ITTO20070462A1 - Composizione cosmetica contenente un estratto di limnocitrus littoralis - Google Patents

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ITTO20070462A1
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skin
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cosmetic
composition
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Delphine Dupont
Cecile Lamy
Isabelle Renimel
Nancy Sauvan
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Lvmh Rech
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Description

DESCRIZIONE dell'invenzione industriale dal titolo: "Composizione cosmetica contenente un estratto di Limnocitrus littoralis"
DESCRIZIONE
La presente invenzione si riferisce al campo della cosmetica. Più particolarmente si riferisce a nuove composizioni cosmetiche contenenti un estratto di Limnocitrus littoralis (Miq.) Swingle, di seguito indicato con Limnocitrus littoralis, così come a nuovi utilizzi di questo estratto nel campo della cosmetica.
Limnocitrus littoralis è una pianta della famiglia delle rutacee ed ha per basionimo Paramignya littoralis Miq. Questa pianta è originaria dell'Asia del Sud-Est ed è secondo le nostre informazioni la sola specie catalogata ad oggi nel genere Limnocitrus. Il suo habitat è essenzialmente situato nelle zone calde e secche.
Si tratta di arbusti che si presentano sotto forma di cespugli che si trovano essenzialmente, ma non unicamente, in Vietnam dal quale d'altronde traggono origine gli arbusti utilizzati nel quadro della descrizione della presente invenzione.
Utilizzi tradizionali oppure religiosi di questa pianta sono menzionati nelle leggende e nella letteratura vietnamita. Ugualmente sono stati descritti utilizzi ed effetti terapeutici tradizionali, in particolare delle foglie di Limnocitrus littoralis, come prodotto espettorante, antitosse oppure per preparare bagni di vapore considerati come rimedi efficaci per l'essudazione ed il trattamento di raffreddori e febbri.
Si conoscono pure diversi utilizzi nella medicina tradizionale, sia delle radici come antipiretici, sia delle foglie come bechici oppure del pericarpo per curare le crisi di asma oppure la tosse.
Infine, diversi rimedi tradizionali, in particolare per l'uterite, per la costipazione e per la tosse propongono decotti contenenti, tra l'altro, parti di Limnocitrus littoralis , sia fresche, sia essiccate.
E' stata pure descritta l'utilizzazione di fo glie bruciate per i loro fumi odorosi.
La famiglia delle rutacee, della quale fa parte la Limnocitrus littoralis , comprende in particolare il genere Citrus, molto diffuso e molto noto, che comprende circa 165 specie.
È noto che un certo numero di specie di piante appartenenti al genere Citrus hanno proprietà antinfiammatorie. Tuttavia, questa caratteristica antinfiammatoria è tutt'altro che generale.
Gli inventori si sono quindi ugualmente interessati alle specie delle piante appartenenti al genere Citrus anche se il loro genere botanico era differente da quello della Limnocitrus littoralis .
Così, al contrario, certe specie di piante del genere Citrus presentano una caratteristica proinfiammatoria. Peraltro, come è stato evidenziato dai saggi realizzati dalla richiedente, altre specie di piante del genere Citrus sarebbero tossiche nel modello utilizzato a dosi in cui presentano una attività antinfiammatoria.
Gli inventori della presente invenzione hanno ora scoperto testando diverse specie di piante del genere Citrus che era possibile preparare, a partire dalla pianta Limnocitrus littoralis, estratti al tempo stesso non tossici alle dosi utilizzate e particolarmente attivi in cosmetica.
Più precisamente, gli inventori della presente invenzione, hanno potuto selezionare, durante prove sistematiche, estratti notevolmente adatti per lottare contro le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria, in particolare quelle associate alle pelli sensibili, con un effetto cutaneo lenitivo.
Per pelle sensibile si intende una pelle che risponde alle aggressioni esterne con gli stessi segni di una pelle detta normale ma in modo più rapido ed alle volte più violento, tuttavia senza che detta pelle presenti uno stato patologico.
Le manifestazioni cutanee non patologiche generalmente associate alle pelli sensibili sono ben note. Si traducono con sensazioni di disagio più o meno marcate a seconda delle persone a livello epidermico ed in particolare con sensazioni di calore oppure di bruciore, pizzicori, pruriti e/oppure spasmi o addirittura con l'apparizione di rossori. Questi disordini cutanei sono causati da fattori esterni quali emozioni, fattori ambientali (inquinamento, raggi UV, fumo, temperatura, ecc...), agenti chimici presenti in particolare nelle composizioni cosmetiche come i tensioattivi, i conservanti, i profumi oppure alcuni agenti cosmetici attivi
I meccanismi di azione che conducono a queste manifestazioni sono variamente noti ma hanno allo stesso tempo come punto in comune e come origine processi infiammatori. Questi porteranno ad una eccitazione, più o meno rilevante dei nervi sensitivi cutanei, conseguente alla liberazione di mediatori dell'infiammazione , come le specie reattive dell'ossigeno, le citochine (come 1'interleuchina 8) oppure le prostaglandine, in particolare le prostaglandine di tipo E2.
Peraltro, gli inventori hanno potuto constatare che questi stessi estratti risultavano efficaci in altre applicazioni cosmetiche, in particolare nel campo dell'invecchiamento cutaneo, per la loro capacità di stimolare la sintesi del collagene.
Quindi, secondo un primo aspetto, l'invenzione si riferisce ad una composizione cosmetica contenente un estratto della pianta Limnocitrus littoralis.
Secondo un secondo aspetto, l'invenzione si riferisce all'utilizzo di detto estratto come agente attivo in composizioni per conferire loro diverse proprietà cosmetiche che permettano di lottare contro le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria e di prevenire e/oppure lottare contro gli effetti dell'invecchiamento cutaneo .
Secondo un terzo aspetto, l'invenzione si riferisce ad un procedimento di trattamento cosmetico destinato alla cura della pelle, in particolare una cura destinata a lottare contro le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria oppure ad una cura destinata a prevenire e/oppure lottare contro gli effetti dell'invecchiamento della pelle, in particolare una cura antirughe.
Quindi, secondo una prima caratteristica essenziale, l'invenzione si riferisce ad una composizione cosmetica, caratterizzata dal fatto che contiene, come agente attivo, un estratto di Limnocitrus li ttoralis ottenuto per mezzo di un solvente di estrazione alcolico oppure idroalcolico, in un veicolo cosmeticamente accettabile compatibile con una applicazione topica.
Secondo una seconda caratteristica essenziale, l'invenzione si riferisce ad un utilizzo, in una composizione cosmetica oppure per la produzione di una composizione cosmetica, di un estratto di Limnocitrus littoralis dell'invenzione come agente attivo che conferisca a detta composizione cosmetica proprietà cosmetiche che permettano di lottare contro le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria quali quelle associate alle pelli sensibili, con un effetto lenitivo della cute.
Secondo questo primo uso, 1'invenzione si riferisce all'utilizzo di detta composizione cosmetica per lenire le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria come le sensazioni di calore o di bruciore, rossori, spasmi, pruriti e pizzicori.
Secondo un secondo uso, 1'invenzione si riferisce ad un utilizzo, in una composizione cosmetica oppure per la produzione di una composizione cosmetica, di un estratto di Limnocitrus littoralis secondo l'invenzione come agente stimolante la sintesi del collagene.
Secondo questa seconda utilizzazione, l'invenzione si riferisce all'utilizzo di detta composizione per prevenire e/oppure lottare contro gli effetti dell'invecchiamento intrinseco e/oppure foto-indotto della pelle.
Secondo un'altra caratteristica essenziale, l'invenzione si riferisce ad un procedimento di trattamento cosmetico in particolare destinato a lenire le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria e/oppure a prevenire e/oppure lottare contro gli effetti dell'invecchiamento intrinseco e/oppure foto-indotto, comprendente l'applicazione sulla pelle di una composizione cosmetica secondo l'invenzione.
Secondo quest'ultima caratteristica, l'invenzione si riferisce più particolarmente ad un procedimento di trattamento cosmetico destinato ad una cura antirughe.
Altre caratteristiche dell'invenzione appariranno dalla descrizione e degli esempi dettagliati seguenti .
Le composizioni cosmetiche dell'invenzione sono caratterizzate dalla presenza di un agente attivo costituito da un estratto di Limnocitrus littoralis .
Questo estratto viene ottenuto con un procedimento che comprende almeno una fase di estrazione per mezzo di un solvente di estrazione alcolico o idroalcolico.
Le prove realizzate dagli inventori della presente invenzione hanno dimostrato che è preferibile utilizzare le parti aeree della pianta per ottenere estratti utili secondo 1'invenzione.
Secondo una variante particolarmente vantaggiosa dell'invenzione, l'estratto è un estratto di foglie.
Gli alcoli utilizzati, sia puri sia in miscele idroalcoliche, sono vantaggiosamente dei monoalcoli C1-C5 oppure dei glicoli da C2-C5.
Come alcoli particolarmente preferiti per la preparazione degli estratti utili secondo l'invenzione, si citeranno etanolo, butilenglicole come anche le miscele di etanolo/acqua e butilenglicole/acqua.
Durante le prove realizzate dagli inventori della presente invenzione è risultato che la qualità degli estratti e, in particolare la stabilità delle loro proprietà intrinseche nel tempo, erano ampiamente migliorate quando il solvente di estrazione conteneva quantità relativamente basse di acqua o anche quando era anidro.
Quindi, secondo una variante vantaggiosa, il solvente di estrazione è 1'etanolo oppure una miscela di etanolo/acqua che comprende al massimo il 50% di acqua, preferibilmente al massimo il 4% di acqua.
Secondo un'altra variante particolarmente vantaggiosa dell'invenzione, l'estratto è ottenuto utilizzando il butilenglicole puro come solvente di estrazione .
Quindi, gli estratti di Limnocitrus littoralis dell'invenzione sono vantaggiosamente ottenuti utilizzando un solvente anidro e, più particolarmente il butilenglicole.
Peraltro, secondo un modo di realizzazione particolarmente vantaggioso, anche quando l'estratto non è ottenuto direttamente da una estrazione con butilenglicole, risulta interessante introdurlo nella composizione dell'invenzione sotto forma di una soluzione nel butilenglicole, in particolare sotto forma di una soluzione contenente dallo 0,05% al 5% in peso, preferibilmente dallo 0,1% all'1% in peso di estratto anidro rispetto al peso di butilenglicole.
Secondo altre varianti ancora, l'estratto verrà sottoposto prima della sua introduzione in una composizione e, quando è ancora in soluzione nel solvente di estrazione utilizzato secondo l'invenzione, ad una fase di separazione solido-liquido, per eliminare la parte solida.
L'estratto potrà ugualmente essere sottoposto a diverse fasi dì decolorazione, in particolare ad una fase di decolorazione su carbone attivo.
La concentrazione in estratto, espressa in percentuale in peso di estratto secco, delle composizioni dell'invenzione potrà variare in proporzioni ampie.
Tuttavia, questa concentrazione sarà vantaggiosamente compresa tra il IO<-4>e 5% in peso, preferibilmente tra lo 0,01 ed il 2% in peso di estratto secco rispetto al peso totale della composizione, l'estratto essendo preferibilmente un estratto di foglie di Limnocitrus lìttoralis.
Le composizioni dell'invenzione potranno contenere almeno un agente conservante, scelto tra gli agenti conservanti classicamente utilizzati nel campo della cosmetica.
Le composizioni dell'invenzione potranno ugualmente comprendere almeno un agente anti-ossidante.
Come agente anti-ossidante particolarmente preferito secondo l'invenzione, si citerà 1'alfatocoferolo, l'acido ascorbico così come loro derivati cosmeticamente accettabili ed in particolare loro esteri.
Le composizioni dell'invenzione possono venire formulate in modo molto variabile e possono presentarsi sotto forma del tutto compatibile con una applicazione topica sulla pelle.
Le composizioni si possono presentare in particolare sotto forma di crema, gel, lozione, stick, ombretto oppure fondotinta.
Le composizioni preferite dell'invenzione comprenderanno quantità particolarmente ridotte di acqua o saranno sotto forma anidra.
Come esempio di tali composizioni, si citeranno i fondotinta, gli ombretti Oppure gli stick.
Come precedentemente esposto, l'interesse delle composizioni è essenzialmente legato alle proprietà lenitive delle manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria come anche ad una attività di lotta oppure di prevenzione degli effetti dell'invecchiamento intrinseco e/oppure foto-indotto della pelle, in particolare le rughe.
È stato evidenziato dagli inventori della presente invenzione, che le proprietà lenitive erano legate essenzialmente ad una attività inibitrice delle prostaglandine di tipo E2(PGE2) e che l'attività anti-invecchiamento era legata ad una attività di stimolazione della sintesi del collagene.
Gli estratti come definiti in precedenza potranno, per le loro proprietà, venire utilizzati in composizioni cosmetiche oppure per la.produzione di queste composizioni, in quanto agente lenitivo cutaneo .
Le composizioni così ottenute potranno venire utilizzate per lenire le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria, quali le sensazioni di calore o di bruciore, pizzicori, rossori, spasmi, pruriti che hanno come origine fenomeni, di tipo infiammatorio della pelle.
Per la loro seconda tipologia di attività sulla sintesi del collagene, gli estratti dell'invenzione potranno venire utilizzati in composizioni cosmetiche oppure per la produzione di tali composizioni in quanto agente stimolante della sintesi del collagene.
Tali composizioni potranno venire utilizzate in tutti i casi in cui si cerca di prevenire e/oppure di lottare contro gli effetti dell'invecchiamento intrinseco e/oppure foto-indotto della pelle, in particolare le rughe.
Si riconosce ugualmente a detti fenomeni di tipo infiammatorio summenzionati un ruolo nell'accelerazione dell'invecchiamento cutaneo come viene descritto da S- Pillai, C. Oresajo e J. Hayward nell'articolo tratto dall'International Journal of Cosmetic Science, 2005, 27, p 17-34.
Quindi, gli estratti secondo l'invenzione, per la loro doppia attività contro le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria da una parte e di stimolazione della sintesi del collagene dall'altra, sono particolarmente adatti nel campo dell'invecchiamento cutaneo.
Come precedentemente esposto, l'invenzione si riferisce ugualmente ad un procedimento di trattamento cosmetico destinato in particolare a lenire i disordini cutanei di origine infiammatoria e/oppure prevenire e/oppure lottare contro gli effetti dell'invecchiamento intrinseco e/oppure foto-indotto, caratterizzato dal fatto che comprende l'applicazione sulla pelle di una composizione cosmetica come definita in precedenza.
ESEMPI
I. PREPARAZIONE DI ESTRATTI UTILI SECONDO
L'INVENZIONE
a. Preparazione di un estratto mediante estrazione idro-etanolica
A 10 g di foglie tritate vengono aggiunti 150 mi di una miscela di etanolo/acqua nelle proporzioni 90/10 volume/volume (v/v) in un pallone da 250 mi. La miscela viene portata al ricadere per 30 minuti. Dopo raffreddamento, l'estratto viene filtrato su buchner con 2 filtri GF/F (Whatmann), quindi la torta di filtrazione viene lavata con 50 mi di miscela di etanolo/acqua (90/10 v/v). Quindi, il filtrato viene evaporato a secchezza mediante un evaporatore rotante.
A partire dall'estratto secco così ottenuto, si preparano 3 soluzioni:
- una soluzione all'1% peso/volume (p/v) in una miscela di etanolo/acqua (50/50, v/v), indicata di seguito come Estratto A,
- una soluzione all'1% (p/v) in 1,3-butilenglicole indicata di seguito come Estratto B.
- una soluzione all'1% (p/v) in etanolo/acqua (50/50, v/v) con 30 μΐ/ml di una miscela contenente antiossidanti indicata di seguito come Estratto C.
Questa miscela di antiossidanti è composta da 0,20 g di alfa-tocoferolo 0,05 g di palmitoil-lecitina 0,01 g di ascorbilpalmitato, il tutto in 6 mi di una miscela di acqua/etanolo (16/84 v/v).
b. Preparazione di un estratto mediante estrazione con butilenglicole
A 10 g di foglie tritate vengono aggiunti 150 mi di 1,3-butilenglicole in un pallone da 250 mi. La miscela viene agitata per un'ora a 50°C. Dopo raffreddamento, l'estratto viene filtrato su bii~ chner con un filtro da 0,45 μιη (Millipore). La torta .di filtrazione viene lavata con 50 mi di 1,3-butilenglicole . L'estratto secco della soluzione è circa lo 0,4% in peso rispetto al peso totale della soluzione .
L'estratto secco così ottenuto viene indicato di seguito come Estratto D.
c. Preparazione di un estratto decolorato
La soluzione in butilenglicoìe ottenuta in b) viene decolorata su carbone attivo (CxV) (fornitore: CECA) procedendo secondo il procedimento descritto di seguito.
Una prima fase viene realizzata a partire da 50,07 mi della..soluzione.precedente.con. 10_.mg. dicarbone attivo (ossia circa il 5% in peso rispetto al peso di sostanza secca). Il tutto viene agitato per 2 ore a temperatura ambiente. La soluzione viene filtrata su filtro GF/F (Whatmann).
A questa soluzione vengono aggiunti di nuovo 10 mg di carbone attivo. Il tutto viene agitato per 1 ora a temperatura ambiente. La soluzione viene filtrata su filtro GF/F (Whatmann).
A questa soluzione vengono aggiunti di nuovo 20 mg di carbone attivo. Il tutto viene agitato per 1 ora a temperatura ambiente. La soluzione viene filtrata su filtro GF/F (Whatmann) quindi evaporata a secchezza.
L'estratto secco di questa soluzione così ottenuto è dello 0,28% in peso rispetto al peso totale della soluzione. Questo viene indicato in seguito come Estratto E.
II. EVIDENZIAZIONE DELL'ATTIVITÀ' ANTINFIAMMA¬
TORIA
1 . Principio del test
Il test viene realizzato su cheratinociti umani e si propone di determinare l'inibizione della liberazione della prostaglandina di tipo E2in presenza di estratti secondo l'invenzione.
2. Protocollo del test di misurazione dell'attività antinfiammatoria
a. Preparazione del testimone positivo e del campione da testare.
Il testimone positivo utilizzato per inibire la liberazione della PGE2è 1'indometacina (Sigma rif: I 7378). Una soluzione madre 3 x IO<-3>molare è stata realizzata in DMSO. L'indometacina è stata introdotta nel mezzo di coltura allo 0,1 % v/v ossia alla concentrazione finale di prodotto attivo di 3 x 10<~6>M. Parallelamente è stato preparato un testimone eccipiente (DMSO) allo 0,1% finale v/v. Ciascun estratto di Limnocitrus littoralis da testare viene disciolto in DMSO alla concentrazione del 5% v/v, quindi diluito alla concentrazione di 3,125 mg/ml.
Ciascun estratto di Limnocitrus littoralis da testare viene in seguito introdotto in un mezzo di coltura allo 0,1 % v/v ossia ad una concentrazione finale di prodotto attivo di 3,125 pg/ml. Parallelamente è stato preparato, un testimone eccipiente (DMSO) allo 0,1% finale v/v.
Precedentemente è stato realizzato un test di vitalità cellulare con il metodo XTT (test realizzato dopo 24 ore di trattamento) per verificare l'a■>ssenza di citotossicità sui cheratinociti alla dose di Limnocitrus littoralis studiata.
b. Trattamento delle cellule
I cheratinociti (tipo HaCaT) vengono messi in coltura in un mezzo KSFM complementato (Gibco rif: 17005-034 37000-015). I cheratinociti vengono inseminati in micropiastre a 96 pozzetti a 10.000 cellule per pozzetto. Questo primo giorno di coltura viene considerato come J0. Dopo 24 ore (Jl) di incubazione, il mezzo viene sostituito con un mezzo KSFMc contenente sia un estratto di Limnocitrus littoralis, come descritto al punto I, sia 1'indometacina sia il solvente testimone (DMSO).
Dopo 48 ore {J3) ossia dopo 24 ore di trattamento il mezzo di coltura viene recuperato quindi congelato a -20°C, le cellule vengono lavate una volta con PBS e sono oggetto di un dosaggio di proteina con il metodo BCA.
Il mezzo di coltura dopo scongelamento viene dosato secondo il protocollo del kit EIA (Enzyme Immuno Assay) avente il.riferimento 514010 e commercializzato dalla società Cayman.
Una gamma di taratura secondo lo stesso protocollo viene preparata contemporaneamente {gamma da 0 a 1 ng/ml).
c. Risultati
La tabella I seguente raggruppa i risultati espressi in percentuale di inibizione delle prostaglandine di tipo E2in presenza degli estratti A, B, C, D, ed E, utilizzati a 1 mg/mi e 0,1 mg/mi in DMSO.
TABELLA I
Si osserva che gli estratti A, B, C, D, ed E presentano tutti una attività di inibizione delle PEG-2 e che ad una concentrazione più alta, ma non tossica per le cellule, l'attività di inibizione delle PEG-2 diventa pure molto significativa.
III. EVIDENZIAZIONE DELL'INTERESSE DI LIMNOCI-
TRUS LITTORALIS RISPETTO AD ALTRE PIANTE APPARTE-NENTI AL GENERE CITRUS
I saggi riportati di seguito illustrano l'interesse di Limnocìtrus littoralis rispetto ad altri citrus in termini di attività antinfiammatoria e di tossicità.
Negli studi realizzati in questa parte, si è utilizzato per la determinazione dell'attività antinfiammatoria, il test descritto nella parte II precedente.
Lo studio si è concentrato sulle cinque seguenti specie del genere Citrus:
I : Citrus maxima (Burm, Ex Rumph.) Merr.
II ; Citrus aurentìfolia (Chrìstm.) swingle
III : Citrus nobilis (Lour.)
IV : Citrus hystrix (DC.)
V : Citrus netìcufata (Bianco.)
Gli inventori della presente invenzione hanno cercato di confrontare le capacità di inibizione delle PGE2tra l'estratto A di Limnocitrus littoralis ed estratti idroalcolici di diversi citrus ottenuti alle stesse condizioni di estrazione descritte per l'estratto A e testati a concentrazioni identiche.
Peraltro, si è verificata la tossicità degli estratti da I a V in confronto con quella dell'estratto A di Limnocitrus littoralis ottenuta alle stesse condizioni.
1. Determinazione del limite di citotossicità Per la determinazione del limite di citotossicità, si è considerato, come limite accettabile della non-tossicità, il limite corrispondente ad una vitalità delle cellule del 90%.
I risultati sono riportati nella tabella II seguente:
TABELLA II
I campioni IV e V sono nelle condizioni sperimentali utilizzate, considerate come citotossiche.
2. Determinazione della liberazione di PGE2Tutti gli estratti sono testati a 3,125 pg/ml alle condizioni descritte al punto II b} utilizzando per il dosaggio<'>un kit EIA (Rif: 514010) commercializzato dalla società Cayman. Gli estratti ottenuti a partire dalle specie del genere citrus IV e V presentano un valore costante di citotossicità a partire da questa dose.
I valori presentati nella tabella seguente sono percentuali di liberazione delle PGE2ottenute mediante comparazione tra l'attività di liberazione di PGE2di un campione dato e quella di un testimone senza effettore, la cui attività di liberazione di PGE2viene arbitrariamente stabilita al 100% poiché corrisponde all'attività basale dì liberazione di PGE2delle cellule.
TABELLA III
Questo primo risultato realizzato soltanto su 3 punti (dai quali risultano scarti-tipo abbastanza rilevanti) indica che con il modello utilizzato e nelle condizioni operative, solo il Citrus maxima (I) tra tutte le altre specie del genere citrus testate presenta una liberazione negativa di PGE2di -32,76 rispetto al campione, ciò che traduce in pratica una attività di inibizione delle PGE2. Si osserva ugualmente che questa attività è nettamente più. debole di quella di Limnocitrus littoralis con -52, ossia una capacità di inibizione delle PGE2ben superiore .
IV. EVIDENZIAZIONE DELL'ATTIVITÀ' "ANTI-
INVECCHIAMENTO"
1. Principio & scopo del test
I radicali liberi sono implicati nell'accelerazione dell'invecchiamento cronologico della pelle per la loro azione diretta ed indiretta attraverso la loro attività pro-infiammatoria. Si è quindi scelto un modello di stess ossidativo per irraggiamento UVA e UVB che permette di simulare un invec chiamento cronologico accelerato (Rittié e coll. UV-light -induced cascades and skin aging. Ageing Research Review 2002, 2 : 705-720)
Si è valutato l'effetto degli estratti di Limnocitrus littoralis secondo l'invenzione sulla sintesi di collagene.
2 . Modello sperimentale di pelle umana mantenuta in sopravvivenza e sottoposta ad uno stress ossidativo
Frammenti di pelle sono stati ottenuti da donne dopo chirurgia plastica (8 donatrici differenti) . I frammenti sono stati posti in inserti a loro volta sospesi al di sopra di pozzetti di·coltura. Mezzo di coltura è stato aggiunto nel fondo del pozzetto, un passaggio che si effettua mediante diffusione lenta tra i due compartimenti attraverso una membrana porosa {12 μιη). Questo mezzo di coltura dei pozzetti è stato rinnovato ogni 3 giorni.
Un modello sperimentale di stress ossidativo è stato realizzato da una sequenza (in J0) di irradiazione di UV A (8 J/cm<2>) e di UV B (16 J/cm<2>} per provocare la generazione di radicali liberi ossigenati. Quindi un estratto di Limnocitrus littoralis secondo l'invenzione da testare viene applicato alla superficie della pelle una volta al giorno.
Il protocollo comprende quindi le seguenti condizioni :
- pelle testimone (senza stress ossidativo e non trattata)
- pelle stress ossidativo (pelle di controllo)
- pelle stress ossidativo estratto di Limnoci trus littoralis secondo l'invenzione da testare .
Le colture di pelle sono state in seguito interrotte a J7 per le diverse analisi.
3. Analisi dell'effetto di un estratto di Limnocitrus littoralis sulla sintesi di collagene Si valuta a livello del derma mediante dosaggio biochimico del collagene l'effetto di un estratto di Limnocitrus littoralis sulla stimolazione del metabolismo dei fibroblasti della pelle a livello della sintesi di collagene.
I frammenti di pelle vengono digeriti enzimaticamente per una notte a 4°C in una soluzione 0,5 M di acido acetico contenente pepsina. Questo metodo permette di recuperare il collagene appena sintetizzato. Dopo triturazione meccanica, per esempio mediante un mortaio, la quantità di collagene (pg/ml) viene valutata con un metodo di dosaggio spettro-colorimetrico a 540 nm: il collagene solubile in acido viene rivelato dopo fissaggio specifico del colorante rosso sirius (Sircol Collagen Assay, Interchim.).
Per confrontare i diversi risultati, la quantità di collagene viene rapportata alla quantità di proteine totali del campione. Il dosaggio della concentrazione di proteine viene realizzato spettrofotometricamente a 562 nm (saggio BCA, Pierce).
I risultati sono espressi in pg di collagene/mg di proteine.
4. Analisi statistiche
E' stato eseguito uno studio comparativo dei risultati tra le pelli trattate con un estratto di Limnocitrus littoralis e le pelli non trattate ma che hanno subito uno stress ossidativo da parte dei raggi CJV, concentrato su:
- pelle testimone
- pelle sperimentalmente invecchiata mediante raggi UV A e B (pelle di controllo)
- pelle raggi UV A / B estratto di Lìmnocitrus littoralis secondo l'invenzione.
E' stata calcolata una media a partire dai risultati ottenuti sulle 8 pelli.
L'analisi statistica è stata effettuata con il test di Student detto dello scarto ridotto o test dei campioni accoppiati, con probabilità del 5%.
5. Risultati del dosaggio biochimico del collagene
I risultati presentati nella tabella IV sono stati ottenuti con l'estratto D.
TABELLA IV
Sintesi del collagene ^g/mg di proteine totali ) :
* : differenza statisticamente significativa rispetto alla pelle testimone (test accoppiato di Student, p < 0,05)
# : differenza statisticamente significativa rispetto alla pelle di controllo UV .{test accoppiato di Student, p < 0,05)
Si osserva da una parte una diminuzione statisticamente significativa della sintesi di collagene con un tasso di 87,3 μg/mg a livello della pelle :sottoposta a stress ossidativo rispetto alla pelle testimone il cui tasso è di 114,5 μς/mg (p = 0,02}.
Si osserva d'altra parte che il trattamento con l'estratto D di Limnocitrus littoralis ha permesso di ottenere una stimolazione statisticamente significativa della sintesi di collagene con un tasso di 128,4 μg/mg contro 87,3 per la pelle di controllo (p = 0,04).
6. Conclusione
A partire da un modello di pelle umana mantenuta in vita e sottoposta ad uno stress ossidativo che simula un invecchiamento cutaneo accelerato, si è evidenziata una stimolazione statisticamente significativa della sintesi di collagene, dimostrando quindi una attività anti-invecchiamento di un estratto di Limnocitrus littoralis secondo l'invenzione.
V. ESEMPI DI FORMULAZIONE SECONDO L'INVENZIONE Si preparano le composizioni cosmetiche per applicazione topica, descritte in seguito, a partire dalle seguenti composizioni centesimali in peso, in modo tradizionale.
Gel
Acqua deionizzata 73,5 % Alcol 96,2% voi 21 Polimero di AMPS (Sepigei 305} 3 Conservante 0,3 Concentrato di profumo 0,1 Estratto D di Limnocitrus littoralis 2 Ialuronato di sodio (alto peso molecolare) 0,1 Emulsione per il corpo
Palmitato di ottile 7,0 % Trigliceridi caprilato/caprato di glicerolo 3,0 Ottanoato di ottile 2,0 Feniltrimeticone 2,0 Glicerina 2,0 Acido stearico 1,0 Sorbitanstearato 1,0 Alcol cetilico 0,5 Alcol stearilico 0,5 Estratto E di Limnocitrus littoralis 1 Conservanti, profumo, coloranti, neutralizzanti 0,1 Acqua q.b.
Lozione
Butilenglicole 3 % EDTA 0,1 Solubilizzante 1 Concentrato di profumo 0,1 Alcol 5,2 Estratto A di Limnoci trus li t toralis 0,5 4-benzofenone 0,13 Conservanti, profumo, coloranti, neutralizzante 0,1 Acqua q.b.
Fondotinta
Poligliceril-4-isostearato/co-poliolo di cetildimet icone/esiliaurato
(commercializzato per esempio con la denominazione Abil WE 09) 5,1 % Cìclopentasiìossano e cicloesasilossano 5,0 (per esempio: Fluid DC345 di Dow Corning) Cetildimeticone (per esempio Abil wax 9840) 1,0 Trigliceridi caprilico/caprico 2,2 Stearato di ottile 1,4 Olio minerale 3,5 Olio di ricino idrogenato 1,2 Cera d'api 0,8 Polimetacrìlato di metile 1,1 Ossidi di ferro 0,5 Biossido di titanio 5,2 Acqua 67,3 NaCl 0,6 Estratto D di Limnoci trus li ttoralis 2 Concentrato di profumo 0,1 Metossicinnamato di ottile 3 Fondotinta anidro
Mica 46,0 % Biossido di titanio 22,4 Talco 11,0 Estratto D di Limnocitrus littoralìs 1,0 Silice anidra 5,0 Nylon-12 4,0 Metossicinnamato<■>di ottile 2,0 3-benzofenone 2,0 Acido stearico 2,0 Stearato di magnesio 1,5 Coloranti e pigmenti (ossidi di ferro) 2,5 Profumi 0,3 Conservanti 0,3 Gel lenitivo dopo esposizione solare
Glicerina 5,0 % Trigliceridi caprilico/caprico/succinico 5,0 Metossicinnamato di ottile 1,0 Co-polioli di dimeticone 0,5 Polimero unito acrilati/C10-C30
alchile acrilato 0,5 Estratto B di Limnocitrus li ttoralìs 3 N-acetilcisteina 0,2 Conservanti, profumo, coloranti 0,1 Acqua q.b.
Fluido protettore solare
Pentaciclometicone 49.0 % Biossido di titanio 15.0 Metossicinnamato di ottile 7.5 Glicerina 5.0 Feniltrimeticone 5.0 Co-polioli di dimeticone 3.0 Poiimetimetacrilato 2.5 Estratto C di Lìmnocitrus littoralìs 5 Conservanti, profumo, coloranti,
neutralizzante 0,1 Acqua q.b.
Crema anti-rughe
Glicerilstearato PEG-100 stearato 6.0 % Poliisobutene idrogenato 3,0 Squalano 3,0 Trigliceridi caprilato/caprato di glicerolo 3.0 Glicerina 2.0 Metossicinnamato di ottile 2,0 Ottanoato di cetostearile 1.5 Cera d'api 1,5 Alcol cetilico 1,0 Alcol stearilico 1,0 Dimeticone 1,0 Gomma xanthan 0,2 Estratto E di Limnocitrus littoralis 2 Conservanti, profumo, coloranti, 0,2 Acqua q.b.

Claims (20)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Composizione cosmetica, caratterizzata dal fatto che contiene, come agente attivo, un estratto di Limnocitrus littoralis ottenuto per mezzo di un solvente di estrazione alcolico oppure idroalcolico, in un veicolo cosmeticamente accettabile compatibile con una applicazione topica.
  2. 2. Composizione secondo la rivendicazione 1, caratterizzata dal fatto che detto estratto è ottenuto a partire da una parte aerea di Limnocitrus littoralis .
  3. 3. Composizione secondo la rivendicazione 2, caratterizzata dal fatto che detto estratto è ottenuto da foglie di Limnoci trus li ttoralis.
  4. 4 . Composizione secondo una delle rivendicazioni 1 a 3, caratterizzata dal fatto che detto solvente di estrazione è scelto nel gruppo costituito da monoalcoli C1-C5 e da glicoli da C2-C5.
  5. 5. Composizione secondo una delle rivendicazioni 1 a 4, caratterizzata dal fatto che detto solvente di estrazione è scelto nel gruppo costituito da etanolo, butilenglicole e miscele di etanolo/acqua e butileneglicole/acqua.
  6. 6. Composizione secondo la rivendicazione 5, caratterizzata dal fatto che detto solvente di e strazione è etanolo oppure una miscela di etanolo/acqua comprendente al massimo il 50% di acqua, preferibilmente al massimo il 4% di acqua.
  7. 7. Composizione secondo una delle rivendicazioni 1 a 5, caratterizzata dal fatto che detto solvente di estrazione è butilenglicole.
  8. 8. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 7, caratterizzata dal fatto che detto estratto in soluzione in detto solvente di estrazione è stato sottoposto ad una fase di separazione solido-liquido, per eliminare la parte solida.
  9. 9. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 8, caratterizzata dal fatto che detto estratto è stato sottoposto ad una fase di decolorazione, in particolare una fase di decolorazione su carbone attivo.
  10. 10. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 9, caratterizzata dal fatto che contiene dal 10<”4>% al 5%, preferibilmente dallo 0,01% al 2%, espresso in peso di estratto secco rispetto al peso totale della composizione, di un estratto di Limnocitrus littoralis, in particolare un estratto di foglie.
  11. 11. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 10, caratterizzata dal fatto che contiene inoltre almeno un anti-ossidante, come alfa-tocoferolo, acido ascorbico e loro derivati cosmeticamente accettabili, in particolare loro esteri .
  12. 12. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 11, caratterizzata dal fatto che si presenta sotto forma di crema, gel, lozione, stick, ombretto oppure fondotinta.
  13. 13. Composizione secondo una delle rivendicazioni 1 a 11, caratterizzata dal fatto che è sotto forma anidra e dal fatto che si tratta, in particolare, di un fondotinta, di un ombretto, di uno stick.
  14. 14. Composizione secondo una delle rivendicazioni 1 a 13, caratterizzata dal fatto che detto estratto viene introdotto sotto forma di una soluzione nel butilenglicole, in particolare sotto forma di una soluzione contenente dallo 0,05 al 5% in peso, meglio dallo 0,1 all'1% in peso di detto estratto, espresso in peso anidro rispetto al peso di butilenglicole.
  15. 15. Uso, in una composizione cosmetica oppure per la produzione di una composizione cosmetica, di un estratto come definito in una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 10, in quantità di agente attivo capace di conferire a detta composizione cosmetica proprietà cosmetiche che permettano di lottare contro le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria come quelle associate alle pelli sensibili, mediante un effetto lenitivo cutaneo .
  16. 16. Uso secondo la rivendicazione 15, caratterizzata dal fatto che detta composizione cosmetica è destinata a lenire le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria come le sensazioni di calore oppure di bruciore, rossori, spasmi, pruriti e pizzicori.
  17. 17. Uso, in una composizione cosmetica oppure per la produzione di una composizione cosmetica, di un estratto come definito in una delle rivendicazioni 1 a 10, come agente stimolante la sintesi del collagene.
  18. 18. Uso, secondo la rivendicazione 17, caratterizzato dal fatto che detta composizione è destinata a prevenire e/oppure lottare contro gli effetti dell'invecchiamento biologico e/oppure fotoindotto della pelle.
  19. 19. Procedimento di trattamento cosmetico in particolare destinato a lenire le manifestazioni cutanee non patologiche di origine infiammatoria e/oppure prevenire e/oppure lottare contro gli effetti dell'invecchiamento biologico e/oppure fotoindotto, caratterizzato dal fatto che comprende l'applicazione sulla pelle di una composizione cosmetica come definita in una delle rivendicazioni 1 a 14.
  20. 20. Procedimento di trattamento cosmetico secondo la rivendicazione 19, caratterizzato dal fatto che è destinato ad una cura anti-rughe.
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