HU212925B - Process for the preparation of beta-hydroxy-alfa-amino acids - Google Patents
Process for the preparation of beta-hydroxy-alfa-amino acids Download PDFInfo
- Publication number
- HU212925B HU212925B HU911854A HU185491A HU212925B HU 212925 B HU212925 B HU 212925B HU 911854 A HU911854 A HU 911854A HU 185491 A HU185491 A HU 185491A HU 212925 B HU212925 B HU 212925B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- beta
- aldehyde
- hydroxy
- acid
- alpha
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1003—Transferases (2.) transferring one-carbon groups (2.1)
- C12N9/1014—Hydroxymethyl-, formyl-transferases (2.1.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
- C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
- C07C229/24—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having more than one carboxyl group bound to the carbon skeleton, e.g. aspartic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Catalysts (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás béta-hidroxi-alfa-aminosavak előállítására. Közelebbről egy enzimes eljárásra vonatkozik, amely béta-hidroxi-alfa aminosavaknak lényegében az L-eritro-alakban való előállítására irányul.
A béta-hidroxil-alfa-aminosavak számos területen használhatók fel, ideértve köztitermékként való alkalmazásukat a béta-laktám antibiotikumok előállítása területén; 1. pl. a következő irodalmi helyeket: P. G. Mattingly et el., J. Org. Chem. 1981,46, 1557 és M. J. Miller et al., J. Am. Chem. Soc. 1980,102, 7026.
Számos kémiai eljárás ismert béta-hidroxi-alfaaminosavak előállítására, ezek többsége azonban egy vagy több hátránnyal jár. Ezek közé tartozik az általánosság hiánya, a sztereokémiái viszonyok befolyásolásának nehézségei, királis segédmegoldások szükségessége, valamint az a körülmény, hogy primer módon a treo (vagy szin-) - izomerek keletkeznek.
Az enzimes eljárások bizonyos szempontból előnyökkel rendelkeznek a kémiai eljárásokkal szemben. Ilyen pl. az, hogy vizes közegben hajthatók végre, enyhe körülmények között és gyakran sztereoszelektívek. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott enzim általában aldolázként ismert. Egy ilyen aldoláz a szerin-hidroxi-metil-transzferáz (SHMT) (L. Schirch: Adv. Enzymol. Relat. Areas Mól. Bioi. 1982, 53, 83 és L. Schirch et al.: J. Bioi. Chem. 1968, 243,5651).
Az aldolázok biológiai szerepe a természetben az, hogy 1 szénatomos egységeket vigyenek rá a szerinre vagy hasítsanak le abból és elvégezzék a béta-hidroxialfa-aminosavak retroaldol-hasítását (amilyen pl. a treonin és az allo-treonin) egy aldehid és glicin keletkezése mellett.
Az aldolázok mindenütt előfordulnak a növényekben, baktériumokban és állatokban (pl. kukoricamagoncokban, csírázó babban és nyúlmájban). A találmány szerinti eljárás során SHMT-t használunk fel béta-hidroxi-alfa-aminosavak - a béta-laktám antibiotikumok prekurzorai - enyhe körülmények között való előállítására. Az eljárás segítségével a béta-hidroxiaminosav számos esetben az L-eritro-izomer alakjában képződik. Ez a prekurzor keresett alakja, amely a bétalaktám antibiotikumok megfelelő diasztereomer alakjait szolgáltatja.
A GB 2 130 216 számú szabadalmi leírás glicinből és formaldehidből SHMT jelenlétében L-szerin előállítását ismerteti. Ez olyan (I) általános képletű vegyületnek felel meg, ahol R hidrogénatom. A JP 01 104 185 számú szabadalmi leírás glicinből és benzaldehidből SHMT-vel béta-fenil-szerin előállítására vonatkozik, ez az R helyén fenilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületnek felel meg.
A találmány tárgya enzimes eljárás (I) általános képletű béta-hidroxi-alfa-aminosavak előállítására, ahol R jelentése 2-6 szénatomos alkenil-, 2-6 szénatomos alkinilcsoport vagy észterezett karboxil-, 1-4 szénatomos alkoxicsoporttal, ciano-, hidroxi-, 1-4 szénatomos alkanoil-oxi-, fenil- vagy furilcsoporttal helyettesített 1-6 szénatomos alkilcsoport, amely abból áll, hogy vizes közegben körülbelül 5,5 és körülbelül 9,0 közötti pH-értéken és körülbelül 30 ’C és körülbelül 55 ’C közötti hőmérsékleten glicint és egy alifás aldehidet vagy egy gyűrűs aldehidet (például 2-furfurilt) szerin-hidroxi-metil-transzferázzal (SHMT) inkubálunk. így például a borostyánkősav-félaldehid egy észterét az eljárás során béta-hidroxi-alfa-adipinsav-monoészterré alakítjuk át.
Közelebbről a találmány szerinti, az (I) általános képletű béta-hidroxi-alfa-aminosavak előállítására irányuló eljárás abból áll, hogy vizes közegben körülbelül 7,0 és körülbelül 8,0 közötti pH-értéken glicint és egy RCHO általános képletű aldehidet reagáltatunk szerin-hidroximetil-transzferáz és piridoxál-5'-foszfát jelenlétében, körülbelül 30 ’C és körülbelül 55 ’C közötti hőmérsékleten. Az eljárást előnyösen 37 ’C-on hajtjuk végre.
A glicin és az RCHO általános képletű aldehid relatív arányai azonban változtathatók. Úgy tűnik, hogy magasabb termék-kitermelések érhetők el, ha ekvimoláris mennyiségeket használunk. A használt enzimmennyiség függ attól, hogy az enzimet milyen mértékben tisztították meg, és hogy a jelenlévő szennyezések milyen vonatkozásban befolyásolhatják az enzimaktivitást.
A reakcióelegy pH-ját a legtöbb szubsztrát esetében kb.
5,5 és kb. 9 közötti értékre állítjuk be, puffer segítségével. Többnyire 7,0 és kb. 8,0 között pH értéken dolgozunk. A keresett pH-tartomány előállítására alkalmasak például a foszfát-pufferek. Mint más enzimreakciók esetében is, kofaktorok befolyásolhatják az enzim szubsztrát-specifítását, valamint az enzim hatékonyságát, egy adott szubsztrát reakciójának katalízisében. A szerin-hidroximetil-transzferáz esetében az eljárásban lényeges szerepet játszó kofaktor a piridoxál-5'-foszfát. A PLP-n kívül más kofaktorok is alkalmazhatók és ezek kedvezően befolyásolhatják az egyes szubsztrátok esetében előállított termék kitermelését. A tetrahidrofolsav például növeli az enzimek a piroszőlősav-aldehid átalakítására irányuló aktivitását. A nátrium-metavanadát ugyancsak kofaktorként szolgál ugyanennek az aldehidnek az átalakítására.
(I) általános képlet az eljárással előállítható bétahidroxi-alfa-aminosavakat belső só alakban mutatja be. Az eljárás pH-ján ez a só-alak várható, más körülmények között viszont létezik az (la) általános képlet által leírt nemionos alak is.
Az eljárásban alkalmazott RCHO általános képletű aldehid egyenes vagy elágazó láncú szubsztituált alkil-, alkenil- vagy alkinil-aldehid vagy heterociklusos aldehid lehet. Az alkilcsoport helyettesítői például a következő csoportok lehetnek:
- alkoxi-, például metoxi- vagy etoxicsoport,
- észterezett karboxilcsoport, például az 1—4 szénatomos alkilészterek,
- ciano-, hidroxicsoport,
- acilezett hidroxicsoport, például formil-oxi-, acetoxi-, propionoxi- vagy butanoil-oxi-csoport, vagy alifás aldehidek oxocsoportokat tartalmazhatnak, például az RCHO általános képletű vegyület lehet egy keto-aldehid, például 4-oxo-pentanal, piroszőlősav-aldehid, stb.
Az eljárásban alkalmazható RCHO általános képletű alkil-aldehidekre a következő konkrét példákat említjük meg: borostyánkősav-félaldehid-metil-észter, bo2
HU 212 925 Β rostyánkősav-félaldehid-benzil-észter, 4-hidroxi-valeraldehid, glutársav-félaldehid-metil-észter, piroszőlősav-aldehid, O-formil-4-hidroxi-valer-aldehid, propargil-aldehid és az (lb) általános képletű alkén-aldehidek, amelyekben R' jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, pl. az akrolein és 4-pentanol.
A találmány szerinti eljárásban az (I) általános képletben
R jelentése előnyösen észterezett karboxilcsoporttal vagy 1-4 szénatomos alkanoil-oxi-csoporttal helyettesített 1-6 szénatomos alkilcsoport.
Az „észterezett karboxilcsoporttal helyettesített 1-6 szénatomos alkil”-csoport egyenes vagy elágazó láncú, észterezett karboxilcsoporttal helyettesített alkilcsoportokat jelent, amelyekben az észterező csoport 1-4 szénatomos alkil-, fenil-, benzil-, helyettesített benzil- (például ρ-metoxi-benzil-, metil-benzil-, p-nitro-benzil-)csoport, difenil-metil- vagy valamely más, szokásos karboxil-védőcsoport.
Az utóbbi csoportokra példák: etoxi-karbonil-metil-, 2-metoxi-karbonil-etil-, 3-(tercier-butil-oxi-karbonil)-propil-, 3-benzil-oxi-karbonil-butil-, 5-(4-metoxibenzil-oxi-karbonil)-hexil-, és hasonló észterezett karbonilcsoporttal helyettesített alkilcsoport.
Az „1-4 szénatomos alkoxicsoporttal helyettesített
1- 4 szénatomos alkil”-csoport jelentése például a következő: metoxi-metil-, 2-etoxi-etil-, 4-tercier-butil-oxi-butil-, 3-izopropoxi-pentil-, 2-etoxi-hexil- stb. csoport.
A „cianocsoporttal helyettesített 1-6 szénatomos alkil-csoport” megjelölés például a következőkre utal: ciano-metil-, 2-ciano-etil-, 4-ciano-butil-, 3-ciano-butil-, 3-ciano-hexil- stb. csoport.
A „hidroxilcsoporttal helyettesített 1-6 szénatomos alkil-csoport” kifejezés pl. a következőkre utal: hidroxi-metil-, 2-hidroxi-metil-, 4-hidroxi-butil-, 3-hidroxipropil-, 3-hidroxi-hexil- és hasonló csoport.
Az „1-4 szénatomos alkanoil-oxi-csoporttal helyettesített 1-6 szénatomos, alkil” -csoport kifejezés pl. a következő csoportokat jelenti: 2-acet-oxi-etil-, 2-formil-oxi-etil-, 3-acet-oxi-propil-, 4-propion-oxi-butil- és hasonló csoportok.
A találmány szerinti eljárásban különösen kitüntetettek azok az RCHO általános képletű aldehidek, amelyekben R egy észterezett karboxil-csoporttal helyettesített 1-4 .szénatomos alkil-csoport. Az ilyen csoportokra példa a 2-(metoxi-karbonil)-etil-, 2-(benzil-oxikarbonil)-etil-, 3-(etoxi-karbonil)-propil-, 2-(formiloxi)-etil- és 2-acet-oxi-etil-csoport.
Az eljárásban használt RCHO általános képletű vegyületek ismertek: a kereskedelemben hozzáférhetők vagy a szokásos módszerekkel előállíthatok. A találmány szerinti eljárás egy kitüntetett megvalósítási módja szerint olyan RCHO általános képletű aldehidet alkalmazunk, amelyben R jelentése 2-(észterezett karboxi)-etil-, 2-ciano-etil-, 2-(észterezett karboxi)-etinil-,
2- (észterezett karboxi)-vinil-, 3-(észterezett karboxi)propil-, 2-formil-oxi-etil-, 2-acet-oxi-metil-, 3-formiloxi-propil-, vagy 3-acet-oxi-propil-csoport és az észterezett karboxil-csoportban az észter-maradék 1-4 szénatomos alkil-, (pl. metil-, etil- vagy terc-butil-), fenil-, benzil-, difenil-metil-, tritil- vagy helyettesített benzil(pl. 4-metoxi-benzil- vagy 4-nitro-benzil-)-csoport.
A találmány szerinti eljárásban való felhasználás szempontjából különösen kitüntetett aldehid a borostyánkősav-félaldehid-észter. Egy másik, különösen kitüntetett aldehid a glutársav-félaldehid egy észtere.
A találmány szerinti eljárásban végbemenő reakciót az 1. reakcióvázlat mutatja be, ahol R jelentése az előbbiekben megadott.
Mint az előbbiekben említettük, a szerin-hidroximetil-transzferáz számos forrásból hozzáférhető. Három ilyen forrás a nyúlmáj (LaVerne Schirch et al., J. Bioi. Chem. vol. 237, no. 8, 1962), a kukoricamagoncok (T. Masuda et al., Agric. Bioi. Chem. 1986, 50, 2763) és a csírázó bab (D. N. Rao és N. A. Rao, Plánt Physiol. 1982, 69, 11).
A következő 1. táblázatban jellegzetes aldehid szubsztrátumokat sorolunk fel, amelyeket az eljárás során két forrásból származó SHMT-vel béta-hidroxi-alfaaminosavakká alakítottunk át. Az 1. táblázatban szereplő szubsztrátumok konverzióját úgy hajtjuk végre, hogy a szubsztrátumot és a glicint az eljárás körülményei között SHMT-vel inkubáljuk. Az eljárási paraméterek egy hányada azonos volt valamennyi szubsztrát esetében; ezeket a következő bekezdésekben részletezzük. A kivételeket - ha előfordulnak - esetenként jelezzük.
Az inkubálást 10 mM foszfát-pufferben végezzük (pH 7,3), amely kb. 80 μΜ koncentrációban piridioxál5'-foszfátot tartalmaz. A jobb eredmények elérése érdekében valamennyi oldatot desztillált, ionmentesített vízzel készítettük el. Az átalakítást kb. 37 ’C-on végezzük, leforrasztott, 500 μΐ térfogatú polipropilén mikrocentrifuga-csövekben, állandó hőmérsékletű vízfürdőben.
A kémcsöveket fénytől óvjuk, eltekintve azoktól az esetektől, amikor ezeket kiemeljük a vízfürdőből, alíkvot mennyiségeknek elemzési célokra való levételéhez. Valamennyi átalakítási kísérletben az SHMT-vel való inkubálással párhuzamosan egy vak enzimes inkubálást is végzünk. Az inkubálási elegy össztérfogata általában kb. 200 μΐ. A vakpróba esetében a körülmények megegyeznek az inkubációs elegyével, eltekintve attól, hogy enzim nincs jelen.
I. táblázat
Az SHMT aldehid (RCHO) szubsztrátumai
| Aldehid (RCHO) R | Enzim* | |
| nyúlmáj | kukoricamagonc | |
| -(CH2)-CO2CH3 | + | + |
| -(CH2)2-<O2(CH3)2 | + | ND |
| -ÍCH2)2-CO2CH3 | + | + |
| -C(O)CH2** | + | + |
| -(CH2)3-0-CHO | + | ND |
| -ch2och2c6h5 | ND | + |
| 2-(2-furil)-etil | + | - |
* + = konverzió; - = nincs kimutatható konverzió; ND = nem határoztuk meg, *♦ a nyúlmáj-SHMT esetében VO3“ van jelen; a kukorica-SHMT esetében tetrahidrofolát van jelen.
HU 212 925 Β
Az eljárás a béta-hidroxi-alfa-aminosav megállapítására oly módon követhető, hogy az inkubációs elegyből időnként alikvot mennyiségeket veszünk ki és a mintákat elemzésnek vetjük alá, a keverékben jelenlevő valamennyi primer amin vegyület HPLC segítségével végzett elkülönítésével és az O-ftálaldehid-izoindol-származékok fluoreszcenciás kimutatásával. A meghatározási eljárást a következő helyeken írják le: Β. N. Jones et al., J. Chrom. 1983, 266, 471; Β. N. Jones et al., J. Liq. Chrom. 1981,4,565 és S. S. Simons Jr. et el., J. Am. Chem. Soc. 1976,98, 7098.
Az inkubációs keverékek és az enzim-vakpróba HPLC elemzése lehetővé teszi annak meghatározását, hogy a kromatogramokon mely csúcsok tulajdoníthatók az enzimes reakció termékeinek.
A találmány szerinti eljárást úgy hajtjuk végre, hogy az aldehidet egy pufferolt glicin-oldathoz adjuk amely PLP-t és egy másik kofaktort tartalmaz -, majd az oldatot összekeverjük a pufferolt enzim-oldattal.
Egy másik megoldás szerint a pufferolt, PLP-t tartalmazó glicin-oldatot és az enzim-oldatot keverjük össze, majd hozzáadjuk az aldehidet. Ugyancsak lehetséges az a megvalósítási mód, amely szerint az enzimoldatot hozzáadjuk az aldehidet és a glicint tartalmazó oldathoz, PLP-t tartalmazó pufferben.
Ahhoz, hogy az eljárás szerinti átalakulás végbemenjen, nincs szükség arra, hogy az RCHO általános képletű aldehid teljesen oldatba menjen. Azok az aldehidek, amelyek csak részben oldhatók a vizes reakcióelegyben, ugyancsak enzim-szubsztrátként szolgálhatnak.
A találmány szerinti eljárás abban az esetben, ha aldehidként alifás aldehidet alkalmazunk (azaz az RCHO általános képletű vegyületben az aldehid-csoporthoz kapcsolódó szénatom telített, -CH2- csoport) kitüntetetten a béta-hidroxi-alfa-aminosav vagy észter L-eritro-diasztereomerjét szolgáltatja.
A találmány szerinti eljárással előállított béta-hidroxi-alfa-aminosavakra példák a következők:
béta-hidroxi-alfa-amino-adipinsav, béta-hidroxi-alfa-amino-hexánsav, béta-hidroxi-alfa-amino-omegaformil-oxi-hexánsav, béta-hidroxi-alfa-amino-gammaoxo-valeriánsav, béta-hidroxi-alfa-amino-gamma-fenil-vajsav, béta-hidroxi-alfa-aminoheptánsav, béta-hidroxi-alfa-amino-omega-(2-furil)-pentánsav és a hasonló aminosavak.
A találmány szerinti eljárás egy kitüntetett megvalósítási módja szerint a borostyánkősav-félaldehid egy észterét, amilyen egy 1-4 szénatomos alkil-észter, pl. a metilészter vagy az izopropil-észter, glicinnel és SHMT-vel inkubáljuk PLP jelenlétében. így a béta-hidroxi-alfa-amino-adipinsav félészterét kapjuk az L-eritro-izomer alakjában. Az eljárás egy másik kitüntetett megvalósítási mód szerint a glutársav-félaldehid egy észterét, pl. a metilésztert inkubáljuk SHMT-vel; így a béta-hidroxi-alfa-amino-pimelinsav félészterét kapjuk.
A találmány szerinti eljárás említett két megvalósítási módját a 2. reakcióvázlat mutatja be; e képletekben R, jelentése 1—4 szénatomos alkil-, fenil-, benzil-, difenil-metil-, 4-metoxi-benzil- vagy 4-nitro-benzilcsoport és n értéke 2 vagy 3.
A találmány szerinti eljárással előállítható továbbá a sav, a béta-hidroxi-alfa-amino-adipinsav, ennek mono-, és di-R!-észtere és sói. Ezek a származékok az R1OOC-CH2-CH2-CH(OH)CH(NH2)COORI' általános képlettel írhatók el, ahol
R, jelentése az előbbiekben megadott és
R/jelentése hidrogénatom vagy Rb
Az eljárás során ezt az aminosavat az L-eritro-alakban kapjuk meg. A diacid sói vagy monoészterek a szokásos módon állíthatók elő. Az ilyen sók közé tartoznak a következők:
- alkálifém-sók, így a nátrium- és kálium-sók,
- alkáli földfém sók, így a kalcium-sók,
- és az ammónium-sók és amin-sók, amelyek pl. a következő aminokkal képezhetők: benzil-amin, dibenzil-amin, ciklohexil-amin, diciklohexilamin, 1-4 szénatomos alkil-csoporto(ka)t tartalmazó primer és szekunder aminok (így a metilamin, etil-amin, dietil-amin, di-(n-butil)-amin), etanol-amin, dietanol-amin, dipropanol-amin stb.
Ezek a sók hasznosak a disav vagy egy monoésztere elkülönítésében és tisztításában és stabil alakokat jelentenek az aminosav tárolására.
Ugyancsak előállíthatok az aminosavakkal és észtereikkel képezett savaddíciós sók. Ilyen sókat azokkal a savakkal képezhetünk, amelyek erősebbek az aminosav savas karboxil-csoportjánál. Példa az ilyen savakra a sósav, hidrogénbromid, foszforsav és kénsav, valamint a szulfonsavak, így a toluol-szulfonsav, naftalinszulfonsav, metán-szulfonsav és az n-bután-szulfonsav.
Rí-észtereken a mono- és a diésztereket értjük, amelyekben Rj jelentése azonos az előbbi reakcióvázlatban megadottal. Az ilyen észterekre példa a monometil-, mono-etil-, dimetil-, dietil-, terc.butil-, di-tercbutil-, benzil-, 4-metoxi-benzil- és a dibenzil-észter.
A találmány szerinti eljárással előállított béta-hidroxi-alfa-aminosavak fontos béta-laktám vegyületek hasznos köztitermékei. Ezek a termékek ismert eljárásokkal béta-laktám vegyületekké alakíthatók át, amelyek ismert antibiotikumok előállításához használhatók fel. A béta-hidroxi-alfa-aminosavak pl. hidroxamát származékokká alakíthatók át és az utóbbiak ciklizálhatók, 3-amino-4-helyettesített béta-laktám-származékok képződése közben, amint ezt a 3. reakcióvázlat bemutatja; e képletekben
R jelentése az előbbiekben és az (I) képlettel kapcsolatban megadott és
R2 jelentése alkil-, alkanoil- vagy aralkil-csoport.
A hidroxamát-képzéshez és a hidroxamát béta-laktámmá való ciklizálásához a következő módszereket használjuk fel: M. J. Miller, Acts. Chem. Rés. 1986,19, 49; G. Rajendra et al., Tetrahedron Lett. 1987,28,6257 és T. Kolasa et al., Tetrahidron Lett. 1987,28, 1861.
Egy másik megoldás szerint a béta-hidroxi-alfaaminosavak N-(helyettesített metil)-azetidinonokká alakíthatók át (4 595 532 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, szabadalmas M. J. Miller). Ezenkívül az eljárással kapott aminosav termékek N(foszfono-metil)-azetidinonokká is átalakíthatok (M. J.
HU 212 925 Β
Miller, 4 820 815 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás).
A következő előállítási eljárások és példák részletesebben íiják le a találmány szerinti eljárást, de nem áll szándékunkban a találmány tárgyát ezekre korlátozni.
A szerin-hidroxi-metil-transzferáz előállítása kukoricamagoncokból
Valamennyi következő eljárást 4 “C-on hajtjuk végre. 5-7 napos kukoricamagoncokat megmosunk és Waring blender-ben homogenizálunk 100 mM-os káliummonohidrogénfoszfát pufferben, amely 1 mM etiléndiamin-tetraecetsav-(EDTA)-dinátriumsót, 1 mM ditiotreitolt és 125 μΜ piridoxál-5'-foszfátot tartalmaz. A keverék kb. 960 g/1 magoncot tartalmaz.
A homogenizátumot sejtvásznon szűrjük át és a szűrletet ammónium-szulfáttal kezeljük. A 35-50%-os ammónium-szulfátos telítés során kicsapódott fehérjét 13,800xg-vel 40 percen át centrifugáljuk, majd pH 7,8 10 μΜ-os foszfát-pufferben oldjuk, amely 125 μΜ piridoxál-5'-foszfátot és 1 mM EDTA-t tartalmaz. Az oldatot dializáljuk és 5-15 mg/ml fehéije értékre töményítjük. Ennek során ugyanazt a puffért használjuk, EDTA nélkül.
A fehérje aldoláz-aktivitásának meghatározásához többkomponensű rendszert használunk, amely a következőkből épül fel; az L-allo-treonin aldolázzal katalizált retroaldolja és a kapott acetaldehid NADH-tól (a nikotin-amid-adenin-dinukleotid redukált alakja) függő, élesztő-alkohol-dehidrogenáz (ADH) hatására végbemenő redukciója.
Fajlagos aktivitás; átlagosan 78 milliegység/mg fehérje. Az enzimaktivitás egységét úgy definiáljuk, mint az ahhoz szükséges enzim-mennyiséget, hogy 1 optikai sűrűség egységnyi változás következzék be 340 nm-en 1 perc alatt, szobahőmérsékleten, a következő összetételű közegben: ADH, 120 mM L-allo-treonin, 125 μΜ PLP és 120 μΜ NADH 100 mM pH 7,5 foszfát-pufferben.
A SHMT-t, amikor nem használjuk, előállítása után vagy liofilizált alakban, vagy lefagyasztva, 10% glicerinnel tároljuk. A következő példákban, hacsak másként nem jelezzük, a pufferrendszer pH 7,3 10 mM kálium-foszfát oldat, amely kb. 80 μΜ piridoxál-5'foszfátot (PLP) tartalmaz. Valamennyi oldatot desztillált, ionmentes vízzel készítünk el.
Az enzimes inkubálást 37 ”C-on lezárt, 500 μΐ térfogatú polipropilén mikrocentrifuga-csövekben végezzük, állandó hőmérsékletű vízfürdőben.
A példákban közölt retenciós idők esetenként kissé különbözhetnek, mivel a HPLC elemzés során kismértékű változások következhetnek be olyan tényezőkben, mint az oszlop működése, ekvilibrálás, puffer-minőség stb.
A következő példákban alkalmazott SHMT-t nyúlmájból állítottuk elő, Schirch (1. az előzőkben) szerint.
1. példa alfa-Amino-béta-hidroxi-adipinsav-monometil-észter
13,3 g (0,177 mmól) glicint és 20 mg (0,172 mmól) borostyánkősav-félaldehid-metil-észtert 5,0 ml pufferben oldunk; így a koncentrációkat 35 mM ill. 34 mM értékre állítjuk be. Az ebben a kísérletben használt aldehid DMSO-mentes, bár korábbi inkubálások alkalmával megfigyelhető volt, hogy az aldehid még mindig tartalmazott szennyezést (abból következően, hogy szintézise CH2=CH-CH2-CH2-COO-CH3-ból kiindulva ózonolízissel történt és a feldolgozás során dimetil-szulfoxidot alkalmaztak).
0,1 mg SHMT-t 100 μΐ pufferben oldunk és az oldathoz hozzáadunk 100 μΐ szubsztrát-elegyet. Alikvot mintákat veszünk 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 és 24 óra inkubálási idő után.
A nagyobb (L-eritro-) termék-csúcsot 22,5 perces retenciós idő mellett figyeljük meg; ez a maximumot 2 óra alatt éri el.
Az első 2 óra alatt egy új kisebb csúcs jelenik meg a HPLC elemzés során, amelynek retenciós ideje kb. 8 perc. 24 óra alatt ennek intenzitása nő, míg a kiindulási glicinnek és közti termék alfa-ami no-béta-hidroxi-adipinsav-metilészternek megfelelő csúcsok csökkennek. 24 óra múlva az új csúcsnak a glicin ill. az észter csúcshoz viszonyított aránya 38:47:15.
Az új csúcsnak megfelelő vegyület szerkezetét függetlenül végzett szintézissel és az autentikus és az enzimes úton keletkezett termék együtt való injektálásával határoztuk meg és azt találtuk, hogy az L-eritroalfa-amino-béta-hidroxi-adipinsav (R = -CH-i-CH2COOH).
Az autentikus vegyület kémiai szintézisét a borostyánkősav-félaldehid-metilészter és egy királis oxazin bór enolátja aldol-kondenzációjával végezzük (D. S. Reno et al., Tetrahderon Lett. 1990, 31, 827), majd a kapott terméket védőcsoport-mentesítjük és hidrolízissel a keresett vegyületet kapjuk.
Ebben a kiindulási aminosavnak az enzimes szintézis során való képződése az eredetileg képződött aminosav-monometil-észter-hidrolízise segítségével következik be. Mivel a termék egy további ionizált karbonsav-csoportot tartalmaz, nem szubsztrát a reverzibilis enzimes aldol-kodenzáció számára. így az új aminosav-termék (L-eritro-alfa-amino-béta-hídroxi-adipinsav) felhalmozódik.
Mint két karbonsav-csoportot tartalmazó aminosav ez a termék a reakcióelegyből ioncserélő kromatográfiával különíthető el és tisztítható (J. P. Greenstein-MWinitz: Chemistry of Amino Acids, vol. 2, p. 14521460, J. Wiley & Sons, New York, 1961).
2. példa alfa-Amino-béta-hidroxi-adipinsav-mono-izopropil-észter
26,1 mg (0,348 mmól) glicint 10,0 ml pufferben oldunk és hozzáadunk 34 mg borostyánkősav-félaldehidizopropil-észtert (amely az előállítási műveletből származó DMSO-t tartalmaz). DMSO-nak az inkubációs elegyben való jelenléte nem befolyásolja hátrányosan az enzimet, illetőleg a reakciót. Az aldehid koncentrációja a pufferben a jelenlevő DMSO mennyiségének levonása után 18 mmól. A glicin kiindulási koncentrációja az inkubálás során az elegyben 17,4 mM, az aldehidé pedig 9 mM.
HU 212 925 Β
A szubsztrát-keveréket (100 pl) hozzáadjuk 0,1 mg SHMT 100 pl pufferrel elkészített oldatához és a blank enzim oldathoz.
Alikvot mintákat veszünk 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 17,25; 25 és 52 óra elteltével és HPLC-vel megvizsgáljuk ezeket. A fő termék-csúcs (L-eritro-) 25 perces retenciós idő után jelenik meg - azaz 0,5 órán belül és 2—4 óra alatt nő maximálisra.
3. példa alfa-Amino-béta-hidroxi-pimelinsav-monometilészter
Az ebben a reakcióban felhasznált glutársav-félaldehid-metil-észter kb. 1:1 tömegarányban tartalmaz DMSO-t. A DMSO melléktermék az aldehid előállítási reakciójában, amelynek lényege az 1-metoxi-ciklopentén ózonolízise és amelynek során a feldolgozási fázisban DMSO-t alkalmaznak (D. L. Cline et al., Tetrahedron Lett. 1980, 36, 1399).
A szubsztrát oldatot úgy készítjük el, hogy 25,6 mg (0,341 mmól) glicint és 66,7 mg aldehid/DMSO keveréket 10 ml pufferben oldunk. így a glicin koncentrációja 34,1 mM, míg az aldehidé kb. 25 mM.
Az enzim-oldat 0,1 mg SHMT-t tartalmaz 40 pl (és nem 100 pl) pufferben oldva. 40 pl szubsztrát oldatot hozzáadunk az enzimoldathoz ill. a blankhoz és a szokásos módon végezzük az inkubálást. 10 pl térfogatú alikvot mintákat veszünk 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 és 17,0 óra elteltével. A 0,5 órás mintában a HPLC kromatogramon 23,7 percnél egy enzim hatására keletkezett csúcs jelenik meg, amely a keresett terméknek felel meg. Az integrálás kb. 20%-os kitermelésre mutat. 22,3 percnél egy második kis csúcs jelenik meg, amely ugyancsak enzimhatásra képződik. Ez kisebb mennyiségű treo-izomemek felel meg.
4. példa alfa-Amino-béta-hidroxi-gamma-oxo-valeriánsav
25,5 mg glicint (0,340 mmól) és piroszőlősav-aldehidet (40 tömeg%-os oldatból 61,1 mg; 0,327 mmól piroszőlősav-aldehid) 10 ml pH 7,2 pufferben oldunk; így a törzsoldatban 34 mM glicin és 32,7 mM piroszőlősav-aldehid koncentrációt állítunk be. 1,5 mg nátrium-metavanadátot adunk hozzá (Aldrich, 90% tisztaságú vegyület). Kb. 30 perc alatt ez feloldódik és koncentrációja 1,11 mM.
Az enzim oldathoz (0,1 mg SHMT 80 pl-ben) 80 pl szubsztrát oldatot adunk. 10 pl-es mintákat veszünk 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 29 és 53 óra elteltével.
A HPLC-vel végzett aminosav-meghatározás arra mutat, hogy az új aminosav 8,5 perces retenciós idővel jelenik meg. Annak igazolására, hogy ez a keresett aminosav, autentikus racém anyagot állítunk elő a rézglicinát módszerrel. Ezek szerint 4,23 g réz(II)glicinátot (20 mM) 10 ml 9M vizes KOH-ban oldunk. Az oldathoz piroszőlősav-aldehidet (40 tömeg%-os vizes oldatból 16,2 ml-t; ez 7,0 g = 9,71 mM aldehidnek felel meg) adunk. 5,25 óra elteltével 3M ammónium-hidroxidot (40 ml) adunk a kapott barna színű oldathoz és az oldószereket ledesztilláljuk. Barna színű olajat kapunk. Az olajat NH4 +-alakú Dowex—50 gyantát tartalmazó oszlopon vezetjük át; az eluálást vízzel végezzük. így a félig tisztított aminosavat kapjuk.
5. példa alfa-Amino-béta-hidroxi-6-formil-hexánsav
Ebben az inkubációs elegyben az aldehid még tartalmaz jelentős mennyiségű DMSO-t azzal összefüggésben, hogy előállítása a dihidropirán ózonolízisével történt és a feldolgozás során DMSO-t alkalmaztak. 10,0 ml pufferhez 39,5 mg (kb. 0,20 mmól, a DMSO-t is figyelembe véve) O-formil-4-hidroxi-butanolt és
25.5 mg (0,340 mól) glicint adunk.
pl szubsztrát oldatot adunk az enzim-oldathoz (0,1 mg SHMT 40 pl-ben) és a blank oldathoz. A két szubsztrát koncentrációja az inkubációs elegyben 17 mM (glicin) és 10 mM (aldehid). 10 pl-es alikvot mintákat veszünk 0,5; 1,0+ 2,0+, 3,0+ 7,0 és 24 órai inkubálási idő után.
A 0,5 órakor levett első mintában aminosav-elemzéssel két új aminosav mutatható ki. 15,6 percnél közvetlenül a glicin csúcs után - egy kis csúcs jelenik meg. A másik egy nagy, éles körvonalú csúcs
22.5 percnél. A harmadik órában a 22,5 percnél levő csúcs - amely a várt aminosavnak felel meg - maximumot ér el, a glicin-csúcs kb. 10%-ának megfelelő mértékben, majd lassan csökken, míg a 15,6 percnél megjelenő csúcs intenzitása kissé nő. A 15,6 percnél eluálódó aminosav az a termék, amely a hangyasav-észternek a reakcióelegyben végbemenő lassú hidrolízise során keletkezik. Szerkezete az alfa-amino-béta-hidroxi-6hidroxi-hexánsavénak felel meg.
6. példa alfa-Amino-béta-hidroxi-delta-(2-furil)-valeriánsav
A szubsztrát oldatot úgy állítjuk elő, hogy 25,5 mg (0,340 mmól) glicint és 46,3 g (0,373 mmól) aldehidet 10,0 ml pufferben oldunk. Az aldehid (egy folyadék) oldódása kb. 15 percet vesz igénybe.
100 pl szubsztrát oldatot hozzáadunk az enzim oldathoz (0,1 mg SHMT 100 pl pufferben) és az elegyet 37 ’C-on inkubáljuk. 0,55; 1,0; 2,0; 4,25+ 8,0 és 21 óra múlva veszünk alikvot mintákat. 0,5 óra alatt egy 21,3 perces retenciós idővel rendelkező csúcs jelenik meg a HPLC elemzés során, amely arra mutat, hógy a glicin kb. 3%-ban alakult át az aldol-termékké.
7. példa
Az alfa-amino-béta-hidroxi-hex-5-insavat propargil-aldehiddel állítjuk elő, az előbbi példákban leírt inkubációs eljárások szerint.
8. példa
Az alfa-amino-béta-hidroxi-hex-5-énsavat allil-aldehid alkalmazásával kapjuk, az előző példákban leírt inkubációs körülmények között.
9. példa
Az aIfa-amino-béta-hidroxi-pent-4-énsavat úgy állítjuk elő, hogy akroleint használunk és az előző pél6
HU 212 925 Β dákban leírt eljárásokat követjük ill. körülményeket alkalmazzuk.
10. példa
Az alfa-amino-béta-hidroxi-delta-ciano-valeriánsavat béta-ciano-propion-aldehid felhasználásával kapjuk, az előző példákban megadott körülmények között.
Claims (7)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás (I) általános képletű béta-hidroxi-alfaaminosavak előállítására - a képletbenR jelentése 2-6 szénatomos alkenil-, 2-6 szénatomos alkinil-csoport vagy észterezett karboxil-, 1-4 szénatomos alkoxicsoporttal, ciano-, hidroxi-, 1—4 szénatomos alkanoil-oxi-, fenil- vagy furilcsoporttal helyettesített 1-6 szénatomos alkilcsoport -, azzal jellemezve, hogy 30 °C és 55 ”C közötti hőmérsékleten vizes oldatban 5,5 és 9,0 közötti pH-értéken egy RCHO általános képletű aldehidet - amelyben R jelentése a fenti - és glicint piridoxál-5’-foszfát jelenlétében szerin-hidroxi-metil-transzferázzal reagáltatunk.
- 2. Az 1. igénypont szerint eljárás, azzal jellemezve, hogy R helyén észterezett karboxilcsoporttal vagy 1-4 szénatomos alkanoil-oxi-csoporttal helyettesített 1-4 szénatomos alkilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületeket állítunk elő.
- 3. Az 1. igénypont szerint eljárás, azzal jellemezve, hogy RCHO általános képletű aldehidként (Ic) általános képletű aldehidet alkalmazunk, amelybenRj jelentése 1-4 szénatomos alkil-, benzil-, difenilmetil-, 4-metoxi-benziI- vagy 4-nitro-benzil-csoport, és n értéke 2 vagy 3.
- 4. A 3. igénypont szerint eljárás, azzal jellemezve, hogy RCHO általános képletű aldehidként borostyánkősav-félaldehid-metil-észtert alkalmazunk.
- 5. A 3. igénypont szerint eljárás, azzal jellemezve, hogy RCHO általános képletű aldehidként glutársavfélaldehid-metil-észtert alkalmazunk.
- 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az R helyén észterezett karboxil-, 1-4 szénatomos alkanoil-oxi-, fenil- vagy furil-csoporttal helyettesített 1-6 szénatomos alkilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületeket állítunk elő.
- 7. A 6. igénypont szerint eljárás, azzal jellemezve, hogy a béta-hidroxi-alfa-aminosavat L-eritro-diasztereomer alakban állítjuk elő.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53284590A | 1990-06-04 | 1990-06-04 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU911854D0 HU911854D0 (en) | 1991-12-30 |
| HUT61597A HUT61597A (en) | 1993-01-28 |
| HU212925B true HU212925B (en) | 1996-12-30 |
Family
ID=24123416
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU911854A HU212925B (en) | 1990-06-04 | 1991-06-03 | Process for the preparation of beta-hydroxy-alfa-amino acids |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0460883B1 (hu) |
| JP (1) | JPH0787989A (hu) |
| KR (1) | KR920000701A (hu) |
| CN (1) | CN1058046A (hu) |
| AT (1) | ATE147785T1 (hu) |
| AU (1) | AU637705B2 (hu) |
| CA (1) | CA2043761A1 (hu) |
| CS (1) | CS164591A3 (hu) |
| DE (1) | DE69124143T2 (hu) |
| DK (1) | DK0460883T3 (hu) |
| ES (1) | ES2099135T3 (hu) |
| FI (1) | FI912626A (hu) |
| GR (1) | GR3022558T3 (hu) |
| HU (1) | HU212925B (hu) |
| IE (1) | IE911879A1 (hu) |
| IL (1) | IL98312A0 (hu) |
| NO (1) | NO912120L (hu) |
| NZ (1) | NZ238342A (hu) |
| YU (1) | YU97891A (hu) |
| ZA (1) | ZA914201B (hu) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0628638A3 (en) * | 1993-05-25 | 1995-09-06 | Lilly Co Eli | Process for the preparation of 2-amino-3-hydroxy-carboxylic acids. |
| JP4032441B2 (ja) * | 1995-08-30 | 2008-01-16 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸の製造方法 |
| CN1062603C (zh) * | 1996-01-31 | 2001-02-28 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 酶法生产d－对羟基苯甘氨酸的膜反应方法 |
| CA2234412C (en) * | 1997-06-09 | 2008-09-02 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Method for producing optically active compound |
| KR100939503B1 (ko) | 2002-04-26 | 2010-01-29 | 차이나 페트로리움 앤드 케미컬 코포레이션 | 하향류 접촉분해 반응기 및 이의 용도 |
| DE102007020246B4 (de) | 2007-04-24 | 2012-12-27 | Schott Ag | Metallkolloidgefärbte oder farblose Glaskeramik und in eine metallkolloidgefärbte oder farblose Glaskeramik umwandelbares farbloses Glas |
| WO2015103583A1 (en) * | 2014-01-06 | 2015-07-09 | President And Fellows Of Harvard College | Monobactams and methods of their synthesis and use |
| JP7402157B2 (ja) | 2017-05-27 | 2023-12-20 | エンズィマスター（ニンボー）バイオ－エンジニアリング カンパニー リミテッド | 操作されたポリペプチドおよびβ－ヒドロキシ－α－アミノ酸合成におけるそれらの用途 |
| CN114657221A (zh) * | 2020-12-22 | 2022-06-24 | 安徽华恒生物科技股份有限公司 | 一种d-泛酸的制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3871958A (en) * | 1972-03-04 | 1975-03-18 | Ajinomoto Kk | Biological method of producing serine and serinol derivatives |
| GR79037B (hu) * | 1982-11-19 | 1984-10-02 | Genex Corp |
-
1991
- 1991-05-30 NZ NZ238342A patent/NZ238342A/en unknown
- 1991-05-30 IL IL98312A patent/IL98312A0/xx unknown
- 1991-05-31 IE IE187991A patent/IE911879A1/en unknown
- 1991-05-31 FI FI912626A patent/FI912626A/fi not_active Application Discontinuation
- 1991-05-31 KR KR1019910008978A patent/KR920000701A/ko not_active Application Discontinuation
- 1991-05-31 CS CS911645A patent/CS164591A3/cs unknown
- 1991-06-03 HU HU911854A patent/HU212925B/hu not_active IP Right Cessation
- 1991-06-03 DE DE69124143T patent/DE69124143T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-06-03 AT AT91304977T patent/ATE147785T1/de active
- 1991-06-03 YU YU97891A patent/YU97891A/sh unknown
- 1991-06-03 ES ES91304977T patent/ES2099135T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-06-03 JP JP3131068A patent/JPH0787989A/ja active Pending
- 1991-06-03 CN CN91104369A patent/CN1058046A/zh active Pending
- 1991-06-03 AU AU78146/91A patent/AU637705B2/en not_active Ceased
- 1991-06-03 ZA ZA914201A patent/ZA914201B/xx unknown
- 1991-06-03 CA CA002043761A patent/CA2043761A1/en not_active Abandoned
- 1991-06-03 EP EP91304977A patent/EP0460883B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-06-03 DK DK91304977.1T patent/DK0460883T3/da active
- 1991-06-03 NO NO91912120A patent/NO912120L/no unknown
-
1997
- 1997-02-12 GR GR970400248T patent/GR3022558T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0460883A3 (en) | 1992-11-19 |
| NZ238342A (en) | 1993-10-26 |
| CA2043761A1 (en) | 1991-12-05 |
| EP0460883A2 (en) | 1991-12-11 |
| CS164591A3 (en) | 1992-01-15 |
| FI912626A0 (fi) | 1991-05-31 |
| HUT61597A (en) | 1993-01-28 |
| AU7814691A (en) | 1991-12-05 |
| JPH0787989A (ja) | 1995-04-04 |
| DK0460883T3 (da) | 1997-07-14 |
| EP0460883B1 (en) | 1997-01-15 |
| FI912626A (fi) | 1991-12-05 |
| AU637705B2 (en) | 1993-06-03 |
| NO912120D0 (no) | 1991-06-03 |
| ZA914201B (en) | 1993-02-24 |
| KR920000701A (ko) | 1992-01-29 |
| ES2099135T3 (es) | 1997-05-16 |
| DE69124143D1 (de) | 1997-02-27 |
| YU97891A (sh) | 1994-01-20 |
| NO912120L (no) | 1991-12-05 |
| HU911854D0 (en) | 1991-12-30 |
| ATE147785T1 (de) | 1997-02-15 |
| CN1058046A (zh) | 1992-01-22 |
| IE911879A1 (en) | 1991-12-04 |
| DE69124143T2 (de) | 1997-05-22 |
| IL98312A0 (en) | 1992-06-21 |
| GR3022558T3 (en) | 1997-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101294499B1 (ko) | 광학 활성 키랄 아민의 제조 방법 | |
| EP0404146B1 (en) | Enantiomeric enrichment and stereoselective synthesis of chiral amines | |
| CA2659300C (en) | Process for preparation of optically active n-protected 3-aminopyrrolidine or optically active n-protected 3-aminopiperidine and the corresponding ketones by optical resolution ofthe racemic amine mixtures employing a bacterial omega-transaminase | |
| KR100810169B1 (ko) | 아스파르테이트를 사용하여 효소적 아미노기 전달반응에의해 엘-포스피노트리신을 제조하는 방법 | |
| JPH01317395A (ja) | アミノ酸の製造法 | |
| HU212925B (en) | Process for the preparation of beta-hydroxy-alfa-amino acids | |
| Freese et al. | The induction of alanine dehydrogenase | |
| Baek et al. | Alternate substrate inhibitors of an. alpha.-chymotrypsin: enantioselective interaction of aryl-substituted enol lactones | |
| US5266468A (en) | Process for preparing β-hydroxy-α amino acids | |
| JP2006246791A (ja) | Ｄ−アラニンの製造法 | |
| EP0673432B1 (en) | Process for preparing clavulanic acid | |
| HU203791B (en) | Herbicide and growth-controlling composition containing optically active phosphorous-containing acetic acid derivatives and enzymatic process for producing these compounds | |
| Thomas et al. | Stereochemical course of the decarboxylation of 2-amino-2-methylmalonic acid by serine hydroxymethyltransferase | |
| JPH03266995A (ja) | ４―ヒドロキシ―ｌ―プロリンの製造法 | |
| Janet | Decarboxylation of 2-aminomalonic acid by serine hydroxymethyltransferase is, in fact, a stereospecific process | |
| JPH06261787A (ja) | 光学活性β−アミノ酸の製造法 | |
| JPH02124087A (ja) | シユードモナス属細菌の培養方法 | |
| PT97847B (pt) | Processo para a prparacao de beta-hidroxi-alfa-aminoacidos | |
| JPH0297377A (ja) | アミノ酸ラセマーゼ生産菌の培養方法 | |
| CZ283836B6 (cs) | Způsob stereoselektivní syntézy jedné chirální formy aminu |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |