KR20010040752A - 에이즈 치료제 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 (a) 사람형 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물 및 (b) 뉴클레오시드계 항HIV제를 유효성분으로 하는 AIDS치료제에 관한다. 본 발명에 의하면, 조성물(a)에 의해 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS치료 효과가 증강된다.
Description
AIDS는 HIV(Human Immunodeficiency Virus) 감염을 원인으로 하는 질환이며, 그의 환자수는 근년 급속히 증가하고 있다. AIDS치료에는 Zidovudine (Azidothymidine, AZT), Didanosine(ddI) 등의 뉴클레오시드계 항HIV제 등이 이용되고 있다.
그러나, 이들 종래의 항HIV제로는 AIDS에 대한 치료효과가 충분하지 않아서 더욱 새로운 AIDS치료수단의 개발이 요망되고 있다.
본 발명은 후천성 면역부전증후군(Acquired Immunodeficiency Syndrome: AIDS)의 치료제에 관한 것이다.
도 1은 murine AIDS (MAIDS) 마우스의 생존율의 경시변화를 나타내는 도이다.
[발명을 실시하기 위한 최선의 형태]
본 발명에서 사용되는 (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물은 암의 방사선 요법에 의한 백혈구 감소에 대하여 우수한 회복작용이 있은 것이 알려져 있다 [The Clinical Report (Basic and Clinical Report) 24(4), 1973(1990) 및 Nippon Igaku Hoshasen Gakkai Zasshi 50(8), 993(1990) 등).
그러나, 이 조성물(a)의 AIDS에 대한 작용에 대해서는 전혀 알려져 있지 않다.
이 조성물(a)는 다당체를 주성분으로 하는 것이나, 보다 상세히는 아라비노오즈, 만노오즈 및 글루코오즈를 주구성당으로 하는 다당체 및 소량의 핵산을 함유하는 조성물인 것이 바람직하다. 또한 이 다당체는 겔 여과법에 의한 분자량이 5×102∼5×104의 것이 바람직하다. 이 조성물(a) 중의 핵산 함량은 0.05∼0.3중량% 정도가 바람직하고 또한 1∼5중량% 정도의 단백을 함유하고 있어도 좋다. 또한 이 다당체중의 만노오즈 함량은 10∼72중량%, 아라비노오즈 함량은 3∼30중량%, 글루코오즈 함량은 5∼30중량%가 바람직하다. 또한 이 다당체중의 특히 바람직한 만노오즈 함량은 40∼50중량%, 아라비노오즈 함량은 15∼25중량%, 글루코오즈 함량은 5∼15중량%이다.
이 조성물(a)은 결핵균의 열수성 매체 추출물로부터 정제함으로써 얻어진다. 보다 상세히는 결핵균의 균체로부터 열수성 매체를 추출하고, 추출액을 담백질 제거 처리 및 분자량 105이상의 다당체를 제거처리 함으로써 얻을 수 있다. 여기서 결핵균으로서는 사람형 결핵균이어도, 동물형 결핵균이어도 좋으나, 사람형 결핵균이 보다 바람직하다. 동물형 결핵균으로서는 우형(牛型)(Mycobacterium(M.)bovis), 조형(鳥型)(M. avium), 쥐형(M. microti), M. kansaii, M. marium, M. intracellulae 등을 들 수 있다. 사람형으로서는 아오야마 B주(Aoyama B strain), H37Rv주 및 H37Ra주를 들 수 있으나, 아오야마 B주가 특히 바람직하다. 상기 공정중, 열수성 매체추출은 80∼120℃의 열수성 매체에서 행하는 것이 바람직하다. 여기서 수성 매체로서는 물, 식염수, NaOH 수용액 등을 들 수 있으나, 물이 특히 바람직하다. 또한 단백질 제거처리는 술포살리실산, 트리클로로아세트산, 포스포텅스텐산 등의 단백 침전제를 이용하여 단백질을 침전시키고, 그의 상청을 분취함으로서 행하는 것이 바람직하다. 또한, 분자량 105이상의 다당체 제거 처리는 적당량의 에탄올, 메탄올, 아세톤 등을 사용하여 고분자량의 다당체를 침전시키고, 그의 상청을 분취함으로서 행하는 것이 바람직하다.
한편, (b) 뉴클레오시드계 항HIV제는 특히 제한되지 않으나, Zidovudine(Azidothymidine, AZT), Didanosine(ddI), Zalcitabin(ddC), Stavudine (d4T) 및 Lamivudime(3TC)로부터 선택된 1종 또는 2종이상이 바람직하고, Azidothymidine가 특히 바람직하다.
본 발명에 있어서, 조성물(a)는 주사에 의해 투여하는 것이 바람직하고, 피하주사에 의해 투여하는 것이 특히 바람직하다. 또한, 뉴클레오시드계 항HIV제(b)는 약제의 종류에 따라 다르나, 경구투여 또는 주사에 의한 투여가 바람직하고, 경구투여가 특히 바람직하다. 여기서 경구 투여용의 제형으로서는 과립제, 정제, 캅셀제, 액제 등을 들 수 있다.
조성물(a)의 투여량은 통상 아라비노오즈 환산 당함량으로서 2∼200㎍/일이 바람직하고, 20∼100㎍/일이 특히 바람직하다. 또한, 뉴클레오시드 항HIV제(b)의 투여량은 약제 및 투여경로에 따라 다르나, 경구투여의 경우, 통상 50∼1500㎎/일이 바람직하고, 200∼1000㎎/일이 특히 바람직하다.
조성물(a) 및 뉴클레오시드계 항HIV제(b)는 각각, 통상 약학적으로 허용되는 담체를 첨가하여 상기 투여수단으로 사용되는 의약조성물로서 투여하는 것이 바람직하다. 이들 의약조성물을 조제하는 데 사용될 수 있는 담체로서는 부형제, 결합제, 활택제, 붕괴제, 피복제, 유화제, 현탁제, 용제, 안정화제, 흡수조제, 주사용수, 등장화제 등을 들 수 있다.
그리하여 본 발명자는 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS치료효과를 개선하기 위하여 예의 연구한 결과, 방사선 치료법에서 백혈구 감소를 개선하는 약제로서 알려져 있는 결핵균의 열수성 매체 추출물과 뉴클레오시드계 항HIV제를 병용하면 V환자의 연명율이 당해 항HIV제 단독으로 투여하는 것에 비해 비약적으로 향상함을 발견하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
즉, 본 발명은 (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물 및 (b) 뉴클레오시드계 항HIV제를 유효성분으로 하는 AIDS치료제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물을 유효성분으로 하는 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS 치료효과 증강제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물의 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS 치료효과증강제를 제조하기 위한 사용을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물 및 (B) 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS 치료제 제조를 위한 사용을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 HIV 감염환자에 (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물 및 (B) 뉴클레오시드계 항HIV제를 투여함을 특징으로 하는 AIDS의 처치방법을 제공하는 것이다.
이하, 실시예를 들어 본 발명을 더 상세히 설명하나, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다.
참고예1 (조성물(a)의 조제)
동결건조보존(-20℃)된 사람형 결핵균 아오야마 B주(Mycobacterium tuberculosis strain Aoyama B)를 소톤-감자 배지(Sauton-potato medium)(1)중, 37±1℃에서 종배양한다. 이 종배양균을 제조용 배지(2)에 이식하고, 37±1℃에서 5∼7주간 배양(본배양)하여 얻어진 균체를 주사용수로 세정한 후, 그의 습균체 중량의 20배량의 주사용수를 가하고, 100℃, 120분간 가열하여 추출액을 얻는다. 이 추출액을 0.45㎛의 맴브레인 필터로 여과한 후, 당함량(페놀-황산법에 의한 D-아라비노오즈 환산)이 4.0∼6.0㎎/㎖가 되도록 감압 농축하여 농축액으로 한다. 이어서 단백질 제거 목적으로서 이 농축액에 1W/V%의 술포살리실산을 가하고, 10℃이하에서 15∼20분간 방치후, 추출물을 원심제거(10℃이하, 1150×G, 10분간)하고, 상징액을 회수한다. 이 상징액의 단백질 농도는 0.30㎎/㎖(Lowry법, 티로신 환산)이하이다. 다시 상징액을 검출한계 이하(10 ppm 이하, 염화제2철 용액법)로 될 때까지 술포살리실산을 제거한다. 이 용액을 당함량이 1.8∼2.2㎎/㎖로 되도록 감압 농축하고, 여기에 염화나트륨(0.9W/V%) 및 농축액과 같은 용량의 냉에탄올 가하고, 10℃이하, 40시간이상 방치후, 석출물(고분자 영역의 다당체)을 원심분리(10℃이하, 2040×G, 10분간)한다. 이어서, 이 상징액에 4배량의 냉에탄올을 가하고, 10℃이하, 40시간이상 방치후, 원심분리(10℃이하, 2040×G, 10분간)에 의해 침전물을 회수한다. 이 침전물을 주사용수에 용해하고, 당함량을 1.8∼2.2 ㎎/㎖로 조정 후, 0.45㎛ 맴브레인 필터로 여과하고, 고압증기 멸균(121℃, 20분간)하여 조성물(a)액으로 한다.
(1) 소톤-감자 배지
소톤 배지에 세정 감자 조각을 침지시키고, 115℃, 15분간 멸균한 후, 소톤 감자 배지로 사용하였다.
소톤 배지
L-아스파라긴(1 수화물) 4.0g
시트르산 (1 수화물) 2.0g
황산마그네슘(7 수화물) 0.5g
인산일수소칼륨(무수) 0.5g
시트르산철암모늄 0.05g
글리세린 60㎖
이상을 물에 용해하여 1000㎖로 한다. pH는 수산화나트륨 용액으로 7.0∼7.3으로 조정한다.
(2): 제조용 배지
L-아스파라긴(1 수화물) 4.0g
시트르산 (1 수화물) 2.0g
황산마그네슘(7 수화물) 0.5g
인산일수소칼륨(무수) 0.5g
시트르산철암모늄 0.05g
글리세린 60㎖
이상을 물에 용해하여 1000㎖로 하고, 고압 증기멸균(121℃, 20분간)한다. pH는 수산화나트륨 용액으로 7.0∼7.3으로 조정한다.
얻어진 조성물(a)액의 물리화학적 성질은 다음과 같다.
(1) 외관
미황색 맑은 용액
(2) pH
4.50∼5.30
(3) 단백질 함량
동결건조품중, 3.5중량%(아미노산으로서)
(4) 핵산함량
동결건조품중, 0.1중량%
(5) 다당체의 주 구성 단당
만노오즈 43.4중량%, 아라비노오즈 18.2중량%, 글루코오즈 10.4중량%.
다당체의 주된 구성 단당의 측정 방법: 다당체를 2N 트리플루오로아세트산으로 100℃, 2시간 가수 분해후, 2-시아노아세트아미드 형광 유도체에 의한 액체 크로마토그래피법에 의함(S. Honda, et al, Anal. Chem., 52, 1079(1980).
시험예
Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Apr. 1990, p. 605-609에 따라, LP-BM5 murine leukemia virus를 감염시킨 SC-1 세포의 배양 상청 0.1㎖를 C57BL/6 수컷 마우스에 복강내 투여함으로서 murine AIDS(MAIDS) 마우스를 작성했다. AZT 및/또는 조성물(a) (참고예 1에서 얻은 액)를 바이러스 감염 익일부터 MAIDS 마우스에 투여했다. AZT는 10㎎/㎏/day의 투여량으로 4일 마다 경구투여하고, 조성물(a)는 참고예1에서 얻어진 액을 당함량으로서 10㎎/㎏/day의 투여량으로 격일 복강내 투여했다.
약제 투여후 MAIDS 마우스를 145일간 관찰하고, 생존율을 측정했다. 이들 약제 투여에 의한 MAIDS 치료효과를 판정했다. 130일후의 생존율을 표 1에, 또한 생존율의 경과를 도 1에 나타낸다.
표 1
군 | 마우스의 수 | 생존 | 치사 | 생존율(%) |
콘트롤 | 22 | 8 | 14 | 36 |
조성물(a) | 10 | 3 | 7 | 30 |
AZT | 10 | 6 | 4 | 60 |
조성물+AZT | 10 | 8 | 2 | 80* |
바이러스 감염 130일 후, 생존율에서 콘트롤군과 처치군사이의 통계적 유의치는 평가하였다.
*: p=0.027, 콘트롤과 비교시(Fisher's exact method).
표 1 및 도 1로부터 명백한 바와 같이, AZT 단독투여의 경우에 비하여 AZT와 조성물(a)의 양자를 투여한 군에서는 명백히 MAIDS에 의한 사망률이 저하하였다.
본 발명에 의하면, 뉴클레오시드계 항HIV제 단독투여의 경우에 비하여 AIDS의 치료효과가 비약적으로 향상된다.
Claims (20)
- (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물 및 (b) 뉴클레오시드계 항HIV제를 유효성분으로 하는 AIDS치료제.
- 제 1항에 있어서, 조성물(a)가, 아라비노오즈, 만노오즈 및 글루코오즈를 주구성당으로 하는 다당체 및 핵산을 함유하는 조성물인 AIDS치료제.
- 제 1항에 있어서, 조성물(a)가, 아라비노오즈, 만노오즈 및 글루코오즈를 주구성당으로 하는 분자량(겔 여과법에 의함)이 5×102∼5×104의 다당체 및 핵산을 함유하는 조성물인 AIDS치료제.
- 제 1항 내지 제 3항의 어느 1항에 있어서, 결핵균이 사람형 결핵균인 AIDS치료제.
- 제 1항 내지 제 4항의 어느 1항에 있어서, 결핵균이 아오야마 B주(Aoyama B strain)인 AIDS치료제.
- 제 1항 내지 제 5항의 어느 1항에 있어서, 뉴클레오시드계 항HIV제(b)가 Zidovudine(Azidothymidine, AZT), Didanosine(ddI), Zalcitabin(ddC), Stavudine (d4T) 및 Lamivudime(3TC)로부터 선택된 것인 AIDS치료제.
- (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물을 유효성분으로 하는 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS 치료효과 증강제.
- (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물 및 (b) 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS 치료제 제조를 위한 사용.
- 제 8항에 있어서, 조성물(a)가, 아라비노오즈, 만노오즈 및 글루코오즈를 주구성당으로 하는 다당체 및 핵산을 함유하는 조성물의 AIDS 치료제 제조를 위한 사용.
- 제 8항에 있어서, 조성물(a)가, 아라비노오즈, 만노오즈 및 글루코오즈를 주구성당으로 하는 분자량(겔 여과법에 의함)이 5×102∼5×104의 다당체 및 핵산을 함유하는 조성물의 AIDS 치료제 제조를 위한 사용.
- 제 8항 내지 제 10항의 어느 1항에 있어서, 결핵균이 사람형 결핵균인 조성물의 AIDS 치료제 제조를 위한 사용.
- 제 8항 내지 제 11항의 어느 1항에 있어서, 결핵균이 아오야마 B주(Aoyama B strain)인 AIDS치료제 제조를 위한 사용.
- 제 8항 내지 제 12항의 어느 1항에 있어서, 뉴클레오시드계 항HIV제(b)가 Zidovudine(Azidothymidine, AZT), Didanosine(ddI), Zalcitabin(ddC), Stavudine (d4T) 및 Lamivudime(3TC)로부터 선택된 것인 AIDS치료제 제조를 위한 사용.
- (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물을 유효성분으로 하는 뉴클레오시드계 항HIV제의 AIDS 치료효과 증강제 제조를 위한 사용.
- (a) 결핵균의 열수성 매체 추출물 유래의 다당체를 주성분으로 하는 조성물 및 (b) 뉴클레오시드계 항HIV를 투여함을 특징으로 하는 AIDS의 처치방법.
- 제 15항에 있어서, 조성물(a)가, 아라비노오즈, 만노오즈 및 글루코오즈를 주구성당으로 하는 다당체 및 핵산을 함유하는 조성물의 처치방법.
- 제 15항에 있어서, 조성물(a)가, 아라비노오즈, 만노오즈 및 글루코오즈를 주구성당으로 하는 분자량(겔 여과법에 의함)이 5×102∼5×104의 다당체 및 핵산을 함유하는 조성물의 처치방법.
- 제 15항 내지 제 17항의 어느 1항에 있어서, 결핵균이 사람형 결핵균인 조성물의 처치방법.
- 제 15항 내지 제 17항의 어느 1항에 있어서, 결핵균이 아오야마 B주(Aoyama B strain)인 조성물의 처치방법.
- 제 15항 내지 제 19항의 어느 1항에 있어서, 뉴클레오시드계 항HIV제(b)가 Zidovudine(Azidothymidine, AZT), Didanosine(ddI), Zalcitabin(ddC), Stavudine (d4T) 및 Lamivudime(3TC)로부터 선택된 것인 조성물의 치료방법.
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