
これらの溶媒はそれぞれ単独もしくは２種以上を混合し
て用いられ、その使用量は一般式（２）で示される光学
活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物に対し
て通常２〜１００重量倍の範囲である。
【００３０】還元剤として水素を用いる場合、例えば溶
媒に一般式（２）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−
カルボン酸化合物および触媒を加えたのち、反応系に水
素ガスを供給することにより行われる。水素ガスを供給
するには反応系に水素ガスを吹き込んでもよいし、常圧
ないし加圧下に水素ガス雰囲気下で反応系を攪拌しても
よい。また、水素以外の還元剤を用いる場合は、例えば
溶媒に一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物および触媒を加えたのちに
還元剤を加えればよい。反応温度は、いずれの場合も通
常−５０〜２００℃の範囲であり、好ましくは０〜１５
０℃の範囲である。
媒に一般式（２）で示されるＮ−置換アゼチジン−２−
カルボン酸化合物および触媒を加えたのち、反応系に水
素ガスを供給することにより行われる。水素ガスを供給
するには反応系に水素ガスを吹き込んでもよいし、常圧
ないし加圧下に水素ガス雰囲気下で反応系を攪拌しても
よい。また、水素以外の還元剤を用いる場合は、例えば
溶媒に一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物および触媒を加えたのちに
還元剤を加えればよい。反応温度は、いずれの場合も通
常−５０〜２００℃の範囲であり、好ましくは０〜１５
０℃の範囲である。
【００３１】一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
シル基の場合は、例えば塩化水素、臭化水素などの無機
酸水溶液中加熱することにより、容易に式（３）で示さ
れる光学活性アゼチジン−２−カルボン酸に導くことが
できる。また、水存在下アシラーゼなどの脱アシル化酵
素を用いることにより、同様に式（３）で示される光学
活性アゼチジン−２−カルボン酸を得ることができる。
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
シル基の場合は、例えば塩化水素、臭化水素などの無機
酸水溶液中加熱することにより、容易に式（３）で示さ
れる光学活性アゼチジン−２−カルボン酸に導くことが
できる。また、水存在下アシラーゼなどの脱アシル化酵
素を用いることにより、同様に式（３）で示される光学
活性アゼチジン−２−カルボン酸を得ることができる。
【００３２】一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
ルキルオキシカルボニル基の場合は、水もしくは有機溶
媒中、例えば塩酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸など
による酸性条件下、必要に応じて加熱することにより、
式（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カルボン
酸を得ることができる。
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
ルキルオキシカルボニル基の場合は、水もしくは有機溶
媒中、例えば塩酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸など
による酸性条件下、必要に応じて加熱することにより、
式（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カルボン
酸を得ることができる。
【００３３】一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
リルオキシカルボニル基の場合は、例えばテトラキス
（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒存在
下、水素化トリ−ｎ−ブチルスズ、酢酸等を用いて収率
良く式（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カル
ボン酸を得ることができる。
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
リルオキシカルボニル基の場合は、例えばテトラキス
（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒存在
下、水素化トリ−ｎ−ブチルスズ、酢酸等を用いて収率
良く式（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カル
ボン酸を得ることができる。
【００３４】一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
リル基の場合は、例えばテトラヒドロフラン等の溶媒
中、例えばビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム
と１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタンから調
製される触媒等の存在下、チオサリチル酸等と室温もし
くは必要により加熱条件下混合することにより、式
（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸
を得ることができる。
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がア
リル基の場合は、例えばテトラヒドロフラン等の溶媒
中、例えばビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム
と１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタンから調
製される触媒等の存在下、チオサリチル酸等と室温もし
くは必要により加熱条件下混合することにより、式
（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸
を得ることができる。
【００３５】一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がス
ルホニル基の場合は、例えば塩酸、硫酸、酢酸、トリフ
ルオロ酢酸などによる酸性条件下、必要に応じて加熱す
ることにより、もしくはバーチ還元等により、式（３）
で示される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸を得る
ことができる。
アゼチジン−２−カルボン酸化合物において、Ｒ2がス
ルホニル基の場合は、例えば塩酸、硫酸、酢酸、トリフ
ルオロ酢酸などによる酸性条件下、必要に応じて加熱す
ることにより、もしくはバーチ還元等により、式（３）
で示される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸を得る
ことができる。
【００３６】上記の各種の反応後、通常の後処理法、例
えば触媒を濾別後、濾液を濃縮する方法、抽出操作後、
抽出液を濃縮する方法などによって、容易に式（３）で
示される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸を得るこ
とができる。これはさらに再結晶、カラムクロマトグラ
フィーなどによって精製されてもよい。
えば触媒を濾別後、濾液を濃縮する方法、抽出操作後、
抽出液を濃縮する方法などによって、容易に式（３）で
示される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸を得るこ
とができる。これはさらに再結晶、カラムクロマトグラ
フィーなどによって精製されてもよい。
【００３７】
【発明の効果】本発明の方法によれば、１工程で光学純
度よく一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物を製造することができ、ま
たその一般式（２）で示される化合物から式（３）で示
される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸に容易に導
くことができる。
度よく一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチ
ジン−２−カルボン酸化合物を製造することができ、ま
たその一般式（２）で示される化合物から式（３）で示
される光学活性アゼチジン−２−カルボン酸に容易に導
くことができる。
【００３８】
【実施例】以下、実施例により本発明をより詳細に説明
するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
【００３９】実施例１ ５００ｍｌ容三角フラスコに液体培地（水１Ｌにグリセ
ロ−ル５ｇ、酵母エキス６ｇ及びリン酸一カリウム９
ｇ、リン酸二カリウム４ｇを溶解し、ｐＨ７．０とす
る。）１００ｍｌを入れて滅菌した後、アンピシリンを
５０μｇ／ｍｌになるように加え、参考例１で示した方
法で作成したアルスロバクタ−(Arthrobacter)ＳＣ−６
−９８−２８株由来のエステラ−ゼ遺伝子組換え微生物
の斜面培養から１白金耳接種し、３０℃で２４時間回転
振とう培養した。次に３Ｌ容の小型培養槽（丸菱バイオ
エンジ社製、ＭＤＬ型）に滅菌した液体培地（水１Ｌに
グリセロ−ル１５ｇ、酵母エキス２５ｇ及びリン酸一カ
リウム０．４ｇ、硫酸マグネシウム２ｇ硫酸第一鉄０．
１ｇを溶解し、ｐＨ７．０とする。）１５００ｍｌを仕
込み、そこへ上記の三角フラスコで培養した培養液１５
ｍｌを接種した。３０℃で通気攪拌培養を始め、対数増
殖期中期（培養１０〜１５時間）にＩＰＴＧ（イソプロ
ピルチオ−β−Ｄ−ガラクトシド）を終濃度１ｍＭにな
るように添加した後、滅菌した培地を流加し、さらに培
養を継続、計４０時間培養することにより、微生物培養
物を得た。
ロ−ル５ｇ、酵母エキス６ｇ及びリン酸一カリウム９
ｇ、リン酸二カリウム４ｇを溶解し、ｐＨ７．０とす
る。）１００ｍｌを入れて滅菌した後、アンピシリンを
５０μｇ／ｍｌになるように加え、参考例１で示した方
法で作成したアルスロバクタ−(Arthrobacter)ＳＣ−６
−９８−２８株由来のエステラ−ゼ遺伝子組換え微生物
の斜面培養から１白金耳接種し、３０℃で２４時間回転
振とう培養した。次に３Ｌ容の小型培養槽（丸菱バイオ
エンジ社製、ＭＤＬ型）に滅菌した液体培地（水１Ｌに
グリセロ−ル１５ｇ、酵母エキス２５ｇ及びリン酸一カ
リウム０．４ｇ、硫酸マグネシウム２ｇ硫酸第一鉄０．
１ｇを溶解し、ｐＨ７．０とする。）１５００ｍｌを仕
込み、そこへ上記の三角フラスコで培養した培養液１５
ｍｌを接種した。３０℃で通気攪拌培養を始め、対数増
殖期中期（培養１０〜１５時間）にＩＰＴＧ（イソプロ
ピルチオ−β−Ｄ−ガラクトシド）を終濃度１ｍＭにな
るように添加した後、滅菌した培地を流加し、さらに培
養を継続、計４０時間培養することにより、微生物培養
物を得た。
【００４０】実施例２ ２０〜２５℃でラセミ体混合物のＮ−（Ｒ）−フェニル
エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル（２
００ｍｇ）にｔ−ブチルメチルエーテル１．８ｍｌを加
え、１分間攪拌後、実施例１に従って調製した微生物培
養物２０μｌを１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）２ｍｌに懸濁して注加し、４０℃に昇温して８時間
攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水
層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミパック
ス ＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析セ
ンター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｒ）−フェ
ニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換率３
８．１％、Ｒ体比９８．７％でえられた。
エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル（２
００ｍｇ）にｔ−ブチルメチルエーテル１．８ｍｌを加
え、１分間攪拌後、実施例１に従って調製した微生物培
養物２０μｌを１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）２ｍｌに懸濁して注加し、４０℃に昇温して８時間
攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水
層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミパック
ス ＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析セ
ンター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｒ）−フェ
ニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換率３
８．１％、Ｒ体比９８．７％でえられた。
【００４１】実施例３ ２０〜２５℃でラセミ体混合物のＮ−（Ｓ）−フェニル
エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル（２
００ｍｇ）にｔ−ブチルメチルエーテル１．８ｍｌを加
え、１分間攪拌後、実施例１に従って調製した微生物培
養物２０μｌを１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）２ｍｌに懸濁して注加し、４０℃に昇温して８時間
攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水
層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミパック
ス ＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析セ
ンター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｓ）−フェ
ニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換率１
８．１％、Ｒ体比９２．１％でえられた。
エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル（２
００ｍｇ）にｔ−ブチルメチルエーテル１．８ｍｌを加
え、１分間攪拌後、実施例１に従って調製した微生物培
養物２０μｌを１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）２ｍｌに懸濁して注加し、４０℃に昇温して８時間
攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水
層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミパック
ス ＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析セ
ンター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｓ）−フェ
ニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換率１
８．１％、Ｒ体比９２．１％でえられた。
【００４２】実施例４ ２０〜２５℃でラセミ体混合物のＮ−ベンジルアゼチジ
ン−２−カルボン酸エチルエステル（２００ｍｇ）にｔ
−ブチルメチルエーテル１．８ｍｌを加え、１分間攪拌
後、実施例１に従って調製した微生物培養物２０μｌを
１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）２ｍｌに懸
濁して注加し、４０℃に昇温して８時間攪拌した。静置
後に分液して有機層と水層とを得た。水層を高速液体ク
ロマトグラフィー〔カラム：スミキラル ＯＡ−３１０
０、４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（住化分析センター社
製）〕で分析したところ、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２
−カルボン酸が転換率４６．３％、Ｒ体比９６．４％で
えられた。
ン−２−カルボン酸エチルエステル（２００ｍｇ）にｔ
−ブチルメチルエーテル１．８ｍｌを加え、１分間攪拌
後、実施例１に従って調製した微生物培養物２０μｌを
１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）２ｍｌに懸
濁して注加し、４０℃に昇温して８時間攪拌した。静置
後に分液して有機層と水層とを得た。水層を高速液体ク
ロマトグラフィー〔カラム：スミキラル ＯＡ−３１０
０、４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（住化分析センター社
製）〕で分析したところ、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２
−カルボン酸が転換率４６．３％、Ｒ体比９６．４％で
えられた。
【００４３】実施例５ ２０〜２５℃で１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）２ｍｌに実施例１に従って調製した微生物培養物２
０μｌを加えて１分間攪拌後、ラセミ体混合物のＮ−
（Ｒ）−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸メ
チルエステル（２００ｍｇ）を加えた。４０℃に昇温し
て２時間攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを
得た。水層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：ス
ミパックスＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化
分析センター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｒ）
−フェニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換
率４９．３％、Ｒ体比９５．６％でえられた。
０）２ｍｌに実施例１に従って調製した微生物培養物２
０μｌを加えて１分間攪拌後、ラセミ体混合物のＮ−
（Ｒ）−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸メ
チルエステル（２００ｍｇ）を加えた。４０℃に昇温し
て２時間攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを
得た。水層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：ス
ミパックスＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化
分析センター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｒ）
−フェニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換
率４９．３％、Ｒ体比９５．６％でえられた。
【００４４】実施例６ ２０〜２５℃で１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）２ｍｌに実施例１に従って調製した微生物培養物２
０μｌを加えて１分間攪拌後、ラセミ体混合物のＮ−
（Ｓ）−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸メ
チルエステル（２００ｍｇ）を加えた。４０℃に昇温し
て２時間攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを
得た。水層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：ス
ミパックスＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化
分析センター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｓ）
−フェニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換
率５０．３％、Ｒ体比８７．０％でえられた。
０）２ｍｌに実施例１に従って調製した微生物培養物２
０μｌを加えて１分間攪拌後、ラセミ体混合物のＮ−
（Ｓ）−フェニルエチルアゼチジン−２−カルボン酸メ
チルエステル（２００ｍｇ）を加えた。４０℃に昇温し
て２時間攪拌した。静置後に分液して有機層と水層とを
得た。水層を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：ス
ミパックスＯＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化
分析センター社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｓ）
−フェニルエチル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換
率５０．３％、Ｒ体比８７．０％でえられた。
【００４５】実施例７ ２０〜２５℃で１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）２ｍｌに実施例１に従って調製した微生物培養物２
０μｌを加えて１分間攪拌後、ラセミ体混合物のＮ−ベ
ンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチルエステル（２
００ｍｇ）を加えた。４０℃に昇温して２時間攪拌し
た。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水層を高
速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミキラル ＯＡ
−３１００、４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（住化分析センタ
ー社製）〕で分析したところ、Ｎ−ベンジルアゼチジン
−２−カルボン酸が転換率５８．８％、Ｒ体比７７．６
％でえられた。
０）２ｍｌに実施例１に従って調製した微生物培養物２
０μｌを加えて１分間攪拌後、ラセミ体混合物のＮ−ベ
ンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチルエステル（２
００ｍｇ）を加えた。４０℃に昇温して２時間攪拌し
た。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水層を高
速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミキラル ＯＡ
−３１００、４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（住化分析センタ
ー社製）〕で分析したところ、Ｎ−ベンジルアゼチジン
−２−カルボン酸が転換率５８．８％、Ｒ体比７７．６
％でえられた。
【００４６】実施例８ 参考例２で示した方法で作成したクロモバクテリウム(C
hromobacterium)ＳＣ−ＹＭ−１株由来のエステラ−ゼ
遺伝子組換え微生物を、実施例１記載の方法と同様にし
て培養し、微生物培養物を得た。
hromobacterium)ＳＣ−ＹＭ−１株由来のエステラ−ゼ
遺伝子組換え微生物を、実施例１記載の方法と同様にし
て培養し、微生物培養物を得た。
【００４７】実施例９ ２０〜２５℃でラセミ体混合物のＮ−（Ｒ）−フェニル
エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル（２
２ｍｇ）にｔ−ブチルメチルエーテル１ｍｌを加え、１
分間攪拌後、実施例８に従って調製した微生物培養物２
μｌを１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）１ｍ
ｌに懸濁して注加し、４０℃に昇温して６時間攪拌し
た。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水層を高
速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミパックス Ｏ
ＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析センター
社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｒ）−フェニルエ
チル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換率３１．４
％、Ｓ体比６８．５％でえられた。
エチルアゼチジン−２−カルボン酸メチルエステル（２
２ｍｇ）にｔ−ブチルメチルエーテル１ｍｌを加え、１
分間攪拌後、実施例８に従って調製した微生物培養物２
μｌを１００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）１ｍ
ｌに懸濁して注加し、４０℃に昇温して６時間攪拌し
た。静置後に分液して有機層と水層とを得た。水層を高
速液体クロマトグラフィー〔カラム：スミパックス Ｏ
ＤＳ−２１２、６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析センター
社製）〕で分析したところ、［Ｎ−（Ｒ）−フェニルエ
チル］アゼチジン−２−カルボン酸が転換率３１．４
％、Ｓ体比６８．５％でえられた。
【００４８】実施例１０ グルコース１．０％、ペプトン０．７％、酵母エキス
０．５％、リン酸水素二カリウム０．２％（ｐＨ７．
２）からなる殺菌済み培地３ｍｌを口径１８ｍｍφの試
験管にいれたものに対し、トリブチリン４μｌを添加し
た後、あらかじめ同培地にて３０℃、３日間往復振盪培
養したアルスロバクター・エスピー（Arthrobacter s
p.）ATCC21908株の培養液１００μｌを植菌した。これ
を３０℃、１日間往復振盪培養し、それぞれの菌体培養
物を得た。これらの菌体培養物それぞれ０．５ｍｌに対
して、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチル
２１．５ｍｇを溶解させたｔ−ブチルメチルエーテル１
ｍｌおよび２００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．
５ｍｌを加えた。これを４０℃、１６時間往復振盪し
た。静置後に分液して得られた水層を高速液体クロマト
グラフィー〔カラム：スミキラル ＯＡ−３１００、
４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（住化分析センター社製）〕で
分析したところ、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸が、転換率２４．８％、Ｒ体比９６．６％で得られ
ていた。
０．５％、リン酸水素二カリウム０．２％（ｐＨ７．
２）からなる殺菌済み培地３ｍｌを口径１８ｍｍφの試
験管にいれたものに対し、トリブチリン４μｌを添加し
た後、あらかじめ同培地にて３０℃、３日間往復振盪培
養したアルスロバクター・エスピー（Arthrobacter s
p.）ATCC21908株の培養液１００μｌを植菌した。これ
を３０℃、１日間往復振盪培養し、それぞれの菌体培養
物を得た。これらの菌体培養物それぞれ０．５ｍｌに対
して、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボン酸エチル
２１．５ｍｇを溶解させたｔ−ブチルメチルエーテル１
ｍｌおよび２００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．
５ｍｌを加えた。これを４０℃、１６時間往復振盪し
た。静置後に分液して得られた水層を高速液体クロマト
グラフィー〔カラム：スミキラル ＯＡ−３１００、
４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（住化分析センター社製）〕で
分析したところ、Ｎ−ベンジルアゼチジン−２−カルボ
ン酸が、転換率２４．８％、Ｒ体比９６．６％で得られ
ていた。
【００４９】実施例１１ 実施例４で得られたＮ−ベンジルアゼチジン−２−カル
ボン酸水溶液に室温下、１０％Ｐｄ（ＯＨ）2（含水、
水分４３％）を１７０ｍｇ添加し、水素ガス雰囲気下、
室温で１８時間攪拌後、４０℃に昇温してさらに３４時
間攪拌する。その後、ろ過し、濾液としてアゼチジン−
２−カルボン酸の溶液を得る。この溶液を高速液体クロ
マトグラフィー分析〔カラム：スミキラル ＯＡ−６０
００、４．６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析センター
製）〕で分析することにより、光学活性アゼチジン−２
−カルボン酸の（Ｒ）体が得られる。
ボン酸水溶液に室温下、１０％Ｐｄ（ＯＨ）2（含水、
水分４３％）を１７０ｍｇ添加し、水素ガス雰囲気下、
室温で１８時間攪拌後、４０℃に昇温してさらに３４時
間攪拌する。その後、ろ過し、濾液としてアゼチジン−
２−カルボン酸の溶液を得る。この溶液を高速液体クロ
マトグラフィー分析〔カラム：スミキラル ＯＡ−６０
００、４．６ｍｍφ×１５ｃｍ（住化分析センター
製）〕で分析することにより、光学活性アゼチジン−２
−カルボン酸の（Ｒ）体が得られる。
【００５０】参考例１ 実施例１で使用したアルスロバクターＳＣ−６−９８−
２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１８５１）由来のエステラー
ゼ遺伝子組換え体微生物は特開平５−５６７８７記載の
方法に準じて作成した。即ち、特開平５−５６７８７記
載実施例の方法に準じてアルスロバクターＳＣ−６−９
８−２８株由来のエステラーゼ遺伝子を含むプラスミド
ｐＡＧＥ−１を調製した。これを制限酵素ＮｓｐＶ、Ｈ
ｉｎｄＩＩＩで消化することによりエステラーゼの翻訳
領域を切り出し、エステラーゼ遺伝子の開始コドンＧＴ
ＧをＡＴＧに変換するために合成したＤＮＡ断片およ
び、制限酵素ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄＩＩＩで消化したｌ
ａｃプロモータを有する発現ベクターｐＵＣ１１８（宝
酒造株式会社製）とライゲーションを行った。この様に
して、ｌａｃプロモーターの下流にアルスロバクターＳ
Ｃ−６−９８−２８株由来のエステラーゼ遺伝子を有す
る大腸菌用発現プラスミドを作成した後、定法に従い大
腸菌ＪＭ１０５株に導入することにより組換え体微生物
を構築した。
２８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１８５１）由来のエステラー
ゼ遺伝子組換え体微生物は特開平５−５６７８７記載の
方法に準じて作成した。即ち、特開平５−５６７８７記
載実施例の方法に準じてアルスロバクターＳＣ−６−９
８−２８株由来のエステラーゼ遺伝子を含むプラスミド
ｐＡＧＥ−１を調製した。これを制限酵素ＮｓｐＶ、Ｈ
ｉｎｄＩＩＩで消化することによりエステラーゼの翻訳
領域を切り出し、エステラーゼ遺伝子の開始コドンＧＴ
ＧをＡＴＧに変換するために合成したＤＮＡ断片およ
び、制限酵素ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄＩＩＩで消化したｌ
ａｃプロモータを有する発現ベクターｐＵＣ１１８（宝
酒造株式会社製）とライゲーションを行った。この様に
して、ｌａｃプロモーターの下流にアルスロバクターＳ
Ｃ−６−９８−２８株由来のエステラーゼ遺伝子を有す
る大腸菌用発現プラスミドを作成した後、定法に従い大
腸菌ＪＭ１０５株に導入することにより組換え体微生物
を構築した。
【００５１】参考例２ 実施例８で使用したクロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−１
株由来のエステラーゼ遺伝子組換え体微生物は特開平７
−２１３２８０記載の方法に準じて作成した。即ち、ク
ロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
４００９）由来のエステラーゼ遺伝子に部位特異的変異
を導入した遺伝子を含むプラスミドｐＣＣ１６０Ａ１８
９Ｙ３６３ｔｅｒｍを作成し、大腸菌ＪＭ１０５株に導
入することにより組換え微生物を構築した。以下にプラ
スミドｐＣＣ１６０Ａ１８９Ｙ３６３ｔｅｒｍの構築方
法を示す。 プラスミドｐＣＣ１６０Ａの調製 まず、クロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−１由来の野生型
エステラーゼ遺伝子を含むプラスミドｐＣＣ１０１を特
開平７−２１３２８０記載の実施例１〜５記載の方法に
準じて作成した。同実施例７記載の方法に準じて、プラ
スミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮＡとし、
同実施例６記載の方法に準じて作成した特開平７−２１
３２８０記載の配列番号２７で示される変異プライマ−
ＭＹ−１（１００ｐｍｏｌ）および同配列番号１１で示
される変異プライマー１６０Ａ（１００ｐｍｏｌ）を用
いて、GeneAmp PCR Reagentキット（宝酒造株式会社
製）によりＤＮＡ断片を増幅した。得られたＰＣＲ産物
（２７０ｂｐＤＮＡ断片）をＳＵＰＲＥＣ−０２カラム
（宝酒造株式会社製）を使用して精製した。続いて、同
様にプラスミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮ
Ａとし、同配列番号２６で示される変異プライマーＲＶ
−Ｃ（５０ｐｍｏｌ）および先に精製した２７０ｂｐＤ
ＮＡ断片（５０ｐｍｏｌ）をプライマーとしてGeneAmp
PCRReagentキット（宝酒造株式会社製）によりＤＮＡ断
片を増幅した。増幅したＤＮＡ断片を制限酵素ＣｅｌＩ
ＩＩおよびＣｌａＩで消化し、サンプルを４％アガロー
スゲル（ＮｕＳｉｅｖｅ３：１Ａｇａｒｏｓｅ（宝酒造
株式会社製）で電気泳動後、約２４０ｂｐのＤＮＡ断片
を分離し、ジーンクリーンＤＮＡ精製キット（Ｂｉｏ１
０１、Ｉｎｃ製）を用いて精製した。一方、プラスミド
ｐＣＣ１０１（３μｇ）を制限酵素ＣｅｌＩＩＩおよび
ＣｌａＩで消化後、アルカリフォスファターゼ処理を行
った。ついでこのＤＮＡ断片（４.２ｋｂｐ）と先に調
製して得られた変異の導入された約２４０ｂｐのＤＮＡ
断片をＤＮＡライゲーションキット（宝酒造株式会社
製）を用いて連結し、通常の方法に従って大腸菌ＪＭ１
０９株に形質転換した。このようにして得られた形質転
換体から定法に従いプラスミドｐＣＣ１６０Ａを調製し
た後、ダイデオキシ法により変異箇所の塩基配列を決定
し、設計どおりの変異が導入されていることを確認し
た。 プラスミドｐＣＣ１８９Ｙの調製 ｐＣＣ１６０Ａの調製の場合の用いた変異プライマー１
６０Ａを同実施例６記載の方法に準じて作成した同配列
番号２４で示される変異プライマー１８９Ｙに変更し
て、その他はプラスミドｐＣＣ１６０Ａの調製の場合と
同様にして、プラスミドｐＣＣ１８９Ｙを調製した後、
ダイデオキシ法により変異箇所の塩基配列を決定し、設
計どおりの変異が導入されていることを確認した。 プラスミドｐＣＣ３６３ｔｅｒｍの調製 プラスミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮＡと
し、同配列番号３０で示される変異プライマーＭＹ−２
（１００ｐｍｏｌ）および同配列番号２８で示される変
異プライマーＡ３６３ｔｅｒｍ（１００ｐｍｏｌ）を用
いて、GeneAmpPCR Reagentキット（宝酒造株式会社製）
によりＤＮＡ断片を増幅した。得られたＰＣＲ産物（１
５０ｂｐ断片）をＳＵＰＲＥＣ−０２カラム（宝酒造株
式会社製）を使用して精製した。 続いて、同様にプラ
スミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮＡとし、
同配列番号２９で示される変異プライマーＲＶ−Ｄ（５
０ｐｍｏｌ）および先に精製した１５０ｂｐＤＮＡ断片
（５０ｐｍｏｌ）をプライマーとしてGeneAmp PCR Reag
entキット（宝酒造株式会社製）によりＤＮＡ断片を増
幅した。増幅したＤＮＡ断片を制限酵素ＢｓｔＰＩおよ
びＸｂａＩで消化し、サンプルを４％アガロースゲル
（ＮｕＳｉｅｖｅ３：１Ａｇａｒｏｓｅ（宝酒造社株式
会社製）で電気泳動し、約２８０ｂｐのＤＮＡ断片を分
離し、ジーンクリーンＤＮＡ精製キット（Ｂｉｏ１０
１、Ｉｎｃ製）を用いて精製した。一方、ｐＣＣ１０１
（３μｇ）をＢｓｔＰＩおよびＸｂａＩで消化し、アル
カリフォスファターゼ処理を行った。ついでこの４．２
ｋｂｐのＤＮＡ断片と先に調製して得られた変異の導入
された２８０ｂｐのＤＮＡ断片をＤＮＡライゲーション
キット（宝酒造株式会社製）を用いて連結し、通常の方
法に従って大腸菌ＪＭ１０９株に形質転換した。得られ
た形質転換体から定法に従ってプラスミドｐＣＣ３６３
ｔｅｒｍを調製した後、ダイデオキシ法により変異箇所
の塩基配列を決定し、設計どうりの変異が導入されてい
ることを確認した。 多重変異型エステラーゼ生産プラスミドの構築 で得られた変異体プラスミドｐＣＣ１６０Ａ（１０μ
ｇ）を制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＦｓｐＩで消化して得
た０. ６ｋｂｐのＤＮＡ断片、で得られた変異体プラ
スミドｐＣＣ１８９Ｙ（１０μｇ）をＦｓｐＩおよびＢ
ｓｔＰＩで消化して得た０.４ｋｂｐの断片およびで
得られたプラスミドｐＣＣ３６３ｔｅｒｍ（３μｇ）を
制限酵素ＢｓｔＰＩおよびＥｃｏＲＩで消化して得た
３. ４ｋｂｐのＤＮＡ断片の３種をＤＮＡライゲーショ
ンキット（宝酒造株式会社製）を用いて連結し、通常の
方法に従って大腸菌ＪＭ１０５株に形質転換し、多重変
異型エステラーゼ遺伝子を含有するプラスミドｐＣＣ１
６０Ａ１８９Ｙ３６３ｔｅｒｍを含有する形質転換体を
得た。
株由来のエステラーゼ遺伝子組換え体微生物は特開平７
−２１３２８０記載の方法に準じて作成した。即ち、ク
ロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
４００９）由来のエステラーゼ遺伝子に部位特異的変異
を導入した遺伝子を含むプラスミドｐＣＣ１６０Ａ１８
９Ｙ３６３ｔｅｒｍを作成し、大腸菌ＪＭ１０５株に導
入することにより組換え微生物を構築した。以下にプラ
スミドｐＣＣ１６０Ａ１８９Ｙ３６３ｔｅｒｍの構築方
法を示す。 プラスミドｐＣＣ１６０Ａの調製 まず、クロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−１由来の野生型
エステラーゼ遺伝子を含むプラスミドｐＣＣ１０１を特
開平７−２１３２８０記載の実施例１〜５記載の方法に
準じて作成した。同実施例７記載の方法に準じて、プラ
スミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮＡとし、
同実施例６記載の方法に準じて作成した特開平７−２１
３２８０記載の配列番号２７で示される変異プライマ−
ＭＹ−１（１００ｐｍｏｌ）および同配列番号１１で示
される変異プライマー１６０Ａ（１００ｐｍｏｌ）を用
いて、GeneAmp PCR Reagentキット（宝酒造株式会社
製）によりＤＮＡ断片を増幅した。得られたＰＣＲ産物
（２７０ｂｐＤＮＡ断片）をＳＵＰＲＥＣ−０２カラム
（宝酒造株式会社製）を使用して精製した。続いて、同
様にプラスミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮ
Ａとし、同配列番号２６で示される変異プライマーＲＶ
−Ｃ（５０ｐｍｏｌ）および先に精製した２７０ｂｐＤ
ＮＡ断片（５０ｐｍｏｌ）をプライマーとしてGeneAmp
PCRReagentキット（宝酒造株式会社製）によりＤＮＡ断
片を増幅した。増幅したＤＮＡ断片を制限酵素ＣｅｌＩ
ＩＩおよびＣｌａＩで消化し、サンプルを４％アガロー
スゲル（ＮｕＳｉｅｖｅ３：１Ａｇａｒｏｓｅ（宝酒造
株式会社製）で電気泳動後、約２４０ｂｐのＤＮＡ断片
を分離し、ジーンクリーンＤＮＡ精製キット（Ｂｉｏ１
０１、Ｉｎｃ製）を用いて精製した。一方、プラスミド
ｐＣＣ１０１（３μｇ）を制限酵素ＣｅｌＩＩＩおよび
ＣｌａＩで消化後、アルカリフォスファターゼ処理を行
った。ついでこのＤＮＡ断片（４.２ｋｂｐ）と先に調
製して得られた変異の導入された約２４０ｂｐのＤＮＡ
断片をＤＮＡライゲーションキット（宝酒造株式会社
製）を用いて連結し、通常の方法に従って大腸菌ＪＭ１
０９株に形質転換した。このようにして得られた形質転
換体から定法に従いプラスミドｐＣＣ１６０Ａを調製し
た後、ダイデオキシ法により変異箇所の塩基配列を決定
し、設計どおりの変異が導入されていることを確認し
た。 プラスミドｐＣＣ１８９Ｙの調製 ｐＣＣ１６０Ａの調製の場合の用いた変異プライマー１
６０Ａを同実施例６記載の方法に準じて作成した同配列
番号２４で示される変異プライマー１８９Ｙに変更し
て、その他はプラスミドｐＣＣ１６０Ａの調製の場合と
同様にして、プラスミドｐＣＣ１８９Ｙを調製した後、
ダイデオキシ法により変異箇所の塩基配列を決定し、設
計どおりの変異が導入されていることを確認した。 プラスミドｐＣＣ３６３ｔｅｒｍの調製 プラスミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮＡと
し、同配列番号３０で示される変異プライマーＭＹ−２
（１００ｐｍｏｌ）および同配列番号２８で示される変
異プライマーＡ３６３ｔｅｒｍ（１００ｐｍｏｌ）を用
いて、GeneAmpPCR Reagentキット（宝酒造株式会社製）
によりＤＮＡ断片を増幅した。得られたＰＣＲ産物（１
５０ｂｐ断片）をＳＵＰＲＥＣ−０２カラム（宝酒造株
式会社製）を使用して精製した。 続いて、同様にプラ
スミドｐＣＣ１０１（０．５μｇ）を鋳型ＤＮＡとし、
同配列番号２９で示される変異プライマーＲＶ−Ｄ（５
０ｐｍｏｌ）および先に精製した１５０ｂｐＤＮＡ断片
（５０ｐｍｏｌ）をプライマーとしてGeneAmp PCR Reag
entキット（宝酒造株式会社製）によりＤＮＡ断片を増
幅した。増幅したＤＮＡ断片を制限酵素ＢｓｔＰＩおよ
びＸｂａＩで消化し、サンプルを４％アガロースゲル
（ＮｕＳｉｅｖｅ３：１Ａｇａｒｏｓｅ（宝酒造社株式
会社製）で電気泳動し、約２８０ｂｐのＤＮＡ断片を分
離し、ジーンクリーンＤＮＡ精製キット（Ｂｉｏ１０
１、Ｉｎｃ製）を用いて精製した。一方、ｐＣＣ１０１
（３μｇ）をＢｓｔＰＩおよびＸｂａＩで消化し、アル
カリフォスファターゼ処理を行った。ついでこの４．２
ｋｂｐのＤＮＡ断片と先に調製して得られた変異の導入
された２８０ｂｐのＤＮＡ断片をＤＮＡライゲーション
キット（宝酒造株式会社製）を用いて連結し、通常の方
法に従って大腸菌ＪＭ１０９株に形質転換した。得られ
た形質転換体から定法に従ってプラスミドｐＣＣ３６３
ｔｅｒｍを調製した後、ダイデオキシ法により変異箇所
の塩基配列を決定し、設計どうりの変異が導入されてい
ることを確認した。 多重変異型エステラーゼ生産プラスミドの構築 で得られた変異体プラスミドｐＣＣ１６０Ａ（１０μ
ｇ）を制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＦｓｐＩで消化して得
た０. ６ｋｂｐのＤＮＡ断片、で得られた変異体プラ
スミドｐＣＣ１８９Ｙ（１０μｇ）をＦｓｐＩおよびＢ
ｓｔＰＩで消化して得た０.４ｋｂｐの断片およびで
得られたプラスミドｐＣＣ３６３ｔｅｒｍ（３μｇ）を
制限酵素ＢｓｔＰＩおよびＥｃｏＲＩで消化して得た
３. ４ｋｂｐのＤＮＡ断片の３種をＤＮＡライゲーショ
ンキット（宝酒造株式会社製）を用いて連結し、通常の
方法に従って大腸菌ＪＭ１０５株に形質転換し、多重変
異型エステラーゼ遺伝子を含有するプラスミドｐＣＣ１
６０Ａ１８９Ｙ３６３ｔｅｒｍを含有する形質転換体を
得た。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【書類名】 受託番号変更届
【提出日】 平成１１年８月９日
【旧寄託機関の名称】 通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所
学工業技術研究所
【旧受託番号】 微工研菌寄第Ｐ−１４００９
号
号
【新寄託機関の名称】 通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所
学工業技術研究所
【新受託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−６７０３
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 17/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 間 資雄 大阪市此花区春日出中３丁目１番98号 住 友化学工業株式会社内 (72)発明者 井上 歩 兵庫県宝塚市高司４丁目２番１号 住友化 学工業株式会社内 Ｆターム(参考） 4B064 AE01 AG01 CA02 CA19 CA21 CC24 CD12 CD27 DA16 4B065 AA01X AA01Y AA13X AA13Y BA02 CA31 CA60
Claims (12)
- 【請求項１】アルスロバクター（Arthrobacter）属また
はクロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属する
微生物由来の酵素を用いて、一般式（１） （式中、Ｒ1は炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲンも
しくはニトロで１個以上置換されていてもよい炭素数１
〜８のアルキル基、またはアリル基、または芳香環上に
炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、
ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されていてもよ
いアラルキル基、または芳香環上に炭素原子数１〜８の
アルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしく
はニトロで１個以上置換されていてもよいアリール基を
示し、Ｒ2は芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭素
数１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしくはニトロで１個
以上置換されていてもよいアラルキル基、または炭素数
１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしくはニトロで１個以
上置換されていてもよい炭素数１〜８のアルキルカルボ
ニル基、または芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン、フェニルもしくは
ニトロで１個以上置換されていてもよいアリールカルボ
ニル基、またはハロゲン、スルホニルもしくは（芳香環
上に炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキ
シ、ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されていて
もよいアリール基）で１個以上置換されていてもよい炭
素数１〜８のアルキルオキシカルボニル基、またはアリ
ルオキシカルボニル基、または芳香環上に炭素原子数１
〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン
原子もしくはニトロで１個以上置換されていてもよいア
リールオキシカルボニル基、または炭素数１〜８のアル
コキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換されていても
よい炭素数１〜８のアルキル基、またはアリル基、また
は芳香環上に炭素原子数１〜８のアルキル、炭素数１〜
８のアルコキシ、ハロゲン、ニトロで１個以上置換され
ていてもよいアリール基、または芳香環上に炭素原子数
１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ基、ハロ
ゲン原子もしくはニトロで１個以上置換されていてもよ
いアリールスルホニル基を示す。）で示されるＮ−置換
アゼチジン−２−カルボン酸エステル化合物を不斉加水
分解することを特徴とする一般式（２） （式中、Ｒ2は前記と同じ意味を示し、＊は不斉炭素原
子を示す。）で示される光学活性Ｎ−置換アゼチジン−
２−カルボン酸化合物の製造方法。 - 【請求項２】一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジ
ン−２−カルボン酸エステル化合物において、Ｒ2が芳
香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアル
コキシ、ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されて
いてもよいアラルキル基、または芳香環上に炭素数１〜
８のアルキル、炭素数１〜８のアルコキシ、ハロゲン原
子もしくはニトロで１個以上置換されていてもよいアリ
ール基で置換された炭素数１または２のアルキルオキシ
カルボニル基である請求項１に記載の製造方法。 - 【請求項３】一般式（１）で示されるＮ−置換アゼチジ
ン−２−カルボン酸エステル化合物において、Ｒ1が炭
素数１〜８のアルキル基である請求項２に記載の製造方
法。 - 【請求項４】酵素が、アルスロバクターＳＣ−６−９８
−２８株、アルスロバクター・エスピー（Arthrobacter
sp.）ＡＴＣＣ２１９０８株またはクロモバクテリウム
（Chromobacterium）ＳＣ−ＹＭ−１株由来である請求
項１、２または３に記載の製造方法。 - 【請求項５】酵素が、アルスロバクターＳＣ−６−９８
−２８株由来のエステラーゼである請求項１、２または
３に記載の製造方法。 - 【請求項６】酵素が、アルスロバクターＳＣ−６−９８
−２８株由来のエステラーゼをコードする遺伝子が導入
されることによって形質転換された組み換え微生物が産
生するエステラーゼである請求項１、２または３に記載
の製造方法。 - 【請求項７】酵素が、クロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−
１株由来のエステラーゼである請求項１、２または３に
記載の製造方法。 - 【請求項８】酵素が、クロモバクテリウムＳＣ−ＹＭ−
１株由来のエステラーゼをコードする遺伝子が導入され
ることによって形質転換された組み換え微生物が産生す
るエステラーゼである請求項１、２または３に記載の製
造方法。 - 【請求項９】有機溶媒の共存下に行うことを特徴とする
請求項１、２または３に記載の製造方法。 - 【請求項１０】請求項１〜９のいずれかに記載の製造方
法で得た一般式（２）で示される光学活性Ｎ−置換アゼ
チジン−２−カルボン酸化合物のＮ−置換基を脱離させ
ることを特徴とする式（３） （式中、＊は不斉炭素原子を示す。）で示される光学活
性アゼチジン−２−カルボン酸の製造方法。 - 【請求項１１】請求項１〜９のいずれかに記載の製造方
法で得たＲ2が芳香環上に炭素数１〜８のアルキル、炭
素数１〜８のアルコキシ、ハロゲンもしくはニトロで１
個以上置換されていてもよいアラルキル基、または芳香
環上に炭素数１〜８のアルキル、炭素数１〜８のアルコ
キシ、ハロゲンもしくはニトロで１個以上置換されてい
てもよいアリール基で置換された炭素数１または２のア
ルキルオキシカルボニル基である一般式（２）で示され
る光学活性Ｎ−置換アゼチジン−２−カルボン酸化合物
を金属触媒の存在下に還元剤と反応させることを特徴と
する式（３）で示される光学活性アゼチジン−２−カル
ボン酸の製造方法。 - 【請求項１２】還元剤が水素、ヒドラジンもしくはその
塩、または蟻酸もしくはその塩である請求項１１に記載
の光学活性アゼチジン−２−カルボン酸の製造方法。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
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