HU228078B1 - Method for determining microbial contamination - Google Patents
Method for determining microbial contamination Download PDFInfo
- Publication number
- HU228078B1 HU228078B1 HU0105360A HUP0105360A HU228078B1 HU 228078 B1 HU228078 B1 HU 228078B1 HU 0105360 A HU0105360 A HU 0105360A HU P0105360 A HUP0105360 A HU P0105360A HU 228078 B1 HU228078 B1 HU 228078B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- microorganisms
- medium
- sample
- process according
- eredeti
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 64
- 238000011109 contamination Methods 0.000 title description 18
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 73
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 62
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 51
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims description 25
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 22
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 22
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 21
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 20
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 19
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 19
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 16
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 13
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 11
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 8
- 239000011368 organic material Substances 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 claims description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 4
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 claims 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 74
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 71
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 34
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 26
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 20
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 16
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 16
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 16
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 11
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 239000004579 marble Substances 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 description 6
- NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M sodium polyacrylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C=C NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 5
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 5
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 4
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 3
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 2
- 241000124015 Salix viminalis Species 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000010459 dolomite Substances 0.000 description 2
- 229910000514 dolomite Inorganic materials 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N Calcium oxide Chemical compound [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- 102000011045 Chloride Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010062745 Chloride Channels Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229920000877 Melamine resin Polymers 0.000 description 1
- 240000008881 Oenanthe javanica Species 0.000 description 1
- 229920001131 Pulp (paper) Polymers 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 239000002174 Styrene-butadiene Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710119641 Trypsin-6 Proteins 0.000 description 1
- 229920001807 Urea-formaldehyde Polymers 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- MTAZNLWOLGHBHU-UHFFFAOYSA-N butadiene-styrene rubber Chemical compound C=CC=C.C=CC1=CC=CC=C1 MTAZNLWOLGHBHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000013210 evaluation model Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 238000005555 metalworking Methods 0.000 description 1
- 238000012543 microbiological analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012860 organic pigment Substances 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- ODGAOXROABLFNM-UHFFFAOYSA-N polynoxylin Chemical compound O=C.NC(N)=O ODGAOXROABLFNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005553 polystyrene-acrylate Polymers 0.000 description 1
- BITYAPCSNKJESK-UHFFFAOYSA-N potassiosodium Chemical compound [Na].[K] BITYAPCSNKJESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 230000035943 smell Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011115 styrene butadiene Substances 0.000 description 1
- 229920003048 styrene butadiene rubber Polymers 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- LLZRNZOLAXHGLL-UHFFFAOYSA-J titanic acid Chemical compound O[Ti](O)(O)O LLZRNZOLAXHGLL-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012463 white pigment Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/06—Quantitative determination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Eljárás mikrobiológiai szennyeződések meghatározására
A találmány ásványi anyagokat és/vagy pigmenteket és/vagy töltőanyagokat és/vagy rostanyagokat - adott esetben ereket kolloid formában lévő polimerekkel kombinációban - tartalmazó vizes szuszpenziók, emulziók vagy diszperziók mikrobiológiai szennyeződéseinek mennyiségi és/vagy minőségi meghatározására vonatkozik.
vizes szuszpenzlók csiraszennyeződésénsk meghatározása és higiéniai ellenőrzése a hagyományos módszerekkel lényegében a kimutatandó mikroorganizmusok szaporodóképességén alapod.. Ezen eljárások kivitelezése természetükből adódóan 24. órától több napig terjedő időtartamot igényel. Ezek az: időtartamok túlságosan hosszúak sok kérdés megválaszolásához, és az eredményeket tál későn kapjuk ahhoz, hogy a termelési folyamatokba azokat irányítva avatkozzunk be. Különösen a szállítást megelőző ellenőrzések igényelnek mindegyre olyan eljárásokat, amelyekre rövid meghatározási intervallumok jellemzők.
Ennélfogva áz aerob mezofíi mikrobák szokásos mikrobiológiai analízise, úgymint a Fiaté Count vagy Easicuit eljárások azért probiamatikosak, mert hosszú, 41 órán át is tartó inkubációs időt tesznek szükségessé. Ezekkel az eljárásokkal ne® lehet ha~ marabb értékelni, és igy a csiraszámot meghatározni, mint két nap eltelte után. 'Tekintetbe kell vennünk továbbá számos más hatást is, úgymint a tápközeget, sz oxigén parciális nyomását (aerob/a.naero.b), a szelektivitást, a pH-t és még sok más tényezőt .
Gyakran lehetetlen ezért meghatározni egyes termékek, így például pigment zagyok/iszagok csíraszámát a fogyasztó részére történő szállítás előtt, továbbá irányító módon beavatkozni bíooid anyagok adagolásával, Annak következtében, hogy 6 hétig is tarthat a tengeri vagy vasüti szállítás, a pigment .zagy (slur.ry) minősége- romolhat vagy használhatatlanná válhat a termék. A fehér pigment zagy/íszap szürke -színűvé és kellemetlen szagává válhat. Mindeddig a romlás megakadályozásának egyetlen lehetősége fo.ioc.id anyagok preventív túladagolása a pigment zagyhoz, ez azonban rendkívül költséges, az anyagok pazarlásával jár, és környezetvédelmi szempontból értelmetlen megoldás. Ezen felül két különböző megközelítést kell elemezni mind az aerob mezof.il baktériumokra, mind a gombákra nézve. Higitási sorozatok készítése szükséges továbbá, így megsokszorozódik az elemzések s z árna.
A papír- és pigment iparban szokásosan alkalmazott csíraszám meghatározási eljárásokat például a következő könyvrészletek ismerteik: Seh'wei seri sebes lebensmitteibueh.’’ 56. fejezet, 7.01 rész (1935. évi kiadás, 1938. évi átdolgozott változat),
Bastímraung von a erőben Bakterien und Keimen címmel, továbbá ’'Sohweizerisches bebensm.itteifouch” 56. fejezet, 7.22 rész (1985. évi kiadás, 1988. évi átdolgozott változat), Bestimmung von
Pílzen.' címmel, Általában a meghatározás elvégzése előtt minden esetben körülbelül 48' órás Inkubációs idő szükséges,.
A CeiiFacts’®' részecskeanallzátort és eljárást a Hicrobíal Systems Company, Léd. fejlesztette ki, Erről részletesebb információk találhatók a következő helyen megjelent közleményben: Labor flash 9/96, Zeitung mit Leserdienst rür Labor und Forschung, Ott Veriag t Druck AG, ÜH-3607 Thun, Svájc, így meg kell említenünk, hegy a CeiiFacts analizátor alkalmazható kalcium-karbonát iszapok csiraszámának meghatározására is. A bejelentő laboratóriumi kísérletei azonban feltárták, hogy ilyen típusú meghatározás a gyártó által leírt módon nem, vagy csak pontatlanul végezhető el.
A CeiiFacts analizátorral végzett mérés elve azon alapul, hogy baktériumokat, gombákat és élesztőket részecskék forrnájóban elektromos erőtérben mérnek úgy, hogy a részecskeszámot a minták inkubációja során intervallumonként megmérik, majd meghatározzák a. részecskeszám növekedését, és az exponenciális növekedés esetén ebből a szakaszból t,, időpontra ext.rapolálják az értéket. Ez a mérési elv akkor is hatékony, ha olyan “idegen részecskék alacsony számát határozzák meg, amelyeknek a mérete a baktériumok, gombák vagy az élesztők méretével azonos vagy ahhoz hasonló, Olyan szuszpenziők és emulziók esetén, amelyek 1 tömeg!-nél nagyobb arányban tartalmaznak idegen részecskéket, úgymint ásványi anyagokat, töltőanyagokat és/vagy pigmenteket, a jelenlévő azon idegen részecskék száma, amelyeknek a mikroorganlzmusokéval azonos a mérete, nevezetesen -1,5-20 gm, ~ vagyis a ts vakérték - túl magas ahhoz, hogy 10 óránál rövidébe időtartamon beiül « « kimutatható tegyen a csiraszámnak· az inkubáció- során a szaporodás révén bekövetkező további növekedése.. Ennélfogva a CeliFacts analizátor nem képes kielégítő pontosságú mérést végezni, és a gyártó a kiindulási folyadék hígítását írja elő az alkalmazhatóság biztosítása Gáljából.
Ha a vakprőba értéke 10δ részecske/ml, a CeliFacts analizátorral nem lehet szignifikánsan kimutatni egy 10’ részecske/ml nagyságú növekedést. H'a viszont az idegen részecskék” jelenléte· miatt szükségessé vált hígítás túl nagy, úgyhogy a szaporodó organizmuso.k hígítása - amelyeket természetesen azonos nagyságrendben hígítottunk - többé nem. szignifikáns, helytelen eredményt mérünk. .Ezen felül, a 2'őpm-n.él nagyobb átmérőjű idegen részecskék” el.tömhetik a mérőcellát, amelynek csak 30μ-m az átmérője. Az idegen részecskék” lehetnek például ásványi típusúak mint amilyen a kalcium-karbonát, lehetnek szintetikusak, szerves, polimer típusú vegyületek, úgymint polisztirol-akrílát diszperziók, vagy lehetnek természetes szerves típusú vegyületek, úgymint keményítő oldatok vagy hemiceilulőz-ok és/vagy cellulóz rostok vagy ezen részecskék kombinációi, amint azok például egy papírgyári ciklusban előfurduinak.
A találmány célja olyan gyors és hatékony, könnyen kivitelezhető eljárás kidolgozása ásványi anyagokat és/vagy pigmenteket és/vagy töltőanyagokat és/vagy rc-stanyagckat tartalmazó vizes szuszpenziók, emulziók vagy diszperziók mikrobiológiai szennyeződésének mennyiségi és/vagy minőségi meghatározására, amely eljárás kiküszöböli a technika állásának megfelelő eljárások fenti hátrányait.
A találmány szerint est a célt az 1. igénypontban megadott, eljárás kidolgozásával értük el. Est az eljárást az jellemzi, hogy a szuszpenziőkből, emuÁziókbői vagy diszperziókból vett mintákhoz egy vagy több olyan szerves anyagot adunk, amelyet a mikroorganizmusok képesek lebontani, ezt követően adott esetben a mintákat Ínkubáljuk, majd a mintákat centrifugáljuk, és igy elválasztjuk a mikroorganizmusokat az ásványi anyagoktól és/vagy töltőanyagoktól és/vagy pigmentektől és/vagy rostanyagoktól; majd a vizes felüiüszö fázisban egy vagy több inkubáció után meghatározzuk a mikroorganizmusok számát és/vagy méretét és/vagy természetét.
A találmány előnyős kiviteli megoldásait a függő igénypontok, az itt következő kitanitás és a példák tárják fel.
A mikroorganizmusok mennyiségi és minőségi meghatározása már több éve a technika állásához tartozik. A mikrobiológiai szenynyesések meghatározása azonban különösen nehéz olyan esetekben, amikor más szilárd részecskék, úgymint ásványi anyagok, pigmentek, töltőanyagok és/vagy rostos anyagok nagy koncentrációban vannak jelen a vizsgálandó mintában. Minthogy ezeknek az ”idegen részecskéknek'’ a mérete gyakran hasonló a mikroorganizmusokéhoz, általában csak arra van lehetőség, hogy nagy hígítással csökkentsük minimálisra az ilyen ”idegen résseoskék.” számát. Ezzel együtt járóan és elkerülhetetlenül azonban, ezek a nagy hígítást eredményező lépések csökkentik a szennyező mifcroorganizmusok számát, és hosszú inkubációs idő szükséges ahhoz, hogy a mikroorganizmusok száma a szaporodás révén olyan mértékben megnőve-kod jók, hogy biztonságos kimutatás váljon lehetővé.
« X
Szükség volt ezért as előbbiekben említett típusú új eljárás kidolgozására, amely lényegesen rövidebb idő alatt szolgáltat reprodukálható és megbízható eredményeket a vizsgálandó mintában lévő mikroorganizmusok száma, mérete és/vagy típusa tekintetében.
Meglepő és nem. várt módon felismertük, hogy a mikroorganizmusok elválaszthatók az inért anyagoktól {”idegen részecskéktől' ügy, hogy lebontható szerves anyagokat adunk a mintához, majd ezt kővetően a mintát centrifugáljuk, A. mikroorganizmusok rendszerint lehetőleg az ásványi anyag, pigment, töltőanyag és/vagy rostanyagok felületére tapadnak, igy megnehezítik a felülettől való elválasztásukat, Bár az idegen részecskék egy egyszerű eentrífugáiási tépésben kiülepednek, magukkal viszik azonban a mikroorganizmusokat a periekbe, minthogy azok e részecskékhez tapadnak, és ezért a mikroorganizmusoknak a felülúszóban maradó része pontatlan eredményeket ad a mikroorganizmusokkal való szennyezettség mértékének a tekintetében.
Kimutattuk, hogy biológiailag lebontható szerves anyagok adagolása meglepő módon lehetővé teszi a mikroorganizmusoknak és az ásványi anyagoknak, pigmenteknek, töltőanyagoknak és/vagy rostanyagoknak az elválasztását. Előnyös módon az a szerves anyag, amelyet ie tudnak bontani a mikroorga.nlzmusok, egy olyan tápközeg, amelyet szokásosan alkalmaznak a mikroorganizmusok tenyésztésére. Meglepő módon, a tápközeg szeparálásserként hat a mikroorganízmusok és az idegen részecskék között, és igy első ízben teszi lehetővé ezek elválasztását és megkülönböztetését anélkül, hogy befolyásolná a mikroorganizmusok analízisének továbbí lépéseit. Azok at anyagok, amelyek biológiailag nejs, vagy csak nehezen bonthatók le, azt a kockázatot hordozzák, magukban., hogy a mikroorganizmusok szeparálédnsk ugyan az inért részecskéktől, azonban ezek az anyagok a mikroorganizmusok növekedésének inhibitoraiként hatnak, és így pontatlan eredményt idéznek elő.
A találmány szerinti eljárásban nemcsak elhagyhatunk egy lépést, nevezetesen a hígitási lépést, hanem ezen túlmenően rendkívüli mértékben lerövidítjük az inkubációs időszakot is. Továbbá nemcsak az történik, hogy egy szeparálószert adagolunk, hanem az is, hogy a szeparálőszer egyidejűleg t.ápoldatként is szolgál, amelyet a vizsgálandó mikroorganizmusok optimális szaporításához használhatunk fel, és egy előnyös kivitelben ügy választunk meg, hogy specifikus legyen a vizsgálandó mikroorga.nl.zmusok egy bizonyos típusára úgymint baktériumokra, gombákra vagy élesztőkre.
Azáltal oldottuk meg a találmány szerinti feladatot, hogy olyan szerves anyagot adagoltunk - előnyösen tápoldat, illetve tápközeg forrnájáfoan amelyet a mikroorganizmusok lebonthatnak, továbbá egy centrífugáiási lépést vezettünk be. A meghatározás idejét azért tudtuk csökkenteni sőt egyáltalán az meghatározást azért tudtuk elvégezni, mert a vizsgálandó minta kisebb számban tartalmaz ”idegen részecskéket”. Azonfelül a. mikrobiológiai részecskék kiindulási száma és az idő függvényében bekövetkező kisebb növekedése esetén is elvégezhetjük a meghatározást az olyan mintákhoz viszonyítva, amelyeknek nagy a vakértéke, vagyis az olyan mintákkal, amelyek nagyszámú idegen részecskéket tartalmaznak.
* ·'*:·*
A találmány szerinti eljárással olyan vizes szuszpenziókat, emulziókat és diszperziókat vizsgálhatunk, amelyek többek között ásványi anyagokat, pigmenteket, töltőanyagokat, és/vagy rostos anyagokat, úgymint cellulóz rostokat tartalmaznak, valamint adott esetben további polimereket, igv természetes, szintetikus vagy félszintetikus polimereket tartalmaznak kolloid formában.
Az ilyen polimerekre példák a következők: sztirol-butadíén, szt írd-a korlát, melamingyanták, formaldehid-karbamid-gyanták, keményítő, karboxi-meti 1-cel.idóz.
A vizsgálandó minták előnyösen a papírgyártás, technológiai lépéseiből származnak. További alkalmazási terület a pigment ipar és a fémfeldolgozó ipar.
A találmány értelmében mintát veszünk azokból a szuszpenziókból, emulziókból vagy diszperziókból,, amelyek mikrobiológiai szennyezettségét meg kell határoznunk. A minta, mennyisége általában 0,5 - 20 mi, kisebb vagy nagyobb mintákat is vehetünk azonban. Emellett a minta mennyisége nem. jelentős et találmány szerinti eljárás sikeres kivitelezése szempontjából,
A kivett mintához olyan szerves anyagokat adunk, amelyeket a mikroorganizmusok képesek lebontani, és az igy kapott elegyet összekeverjük. A mintához hozzáadott biológiailag lebontható szerves anyagok mennyisége 0,5 -50 mi a minta egy ml-éré számítv 3 v
A minta térfogatának a biológiailag lebontható anyag térfogatához viszonyított aránya a minta eredeti koncentrációjától, valamint az oldatban levő biológiailag lebontható anyag koncentrációjától függ. Az arányt a biológiailag lebontható anyag olyan mennyiségéhez állítjuk be, amely elég nagy ahhoz, hogy elvégezhető legyen a mikroorganizmusok és az ásványi anyagok, töltőanyagok, pigmentek és/vagy rostanyagok,· továbbá az adott esetben kolloid formában jelenlévő- polimerek elválasztása. A minta térfogatának a biológiailag lebontható anyag térfogatára vonatkoztatott optimális arányát - amit minden esetre küiön-külön meg kell állapítani - a szakember manuális kísérletekkel határozhatja meg.
A biológiailag lebontható anyagot tartalmazó oldat koncentrációját rendszerint úgy választjuk meg, hogy a minta oldatának aránya a biológiailag lebontható anyagot tartalmazó oldatra vonatkoztatva .1:0,1 - 1:100 legyen. Az optimális arány erősen függ az illető mintaoldat koncentrációjától és összetételétől. Azokat a pigment és/vagy töltőanyag szuszpenziókat, amelyek szilárdanyag tartalma nagyobb mint 65 tömeg %, általában 1:2 - 1:10 arányban, előnyösen 1:3 arányban hígítjuk. Ka a sziiárdanyag tartalom 6S tömeg %-nál kisebb, akkor a mintát rendszerint 1:0,1
- 1:1 arányban hígítjuk. Bizonyos esetekben, különösen akkor, ha nagyon nagy szennyezettségre számítunk, a mintát általában 1:10
- 1:100 arányban hígítjuk. A megválasztott hígítás! faktort figyelembe keli venni az értékelésben vagy specifikusan hangsúlyozni kell az eredményben.
A biológiailag lebontható szerves anyagok közé tartozik különösen a tápközegek azon csoportja, amely specifikus a vizsgálandó mikroorganizmusra nézve. A tápközeg előnyösen szénforrást, nitrogéntorrást, foszfát- és/vagy kénforrást, valamint adott esetben ásványi anyagokat, növekedési faktorokat és/vagy vitám!10 nokat tartalmas. Más anyagokat is adhatunk a táptalajhoz, ha azok szükségesek a mikroorganizmusok optimális szaporodásához. A következőkben ismertetjük azokat az előnyös táptalajokat, amelyeket találmány szerint alkalmazhatunk.
Adott esetben a táp-közeg hozzáadását követően egy vagy több inkubációs lépést végezhetünk, el, hogy megnöveljük a mintában lévő mikroorganizmusok számát. Ez különösen előnyös lehet egy későbbi minőségi analízis szempontjából. A találmány egy előnyös kivitelében azonban a centrífugálás előtt elhagyjuk ezt az ínkubálást, és igy jelentős időtartam csökkentést érünk el.
A mí kroo-rgan izmus oknak az ásványi anyagoktól, töltőanyagoktól és/vagy rostanyagoktól való elválasztása eéljáből centrlfugálási lépést végzünk azután, hogy a tápközeget hozzáadtuk a mintához, és adott esetben ezután inkabálási lépést hajtottunk végre. A centrifugálást olyan módon végezzük el, hogy a mikroorganizmusok legnagyobb részét, vagyis több mint 50%-át elválászszuk az idegen részecskéktől , vagyis az ásványi anyagoktól, töltőanyagoktól, pigmentektől, polimerektől és rostanyagoktól. A centrifugálisnak olyan hatásúnak kell lennie, hogy a mikroorganizmusok a felülúszöban akkumulálódjanak, míg az idegen részecskék leülepedjenek, Erre a célra a oentrifugáiást előnyösen 100 1500 g, előnyösen 200 - 1200 g és különösen előnyös esetben 600 - 1000 g értéken végezzük. A gravitációs erőteret az elválasztandó ásványi anyagoktöi, töltőanyagoktól vagy rostanya-goktől függően, vagy pedig az elválasztandó mikroorganizmusoktól függően állítjuk be.
♦ * ♦ Λ * ·< ·.· *
Ζ-, JS
Az optimális ülepedést indexet a szakember kísérleti úton határozhatja meg, Magát a eentrífugáiást 1 - 30· percig, előnyösen 2 - 15 percig és különösen előnyös módon 5-10 percig végezzük. A centrifugái ás optimális időtartamát a szakember .tábora töri und. kísérletek alapján határozhatja meg.
Ásványi, anyagokként és/vagy töltőanyagokként és/vagy pigmentekként a következőket alkalmazzuk előnyös esetben: a periódusos rendszer második és/vagy harmadik, főcsoportjába és/vagy negyedik főcsoportjába es/vagy negyedik mellékcsoportjába tartozó elemeket tartalmazó vegyületeket, különösen kalciumot és/vagy szilíciumot és/vagy alumíniumot és/vagy titánt és/vagy báriumot tartalmazó vegyületeket és/vagy szerves pigmenteket.
Ásványi anyagokként, töltőanyagokként és pigmentekként előnyösen olyan ásványi anyagokat és/vagy töltőanyagokat és/vagy pigmenteket használunk, amelyek, kaolint és/vagy alumíniumhidroxidot és/vagy titán-hidroxidot és/vagy bárium-szulfátot és/vagy poliszéiról üreges gömböket és/vagy formaldehidet gyantákat es/vagy kalcium-karbonátot, különösen természetes kalciumkarbonátokat és/vagy márványt és/vagy kalcíum-oxídot (lime) és/vagy dolomitot és/vagy dolomitot tartalmazó kalciumkarbonátokat és/vagy szintet ikusan előállított kalciumkarbonátokat, úgynevezett kicsapott kalcium-karbonátokat tartalmaznak .
Á mikroorganizmusokat tartalmazó feiülűszót eltávolítjuk, és ezután közvetlenül felhasználhatjuk a mikrobiológiai szennyezettség mennyiségi és./vagy minőségi meghatározására. Szt kővetően előnyösen egy vagy több inkubációs lépést végzünk, hogy meg12 , ο · «· «;·..
növeljQk a mikroorganizmusok számát a felülűszöban. Ezt a szaporítási lépést előnyösen olyan inkubációs hőmérsékleten végezzük, amely kedvez a mikroorganizmusoknak,, és amely a szaporítandó mikroorganizmusok típusától függ. Az előnyös inkubációs hőmérsékletek a 20-37’C tartományban vannak, további előnyös hőmérséklettartomány a 28-34°C, és különösen előnyös tartomány a 31,5-32,5”C, Az egyes esetekben szükséges inkubációs hőmérsékleteket a szakember ismeri, azok vagy megtalálhatók monográfiákban vagy kísérletileg határozhatók meg.
Az egyes inkubációs lépések összes ideje 30°C inkubációs hőmérsékleten legfeljebb 12 óra, ha a minta szennyezettsége kisebb mint 105 csíra/ml, legfeljebb 6 óra, ha a minta szennyezettsége nagyobb mint 10' csíra/ml de kisebb mint a 10” csíra/g, és legfeljebb 3 óra olyan szuszpenziö esetén, amelyeknek az eredeti szilárdanyag tartalma 60-60 tömeg! és szennyezettsége nagyobb mint 10” csíra/ml (tripszinnel előkezelt szója táptalaj-agar alkalmazásával meghatározva).
Az egyes inkubációs lépések száma 30°C-on legfeljebb 2-6, ha a minta szennyezettsége kisebb mint 10” csíra/ml, legfeljebb 2-4, ha a minta szennyezettsége nagyobb mint 10” csíra/ml de kisebb mint 10* csíra/g, és legfeljebb 2-3 olyan szuszpenziö esetén, amelyeknek az eredeti szíiárdanyag tartalma 60-80 tömeg! és szennyezettsége nagyobb mint 10' csíra/ml {tripszinnel előkezelt szója táptalaj-agar alkalmazásával meghatározva).
Az egyes inkubációs lépések időtartalma 30°C-on 1-12 óra, ha a minta szennyezettsége kisebb mint 10” csíra/ml, 1-6 óra, ha a minta szennyezettsége nagyobb mint 10” csíra/ml de kisebb mént
1.3 * φ
X y φφ φ Φ Φ X φ Φ X Φ «φφφ X
X φφ ** Φ** * **
10* esira/g, és 1-2 óra olyan szuszpenzió esetén, amelynek az eredeti sziiárdanyag tartalma. 60--80 tömeg % és szennyezettsége nagyobb mint 10 cslra/ml (tripszinnel előkezelt szója táptalaj agar alkalmazásával meghatározva).
A technika állásához számos ismert eljárás tartozik az igy kapott mikroorganizmusok mennyiségiilletve minőségi meghatározására. Különösen előnyös a találmány szerint a CellFacts55 analizátorral végzett vagy az ATP meghatározásán alapuló eljárás. A szakember számára rendelkezésre állnak és ismertek más eljárások is. Az előnyös eljárásokat, részletesebben a következő példákban ismertetjük majd.
Miután végrehajtottuk a találmány szerinti eljárást, elvégezhetjük a mikroorganizmusok minőségi és/vagy mennyiségi meghatározását. Az első minőségi meghatározás egy hozzávetőleges megkülönböztetést jelent a gombák, élesztők és baktériumok csoportjai között. Ha a CeilFsots^ analizátorral végzett eljárást spéci· fikus mikroorganizmusokra, igy például specifikus baktériumokra nézve kalibráljuk, ágy további specifikációt végezhetünk az egyes altípusokon belül, A minőségi analízist - például a CellFacts^ eljárással - összesített megkülönböztetés alapján végezzük egyetlen sejt méretére, illetve térfogatára nézve.
A szeparálöszerként alkalmazott tápközeg típusa különösen a elválasztandó vagy szaporítandó mikroorganizmustól függ, Előnyös módon olyan tápközegeket alkalmazunk, amelyek a meghatározandó csirák szelektív növekedését teszik lehetővé, és lehetőleg elnyomják más, nem meghatározandó csirák szaporodását. A találmány szerint alkalmazható tápközegek például a következők: tripton
Í-4 4 Κ ♦ * »*« Φ azolekfcin/Tween 20 (TAT) táptalaj—agar (tryptone azolectin Tween 20 broth agar glüközolöat, pepton/kazein táptalaj (nutrient broth) , előnyösen trlpszinnel előkezelt szója táptalaj --agar (tryptic soy broth agar). A tápkőzegek összetételét a leíráshoz csatolt melléklet ismerteti.
A mikroorganizmusok számára készített tápközeg koncentrációja. előnyösen a 0,1 - 10 tömeg %, előnyösebben a. 2-5 tömeg % tartományban van, különösen előnyösen körülbelül 3 tömeg %.
A találmány szerinti eljárás nemcsak minőségi, hanem mennyiségi analízist is lehetővé tesz a baktériumokra, gombákra és élesztőkre nézve. Egy előnyös kivitelben ezt az analízist egy lépésben, végezzük,
A mikroorganizmusoknak és az ásványi anyagoknak, töltőanyagoknak, pigmenteknek és/vagy rostanyagoknak, vagyis az „idegen részecskéknek az elválasztását követően egy vagy több, előnyösen 2-5 inkubációs lépést végzünk abból a célból, hogy megnöveljük a minta felúlúszőiában léve mikroorganizmusok számát.
Többszörös inkubációt intervallumokban végzünk, vagyis a szennyezettség mérését minden esetben megismételjük a tc4.x időpont után. Ez lehetővé teszi az inkubációs idő és az inkubációs intervallumok behatárolását. Abban, az időpontban, amikor exponenciális- növekedést figyelünk, meg, extrapolálunk és visszaszámolunk a to időpontra. Ennélfogva nagyfokú eredeti szennyezettség olyan növekedést eredményez, amelyet korábban lehet megfigyelni és számolni, úgyhogy az ezután következő intervallumok elhagyhatók.
Az inkubációs idő 10 csíra/ml-nél kisebb szennyezettség esetén legfeljebb 12 óra 10° csira/ml-néi kisebb szennyezettség esetén legfeljebb 6 óra, olyan szuszpenziök esetén, amelyek eredetileg 60-80 tömeg % szilárdanyagot tartalmaznak és szennyezettségük meghaladja a TCP osira/ml mértéket, legfeljebb három óra, amikor ís a legutóbbi esetben előnyösen, agarral szilárdított, trípszinnel előkezelt szója táptalajt használunk. Azt az inkubációs időt, amelyet a mikroorganizmusokkal való szennyezettség fokától függően kell alkalmaznunk, a szakember egyszerű manuális kísérletekkel határozhatja meg. Minél kisebb a minta mikrobiológiai szennyezettségének eredeti mértéke, annál nősz•szabb inkubációs időt kell választanunk és fordítva. A szuszpenz.lóban lévő szilárd anyagok eredeti részaránya nem befolyásolja közvetlenül az Inkubációs időt.
A. következőkben részletesebben magyarázzuk a találmányt az •összehasonlító példák és a példák bemutatásán keresztül. A találmányt a szakember tovább módosíthatja a leírás és az igénypontok, valamint a feltételezett szakértelem alapján, A találmány nem korlátozódik a bemutatott példákra.
Csiraszám meghatározása CellFacts^ részecskeszársiálő alkalmazásé· val
A találmány szerint a szuszpenziőban és/vagy emulzióban és/vagy diszperzióban levő mikroorganizmusokat egy meghatározott átmérőjű mérőporuson szívatjuk át vákuum alkalmazástval. Feszültséget jnk.okatj adunk erre a pólusra (kapilláris, 30 pm; .
Tekintettel, arra, hogy az ép sejtek első közelítésben szigete16 * ΧΦΦ löknek tekinthetők, mérhető ellenállás növekedés figyelhető meg, mialatt a sejt áthalad a mérőpóruson, és· ennek a növekedésnek a mértéke a sejt térfogatától függ. Az áramimpuizus közvetlen öszazefüggésben van a térfogattal. A minták inkubációja révén a sejtek szaporodásának kis különbségeit mérhetjük, vagyis a sejtosztódás a részecske szám arányos növekedését eredményezi. Az. exponenciális szakasz megfigyelése után a kiindulási koncentrációt extrapolációval számíthatjuk ki, minthogy a sejtszaporodást exponenciális függvény Írja le. Ipari mintáknak a találmány szerinti készítése következtében és a fenti eljárás alkalmazásával a CaCC’s, talkum és kaolin iszapok/zagyok, valamint, más anyagok (például hűtőközegek, krétaszuszpenziö («hite water), kclloídálisan szuszpendált keményítő, stb.) meghatározásának időtartalma csak a '2-12 óra tartományban van a technika állása szerinti 24-48: óra helyett.
Ez lehetővé teszi, hogy kellő időben avatkozzunk be tartós!
tószerek használatával az áruk nagy szennyezettsége és/vagy rom.....
Iása előtt.
A teehnlka állását bemutató példak
1. Példa: Kalcium-karbonát iszap (slurry)
A) Csiraszám. meghatározásokat végzünk a Schweizerisches
Lebensmittelbuch, 56. fejezet, ?,0I rész (1985. évi kiadás,
1938. évi átdolgozott változat), melyeknek címe: „Bestimmung von aeroben Bakterion und Keimen, valamint a Schweizerisches
Lebensmittelbuch 56, fejezet, 7.22 rész (1985, évi kiadás, 1938.
τ ♦· :
évi átdolgozott változat), melynek címe: „Bestimmung von Biizen szerint.
Él j árás
Norvégiából származó természetes őrölt márványból készített
77,5 iömeg%-os vizes iszapot fsiurry) vizsgálunk. Az iszapban a részecskék 90 tömegt-ának mérete < 2 pm, a részecskék 65 tömeg%ának mérete pedig < 1 pm. Az iszapot 8,65 tömeg % mennyiségű kereskedelmi forgalomban lévő n.átrium-poiiakriláttal oiszpergáltuk. Az iszap 3 ml-es mintáját a Sehweízerisches Lebensmíttelbueh 56. fejezet, 7.81 rész (1085. évi kiadás, 1988, évi átdolgozott változat), melynek címe; „Bestímmung von aeroben mesophiien Keimen által leírt módszer szerint analizáljuk.
Eredmény:
órás inkubálás utána csíraszáza meghatározás eredménye: 30 X 10e aerőb mezőül csíra/ml szuszpenzió. Nem találtunk élese töt az aerob mezofíl csirák számára szolgáló tápközegben.. A Sonweízerisches Lebensmíttelboob 56, fejezet, 7,22 rész (1985.
évi kiadás, 1988. évi átdolgozott változat),melynek elme:
„Bestimmung von Pílzen - által leirt eljárás szerint < 1CX gomba/mi veit kimutatható.
B) Csíraszám. meghatározása a CeilFacts részecskeszámláló alkalma zásával
Élj árás φ *.·♦18
Az ΙΑ példában leírt mintát, a Norvégiából származó természetes- őrölt márványból készített 77,5 tömeq%~os vizes iszapot vizsgáljuk. Az iszapban a részecskék 90 tömeg%--ának mérete < £ pm, a részecskék 65 töm-eg%'~ának mérete pedig < 1 pm. Az iszapot 0/65 tömeg % mennyiségű kereskedelmi forgalomban lévő nátriumpoliakriláttal díszpesgáltak, Az iszap 3 ml-es mintáját steril lombikba pipettázzuk. A mintához 3 mi térfogatú 3 tomegk TAT táptalaj alap/(Tween 20 tápoidatot adunk, és CellFacts berendezéssel analizáljuk. Az analízist úgy végezzük, hogy azonnal megkíséreljük a részecskeszám meghatározását a CellFacts készülékkel (időpont: t^} . Minthogy a részecske-szám tál nagy volt a készülékkel való meghatározáshoz, fel keli hígítani a mintát. Miután 1.:10 000 arányú hígítást végzünk, a készülék elfogadja a részecske koncentrációt, és meghatározhatjuk a toh vakértékét. Inkubációt végzünk, és 2 óra (időpont: t/v;, 4 öra (időpont: t4h) , óra (időpont; tál, 12. őre (időpont: tl2h} ínkubálás után újból meghatározzuk a. része-cskeszámo-t a CellFacts készülékben. Az inkub-álást 50°€-οη végezzük. Ha a részecskék számát a részecskeátmérő függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk a tiszta fázisban a élő sejtek jelenlétét, („a csúcs növekedése', y tengely) és a mikroorganizmusok típusát, például a baktériumokat, élesztőket vagy gombákat (átlagos részecske átmérő, x tengely! a meghatározott inkubációs idők után, órán át tartó Ínkubálás után a szuszpenzió eredeti szeny nyezettségét á to>, időpontra való extrapolálással értékeljük. Referenciaként az IA; példában, leírt a Schueizerisches
Lebensmitteibuch szerint végzett csiraszám. meghatározás eredmé19
X* nyét alkalmazzuk... (lásd „Sestimmung von nercben mesophiien Keimen, Schveizeri.sches lebensmitteibuch 56. fejezet, 7.01 rész (1985. évi kiadás, 1983. évi átdolgozott változat).
Eredmények;
Az IB) példa eredményeit az 1. táblázatban foglaljak össze.
1. Táblázat: Cslraszám meghatározása CellFacts részecskeszámlálóval
Táptalaj: agstrai szilárdított trlpszinnei előkezelt szója táptalaj
| Minta | Extrahálószer | A meghatározás időpontja (óra) | Aérob-mezofil osíra/mi szuszpenzíő a (csúcs aa- tximuma 1-2,.5 pm. rés.zecs- keátmérőnél) |
| Trlpszinnei előkezelt szója. | 12 | < W | |
| Minta | Extr a h á1ős zer | A meghatározás időpontja (óra.) | gomba/ml szuszpenzíő a (csúcs maximuma 5-9 um rész e c s keá tmé r őnél) |
| 1 | Trlpszinnei előkezelt szója táptalaj-agar | 12 | < 10;i ) |
<·*
Az IA) és az 1B) példából látható, hogy a technika állásához tartozó eljárásokkal nem tudjuk meghatározni az adott szuszpenziöban a baktériumokat, gombákat és élesztőket a CeiiFacts műszerrel, és különösen lö2 csíra/ml csíraszám alatt teljesen pontatlan eredményeket kapunk. Ezen felül a Schweízerisohes Lebensmitteibuch eljárásnak kivitelezése 43 órát vesz Igénybe.
Feltéteiezető, hogy a mintáknak a CeiiFacts műszerrel végzett méréshez szükséges hígításával a jelenlévő mikrobiológia csirákat olyan .mértékben kellett hígítanunk, hogy azok száma a hígított mintában nem érte el a kimutathatóság! határértékeket.
Ha a meghatározást a Schweizerisebes Lebenamsíttelbuch szerint végezzük, akkor az elemzés időtartama 43 óra.
Cj_Csíraszám meghatározása ATF méréssel
Eljárás
Az IA) példában is használt mintával dolgozunk. Ez a minta Norvégiából származó természetes őrölt márványból készített 77,5 tömeg %-os vizes iszap. A iszapban a részecskék 90 tömeg %-ának mérete < 2 pm, a részecskék 65 tömeg%-ának mérete pedig < 1 pm.
Az iszapot 0,65 tömeg! mennyiségű, kereskedelmi forgalomban lévő nátrium-pofiakziláttai diszpergáítuk. A minta 3 ml-ét steril lombikba!, pipettázzuk. Ehhez hozzáadunk 3 ml 3 tömeg %-os TAT táptalaj alap/Tween 20 tápoldatot, és BioOrbit 1253 iuminométerrrel analizáljuk. Az analízist úgy végezzük, hogy rögtön megkíséreljük az ATT által kibocsátott fény mennyiségének mérését a BioOrbit 1253 lar ónomét erben (to;b . Ezen felül megmérjük a mintát 1:10 OöO arányú hígítás után. Ilyen módon mindegyik * Φ * φ χχ* * x- Φ '‘♦ί* Β». «Λ esetben meghatározzuk & vakértéket (tOh) . Megmérjük a fényintenzitást a Bioörbit 1253 luminométerben 4 őrás (időpont: t^h), 7 órás (időpont : &%.}, majd 17 órás (időpont: ζ;7>ρ inkubálás után. Az inkubálest 30*C-on végezzük. Ha a megfelelő inkubációs időpontban mért fényintenzitást az inkubációs idő függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk az élő sejtek jelenlétét (a fényintenzitás növekedéséből az Idő függvényében). A megközelítően exponenciális növekedéssel járó inkubációs idő után összehasonlító módon határozhatjuk meg a szuszpenziő szennyezettségét ügy, hogy összehasonlítjuk az egyes minták görbéinek lefutását. Ezáltal fel kvantitatív módon különböztethetjük meg a „nincs növekedés, „gyenge növekedés és „erős növekedés állapotokat.
Mer é s i el. járás a BloOrblt 1253 ti p usú lum in ómé tér, a lka ima z ásáva 1
a) Első lépésként 100-100 μΙ-t pípettázunk iumínométer küvettába a mintákból, amelyeket a fentiek szerint készítettünk el.
b) Ehhez 100 μί ATT-felszabadító reagenst adunk, jól összerázzuk és egy percig állni hagyjuk, hogy az ATP-t extrakcióval el t á vo 111 h a s s a k.
c) Ezután 500 pl .AMR reagenst adagolunk és rázással összeka verj ük a mintát.
d) Ezt követően a küvettát behelyezzük a mérőcellába, és le olvassuk a fényemissziét.
Referencia: felhasználói kézikönyv és a cég használati leírása: „User's manual of the EíoOrbít iumínometer ver. 3,0, May «Α és „Application Nóta 20 of BieOrbit CY company, FIK 20521 Torkú, Finland,
Az eredményeket a 2. táblázatban foglaljuk össze.
2.Táblázat.: Csíraszám, meghatározása ATP méréssel a technika á 1 Iása szérint
| Inkubációs idő (óra; | Minta Fé n y in t e az i t á s [ RLC ] az LCD kijelzőn | 1:10 000 higitású minta Fényintenzitás [RLU} az LCD kijelzőn |
| ö | ö, 001 | 0,002 |
| 4 | 0, 000 | 0,001 |
| 7 | 0,0 02 | 0,002 |
| 17 | 0, 001 | 0,001 |
éra múlva nem figyelhető meg különbség az egyes inkubációs idők között, ha a technika állásához tartozó eljárást alkalmazzunk, vagyis fel kell tételeznünk, hogy az iszap nem szennyezett. Ugyanazt az iszapot használtuk azonban mint az 1A) példában, melyben a Schweizerisohes Lebemsmittsl.buch módszerének alkalmazását mutattuk be. Minthogy azzai az eljárással az IA) példában 3 x lö’ csíra/ml eredményt kapunk, nyilvánvaló, hogy ennek a IC; példa szerinti eredménynek hibásnak keli lennie. A gyakorlatban ez végzetes következményeket vonhat maga után, igy ételmérgezést vagy áruk romlását.
ΦΦ
Ha a technika állásához tartozó eljárásokat használjuk, nem tudjuk meghatározni a fenti szuszpenzióban a baktériumokat, gombákat és élesztőket.
Feltételezzük, hogy az eredeti szuszpenziö nagy részecske koncentrációja azt eredményezte, hogy az ATP által kibocsátott fény teljes mennyisége abszorbeálödott a szuszpenziófoan, és ha a mintát ezen eljárás szerint felhígítottuk, akkor a mikrobiológiai csirák olyan mértékben hígultak, hogy már nem érték el a kimutatási határértékeket.
& találmány szerint í eljárást bemutató példák 2. példa: Kalcium-karbonát iszap, mérés a CellFacts műszerrel
Eljárás:
Norvégiából származó természetes őrölt márványból készített
77,5 tömeg %-os vizes iszapot vizsgálunk. A iszapban a részecskék 90 tömeg %-ának mérete < 2 pm, a részecskék 65 tomegl-ának mérete pedig < 1 pm. Az. iszapot ö, 65 tömeg % mennyiségű, kereskedelmi forgalomban lévő nátríum-poliakríláttai díszpergáituk, Az iszapból 3 ml térfogatú mintákat külon-külön steril lombikokba pipettázunk. Az egyik irintához 3 ml térfogatú 3 tömeg!~os TAT táptalaj alap/Tween 20 tápoidatot és a második mintához 3 ml térfogatú 3 tömeg%-os tripszlnnei előkezelt szőja-táptalaj tápoldatot adunk. Ezután mindkét mintát 20 másodpercen át alaposan keverjük, majd centrifugaijuk. A centrlfugái ász 10 percen át 300 g-on végezzük, majd a tiszta felülúszót elkülönítjük, és CellFacts készülékkel analizáljuk. Az analízist úgy végezzük, ♦
hogy megmérjük a részecskeszámot a CeliFacts készülékben közvetlenül a centrifugálás után (időpont: tOfe) , továbbá 4 órás (időpont: t«3 és 6 órás (időpont: t6h.) Inkubálás után. Az inkubáció hőmérséklete 30'ÖC. Ha a részecskék számát a részecskék átmérőjének függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk az élő sejtek jelenlétét (a csúcs növekedése) és mikroorganizmusok típusát (baktériumok, élesztők vagy gombák)a tiszta fázis minden egyes inkubációs időpontját követően. Az exponenciális szakasz inkubációs ideje után a szuszpenzió eredeti szennyezettségét a toh időpontra való extrapolálással határozzuk meg. Összehasonlításként elvégezzük a Sehoeizerísches Lebensmitteibuch szerinti csíraszám meghatározást („Eestimmung von aeroben mesophílen Keimen Schwoizerísches Lebensmitteibuch, 56. fejezet, 7.01 rész, 1985. évi kiadás és 1988. évi átdolgozott változat).
Eredmények:
Csiraszám meghatározása a Schweizerisches Lebensmátteibuch szerint:
óra után a csíraszám 3,0 x ICO aerob mezofil osira/ml szuszpenzió.
A CeliFacts részecskeszámlálóval nyert eredményeket a 3. táblázatba foglaljuk össze.
X XX X*
X X X * * ♦ * χ ·>*Χ # *
ΧΧΧ-Χ X 9 « *
X' X X ** X»* X
3. Táblázat; A CellFacts készülékkel kapott eredmények a 2. példa esetén
1. TA? táptalaj aiap/Teeen 20 {poli (oxi—etilén)-szorbitánmonolaurát
2. Agárral adalékolt, tripszinnei előkezelt szója táptalaj
| ;Minta | Sxtrahálőszer | A meghatározás í dói. gén ye (óra) | Aerob mezofil csira/ml. szuszpenziő (a csúcs maximuma 1-2,5 um ré s zecs keát-c mérőnél; |
| 1 | TAT táptalaj alap/Tween 20 | 1,25 x 10s | |
| 2 | Trip.szi.nnel előkezelt szói a táptalaj-agar | 4 | 3,.14 x 10 * |
| Minta | Extrahálószer | A meghatározás időigénye (őrá: | gomba/ml szuszpenziő (a csúcs maximuma 5-9 pm ré- s zecs keátmé róná1) |
| Tripszinnei előkezelt szója tápba laj-agar | 12 | < líb |
Ka a mintákat a találmány szerinti eljárással analizáljak, kitűnő egyezést kapunk a 5'chweizeri.sches Lebensm.it telbnch csiraszámlálási eljárásával a 48 éra utáni meghatározás eredményével.
.· ρ.,
Schweizeris-ches Lefo-ensmittel.bu.ch szerinti csiraszám. meghatá rozással -összevetve mindkét minta eredménye nagy biztonsággal a konfidencia-babarokon beiül van,
A konfídencia-határoken a leírásban az egyes csiraszám meghatározások ± 0,5 lo-gxo eltérésének értéket értjük a következő szakirodalommal összhangban: „FALS Central Public Health Laboratory, 61 Colindaie Avenoe, London W9 Süt, ÜK, distrifoution Ö70, pages 6- and 7 and appendix 1, distrifoution date Nov. 16, 1998, report date De-c 30, 199-8.f'
3. példa: Kalcium-karbonát iszap, analízis BioOrbit 1253 rumi nőmétorral
Eljárás
A vizsgált minta természetes őrölt márvány 71,5 tömeg%-os iszapja. Az iszapban a részecskék 90 tömeg%-ának mérete < 2 pm, részecskék 65 tömegl-ának mérete pedig < 1 um. Az iszapot 0,5 tö meg % mennyiségű, kereskedelmi forgalomban lévő nátriumpoliakrilátta! díszpergáltuk. Ebből az iszapból 500-500 ml-es mintákat 1 literes üveglombikokba mérünk. Az egyik mintát 3 napon át tároljuk 5ű>-on CA minta) , a másik mintát 3 napon át 30°-on tároljuk <B minta). Ezután a minták hőmérsékletét 20°C-ra. állítjuk be, és mindegyik minta 3-3 mi-ét steril lombikokba alaposan összekeverjük a megfelelő extrahálószer 3 mi-évei. Az igy kapott elegyeket 10 percig centrifugáljuk 600 g-n, majd a tiszta felülűszo fázist elkülönítjük, és BioOrbit 1253 típusú iumizcméfer alkalmazásával analizáljuk a fénykibocsátásra nézve.
Az analízist úgy végezzük, hogy a BioOrbit 1253 típusú luminométerben megmérjük a fényintenzitást közvetlenül a centrífugálás után (időpont: tón), majd é óra (időpont: t4h) , '7 óra (időpont: tyh) és 17 éra (időpont: tr;>j múlva. Az inkubáíást 3ÖcC~on végezzük. Ha a megfelelő, inkubációs idő után mért fényintenzitást az inkubációs idő függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk az élő sejtek jelenlétét ( a fényintenzitás növekedéséből az idő függvényében): a tiszta fázisban. A megközelítően, exponenciális növekedéssel járó inkubációs idő után összehasonlító módon határozhatjuk meg a szuszpsnziö szennyezettségét úgy, hogy összehasonlítjuk az egyes minták görbéinek lefutását. Ezáltal félkvantitatív módon különböztetjük meg a „nincs növekedés, „gyenge növekedés és „erős növekedés állapotokat, összehasonlításként elvégezünk egy csíraszám meghatározást a
Schweizerisohes Lebensmiételhoch előírásai szerint is.
(„Bestimmung von aeroben rtesophiien Keimen, Schweizerisohes Letoensmittelfouch, 56.» fejezet, 7.01 rész, 1985, évi kiadás#
1988. évi átdolgozott változat).
Az alkalmazott extrahá1ószerek:
1, A technika állása szerint: desztillált vízzel készült 0,9 tö megá-os NaCl-oldat, nem tartalmaz olyan szerves anyagot# amely tápanyag lehetne.
2. A találmány szerint: 3 tömegt-os szerves táp-oldat (trípszinnei előkezelt szója táptalaj-agarí
Csíraszám meghatározás a Sebőéizerisohes Lebensmittelbuch, szerint
A minta
B minta x 10i5 aerob mezőül csira.7g szuszpenzió, 48 7 ά 10' aerob mezofil csira/g szuszpenziö, 48 óra múlva;
óra múlva.
Az eredményeket a 47 a és a 4/b táblázatban foglaljuk össze, és az l. ábrán szemléltei
4. Táblásat: A szennyezettség értékelése BloOrbit luminométerrel végze11 méréssel a 3n példa sz erint
4/a Táblázat: A technika állása szerint desztillált vízzel készült 0,9 tömeg%-os baCl-oIdat alkalmazásával
| Az inkubálás időtar- ) tama {óra) | 1A minta fényintenzitás [RLÖ] az LCD ki- ; jelzőn | 1B minta fényintenzitás (RLül az LCD ki- ; jelzőn |
| 0 | 0, 001 | 0,001 |
| 4 | 0, 002 | 0,003 |
| 7 | 0,002 | 0,001 |
| 17 | 0, 004 | 0,007 |
Ha a technika állásához tartozó eljárást alkalmazzuk, nem figyelhetünk meg egyértelmű különbséget a gyengén és az erősen szennyezett szuszpenziók között 17 éra múlva.
4/3 Táblázat: A találmány szerint 3 tömeg %-os szerves t ápol fiattal íagarral adalékéit, trlpssinel előkezelt szója táptalaj)
| Az inknbálás időtar- | 1A minta fényintenzí- | 13 minta fényintenzi- |
| tama (éra) | tás (RLUj az LCD kí- | tás [RLUj az LCD ki- |
| jelzőn | j e 1 z őn | |
| 0 | 0,001 | 0,002 |
| 4 | 0, 004 | 0, ÖQfe |
| 7 | 0,007 | 0, 045 |
| 17 | 0,050 | 0,24 0 |
A találmány szerinti új eljárás alkalmazása esetén már 7 óra múlva különbséget tehetünk a „gyengén, szennyezett és az „erősen szennyezett oldatok között. Ezen felül a „gyenge szennyezettséget szignifikánsan detektálhatjuk már 17 óra múlva.
A szakirodalom és a BíoQrfelt luminométer felhasználói kézikönyvének 3.Ό változata (1995. május), valamint a BíoOrblt OY cég (FIN 20521 Turku, Finised) „applIcátion note 20 kiadványa szintén bemutat értékelési modelleket a biomassza számítására az [RLU] értékek alkalmazásával. Ezen felül a osiraszárnymi értéket „kalibrációval is meghatározhatjuk ismert szennyezettség/. fokú ssuszpenzíók alkalmazásával.
4
6Ϊ
4_> példa: Az USA-ból származó agyagból készült iszap vizsgálata
Eljárás
A vizsgált minta az USA Georgia államából származó termésre tes őrölt anyagból készült 72,8' tömegl-os vizes iszap. Az iszapban a részecskék 95 tömeg %-ának mérete < 2 pm, 78 tömegi-ának mérete pedig < 1 pm. Az iszapot 0,35 tömeg % mennyiségű, kereske delmí forgalomban kapható nátrínm-poiiakrirattal díszpergáltuk. Ebből az iszapból 3-3 ml-es mintákat külön-külön steril lombikokba pipettázunk. Az egyik mintához: 3 mi 3 t.ömeg%~os TAT táptalaj /Tween 20 tápoldatot adunk, és a második mintához pedig 3 mi 3 tömeg%~os tripszinnel előkezelt szója-táptalaj tápoidatot. Ezután mindkét mintát alaposan keverjük 20 másodpercen át, majd centrí fugáijuk. A centrifugáiást lö percen át 830 g-n végezzük, majd a tiszta felülúsző fázist elkülönítjük, és CellFacts készülékkel analizáljuk. Az analízist úgy végezzük, hogy megmérjük a részecskeszámot a CellFacts: készülékben közvetlenül a centrifugális után (időpont: , majd 2 órás (időpont: t2h) , 4 órás (időpont: , 6 órás (időpont: fc6h> és 12 órás (időpont: tm) inkubálás után. Az inkubálás hőmérséklete 30’C. Ha részecskeszámot a részecskeszámot a részecskék átmérőjének függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk a tiszta fázisban az élő sejtek jelenlétét (csúcs növekedés) és a mikroorganizmusok fajtáját (baktériumok, élesztők vagy gombák) az egyes inkubációs idők után. Azután, hogy az inkubációs idő elérte a közel exponenciális növekedést, a szuszpenziö eredeti szennyezettségét úgy határozzuk meg, hogy extrapoláiunk a t©v időpontra, összehasonlítás·“> s * 4
4.4 •\·'· 4P* rf ♦
J.
ként osiraszám meghatározást, végzünk a Schwaizerisebes
Lebensmítelbu-c.h szerint. („Bestímmung von «erőben mesophilan Keimen, Schweize.risebes Lebensmittelbucb, 5-6. fejezet., 7.01 rész, 1985. évi kiadás, 1988, évi átdolgozott változat.)
A csíraszám meghatározása a Schweizerísebes L-ebensmittelfouch szerint:
A esiraszám meghatározás eredménye- 48 óra után: 5,0 x 10’ aerob mezőül csira/mi szuszpenzíó.
A. csíraszám meghatározásnak a Cel-lFacts részecske.s:zámlálóva.'l nyert eredményeit az '5. táblázatban foglaltuk össze.
5. Táblázat: A CeilFacts készülékkel kapott eredmények a 4. példa esetén
1. TAT táptalaj alap/Tw-een £0 (ρο-Ií (oxi---etilén)-szerbi tá.nmonüaurát
2, Agárral adalékait trípszinnel előkezelt szója táptalaj
| Minta | űxtraháiőszer ; | A meghatározás időigénye (óra) | Aerob raezofil cslra/mi szuszpenzíó (a csúcs maximuma 1-2,5 μη részecskeátmérőnél) |
| i | TAT táptalaj | 12 | I, 12 x IQ5 |
| alap/Tween 20 ; | |||
| <·\ z. | Trípszinnel | 6 | 5,21 x 10 |
| előkezelt szója | |||
| 1 | táptalaj-agar |
| (Minta | Extrahálőszer | A meghatározás időigénye (Óra) | go-mba/mi szuszpenzió la csúcs maximuma 5-9 un ré- szeoskeátmétőnél) |
| Trips sínnel előkezelt szója táptalaj-agar | 12 | < Tő3 |
Ha a 2. példában a mintákat a találmány szerinti eljárással analizáljuk, kitűnő egyezést kapunk a Schwe.iserisches Leb-erxsmittelbuch esíraszámlálási eljárással a 48 óra utáni meghatározás eredményével.
A Schweizer Is ebes Lsbensmitteibuch szerinti csíraszám meghatározással összevetve mindkét minta eredménye nagy biztonsággal a konfidencia-határokon belül van,
A konfidencia-határokon a leírásban az egyes csíraszám meghatározások ± 0,5 logj-s eltérésének, értékét értjük a következő szakirodalommal összhangban: „PHLS Central Public Health Laboratory, 61 -Colindáié Avenue., London NW9 5HT:, UK, distributicn 070, pagss 6 and 7 and appendix 1, distribution date Nov. 16, 1998, report date Dac. 80, 1998. 5
5. Példa: Papírgyártó gép körviz/krétaszuszpenztó (white water)
Pljárás
Olyan 0,5%-os vizes szuszpenziót vizsgálunk, amely körülbelül 0,8 tömeg % arányban tartalmaz Norvégiából származó, természetes őrölt márványt.
A szuszpenziőban a részecskék 60 tomegi-anak mérete < 2 μια, a részecskék 3.5 tömeg%~án.ak mérete pedig < 1 pm. Az iszapot 0,15 tömegé mennyiségű, kereskedelmi forgalomban lévő nátriumpoliakriláttal és körülbelül 0,3 tömegé mennyiségű cellulózrostta-l. (szeltit/szulfát papír pulppal - ahogy azt a papírgyárakban papírgyártásra használják - továbbá 0,05 tömegé mennyiségű, kereskedelmi forgalomban lévő poli(akríl-amíd)-dal diszpergáltuk. Ebből a szuszpenzlóból ml-t steril lombikba pipettázunk. A mintához hozzáadunk 3 ml 3 tömeg %-os trlpszinnel előkezelt szója táptalaj tápoldatot.
Ezután a mintát 20 másodpercen át alaposan keverjük, majd centrifugáljuk. A centrífugálásé 10 percen át 1000 g-n végezzük, majd a tiszta felülnszó fázist elkülönítjük, és CeílFacts készülékkel ana.1.1 zál juk. Az analízist ügy végezzük, hogy megmérjük a részecskeszámot a CeliFacts készülékben közvetlenül a centrifugáidé után (időpont: tud, majd 1 órás (Időpont: 2' órás (időpont:; t^d inkubálás után. Az inkubálás hőmérséklete 30 cC. .Ha a részscskeszámet a részecskék átmérőjének függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk a tiszta fázisban az élő sejtek jelenlétét (csúcs növekedést) és a mikroorganizmusok fajtáját (baktériumok, élesztők vagy gombák) az egyes inkubációs idők után. Azután, hogy az inkubációs idő elérte a közei exponenciális növekedést, a szuszpenzió eredeti szennyezettségét úgy határozzuk meg, nogy exrapoíálunk a t,oh időpontra, összehasonlításként csiraszám meghatározást végzünk a Schweizerisches Lebensmittelbuch szerint, („bestimmung von aeroben mesophiien Keimen, Schweizerisches \2+ •ΦΦ · «X * ν φ φ » Φ 9 „ β «α* « x# »
Lebensmitíelbuch, 56. fejezet, 7.01 rósz, 198 5, évi kiadás,
1988. évi átdolgozott változat.
A csíraszám meghatározása a Scnweízerisches Lebensm.ittelbuch szerint::
A csíraszám meghatározás eredménye 48 óra után: 3,0 x 10: aerob raezof.il csíra/ml szuszpenzió.
A cs írna szám meghatározásának a CellFacts részecskeszámlálőval nyert eredményeit a 6. táblázatban. foglaltuk össze.
6. Példa: ,R CellEaots készülékkel kapott eredmények az 5. példa estén
1. Agarral adalékolt, trípszinnel előkezelt szója táptalaj
| Minta | Ext r a h á 1 ó s ze r | A iíiCCJ i'i ci t'. ci ΓΟ 2 <;i S időigénye í 6 r a) | áerob mezőtii csira/mi szuszpenziő {a csúcs maximumé 1-2,5 um részecskéét-1 mérőnélí |
| 1 : | Trípszinnel előkezelt szója táptalaj-agar | ·'> | 3,45 x lö'' |
XX
| Hinta | Sxtrahálőszer | A. meghatározás időigénye (óra) | gomba/ml szuszpenzió (a 1 csúcs maximuma 5-9 um ré- ] | szeoskeátmérönéi) |
| 1 | iripscinnel előkezelt szója táptalaj-agar | 6 | körülbelül líh ! i |
Ha a 2. példában a mintákat a találmány szerinti eljárással analizáljuk, kitűnő egyezést kapunk a Schweirerisch.es Lebensmittelbuoh cslraszámláiási eljárással a 48 éra utáni meghatározás eredményével.
A Schweízerisehes Lebensmittelbuoh szerinti osíraszám meghatározással összevetve mindkét minta eredménye nagy biztonsággal a konfidencia-határokon belül van.
A konfidencia-határokon a leírásban az egyes csrraszá®. meghatározások ± 0,5 logw eltérésének értékét értjük a következő szakirodalommal összhangban: ,,PHLS Central küblié Health Lakóratory, 61 Col inda-le hvenue., London hW9 5HT, ÜK, distribution 070, pages 6 and 7 and appendix 1, distribution date Nov. 16, 1998, report date Deo. 30, 1998.
6. Példa : Kolloid keményítő sznszpenzlő
El járá s tömegé vizes, kolloid kukoricakeményitő szuszpenziöt vizsgálunk, amint azt a papírgyártásban használják. Ebből 3 mies mintát steril lombikba pípetfázunk. Ehhez a mintához 3 mi 3 tömeg %-os tripszinnel előkezelt szója táptalaj tápoldatot adagolunk. Ezután a mintát 20 másodpercen át alaposan keverjük, majd centrifugáljuk. A centrifugáiást 10 percen át 800 g~n végezzük., majd a tiszta feiülúszé fázist elkülönítjük, és CeliFacts készülékkel analizáljak. Az analízist úgy végezzük, hogy megmérjük a részecskeszámot a CeliFacts készülékben közvetlenül a centrifugálás után (időpont: toh), majd 1 órás (időpont: ttn) és 2 órás (időpont: tan) inkubálás után. Az inkubálás hőmérséklete 30 °C. Ha a részecskeszámot a részecskék átmérőjének függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk a tiszta fázisban az élő sejtek jelenlétét (csúcs növekedést! és a mikroorganizmusok fajtáját (baktériumok, élesztők vagy gombák) az egyes inkubációs idők után. Azután, hogy az inkubációs idő elérte a közel exponenciális növekedést, a szuszpenzió eredeti szennyezettségét úgy határozzuk meg, hogy exrapoláiunk a időpontra. Összehasonlításként csiraszám meghatározást végzünk a Schweizerisches Lebensmitteibuch szerint. („Sestimmung von aeroben mesophílen Keimen, Schweizerisches Lebensmitteibuch, 56. fejezet, 7.01 rész, 1985. évi kiadás, 198b. évi átdolgozott változat).
A csíraszám meghatározása a Schweizerisch.es Lebensmitteibuch szerint:
A csíraszám meghatározás eredménye 48 óra után: 4,0 x 10c aerofo mezofil csira/rai szuszpenzió.
A osiraszám meghatározásának a CeliFacts részscskeszámiálő~ val nyert eredményeit a 7, táblázatban foglaltuk össze.
* ♦ .* ♦ *
- Táblázat: A CellFacts készülékkel kapott eredmények ah. példa esetén
1. Agárral adalékolt, trlpszinnei előkezelt, szója táptalaj
| Minta | Extra-hálós zer | A meghatározás időigénye (óra) | Aerob mezofil csíra/ml szuszpenzíő (a csúcs maximuma 1-2,5 pm részecskeátmérőnél) |
| 1 | Trlpszinnei előkezelt szója táptalaj-agar | 2 | 4,22 x lö” |
| Minta | Hxtrahálőszer | A meghatározás időigénye (óra) | gomba/ml szuszpenzíő ía csúcs maximuma 5-9 pm részecskeátmérőnél) |
| 1 | Trlpszinnei előkezelt szója táptalaj-agar ; | 12 | < ICA |
Ha a 2. példában a mintákat a találmány szerinti eljárással analizáljuk, kitűnő egyezést kapunk a Schweizerisch.es Lebensmittelbuch csiraszámlálási eljárással a 48 éra utáni meghatározás eredményével.
A Schweizerisches Lebensmittelbuch szerinti csiraszám meghatározással összevetve mindkét minta eredménye nagy biztonsággal a konfidencia-határokon belül van.
« «
A konf ídeircía-határokon a leírásban az egyes csiraszám meghatározások ± 0,5 iogiö eltérésének értékét értjük a következe szakirodalommal összhangban: „FH1S Central Public Health Laboratory, €1 Coiíndaie A verme., London W9' 5KT, UK, distribution 070, pages 6 and ? and appendix 1, distribution date bov. 16, 1998, report date Dec. 30, 1998.
7. Példa
Eljárás
A vizsgált minta természetes őrölt márvány 71,5 tömegi-os vizes iszapja. Az iszapban a részecskék 90 tömegé-ának mérete < 2 pm, a részecskék 65 tömegi-ának mérete pedig < 1 pm. Az laza pof 0,5 tömeg% mennyiségű, kereskedelmi forgalomban lévő nátrium-poliakr Háttal diszpergáltuk. Ebből az iszapból 3-3 mi-t steril lombikokba mérünk he és alaposan összekeverjük 3-3 mi megfelelő eztrahálószerrel. Az igy kapott elegyet 800 g-n 10 percen át centrifugáljuk, majd a tiszta felüiűszó fázist elkülönítjük, és CeilFacts készülékkel analizáljuk. Az analízist úgy végezzük, hogy megmérjük a részecskeszámot a CeilFacts készülékben. közvetlenül a centrifugálás után (időpont: tmö, majd 2 órás (időpont: tan»·, 4 órás (időpont: z 7 órás (időpont; t^,) és 17 órás (időpont; tzvú inkubálás után. Az inkubálás hőmérséklete 30H, ha részecskeszámot a részecskék átmérőjének függvényében ábrázoljuk, meghatározhatjuk a tiszta fázisban az élő sejtek jelenlétét (csúcs növekedés) és a mikroorganizmusok fajtáját (baktériumok, élesztők vagy gombák) az egyes inkubációs idők után. Azután, hogy az inkubációs idő elérte a közel exponenciá39
ΦΦΦ» φ »< Φ* *»* « Φ* Φ * »*φ lis növekedést, a szuszpenzíó eredeti, szennyezettségét ügy határozzuk meg, hogy extrapoiáiank a időpontra, összehasonlításként csiraszám meghatározást végzünk a Schweizerisches Lebensmitelboch szerint, {„Bestífíímnng von aeroben mesophilen Keimen, Schweizerisches Lebensmittelbuch, 56. fejezet, 7.01 rész, 1985. évi kiadás, 1988. évi átdolgozott változat.)
Az alkalmazott extraháloszerek:
A technika állása szerint:
1. Desztillált viz
z. 0,9 tömegá-os: N-aCl-oldat, desztillált vízzel készítve, szervetlen ső
3. 0,8 tömeg%-os poliiozi-etilén)-szorbitán-monolaurát (2 mól poli£oxi-etílén)), szerves felületaktív anyag
A találmány szerint
4. 3 töir>eg%-os szerves tápol.dat {agarral adalékoit, tripszinnel előkezelt szója táptalaj)
A csíraszám meghatározása a Schweizerisches Lebensmíttelbuch szerint:
A csíraszám meghatározás eredménye 48 óra után: 5,0 x lö* aerob mezofil csira/ml szuszpenzió,
A csíraszám. meghatározásának a C'ellFacts részecskeszámlálovai nyert eredményeit a 8. táblázatban foglaljak össze.
X ♦
XX *♦ «
8. Táblázat: A CellFacts készülékkel. kapott eredmények a 7. pél-da esetén
| Minta | Sxtrahalőszer | A. meghatározás időigénye (óra) | Aerob mezofír csíra/ml szuszpenzió (a csúcs maximuma 1-2,3 pm részéé s k e á t mé r ő n él) |
| i | Desztillált víz | .......... 17 | 2 x Í0s |
| KaCI oldat | 18 | 1,6 x 10J | |
| 3 | poli foxi-etzlen)- | 24 | >10 |
| szórbitén-mon ο1aurá t | |||
| 4 | szerves tápoldat | ir , 6 x 1(4 |
Az 1-3. minták elsősorban egyértelműen demonstrálják, hogy nagyon bosszú inkubációs idő szükséges, amíg az eredményt megkapjuk másodsorban pedig még ezek az eredmények is pontatlanok (Referencia: csíraszám meghatározás Schweizerisches
Lebensmittelbuoh szerint).
Az 1-3. minták esetén Schwerzerisehes Lebensmittelbuoh szerint meghatározott csiraszómhoz viszonyított ingadozás messze tűi van a konfidencia határon.
Az 1, és 2. minta nem tartalmaz szerves anyagot, amely tápanyagként szolgálhatna. A 3. minta tartalmaz szerves anyagot. Ez az anyag azonban nem tápanyagként, hanem inkább inhibitorként hat. A Tween 20 bizonyos gátló hatása már megfigyelhető volt a
5Χ ' φφ«9 φ Φ * Φ »ΦΦ φ *
Φ Φ « Φ φφ V* ΦΦΦ φ
4-1 példa esetén, ahol Tween 20-at alkalmaztunk a 4-2. példa eredményeiken vrszonyitva, A tápoldatként ható szerves anyag azonban, amelyet a találmány szerint használtunk, képes volt megakadályozni, nogy pontatlan eredményt kapjunk a 4-2 példa esetében. A 7-4 példával összehasonlítva azonban a 7-3 példa végzetesen hibás eredményt adott.
A 4. minta, amelyet a találmány szerinti eljárással analizáltunk kitűnő egyezést mutatott a Schweizerisches Lebensmittelbuch alapján végzett csíraszámlálással.
A 4. minta esetén Schweizerisches Lebensmittelbuoh szerinti csiraszám meghatározáshoz viszonyított eltérés nagy biztonsággal a konfídencia-határokon belül van.
A konfidencia-határokon a leírásban az egyes csiraszám meghatározások ± 0,5 loguj eltérésének értékét értjük a következő szakirodalommal összhangban: „akis Central Public Health Laboratory, 61 Colindale Avenne., London I7W9 5HT, OK, oistribution 070, paces 6 and 7 and appendix 1, distribution date Hov. 16, 1998, report date bee. 30, 1990.
Az előnyös tápközegek összetétele
Tripszinnel előkezelt szója táptalaj
Bacto tripton 17,0 g/1
Bacto szőj tón 3,0 g/1
Bacto dextröz 2,5 g/1
Hátríum-kloríd 5,0 g/I
Díkálium-foszfát 2,5 g/1
X > ««
Φφφ * ♦ Φ * * 9
X >), Φ* ΦβΦ* X Φ» »
TAT táptalaj alap
Bacto trípton.
Azolektin
20,0 g/1 5,0 g/1
T áp t alaj („nntrient broth)
Bacto marhahús kivonat 3, 0 g/1
Bacto peptin 5,0 g/1
Kazeinből származó peptid, trlpszinnel emésztve
Kazeinből származó pépéin 1,0 g/1
Nátrium-kloríd I.,8 g/1 .Agárlemez cs 1 raszám Iájáéhoz
Bacto-trípton
Siesz tőkivonat
Bacto dexróz
Agár No.l
5,0 g/1 2,5 g/I 1,0 g/1 5,0 g/1
Stílén-glikoi
Stilén-glikoi
Azolektin
N á t r i®-klorld
1,0 g/1 5,0 g/1 1, 8
Glicerin
Glicerin
Azolektin
N á t r1um~klorld
1,0 g/i 5,0 g/1 1,8 g./i
73082/ OS
Claims (16)
1. Eljárás ásványi anyagokat és/vagy pigmenteket és/vagy töltőanyagokat és/vagy rostanyagokat tartalmazó szuszpenziők, emulzió vagy diszperziók mikrobiológiai szennyeződéseinek kvantitatív és/vagy kvalitatív meghatározására, azzal jellemezve, hogy a; a szuszpenziőkböl,, emulziókból vagy diszperziókból vett mintát egy vagy több mikroorganizmusok által lebontható szerves anyaggal elegyítünk, ezen anyagok elválasztószerek' a mikroorganizmusok és az ásványi anyagok, pigmentek, töltőanyagok és/vagy rostanyagok között, ahol a biológiailag lebontható anyag mennyiségének megválasztásával lehetővé tesszük a mikroorganizmusoknak az ásványi anyagoktól, töltőanyagoktól, pigmentektől és/vagy rostanyagoktól való elválasztását, és ahol adott esetben, a mikroorganizmusok számának megnövelésére inkubációt végzünk,
b) az igy kapott elegyet centrifugáljuk, így az ásványi anyagok és/vagy töltőanyagok és/vagy pigmentek és/vagy rostanyagok túlnyomó részét elválasztjuk a mikroorganizmusoktól, míg a mikroorganizmusok a felülúszőban vannak, és
c) a eentrifugáiással nyert vizes felüiúszót előnyösen egyszer vagy többször Ínkubáljuk, és igy a mikroorganizmusok számát megnöveljük a felülúszóban, és
d) meghatározzuk ebben a f elül ószóban, a. mikroorganizmusok számút és/vagy méretét és/vagy típusát.
73. Ο 82 / DE 80105380
2:. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a mikrobiológiai szennyeződést baktériumok és/vagy gombák és/vagy élesztők alkotják.
3. Az 1, vagy 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, Hogy azt a szerves anyagot, amelyet a mikroorganizmusok lebonthatnak, a mikroorganizmusok tápközegének formájában adagoljuk.
4. A 3. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a tápközeg szénforrást, nitrogénforrást, foszfát és/vagy kénforrást, valamint adott esetben ásványi anyagokat, növekedési faktorokat és/vagy vitaminokat tartalmaz.
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a oentrifugáiást 100-1500 g értéken, előnyösen 200-1200 g, különösen előnyös esetben 60Ö-1000 g értéken végezzük.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az inkubációt 20-37°C-on, előnyösen 28-34°C-on és legelőnyösebben 31,5-32,S°C-on végezzük.
7. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy olyan tápközeget alkalmazunk, amely a meghatározandó mikroorganizmusok szelektív növekedését teszi lehetővé.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy tápközegként trípton azoiektin/polioxietilén (20) szorbitán (TAT)-monoi aktát táptalaj-agart és/vagy glükózéidatot és/vagy pepton/kazeint és/vagy általános táptalajt inutrient broth), előnyösen tripszínnel előkezelt szója táptalaj -agart használunk.
•Λ' ·>
9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a mifcroorgsnizmusok tápkozegének koncentrációja előnyösen 0,1-10 tömeg!, előnyösebben 2-5 tömeg! és legelőnyösebben 3 tömeg %,
10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a szuszpenzió, emulzió vagy diszperzió tartalmaz továbbá kolloid formában lévő polimereket is.
11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a baktériumok és/vagy gombák és/vagy élesztők minőségi és/vagy mennyiségi meghatározását egyidejűleg, egy analízisben végezzük.
12. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a centrifagáiésí lépést 1-30 percig, előnyösen 2-.15 percig, különösen, előnyösen 10 percig végezzük.
13. A 1-12. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a centrifugálással nyert, a mikroorganizmusokat tartalmazó fázist a mikroorganizmusok mennyiségére nézve részeoskenagyság-eiemzö eljárással analizáljuk.
14. A 13. Igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmusok méretét és számát úgy határozzuk meg, hogy a mikroorganizmus mintát vákuum alkalmazásával olyan mérőpóruson szívatjuk át, amelynek meghatározott hossza és átmérője van, ahol feszültséget adunk a pórus bemenetre és kimenetre és áramimpulzust mérünk a mikroorganizmusoknak a mintán való áthaladásakor, amely áram-impulzus közvetlen összefüggésben van a mikroorganizmus térfogatával, és az áramlmpuizusok száma a mikroorganizmusok számának felei meg.
,ϊ *
15, A 1-14. igénypontok bármelyike: szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a centrifugálissal nyert, a mikroorganizmusokat tartalmazó fázist a mikroorganizmusok mennyiségére nézve a mikroorganizmusok által termelt ATF meghatározásával analizáljuk.
16. Az 1-15. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a diszperziók, emulziók és szuszpenziók mikrobiológiai szennyeződését a fémiparban, a pigment és papíriparban valamint a papíripari krétasznszpenziok ' :z - - esetén vizsga1juk.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19904057A DE19904057C2 (de) | 1999-02-02 | 1999-02-02 | Verfahren zur Bestimmung der mikrobiellen Kontamination |
| PCT/EP2000/000328 WO2000046392A2 (de) | 1999-02-02 | 2000-01-17 | Verfahren zur bestimmung der mikrobiellen kontamination |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0105360A2 HUP0105360A2 (hu) | 2002-05-29 |
| HUP0105360A3 HUP0105360A3 (en) | 2004-03-01 |
| HU228078B1 true HU228078B1 (en) | 2012-10-29 |
Family
ID=7896120
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0105360A HU228078B1 (en) | 1999-02-02 | 2000-01-17 | Method for determining microbial contamination |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6627413B1 (hu) |
| EP (1) | EP1149172B1 (hu) |
| KR (1) | KR100790011B1 (hu) |
| AR (1) | AR022339A1 (hu) |
| AT (1) | ATE307894T1 (hu) |
| AU (1) | AU778034B2 (hu) |
| BR (1) | BR0007965B1 (hu) |
| CA (1) | CA2361665C (hu) |
| CO (1) | CO5241363A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ302995B6 (hu) |
| DE (2) | DE19904057C2 (hu) |
| ES (1) | ES2251957T3 (hu) |
| HU (1) | HU228078B1 (hu) |
| MX (1) | MXPA01007694A (hu) |
| NO (1) | NO328953B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ513627A (hu) |
| SK (1) | SK10342001A3 (hu) |
| TR (1) | TR200102213T2 (hu) |
| TW (1) | TWI262214B (hu) |
| WO (1) | WO2000046392A2 (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050070701A1 (en) * | 2003-09-29 | 2005-03-31 | Hochstetler Spencer Erich | Detection of living cells in polymers or pigments |
| FR2881064A1 (fr) | 2005-01-26 | 2006-07-28 | Omya Development Ag | Procede de controle de la contamination microbienne, suspensions minerales obtenues et leurs utilisations |
| FR2937977A1 (fr) * | 2008-11-03 | 2010-05-07 | Coatex Sas | Procede de detection de la contamination microbienne par bioluminescence dans des epaississants acryliques associatifs et dans les produits les contenant. |
| DE102011077238B4 (de) * | 2011-06-09 | 2016-03-31 | Bayerische Motoren Werke Aktiengesellschaft | Verfahren zum Nachweis von Mikroorganismen in einem Hohlraumkonservierungsmittel |
| EP2959007B1 (en) * | 2013-02-25 | 2018-05-02 | Mirheidari, Saeed | Method and device for determining microbial pollution level in different environments and processes |
| US9068217B2 (en) | 2014-02-25 | 2015-06-30 | Saeed Mir Heidari | Method and device for determining microbial pollution level in different environments and processes |
| EP3184644A1 (en) * | 2015-12-22 | 2017-06-28 | Omya International AG | Microbial cell viability assay for detection of or determining slurry contamination |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1571060A1 (ru) * | 1988-02-12 | 1990-06-15 | Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ | Способ определени центробежной раздел емости суспензий микроорганизмов |
| WO1991004318A1 (en) * | 1989-09-20 | 1991-04-04 | Trancel Corporation | Cell separation invention |
| JPH04228097A (ja) * | 1990-07-02 | 1992-08-18 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | ミルク試料からの細胞分離および濃縮方法とそのキット |
| JP3542366B2 (ja) * | 1993-11-15 | 2004-07-14 | キヤノン株式会社 | 微生物の分離方法および微生物個体数の計測方法 |
| DE19503120A1 (de) * | 1995-02-01 | 1996-08-08 | Passavant Werke | Verfahren zur Klärung von u.a. mit mineralischen Bestandteilen verschmutzten Abwässern |
| DE19532802C1 (de) * | 1995-08-25 | 1997-05-28 | Biophil Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur Verwertung von Schleifschlämmen |
| DE19625137A1 (de) * | 1996-06-24 | 1998-01-08 | Basf Ag | Verwendung eines Bioluminszenz-Tests zum Nachweis von Mikroorganismen in Dispersionen, die Polymere und/oder Pigmente enthalten |
| US6440689B1 (en) * | 1999-12-30 | 2002-08-27 | Ondeo Nalco Company | Measurement of microbiological activity in an opaque medium |
-
1999
- 1999-02-02 DE DE19904057A patent/DE19904057C2/de not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-01-17 BR BRPI0007965-0A patent/BR0007965B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-01-17 DE DE50011446T patent/DE50011446D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-17 ES ES00901110T patent/ES2251957T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-17 US US09/889,545 patent/US6627413B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-17 AT AT00901110T patent/ATE307894T1/de active
- 2000-01-17 MX MXPA01007694A patent/MXPA01007694A/es not_active IP Right Cessation
- 2000-01-17 NZ NZ513627A patent/NZ513627A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-01-17 EP EP00901110A patent/EP1149172B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-17 WO PCT/EP2000/000328 patent/WO2000046392A2/de active IP Right Grant
- 2000-01-17 SK SK1034-2001A patent/SK10342001A3/sk unknown
- 2000-01-17 AU AU21091/00A patent/AU778034B2/en not_active Ceased
- 2000-01-17 TR TR2001/02213T patent/TR200102213T2/xx unknown
- 2000-01-17 CA CA2361665A patent/CA2361665C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-17 KR KR1020017009641A patent/KR100790011B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-01-17 CZ CZ20012588A patent/CZ302995B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-01-17 HU HU0105360A patent/HU228078B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-01-28 CO CO00004924A patent/CO5241363A1/es not_active Application Discontinuation
- 2000-01-28 AR ARP000100390A patent/AR022339A1/es unknown
- 2000-01-29 TW TW089101541A patent/TWI262214B/zh not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-07-13 NO NO20013506A patent/NO328953B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE19904057C2 (de) | 2003-01-30 |
| CA2361665C (en) | 2010-03-16 |
| CZ302995B6 (cs) | 2012-02-15 |
| MXPA01007694A (es) | 2002-03-14 |
| NZ513627A (en) | 2001-09-28 |
| EP1149172B1 (de) | 2005-10-26 |
| AU2109100A (en) | 2000-08-25 |
| TWI262214B (en) | 2006-09-21 |
| US6627413B1 (en) | 2003-09-30 |
| WO2000046392A2 (de) | 2000-08-10 |
| WO2000046392A3 (de) | 2000-12-14 |
| TR200102213T2 (tr) | 2002-02-21 |
| ATE307894T1 (de) | 2005-11-15 |
| CO5241363A1 (es) | 2003-01-31 |
| KR20010103001A (ko) | 2001-11-17 |
| AR022339A1 (es) | 2002-09-04 |
| BR0007965B1 (pt) | 2011-09-20 |
| KR100790011B1 (ko) | 2007-12-31 |
| NO20013506L (no) | 2001-10-01 |
| SK10342001A3 (sk) | 2002-01-07 |
| AU778034B2 (en) | 2004-11-11 |
| NO20013506D0 (no) | 2001-07-13 |
| HUP0105360A3 (en) | 2004-03-01 |
| HUP0105360A2 (hu) | 2002-05-29 |
| BR0007965A (pt) | 2001-11-06 |
| ES2251957T3 (es) | 2006-05-16 |
| DE19904057A1 (de) | 2000-08-10 |
| NO328953B1 (no) | 2010-06-28 |
| EP1149172A2 (de) | 2001-10-31 |
| CZ20012588A3 (cs) | 2001-11-14 |
| DE50011446D1 (de) | 2005-12-01 |
| CA2361665A1 (en) | 2000-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2402575A1 (en) | Method and apparatus for detecting the presence of microbes and determining their physiological status | |
| JP4118927B2 (ja) | 微生物計量装置の正常状態確認検査用検体 | |
| HU228078B1 (en) | Method for determining microbial contamination | |
| JP2006284604A5 (hu) | ||
| WO2003067211A3 (en) | An improvement in a method bacterial endospore quantification using lanthanide dipicolinate luminescence | |
| Kennedy et al. | Estimating cell concentration in the presence of suspended solids: A light scatter technique | |
| JP3740019B2 (ja) | 微生物計量装置 | |
| JPS60500557A (ja) | 微生物学的試験方法および装置 | |
| CA1257649A (en) | Measurement of microbial activity using lyophilized bioelectrochemical cell components | |
| WO2010043021A1 (en) | Method of identifying endogenous fluorescent biological markers for monitoring cells | |
| JP2735901B2 (ja) | 微生物の生細胞，死細胞および微生物細胞以外の粒子の数の測定方法 | |
| JPS6361144A (ja) | 微生物測定方法 | |
| JP3995888B2 (ja) | 微生物計量方法および微生物計量装置 | |
| JP2007093614A (ja) | 微生物計量方法 | |
| JP2947305B2 (ja) | 微生物測定方法 | |
| US11970726B2 (en) | Method for quantifying the cultivability of individual bacterial cells using culture independent parameters | |
| Lelkes et al. | Direct fluorometric assay of catecholamine secretion from isolated bovine adrenal chromaffin cells | |
| Cleary et al. | Intrinsic optical properties of bacterial spores and cells | |
| Saquet | ATP-bioluminescence technique for fruit quality assessments: a detailed methodology for analysis of adenylate nucleotides | |
| SU624164A1 (ru) | Способ определени содержани экзогенного субстрата в питательной среде и устройство дл его осуществлени | |
| JP2001153864A (ja) | 発光式ｂｏｄ測定方法 | |
| JPH09262095A (ja) | 微生物数の計測方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: OMYA DEVELOPMENT AG, CH Free format text: FORMER OWNER(S): OMYA AG., CH |
|
| FH91 | Appointment of a representative |
Free format text: FORMER REPRESENTATIVE(S): S.B.G.& K. SZABADALMI UEGYVIVOEI IRODA, HU Representative=s name: DR. KOCSOMBA NELLI UEGYVEDI IRODA, HU |
|
| FH92 | Termination of representative |
Representative=s name: S.B.G.& K. SZABADALMI UEGYVIVOEI IRODA, HU |
|
| HC9A | Change of name, address |
Owner name: OMYA INTERNATIONAL AG, CH Free format text: FORMER OWNER(S): OMYA AG., CH; OMYA DEVELOPMENT AG, CH |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |