HU224830B1 - Avian polynucleotide vaccine formula - Google Patents

Avian polynucleotide vaccine formula Download PDF

Info

Publication number
HU224830B1
HU224830B1 HU9902790A HUP9902790A HU224830B1 HU 224830 B1 HU224830 B1 HU 224830B1 HU 9902790 A HU9902790 A HU 9902790A HU P9902790 A HUP9902790 A HU P9902790A HU 224830 B1 HU224830 B1 HU 224830B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
vaccine
gene
plasmid
virus
seq
Prior art date
Application number
HU9902790A
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-Christophe Audonnet
Annabelle Bouchardon
Michel Riviere
Original Assignee
Merial Sas
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merial Sas filed Critical Merial Sas
Publication of HUP9902790A2 publication Critical patent/HUP9902790A2/hu
Publication of HUP9902790A3 publication Critical patent/HUP9902790A3/hu
Publication of HU224830B1 publication Critical patent/HU224830B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A61K39/17—Newcastle disease virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A61K39/255—Marek's disease virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16311—Mardivirus, e.g. Gallid herpesvirus 2, Marek-like viruses, turkey HV
    • C12N2710/16334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/10011—Birnaviridae
    • C12N2720/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/10011—Circoviridae
    • C12N2750/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18111—Avulavirus, e.g. Newcastle disease virus
    • C12N2760/18134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18311—Metapneumovirus, e.g. avian pneumovirus
    • C12N2760/18334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/22011—Dicistroviridae
    • C12N2770/22034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
    • C12N2770/32434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

(57) Kivonat
A találmány madarakban alkalmazható vakcinakészítményekre vonatkozik, amelyek legalább Newcastle-betegség-vírus elleni polinukleotid-vakcinavalenciát tartalmaznak, amely madárpatogén valenciagént magában foglaló plazmidot tartalmaz a gént úgy integrálva, hogy arról az in vivő a gazdasejtben expresszálódjék. A vakcina további valenciákat tartalmazhat az alább felsoroltak közül: Marek-féle betegség vírus gB- és gD-gént; Newcastle-betegségvírus-HN- és -F-gént; fertőző burzabetegségvírus-VP2-gént; fertőző bronchitisvírus-S-, -M- és -N-géneket; és/vagy fertőző anémiavírus (VP1+VP2)-géneket.
A találmány szerinti vakcinakészítmények egyszerre több, madarakban, például csirkékben kóros elváltozásokat okozó vírus elleni vakcinázást és megerősítő oltást tesznek lehetővé.
HU 224 830 Β1
A leírás terjedelme 40 oldal (ezen belül 28 lap ábra)
HU 224 830 Β1
A találmány tárgyát madárfajok, előnyösen csirkék vakcinázására alkalmas vakcinakészítmények képezik. A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti vakcinák beadására alkalmas vakcinázási eljárások.
A korábbiakban már számos olyan vakcinakombináció alkalmazását javasolták, amely egyidejűleg több, csirkékben kóros elváltozásokat okozó vírus ellen irányult.
A napjainkig kifejlesztett vakcinakombinációkat inaktivált vagy élő vakcinákból állították elő. Ezek alkalmazása olyan problémákat vet fel, mint az egyes valenciák közti kompatibilitás, valamint a stabilitás kérdése. Valóban elengedhetetlen, hogy biztosítsuk a különböző vakcinavalenciák közti kompatibilitást, egyrészt az alkalmazott különböző antigének, másrészt az alkalmazott készítmények szempontjából. Felmerül továbbá az ilyen kombinált vakcinák tartósításának, valamint biztonságosságának kérdése, különösen adjuvánsok jelenlétében. Általánosságban ezek a vakcinák igen költségesek.
A WO-A-90 11092, WO-A-92 19183,
WO-A-94 21797 és WO-A-95 20660 számú nemzetközi közzétételi iratok a közelmúltban kifejlesztett technológia szerint előállított polinukleotidvakcinákra vonatkoznak. Ismeretes, hogy ezek a vakcinák olyan plazmidokat tartalmaznak, amelyek képesek a beléjük inszertált antigént gazdasejtben expresszálni. A vakcinák beadásának valamennyi ismert módját javasolták már (intraperitoneális, intravénás, intramuszkuláris, transzkután, intradermális, nyálkahártyán át történő és hasonló beadási módokat). Különböző vakcinázási eljárások alkalmazhatók, például aranyrészecskék felszínére vitt DNS-t lőhetünk ki úgy, hogy az behatoljon az állat bőrébe [Tang és munkatársai: Natúré 356, 152-154, (1992)]; vagy alkalmazhatunk folyadéksugár-injektort, amely lehetővé teszi a bőr, izom, zsírszövet és emlőszövet egyidejű transzfektálását [Furth és munkatársai: Analytical Biochemistry 205, 365-368 (1992)].
A polinukleotidvakcinák tartalmazhatnak csupasz DNS-t; vagy például lipidekbe csomagolt vagy kationos liposzómákba formulázott DNS-t.
Ennek megfelelően a találmány tárgyát képezi multivalens vakcinakészítmény, amely egyszerre több, madarakra patogén vírussal szembeni vakcinázási tesz lehetővé.
A találmány tárgyát képezi továbbá különböző valenciák kombinációját tartalmazó vakcinakészítmény, amely ugyanakkor megfelel valamennyi feltételnek, amely a különböző valenciák kompatibilitását és stabilitását biztosítja.
A találmány tárgyát képezi továbbá vakcinakészítmény, amely lehetővé teszi különböző valenciák kombinálását ugyanazon vivőanyagban.
A találmány tárgyát képezi továbbá vakcinakészítmény, amelynek alkalmazása egyszerű és nem költséges.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás tyúkfélék (Gallinaceae) immunizálására, amely lehetővé teszi védettség, ezen belül multivalens védettség létrehozását nagy hatékonysággal és hosszú időtartamra, ugyanakkor biztonságosan és oltási maradványok nélkül.
Ennek megfelelően a találmány tárgyát képezik madarakon alkalmazható vakcinakészítmények, amelyek legalább három polinukleotid-vakcinavalenciát tartalmaznak, és ezek mindegyike egy madárpatogén valenciagént magában foglaló plazmidot tartalmaz úgy inszertálva, hogy arról a gén in vivő a gazdasejtben expresszálódjék, a következő valenciák közül: Marek-féle betegség vírus („Marek’s disease vírus”; MDV), Newcastle-betegség-vírus („Newcastle’s disease vírus”; NDV), fertőző burzabetegség-vírus („infectious bursal diseases vírus”; IBDV), fertőző bronchitisvírus („infectious bronchitis vírus; IBV), fertőző anémiavírus (CAV), fertőző laringotracheitiszvírus („infectious laryngotracheitis vírus”; ILTV), encefalomielitisz- (agyvelőgyulladás) vírus („avian encephalomyelitis vírus”; AEV) vagy madár-leukózisvírus („avian leukosis vírus”; ALV), pneumovirózisvírus és/vagy madárinfluenza- („avian plague”) vírus; és a plazmidok - az egyes valenciáknak megfelelően - egy vagy több gént tartalmaznak, az alább felsoroltak közül: a Marek-féle betegség vírusának gB- és gD-génjét, a Newcastle-betegség vírusának HN- és F-génjét, a fertőző burzabetegség vírusának VP2-génjét, a fertőző bronchitis vírusának S-, M- és N-génjét, a fertőző anémia vírusának VP1+VP2-régióját, a fertőző laringotracheitisz vírusának gB- és gD-génjét, az encefalomielitisz vírusának env- és gag/pro génjét, a pneumovirózis vírusának F- és Ggénjét és/vagy a madárinfluenza vírusának HA-, N- és NP-génjét.
A leírásban a „valencia” kifejezés alatt legalább egy olyan antigént értünk, amely adott patogén vírussal szemben védettséget vált ki; ez a valencia szubvalenciaként tartalmazhat az adott patogén egy vagy több törzséből származó egy vagy több természetes vagy módosított gént.
A leírásban „patogén ágens gén” alatt nemcsak teljes géneket értünk, hanem azokat a különböző nukleotidszekvenciákat, egyebek között fragmentumokat is, amelyek megtartották protektív immunválaszt kiváltó tulajdonságukat. A „gén” kifejezés, a példákban pontosan meghatározott szekvenciákon felül, vonatkozik az azokkal ekvivalens nukleotidszekvenciákra is, azaz olyan szekvenciákra, amelyek eltérnek ugyan a példákban ismertetett szekvenciáktól, de ugyanazt a proteint kódolják. A kifejezés vonatkozik továbbá adott patogén más törzseinek nukleotidszekvenciáira, amelyek keresztvédettséget hoznak létre, vagy egy adott törzzsel vagy törzscsoporttal szemben biztosítanak védelmet. Ezenfelül az vonatkozik olyan nukleotidszekvenciákra, amelyek annak érdekében lettek módosítva, hogy elősegítsék azok in vivő expresszáltathatóságát a gazdaállatban, de amelyek ettől eltekintve ugyanazt a proteint kódolják.
Előnyösen a találmány szerinti vakcinakészítmény három valenciát tartalmaz, a Marek-féle betegség, a fertőző burzabetegség, a fertőző anémia és/vagy a Newcastle-betegség kórokozói közül. Előnyösen a készítményt a fertőző bronchitisvalenciával is kiegészíthetjük.
Három, 4 vagy 5 valencia alkalmazása mellett a készítményt kiegészíthetjük egy vagy több, következő va2
HU 224 830 Β1 lenciával: madárinfluenza-, laringotracheitisz-, pneumovirózis- és/vagy encefalomielitiszvalenciák.
A Marek-féle betegség valencia esetében alkalmazhatjuk a gB- és gD-glikoproteineket kódoló géneket, több különböző vagy egyazon plazmidba integrálva. Előnyösen azonban a gB-glikoproteint kódoló gént önmagában alkalmazzuk.
A Newcastle-betegség-valencia esetében előnyösen két gént, a HN- és F-láncokat kódoló géneket alkalmazhatjuk, két különböző vagy egyazon plazmidba integrálva.
A fertőző bronchitisvalencia esetében előnyösen az S jelzésű gént alkalmazhatjuk. Más, kevésbé előnyös megoldás szerint az S és M jelzésű géneket társíthatjuk egyetlen vagy több különböző plazmidban.
A fertőző anémiavalencia esetében előnyösen két gént, a VP1 és VP2 jelzésű géneket alkalmazhatjuk, azonos plazmidban kombinálva.
A fertőző laringotracheitiszvalencia esetében előnyösen a gB-régiót kódoló gént egymagában alkalmazzuk. Más, kevésbé előnyös megoldás szerint a gB- és gD-glikoproteineket kódoló géneket társíthatjuk több különböző vagy egyetlen plazmidban.
A pneumovirózisvalencia esetében előnyösen két gént, az F és G jelzésű géneket alkalmazhatjuk, egyetlen vagy több különböző plazmidban.
A madárinfluenza-valencia esetében előnyösen a HA jelzésű gént alkalmazzuk. Adott esetben kevésbé előnyös megoldás szerint a HA-gént társíthatjuk az NP és/vagy N jelzésű génekkel, több különböző vagy egyetlen plazmidban. Előnyösen több különböző, elsősorban mezei izolátum („found in the field) influenza-vírustörzsből származó HA-szekvenciát kombinálunk ugyanazon vakcinában. Másfelől, az NP jelzésű gén keresztvédettséget biztosít más madárinfluenza-törzsekkei szemben, ezért egyetlen vírustörzsből származó NP-szekvencia alkalmazása elegendő.
Az encefalomielitiszvalencia esetében előnyösen az env-gént alkalmazzuk.
A találmány szerinti vakcinakészítményt 0,1 ml térfogattól 1 ml térfogatig terjedő mennyiségben; és különösen előnyösen 0,3 ml térfogattól 0,5 ml térfogatig terjedő mennyiségben adagoljuk.
Általánosságban az adag plazmidtípusonként 10 ng mennyiségtől 1 mg mennyiségig; előnyösen 100 ng mennyiségtől 500 pg mennyiségig; előnyösebben 0,1 pg mennyiségtől 50 pg mennyiségig terjed.
Előnyösen csupasz plazmidot alkalmazunk, egyszerűen elegyítve a vakcina-vivőanyaggal, amely általában fiziológiás konyhasóoldat vagy hasonló. Természetesen alkalmazhatunk bármely, a technika állása szerint ismert polinukleotidvakcina-formát, előnyösen liposzómákban formulázva.
Mindegyik plazmid promotert tartalmaz, amelynek irányítása alatt biztosított az inszertált gén(ek) expressziója a gazdaszervezetben. Ez általában egy erős eukarióta promoter, például citomegalovírus korai CMV-IE-promoter, amely lehet humán vagy egéreredetű, vagy adott esetben lehet egyéb, például patkány-, sertés- vagy tengerimalac-eredetű.
Általánosságban a promoter lehet virális vagy sejteredetű. A CMV-IE-promoteren felül, víruseredetű promoterként alkalmazhatjuk az SV40-vírus korai vagy késői promoterét, vagy a Rous-szarkóma-vírus LTR-promoterét. A promoter származhat továbbá abból a vírusból, amelyből a gént izoláltuk, lehet például a gén saját promotere.
Sejteredetű promoterként alkalmazhatunk citoszkeletongén-promotert, mint például dezminpromotert [Bolmont és munkatársai: Journal of Submicroscopic Cytology and Pathology 22, 117-122 (1990)], vagy más megoldás szerint, az aktinpromotert.
Amikor egyazon plazmidban több gén van jelen, azokat elhelyezhetjük azonos vagy két különböző transzkripciós egységen.
A találmány szerinti különböző vakcinavalenciákat előnyösen úgy kombináljuk, hogy az egyes valenciáknak megfelelő antigéneket expresszáló plazmid-polinukleotidokat elegyítjük, vagy más eljárás szerint több valenciának megfelelő antigéneket expresszáltathatunk ugyanarról a plazmidról.
A találmány tárgyát képezik továbbá monovalens vakcinakészítmények, amelyek a fenti vírusok valamelyikéből származó, egy vagy több fent ismertetett gént kódoló, egy vagy több plazmidot tartalmaznak. Monovalens jellegüktől eltekintve ezek a készítmények a fent ismertetett jellemzőkkel rendelkeznek, ami a gének kiválasztását, azok kombinációját, a plazmidok összetételét, a dózistérfogatot, a dózist és hasonlókat illeti.
A monovalens vakcinakészítmények alkalmazhatók továbbá (i) a fent ismertetett polivalens vakcinakészítmények előállítására; (ii) adott kórkép ellen, önmagukban; (iii) más patogén elleni egyéb típusú vakcinával (élő, vagy inaktivált teljes, rekombináns vagy alegységvakcinával) kombinálva; (iv) korábbi vakcinázást követően, emlékeztető immunizálásra, az alább ismertetettek szerint.
A találmány tárgyát képezi továbbá a találmány szerinti egy vagy több plazmid alkalmazása madarak számára készült vakcina előállítására, amely hagyományos, a technika korábbi állása szerinti (mono- vagy multivalens) vakcinával - előnyösen élő egész organizmust tartalmazó vakcinával, inaktivált egész organizmust tartalmazó vakcinával, alegységvakcinával és/vagy rekombináns vakcinával - már egyszer kezelt állatok vakcinázására szolgál. Ez az első vakcina a plazmid (plazmidok) által kódolt antigént (antigéneket) vagy keresztvédettséget nyújtó antigént (antigéneket) biztosít (azaz tartalmazza vagy expresszálni képes azokat).
Megjegyzendő, hogy a polinukleotidvakcina erős emlékeztető tulajdonságot mutat, amely az immunválasz felerősítésében és hosszan tartó immunitásban nyilvánul meg.
Általánosságban első vakcinaként alkalmazhatunk kereskedelemben kapható, különböző állatorvosi vakcinákat előállító cégektől beszerezhető vakcinákat.
A találmány tárgyát képezi továbbá vakcinázókészlet, amely a találmány szerinti vakcinakészítményt és egy fent ismertetett, első vakcinázásra alkalmas vakcinát tartalmaz. A találmány tárgyát képezi továbbá a ta3
HU 224 830 Β1 lálmány szerinti vakcinakészítmény, amelyhez írásos alkalmazási utasítás van csatolva, amelyen fel van tüntetve, hogy a készítményt első vakcinázást követően, emlékeztető oltásra szánjuk, a fent ismertetettek szerint.
A találmány tárgyát képezi továbbá madarak vakcinázására alkalmas eljárás, amely szerint a fent ismertetett hatásos vakcinakészítményt adagoljuk. Ezen vakcinázási eljárás szerint a vakcinakészítmény egy vagy több adagját adjuk be, egymást követően rövid időtartam alatt és/vagy hosszabb időközönként.
Ezen vakcinázási eljárások szerint a találmány szerinti vakcinakészítményeket beadhatjuk különböző, polinukleotidvakcinák beadására korábban már javasolt módokon, ismert adagolási technológiák szerint.
Különösen előnyösen a vakcinakészítményt intramuszkulárisan, in ovo, intraokulárisan, porlasztással vagy ivóvízzel adagoljuk.
Az antigének prezentálásának hatékonysága az immunrendszer felé szövetféleségenként eltérő. Különösen a légzőrendszer nyálkahártyája képez gátat a kórokozók bejutásának, ezenfelül az kapcsolatban áll limfoid szövetekkel, amelyek támogatják a helyi immunitást. Ráadásul a nyálkahártyával, így a szájüreg, a garat és a hörgők nyálkahártyájával történő érintkeztetéssel beadott vakcina nyilvánvalóan alkalmas nagyszámú állat egyidejű vakcinázására.
Ennek megfelelően a találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a vakcinakészítményeket nyálkahártyán át adagoljuk, közelebbről porlasztás, „spray” vágy ivóvíz útján. A találmány szerinti vakcinakészítményeket és adagolási eljárásokat ebben az összefüggésben alkalmazhatjuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá vakcinázási eljárás, amely során a fent ismertetettek szerint első vakcinázást végzünk, majd a találmány szerinti vakcinakészítménnyel emlékeztető vakcinázást végzünk.
A találmány szerinti eljárás egy előnyös megvalósítási módja szerint az állatnak első alkalommal hagyományos vakcina - közelebbről inaktivált, élő, attenuált, rekombináns, típusspecifikus, vagy más megoldás szerint alegységvakcina - hatásos adagját adjuk be, azaz első vakcinázást végzünk, majd előnyösen 2-től 6 hétig terjedő időtartamot követően adagoljuk a találmány szerinti mono- vagy polivalens vakcinát.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás a vakcinakészítmények előállítására, nevezetesen a valenciák és azok elegyének előállítására, amint az a leírásból nyilvánvaló.
A találmány szerinti megoldást az alábbiakban konkrét megvalósítási példákon keresztül részletesebben kívánjuk szemléltetni, hivatkozva a leíráshoz csatolt ábrákra.
Az alábbiakban röviden ismertetjük a leíráshoz csatolt ábrákat.
Az 1. ábrán a pVR1012-plazmid látható.
A 2. ábrán a pAB045-plazmid látható.
A 3. ábrán a pAB080-plazmid látható.
A 4. ábrán a Texas-GB-tötzshöz tartozó NDV HNgénjének szekvenciáját mutatjuk be.
Az 5. ábrán a pAB046-plazmid látható.
A 6. ábrán a Texas-GB-törzshöz tartozó NDV F-génjének szekvenciáját mutatjuk be.
A 7. ábrán a pAB047-plazmid látható.
A 8. ábrán a Faragher-törzshöz tartozó IBDV
VP2-génjének szekvenciáját mutatjuk be.
A 9. ábrán a pAB048-plazmid látható.
A 10. ábrán a Massachusetts-41-törzshöz tartozó
IBV S-génjének szekvenciáját mutatjuk be.
A 11. ábrán a pAB049-plazmid látható.
A 12. ábrán a Massachusetts-41-törzshöz tartozó
IBV M-génjének szekvenciáját mutatjuk be.
A 13. ábrán a pAB050-plazmid látható.
A 14. ábrán a Massachusetts-41-törzshöz tartozó
IBV N-génjének szekvenciáját mutatjuk be.
A 15. ábrán a pAB051-plazmid látható.
A 16. ábrán a pAB054-plazmid látható.
A 17. ábrán a pAB055-plazmid látható.
A 18. ábrán a pAB076-plazmid látható.
A 19. ábrán a pAB089-plazmid látható.
A 20. ábrán a pAB086-plazmid látható.
A 21. ábrán a pAB081 -plazmid látható.
A 22. ábrán a pAB082-plazmid látható.
A 23. ábrán a pAB077-plazmid látható.
A 24. ábrán a pAB078-plazmid látható.
A 25. ábrán a pAB088-plazmid látható.
A 26. ábrán a pAB079-plazmid látható.
Szekvencialista
1. azonosító számú szekvencia: AB062-oligonukleotid;
2. azonosító számú szekvencia: AB063-oligonukleotid;
3. azonosító számú szekvencia: AB148-oligonukleotid;
4. azonosító számú szekvencia: AB149-oligonukleotid;
5. azonosító számú szekvencia: AB072-oligonukleotid;
6. azonosító számú szekvencia: AB073-oligonukleotid;
7. azonosító számú szekvencia: a Texas-GB-törzs NDV-HN-génjének szekvenciája,
8. azonosító számú szekvencia: AB091-oligonukleotid;
9. azonosító számú szekvencia: AB092-oligonukleotid;
10. azonosító számú szekvencia: a Texas-GB-törzs NDV-F-génjének szekvenciája,
11. azonosító számú szekvencia: AB093-oligonukleotid;
12. azonosító számú szekvencia: AB094-oligonukleotid;
13. azonosító számú szekvencia: a Faragher-törzsből származó IBDV-VP2-„gén” szekvenciája;
14. azonosító számú szekvencia: AB095-oligonukleotid;
HU 224 830 Β1
15. azonosító számú szekvencia: AB096-oligonukleotid;
16. azonosító számú szekvencia: a Massachusetts41-törzsből származó IBV-S-gén szekvenciája;
17. azonosító számú szekvencia: AB097-oligonukleotid;
18. azonosító számú szekvencia: AB098-oligonukleotid;
19. azonosító számú szekvencia: a Massachusetts-41-törzsből származó IBV-M-gén szekvenciája;
20. azonosító számú szekvencia: AB099-oligonukleotid;
21. azonosító számú szekvencia: AB0100-oligonukleotid;
22. azonosító számú szekvencia: a Massachusetts-41-törzsből származó IBV-N-gén szekvenciája;
23. azonosító számú szekvencia: CD064-oligonukleotid;
24. azonosító számú szekvencia: CD065-oligonukleotid;
25. azonosító számú szekvencia: CD066-oligonukleotid;
26. azonosító számú szekvencia: AB105-oligonukleotid;
27. azonosító számú szekvencia: AB140-oligonukleotíd;
28. azonosító számú szekvencia: AB141-oligonukleotid;
29. azonosító számú szekvencia: AB164-oligonukleotid;
30. azonosító számú szekvencia: AB165-oligonukleotid;
31. azonosító számú szekvencia: AB160-oligonukleotid;
32. azonosító számú szekvencia: AB161-oligonukleotid;
33. azonosító számú szekvencia: AB150-oligonukleotid;
34. azonosító számú szekvencia: AB151-oligonukleotid;
35. azonosító számú szekvencia: AB152-oligonukleotid;
36. azonosító számú szekvencia: AB153-oligonukleotid;
37. azonosító számú szekvencia: AB142-oligonukleotid;
38. azonosító számú szekvencia: AB143-oligonukleotid;
39. azonosító számú szekvencia: AB144-oligonukleotid;
40. azonosító számú szekvencia: AB145-oligonukleotid;
41. azonosító számú szekvencia: AB156-oligonukleotid;
42. azonosító számú szekvencia: AB158-oligonukleotid;
43. azonosító számú szekvencia: AB146-oligonukleotid;
44. azonosító számú szekvencia: AB147-oligonukleotid.
A találmány szerinti megoldást az alábbiakban konkrét megvalósítási példákon keresztül kívánjuk szemléltetni, anélkül azonban, hogy igényünket az ismertetettekre korlátoznánk.
1. példa
A vírusok tenyésztése
A vírusokat megfelelő sejteken tenyésztettük a citopátiás hatások megjelenéséig. Az egyes vírusok esetében alkalmazandó sejtrendszerek szakember számára jól ismertek. Röviden, az adott vírusra érzékeny sejteket, amelyeket Eagle-féle minimum esszenciális tápfolyadékban (MEM-tápfolyadékban) vagy más alkalmas tápfolyadékban tenyésztettünk, oltottunk be a vizsgálandó vírustörzzsel, 1-es fertőzési többszörös („multiplicity of infection”; MOI) érték alkalmazása mellett. Ezután a fertőzött sejteket 37 °C-on inkubáltuk, a teljes citopátiás hatás kialakulásához szükséges ideig (átlagosan 36 óráig).
2. példa
Virális genomi DNS extrakciója
Tenyésztést követően a felülúszót és a lizált sejteket összegyűjtöttük, és a teljes vírusszuszpenziót 1000 g mellett, 10 percig, +4 °C-on centrifugáltuk a sejttörmelék eltávolítása céljából. Ezután a vírusrészecskéket 400 000 g-vel, 1 órán át, +4 °C-on végzett ultracentrifugálással összegyűjtöttük. A pelletet minimális térfogatú pufferben szuszpendáltuk (10 mmol/l Tris; 1 mmol/l EDTA). A koncentrált vírusszuszpenziót 2 órán át, 37 °C-on, proteináz-K-val kezeltük (100 pg/ml végkoncentrációban), nátrium-dodecil-szulfát (SDS) jelenlétében (0,5% végkoncentrációban). A vírus-DNS-t fenol/kloroform eleggyel extraháltuk, majd kétszeres térfogatú abszolút etanollal precipitáltuk. Miután az elegyet egy éjszakán át -20 °C-on állni hagytuk, a DNS-t 10 000 g mellett, 15 percig, +4 °C-on centrifugáltuk. A kiülepített DNS-t szárítottuk, majd minimális térfogatú steril ultratiszta vízben szuszpendáltuk. A DNS ezután restrikciós enzimekkel emészthető.
3. példa
Virális genomi RNS-ek izolálása
Az RNS-vírusokat szakember számára jól ismert módszerekkel tisztítottuk. Az egyes vírusok genomját alkotó vírus-RNS-t ezután „guadinium-tiocianát/fenol/kloroform extrakciós technológiával izoláltuk, Chromczynski P. és Sacchi N. eljárása szerint [Anal. Biochem. 162, 156 (1987)].
4. példa
Molekuláris biológiai módszerek
Valamennyi plazmid előállítását ismert molekuláris biológiai módszerek alkalmazásával végeztük, Sambrook J. és munkatársai kézikönyvében leírtak szerint [„Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, 2. kiadás, „Cold Spring Harbor Laboratory”, Cold Spring Harbor, New York (1989)]. A leírásban ismertetett kísérletek során alkalmazott valamennyi restrikciós fragmentumot a „Geneclean” reagenskészlettel izoláltuk („BIO 101 Inc.”, La Jolla, CA, USA).
HU 224 830 Β1
5. példa
R T-PCR-technológia
Specifikus (5'-végükön az amplifikált fragmentumok klónozását megkönnyítő restrikciós helyeket tartalmazó) oligonukleotidokat szintetizáltunk úgy, hogy az általuk létrehozott fragmentumok teljesen fedjék az amplifikálandó gének kódolórégióját (lásd az alábbi példákban). A reverz transzkripciós (RT) reakciót és a polimeráz-láncreakciót (PCR) ismert eljárások szerint végeztük [Sambrook és munkatársai: (1989)]. Mindegyik RT-PCR reakciót specifikus amplifikációs oligonukleotid- („amplimer”) pár alkalmazásával végeztük, az extrahált víruseredetű genomi RNS templátként történő alkalmazása mellett. Az amplifikált komplementer DNS-t fenol/kloroform/izoamil-alkohol elegyével (24:24:1) extraháltuk, mielőtt azokat restrikciós enzimekkel emésztettük.
6. példa
A pVR1012-plazmid
A pVR1012-plazmidot (lásd 1. ábra) a „Vicái Inc.” cégtől szereztük be (San Diego, CA, USA). Annak előállítását Hartikka J. és munkatársai írták le [Humán Gene Therapy 7, 1205 (1996)].
7. példa
A pAB045-plazmid (MDV gB-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
PCR-reakciót végeztünk a Marek-féle betegség vírus (MDV) (RB1B-törzs) [Ross L. és munkatársai: J. Gén. Virol. 72, 949 (1989)] 2. példában ismertetettek szerint előállított genomi DNS-e alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB062 (37 nukleotidból álló oligonukleotid) (1. azonosító számú szekvencia)
5'-AAAACTGCAGACTATGCACTATTTTAGGCGGAAI i GC-3'; és
AB063 (35 nukleotidból álló oligonukleotid) (2. azonosító számú szekvencia)
5’-GGAAGATCTTTACACAGCATCATCTTTCTGAGTCTG-3';
miáltal az MDV-vírusból izoláltuk a gB-glikoproteint kódoló gént, egy Pstl-BglII-fragmentum formájában. Tisztítást követően a 2613 bázispár (bp) PCR-terméket Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 2602 bp nagyságú Pstl-BglII-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB045-plazmidot (7455 bp) (lásd 2. ábra).
8. példa
A pAB080-plazmid (az MDV-gD-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
PCR-reakciót végeztünk a Marek-féle betegség vírus (MDV) (RB1B-törzs) [Ross L. és munkatársai: J. Gén. Virol. 72, 949 (1989)] 2. példában ismertetettek szerint előállított genomi DNS-e alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB148 (29 nukleotidból álló oligonukleotid) (3. azonosító számú szekvencia)
5’-AAACTGCAGATGAAAGTATTTTTTTTTAG-3’; és
AB149 (32 nukleotidból álló oligonukleotid) (4. azonosító számú szekvencia)
5’-GGAAGATCTTTATAGGCGGGAATATGCCCGTC-3';
miáltal az MDV-vírusból izoláltuk a gD-glikoproteint kódoló gént, egy Pstl-BglII-fragmentum formájában. Tisztítást követően az 1215 bázispár (bp) PCR-terméket Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1199 bp nagyságú Pstl-BglII-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB080-plazmidot (6051 bp) (lásd 3. ábra).
9. példa
A pAB046-plazmid (az NDV-HN-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a Newcastle-betegség-vírusból (NDV) (Texas-GB-törzs) a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB072 (39 nukleotidból álló oligonukleotid) (5. azonosító számú szekvencia)
5’-AGAATGCGGCCGCGATGGGCTCCAGATCTTCTACCAG-3’; és
AB094 (34 nukleotidból álló oligonukleotid) (6. azonosító számú szekvencia)
5'-CGCGGATCCTTAAATCCCATCATCCTTGAGAATC-3';
miáltal az NDV-vírus Texas-GB-törzsből Notl-BamHl-fragmentum formájában izoláltuk a HN-glikoproteint kódoló gént (lásd 4. ábra és 7. azonosító számú szekvencia). Tisztítást követően az 1741 bp RT-PCR terméket Notl- és BamHI-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1723 bp nagyságú Notl-BamHI-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Notl- és BamHI-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB046-plazmidot (6616 bp) (lásd 5. ábra).
10. példa
A pAB047-plazmíd (az NDV-F-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a Newcastle-betegség-vírusból (NDV) (Texas-GB-törzs) a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB091 (37 nukleotidból álló oligonukleotid) (8. azonosító számú szekvencia)
5’-AGAATGCGGCCGCGATGGGCTCCAGATCTTCTACCAG-3’; és
AB092 (34 nukleotidból álló oligonukleotid) (9. azonosító számú szekvencia)
5’-TGCTCTAGATCATATTTTTGTAGTGGCTCTCATC-3’;
miáltal az NDV-vírus Texas-GB-törzsből egy NotiXbal-fragmentum formájában izoláltuk a F-glikoproteint kódoló gént (lásd 6. ábra és 10. azonosító számú szekvencia). Tisztítást követően az 1684 bp RT-PCR6
HU 224 830 Β1 terméket Notl- és Xbal-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1669 bp nagyságú Notl-Xbal-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Notl- és Xbalenzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd
6. példa), így kaptuk a pAB047-plazmidot (6578 bp) (lásd 7. ábra).
11. példa
A pAB048-plazmid (az IBDV-VP2-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a fertőző burzabetegség-vírusból (IBDV) (Faragher-törzs) a 3. példában ismertetettek szerint előállított RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával;
AB093 (33 nukleotidból álló oligonukleotid) (11. azonosító számú szekvencia)
5’-TCAGATATCGATGACAAACCTGCAAGATCAAAC-3’; és
AB094 (38 nukleotidból álló oligonukleotid) (12. azonosító számú szekvencia)
5'-AGAATGCGGCCGCTTACCTCCTTATAGCCCGGATTATG-3';
miáltal az IBDV-vírus Faragher-törzsből egy EcoRV-Notl-fragmentum formájában izoláltuk a VP2-proteint kódoló szekvenciát (lásd 8. ábra és 13. azonosító számú szekvencia). Tisztítást követően az 1384 bp RT-PCR terméket EcoRV- és Notl-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1367 bp nagyságú EcoRVNotl-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg EcoRV- és Notl-enzimekkel emésztett pVR1012vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB048-plazmidot (6278 bp) (lásd 9. ábra).
12. példa
A pAB049-plazmid (az IBV-S1-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a csirke-fertőzőbronchitisvírusból (IBV) (Massachusetts-41-törzs) a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB095 (32 nukleotidból álló oligonukleotid) (14. azonosító számú szekvencia)
5’-ACGCGTCGACATGTTGGTAACACCTCTTTTACC-3’; és
AB096 (35 nukleotidból álló oligonukleotid) (15. azonosító számú szekvencia)
5’-GGAAGATCTTCATTAACGTCTAAAACGACGTGTTC-3’;
miáltal az IBV-vírus Massachusetts-41-törzsből egy Sall-BglII-fragmentum formájában izoláltuk az S-glikoprotein S1-alegységét kódoló szekvenciát (lásd 10. ábra és 16. azonosító számú szekvencia). Tisztítást követően az 1635 bp RT-PCR terméket Sáli- és Bglll-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1622 bp nagyságú Sall-BglII-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Sáli- és Bglll-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB049-plazmidot (6485 bp) (lásd 11. ábra).
13. példa
A pAB050-plazmid (az IBV-M-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a csirke-fertőzőbronchitisvírusból (IBV) (Massachusetts-41-törzs) a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB097 (37 nukleotidból álló oligonukleotid) (17. azonosító számú szekvencia)
5’-ATAAGAATGCGGCCGCATGTCCAACGAGACAAATTGTAC-3’; és
AB098 (38 nukleotidból álló oligonukleotid) (18. azonosító számú szekvencia)
5’-ATAAGAATGCGGCCGCTTTAGGTGTAAAGACTACTCCC-3’;
miáltal az IBV-vírus Massachusetts-41-törzsből egy Notl-Notl-fragmentum formájában izoláltuk az M-glikoproteint kódoló gént (lásd 12. ábra és 19. azonosító számú szekvencia). Tisztítást követően a 710 bp RT-PCR terméket Notl-enzimmel emésztettük, ezáltal egy 686 bp nagyságú Notl-Notl-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Notl-enzimmel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB050-plazmidot (5602 bp), amely a promoterhez képest helyes orientációban tartalmazta az IBV-M-gént (lásd 13. ábra).
14. példa
A pAB051 -plazmid (az IBV-N-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a csirke-fertőzőbronchitisvírusból (IBV) (Massachusetts-41-törzs) a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB099 (34 nukleotidból álló oligonukleotid) (20. azonosító számú szekvencia)
5’-AAAACTGCAGTCATGGCAAGCGGTAAGGCAACTG-3’; és
AB0100 (33 nukleotidból álló oligonukleotid) (21. azonosító számú szekvencia)
5'-CGCGGATCCTCAAAGTTCATTCTCTCCTAGGGC-3’;
miáltal az IBV-vírus Massachusetts-41-törzsből egy Pstl-BamHI-fragmentum formájában izoláltuk az N-proteint kódoló gént (lásd 14. ábra és 22. azonosító számú szekvencia). Tisztítást követően az 1250 bp RT-PCR terméket Pstl- és BamHI-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1233 bp nagyságú Pstl-BamHI-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Pstl- és BamHl-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB051-plazmidot (6092 bp) (lásd 15. ábra).
15. példa
A pAB054-plazmid (a CAV-VP1-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
PCR-reakciót végeztünk a csirke-anémiavírus (CAV) (Cuxhaven-1-törzs) [Meehan B. és munkatársai:
HU 224 830 Β1
Arch. Virol. 124, 301 (1992)] 2. példában ismertetettek szerint előállított genomi DNS-e alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
CD064 (39 nukleotidból álló oligonukleotid) (23. azonosító számú szekvencia)
5’-TTCTTGCGGCCGCCATGGCAAGACGAGCTCGCAGACCGA-3’; és
CD065 (38 nukleotidból álló oligonukleotid) (24. azonosító számú szekvencia)
5’-TTCTTGCGGCCGCTCAGGGCTGCGTCCCCCAGTACATG-3’;
miáltal egy Notl-Notl-fragmentum formájában izoláltuk a CAV-vírus VP1-kapszidproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően az 1377 bp PCR-terméket Notlenzimmel emésztettük, ezáltal egy 1359 bp nagyságú Notl-Notl-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Notl-enzimmel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB054plazmidot (6274 bp), amely a promoterhez képest helyes orientációban tartalmazta a CAV-VP1-gént (lásd
16. ábra).
17. példa
A pAB055-plazmid (a CAV-VP2-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
PCR-reakciót végeztünk a csirke-anémiavírus (CAV) (Cuxhaven-1-törzs) [Meehan B. és munkatársai: Arch. Virol. 124, 301 (1992)] 2. példában ismertetettek szerint előállított genomi DNS-e alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
CD066 (39 nukleotidból álló oligonukleotid) (25. azonosító számú szekvencia)
5’-TTCTTGCGGCCGCCATGCACGGGAACGGCGGACAACCGG-3’; és
AB105 (32 nukleotidból álló oligonukleotid) (26. azonosító számú szekvencia)
5'-CGCGGATCCTCACACTATACGTACCGGGGCGG-3’;
miáltal egy Notl-BamHI-fragmentum formájában izoláltuk a CAV-vírus VP2-proteinjét kódoló gént. Tisztítást követően a 674 bp PCR-terméket Notl- és BamHl-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 659 bp nagyságú Notl-BamHI-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Notl- és BamHI-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB055-plazmidot (5551 bp) (lásd
17. ábra).
18. példa
A pAB076-plazmid (az ILTV-gB-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
PCR-reakciót végeztünk a csirke-fertőzőlaringotracheitisz (ILTV) (SA-2-törzs) [Kongsuwan K. és munkatársai: Virology 184, 404 (1991)] 2. példában ismertetettek szerint előállított genomi DNS-e alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB140 (38 nukleotidból álló oligonukleotid) (27. azonosító számú szekvencia)
5’-TTCTTGCGGCCGCATGTCTTGAAAATGCTGATC-3’; és
AB141 (36 nukleotidból álló oligonukleotid) (28. azonosító számú szekvencia)
5’-TTCTTGCGGCCGCTTATTCGTCTTCGCTTTC
TTCTG-3’;
miáltal egy Notl-Notl-fragmentum formájában izoláltuk az ILTV-vírus gB-glikoproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően a 2649 bp PCR-terméket Notl-enzimmel emésztettük, ezáltal egy 2631 bp nagyságú Notl-Notl-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Notl-enzimmel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB076-plazmidot (7546 bp), amely a promoterhez képest helyes orientációban tartalmazta az ILTV-gB-gént (lásd
18. ábra).
20. példa
A pAB089-plazmid (az ILTV-gD-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
PCR-reakciót végeztünk a csirke-fertőzőgégelégcsőhurut (ILTV) (SA-2-törzs) [Johnson M. és munkatársai: „Genbank szekvenciaazonosító szám: L31965 (1994)] 2. példában ismertetett eljárás szerint előállított genomi DNS-e alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB164 (33 nukleotidból álló oligonukleotid) (29. azonosító számú szekvencia)
5’-CCGGTCGACATGGACCGCCATTTATTTTTGAGG-3’; és
AB165 (33 nukleotidból álló oligonukleotid) (30. azonosító számú szekvencia)
5’-GGAAGATCTTTACGATGCTCCAAACCAGTAGCC-3’;
miáltal egy Sall-BglII-fragmentum formájában izoláltuk az ILTV-vírus gD-glikoproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően az 1134 bp PCR-terméket Sáli- és Bglll-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1122 bp nagyságú Sall-BglII-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Sáli- és Bglll-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB089-plazmidot (5984 bp) (lásd 19. ábra).
21. példa
A pAB086-plazmid (az AEV-em-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a madár-encefalomielitiszvírusból (AEV) (C-típus) [Bieth E. és munkatársai: Nucleic Acids Rés. 20, 367 (1992)] a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB160 (54 nukleotidból álló oligonukleotid) (31. azonosító számú szekvencia)
5’-TTTGATATCATGGAAGCCGTCATTAAGGCATTTCTGACTGGATACCCTGGGAAG-3’; és
AB161 (31 nukleotidból álló oligonukleotid) (32. azonosító számú szekvencia)
5’-TTTGGATCCTTATACTATTCTGCTTTCAGGC-3’;
miáltal egy EcoRV-BamHI-fragmentum formájában izoláltuk az AEV-vírus env-glikoproteinjét kódoló szek8
HU 224 830 Β1 venciát. Tisztítást követően az 1836 bp RT-PCR terméket EcoRV- és BamHI-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1825 bp nagyságú EcoRV-BamHI-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg EcoRV- és BamHI-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB086-plazmidot (6712 bp) (lásd 20. ábra).
22. példa
A pAB081 -plazmid (az AEV gag/pro gént tartalmazó konstrukció) előállítása RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a madár-encefalomielitiszvírusból (AEV) (C-típus) [Bieth E. és munkatársai: Nucleic Acids Rés.
20, 367 (1992)] a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB150 (31 nukleotidból álló oligonukleotid) (33. azonosító számú szekvencia)
5’-ACGCGTCGACATGGAAGCCGTCATTAAGGTG-3’; és
AB151 (32 nukleotidból álló oligonukleotid) (34. azonosító számú szekvencia)
5’-TGCTCTAGACTATAAATTTGTCAAGCGGAGCC-3';
miáltal egy Sall-Xbal-fragmentum formájában izoláltuk az AEV-vírus Gag- és Pro-proteinjeit kódoló szekvenciát. Tisztítást követően a 2125 bp RT-PCR terméket Sáli- és Xbal-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 2111 bp nagyságú Sall-Xbal-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Sáli- és Xbal-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB081-plazmidot (6996 bp) (lásd
21. ábra).
23. példa
A pAB082-plazmid (pneumovírus-G-gént tartalmazó konstrukció) előállítása RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a pulyka-rinotracheitiszvírusból („turkey rhinotracheitis vírus”; TRV) (2119-törzs) [Juhasz K. és munkatársai: J. Gén. Virol. 75, 2873 (1994)] a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB152 (32 nukleotidból álló oligonukleotid) (35. azonosító számú szekvencia)
5’-AAACTGCAGAGATGGGGTCAGAGCTCTACATC-3; es
AB153 (31 nukleotidból álló oligonukleotid) (36. azonosító számú szekvencia)
5'-CGAAGATCTTTATTGACTAGTACAGCACCAC-3’;
miáltal egy Pstl-BglII-fragmentum formájában izoláltuk a TRV-vírus G-glikoproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően a 2165 bp RT-PCR terméket Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1249 bp nagyságú Pstl-BglII-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB082-plazmidot (6101 bp) (lásd
22. ábra).
24. példa
A pAB077-plazmid (H2N2-törzshöz tartozó madárinfluenzavírus-HA-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a madárinfluenza-vírusból („avian plague vírus”; AIV) (H2N2 Potsdam-törzs) [Scháfer J. és munkatársai: Virology 194, 781 (1993)] a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB142 (33 nukleotidból álló oligonukleotid) (37. azonosító számú szekvencia)
5'-AAACTGCAGCAATGGCCATCATTTATCTAATTC-3'; és
AB143 (31 nukleotidból álló oligonukleotid) (38. azonosító számú szekvencia)
5'-CGAAGATCTTCATATGCAGATTCTGCATTGC-3';
miáltal egy Pstl-BglII-fragmentum formájában izoláltuk a madárinfluenza-vírus (H2N2-törzs) HA-glikoproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően az 1709 bp RT-PCR terméket Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1693 bp nagyságú Pstl-Bgíll-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Pstl- és Bglll-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB077-plazmidot (6545 bp) (lásd 23. ábra).
25. példa
A pAB078-plazmid (H7N7-törzshöz tartozó madárinfluenzavírus-HA-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a madárinfluenza-vírusból (AIV) (H7N7 típusú Leipzig-törzs) [Rohm C. és munkatársai: Virology 209, 664 (1995)] a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB144 (31 nukleotidból álló oligonukleotid) (39. azonosító számú szekvencia)
5’-AAACTGCAGATGAACACTCAAATCCTGATAC-3’; és
AB145 (31 nukleotidból álló oligonukleotid) (40. azonosító számú szekvencia)
5’-TTTGGATCCTTATATACAAATAGTGCACCGC-3’, miáltal egy Pstl-BamHI-fragmentum formájában izoláltuk a madárinfluenza-vírus (H7N7-törzs) HA-glikoproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően az 1707 bp RT-PCR terméket Pstl- és BamHI-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1691 bp nagyságú Pstl-BamHI-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Pstl- és BamHI-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB078-plazmidot (6549 bp) (lásd 24. ábra).
HU 224 830 Β1
26. példa
A pAB088-plazmid (H1N1-törzshöz tartozó madárinfluenzavírus-NP-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a madárinfluenza-vírusból („avian influenza vírus”; AIV) (H1N1 Bavaria-törzs) [Gammelin. és munkatársai: Virology 170, 71 (1989)] a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB156 (32 nukleotidból álló oligonukleotid) (41. azonosító számú szekvencia)
5'-CCGGTCGACATGGCGTCTCAAGGCACCAAACG-3’;
AB158 (30 nukleotidból álló oligonukleotid) (42. azonosító számú szekvencia)
5’-CGCGGATCCTTAATTGTCATACTCCTCTGC-3’;
miáltal egy Sall-BamHI-fragmentum formájában izoláltuk a madárinfluenza-vírus NP-nukleoproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően az 1515 bp RT-PCR terméket Sáli- és BamHI-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1503 bp nagyságú Sall-BamHI-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Sáli- és BamHl-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB078-plazmidot (6371 bp) (lásd 25. ábra).
27. példa
A pAB079-plazmid (H7N1-törzshöz tartozó madárinfluenzavírus-N-gént tartalmazó konstrukció) előállítása
RT-PCR reakciót végeztünk az 5. példában leírt eljárás szerint, a madárinfluenza-vírusból (AIV) (H7N1 típusú Rostock-törzs) [McCauley J. és munkatársai: (1990); „Genbank” szekvenciaazonosító szám: X52226] a 3. példában ismertetettek szerint előállított genomi RNS alapján, a következő oligonukleotidok alkalmazásával:
AB146 (35 nukleotidból álló oligonukleotid) (43. azonosító számú szekvencia)
5’-CGCGTCGACATGAATCCAAATCAGAAAATAATAAC-3’; és
AB147 (31 nukleotidból álló oligonukleotid) (44. azonosító számú szekvencia)
5’-G G AAG ATCTCTACTTGTC AATGGTGAATGGC-3’;
miáltal egy Sall-BglII-fragmentum formájában izoláltuk a madárinfluenza-vírus (H7N1-törzs) N-glikoproteinjét kódoló gént. Tisztítást követően az 1361 bp RT-PCR terméket Sáli- és Bglll-enzimekkel emésztettük, ezáltal egy 1350 bp nagyságú Sall-BglII-fragmentumot kaptunk. Ezt a fragmentumot előzőleg Sáli- és Bglll-enzimekkel emésztett pVR1012-vektorral ligáltuk (lásd 6. példa), így kaptuk a pAB079-plazmidot (6212 bp) (lásd 26. ábra).
28. példa
A plazmidok előállítása és tisztítása
Állatok vakcinázására szánt plazmidokat előállíthatunk bármely olyan eljárással, amely túlnyomórészt szuper spiralizált formájú tisztított plazmidokat tartalmazó szuszpenzió keletkezését eredményezi. Ezek az eljárások szakember számára jól ismertek. Közelebbről, alkalmazhatjuk az alkalikus lízis módszert, majd két egymást követő ultracentrifugálást cézium-klorid-gradiensen, etidium-bromid jelenlétében, Sambrook J. munkatársai eljárása szerint [Sambrook J. és munkatársai: „Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, 2. kiadás, „Cold Spring Harbor Laboratory”, Cold Spring Harbor, New York (1989)]. Megemlítendők továbbá a WO 95/21 250 és WO 96/02 658 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok, amelyekben vakcinázásra alkalmazható plazmidok ipari méretekben történő előállítására szolgáló eljárások ismertetését találjuk. Vakcinák előállítására (lásd 17. példa) a tisztított plazmidokat úgy szuszpendáljuk, hogy magas (>2 mg/ml) koncentrációjú oldatot kapjunk, amely kompatibilis a tárolással. Ezt elérhetjük úgy, hogy a plazmidokat ultratisztaságú vízben vagy TE-pufferben [10 mmol/l Tris-HCI; 1 mmol/l EDTA (pH=8,0)] szuszpendáljuk.
29. példa
Vakcinakombinációk előállítása
A vakcinakombinációk előállítására felhasznált különböző plazmidokat elegyítjük, azok koncentrált oldataiból kiindulva (16. példa). Az elegyeket oly módon állítjuk össze, hogy azokban az egyes plazmidok végkoncentrációja megfeleljen azok hatásos dózisának. A vakcina végkoncentrációjának beállítására alkalmazhatunk 0,9%-os NaCI-oldatot vagy PBS-puffert.
A vakcinákat előállíthatjuk továbbá különleges készítményekként, például liposzómákat vagy kationos lipideket tartalmazó készítményekként.
30. példa
Csirkék vakcinázása
A csirkéket az egyes plazmidok 10, 50 vagy 100 pg dózisával vakcináztuk. Az injektálást végezhetjük tűvel, intramuszkulárisan (izomba). Az injektálást végezhetjük a mellcsontélen (2 hetesnél idősebb csirkék esetén) vagy a combon (1 napos vagy annál idősebb csirkék esetén). Ebben az esetben a vakcinázásra alkalmazott dózist 0,1-0,3 ml térfogatban adjuk be.
Felnőtt (20 hetesnél idősebb) madarak esetében az injektálást szintén intramuszkulárisan végezzük, speciálisan csirkék vakcinázására tervezett folyadéksugár-injektor készülékkel, például „AVIJET’-készülékkel (tű nélkül). Ebben az esetben 0,3 ml térfogatú készítményt injektálunk. Az injektálást végezhetjük a mellcsontélen vagy a comb magasságában. Hasonlóképp, felnőtt madarak esetében az injektálást végezhetjük tűvel, intramuszkulárisan, a mellcsontélen vagy a combba, 0,3 ml térfogatú készítmény beadásával. Ezenfelül a plazmidvakcinákat injektálhatjuk in ovo. Ebben az esetben például 29. példában említett különleges készítményeket alkalmazhatunk. Tizennyolc (18) napos embrionált tojásba 50-200 μΙ térfogatú készítményt injektálhatunk.
HU 224 830 Β1

Claims (13)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Madárban alkalmazható vakcina, amely Newcastle-betegség-vírus HN-génjét hordozó cirkuláris plazmidot és alkalmas vivőanyagot tartalmaz.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti vakcina, amelyben a plazmid Newcastle-betegség-vírus F-génjét és HNgénjét is hordozza.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti vakcina, amely Newcastle-betegség-vírus F-génjét hordozó cirkuláris plazmidot is tartalmaz.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, amelyben a plazmid az alábbi promoterek közül legalább egyet tartalmaz:
    CMV-IE-promoter, korai SV40-promoter, késői SV40-promoter, Rous-féle szarkómavírus LTR-promotere vagy citoszkeletongén promotere.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti vakcina, amelyben a promoter CMV-IE-promoter.
  6. 6. A 4. igénypont szerinti vakcina, amelyben a citoszkeletongén promotere a dezmin promotere vagy az aktin promotere.
  7. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy további madárpatogén génjét hordozó és expresszáló plazmidot is tartalmaz.
  8. 8. A 7. igénypont szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy az alábbiak közül bármely két plazmidot tartalmazza: a Marek-féle betegség vírus gB- vagy a gD-génjét tartalmazó plazmid, fertőző burzabetegség-vírus VP2-génjét tartalmazó plazmid és fertőző anémiavírus VP1- és VP2-génjét tartalmazó plazmid.
  9. 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, azzal jellemezve, hogy minden egyes plazmidot 10 ng-1 mg, előnyösen 100 ng-500 μg, előnyösebben 0,1 μg-50 μg mennyiségben tartalmaz.
  10. 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti vakcinában található, Newcastle-betegség-vírus HN-génjét hordozó cirkuláris plazmid alkalmazása, önmagában vagy a 3-9. igénypontok bármelyike szerinti vakcinában található egyéb plazmiddal kombináltan, állatok Newcastle-betegséggel, Marek-féle betegséggel, fertőző burzabetegséggel és/vagy fertőző anémiával szembeni vakcinázására szolgáló madárvírus előállítására, amely állatokat első vakcinázással kezeltek, első vakcinaként az alábbiak bármelyikét alkalmazva: élő teljes vakcina, inaktív teljes vakcina, alegységvakcina és rekombináns vakcina, ahol az első vakcina a plazmid(ok) által kódolt antigén(eke)t vagy keresztvédelmet biztosító antigén(eke)t nyújt.
  11. 11. Vakcinázókészlet, amely az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti polinukleotidvakcinát és az alábbiak közül legalább egy, madárban alkalmazható vakcinát tartalmaz: élő teljes vakcina, inaktív teljes vakcina, alegységvakcina és rekombináns vakcina, ahol az első vakcina a polinukleotidvakcina által kódolt antigént vagy keresztvédelmet biztosító antigént nyújt, amely vakcinázókészlet az utóbbinak első vakcinázás során történő beadására és/vagy a vakcinakészítménnyel történő megerősítő oltásra szolgál.
  12. 12. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, amelyhez csatolt nyomtatványon fel van tüntetve, hogy a készítmény emlékeztető oltásra alkalmazható valamely élő teljes vakcina, inaktivált teljes vakcina, alegységvakcina vagy rekombináns madárvakcina első vakcinaként történő alkalmazását követően, amely első vakcina a plazmid(ok) által kódolt antigén(eke)t vagy keresztvédettséget nyújtó antigén(eke)t nyújt.
  13. 13. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti vakcinában található, Newcastle-betegség-vírus HN-génjét hordozó cirkuláris plazmid alkalmazása, önmagában vagy a 3-6. igénypontok bármelyike szerinti vakcinában található, Newcastle-betegség-vírus F-génjét hordozó cirkuláris plazmiddal kombináltan, Newcastle-betegség elleni vakcina előállításában, amely madárfajokban alkalmazható vakcinázásra szolgál, további madárbetegség elleni élő teljes vakcinával, inaktív teljes vakcinával, alegységvakcinával és/vagy rekombináns vakcinával kombináltan.
    HU 224 830 Β1
    Int. Cl.: A61K 48/00
    HU 224 830 Β1
    Int. Cl.: A61K 48/00
    2. ábra
    HU 224 830 Β1
    Int. Cl.: A61K 48/00
HU9902790A 1996-07-19 1997-07-16 Avian polynucleotide vaccine formula HU224830B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609339A FR2751225B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Formule de vaccin polynucleotidique aviaire
PCT/FR1997/001326 WO1998003659A1 (fr) 1996-07-19 1997-07-16 Formule de vaccin polynucleotidique aviaire

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP9902790A2 HUP9902790A2 (hu) 1999-12-28
HUP9902790A3 HUP9902790A3 (en) 2000-03-28
HU224830B1 true HU224830B1 (en) 2006-02-28

Family

ID=9494451

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9902790A HU224830B1 (en) 1996-07-19 1997-07-16 Avian polynucleotide vaccine formula

Country Status (19)

Country Link
US (3) US6221362B1 (hu)
EP (2) EP0914442B1 (hu)
JP (2) JP2001503019A (hu)
KR (1) KR20000065258A (hu)
CN (2) CN1225685A (hu)
AR (1) AR013063A1 (hu)
AU (1) AU735184B2 (hu)
BR (1) BR9710495A (hu)
CA (1) CA2261343A1 (hu)
CO (1) CO4700304A1 (hu)
DE (1) DE69730839T2 (hu)
ES (1) ES2232876T3 (hu)
FR (1) FR2751225B1 (hu)
HU (1) HU224830B1 (hu)
ID (1) ID19475A (hu)
MA (1) MA24268A1 (hu)
NZ (1) NZ333779A (hu)
TN (1) TNSN97120A1 (hu)
WO (1) WO1998003659A1 (hu)

Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751225B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique aviaire
ZA978434B (en) * 1996-09-27 1998-03-26 Akzo Nobel Nv Inactivated vaccines.
US6468984B1 (en) * 1999-06-08 2002-10-22 Innovo Biotechnologies Ltd. DNA vaccine for protecting an avian against infectious bursal disease virus
AU4606000A (en) * 1999-06-10 2001-01-02 Agricultural Research Council Vaccine for newcastle disease virus
AR031405A1 (es) * 2000-11-21 2003-09-24 Wyeth Corp Metodos y vacunas para conferir proteccion in ovo contra la rinotraqueitis del pavo
FR2823222B1 (fr) 2001-04-06 2004-02-06 Merial Sas Vaccin contre le virus de la fievre du nil
US7615209B2 (en) 2001-09-12 2009-11-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Compositions of NDV and methods of use thereof for treatment of cancer
IL145397A0 (en) * 2001-09-12 2002-06-30 Yissum Res Dev Co Compositions and methods for treatment of cancer
US7037506B2 (en) * 2002-03-08 2006-05-02 Schweltzer Chemical Corporation Ltd. Vaccine accelerator factor (VAF) for improvement of vaccinations in poultry
US7029681B2 (en) * 2002-03-08 2006-04-18 Schweitzer Chemical Corporation Multiple and multivalent DNA vaccines in ovo
EP1980268A2 (en) * 2002-04-12 2008-10-15 Ilaria Capua Vaccination methods against avian influenza virus
WO2004035821A1 (en) * 2002-10-15 2004-04-29 Wyeth Assay methods for detection of a virus in an avian tissue sample
EP1606419A1 (en) 2003-03-18 2005-12-21 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
ES2417019T3 (es) 2003-11-13 2013-08-05 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Procedimiento de caracterización del virus de la enfermedad de la bursitis infecciosa
ATE510928T1 (de) 2004-02-19 2011-06-15 Univ Alberta Leptinpromotor-polymorphismen und verwendungen davon
DK1881845T3 (da) 2005-04-25 2010-06-07 Merial Ltd Nipah-virusvacciner
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
DE102005040812A1 (de) * 2005-08-27 2007-03-15 Few Fahrzeugelektrikwerk Gmbh & Co. Kg Elektrischer Anschluss sowie Verfahren zu dessen Verbindung mit der Scheibe eines Kraftfahrzeugs
CA2629522A1 (en) 2005-11-14 2007-05-18 Merial Limited Gene therapy for renal failure
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
UA100692C2 (ru) 2007-05-02 2013-01-25 Мериал Лимитед Днк-плазмиды, имеющие повышенную экспрессию и стабильность
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
CN102046522A (zh) * 2008-06-03 2011-05-04 旭硝子株式会社 核—壳粒子的制造方法、核—壳粒子、中空粒子的制造方法、涂料组合物及物品
EP3542815A1 (en) 2008-11-28 2019-09-25 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Recombinant avian influenza vaccine and uses thereof
CN102428099B (zh) 2009-04-03 2016-03-16 梅里亚有限公司 运载新城疫病毒的禽疫苗
AR079767A1 (es) 2009-12-28 2012-02-15 Merial Ltd Antigeno ndv (virus de la enfermedad de newcastle) recombinante y usos del mismo
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
AU2011224188B2 (en) 2010-03-12 2015-01-22 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Bluetongue virus recombinant vaccines and uses thereof
WO2012030720A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Merial Limited Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
US20140296248A1 (en) 2011-04-04 2014-10-02 Stichting het Nederlands Kanker Instiuut-Antoni van Leeuwenhoek ziekenhuis Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
EP2694678A2 (en) 2011-04-04 2014-02-12 Netherland Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
WO2012145577A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Merial Limited Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
EP2701736A1 (en) 2011-04-25 2014-03-05 Advanced Bioscience Laboratories, Inc. Truncated hiv envelope proteins (env), methods and compositions related thereto
MX361804B (es) 2011-05-27 2018-12-17 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas genéticas contra el virus hendra y el virus nipah.
WO2012166493A1 (en) 2011-06-01 2012-12-06 Merial Limited Needle-free administration of prrsv vaccines
HUE035774T2 (hu) 2011-08-12 2018-05-28 Merial Inc Biológiai anyagok, különösen oltóanyagok, vákuummal elõsegített tartósítása
HRP20190525T8 (hr) * 2011-11-30 2023-01-20 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Rekombinantni vektori gallid herpesvirusa 3 (mdv serotip 2) koji eksprimiraju antigene ptičjih patogena i njihove uporabe
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
CA2864119C (en) 2012-02-14 2022-05-24 Merial Limited Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and ox40 proteins, and vaccines made therefrom
CN104203274B (zh) 2012-02-14 2017-09-08 梅里亚股份有限公司 轮状病毒亚单位疫苗及其制备和使用的方法
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
ES2664069T3 (es) 2012-06-13 2018-04-18 Merial, Inc. Vacunas contra BTV y AHSV de genoma reordenado
CN102719567A (zh) * 2012-07-05 2012-10-10 广东温氏食品集团有限公司 禽传染性支气管炎病毒h120毒株的pcr检测引物及检测方法
WO2014164697A1 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Merial Limited Reverse genetics schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof
NZ727221A (en) 2014-05-19 2018-05-25 Merial Inc Method and device for conditional in ovo injection
IL241841B (en) * 2014-09-30 2019-09-26 Univ Free State Production of proteins for human and animal health using yarrowia lipolytica
MX2017005687A (es) 2014-11-03 2017-08-21 Merial Inc Metodos para usar formulaciones para vacuna con microagujas para elicitar en animales inmunidad protectora contra virus de la rabia.
CN104881148B (zh) * 2015-05-15 2017-12-15 苏州达方电子有限公司 键盘及其控制方法
CA2990643C (en) 2015-06-23 2023-10-17 Merial, Inc. Prrsv minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof
CA2996143A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Merial, Inc. Fcv recombinant vaccines and uses thereof
PL3355915T3 (pl) 2015-09-29 2024-03-25 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Szczepionki zawierające cząstki wirusopodobne (VLP) parwowirusa psów (CPV) i ich zastosowania
RU2714428C2 (ru) 2015-11-23 2020-02-14 Мериал, Инк. Слитые белки fmdv-e2 и их применение
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
CN107099513B (zh) * 2017-06-22 2020-07-14 北京邦卓生物科技有限公司 一种共表达ndv hn和ibdv vp2基因的hvt的构建及其应用
CN111727053B (zh) * 2018-01-26 2024-06-25 全国农业协同组合连合会 非人动物用抗原表面结合型脂质体疫苗
CN110777122A (zh) * 2019-10-21 2020-02-11 青岛易邦生物工程有限公司 一种表达ibdv的vp2蛋白的重组ⅰ型马立克氏病病毒

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990015140A1 (en) * 1989-05-30 1990-12-13 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Production of ibdv vp2 in highly immunogenic form
EP0597016A4 (en) * 1991-07-26 1996-04-24 Virogenetics Corp Infectious bursal disease virus recombinant poxvirus vaccine.
FR2697534A1 (fr) * 1992-11-02 1994-05-06 Rhone Merieux Virus herpès de la dinde recombinant pour la réalisation de vaccin de la maladie de Gumboro, son procédé de préparation et vaccin obtenu.
IL108915A0 (en) * 1993-03-18 1994-06-24 Merck & Co Inc Polynucleotide vaccine against influenza virus
EP1650310A1 (en) * 1993-04-14 2006-04-26 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Recombinant avian adenovirus vector
EP1170368B1 (en) * 1994-01-27 2010-07-28 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit
JPH08116976A (ja) * 1994-10-20 1996-05-14 Chemo Sero Therapeut Res Inst 免疫用核酸調製物およびこれを用いた免疫方法
US5736524A (en) * 1994-11-14 1998-04-07 Merck & Co.,. Inc. Polynucleotide tuberculosis vaccine
FR2728794B1 (fr) * 1994-12-30 1997-03-21 Rhone Merieux Vaccin recombinant aviaire a base de virus herpes aviaire, notamment contre la maladie de gumboro
WO1996021034A1 (fr) * 1994-12-30 1996-07-11 Rhone Merieux Vaccin vivant recombinant aviaire
FR2751225B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique aviaire
US5916879A (en) 1996-11-12 1999-06-29 St. Jude Children's Research Hospital DNA transcription unit vaccines that protect against avian influenza viruses and methods of use thereof
US6468984B1 (en) * 1999-06-08 2002-10-22 Innovo Biotechnologies Ltd. DNA vaccine for protecting an avian against infectious bursal disease virus

Also Published As

Publication number Publication date
DE69730839D1 (de) 2004-10-28
ID19475A (id) 1998-07-16
NZ333779A (en) 2000-07-28
CN1701788A (zh) 2005-11-30
FR2751225A1 (fr) 1998-01-23
US20020037292A1 (en) 2002-03-28
AU735184B2 (en) 2001-07-05
CO4700304A1 (es) 1998-12-29
BR9710495A (pt) 1999-08-17
AU3773697A (en) 1998-02-10
EP0914442A1 (fr) 1999-05-12
DE69730839T2 (de) 2005-09-29
EP0914442B1 (fr) 2004-09-22
JP2001503019A (ja) 2001-03-06
TNSN97120A1 (fr) 2005-03-15
JP2009149608A (ja) 2009-07-09
FR2751225B1 (fr) 1998-11-27
EP1523992A1 (fr) 2005-04-20
AR013063A1 (es) 2000-12-13
KR20000065258A (ko) 2000-11-06
US20030124145A1 (en) 2003-07-03
US6221362B1 (en) 2001-04-24
MA24268A1 (fr) 1998-04-01
CA2261343A1 (fr) 1998-01-29
HUP9902790A2 (hu) 1999-12-28
WO1998003659A1 (fr) 1998-01-29
US6464984B2 (en) 2002-10-15
HUP9902790A3 (en) 2000-03-28
CN1225685A (zh) 1999-08-11
ES2232876T3 (es) 2005-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU224830B1 (en) Avian polynucleotide vaccine formula
RU2319504C2 (ru) Вакцина собак против бешенства (варианты), способ вакцинации (варианты), набор для вакцинации (варианты)
RU2312676C2 (ru) Формула кошачьей вакцины
CA2660355C (en) Polynucleotide vaccine formulation against pathologies of the horse
HU225169B1 (en) Polynucleotide vaccine formula, particularly for treating bovine respiratory disease
EP0914440B1 (en) Nucleic acid vaccination for parvoviral infections
ES2283105T3 (es) Vacunas en el adn con polimeros de acido acrilico o metacrilico o de ema (r) para los caballos.
JP2003502345A (ja) ペットまたはスポ−ツ用動物のためのｄｎａワクチン
EP1490105B1 (en) Multiple and multivalent dna vaccines in ovo
AU2004210602B2 (en) Avian polynucleotide vaccine formula
AU777623B2 (en) Avian polynucleotide vaccine formula
US7037506B2 (en) Vaccine accelerator factor (VAF) for improvement of vaccinations in poultry
Vilela et al. Avian Orthoavulavirus Type-1 as Vaccine Vector against Viral Pathogens in Animal and Human. Vaccines 2022, 10, 259
AU2007202367A1 (en) Avian polynucleotide vaccine formula
Praveen et al. DNA Vaccines: Important Criteria Against Avian Viruses
AU765539B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating horse diseases
Motamed An Overview of Future Development Methods of Infectious Bronchitis Vaccines
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter