HU223043B1 - Eljárás mikrobák emlőssejteken való megtelepedését gátló gyógyszerkészítmény előállítására - Google Patents

Eljárás mikrobák emlőssejteken való megtelepedését gátló gyógyszerkészítmény előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU223043B1
HU223043B1 HU9600602A HU9600602A HU223043B1 HU 223043 B1 HU223043 B1 HU 223043B1 HU 9600602 A HU9600602 A HU 9600602A HU 9600602 A HU9600602 A HU 9600602A HU 223043 B1 HU223043 B1 HU 223043B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
degree
polymerization
galacturonide
process according
esterification
Prior art date
Application number
HU9600602A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT74431A (en
HU9600602D0 (en
Inventor
Peter Meissner
Josef Peter Guggenbichler
Johann Jurenitsch
Adreas De Bettignies-Dutz
Original Assignee
Josef Peter Guggenbichler
Johann Jurenitsch
Adreas De Bettignies-Dutz
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Josef Peter Guggenbichler, Johann Jurenitsch, Adreas De Bettignies-Dutz filed Critical Josef Peter Guggenbichler
Publication of HU9600602D0 publication Critical patent/HU9600602D0/hu
Publication of HUT74431A publication Critical patent/HUT74431A/hu
Publication of HU223043B1 publication Critical patent/HU223043B1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

A találmány tárgya eljárás gyógyszerkészítmény előállítására mikrobákemlőssejteken való megtelepedésének gátlására, amely abban áll, hogyhatóanyagként egy vagy több oligogalakturonidot, melynekpolimerizációs foka ?2 és észterezettségi foka <20%, adott esetbengyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító-, segéd- és töltő-anyagokkal együtt beadásra alkalmas formába hoznak. A találmányszerint előállított gyógyszerkészítmények alkalmazhatók különbözőfertőzések, így a gyomor-bél rendszer, vérrendszer, légutak,urogenitális traktus és/vagy orrgaratüreg fertőzéseinek kezelésére ésmegelőzésére. ŕ

Description

A találmány tárgya eljárás gyógyszerkészítmény előállítására mikrobák emlőssejteken, különösen emberi sejteken való megtelepedésének gátlására, amely abban áll, hogy hatóanyagként egy vagy több oligogalakturonidot, melynek polimerizációs foka >2 és észterezettségi foka <20%, adott esetben gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító-, segéd- és töltőanyagokkal együtt beadásra alkalmas formába hozunk.
A galakturonsavaknak széles alkalmazási területük van, amint azt például Heinrochova és Simon közleménye [Biológia, 46. kötet, 1081-1087. oldal (1991)] ismerteti. Az ismert alkalmazások közé tartozik például a galakturonanázok és pektátliázok besorolására és osztályozására való felhasználás, vagy ligandumokként szelektív bioaffmitáskromatográfiára való alkalmazás. Az ismert hatások közé tartozik a magasabb rendű növények védekezési mechanizmusának kiváltása és a toxikus kationok - mint például Cd2+, Cu2+ és Pb2* - semlegesítése az emberi gyomor-bél rendszerben.
A különböző növényi termékekből származó vizes kivonatok, valamint levek ismeretesek a népi gyógyászatban és a klinikai orvoslásban a bél- és az urogenitális rendszer patogén kórokozók által okozott megbetegedéseivel szembeni hatásuk miatt. Ezeknek a készítményeknek a béltraktusban kifejtett gyógyászati hatását ez idáig a növényi termékekben jelen levő pektineknek a vízháztartást szabályozó hatásával magyarázták.
A mikrobák, mint például baktériumtípusú mikroorganizmusok tapadása a sejtekhez az első lépés minden egyes fertőzés kezdetekor. Csak ha a mikrobák (például baktériumok és/vagy vírusok) megtapadnak a sejtfelszín specifikus receptorain, és ezáltal a test saját nemspecifikus védekezőrendszerét, úgymint a perisztaltikát, a mucilláris clearance-t, a kiválasztott anyagok áramlását, és más hasonlókat ki tudják kerülni, akkor tudnak ott szaporodni, a testbe benyomulni, mérgező hatást kifejteni, és ezáltal betegséget kiváltani.
Az EP-A-0 080 442 számú szabadalmi leírásban egy többlépéses kémiai előállítási eljárást ismertetnek oligoszacharidok előállítására, mint például oligogalaktozidok előállítására pektinből, illetve poligalakturonsavból. Az oligoszacharidok és acilezett származékaik gyógyászatilag alkalmazhatónak látszanak, azokból a közleményekből kiindulva, amelyek bizonyos galaktozidokat, illetve azok metil-, illetve p-nitro-fenil-származékait ajánlják uropatogén colibaktériumok meghatározott vörösvértestekhez való tapadásának inhibiálására. Ezt a feltételezést azonban farmakológiai adatokkal nem támasztják alá.
A mikrobaellenes terápia során célszerű lenne a mikrobák tapadását mint lényeges virulenciatényezőt meghiúsítani, és ezáltal lehetővé tenni, hogy a test a mikrobákat a sejtfelszínről kimossa, illetve onnan kiszorítsa. Találmányunk célkitűzése tehát olyan készítmény létrehozása, amely gátolja a mikrobák megtelepedését emlőssejteken, különösen epiteliális sejteken.
Ezt a feladatot olyan gyógyszerkészítmény előállításával oldottuk meg, amely hatóanyagként egy vagy több oligogalakturonidot tartalmaz, amely(ek)nek polimerizációs foka >2 és észterezettségi foka <20%, adott esetben a gyógyszertechnológiában szokásos hordozó-, hígító-, segéd- és töltőanyagokkal együtt.
Találmányunk további tárgya olyan galakturonidok alkalmazása, amelyek polimerizációs foka >2 és észterezettségi foka <20%, mikrobáknak emlőssejteken való megtelepedését gátló gyógyszerkészítmény előállítására.
Meglepő módon azt találtuk, hogy a patogén mikrobák, mint például E. coli hozzátapadása a sejtekhez, különösen a gyomor-bél és az urogenitális traktus epiteliális sejtjeihez lényegesen (azaz 90%-ig terjedő mértékben) csökkenthető sárgarépalevessel (elkészítése a klasszikus módon, a MORO szerint), vizelethajtó teával (például zsurló, sárga tavaszi kankalin, eperlevelek és izlandi moha keveréke), kókusztejjel, áfonyával és más hasonlókkal. Ez a hatás a növényi anyagokban található pektinekre vezethető vissza, amelyek lényegében 1,4-a-glikozidos kötéssel összekapcsolt galakturonidláncok, melyek savas csoportjai 20-80%-ban metanollal észterezettek, és amelyek galakturonsav mellett adott esetben más cukor építőköveket, például glükózt, galaktózt, xilózt és arabinózt is tartalmazhatnak.
Meglepő módon azt találtuk, hogy a pektinek, illetve galakturonidok, amelyeket ez idáig zseléképzőként, mint sűrítőanyagokat vagy ballasztanyagokat alkalmaztak, gátolják a mikrobák megtelepedését az emlőssejteken, és különösen az emberi sejteken.
Egy a mikrobák tapadását hatásosan gátló galakturonid meghatározott polimerizációs fokkal és előnyösen egy bizonyos észterezettségi fokkal kell rendelkezzen. Leírásunkban a „polimerizációs fok” kifejezés azoknak a galakturonsavegységeknek a számát jelöli, amelyeket egy galakturonid tartalmaz. Az „észterezettségi fok” kifejezés egy galakturonid (többnyire metilcsoporttal) észterezett galakturonsavegységeinek százalékos mennyiségét jelöli a galakturonsavegységek teljes számához viszonyítva. Megállapítottuk, hogy a mikrobák emlőssejtekhez tapadásának gátlásához szükséges polimerizációs fok >2, azaz a galakturonsavmonomer számos más szacharidhoz - például semleges szacharidok, glukuronsav, arabinogalaktán, galaktóz-1-foszfát, glükóz-1foszfát - hasonlóan nem gátolja a kórokozók megtapadását.
A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmény egy előnyös formája esetében a galakturonid észterezettségi foka <20%, különösen előnyösen <10%, és még előnyösebben <5%. A legelőnyösebb azonban az, ha lényegében semmilyen észtercsoport (<2%) nincs jelen.
Olyan galakturonidok, amelyek észterezettségi foka <20%, a természetben előforduló pektinekből nyerhetők teljes vagy részleges demetilezéssel, például lúggal való elszappanosítással.
A találmány szerinti előállított gyógyszerkészítményben levő galakturonid polimerizációs foka >2, azaz a galakturonidnak legalább 2 galakturonsavegysége van. A galakturonid polimerizációs foka előnyösen 2-7, még előnyösebben 2-4, különösen előnyösen 2 vagy 3, és legelőnyösebben 2; azaz digalakturonid, trigalakturonid, tetragalakturonid, pentagalakturonid, hexagalakturonid, heptagalakturonid és ezek keverékei
HU 223 043 Bl az előnyös galakturonidok a találmány szerinti készítményekben, mimellett a legelőnyösebb a digalakturonid, illetve a digalakturonsav. Az alkalmazás módjától függően azonban olyan készítmények is alkalmazhatók, amelyek nem a hatás szempontjából legkedvezőbb anyagot tartalmazzák, ha ez az anyag gyógyszer-technológiai okokból egy speciális alkalmazási formához kevésbé kedvező.
A 2-4 polimerizációs fokú galakturonidok természetben előforduló, nagyobb molekulájú peptidekből nyerhetők enzimes hidrolízissel, pektinhasító enzimek (például pektinázok) alkalmazásával, amelyeket a gyakorlatban többnyire gombákból, úgymint Aspergillusvagy Penicillium-fajtákból kapnak. A nagyobb molekulájú peptidek hidrolízise másrészt savas hidrolízissel, például sósavval is végrehajtható.
A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmények meg tudják gátolni a mikrobák, különösen a bakteriális mikrobák (például E. coli, Streptococcusok, Haemophilus influenzáé, Pneumococcusok és más hasonlók) megtapadását emlőssejteken, illetve ki tudják szorítani a már megtapadt mikrobákat. A találmány szerint előállított készítmények különösen alkalmasak a gyomor-bél rendszer fertőzéseinek (például a felső vékonybélszakaszban oda nem való mikroorganizmusok megtelepedése hasmenéses megbetegedéseknél), a vérrendszer betegségeinek (hemolitikus urémiás tünetegyüttes, amit az E. coli 0157 okoz), a légutak megbetegedéseinek (például felszálló fertőzés lélegeztetett intenzív osztályos betegnél), az urogenitális traktus megbetegedéseinek (például a húgyutak recidiváló fertőzései) és/vagy az orrgaratüreg megbetegedéseinek (például Streptococcusok, H. influenzáé, Pneumococcusok által kiváltott fertőzések) kezelésére.
A találmány szerint előállított gyógyszerkészítményeket adagolhatjuk egyrészt már fennálló betegségeknél, másrészt megelőző (profilaktikus) célzattal is. Számításba jönnek például a következő beadási módok :
a) orális beadás a gyomor-bél rendszer és a húgyutak kezelésére, adalék anyagként rehidratáló oldatokban, megelőző készítményként a nem kívánt mikroorganizmusok ellen a gyomor-bél rendszerben, és más alkalmazások, valamint az intenzív osztályokon mesterségesen lélegeztetett betegeknek,
b) helyi (topikális) alkalmazás az orrgaratüreg, az urogenitális traktus és más testrészek kezelésére, és
c) parenterális alkalmazás.
A galakturonidok, mint a poliszacharidok alkotórészei nagy részarányban fordulnak elő az élelmiszerekben és élelmiszer-segédanyagokban, és így szájon át bekerülnek a szervezetbe, azaz nem mérgezőek, és kiválóan alkalmasak gyógyszerészeti alkalmazásra.
A találmány szerinti gyógyszerkészítményekben alkalmazott galakturonidokat kinyerhetjük a növényekben előforduló poliszacharidokból, például karottából, citrusgyümölcsökből, almából, birsből, cukorrépából, kókusztejből és más növényekből vagy növényi termékekből.
A galakturonidok kinyerésére a kiindulási anyagokat előnyösen felapritjuk és forró vízzel extraháljuk. Az extraktumokat először liofilizálhatjuk vagy közvetlenül tovább feldolgozhatjuk. A továbbfeldolgozást előnyösen kromatográfiás módszerekkel végezzük, amelynek segítségével lehetséges a galakturonidok elválasztása az extraktum többi alkotórészeitől, például más szacharidoktól. Az előnyös kromatográfiás elválasztási módszerek a gélkromatográfia (például BioGelR, SephacrylR elválasztóközegen) és/vagy anioncserélő kromatográfia (például DEAD-SephacelR elválasztóközegen). A kapott pektineket azután az észterezettségi fok csökkentésére részlegesen vagy teljesen elszappanosíthatjuk, és/vagy a polimerizációs fok csökkentésére savas kezeléssel, illetve enzimesen hidrolizálhatjuk.
A találmány szerint a gyógyszerkészítményeket úgy állítjuk elő, hogy egy vagy több hatóanyagot a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító-, segéd- és töltőanyaggal együtt beadásra alkalmas gyógyszerformába hozunk.
A találmány szerinti megoldást a következő, nem korlátozó példákkal szemléltetjük közelebbről.
1. példa
Friss karottát megmosunk, feldarabolunk és lereszelünk. Forrásban lévő vízzel végzett extrakcióval, majd ezt követő liofilizálással kinyerjük a vízoldható poliszacharidokat. Ezután egy első gélkromatográfiás elválasztási lépés következik BioGel P2 oszlopon, eluálószerként desztillált vízzel. Azokat az anyagokat, amelyek ezen az oszlopon eluálódnak (SF A), egyesítjük, és másodszori gélkromatográfiával szétválasztjuk. Szétválasztóközegként Sephacryl S-3000HR és eluálószerként ismét desztillált víz szolgál. A megjelenő két csúcsból a később eluálódónak megfelelő anyagot gyűjtjük össze.
A harmadik feldolgozási lépés ioncserélő kromatográfia DEAE-Sephacelen, eluálószerként egy puffergradiens (0,011 M-l M foszfátpuffer, pH=6,4) alkalmazásával. A nagyobb molaritásnál eluálódó frakciót (SF II) összegyűjtjük és tovább feldolgozzuk. Ezután következik egy sósavas hidrolízis (pH=1,00, 37 °C, 45 perc) és a szacharid visszanyerése alkoholos kicsapással.
A hidrolizátumot gélkromatográfiás úton (Sephacryl S-2000HR, eluálószer desztillált víz) három anyagcsoportra osztjuk, mimellett a legkisebb molekulatömegű szénhidrátokat (SF 2/3) összegyűjtjük.
Azoknak a frakcióknak a tapadásellenes aktivitása, amelyeket tovább feldolgozunk, meghaladja a mindenkori kiváló melléktermékekét.
Az egyes anyagok gátlási intenzitása a feldolgozás során 50%-tól (0,7%-os oldatban, az SF A-nál) több mint 86,4%-on keresztül (0,005%-os oldatban, az SF II-nél) teljes gátlásig (szintén 0,005%-os oldatban, az SF 2/3-nál) nő.
Ez arra mutat, hogy a növekvő tisztasági fokkal az egy bizonyos hatás eléréséhez szükséges koncentráció jól láthatóan kisebb lesz. Ez ellentétes a kereskedelemben kapható pektinek esetével, amelyeket igen nagy koncentrációban kell alkalmazni ahhoz, hogy hasonló hatást érhessünk el.
HU 223 043 Bl
2. példa
Elszappanosítás
11,3 g citrusgyümölcsből származó pektint (Grinstedt cég; Aq anyag) feloldunk 1200 ml desztillált vízben, elegyítjük 480 ml 0,5 n nátrium-hidroxiddal és szobahőmérsékleten 15 percig elszappanosítjuk. Az oldatot tömény hangyasavval pH=4,0-re állítjuk be. Az elszappanosított pektint kétszeres térfogatú metanollal kicsapjuk, 200 ml vízben feloldjuk, és a kicsapást ugyanilyen módon még kétszer megismételjük. Az utoljára nyert csapadékot 50 °C-on szárítjuk (Aj anyag). Kitermelés: 7,15 g. Enzimes hidrolízis
A szárított csapadékot 100 ml 0,1 M nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban feloldjuk, hangyasavval (1 M) pH=4,5-re állítjuk be, elegyítjük 21 mg, Aspergillus nigerből származó Pectinase 5S-sel (Serva cég), és 60 percig 60 °C-on inkubáljuk. Az anyagot az enzim aktiválására rövid ideig 80 °C-ra melegítjük, lehűtjük, és a fent leírt módon metanollal kicsapjuk. A csapadékot centrifugálással (20 perc, 4000 fordulat/perc) kinyeqük és szárítjuk. Kitermelés: 5 g (A2 anyag).
Vékonyréteg-kromatográfiás ellenőrzéssel megvizsgáljuk, hogy a hidrolízis kielégítő mennyiségű oligogalakturonidot eredményezett-e.
Vékonyréteg-kromatográfiás paraméterek Stacionárius fázis: VRK-s kész lemezek, Kieselgel (Merck cég), 10x20 cm Futtatószer: etanol: 25 mM vizes ecetsav=l: 1
Előhívás: 35 °C-on
Bepermetezőreagens: 200 mg naftalin-l,3-diol 50 ml metanolban, plusz 50 ml kénsavban (20% g/g).
Kromatográfia
1,5 g hidrolízisterméket feloldunk 15 ml desztillált vízben és kromatográfiás szétválasztásnak vetjük alá. Oszlop: A Bio-Rad cég üvegoszlopa (2,5/40 cm), töltettérfogat 150 ml
Eluálószer: nátrium-formiát-puffer (pH=4,7), lépcsős gradiens 182 ml-enként, 0,2, 0,3, 0,4,
0,5, 0,6, 0,7 M
Stacionárius fázis: Bio-Rad AGMP 1 anioncserélő gyanta (eluálószerrel ekvilibrálva)
Átfolyási sebesség: 3 ml/perc
Frakciótérfogat: 22 ml
Az egyes frakciók összetételét vékonyréteg-kromatográfiával (paramétereit fent megadtuk) vizsgáljuk. Az azonos összetételű frakciókat egyesítjük és kétszeres térfogatú acetonnal kicsapjuk. Az ilyen módon kapott oligogalakturonidot centrifugálással (4000 fordulat/perc) kinyeqük és 20 ml desztillált vízben felvesszük.
Az oldatba Bio-Rad AG W X-8 kationcserélőt (H+ formában) keverünk, hogy a galakturonidokat szabad sav formába alakítsuk át. A gyanta eltávolítása és a szűrlet liofilizálása után pelyhes fehér port kapunk.
A gátlási adatokat a következő 1. táblázatban adjuk meg.
1. táblázat
i- Az anyag jele Jellemzők Koncent- ráció %-ban Gátlás %-ban
Ao pektin USP'> 0,7 15,3
A, elszappanosított pektin 0,2 10,0
a2 részlegesen hidrolizált A, 0,05 0,0
F. semleges di- és triszacharid 0,005 0,0
f2 semleges triszacharid 0,005 0,0
f3 semleges tetraszacharid 0,005 0,0
f4 trigalakturonid 0,005 84,6
f5 tetragalakturonid trigalakturo- nidnyomokkal 0,005 58,6
f6 tetragalakturonid 0,005 52,7
I F? pentahexagalakturo- nid 0,005 23,9
’) citrusgyümölcsből származó pektin (Grinstedt cég)
A gátlási hatékonyság vizsgálati módszerei
Adhéziós vizsgálat
1. Emberi O+ eritrociták hemagglutinációja: az eritrociták mikrobákkal való összehozása után az erősen hemagglutináló törzseknél 20 másodpercen belül bekövetkezik az eritrociták agglutinációja, ami egy vércsoportösszeférhetetlenség erősségének felel meg.
Az eritrociták koncentrációja: 1 -1,5%.
Mikrobaszuszpenzió: zavaros szuszpenzió, OD 1 462 nm-nél=109 mikroba/ml.
Az agglutináció gátlásának értékelésénél a mikrobákat az eritrocitákhoz való hozzáadás előtt 2 órát inkubáljuk a szénhidrátoldatokkal a mindenkori kívánt koncentrációban, majd a hemagglutinációt ránézéssel, szemikvantitatív módon értékeljük.
2. Emberi uroepiteliumokhoz való tapadás: reggeli vizeletből uroepiteliumokat különítünk el centrifugálással. Mikrobaszuszpenziókat (lásd fent) hozunk össze az epiteliális sejtekkel és inkubáljuk őket, majd 8 μ-os polikarbonátszűrőn szűrjük és többször mossuk. A szűrőket eltávolítjuk, fiziológiás nátrium-klorid-oldatba helyezzük és az epiteliális sejteket kirázzuk. A nátriumklorid-szuszpenziót ezután ismét centrifugáljuk és az üledéket hordozókra visszük fel, May Grünwald és Giemsa szerint megfestjük, és megszámoljuk az 50 epiteliális sejthez tapadó mikrobákat (üres érték).
Kontroll: epiteliális sejtek mikrobákkal való érintkezés nélkül.
HU 223 043 Bl
Tapadásgátlás: azonos módszer, csak a mikrobákat az epiteliális sejtek szuszpenziójához való hozzáadás előtt 1-3 órát érintkezésbe hozzuk a különböző szénhidrátok oldatával (0,5,0,1, 0,05, 0,001%).
Alkalmazott mikrobák: betegekből elkülönített 4 E. coli vad típusú törzset és 2 kereskedelemben alkalmazott törzset alkalmazunk azonos módon.
Eredmények
A mikrobiológiai vizsgálatok keretében a taxatívan felsorolt savanyú oligo- és poliszacharidok mellett semleges szacharidokat is alkalmaztunk, amelyek semmiféle tapadásgátló hatást nem mutattak (egyebek között például fruktánok, úgymint inulin, diszacharidok, úgymint laktóz és laktukóz).
Természetes, azaz extrakcióval nyert pektinek tapadást gátló hatást mutatnak, amit azonban további kezeléssel, például elszappanosítással és hidrolízissel növelni lehetett.
így a fent leírt vizsgálati tételben a karottából vizes extrakcióval nyert pektin 1%-os oldatban 46%-os gátlást mutatott, a tisztított termékek ugyanabból a tételből 0,1%-os koncentrációban 80%-os gátlást fejtettek ki.
A következő 2. táblázatban a mikrobiológiai vizsgálatok további eredményeit foglaljuk össze.
Az epiteliális sejtekhez való bakteriális tapadás kiválasztott anyagokon százalékban:
2. táblázat
Az anyag megjelölése Koncentráció %-ban Gátlás %-ban
Vizes karottaextrakt1* 1 46,0
1 SFA(ld. 1. példa) 0,7 50,0
1 SFII (ld. 1. példa) 0,005 86,4
SF 2/3 (ld. 1. példa) 0,005 113,5
Poligalakturonsav narancsból 0,2 99,0
Poligalakturonsav 0,05 72,0
narancsból
Monogalakturonsav 1 nincs gátlás
Digalakturonsav 0,005 91,7
Trigalakturonid2· 0,005 84,6
T etragalakturonid2) 0,005 52,7
Pentahexagalakturonid 0,005 23,9
Arabinogalaktán 0,005 nincs gátlás
Almapektin 0,05 20,5
Pektinsav almából 0,05 64,8
Galaktóz-1 -foszfát 0,005 3,4
Az anyag Koncentráció Gátlás
megjelölése %-ban %-ban
Glükóz-l-foszfát 0,005 nincs gátlás
Glukuronsav 0,005 nincs gátlás
analóg az 1. példával 2> a 2. példával analóg módon nyerve
Amint az a 2. táblázatból látható, az észterezettségi foktól és a molekulanagyságtól (a polimerizációs foktól) függő hatásnövekedés figyelhető meg.
Kedvező eredményeket értünk el 2-7 polimerizációs foknál.
Elszappanosítás (azaz az észtercsoportok eltávolítása) alkalmazása esetén szintén a gátlás javulását figyeltük meg.

Claims (10)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás gyógyszerkészítmény előállítására mikrobák emlőssejteken való megtelepedésének gátlására, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként egy vagy több oligogalakturonidot, amelyek polimerizációs foka >2 és észterezettségi foka <20%, adott esetben gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító-, segéd- és töltőanyagokkal együtt beadásra alkalmas formába hozunk.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy <10% észterezettségi fokú galakturonidot alkalmazunk.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont eljárás, azzal jellemezve, hogy <5% észterezettségi fokú galakturonidot alkalmazunk.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 2-7 polimerizációs fokú galakturonidot alkalmazunk.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 2-6 polimerizációs fokú galakturonidot alkalmazunk.
  6. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 2-5 polimerizációs fokú galakturonidot alkalmazunk.
  7. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 2-4 polimerizációs fokú galakturonidot alkalmazunk.
  8. 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 2-3 polimerizációs fokú galakturonidot alkalmazunk.
  9. 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 2 polimerizációs fokú galakturonidot alkalmazunk.
  10. 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás gyomor-bél rendszer, vérrendszer, légutak, urogenitális traktus és/vagy orrgaratüreg fertőzéseinek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
HU9600602A 1993-09-10 1994-09-08 Eljárás mikrobák emlőssejteken való megtelepedését gátló gyógyszerkészítmény előállítására HU223043B1 (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4330773A DE4330773A1 (de) 1993-09-10 1993-09-10 Blockierung der Anlagerung von Keimen an menschliche Zellen
PCT/EP1994/003006 WO1995007084A1 (de) 1993-09-10 1994-09-08 Blockierung der anlagerung von keimen an menschliche zellen

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9600602D0 HU9600602D0 (en) 1996-05-28
HUT74431A HUT74431A (en) 1996-12-30
HU223043B1 true HU223043B1 (hu) 2004-03-01

Family

ID=6497409

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9600602A HU223043B1 (hu) 1993-09-10 1994-09-08 Eljárás mikrobák emlőssejteken való megtelepedését gátló gyógyszerkészítmény előállítására

Country Status (16)

Country Link
US (1) US5683991A (hu)
EP (1) EP0716605B1 (hu)
JP (1) JP3798425B2 (hu)
AT (1) ATE174222T1 (hu)
AU (1) AU679262B2 (hu)
CA (1) CA2171197A1 (hu)
CZ (1) CZ288050B6 (hu)
DE (2) DE4330773A1 (hu)
DK (1) DK0716605T3 (hu)
ES (1) ES2127940T3 (hu)
GR (1) GR3029619T3 (hu)
HU (1) HU223043B1 (hu)
PL (1) PL313393A1 (hu)
RU (1) RU96107098A (hu)
SK (1) SK282305B6 (hu)
WO (1) WO1995007084A1 (hu)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19503423A1 (de) * 1995-02-03 1996-08-08 Beiersdorf Ag Antiadhäsive Wirkstoffe
US5951965A (en) * 1998-08-28 1999-09-14 Colgate Palmolive Company Method for visually demonstrating the effectiveness of an anti-bacteria attachment composition
AU730929B2 (en) * 1999-07-06 2001-03-22 Nestec S.A. Composition and method for prolonging the useful life of enteral feeding tubes
DE10006989A1 (de) * 2000-02-16 2001-08-23 Nutricia Nv Antiadhäsive Kohlenhydratmischung
DE10057976B4 (de) * 2000-11-22 2005-02-03 Südzucker AG Mannheim/Ochsenfurt Verfahren zur Herstellung von Pektinhydrolyseprodukten
DE10061574A1 (de) * 2000-12-11 2002-06-13 Josef Peter Guggenbichler Blockierung der Anlagerung von Keimen bei Vögeln
FR2831819B1 (fr) * 2001-11-08 2004-09-03 Rocher Yves Biolog Vegetale Utilisation d'oligosaccharides dans des compositions cosmetiques ou dermatologiques pour stimuler l'adhesion de keratinocytes sur les proteines majeures de la jonction dermo-epidermique
FR2852242B1 (fr) * 2003-03-13 2007-09-14 Utilisation d'oligogalacturonides en cosmetique ou pour la preparation d'une composition dermatologique ou pharmaceutique
GB0321996D0 (en) * 2003-09-19 2003-10-22 Novartis Nutrition Ag Organic compounds
US8110215B2 (en) * 2004-04-30 2012-02-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Personal care products and methods for inhibiting the adherence of flora to skin
WO2006018743A2 (en) * 2004-08-18 2006-02-23 Biologic Health Solutions Pty Ltd Herbal compositions for the prevention or treatment of urinary incontinence and overactive bladder
GB2430881B (en) * 2005-10-06 2010-10-13 Ntnu Technology Transfer As Oligoelectrolyte polyols for the treatment of mucosal hyperviscosity
GB0707096D0 (en) * 2007-04-12 2007-05-23 Ntnu Technology Transfer As Method
EP2268142B1 (en) * 2007-11-27 2017-02-22 Algipharma As Use of alginated oligomers in combating biofilms
GB0904941D0 (en) 2009-03-23 2009-05-06 Ntnu Technology Transfer As Composition
GB0904942D0 (en) 2009-03-23 2009-05-06 Ntnu Technology Transfer As Composition
GB0909529D0 (en) * 2009-06-03 2009-07-15 Algipharma Ipr As Alginate oligomers for the inhibition of microbial adherence to surfaces
BRPI1010780A2 (pt) 2009-06-03 2020-08-25 Algipharma As métodos in vitro ou ex vivo para aperfeiçoar a eficácia de um antibiótico contra acinetobacter e para combater contaminação por acinetobacter de um sítio, uso de um oligômero de alginato e produto
WO2011060474A1 (de) 2009-11-20 2011-05-26 Erber Aktiengesellschaft Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes sowie futtermittelzusatz
WO2015031105A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 The Procter & Gamble Company Substrate comprising oligogalacturonides and disposable absorbent article comprising the substrate
DE102013022109A1 (de) * 2013-12-27 2015-07-02 Markus Paulmichl Oligo-(2-7)-Glucuronat umfassendes Medikament (zweite medizinische Indikation)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2987448A (en) * 1959-12-11 1961-06-06 Oil Seed Products Inc Recovery of galacturonic acid
US4521592A (en) * 1981-10-23 1985-06-04 Svenska Sockerfabriks Ab Compounds for therapeutic or diagnostic use, a process and intermediates for their preparation
US4885128A (en) * 1985-07-30 1989-12-05 Janez Megusar Method for improving performance of irradiated structural materials
GB8803157D0 (en) * 1988-02-11 1988-03-09 Nat Res Dev Denture protection
US5055455A (en) * 1988-09-28 1991-10-08 Brigham And Women's Hospital Capsular polysaccharide adhesin antigen, preparation, purification and use
WO1991016449A1 (en) * 1990-04-16 1991-10-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Saccharide compositions, methods and apparatus for their synthesis
US5523014A (en) * 1994-05-16 1996-06-04 Gojo Industries, Inc. Flowable, pumpable cleaning compositions and method for the preparation thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP0716605A1 (de) 1996-06-19
ATE174222T1 (de) 1998-12-15
DK0716605T3 (da) 1999-08-16
US5683991A (en) 1997-11-04
WO1995007084A1 (de) 1995-03-16
DE59407457D1 (de) 1999-01-21
AU7695694A (en) 1995-03-27
JP3798425B2 (ja) 2006-07-19
RU96107098A (ru) 1998-07-27
EP0716605B1 (de) 1998-12-09
SK32996A3 (en) 1997-03-05
HUT74431A (en) 1996-12-30
SK282305B6 (sk) 2002-01-07
PL313393A1 (en) 1996-06-24
CA2171197A1 (en) 1995-03-16
GR3029619T3 (en) 1999-06-30
CZ288050B6 (cs) 2001-04-11
AU679262B2 (en) 1997-06-26
CZ70896A3 (en) 1996-10-16
ES2127940T3 (es) 1999-05-01
DE4330773A1 (de) 1995-03-16
HU9600602D0 (en) 1996-05-28
JPH09502195A (ja) 1997-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU223043B1 (hu) Eljárás mikrobák emlőssejteken való megtelepedését gátló gyógyszerkészítmény előállítására
US5849720A (en) Enhancement of non-specific immune defenses by administration of underivatized, aqueous soluble glucans
US5663324A (en) Method for producing underivatized, aqueous soluble β(1-3) glucan
JP2007228974A (ja) グルカンの酵素処理
JPH11500901A (ja) 連鎖球菌属からのリポテイコ酸を含有する抗腫瘍及び抗コレステロール製剤
JP2001519471A (ja) アンジェリカ・ギガス・ナカイから精製した新規のペクチン質多糖類とその精製方法およびその免疫刺激剤としての使用
EP1323738A1 (en) Negatively charged polysaccharide derivable form Aloe Vera
EP0296626B1 (en) Anti-hiv agents and method of producing the same
JP3568214B2 (ja) 免疫賦活剤
JPH05125102A (ja) 市販カラゲニン類の精製方法
EP0201332A2 (en) A substance having an anti-infective activity
RU2281104C2 (ru) Блокирование накопления микроорганизмов у птиц
JP4132125B2 (ja) ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤
KR20010040752A (ko) 에이즈 치료제
KR101989980B1 (ko) 청귤 추출박 또는 청피 유래의 항암 또는 면역활성 다당 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물
JPH0690745A (ja) Ｌｐｓ産生菌、ｌｐｓ、ｌｐｓを含む医薬及び動物薬
JPH0345601A (ja) クレブシエラ属から抽出されたガラクタン、その製造方法及び薬剤としての使用
HUT57236A (en) Process for producing new sulfate derivatives of galactan extracted from klebsiella and pharmaceutical compositions comprising such products as active ingredient
JP3595966B2 (ja) 内毒血症または敗血症の予防に有効な新規の効力のある非毒性リポ多糖体の調製方法
JPH06256198A (ja) 血中コレステロール上昇抑制剤
JP2000159809A (ja) シイタケ菌糸体抽出物の分画物及びその用途
JP4500008B2 (ja) 新規な二糖類、それを含有する組成物及びその製造方法
KR20030028009A (ko) 홍화로부터 분리한 대식세포 활성화 다당류 및 그제조방법 및 그 용도
JPH0368041B2 (hu)
JPH07304677A (ja) 血圧降下剤

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: GUGGENBICHLER, JOSEF PETER, DE

Owner name: DE BETTIGNIES-DUTZ, ANDREAS, AT

Owner name: JURENITSCH, JOHANN, AT

HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20031204

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees