HU219814B - Viracid, baktericid és spermicid hatású hüvelykúp és egyéb hüvelyi pesszárium - Google Patents

Abstract

A találmány tárgya hüvelykúp és egyéb hüvelyi pesszárium, amely akövetkező összetevőket tartalmazza: – hatékony mennyiségű,gyógyszerészetileg alkalmazható, helyileg adagolható mikrobaelleneshatóanyag; – legalább mintegy 103 életképes Lactobacillus acidophilusfajba tartozó vagy annak Lactobacillus rhamnosus változata baktérium,amely baktérium mikrokapszulázott, és ahol a baktérium életképes marada pesszárium tárolása alatt a mikrobaellenes szer jelenléte ellenére,és a baktériumot kapszulázó bevonóanyag olyan, hogy az a baktériumot ahüvelyi környezetben lévő nedvességgel történő hosszas érintkezésreadja le, és – gyógyszerészetileg alkalmazható vivőanyag, amely amikrobaellenes hatóanyaggal és a mikrokapszulázott baktériummalalaposan el van keverve. A készítmény adott esetben spermicidhatóanyagot is tartalmaz. ŕ

Description

A találmány a baktericid, viracid és spermicid anyagok területéhez kapcsolódik. Közelebbről a találmány olyan hüvelykúpra és egyéb hüvelyi pesszáriumra vonatkozik, amely spermicid és nagyon hatásos a heteroszexuális kapcsolatok során a szexuálisan terjedő betegségek átadásának megelőzésére.

Ismeretes spermicid hatóanyagok, például nonoxinol-9 vagy oxtoxinol-9 alkalmazása kúpokban, krémekben, habokban egyedül vagy különböző mechanikai fogamzásgátló eszközökkel együtt, elsősorban fogamzásgátló célból. A szakirodalomból az is ismert, hogy a nonoxinol-9-nek bizonyos baktericid hatása is van, és képes a humán immunhiányos vírus (HÍV) elpusztítására, legalábbis bizonyos in vitro kísérletek szerint. A nonoxinol-9 (vagy az oxtoxinol-9) és egyéb spermicid és baktericid hatóanyagok alkalmazása hüvelyi kúpok, krémek, habok és hasonlók összetételében azonban nem problémamentes, mivel ezek a hatóanyagok hajlamosak a hüvely egészséges baktériumflórájának csökkentésére vagy elpusztítására, és ezért a nőknél élesztőfertőzések (candidasis) kialakulását elősegíthetik.

Az előbbiek ismeretében fennáll tehát az az igény, hogy olyan fogamzásgátló szert dolgozzunk ki, amely a nőnél a szexuális kapcsolat előtt intravaginálisan alkalmazható, és amely nagyon hatékony fogamzásgátló, és talán még fontosabb, hogy nagyon hatékony a számos szexuálisan átvihető betegség átadásának megelőzésére. Az utóbbi időben az ilyen fogamzásgátló és megelőzőszerek iránti igény növekedett is, mert a HIV-vírus megjelent és elterjedt az általános heteroszexuális népesség körében is.

Fennáll egy igény továbbá olyan fogamzásgátló és megelőzőszerek iránt, amelyek csökkentik a valószínűségét annak, hogy a nőnemű felhasználójuknál élesztőfertőzések alakulnak ki. Bár a szakirodalom szerint már korábban felismerték azt az igényt, hogy az egészséges intravaginális baktériumflórát fenn kell tartani vagy újra ki kell alakítani, erre a problémára a szokásos megoldást a hüvelyzuhanyok vagy egyéb olyanfajta szerek nyújtották, amelyek Lactobacillus acidophilus kolóniát tartalmaztak. Ezek a hüvelyzuhanyok és egyéb módszerek azonban nem 100%-os hatékony ságúak, továbbá egyáltalán nem járulnak hozzá a fogamzásgátláshoz, és nem védenek a heteroszexuális kapcsolatok alatti szexuálisan terjedő betegségek átadásától.

A találmány olyan hüvelykúpra vonatkozik, amely nemcsak a normális, nem patogén intravaginális baktériumflóra fenntartását vagy újrakialakítását segíti elő, hanem egyidejűleg fogamzásgátló hatású is, és lényeges védelmet nyújt a szexuálisan teijedő betegségek átadásával szemben.

A találmány célja olyan hüvelykúp kialakítása, amely nagymértékben hatékony lényegében valamenynyi szexuálisan teijedő betegség átadásával szemben, és ugyanakkor fogamzásgátló is.

A találmány további célja olyan hüvely kúp kialakítása, amely az említett céloknak megfelel és felhasználóját nem teszi érzékennyé élesztős fertőzésekkel szemben.

Az említett és egyéb célokat a találmány szerint olyan hüvelykúppal vagy egyéb hüvelypesszáriummal, például krémmel, habbal vagy kenőccsel teljesítjük, amely hatóanyagként a következőket tartalmazza:

- egy vagy több gyógyszerészetileg alkalmazható helyi adagoláshoz megfelelő mikrobaellenes szer, például valamely benzalkónium-klorid, cetil-piridiniumklorid, klór-hexidin-glükonát vagy povidon-jód, imidiazolidinil-karbamid vagy diazolidinil-karbamid, és

- egy mikrokapszulázott lactobacillus baktérium életképes kolónia.

Az életképes lactobacillust a kúpba mikrokapszulázott formában visszük be, ez megvédi a baktériumot a kúp tárolása alatt a mikrobaellenes szer hatásától. Másrészt a baktériumot kapszulázó anyag vagy bevonat olyan anyag, amely a baktériumot a hüvelyközegben leadja elsősorban a nedvesség hatására. A leadott lactobacillus baktériumnak az a hatása, hogy a hüvelyfalon kialakítja vagy fenntartja az egészséges tejsavalapú flórát, és hidrogén-peroxidot vagy egyéb baktericid anyagot választ ki, amely megszünteti az abnormális flórakörülményeket, amelyek a fertőzésért felelősek.

A találmány előnyös megvalósításakor a mikrokapszulázott lactobacillus baktériummal együtt egy mikrobaellenes (baktericid) szert is tartalmaz, például egy vagy több, a következőkben felsorolt anyagot: benzalkónium-klorid, cetil-piridinium-klorid, klór-hexidin-glükonát vagy povidon-jód (BETADINE®), valamint imidazolidinil-karbamid és diazolidinil-karbamid; tartalmaz továbbá egy spermicid hatóanyagot is, amely lehet nonoxinol-9 vagy oxtoxinol-9, és tartalmaz továbbá egy puffért, amely egy gyenge savat, például bórsavat vagy szerves savat, például tejsavat, citromsavat vagy ecetsavat tartalmaz, és ez a kúpban, krémben, habban vagy kenőcsben és az alkalmazás után a hüvelyfalon a pH-t az enyhén savas tartományban 3,0 és 5,5 között tartja.

Az in vitro kísérletek és számos in vivő kísérlet is, amely különféle szexuálisan terjedő patogénre vonatkozott, például a Candida albicans és a hasonló élesztőfajták, valamint a Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum, Chlamydia trachomatis, Herpes simplex és a humán immunhiányvírus vizsgálatára vonatkoztak, azt mutatták, hogy a találmány szerinti hüvelykúp nagyban hatásos a szexuálisan terjedő patogének elpusztításában, elősegíti a hüvelyben az egészséges, nem patogén baktériumflóra kialakítását vagy fenntartását, és megelőzi a vaginitist és az élesztőfertőzéseket. A találmány szerint hüvelykúp ezenkívül lényegében mentes a nemkívánatos mellékhatásoktól (például égető, viszkető vagy egyéb kellemetlen érzés) és az elvégzett kísérletek szerint általában nagyon jól elviselhető a nőnemű felhasználó és partnere számára.

A következőkben a találmányt részletesebben is ismertetjük és rövid összefoglalót adunk az elvégzett kísérletekről és a készítmény hatékonyságát igazoló eredményekről.

A találmány szerinti hüvelykúp, krém, hab vagy kenőcs eredeti kombinációban tartalmaz egy mikrobaellenes szert és egy életképes, mikrokapszulázott Lactobacillus acidophilus baktériumot. A baktérium azért szerepel mikrokapszulázott formában, mert így védelmet élvez a mikrobaellenes szer hatásától. Általában a talál2

HU 219 814 Β mány célja megvalósítható hüvelykrém, hab vagy kenőcs formában is, az előnyös megvalósítás azonban hüvelykúp, a találmányt ezért a továbbiakban kúpként ismertetjük. Magától értetődik azonban, hogy a találmány általános elve megvalósítható a már említett krém, hab vagy kenőcs formában is, ezért ezeket a kúppal együtt összefoglaló néven hüvelypesszáriumnak vagy pesszáriumoknak nevezhetjük.

A találmány szerinti kúpban lévő mikrobaellenes (baktericid) szer bármely gyógyszerészetileg alkalmazható ismert, helyileg adagolható mikrobaellenes szer lehet. Ezek közül példaként megemlítjük a kationos felületaktív anyag típusú mikrobaellenes (baktericid) szereket, így a benzalkónium-kloridot, metil-benzetónium-kloridot, cetil-piridinium-kloridot és a cetrimidet (amely vegyes alkil-trimetil-ammónium-bromid). A baktericid szer lehet ezenkívül klór-hexidin-glükonát vagy valamely jodid, amely baktericid szert tartalmaz, például povidon-jód (amelyet BETADIN® márkanéven ismerünk). A találmány szerint az egyes hüvelykúpban körülbelül 12-3000 mg benzalkónium-klorid vagy metil-benzetónium-klorid van, az előnyös mennyiség kúponként körülbelül 120 mg benzalkónium-klorid. Ebből a szempontból magától értetődő, hogy a találmány szerint a nőnemű felhasználónak kell alkalmaznia intravaginálisan egy kúpot a szexuális kapcsolat előtt néhány perccel-néhány órával. A kúp összes tömege előnyösen körülbelül 1,2 g (1200 mg), ez azonban nem jelent korlátozást, mivel a kúp összes tömege és térfogata nemcsak a hatóanyagok mennyiségétől, hanem az inaktív komponensek (töltőanyagok, gyógyszerészeti vivőanyagok) mennyiségétől is függ. A következő leírásban egy komponens vagy összetevő előnyös mennyiségén mindig az egy kúpban lévő mennyiséget értjük, és az egy kúp az előnyös megvalósítási mód szerint körülbelül 1,2 grammos.

A találmány szerint cetil-piridinium-kloridból 25-4000 mg-ot használunk kúponként, előnyösen 50-1000 mg-ot. Klór-hexidin-glükonátból 10-2000 mg-ot, előnyösen 25-1200 mg-ot használunk. Povidon-jódból (BETADIN®) 25-5000 mg-ot, előnyösen kúponként 120 mg-ot használunk. Előnyösen a fent említett mikrobaellenes szerek közül használjuk valamelyiket az említett mennyiségtartományban, azonban használhatjuk ezek kombinációját is ekvivalens mennyiségben. A kationos felületaktív anyag típusú szerek, például a benzalkónium-klorid azonkívül, hogy baktericid szerek, spermicid hatással is rendelkeznek. A találmány szerint baktericid szerként használhatunk a fentieken kívül imidazolidinil-karbamidot is, ebből kúponként 10-1000 mg-ot, előnyösen körülbelül 100 mg-ot használunk.

A diazolidinil-karbamidból kúponként 10-1000 mg-ot, előnyösen körülbelül 100 mg-ot használunk. A találmány szerint használható további mikrobaellenes szerek közül példaként megemlítjük még a hexil-rezolcint (25-1000 mg), a cetrimidet (100-4000 mg), a hexaklorofént (25-3000 mg), a triklokarbant (4,4’,4’-triklór-karbanilid, 50-1000 mg), a kloroxilenolt (25-1000 mg) és a hexadecil-trimetil-ammónium-bromidot (25-400 mg).

Az említett mikrobaellenes szerek közül a legelőnyösebb a benzalkónium-klorid, különösen akkor, ha csak egy mikrobaellenes szert használunk.

A találmány szerint előnyösen azonban nem egy mikrobaellenes szert használunk, hanem inkább egy mikrobaellenesszer-kombinációt.

Különösen előnyös az olyan mikrobaellenesszerkombináció, amely egyrészt mikrobaellenes szerként tartalmaz benzalkónium-kloridot, metil-benzetóniumkloridot, cetil-piridinium-kloridot, klór-hexidin-glükonátot vagy povidon-jódot (BETADIN®), és ez az előnyös készítmény tartalmaz imidazolidinil-karbamidot és diazolidinil-karbamidot is.

A találmány szerinti hüvelykúp egy másik lényeges komponense a Lactobacillus acidophilus vagy a Lactobacillus rhamnosus baktérium életképes kolónia, amelyből egy kúpnak ΙΟ³—10⁷ életképes baktériumot kell tartalmaznia, előnyösebben 10⁵-10⁷ között, a legelőnyösebb életképesbaktérium-szám kúponként körülbelül 1 000 000 (10⁶)· A baktériumokat a kúp mikrokapszulázott formában tartalmazza. Előnyösen a baktérium a Lactobacillus rhamnosus faj és az egyes kúpok legalább 10⁶ életképes baktériumot tartalmaznak. Habár vannak olyan bakteriológusok, akik a Lactobacillus rhamnosus! külön fajtának, bár a Lactobacillus acidophilus rokonának tekintik, a rhamnosus szerintünk inkább az Acidophilus fajta egyik egyszerű változata. Amint az a szakterületen ismert, mindként baktérium a Lactobacillus acidophilus és a Lactobacillus rhamnosus „barátságos” baktérium és az egészséges intravaginális baktériumflóra része. Ismert, hogy mindkét baktérium bizonyos baktericid szereket és hidrogén-peroxidot termel, és így hozzájárul a patogén baktériumok elpusztításához. A találmány szempontjából a Lactobacillus rhamnosus előnye az acidophilus változattal szemben, hogy egyrészt a rhamnosus változat jobban szaporodik (körülbelül 8-10-szeresen) és több szénhidrátot tud fermentálni (23-at, szemben az acidophilus változat esetén a 12-vel), valamint hogy a rhamnosus változat L⁺ tejsavat termel, míg az acidophilus változat a tejsav racém elegyét termeli. Ezek előnyös tulajdonságok, mivel a rhamnosus változatnak az a képessége, hogy többféle szénhidrátot fermentál, erősebbé, életképesebbé teszi ezt a baktériumot. Az L⁺ tejsav termelése pedig azért előnyös, mert az L⁺ enantiomer rendelkezik a nagyobb gombaellenes hatással.

A találmány szerint felhasznált Lactobacillus acidophilus és a Lactobacillus rhamnosus változat is beszerezhető kereskedelmi forrásból, vagy laboratóriumi törzsekből is előállítható. A később ismertetett előnyös megvalósításokban felhasznált Lactobacillus rhamnosusl a kanadai Quebecben lévő montreali Rosell Intézetből szereztük be. A találmány szerint a Lactobacillus változatot mikrokapszulázzuk, és mikrokapszulázott formában keverjük össze a találmány szerinti egy vagy több mikrobaellenes szerrel és egyéb komponenssel. A következőkben ismertetünk néhány, ezen baktérium mikrokapszulázására használható eljárást. A baktérium mikrokapszulázásának célja, hogy megvédjük azt a mikrobaellenes szer vagy szerek hatásától a kúp alkal3

HU 219 814 Β mazása előtti időszakban. A baktérium kapszulázásához olyan anyagot vagy bevonatot választunk a találmány szerint, amely a hüvelyi környezetben (elsősorban a nedvesség miatt) elveszti a filmszerkezetét és leadja a Lactobacillus baktériumot.

Az egy vagy több baktericid hatóanyagon és a mikrokapszulázott Lactobacillus baktériumon kívül a találmány szerinti kúp a következő nem lényeges alkotórészeket vagy komponenseket is tartalmazza. Ezeket a komponenseket azért tekintjük nem lényegeseknek, mert a találmány fő célkitűzéseit ezek nélkül is el lehet érni. A találmány azon megvalósítási módjai azonban, amelyek tartalmazzák ezeket a nem lényeges komponenseket, bizonyos előnyökkel rendelkeznek, ezért ezeket előnyös megvalósítási módoknak tekintjük, valamint újnak és feltalálótevékenységet tartalmazónak is tekintjük az alapmegvalósítási móddal való kombináció szempontjából.

A találmány szerinti kúp előnyösen tehát tartalmaz egy primer spermicid hatóanyagot, amely nonoxinol-9 vagy oxtoxinol-9. Ez utóbbit a találmány szempontjából lényegében ekvivalensnek tekintjük a nonoxinol-9-cel. Egy kúp a nonoxinol-9-ből körülbelül 50-500 mg-ot tartalmaz, az előnyösen mennyiség 100 mg. A nonoxinol-9 korábbi felhasználásai során súlyos hátrányos vonások mutatkoztak, mivel az anyag ismételt alkalmazásával megnövekedett a vaginitis és az élesztős fertőzés valószínűsége, főként azért, meg a nonoxinol-9 a hüvely normális baktériumflóráját károsan befolyásolja. Azonban ha a nonoxinol-9-et a találmány szerinti egyéb komponensekkel együtt használjuk, akkor ezek a hátrányos tulajdonságok nem jelentkeznek.

A találmány szerinti hüvelykúp előnyösen tartalmaz egy olyan puffért is, amely a kúp pufferolására alkalmas, és a szexuális kapcsolat után néhány óráig képes a hüvelyben a pH-t körülbelül 3,0 és 5,5 közötti értéken, előnyösen 4,3 és 4,5 között tartani. Bármely gyenge, gyógyászatilag alkalmazható savat használhatunk, ilyenek például a bórsav, vagy a gyenge szerves savak, például tejsav, aszkorbinsav, citromsav vagy ecetsav, a megfelelő nátrium vagy egyéb gyógyászatilag alkalmazható sóval kombinálva (olyan mértékben, amely a kívánt pH-érték eléréséhez szükséges). A kúp pH-ját előnyösen puffénál 4,3 és 4,5 közötti értékre állítjuk be, ehhez előnyösen tejsavat és nátrium-laktátot, vagy tejsav, nátrium-laktát és aszkorbinsav kombinációját használjuk. Azt tapasztaltuk, hogy a találmány szerinti, a fent ismertetett módon pufferolt kúp alkalmazásával a hüvelyi pH coitus után is savas marad és ismert, hogy ez előnyös a fogamzásgátlás szempontjából továbbá az egészséges hüvelyi baktériumflóra fenntartása szempontjából is. Az aszkorbinsav felhasználása a pH beállítására azért is előnyös, mert ismeretes, hogy az aszkorbinsav növeli a méhnyaknyálkahártya viszkozitását, és ezáltal megnehezíti mind a sperma, mind a mikroorganizmusok számára a méhnyakba való bejutást. Az aszkorbinsav tehát növeli a találmány szerinti kúpnak mind a mikrobaellenes, mind a fogamzásgátló hatását.

A találmány szerinti kúp tartalmaz egyéb olyan gyógyszerészeti vivőanyagokat is, amelyek lehetővé teszik a kúp kialakítását. Különösen előnyös a hidroxipropil-metil-cellulóz (körülbelül 100 kúphoz 40 grammot használunk) és a mikrokristályos cellulóz (körülbelül 20 g/100 kúp), mivel ezek a komponensek jól tapadnak a hüvelyfalhoz savas környezetben, amelyet a találmány szerinti kúpban a megfelelő pufferrendszer biztosít. Előnyösen további vivőanyagokat, például magnézium-sztearátot (100 kúphoz 2-4 grammot) és szilícium-dioxidot (100 kúphoz 2-4 grammot), valamint laktózt (100 kúphoz 2-3 grammot) is használunk.

A találmány szerinti kúphoz adott esetben egyéb komponenseket vagy alkotórészeket is használhatunk, például illatanyagokat, mentolt, eukaliptuszolajat, metilszalicilátot vagy egyéb szalicilátokat, mint topikális hűtőanyagokat, hidrokortizont vagy egyéb gyulladásgátló szteroidokat (kúponként 1-500 mg-ot), és gyulladásgátló szereket; EDTA-t, mint nedvesítőszert és enyhe mikrobaellenes szert; propilénglikolt vagy egyéb gyógyászatilag alkalmazható glikolt, metil-parabent vagy egyéb parabenszármazékot, mint nedvesítőszert és „textúrakialakító” szert; parodiizobutil-fenoxi-polietoxi-etanolt vagy dodekaetilénglikol-monolaurátot, mint spermicid és enyhe mikrobaellenes szert; tritionokat és menfegolt, mint spermicid, enyhe mikrobaellenes és nedvesítőszert.

A következőkben a találmányt példákkal is illusztráljuk, először bemutatjuk a Lactobacillus aciphilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium mikrokapszulázására használható eljárásokat, majd az azt követő példákban bemutatjuk néhány előnyös találmány szerinti kúp előállítását.

Kapszulázási eljárások

A kapszulázáshoz életképes liofilizált Lactobacillus baktériumot használtunk, amelyet a közeg eltávolítása után liofilizáltunk. A baktériumot kereskedelmi forrásból beszerezhetjük vagy laboratóriumi törzsekből előállíthatjuk. A jelenleg előnyösnek tartott megvalósítási módok esetén Lactobacillus rhamnosus baktériumot szerzünk be a kanadai (Quebec, Montreal) Rosell Intézetből. Az organizmust tápközegben növesztjük. A megfelelő tápközegek közül megemlítjük a következőket: Thayer-Martin média, Trypticase Soy, Brain-Heart Infusion Broth közeg, de alkalmas bármely más dúsított közeg is, amely megfelel ezeknek az organizmusoknak a tenyésztésére, mivel a találmány szerinti kúp sikere szempontjából a tápközeg nem kritikus. Mindössze az életképesség és a mikroorganizmusok mennyisége, ami számít, ezeket folyamatosan meghatározzuk standard klinikai laboratóriumi hígítási eljárásokkal, például úgy, hogy a baktérium meghatározott hígítását vér-agar lemezre vagy valamely más dúsított közegbe helyezzük 37 °C-on 24-48 órán keresztül, 5-10%-os szén-dioxid-tartalmú atmoszférában inkubáljuk, majd kolóniaszámlálást végzünk. A tápközeget centrifugálással távolítjuk el 14 000 g-vel 0-4 °C közötti hőmérsékleten, majd steril, kiegyensúlyozott sókkal és 5%-os glükózoldattal mossuk legalább háromszor az első centrifugálás után. A baktériumokat azután hirtelen megfagyasztjuk cseppfolyós nitrogénnel és nagyvákuumban liofílizáljuk.

HU 219 814 Β

A kapszulázóeljárás

A fentiek szerint frissen előállított, megmosott és liofilizált baktériumot 10 ml 5%-os glükóz sóoldatban szuszpendáljuk, olyan térfogatban, hogy sűrű baktériumszuszpenziót kapjunk, amely 1-10 millió organizmust tartalmaz ml-enként (10⁹) 0-4 °C közötti hőmérsékleten. Valamennyi eljárást 0-4 °C közötti hőmérsékleten végzünk, ha másként nem jelezzük, annak érdekében, hogy a Lactobacilli baktérium, amely szobahőmérsékleten elveszti az életképességét, életképes maradjon. A baktériumszuszpenziót gyorsan, gyengéden keverjük, miközben 0,4-0,4 ml nátrium-alginát-oldatot (1,5 tömeg/térfogat%) adagolunk. A kapott elegyet azután négyliteres gömblombikba töltjük nitrogénáramban, burkolt 14-es méretű tűn keresztül. A négyliteres gömblombikot előzetesen 5%-os albuminoldattal kimossuk, majd legalább 10 órán keresztül 65 °C-on melegítjük, az eljárás során felhasznált tűt és burkolócsövet ugyanilyen módon kezeljük.

A fenti elegyet azután 30-as méretű, többszörösen kúpos tűn préseljük át nyomás alatt nagy fecskendőt és nitrogénáramot alkalmazva. A tű végén nagyon kis cseppecskéket kapunk, ezeket nitrogénnel és levegőárammal megszárítjuk a 30-as méretű tű körül, majd a cseppecskéket 1,3-2%-os vizes kalcium-klorid-oldatban gyűjtjük össze, ahol ezek gélesednek. Ezután a kapott terméket legalább háromszor mossuk 0,08-0,13%-os 2-(N-ciklohexil)-amino-etánszulfonsav (CHES)-oldattal és 1,0-1,5%-os kalcium-klorid-oldattal.

A gélesedett cseppecskéket vagy kis gömböket azután tovább mossuk legalább ötszörös feleslegben lévő 0,1%-os CHES-, 1,1%-os kalcium-klorid-, majd normál sóoldattal. A kapott gömböket ezután „hirtelen fagyasztjuk” cseppfolyós nitrogénben, majd liofilizáljuk. Ezen lépések után a kapszulázott organizmust felhasználhatjuk a találmány szerinti készítményben.

B kapszulázási eljárás

Az A kapszulázási eljárást oly módon javítjuk, hogy a következő lépéseket is elvégezzük annak érdekében, hogy a baktériumok még ellenállóbbak legyenek kationos mikrobaellenes szerekkel szemben. A lépéseket 0-4 °C közötti hőmérsékleten végezzük. Tehát az A kapszulázási eljárás során ismertetett mosólépések után a terméket poli-L-lizin (Sigma 0,05 tömeg/térfogat%-os) gömboldattal 10 percig reagáltatjuk. A gömböket azután normál sóoldattal mossuk, amelynek pHját 4,5-re állítjuk be tejsavval. A kapott gömböket azután „hirtelen fagyasztjuk” cseppfolyós nitrogénben, majd liofilizáljuk. Az említett lépések után a kapszulázott organizmust felhasználhatjuk a találmány szerinti készítményben.

C kapszulázási eljárás

0-4 °C közötti hőmérsékleten a frissen előállított, mosott, liofilizált baktériumot összekeverjük hidroxipropil-metil-cellulózzal, oly módon, hogy a baktérium és a hidroxi-propil-metil-cellulóz tömegaránya 10:90 legyen, ez az arány változhat 1:99 és 99:1 között is. Ez a kapszulázott organizmus végső tömegét és életképességét befolyásolja. Magától értetődő, hogy ha cellulózból magasabb arányt alkalmazunk, akkor az alkalmas a baktérium „védelmére” a kapszulázási eljárás alatt. A liofilizált baktérium és a hidroxi-propil-metil-cellulóz keverékét „üstös” bevonással kapszulázzuk. Ezt úgy végezzük, hogy rozsdamentes acél gömblombikot használunk, amelyet először körülbelül 1%-os vizes magnézium-sztearát-szuszpenzióval „bevontunk”. Egy szabadon vízáteresztő akril-metakrilsav-észter kopolimer és egy részlegesen vízáteresztő akril-metakrilsav-észter kopolimer elegyét (EUDRAGIT RL®, illetve EUDRAGIT RS®, amelyet a Rohm Parm. Ltd., Németország cégtől szerzünk be) szuszpendálunk 5-10% koncentrációban aceton/izopropanol 1:1 térfogatarányú elegyében, amely 1 tömeg/térfogat% ricinusolajat is tartalmaz. A két kopolimer aránya változhat 1:1 és 1:10 között, előnyös az 1:2 arány. A szuszpenziót a rozsdamentes acél gömblombikba helyezzük. Mivel a kopolimer szuszpenzió gyorsan megöli a baktériumokat, az eljárást gyorsan kell lefolytatni, úgy, hogy a hidroxi-propil-metil-cellulóz aránya nagy legyen a baktériumhoz képest. Tehát a baktérium és a cellulóz keveréket kis mennyiségekben adagoljuk a rozsdamentes acél lombikba, azt erőteljesen keveijük 3-10 percig, miközben az anyagot nitrogénáramban megszárítjuk.

D kapszulázási eljárás

A frissen előállított, mosott, liofilizált baktériumot hozzáadjuk adott esetben térhálósított poli(vinil-pirrolidon) (amelyet a németországbeli BASF cégtől szerzünk be) és 1%-os divinil-benzol (Biorad) 5%-os glükózzal kiegyenlített sóoldattal 5,0 pH-nál (a pH lehet

4,5 és 8,0 közötti) készített sűrű szuszpenziójához, miközben 0-4 °C-on 2-12 órán keresztül gyorsan, de erőteljesen keveijük. A tejsavbacilusok kapszulázódnak, ha ebben az elegyben 1-12 órán keresztül keveijük. A kapott anyagot azután „hirtelen fagyasztjuk” és liofilizáljuk.

E kapszulázási eljárás

A frissen előállított, mosott, liofilizált baktériumot poli(vinil-povidon) (Crospovidone®) szuszpenzióhoz adagoljuk gyors, de gyengéd keverés közben. Pontosabban 10 g liofilizált baktériumot adagolunk 50 g poli(vinil-povidon) (Crospovidone®) szuszpenzióhoz 0-4 °C hőmérsékleten. A kapszulázás úgy történik, hogy az elegyet 30-60 percig keverjük, bár hosszabb időtartam is alkalmazható. A nedvességet azután az elegyből vákuumban szárítókészülékben eltávolítjuk vagy az anyagot „hirtelen fagyasztjuk” és liofilizáljuk.

Kúpkészítményt állítunk elő:

A) eljárás

12,5 g benzalkónium-kloridot vagy metil-benzetónium-kloridot (100 kúpra elegendő adaghoz), 11 g imidazolidinil-karbamidot (100 kúphoz elegendő adaghoz) és 1,1 g diazolidinil-karbamidot (100 kúphoz elegendő adaghoz) (vagy 1,1 g diazolidinil-karbamidot és 1,1 g imidazolidinil-karbamidot, ha tízszer kisebb koncentrációt akarunk elérni), lassan hozzáadunk 40 g hidroxipropil-metil-cellulóz (100 kúphoz elegendő adaghoz) és 20 g mikrokristályos cellulóz (körülbelül 100 kúphoz elegendő adaghoz) steril normál sóoldattal készített szuszpenziójához (amelyből olyan mennyiséget alkalmazunk, hogy sűrű pasztát kapjuk, ez általában 120 ml),

HU 219 814 Β

35-37 °C-on keverés közben. A pH-t lassan reagenstisztaságú tejsav hozzáadásával körülbelül 6,0-6,3 közötti értékre csökkentjük. (Ez a lépés köti a mikrobaellenes szert a „cellulóz” vivőanyagokhoz.) A szuszpenziót 2 órán keresztül keveijük, majd enyhe keverés közben hozzáadjuk 10,0 g aszkorbinsav körülbelül 10-15 ml steril sóoldattal készített oldatát. Az anyag ekkor nagyon sűrű paszta. Ekkor az elegyhez hozzáadjuk a spermicid hatóanyagot (11 g nonoxinol-9-et 100 kúphoz elegendő adaghoz) és gondosan összekeveijük. Ez után a lépés után az eljárást 0-4 °C közötti hőmérsékleten végezzük. Az elegy pH-ját reagenstisztaságú tejsavval 4,3-4,5-re állítjuk be. Azután frissen előállított kapszulázott Lactobacilli baktériumot adagolunk úgy, hogy a végső koncentráció legalább egymillió életképes baktérium/kúp legyen. Ahhoz, hogy ezt a célt elérjük, vagyis kúponként legalább egymillió életképes baktérium legyen a végső koncentráció, a baktériumból általában négy-hatszoros felesleget alkalmazunk, mivel a különböző keverési eljárások során az életképesség bizonyos mértékig csökken. Ez azt jelenti, hogy általában körülbelül 500 mg kapszulázott baktériumot adagolunk. Fontos, hogy ezeket az organizmusokat ne csak alaposan keverjük el, hogy az eloszlásuk egyenletes legyen, hanem gyorsan is, mivel a nedvesség hátrányosan befolyásolja az organizmusok életképességét. A gyors és alapos keverést végezhetjük például úgy, hogy a pasztát vékony rétegben szóljuk steril üveglemezre, majd replikátorral a baktériumot egyenletesen a pasztára szóljuk. Ezután 100 kúpra elegendő adaghoz körülbelül 2-4 g magnézium-sztearátot és ugyanennyi szilícium-dioxidot adagolunk, továbbá adott esetben adagolhatunk még 2-3 g laktózt is.

Az anyagokat gondosan 2-4 °C közötti hőmérsékleten összekeveijük, majd formába préseljük és 0-4 °C közötti hőmérsékleten vákuumban deszikkátorban megszárítjuk (ha szobahőmérsékleten 25 °C-on vagy ennél magasabb hőmérsékleten szárítanánk, az csökkentené az életképes baktériumok számát).

A kúpokat ezután tartóedényekben levegő- és nedvességmentesen lezáquk és itt tartjuk felhasználásig. A szárítás során ezeket nedvességtől és szélsőséges hőmérsékletektől védjük, hogy a Lactobacillusok életképességét fenntartsuk.

B) kúpkészítmény

Az előző A) eljárás szerint előállított módon készítjük a kúpot, azzal az eltéréssel, hogy benzalkóniumklorid helyett cetil-piridinium-kloridot alkalmazunk (100 kúphoz elegendő adaghoz 12,5 g-ot).

C) kúpkészítmény

A készítményt lényegében az A) eljárásnál ismertetett módon állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy benzalkónium-klorid helyett klór-hexidin-glükonátot alkalmazunk (100 kúphoz elegendő adaghoz 12,5 g-ot).

D) kúpkészítmény, amely glicerinalapú és povidon-jódot (BETADINE®) tartalmaz. A készítmény összetétele és az eljárás hasonló az A) kúp-előállítási eljárás során ismertetetthez a következő eltérésekkel: benzalkónium-klorid helyett povidon-jódot (BETADINE®) alkalmazunk (100 kúphoz elegendő adaghoz 12,5 grammot). A három mikrobaellenes szert (imidazolidinil-karbamid 1,1-11 g, diazolidinil-karbamid 11-1,1 g és povidon-jód) lassan adagoljuk, közben gondosan elkeverjük 1 1 glicerin 20-80% koncentrációjú steril 0,15 n (0,85%-os) sóoldattal készített szuszpenziójához. A pH-t reagenstisztaságú tejsavval körülbelül 6,0-6,3 közötti értékig csökkentjük. Ez a lépés enyhén sűríti az elegyet.

A szuszpenziót 2 órán keresztül keveijük, majd enyhe keverés közben hozzáadjuk 6,0-10 g aszkorbinsav körülbelül 10-15 ml steril sóoldattal készített oldatát. Az elegy ekkor nagyon sűrű szuszpenzió. A teljes elegy pH-ját ezután reagenstisztaságú tejsavval 4,3-4,5 értékre csökkentjük. Az anyagot gyorsan lehűtjük 0-4 °C közötti hőmérsékletre, miközben hozzáadjuk a frissen előállított, kapszulázott baktériumot, amelyet a korábbiakban ismertetett módon állítunk elő, de ennél az eljárásnál általában körülbelül 600-800 mg kapszulázott baktériumot adagolunk, amelyet alaposan elkeveijünk 4-6 g laktózzal együtt. Az előző eljárásokkal és készítményekkel szemben nem adagolunk magnézium-sztearátot vagy szilícium-dioxidot. A készítmény ekkor egész szilárd, olyan, mint egy lágy viasz 0-4 °C közötti hőmérsékleten, és könnyen formába préselhető. A kapott kúpokat levegő- és nedvességmentesen edényekbe záijuk és ott tartjuk felhasználásig. Az így előállított kúpok 37 °C-on gyorsan megolvadnak, ezért különösen nagy gondot kell fordítani arra, hogy a tárolása egészen felhasználásig hűvös helyen történjen.

E) kúpkészítmény (glicerinalapú)

12,5 g benzalkónium-kloridot (100 kúphoz való adaghoz), 11-1,1 g imidazolidinil-karbamidot és 11-1,1 g diazololidinil-karbamidot keverés közben lassan hozzáadunk 1 1, 20-80%-os glicerin, 0,15 n sóoldattal készített szuszpenzióhoz. A pH-t reagenstisztaságú tejsavval lassan körülbelül 6,0-6,3 közötti értékre csökkentjük. Ez a lépés kissé sűríti a keveréket. A szuszpenziót 2 órán keresztül keveijük, majd hozzáadjuk 6,0-10 g aszkorbinsav körülbelül 10-15 ml steril sóoldattal készített oldatát enyhe keverés közben. Az elegy ekkor sűrű viszkózus szuszpenzió. (A konzisztenciája a sűrű mézéhez hasonló.) Az elegyhez 11 g nonoxinol-9-et adunk, és azt gondosan elkeveijük. Az elegy pH-ját ezután reagenstisztaságú tejsavval 4,3-4,5 közötti értékig csökkentjük. A kapott terméket gyorsan lehűtjük 0-4 °C közötti hőmérsékletre, és közben frissen előállított kapszulázott Lactobacillus baktériumot adagolunk. Általában 600-800 mg kapszulázott baktériumot adagolunk, és azt 4-6 g laktózzal együtt gondosan elkeveijük. A kapott végtermék kúponként így legalább 10⁶ életképes baktériumot tartalmaz. A formálás ezen stádiumában a készítmény szilárd, olyasmi, mint egy lágy viasz 0-4 °C közötti hőmérsékleten, és könnyen formába préselhető. A kapott kúpokat azután lég- és nedvességmentes módon csomagolva lezáquk, és így tartjuk felhasználásig. A tárolás során nedvességtől óvni kell, és különös gondot kell fordítani arra, hogy hűvös helyen tartsuk, mivel a glicerinalapú kúpok körülbelül 37 °C-on megolvadnak.

F) kúpkészítmény (glicerinalapú)

Ezt a készítményt lényegében ugyanolyan komponensekből és ugyanolyan módon állítjuk elő, mint az E)

HU 219 814 Β készítményt, az az eltérés, hogy benzalkónium-klorid helyett 100 kúphoz való adaghoz 12,5 g cetil-piridinium-kloridot használunk.

H) kúpkészitmény (glicerinalapú)

Ezt a készítményt lényegében ugyanolyan komponensekből és ugyanolyan módon állítjuk elő, mint az E) készítményt, azzal az eltéréssel, hogy benzalkóniumklorid helyett 100 kúphoz való adaghoz 12,5 g klórhexidin-glükonátot használunk.

I) kúpkészítmény (glicerinalapú)

Ezt a készítményt lényegében ugyanolyan komponensekből és ugyanolyan módon állítjuk elő, mint az E) készítményt, azzal az eltéréssel, hogy benzalkóniumklorid helyett 100 kúphoz való adaghoz 12,5 g poli(vinil-pirrolidon)-jódot (BETADINE®) használunk.

Nagytételű előállítás [J készítmény]

Kísérleti üzemi méretekben körülbelül 20 000 kúpot állíthatunk elő egy alkalommal. Elegendő mennyiségű benzalkónium-kloridot, imidazolidinil-karbamidot és diazolidinil-karbamidot alkalmazunk, úgy, hogy kúponként végül körülbelül 120-1000 mg, 10-100 mg és 10-100 mg legyen a fenti sorrendben a koncentráció, nonoxinol-9-ből olyan mennyiséget alkalmazunk, hogy a végső koncentráció ebből az anyagból az egyes kúpban 90-110 mg legyen. Az említett komponenseket egyszerre hozzáadjuk elegendő mennyiségű steril sóoldathoz, amelyből gondos keverés után sűrű paszta keletkezik. A pH-t tejsavadagolással 4,5-re állítjuk be. Gondos keverés után szobahőmérsékleten hozzáadjuk a kapszulázott Lactobacillust. A Lactobacillust az E) kapszulázási eljárásnál ismertetett módon állítjuk elő. A kapott elegyet azután megfelelő magnézium-sztearáttal és szilícium-dioxiddal keverjük el, annak érdekében, hogy az elegy önthető legyen, majd formába préseljük 8 font nyomással 35-38 °C-on. Általában magnézium-sztearátból és szilícium-dioxidból olyan mennyiséget alkalmazunk, hogy ezek koncentrációja 0,01 és 0,1 tömeg% közötti. Az eljárással stabil kúpokat állítunk elő, a mikroorganizmusok életképessége azonban minden adagnál különböző.

K) kúpkészítmény (egyetlen mikrobaellenes szerrel)

12,5 g benzalkónium-kloridot (100 kúphoz elegendő adaghoz) lassan keverés közben hozzáadunk 40 g hidroxi-propil-metil-cellulóz (körülbelül 100 kúphoz elegendő adaghoz) és 20 g mikrokristályos cellulóz (körülbelül 100 kúphoz elegendő adaghoz) steril normál sóoldattal készített szuszpenziójához (a sóoldatból olyan menynyiséget alkalmazunk, amellyel sűrű paszta keletkezik, ez általában 120 ml), 35-37 °C-on. A pH-t reagenstisztaságú tejsav lassú hozzáadásával körülbelül 6,0-6,3 közötti értékre csökkentjük. Ebben a lépésben kötődik a mikrobaellenes szer a bázishoz. Az elegy ekkor nagyon sűrű paszta konzisztenciájú. Ez után a lépés után valamennyi műveletet 0-4 °C közötti hőmérsékleten végzünk. A teljes keverék pH-ját reagenstisztaságú tejsav hozzáadásával 4,3-4,5 közötti értékre csökkentjük. Ezután hozzáadjuk a frissen előállított kapszulázott Lactobacillus baktériumot olyan mennyiségben, hogy annak végső koncentrációja kúponként legalább egymillió életképes baktérium legyen. Ehhez általában a kapszulázott baktériumokból négy-hatszoros felesleg (körülbelül 500 mg) szükséges az előállítási eljárás során bekövetkező veszteség miatt. Fontos a gyors és alapos keverés, mivel a nedvesség hátrányosan befolyásolja az organizmusok életképességét. A keverést végezhetjük úgy, hogy a pasztát vékony rétegben steril üveglapra szórjuk, majd replikátorral a baktériumot egyenletesen a pasztára permetezzük. 25 °C körüli vagy annál magasabb hőmérséklet hátrányosan befolyásolja a kúpban lévő baktériumok életképességét. Ez után a lépés után körülbelül 2-4 g magnézium-sztearátot és ugyanannyi szilícium-dioxidot adagolunk 2-3 g laktózzal együtt vagy a nélkül. Az anyagokat gondosan elkeverjük 0-4 °C közötti hőmérsékleten, majd formába öntjük és szárítóedényben vákuumban 0-4 °C közötti hőmérsékleten megszárítjuk. A kúpokat azután lég- és nedvességmentesen tároljuk felhasználásig. A tárolás során a kúpokat nedvességtől és szélsőséges hőmérsékletektől védeni kell a tejsavbacilus életképességének megőrzése érdekében.

L) kúpkészítmény egyetlen mikrobaellenes szerrel és glicerinalappal

12,5 g benzalkónium-kloridot (100 kúphoz elegendő adaghoz) lassan, keverés közben hozzáadunk 1 1, 20-80%-os glicerin steril 0,15 normál sóoldattal készített szuszpenzióhoz. Ez a lépés kismértékben sűríti az elegyet. Az elegy ekkor mézhez hasonló konzisztenciájú sűrűs és viszkózus szuszpenzió. Az elegy pH-ját reagenstisztaságú tejsavval 4,3-4,5 közötti értékig csökkentjük. Az anyagot gyorsan lehűtjük 0-4 °C közötti hőmérsékletre, és hozzáadjuk a frissen előállított kapszulázott Lactobacillus baktériumot. Ahhoz, hogy legalább kúponként egymillió életképes baktérium legyen a végtermékben, hat-nyolcszoros feleslegben kell a kapszulázott baktériumot adagolni (ez körülbelül 600-800 mg-nak felel meg), és azt 4-6 g laktózzal együtt gondosan el kell keverni. A készítmény ennél a lépésnél szilárd, olyan mint egy lágy viasz 0-4 °C közötti hőmérsékleten, és könnyen formába préselhető. A kúpokat lég- és nedvességmentesen tartályokba zárjuk és felhasználásig így tároljuk.

M) Nagyadagú készítmény

Az eljárással kísérleti üzemi körülmények között körülbelül 300 kúpot állítunk elő, az eljárás azonban nagyobb és kisebb mennyiségek előállítására is alkalmas. Megfelelő mennyiségű benzalkónium-kloridot, imidazolidinil-karbamidot és diazolidinil-karbamidot (úgy, hogy kúponként a fenti sorrendben a végső koncentráció 100-1000 mg, 10-100 mg, illetve 10-100 mg legyen), összekeverünk olyan mennyiségű nonoxinol-9cel, hogy annak végső koncentrációja az egyes kúpban 90-110 mg legyen. Az említett komponenseket egyszerre hozzáadjuk elegendő mennyiségű steril sóoldathoz, az utóbbiból olyan mennyiséget alkalmazunk, hogy gondos keveréssel sűrű pasztát kapjunk. Például 30 g benzalkónium-kloridot, 2,5 g imidazolidinil-karbamidot és 2,5 g diazolidinil-karbamidot adagolunk körülbelül 50 ml steril sóoldathoz szobahőmérsékleten. Ekkor annyi aszkorbinsavat adagolunk, hogy kúponként 100 mg legyen a koncentrációja (összesen 30,0 grammot), majd a következő anyagokat adagoljuk: 140 g i

HU 219 814 Β laktózt (Fást Flow®), 2,5 g metil-cellulózt (Methocel®), 10 g sztearinsavat, 10 g nátrium-keményítő-glikolátot (Tabco®), 1,5 g nátrium-citrátot, 20-60 g szilícium-dioxidot. Az említett anyagokat gondosan elkeverjük, majd összesen 3,0 g kapszulázott Lactobacillust adagolunk szobahőmérsékleten. A Lactobacillust lényegében a fenti B) kapszulázási eljárással állítjuk elő. A kapott elegyet szobahőmérsékleten enyhe nyomással formában préseljük tablettázógép segítségével.

In vitro és in vivő biológiai vizsgálatok

Megvizsgáltuk a találmány szerinti előnyös hüvelykúp (amelyet a fenti A vagy B eljárással állítottunk elő) hatását a következő patogén organizmusokkal szemben, és azt találtuk, hogy a hüvelykúp olyan koncentrációkban, amelyek valószínűleg előfordulnak a kúp felhasználási körülményei között in vivő, képes ezeket az organizmusokat elpusztítani.

BAKTÉRIUMOK: Gardnerella vaginalis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus (Toxic Shock Toxin Production), Neisseria gonorrhoeae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Shigella dysenteriae, Salmonella typhi, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pnumoniae, Ureaplasma urealyticum, Mobilluncus curtisii és Chlamydia trachomatiis.

VÍRUSOK: humán immunhiányt okozó vírus (HÍV), Herpes simplex I, Herpes simplex II, Cytomegalovírus (CMV), Hepatitis A, Hepatitis B.

ÉLESZTŐK: Candida glabrata, Candidapseudotropicalis.

TRICHOMONAS: Trichomonas vaginalis.

A következőkben néhány in vitro és in vivő vizsgálatot ismertetünk.

Az in vitro vizsgálatban egy megfelelően feldúsított közegből körülbelül 30 ml térfogatnyi mennyiséget vettünk, majd ebbe a megfelelő patogént, amelyet egy kúp mikrobaellenes hatásának vizsgálatára kívántuk használni, belehelyeztünk. Általában 10⁶ lóg fázis patogén organizmust adagolunk a közegbe, ez a szám két vagy három nagyságrenddel nagyobb, mint amely ésszerű számítások szerint az a patogén organizmus (egy fajtája) száma, amely egy nőben előfordulhat, ha fertőzött hímnemű partnerrel szexuális kapcsolatot létesít. Egy kúphoz a 30 ml térfogatot tekintettük olyan hígításnak, amely legalább akkora, vagy lényegesen nagyobb, mint amilyenre a hüvelyben lévő egy kúp mikrobaellenes szere felhígul szexuális kapcsolat után. Következésképpen meggyőződésünk, hogy ami a patogének számát és a mikrobaellenes szerek hígítását illeti, az elvégzett vizsgálatok legalább olyan szigorúak vagy szigorúbbak, mint az in vivő előforduló körülmények, vagyis amikor a találmány szerinti kúpot rendeltetésszerűen használják.

Gardnerella vaginalis

A Gardnerella vaginalisszal szembeni vizsgálat során 10⁶ életképes organizmust, amelyet 300 klinikai izolátumból (baktériumos vaginózissal diagnosztizált betegekből) vettünk, dúsított Mueller-Hinton-tápközeghez adagoltunk. A találmány szerinti kúpot, a közeget és az organizmust finoman kevertük 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. Egy, kettő és három óra elteltével alikvot mintát helyeztünk kvantitatíven csokoládé agarlemezre, és azt 37 °C-on inkubáltuk 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. A lemezeket 24,48 és 72 óra elteltével értékeltük. A következő eredményeket kaptuk: a fenti körülmények között a találmány szerinti kúppal vizsgálva a Gardnerella vaginalis 300 klinikai izolátumából az 1, 2,3 vagy 4 óra elteltével vett minták egyikében sem találtunk életképes organizmust.

Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus és toxigén Staphylococcus aureus

A Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus és toxigén Staphylococcus aureus patogén organizmusokból klinikai izolátumokat nyertünk nőgyógyászati betegektől standard laboratóriumi eljárásokkal. A klinikai izolátumokat 10⁶/ml koncentrációban (1 ml-t) dúsított Muellen-Hinton-tápközeghez adtunk. A találmány szerinti hüvelykúpot, a közeget és az organizmust gyengéden kevertük 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. 1,2 és 3 óra elteltével alikvot mennyiséget kvantitatíven csokoládé agarlemezre vittünk és beojtottuk 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. Ezeket 24,48 és 72 óra elteltével értékeltük. A következő eredményeket kaptuk: a Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus faecalis, Streptococcus pyogenesből és toxigén Staphylococcus aureus patogén klinikai izolátumából egyetlenegy életképeset sem találtunk az 1, 2 vagy 3 óra elteltével vett mintákban.

Gram-negatív bacilusok (baktériumok)

Escherichia coli (100 izolátum), Klebsiella pneumoniae (100 izolátum), Shigella dysenteriae (30 izolátum) és Salmonella typhi (30 izolátum) klinikai izolátumokat vizsgáltunk a találmány szerinti hüvelykúppal szemben.

A klinikai izolátumokat 10⁶/ml koncentrációban dúsított Mueller-Hinton-tápközeghez adagoltuk. A találmány szerinti kúpot, a közeget és az organizmusokat enyhén kevertük 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. 1, 2 és 3 óra elteltével alikvot mintát helyeztünk kvantitatíven csokoládé agarlemezre, és azt 37 °C-on inkubáltuk 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. A lemezeket 24,48 és 72 óra elteltével értékeltük. A következő eredményeket kaptuk: a Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus faecalis, Streptococcus pyogenesből és toxigén Staphylococcus aureus klinikai izolátumok fenti körülmények közötti vizsgálatával a találmány szerinti hüvelykúppal szemben egyetlen életképes organizmust sem találtunk az 1, 2 vagy 3 órás mintákban.

Élesztők

Candida albicans (100 izolátum), Candida parasolosis (50 izolátum), Candida tropicalis (50 izolátum), Candida glabrata (50 izolátum) és Candida pseudotropicalis (50 izolátum) klinikai izolátumokat nyertünk vaginitis klinikai diagnózissal rendelkező nőgyógyászati betegektől.

A klinikai izolátumokat 10⁶/ml koncentrációban (1 ml-t) dúsított Mueller-Hinton-táptalajhoz adtunk. A találmány szerinti hüvelykúpot, a közeget és az orga8

HU 219 814 Β nizmusokat gyengéden kevertük 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. 1, 2 és 3 óra elteltével alikvot mennyiséget csokoládé agarlemezre vittünk át és 37 °Con 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban beojtottuk. A lemezeket 24,48 és 72 óra elteltével értékeltük. A következő eredményeket kaptuk: a Candida albicans, Candida parasolosis, Candida tropicalis, Candida glabrata és Candida pseudotropicalis klinikai izolátumok fenti körülmények között végzett vizsgálatával a találmány szerinti kúpokkal szemben nem találtunk életképes organizmust az 1,2 vagy 3 órás mintában.

Trichomonas vaginalis

Trichomonas vaginalis klinikai izolátumokat nyertünk vaginitis klinikai diagnózissal rendelkező nőgyógyászati betegektől.

A klinikai izolátumokat 10⁶/ml koncentrációban (1 ml-t) dúsított Feinstein-Weiberg-tápközeghez adagoltunk. A találmány szerinti kúpot, a közeget és az organizmusokat gyengéden kevertük 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. 1, 2 és 3 óra elteltével alikvot mennyiséget adagoltunk további Feinstein-Weibergközeghez kvantitatíven és azt 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban inkubáltuk. A kémcsöveket 24,48 és 72 óra elteltével vizsgáltuk. A következő eredményeket kaptuk: a Trichomonas vaginalis 30 klinikai izolátum fenti körülmények közötti vizsgálatával a találmány szerinti hüvelykúppal szemben nem találtunk életképes organizmust sem az 1, sem a 2, sem a 3 órás mintában.

Hemophilus ducreyii

Harmins Hemophilus ducreyii klinikai izolátumot nyertünk Hemophilus ducreyii diagnózissal rendelkező betegektől és laboratóriumi mintákból.

A klinikai izolátumokat 10⁶/ml koncentrációban (1 ml-t) dúsított Mueller-Hinton-közeghez adagoltuk. A találmány szerinti kúpot, a közeget és az organizmusokat gyengéden kevertük 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. 1, 2 és 3 óra elteltével alikvot mennyiséget további dúsított Mueller-Hinton csokoládé agarlemezre helyeztünk kvatitatív módon és azt 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban inkubáltuk. A következő eredményeket kaptuk: a Hemophilus ducreyii klinikai izolátumok fenti körülmények között végzett vizsgálatával a találmány szerinti kúpokkal szemben nem találtunk életképes organizmust az 1, 2 vagy 3 órás mintában.

Neisseria gonorrhoeae

Vaginitis vagy cervicitis klinikai diagnózissal rendelkező nőgyógyászati betegektől száz (100) Neisseria gonorrhoeae klinikai izolátumot nyertünk.

A klinikai izolátumot 10⁶/ml koncentrációban (1 ml-t) dúsított Mueller-Hinton-közeghez adagoltuk. A találmány szerinti kúpot, a közeget és az organizmusokat gyengéden kevertük 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. 1, 2 és 3 óra elteltével alikvot mennyiséget csokoládé agarlemezre helyeztünk kvantitatív módon és beojtottuk 37 °C-on 10% CO₂-ot tartalmazó inkubátorban. A lemezeket 24,48 és 72 óra elteltével értékeltük. A következő eredményeket kaptuk: a Neisseria gonorrhoeae klinikai izolátumok fenti körülmények között végzett vizsgálatával a találmány szerinti kúpokkal szemben nem találtunk életképes organizmust az 1, 2 vagy 3 órás mintában.

Obiigát intracelluláris patogének

A Chlamydia trachomatis, Herpes simplex II és újabban a Humán Immunodeficiency Vírus (HÍV) bizonyára a szexuálisan átvitt betegségek közé tartoznak vagy talán azok közül a legfontosabbak. Valamennyi említett patogén obiigát intracelluláris parazita, ezért nem vizsgálható a fent leírt in vitro eljárásokkal a találmány szerinti kúpokkal szemben. Ezenkívül a kúpban lévő mikrobaellenes, spermicid és egyéb hatóanyagok hatással vannak a szövetkultúra-rendszerre és ezt a tényezőt figyelembe kell venni, ha a találmány szerinti kúpot az említett patogénekkel szemben vizsgáljuk. A vizsgálatokat tehát a következő módon végeztük:

Egy találmány szerinti kúpot hagytunk szétesni 30 ml közegben, majd ezután vagy vírusos vagy chlamydia fertőző egységekhez adtuk (abból 10*-t véve) és az elegyet 10% C0₂-ot tartalmazó inkubátorban egy órán keresztül 37 °C-on inkubáltuk. A sejteket ultrahanggal széttörtük, majd a teljes 30 ml anyagot centrifugáltuk 5000 g-vel. Mind a felülúszót, mind az üledéket megfelelő sejtvonalakba ojtottuk. A találmány szerinti kúp sterilizálta a Chlamydia trachomatis, Herpes simplex II, valamint a HIV-tenyészetet az egyórás mintában.

In vivő és in vitro kombinált vizsgálatok

Vizsgálatot végeztünk a hüvelyen belüli pH és mikrobaellenesszer-koncentráció mérésére néhány órával egy találmány szerinti kúp adagolása után (a kúpot lényegében az A és B eljárás szerint állítottuk elő). A vizsgálat során a hüvelyi pH-t megmérjük 0 időpontban (0), valamint óránként 8 órával a kúp bevitele utánig, majd alikvot mennyiségű hüvelyfolyadékot veszünk a hátsó boltozatból 0 időpontban és óránként. Az alikvot menynyiségű hüvelyfolyadékot patogénekhez vagy potenciális patogénekhez adagoljuk annak érdekében, hogy meghatározzuk, milyen hosszú ideig tart a mikrobaellenes hatás intravaginálisan. A vizsgálathoz olyan betegeket választottunk, akiknél nem volt tapasztalható valamely szexuálisan teijedő betegségtünet, ezt egy Gram-törzszsel határoztuk meg nedves cseppes eljárással, valamint a hüvelyfolyadék pH-jából. Ilyen módon 13 önkéntes pácienst választottunk, akiknek életkora 21 és 35 év közötti volt. Bizonyos kísérletezés után megállapítottuk, hogy 200-300 μΐ folyadékot lehet venni a hátsó hüvelyboltozatból sorozatosan kapillárisszívással, amelyet steril passzőrpipettával végeztünk.

Minden önkéntesnek hetente egy kúpot adtunk. Ilyen módon az egyes időszakokban annyi anyagot tudtunk venni, amely 5-7 organizmussal végzett vizsgálathoz volt elég. Meg kell jegyezni, hogy a vizsgálat időtartama alatt (3 hétig) az önkénteseket megkértük, hogy tartózkodjanak a szexuális aktivitástól legalább 5 napig a kúp bevitele előtt.

A hüvelyi pH-t pH-papírral mértük. A hüvelyfolyadékból 10 μΐ-t frissen beojtott baktériumpázsithoz adagoltunk (ezt L üvegpálcikával készítettük) a következő organizmusokból dúsított csokoládéagaron: Gardnerella vaginalis, Streptococcus faecalis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus,

HU 219 814 Β

Staphylococcus aureus* (*amely toxikus sokk toxinját termeli); Neisseria gonorrhoeae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Shigella dysenteriae, Salmonella typhi; Candida albicans, Vandida parasolosis, Candida tropicalis, Candida pseudotropicalis és Candida glabrata.

A következő eredményeket kaptuk: a pH 4,5 maradt a vizsgálat időtartama alatt. A fent említett mikroorganizmusok elpusztultak a hüvelyfolyadék-mintáktól a vizsgálat teljes időtartama alatt.

Annak érdekében, hogy megvizsgáljuk a nyújtott mikrobaellenes hatást, vírusokra és Chlamydia trachomatisra, alikvot mennyiségű, fentiek szerint nyert hüvelyfolyadékot 10 cm³-es megfelelő sejteket és Chlamydia trachomatist, Herpes simplex II típust vagy HIV-et tartalmazó 10⁴ fertőző egységekben lévő kémcsőbe adtunk. A kapott elegyet egy órán keresztül inkubáltuk. Azután a sejteket hangrezgéssel széttörtük és 10 000 g-vel történő centrifugálás után a kapott felülúszót megfelelő sejtekhez adtuk és megfelelően inkubáltuk. Ilyen körülmények között a Chlamydia trachomatis és a vírusok teljesen elpusztultak.

A következőkben annak vizsgálatát ismertetjük, hogy mennyire biztonságos a találmány szerinti kúp alkalmazása naponta 60 napon keresztül.

A vizsgálat célja az volt, hogy megvizsgáljuk a találmány szerinti kúp egészséges pácienseknél történő alkalmazásával kapcsolatos toleranciát és az esetleges kellemetlen hatásokat. A vizsgálat során a páciensek egy találmány szerinti kúpot alkalmaztak 60 napon át és beszámoltak minden kellemetlen hatásról, ami a kúp alkalmazásával kapcsolatos, amelyet akár ők maguk, akár szexuális partnerük tapasztalt.

A pácienseket azután klinikailag és szubjektív módon is értékeltük, feljegyeztük a bőrirritációk esetleges meglétét, bármely kellemetlen hatást, megnövekedett folyást, valamely megváltozott érzetet és hasonlókat, továbbá elvégeztük a hüvelyflóra megfelelő mikrobiológiai vizsgálatát és szükség esetén a szexuális partnerek megfelelő vizsgálatát.

Ebben a vizsgálatban csak olyan személyek vettek részt, akiknek életkora 18 és 45 év közötti, monogámok, semmilyen nőgyógyászati problémájuk nincs és megfelelő fogamzásgátló módszert használnak. Azokat a személyeket, akik valamely vizsgált termékkel szemben túlérzékenyek, vagy a vizsgálat időtartama alatt szisztemikus vagy helyi adagolású mikrobaellenes szereket szednek, vagy candidasisnak megfelelő klinikai vagy laboratóriumi tüneteik vannak, vagy II típusú aktív Herpes simplex fertőzésre utaló sérüléseik vannak, vagy atrófiás vaginitisük van, vagy cervicitisük van, vagy baktériumos vaginózisra jellemző jeleket vagy tüneteket észlelnek, a vizsgálatból kizártuk.

A következő eredményeket kaptuk: A találmány szerinti kúpot 60 napon keresztül naponta alkalmazó 103 nő közül 4 számolt be enyhe irritációról és ezek közül hárman hagyták abba a termék alkalmazását. Négy személy számolt be arról, hogy partnerük tapasztalt irritációt. Egyetlen személy sem tapasztalt változást az érzékenységében vagy olyan hatást, amely befolyásolta volna a normál életét, sem kellemetlen folyásról nem számoltak be.

Tehát a találmány szerinti kúp általában jól tolerálható, csaknem a teljes vizsgálati populációnál. Az, hogy a találmány szerinti kúp elfogadása jobb, mint az egyéb fogamzásgátló és megelőzőeljárásokkal alkalmazott módszereké, több tényezővel magyarázható. Ezek a következők: a találmány szerinti kúpok nagyon gyorsan szétesnek. A kúpvivőanyag alapja affinitással rendelkezik a hüvelyi epitéliummal szemben azon a természetes, enyhén savas pH-tartományon, amelyet az előnyös megvalósításnál alkalmazott tejsavas pufferrendszer biztosít. A kúp alapjának a hüvelyi epitéliummal szemben mutatott affinitása miatt a mikrobaellenes hatóanyagok, beleértve a spermicid hatóanyagot is, nem okoznak hüvelyi irritációt. A találmány szerinti kúp nem okoz kellemetlen folyást. Általában az előnyös megvalósításkor a kúp tömege kicsi (2 grammos), szemben számos spermicid készítménynél szokásos 5 grammal. Ugyancsak a gyors szétesés és az epitéliumhoz való tapadás miatt a kúp gyorsan biodegradálódik. Végül tapasztalható a spermicid hatóanyag és bizonyos mikrobaellenes szerek enyhe detergenshatása is, amely elősegíti a hüvelyi folyás csökkenését. Ezenkívül a kúp nem tartalmaz semmilyen zsírt (olajat, zsírt vagy hasonlót), hanem inkább olyan anyagokat tartalmaz, amelyek a teljes hüvelyboltozathoz tapadnak. Ezért alkalmazásával nincsenek panaszok a „tisztátalanságra”.

A következőkben annak vizsgálatát ismertetjük, hogy mennyire biztonságos a találmány szerinti kúp alkalmazása 60 napon keresztül másnaponta.

A vizsgálat célja az volt, hogy megvizsgáljuk, hogy a találmány szerinti kúp mennyire tolerálható egészséges személyek esetén és van-e bármilyen kellemetlen hatása az alkalmazásnak. A vizsgálatban részt vevő személyek minden másnap egy találmány szerinti kúpot helyeztek be 60 napon keresztül és beszámoltak minden olyan kellemetlen hatásról, amelyet akár ők maguk, akár szexuális partnereik tapasztaltak.

A klinikai és szubjektív vizsgálatnál megvizsgáltuk a bőrirritációk esetleges meglétét, minden esetleges kellemetlen hatást, megnövekedett folyást, az érzetekben bekövetkező változást és hasonlót, elvégeztük továbbá a hüvelyflóra mikrobiológiai vizsgálatát, és szükség esetén a szexuális partnerek megfelelő vizsgálatát. Ebben a vizsgálatban olyan személyek vettek részt, akik 18 és 45 év közöttiek, monogámok, semmilyen nőgyógyászati problémájuk nincs, és megfelelő fogamzásgátló módszert használnak.

Azokat a személyeket, akiket bizonyos okok miatt kizártunk a 60 napig mindennap kúpot alkalmazók vizsgálati köréből, ugyancsak kizártuk ebből a vizsgálatból.

A következő eredményeket kaptuk: A 119 minden másnap egy találmány szerinti kúpot alkalmazó nő közül hárman számoltak be enyhe irritációról. A résztvevők szexuális partnerei közül senki sem számolt be enyhe vagy súlyos káros reakcióról, amely a termék használatához kapcsolódik. Mindössze 6 személy említette partnerének enyhe irritációját. Senki sem tapasztalt változást az érzékenységében vagy valamilyen befolyást a szokásos napi életére, és abnormális folyást sem tapasztalt senki.

HU 219 814 Β

A találmány szerinti kúp hatásának vizsgálata a szexuálisan fertőző betegségek előfordulására

A vizsgálatnak az volt a célja, hogy meghatározzuk a találmány szerinti kúp biztonságos és hatékony voltát nem monogám személyek hüvelyi fertőzései megelőzésére. Olyan személyeket vettünk be ebbe a vizsgálatba, akik azt állították, hogy évente négy vagy több különböző szexuális partnerük van. Elvártuk azt is, hogy ezek a személyek hatékony fogamzásgátló módszert használjanak. Ennél a vizsgálatnál ilyennek tekintettük a méhen belüli eszközöket (IUD), az orális fogamzásgátló szereket, a hüvelyi pesszáriumot vagy a méhnyaksapkát. A vizsgálatban részt vevő személyek 18 és 45 év közöttiek és rendszeresen menstruálnak.

Ebben a vizsgálatban a részt vevő személyek egy találmány szerinti kúpot alkalmaztak előnyösen 5 perccel, de nem kevesebb, mint 2 perccel a szexuális kapcsolat előtt.

A biztonság és hatékonyság szempontjából a részt vevő személyeket a saját válaszaik alapján értékeltük. Például a következő típusú kérdéseket tettük fel: tapasztalt-e valamely égető vagy bizsergő érzést vagy hallott-e ilyesmiről a partnerétől. Megkérdeztük, hogy tapasztaltak-e valamilyen változást az érzeteikben, volt-e a termék alkalmazása után a higéniás szempontból valamely változás, például kellemetlen folyás. Ezenkívül a részt vevő személyek értékelték a szokásos gyakorlatukat. A részt vevő személyeket megvizsgáltuk a vizsgálat kezdetekor abból a szempontból, hogy található-e náluk élesztő, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Gardnerella vaginalis és kvalitatív szempontból megvizsgáltuk a hüvelyi baktériumflórájukat. A részt vevő személyeknél VDRL- és HIV-tesztet is végeztünk a vizsgálatba bekerüléskor. Kolposzkóppal is megvizsgáltuk ezeket a személyeket a vizsgálat kezdetekor és végén is, hogy megállapítsuk, hogy jelen van-e a humán papillomavírus (HPV). A vizsgálat időtartama 6 hónap volt. A következő eredményeket kaptuk:

Szubjektív eredmények: A 168 vizsgált nőből négyen panaszkodtak hüvelyi irritációra és ketten a partnerük irritációjára.

Klinikai eredmények: A 168 vizsgált nő közül senkinél sem találtunk Neisseria gonorrhoeae-t. A VDRL és HÍV szerológiai vizsgálatok is negatívok voltak. Négy személynél találtunk Trichomonas vaginalist, valamennyi aszimptomatikus volt. Négynél diagnosztizáltunk baktériumos vaginózist. 16 klinikai megjelenést tapasztaltunk Herpes simplex II típussal azon 43 személy közül, akiknek már korábban volt Herpes simplex II fertőzésük. Azon személyek közül, akiknek korábban nem volt ismert Herpes simplex II típusú fertőzésük, senkinél nem tapasztaltunk új primer Herpes simplex II típusú esetet. Egyetlen személynél sem tapasztaltunk Chlamydia trachomatis fertőzést.

Valamennyi személy kolposzkópos vizsgálat szempontjából normálisnak bizonyult a vizsgálat befejezésekor. Habár ez nem jelenti abszolút biztonsággal a HPVfertőzés kizárását a kísérlet alatt, annyit legalábbis jelent, hogy a HPV-fertőzés megjelenését megakadályozza a találmány szerinti kúp alkalmazása alatt.

A kísérlettel kapcsolatban megjegyezzük, hogy nyilvánvalóan nehéz vagy talán lehetetlen a potenciális fertőzés fajtáját és veszélyét mennyiségileg kifejezni a nem monogám személyeknél anélkül, hogy az adott személynél és partnerénél minden alkalom előtt tenyészetet készítenénk, ami természetesen lehetetlen. Ezért adottnak véve a személyek saját előtörténetét összehasonlításul, világos, hogy a találmány szerinti kúp alkalmazása a szexuális kapcsolat előtt statisztikusan és ténylegesen csökkentette a szexuálisan terjedő betegségekkel való fertőzések előfordulását a vizsgált személyek körében. Azt is érdemes megjegyezni, hogy azok a résztvevők, akik megfertőződtek a vizsgálat alatt, elismerték, hogy „nem voltak biztosak abban”, hogy „mindig” alkalmazták a kúpot a szexuális kapcsolataik előtt.

A találmány szerinti kúp hatásának vizsgálata visszatérő monilia (élesztőj-fertőzésekre

Ennek a vizsgálatnak az volt a célja, hogy megállapítsuk a találmány szerinti kúp biztonságát és hatékonyságát élesztős fertőzések megelőzésére olyan betegek esetén, akik már többször szenvedtek hüvelyi élesztőgombás fertőzésekben. Ebben a vizsgálatban olyan betegek vettek részt, akik az előző évben legalább négy különböző alkalommal negyedévenként moniliafertőzést kaptak. A vizsgálat céljából lényeges volt, hogy minden élesztőfertőzéses alkalom előtt legalább egy teljesen tünetmentes hétnek kellett lennie (amely alatt nem volt puritisfertőzés vagy folyás). Ezenkívül a legutolsó fertőzés után is kellett legalább egy tünetmentes hétnek lenni. A vizsgált betegek 18 és 45 év közöttiek voltak. A vizsgálatban részt vevő személyek szabályos időközönként menstruáltak. Csak olyan személyek vettek részt a vizsgálatban, akiknél nem volt ismert semmilyen túlérzékenység a vizsgált termék valamely komponensével szemben. Azok a személyek sem vehettek részt a vizsgálatban, akiknél a döntés időpontjában akár klinikai, akár mikrobiológiai vulvovaginitistüneteket észleltünk.

A vizsgálatban a személyeket egyrészt a biztonsággal és hatékonysággal kapcsolatos kérdésekre adott válaszaik, másrészt klinikai vizsgálatok alapján értékeltük. Például a következő kérdéseket tettük fel: tapasztalt-e bármely égető, bizsergő érzést vagy folyást a kúp használatától? A vizsgálat időtartama 6 hónap volt. A vizsgálatban részt vevő személyeknél tünetmentesség esetén kéthavonta, vagy bármely hüvelyi tünet megjelenése esetén azonnal tenyészetet végeztünk.

A következő eredményeket kaptuk: valamennyi vizsgálatban részt vevő személy nagyon jól tolerálta a találmány szerinti kúp másnaponként történő alkalmazását. Csak akkor fordult elő irritáció miatti panasz, amikor élesztős fertőzés történt és a tünetmentes időszakokban nem volt panasz a kúp alkalmazására.

A vizsgálatban részt vevő 40 beteg közül 13-nál négyszer fordult elő élesztős fertőzés, 12-nél háromszor és 15-nél kétszer a vizsgálat időtartama alatt. Azon 13 beteg közül, akiknél négy fertőzés következett be, négyen citotoxikus hatóanyagot szedtek, ketten citotoxikus hatóanyagot és glükokortikoszteroidokat, és négyen glükokortikoszteroidokat. Ezenkívül négy betegnek inzulinfüggő diabétesze volt. Hárman rendkívül túlsúlyo11

HU 219 814 Β sak voltak, az ideális testsúlynál több, mint 50%-kal nehezebbek. Azon 12 beteg közül, akiknél háromszor fordult elő fertőzés, hárman szedtek glükokortikoszteroidokat, ketten citotoxikus gyógyszereket, háromnak volt inzulinfüggő cukorbetegsége és négyen voltak túl kövérek.

A 118 fertőzésből izolált élesztőfajták közül 60 volt Candida albicans, 18 volt Candida globrata, 4 volt Candida tropicalis és 3 Candida parasolosis. A többiek vegyes fertőzések voltak, ahol nem találtunk szignifikáns eltérést a megfelelő fertőzést okozó csoportok között.

A fenti eredményekből az alábbi következtetéseket vonhatjuk le: A találmány szerinti kúp másnaponti alkalmazása olyan betegeknél, akiknél már korábban többször előfordult élesztős fertőzés, lényegesen lecsökkentette a fertőzés visszatérését ebben a csoportban. Bár nem volt lehetséges ebben a vizsgálati csoportban teljesen megszüntetni az élesztős fertőzések előfordulását, azon betegek többsége, akiknél három vagy négy moniliasis fordult elő, citotoxikus gyógyszereket és/vagy glükokortikoszteroidokat szedett. Ezenkívül a többi metabolikus szempontból hátrányos körülmény, így a cukorbetegség vagy a túlzott kövérség is kétségtelenül hozzájárult ahhoz, hogy náluk ez az élesztőfertőzés ilyen makacsnak bizonyult.

Azok a személyek, akiknek metabolikus rendellességeik nem voltak, viszont rendelkeztek az úgynevezett „környezeti tényezőkkel” vagyis atlétikus felépítésűek, valamint feszes és jól záródó alsóneműt hordanak, akiknél a legalacsonyabb a fertőzési arány.

Érdekes megjegyezni, hogy ezen személyeknél öt kivételével a találmány szerinti kúp alkalmazásának abbahagyása után 2 héten belül már nem rendelkeztek Lactobacillusokkal, mint fő hüvelyi baktériumflórával. Ezek az adatok azt jelentik, hogy sokféle tényező játszik szerepet azon betegeknél, akiknél visszatér az élesztős fertőzés. Legalább az egyik tényező az említett problémával rendelkező betegeknél valószínűleg az, hogy a Lactobacillusok nem képesek újra kialakulni domináns hüvelyflóraként, és ezt a tényezőt nagymértékben és előnyösen befolyásolja a találmány szerinti hüvelykúp.

Claims (35)

1. Hüvelyi pesszárium, amely a következő összetevőket tartalmazza:

- hatékony mennyiségű, gyógyszerészetileg alkalmazható, helyileg adagolható mikrobaellenes hatóanyag;

- legalább körülbelül 10³ életképes Lactobacillus acidophilus fajba tartozó vagy annak Lactobacillus rhamnosus változata baktérium, amely baktérium mikrokapszulázott, és ahol a baktérium életképes marad a pesszárium tárolása alatt a mikrobaellenes szer jelenléte ellenére, és a baktériumot mikrokapszulázó bevonóanyag olyan, hogy az a baktériumot a hüvelyi környezetben lévő nedvességgel történő hosszas érintkezésre adja le, és

- gyógyszerészetileg alkalmazható vivőanyag, amely a mikrobaellenes hatóanyaggal és a mikrokapszulázott baktériummal alaposan el van keverve.

2. Az 1. igénypont szerinti hüvelypesszárium, amely hatékony mennyiségű spermicid hatóanyagot is tartalmaz.

3. Az 1. igénypont szerinti hüvelypesszárium, amely hatékony mennyiségű gyógyszerészetileg alkalmazható pufferrendszert is tartalmaz, amely a pesszárium pH-ját 3,0 és 5,0 közötti értéken tartja.

4. A 3. igénypont szerinti hüvelypesszárium, amelyben a pufferrendszer a pH-t 4,3 és 4,5 közötti tartományban tartja.

5. Az 1. igénypont szerinti hüvelypesszárium, amelyben a mikrobaellenes szer benzalkónium-klorid, metilbenzetónium-klorid, cetil-piridinium-klorid, alkil-trimetil-ammónium-bromid, klór-hexidin-glükonát vagy jódpovidon.

6. Az 1. igénypont szerinti hüvelypesszárium, amely legalább három mikrobaellenes hatóanyag keverékét tartalmazza, ezek közül az egyik benzalkónium-klorid, metil-benzetónium-klorid, cetil-piridinium-klorid, alkiltrimetil-ammónium-bromid, klór-hexidin-glükonát vagy jód-povidon, a másik két mikrobaellenes szer pedig imidazolidinil-karbamid és diazolidinil-karbamid.

7. Az 1. igénypont szerinti hüvelyi pesszárium, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium nátrium-alginát-bevonatba van mikrokapszulázva.

8. Az 1. igénypont szerinti hüvelyi pesszárium, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium akril-metakrilsav kopolimer bevonatba van mikrokapszulázva.

9. Az 1. igénypont szerinti hüvelyi pesszárium, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium egy poli(vinil-pirrolidon)-t és divinil-benzolt tartalmazó bevonatba van mikrokapszulázva.

10. Az 1. igénypont szerinti hüvelyi pesszárium, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium poli(vinil-povidon)-t tartalmazó bevonatba van mikrokapszulázva.

11. Az 1. igénypont szerinti hüvelyi pesszárium, amely a méhnyaknyálkahártya viszkozitásának növelésére elegendő aszkorbinsavat is tartalmaz.

12. Hüvelykúp, amely a következő komponenseket tartalmazza:

- hatékony mennyiségű, gyógyszerészetileg alkalmazható, helyileg adagolható mikrobaellenes hatóanyag;

- legalább körülbelül 10³ életképes Lactobacillus acidophilus fajba tartozó vagy annak Lactobacillus rhamnosus változata baktérium, amely baktérium mikrokapszulázott, és ahol a baktérium életképes marad a kúp tárolása alatt a mikrobaellenes szer jelenléte ellenére, és a baktériumot mikrokapszulázó bevonóanyag olyan, hogy az a baktériumot a hüvelyi környezetben lévő nedvességgel történő hosszas érintkezésre adja le, és

- gyógyszerészetileg alkalmazható vivőanyag, amely a mikrobaellenes hatóanyaggal és a mikrokapszulázott baktériummal alaposan el van keverve.

13. A 12. igénypont szerinti hüvely kúp, amely hatékony mennyiségű spermicid hatóanyagot is tartalmaz, amely nonoxinol-9 vagy oxtoxinol-9.

HU 219 814 Β

14. A 13. igénypont szerinti hüvelykúp, amely hatékony mennyiségű gyógyászatilag alkalmazható pufferrendszert is tartalmaz, amely a kúp pH-ját 3,0 és 5,0 közötti tartományban tartja.

15. A 14. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a pufferolórendszer a pH-t 4,3 és 4,5 közötti értéken tartja.

16. A 15. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a mikrobaellenes szer benzalkónium-klorid, metil-benzetónium-klorid, cetil-piridinium-klorid, alkil-trimetilammónium-bromid, klór-hexidin-glükonát vagy povidon-jód.

17. A 16. igénypont szerinti hüvelykúp, amely legalább három mikrobaellenes szer keverékét tartalmazza, ezek közül az egyik benzalkónium-klorid, metil-benzetónium-klorid, cetil-piridinium-klorid, alkil-trimetilammónium-bromid, klór-hexidin-glükonát vagy jódpovidon, a másik két mikrobaellenes szer pedig imidazolidinil-karbamid és diazolidinil-karbamid.

18. A 17. igénypont szerinti hüvelykúp, amely legalább 10⁶ életképes Lactobacillus acidophilus fajba tartozó vagy annak Lactobacillus rhamnosus változatát megtestesítő baktériumot tartalmaz.

19. A 18. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium nátrium-alginát-bevonatba van mikrokapszulázva.

20. A 18. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium akril-metakrilsav kopolimer bevonatba van mikrokapszulázva.

21. A 18. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium egy poli(vinil-pirrolidon)-t és divinil-benzolt tartalmazó bevonatba van mikrokapszulázva.

22. A 18. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a Lactobacillus acidophilus vagy Lactobacillus rhamnosus baktérium egy poli(vinil-povidon)-t tartalmazó bevonatba van mikrokapszulázva.

23. A 12. igénypont szerinti hüvelykúp, amely 12-3000 mg benzalkónium-kloridot vagy metil-benzetónium-kloridot vagy 25-4000 mg cetil-piridinium-kloridot vagy 10-2000 mg klór-hexidin-glükonátot vagy 25-5000 mg povidon-jódot tartalmaz.

24. A 12. igénypont szerinti hüvelykúp, amely mintegy 10-1000 mg imidazolidinil-karbamidot vagy diazolidinil-karbamidot tartalmaz.

25. A 12. igénypont szerinti hüvelykúp, amely mintegy 50-500 mg nonoxinol-9-et vagy oxtoxinol-9-et tartalmaz.

26. A 12. igénypont szerinti hüvelykúp, amely a méhnyaknyálkahártya viszkozitásának megnövelésére elegendő aszkorbinsavat is tartalmaz.

27. A 26. igénypont szerinti hüvelykúp, amely 40-120 mg aszkorbinsavat tartalmaz.

28. Hüvelykúp, amely a következő komponenseket tartalmazza:

hatékony mennyiségű, gyógyszerészetileg alkalmazható, helyileg adagolható mikrobaellenes hatóanyag, amely 12-3000 mg benzalkónium-klorid, 12-3000 mg metil-benzetónium-klorid, 25-4000 mg cetil-piridiniumklorid, 25-4000 mg alkil-trimetil-ammónium-bromid, 10-2000 mg klór-hexidin-glükonát vagy 25-5000 mg povidon-jód;

10-1000 mg imidazolidinil-karbamid;

10-1000 mg diazolidinil-karbamid;

50-500 mg nonoxinol-9 vagy oxtoxinol-9;

40-120 mg aszkorbinsav;

hatékony mennyiségű gyógyszerészetileg alkalmazható pufferrendszer, amely a kúp pH-ját 4,3 és 4,5 közötti értéken tartja;

legalább körülbelül 10³ életképes baktérium, amely Lactobacillus acidophilus faj vagy annak Lactobacillus rhamnosus változata, ahol a baktérium mikrokapszulázva van, és a baktérium életképes marad a kúp tárolása alatt a mikrobaellenes szer jelenléte ellenére, és a mikrokapszulabevonatot alkotó anyag olyan, hogy a baktériumot a hüvelykömyezet nedvességével történő hosszas érintkezésre adja le, és egy gyógyszerészetileg alkalmazható vivőanyag, amely alaposan el van keverve a mikrobaellenes hatóanyaggal és a mikrokapszulázott baktériummal.

29. A 28. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a mikrobaellenes hatóanyag benzalkónium-klorid és amelyben az egyes kúpok mintegy 120 mg benzalkónium-kloridot tartalmaznak.

30. A 28. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a mikrobaellenes hatóanyag cetil-piridinium-klorid és az egyes kúpok mintegy 50-1000 mg cetil-piridiniumkloridot tartalmaznak.

31. A 28. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a mikrobaellenes hatóanyag klór-hexidin-glükonát, és ahol az egyes kúpok mintegy 25-1200 mg klór-hexidinglükonátot tartalmaznak.

32. A 28. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a mikrobaellenes hatóanyag povidon-jód, és ahol az egyes kúpok mintegy 120 mg povidon-jódot tartalmaznak.

33. A 28. igénypont szerinti hüvelykúp, amelyben a baktérium Lactobacillus rhamnosus és a baktérium olyan mikrokapszulázóbevonatba van kapszulázva, amely nátrium-alginát-bevonat, akrilsav-metakrilsav kopolimer bevonat, poli(vinil-pirrolidon) és divinil-benzol-bevonat, vagy poli(vinil-povidon)-bevonat.

34. A 30. igénypont szerinti hüvelykúp, amelynek összes tömege mintegy 1,2 g.

35. A 33. igénypont szerinti hüvelykúp, amely vivőanyagként hidroxi-propil-metil-cellulózt vagy szilíciumdioxidot tartalmaz.