HU209716B - Process for preparing organic nitrates containing sulphur and pharmaceutical preparations containing the same as ingredient - Google Patents
Process for preparing organic nitrates containing sulphur and pharmaceutical preparations containing the same as ingredient Download PDFInfo
- Publication number
- HU209716B HU209716B HU894831A HU483189A HU209716B HU 209716 B HU209716 B HU 209716B HU 894831 A HU894831 A HU 894831A HU 483189 A HU483189 A HU 483189A HU 209716 B HU209716 B HU 209716B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- nitrooxy
- ethyl ester
- cysteine
- alkyl
- pivaloyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C327/00—Thiocarboxylic acids
- C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
- C07C327/32—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
- C07C327/34—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups with amino groups bound to the same hydrocarbon radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
- C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
- C07C323/59—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton with acylated amino groups bound to the carbon skeleton
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Inorganic Compounds Of Heavy Metals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A leírás terjedelme: 24 oldal (ezen belül 9 lap ábra)
HU 209 716 B kil)-csoport, amino-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil(1-4 szénatomos alkil)-tio-(1^4 szénatomos alkilcsoport,
HO-CO-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, 1-4 szénatomos alkoxi-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, vagy R és R5 tiolakton képződése közben egymással összekapcsolódhat, m értéke 0, 1,2,3,4, 5,6,7, 8,9 vagy 10, s értéke 0 vagy 1, valamint ezek gyógyszerészetileg elfogadható sóinak előállítására.
A találmány szerinti eljárásban az NO2-O(C2-C2]szénatomosj-zsírsavakat vagy ezek reakcióképes származékait, így észtereit vagy savhalogenidjeit, a cisztein, homocisztein, metionin, β,β-dimetil-cisztein vagy egy peptid aminocsoportjával kondenzáljuk, és/vagy kívánt esetben egy további reakciólépéssel az R5 oldalláncban a merkapto-(l-4 szénatomos alkil)csoportot (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoportra vagy (1-7 szénatomos alkanoil)-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoporttá cserélik és/vagy kívánt esetben a kapott vegyületet sóvá alakítják át.
A találmány tárgya új, kéntartalmú szerves nitrátok és ezek gyógyászatiig elfogadható sói előállítására vonatkozik.
Szerves nitrátok (salétromsavészterek) hatásosaknak bizonyultak szívbetegségek kezelésére.
Hatásuk megmutatkozik mind a szív tehermentesítésében, amelyet az elő- és utóterhelés csökkentésével, mind a szív oxigénellátásának a javításával a koronaedények tágítása útján érnek el.
Az elmúlt években mindenesetre megállapították, hogy a gyógyászatban eddig alkalmazott nitrátoknak, így a glicerin-trinitrátnak (GTN), az izoszorbid-5-mononitrátnak vagy az izoszorbit-dihidrátnak, a szervezetbe nagy mennyiségben és folyamatosan, viszonylag rövid idő alatt történő bevitelénél a hatás látható gyengülése, a nitráttolerancia jelentkezik. Számos kísérlet utal arra, hogy szulfhidrit-csoportok jelenléte megakadályozza a nitráttolerancia keletkezését és a már meglévő tolerancia meggyengülhet.
A toleranciaelőidézés mechanizmusát a következőképpen értjük ma:
A jelenlegi ismereteink szerint a szerves nitrovegyületek farmakológiai hatása a cisztein jelenlététől függ. A szerves nitrát ezzel egy közös előfokozatot képez, amelynek a szétesésekor többek között NOgyökök szabadulnak fel, amelyeket a célenzim, a sima izomsejtek oldható guanilátcikláza, aktivál. További, a cGMP-képződés által létrehozott ezt követő reakciók elernyedéshez, illetve véredénytáguláshoz vezetnek.
A reakcióképes és rövid életű, eddig még csak feltételezett közbenső termék valószínűleg a salétromsav tioésztere vagy egy tionitrát. Molekulán belüli átrendezéssel és további kiváltott reakciókkal, amelyek még nincsenek felderítve, végülis egy nitrozotiol képződése következik be, amelyből azután a nitrogén-monoxid, illetve nitrátionok szabadulnak fel. Valószínűleg a GSH-reduktáz segítségével történő enzim függő lebontás ellenben, mivel kizárólag nitritionok keletkezéséhez vezet, a farmakológiai hatás számára nem bír jelentőséggel. A nem-enzimes beépülésnek tehát szüksége van, ahogy említettük, ciszteinre és ezzel a dózistól függően kimeríthető (SH-csoport-pool kimerítés) úgy, hogy tartósan már nem képződhet elég NO, mint a guanilcikláz tulajdonképpeni aktivátora és ez klinikailag hatásgyengüléshez vezet.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek speciálisan felépített anyagok, amelyek nitro-oxi-zsírsavakból (nitro-oxi-alkánsavakból) és kéntartalmú aminosavakból, illetve peptidekből tevődik össze.
A találmány kidolgozásával az volt a feladatunk és célunk, hogy olyan új szerves nitrátokat állítsunk elő, amelyek általános felépítésük - szulfhidrilcsoportok jelenléte - alapján azzal tűnnek ki, hogy nitráttoleranciát vagy már meglévő toleranciát gátolnak vagy gyengítenek.
A feladatot az (I) általános képletű szerves nitrátok és gyógyszerészetileg elfogadható sóik előállítására alkalmas eljárás kidolgozását oldottuk meg, a képletben
R jelentése hidroxilcsoport, 1-4 szénatomos alkoxicsoport, aminocsoport, 1-4 szénatomos alkil-amino-csoport, di(l—4 szénatomos alkil)-amino-csoport, (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil-(l-4 szénatomos alkoxi)-csoport, fenil-(l-4 szénatomos alkoxi)-csoport, di(l—4 szénatomos alkil)-amino-(l4 szénatomos alkoxi)-csoport, (1-4 szénatomos alkoxi)-Gly-Pro-Phe-Pro-Tyr-csoport, 5 szénatomos cikloalkil-amino-csoport,
R1 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy 2-5 szénatomos alkanoil-amino-csoport
R2 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy 2-5 szénatomos alkanoil-amino-csoport,
R5 jelentése merkapto-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, (1-7 szénatomos alkanoil)-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, benzoil-tio(l^l szénatomos alkil)-csoport, (1-4 szénatomos alkil)-tio-(l^l szénatomos alkil)-csoport, amino-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil(1-4 szénatomos alkil)-tio-(l—4 szénatomos alkilcsoport,
HO-CO-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, 1-4 szénatomos alkoxi-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, vagy
R és R5 tiolakton képződése közben egymással összekapcsolódhat, m értéke 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 vagy 10, s értéke 0 vagy 1,
HU 209 716 Β valamint ezek gyógyszerészetileg elfogadható sóinak előállítására.
Az alkilcsoportok - önmagukban vagy más csoport, például alkoxicsoport részeként - egyenes vagy elágazó szénláncúak lehetnek.
A találmány szerinti nitro-oxi-zsírsavalkotók előnyösen 2-6 szénatomos lánchosszal rendelkeznek, amelyek egyenes vagy elágazó láncúak lehetnek, racém vagy optikai izomer formában létezhetnek.
Előnyösek a cisztein, metionin, β,β-dimetil-cisztein és homocisztein aminosavak.
Az aminosavak előnyösen a sztereokémiái L-formával rendelkeznek.
A cisztein és/vagy a metionin metil-, etil- vagy propil-észter formában lehetnek.
A cisztein SH-csoportja a 2-8 szénatomos rövidszénláncú karbonsavakkal észterezve lehet.
A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek közül különösen a következő származékokat nevezzük meg:
N-(2-nitro-oxi-acetil)-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-acetil-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-propionil-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-pivaliol-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-acetil)-metionin-metil-észter,
N-(2-nitro-oxi-propionil)-cisztein,
N-(2-nitro-oxi-propionil)-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-propionil)-metionin-metil-észter,
N-(2-nitro-oxi-butiril)-cisztein,
N-(2-nitro-oxi-butiril)-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-butiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-butiril)-S-butiril-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein,
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-benzoil-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-pivaliol-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-metionin-metil-észter,
N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein,
N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-butiril)-S-propionil-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-butiril)-homocisztein-tiolakton,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter-S-karbonát,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-acetil-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-propionil-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-butiril-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-izobutiril-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-pivaloil-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-benzol-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin,
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-homocisztein-lakton,
N-(2-nitro-oxi-hexanoil)-cisztein-etil-észter,
N-(2-nitro-oxi-hexanoil)-S-propionil-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-hexanoil)-cisztein-etil-észter,
N-(3-nitro-oxi-hexanoil)-metionin-metil-észter,
N-( 12-nitro-oxi-lauroil)-cisztein,
N-( 12-nitro-oxi-lauroil)-cisztein-etil-észter, N-(12-nitro-oxi-lauroil)-S-acetil-cisztein,
N-( 12-nitro-oxi-lauroil)-S-pivaloil-cisztein.
A találmány kiterjed az (I) általános képletű vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására is.
Ezeket a gyógyszerkészítményeket felhasználhatjuk vérkeringési betegségek kezelésére, például koszorúértágító gyógyszerekként, a magas vérnyomás, a szívelégtelenségek kezelésére alkalmas szerekként, továbbá a perifériás véredények, ide számítva az agyi- és vesevéredények tágítására szolgáló gyógyszereket is.
Az (I) általános képletű szerves nitrátokat úgy állítjuk elő, hogy a megfelelő nitráto-zsírsavakat vagy ezek reakcióképes származékait valamely aminosav, illetve peptid aminocsoportjával kondenzáljuk. A kapott vegyületeket egy további reakciólépésben adott esetben az R5 oldalláncban a merkapto-(l-4 szénatomos-alkil)csoportot (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoportra vagy (1-7 szénatomos alkanoil)-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoporttá cseréljük és/vagy kívánt esetben a kapott vegyületet sóvá alakítjuk át.
A találmány szerinti eljárásnál alkalmazott nitrooxi-zsírsavak reakcióképes származékai például a savhalogenidek, savanhidrídek, aktivált amidok vagy az aktivált észterek. Előnyösek a savkloridok, a savazidok, a szimmetrikus savanhidrídek, aktivált észterek és a szerves vagy szervetlen savak által alkotott vegyes anhidridek.
A nitro-oxi-zsírsavaknak aminosavak aminocsoportjaival való kondenzációs reakcióit valamely közömbös oldószerben és a savamidképződését elősegítő kondenzáló szerek jelenlétében, például valamely karbodiimid, így Ν,Ν’-diciklohexil-karbodiimid vagy valamely hasonló karbodiimid, egy iminvegyület, például difenil-ketén-Nciklohexil-imin vagy pentametilén-ketén-N-ciklohexilimin vagy valamely foszfát vagy foszfit, így trietil-foszfit, etil-propil-foszfát vagy izopropil-polifoszfát, felhasználata mellett 1-48 óra alatt -10 °C-tól az alkalmazott oldószer visszafolyatási hőmérsékletéig terjedő hőmérséklettartományban hajtjuk végre.
A találmány szerinti eljárást a következőkben kiviteli példákon is bemutatjuk, de a találmány köre nem korlátozódik csupán a példákban leírtakra.
A százalékok tömegszázalékot jelentenek.
1. példa
N-( 3-Nitro-oxi-butiril)-cisztein-etil-észter előállítása
1. lépés
A 3-hidroxi-vajsav-etil-észter elszappanosítása
13,2 g (0,1 mól) 3-hidroxi-vajsav-etil-észterhez (Aldrich) hozzáadunk 4,0 g (0,1 mól) NaOH-t 100 ml vízben oldva. A reakció akkor fejeződik be, amikor az oldat homogénné válik.
HU 209 716 B
A reakcióelegyet úgy dolgozzuk fel, hogy a kapott oldathoz hozzáadunk 10 ml tömény HCl-t és az ilymódon savassá tett oldatot 100-100 ml etil-acetáttal kétszer extraháljuk. Ezt követően az oldatot rotációs bepárlón bepároljuk és így hígfolyós olajat kapunk. Kitermelés 6,81 g (az elméleti kitermelés: 10,4 g) 3hidroxi-vajsav.
2. lépés
A 3-hidroxi-vajsav nitrálása
8,81 g (0,08 mól) 3-hidroxi-vajsavat és 50 mg karbamidot feloldunk 50 ml ecetsavban 5 °C-on. Az oldathoz először 6,27 ml (0,15 mól) HNO3-at, ezt követően pedig hűtés közben 14,17 ml (0,15 mól) ecetsavanhidridet csepegtetünk hozzá és a reakcióelegyet éjszakán át keveqük.
Ezután a reakcióelegyet feldolgozzuk olymódon, hogy a kapott oldatot 200 ml jeges vízzel elegyítjük és utána etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist NaHCo3-oldattal extraháljuk és az NaHCO3-as fázist tömény HCl-oldattal megsavanyítjuk és etil-acetáttal extraháljuk, végül az oldatot rotációs bepárlóban bepároljuk. Ilymódon hígfolyós olajat kapunk.
Kitermelés 9,4 g (elméleti kitermelés: 11,9 g) 3-nitrooxi-vajsav.
3. lépés
Az N-( 3-nitro-oxi-butiril)-cisztein-etil-észter előállítása
16,6 g (0,11 mól) 3-nitro-oxi-vajsavat feloldunk 100 ml diklór-metánban és az oldathoz nitrogéngáz hozzávezetése közben lassú ütemben 15 °C-on hozzáadunk 17,9 g (0,12 mól) cisztein-etilésztert. Ezt követően lassú ütemben 15 °C-on nitrogéngáz bevezetése közben az elegyhez hozzácsepegtetjük 24,7 g (0,12 mól) diciklohexil-karbodiimid (DCC) 80 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakció befejeződése után a keletkező diciklohexil-karbamidot leszívatással elkülönítjük és az oldatot 150 ml 1 normál HCl-oldattal mossuk, majd rotációs bepárlón bepároljuk.
A kapott anyagot preparatív oszlopkromatográfiás úton tisztítjuk és etanol/n-hexán-elegyből átkristályosítjuk.
Kitermelés 6,88 g (elméleti kitermelés: 30,83 g)
O. p.: 77,8 ’C.
A megfelelő ciszteinészter alkalmazásánál azonos módon eljárva N-(nitro-oxi-butiril)-cisztein-dimetilamino-etil-észtert kapunk olaj alakjában (tömegspektroszkópiai vizsgálati eredmény: m+ 323 és (m+l) 324, fragmentálás igazolja a szerkezetet), továbbá N-(3-nitro-oxi-butiril)-cisztein-benzil-észtert (o. p.: 33 ’C) és N-(3-nitro-oxi-butiril)-ciszteinil-glikolsav-etil-észtert nyerünk, mely utóbbi 48 ’C-on olvad.
2. példa
N-( 3-Nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter előállítása
6,35 g (0,043 mól) 3-nitro-oxi-vajsavat, 7,47 g (0,043 mól) metionin-etil-észtert és egy spatulahegynyi dimetil-amino-piridint (DMAP) keverés és 10 ’C-ra való hűtés közben feloldunk. Utána 10,31 g (0,05 mól) DCC-t 80 ml CH2Cl2-ben oldunk és egyidejűleg nitrogéngáz bevezetése közben hozzácsepegtetjük az előző oldathoz. A reakció befejeződése után az oldatot leszívatjuk, NaHCO3-oldattal, majd HCl-oldattal mossuk, utána pedig rotációs bepárlón bepároljuk, így olajat kapunk.
Az olajat preparatív oszlopkromatográfiás úton tisztítjuk, vagy hidegben kikristályosítjuk.
Kitermelés 1,95 g (elméleti kitermelés: 12,05 g) N-(3nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter színtelen olajként, metilészterré való átalakítás után tömegspektroszkópiai adatok: m+ 308 és (m+l)+ 309, fragmentálás igazolja a szerkezetet.
3. példa
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter és acetilezett származékainak előállítása
1. lépés
Nitro-oxi-pivalinsav-metil-észter előállítása
25,0 g (0,19 mól) hidroxi-pivalinsav-metil-észtert és 0,12 g karbamidot szobahőmérsékleten feloldunk 250 ml CH2Cl2-ben és az oldatot keverés közben 5 ’Cra lehűtjük. Az oldathoz ezután keverés közben hozzácsepegtetünk 23,8 g (0,38 mól) 100%-os HNO3-at úgy, hogy a hőmérséklet 10 ’C fölé ne emelkedjék. Ezt követően az elegyet 5 ’C-ra hűtjük és keverés közben hozzácsepegtetünk 38,6 g (0,38 mól) ecetsavanhidridet olymódon, hogy a hőmérséklet a 10 °C-ot ne lépje túl. A reakcióelegyet 15 percig jeges fürdőben való hűtés közben keveqük, utána lassan szobahőmérséklete engedjük felmelegedni és éjszakán át szobahőmérsékleten tovább keverjük. Az elegyet ezután keverés közben lassan 500 ml jeges vízbe öntjük. A CH2Cl2-es fázist elkülönítjük és egyszer 100 ml desztillált vízzel, egyszer 100 ml telített, vizes NaHCO3-oldattal és mégegyszer 100 ml desztillált vízzel mossuk. A CH2Cl2-kivonatot ezután rotációs bepárlón betöményítjük legfeljebb 40 ’C-os fürdőhőmérsékleten vízsugárszivattyúval létesített vákuumban. A' keletkező világossárga olajszerű maradékot olajszivattyúval létesített vákuumban 60 ’C-os fürdőhőmérsékleten desztilláljuk és így átlátszó, hígfolyós olajat kapunk.
Kitermelés 31,5 g, amely az elméleti hozam 94,0%-a.
2. lépés
Nitro-oxi-pivalinsav előállítása
14,0 g (0,350 mól) NaOH-t feloldunk desztillált vízben és az oldatot körülbelül 10 ’C-ra lehűtjük. Ezután az oldathoz keverés közben hozzáadjuk 31,0 g (0,175 mól) nitro-oxi-pivalinsav-metil-észter 250 ml metanollal készített oldatát. Eközben a reakcióelegy sárgára színeződik és az elegy hőmérséklete körülbelül 25 ’C-ra emelkedik. A reakcióelegyet 90 percig keverjük, utána 29,5 ml (0,35 mól) 37%-os HCl-oldattal semlegesítjük és a metanolt rotációs bepárlóban teljesen ledesztilláljuk. A vizes fázist 200-200 ml metilénkloriddal extraháljuk. Az egyesített metilén-kloridos kivonatokat 50 ml desztillált vízzel mossuk és a meti4
HU 209 716 Β lén-kloridos fázist rotációs bepárlóban teljesen bepároljuk. A színtelen, olajos maradékot 100 ml etil-acetátban oldjuk és rotációs bepárlóban ismét szárazra pároljuk. Ilymódon szilárd, fehér színű maradékot kapunk, amelyből az oldószermaradékokat olajszivattyúval létesített vákuumban (54 Pa) körülbelül 40 °C-os fürdőhőmérsékleten 15 perc alatt rotációs bepárlóban eltávolítjuk. A szilárd, fehér színű 25,44 g maradékot, amely az elméleti hozam 89,1 %-a, 100 ml forró n-hexánban oldjuk és 2 ml diizopropil-étert adunk az oldathoz. Az elegyet szobahőmérsékletre hűtjük és oltókristályokat adunk hozzá, amikoris a termék kikristályosodik. A terméket 72 óra hosszat 0 ’C-on tartjuk, a kristályokat leszívatással elkülönítjük, 10-10 ml n-hexánban kétszer mossuk és vákuum-szárítószekrényen tömegállandóságig szárítjuk szobahőmérsékleten körülbelül 270 Pa nyomáson.
Op.: 54,2 ’C.
Kitermelés 23,66 g, amely az elméleti hozam 82,9%-a.
3. lépés
N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter előállítása
10,7 g (71,1 mmól) L-cisztein-etilészter bázist nitrogéngáz légkörben 200 ml metilén-kloridban keverés közben szobahőmérsékleten oldunk. Az oldathoz hozzáadunk 11,4 g (70,0 mmól) kristályos nitroxi-pivalinsavat és keverés közben szobahőmérsékleten feloldjuk. Ehhez az elegyhez keverés közben és nitrogéngáz atmoszférában hozzácsepegtetjük 14,8 g (71,7 mmól) Ν,Ν-diciklohexil-karbamid (DCC) 50 ml metilén-kloriddal készített oldatát szobahőmérsékleten körülbelül 15 perc alatt, miközben a hőmérséklet 35 °C-ra emelkedik. További keverés után fehér színű diciklohexilkarbamid válik ki. Az elegyet szobahőmérsékletre lehűtjük és éjszakán át nitrogéngáz légkörben keverjük. Ezután a diciklohexil-karbamidot üvegszűrőfritten leszívatjuk és 50 ml CH2Cl2-vel egyszer mossuk. Az egyesített metilén-kloridos oldatokat egyszer 100 ml 1 normál HCl-oldattal, kétszer pedig 100-100 ml desztillált vízzel mossuk (nitrogéngáz alatt), majd rotációs bepárlóban bepároljuk körülbelül 40 °C-os fürdőhőmérsékleten és 550 mbar-tól körülbelül 20 mbar-ig terjedő vízsugárszivattyúval létesített vákuumban. Ilymódon világosbarna színű olajat kapunk.
Kitermelés 21,2 g, amely az elméleti hozam körülbelül 102,9%-a.
A kapott anyagot etanol/hexán-elegyből való, hidegen történő kikristályosítással tisztítjuk.
Kitermelés 13,42 g, az elméleti N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter 65,1 %-a. A termék világosrózsaszínű olaj.
4. lépés
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-S-acetil-cisztein-etil-észter előállítása
10,3 g (35,0 mmól) N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-ciszteinetil-észter 70 ml diklór-metánnal készített oldatához keverés közben hidegen hozzácsepegtetjük 4,3 g (42,0 mmól) ecetsavanhidrid 10 ml diklór-metánnal készült oldatát, Ezt követően az elegyhez hozzácsepegtetjük hidegen és keverés közben 5,0 g (49,0 mmól) trietilamin 20 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakció lejátszódása után az elegyet 1 normál HCl-oldattal, 10%os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd diklór-metánnal extraháljuk. Adiklórmetános kivonatot rotációs bepárlóban szárazra pároljuk, nymodon 11,6 g világossárga olajos terméket kapunk, amelyből etanol/víz-elegyből hidegen 7,8 g oltókristály hozzáadása útján kristályos termék válik ki.
Kitermelés az elméleti hozam 66,3%-a.
Op. < 5 ’C.
4. lépés (1. változat)
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-S-butiril-cisztein-etil-észter előállítása
A 4. lépésben alkalmazott ecetsavanhidrid helyett
6.7 g (42,0 mmól) vajsavanhidridet alkalmazunk és az ott leírt reakciósor szerint járunk el, majd feldolgozás után 13,0 g világossárga olajos terméket kapunk, amelyből a 4. lépésben leírt módon hidegen történő kristályosítással 9,7 g kristályos terméket kapunk, amely az elméleti hozam 76,2%-a.
Op. 5 ’C.
4. lépés (2. változat)
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-S-pivaloil-cisztein-etil-észter előállítása
A 4. lépésben alkalmazott ecetsavanhidrid helyett
7.8 g (42,0 mmól) pivalinsavanhidridet használunk és az ott leírt reakciólépések szerint járunk el, majd feldolgozás után 14,1 g világossárga, olajos terméket kapunk, amelyből a 4. lépésben leírt módon történő kristályosítással 10,5 g kristályos terméket kapunk, amely az elméleti hozam 79,5%-a.
Op. 45 ’C.
4. lépés (3. változat)
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter-S-karbonát előállítása
A 4. lépésben alkalmazott ecetsavanhidrid helyett
4,3 g (42,0 mmól) klór-hangyasav-etil-észtert használunk és az ott leírt reakciólépések szerint járunk el, majd feldolgozás után 11,5 g világossárga, olajos terméket kapunk, amelyből a 4-lépésben leírt módon történő kristályosítással 9,5 g kristályos terméket kapunk, amely az elméleti hozam 74,1 %-a.
Op. 36 ’C.
4. példa
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-metionin-etil-észter előállítása
12,4 g (70,0 mmól) L-metionin-etil-észter bázist nitrogéngáz atmoszférában keverés közben szobahőmérsékleten feloldjuk 250 ml metilén-kloridban. Az oldathoz hozzáadunk 11,4 g (70,0 mmól) kristályos nitro-oxi-pivalinsavat és keverés közben szobahőmérsékleten feloldjuk. Ehhez az elegyhez keverés közben és nitrogéngáz atmoszférában hozzácsepegtetjük 14,8 g (71,7 mmól) Ν,Ν-diciklohexil-karbamid (DCC) 50 ml metilén-klorid5
HU 209 716 Β dal készített oldatát szobahőmérsékleten körülbelül 15 perc leforgása alatt, mimellett a hőmérséklet 35 °C-ra emelkedik. További keverés után fehér színű diciklohexil-karbamid válik ki. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük és éjszakán át nitrogéngáz atmoszférában keveijük. A DCC-t ezután üvegszűrőn át leszívatjuk, 50 ml CH2Cl2-vel egyszer mossuk, majd az egyesített metilénkloridos oldatokat egyszer 100 ml 1 normál HCl-oldattal és kétszer 100-100 ml desztillált vízzel mossuk (nitrogéngáz légkörben) és utána körülbelül 40 °C-os fürdőhőmérsékleten és vízsugárszivattyúval létesített vákuumban kezdetben 550 mbar nyomástól körülbelül 20 mbar nyomásig teqedő nyomáson betöményítjük. Ilymódon világossárga olajat kapunk.
Kitermelés 24,9 g, amely az elméleti nyers N-(3-nitrátopivaloil)-L-metionin-etil-észter 110,3%-a. A nyers terméket preparatív oszlopkromatográfiás úton tisztítjuk. Kitermelés 17,6 g, amely az elméleti (színtelen olaj formájú) N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin-etil-észter 78,0%-a.
Tömegspektroszkópiai adatok: m+ 322 és (m+l)+ 323, fragmentálás igazolja a szerkezetet. n= 1,4897 (25’C-on)
5. példa
N-( 12-Nitro-oxi-lauroil )-S-acetil-cisztein
1. lépés
12-nitro-oxi-laurilsav előállítása
54,1 g (0,250 mmól) 12-hidroxi-laurinsavat és
0,3 g karbamidot gyenge melegítés közben feloldunk
1,3 liter CHCl3-ban és az oldatot keverés közben 20 °C-ra hűtjük. Keverés közben lassú ütemben 23,6 g (0,375 mól) 100%-os HNO3-at csepegtetünk az oldathoz, miközben a hőmérséklet 27 ’C-ra emelkedik. Ezután az elegyet 20 ’C-ra hűtjük és keverés közben, hűtés alkalmazása mellett 38,3 g (0,375 mól) ecetsavanhidridet csepegtetünk hozzá és közben a hőmérsékletet legfeljebb 25 ’C-ig engedjük felemelkedni. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, végül 0,5-0,5 liter desztillált vízzel ötször mossuk, majd Na2SO4 felett szárítjuk. A CHCl3-as fázist porított aktívszénnel tisztítjuk és rotációs bepárlón 50 °C-os fürdőhőmérsékleten, vízsugárszivattyúval létesített vákuumban szárazra pároljuk. Ilymódon 60,8 g olajos maradékot kapunk, amelyet 500 ml forró n-hexánban oldunk és szobahőmérsékletre történt lehűtés után éjszakán át hűtőszekrényben tartunk 0 ’C-on. A kikristályosodott terméket leszívatással elkülönítjük és 50-50 ml n-hexánnal kétszer mossuk, végül a terméket vákuum-szárítószekrényben szobahőmérsékleten és körülbelül 270 Pa nyomáson tömegállandóságig szárítjuk.
Op. 29 ’C.
Kitermelés 39,4 g, amely az elméleti hozam 60,3 %-a.
2. lépés
12-Nitro-oxi-laurinsav-klorid előállítása
2,61 g (10 mmól) nitro-oxi-laurinsavat feloldunk ml metilén-kloridban és szobahőmérsékleten keverés közben hozzácsepegtetjük 4,44 g (35 mmól) oxalilklorid 50 ml metilén-kloriddal készített oldatát. Az elegyet éjszakán át keverjük és végül rotációs bepárlóban szárazra pároljuk.
Kitermelés 3 g, amely az elméleti hozam 93,2%-a.
3. lépés
N-(12-Nitro-oxi-lauroil)-cisztein
Nitrogéngáz atmoszférában és keverés közben 6,06 g (50 mmól) L-ciszteint beviszünk 300 ml DMF-be és hozzácsepegtetünk 5,60 g (20 mmól) 12-nitro-oxi-laurinsavkloridot 50 ml diklór-metánban oldva. Ekkor, mivel átlátszó oldatot nem kaptunk, az elegyet 60 ’C-ra melegítjük, végül 100 ml desztillált vizet adunk hozzá és éjszakán át szobahőmérsékleten keveijük. Ezt követően 300 milliliter desztillált vizet adunk az oldathoz és 200-200 ml etilacetáttal négyszer extraháljuk. A szerves fázist Na2SO4 felett szárítjuk és ezt követően betöményítjük. A maradékot felvesszük 100 ml éterben és kikristályosítás végett éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk 0 ’C-on. Ilymódon fehér színű kristályokat kapunk.
O. p.: 74-75 ’C.
Kitermelés 4,1 g N-(12-Nitro-oxi-lauroil)-cisztein
Amennyiben L-cisztein helyett 6,06 g D-ciszteint alkalmazunk, azonos reakciókörülmények és feldolgozás esetén 3,8 g kristályos terméket kapunk, amely 59 ’C-on olvad.
4. lépés
N-( 12-Nitro-oxi-lauroil)-S-acetil-cisztein előállítása Nitrogéngáz atmoszférában 1,82 g (5 mmól) N(12-nitro-oxi-lauroil)-ciszteint beviszünk 20 ml etilacetátba. Ezt követően az elegyet 0 ’C-ra hűtjük és hozzácsepegtetünk 2,5 ml ecetsavanhidridet, majd -5 ’C-on hozzáadunk 1,52 g (15 mmól) trietil-amint 5 ml etil-acetátban oldva, lassan csepegtetve. A reakcióoldatot vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A kapott termék szobahőmérsékleten olaj.
Kitermelés 2 g, amely az elméleti hozam 98,4%-a.
6. példa
N-(12-Nitro-oxi-lauroil)-cisztein-etil-észter 4 g (26,8 mmól) cisztein-etil-észter bázist feloldunk ml metilén-kloridban és az oldathoz keverés közben hozzácsepegtetünk 2,8 g (10 mmól) nitro-oxi-laurinsav-kloridot 50 ml metilén-kloridban oldva, majd az elegyet éjszakán át keverjük. A kicsapódott ciszteinetilészter-hidrokloridot leszívatással elkülönítjük és az oldószert rotációs bepárlóban lepároljuk. Ilymódon 6 g olajos maradékot kapunk, amelyet 100 ml éterben oldunk és az oldatot éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk 0 ’C-on. A kivált terméket leszívatással elkülönítjük. Op. 59-60 ’C.
Kitermelés 1,6 g, amely az elméleti hozam 40,0%-a.
7. példa
N-(2-Nitro-oxi-propionil)-cisztein-etil-észter előállítása
1. lépés
Nitro-oxi-tejsav-etil-észter előállítása
HU 209 716 Β g (0,28 mól) tejsav-etilésztert feloldunk 300 ml diklór-metánban. Az oldathoz hozzáadunk 100 mg karbamidot és utána 5-10 °C hőmérséklettartományban hozzácsepegtetünk 22,5 ml (0,56 mól) 100%-os salétromsavat. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük és utána hozzácsepegtetünk 52,8 ml (0,56 mól) ecetsavanhidridet úgy, hogy a hőmérséklet ne emelkedjék 5 °C fölé. Az oldatot éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk és utána 250 ml vízzel mossuk. A szerves fázist elkülönítjük és nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd szűrjük és a diklór-metánt ledesztilláljuk. A keletkező olajos maradékot desztillációs úton feldolgozzuk.
Kitermelés 30,34 g, amely az elméleti hozam 66,4%-a. Fp. 34 ’C (33 Pa).
2. lépés
Nitro-oxi-tejsav előállítása g (0,18 mól) nitro-oxi-tejsav-etil-észtert feloldunk 80 ml dioxánban. Az oldathoz 30 ml vizet és 2 g (0,02 mól) kénsavat adunk, majd az elegyet visszafolyatás közben melegítjük 19 óra hosszat. Az oldatot ezután körülbelül 50 ml-re betöményítjük és utána 300 ml vízzel hígítjuk. A pH-t nátrium-hidrogénkarbonát hozzáadásával 7-8 érték közé állítjuk be és az át nem alakult észtert diklór-metánnal való extrahálással eltávolítjuk.
A vizes fázist tömény sósavval 1-es pH-ra állítjuk és háromszor extraháljuk 150-150 ml etil-acetáttal. A kivonatokat egyesítjük és nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd szűrjük és az etil-acetátot rotációs bepárlóban teljesen eltávolítjuk.
Kitermelés 14,6 g színtelen olaj, amely az elméleti hozam 59,2%-a.
3. lépés
N-(2-Nitro-oxi-propionil)-cisztein-etil-észter előállítása
Nitrogéngáz légkörben 10-15 °C-on feloldunk 17 g (0,13 mól) nitro-oxi-tej savat és 18,9 g (0,13 mól) cisztein-etilésztert 200 ml diklór-metánban. Az oldathoz 15-20 °C-on hozzácsepegtetjük 28,6 g (0,14 mól) N,Ndiciklohexil-karbodiimid 75 ml diklór-metánnal készített oldatát. Az 1 óra elteltével kicsapódott N,N-diciklohexil-karbamidot szűréssel elkülönítjük és 75 ml diklór-metánnal utánamossuk. A szűrletet extraháljuk 5050 ml 0,1 normál sósavoldattal és a szerves fázist rotációs bepárlóban bepároljuk. Ilymódon 22,4 g kristályos nyert terméket kapunk, amelyet 100 ml 1:1 arányú etanol/n-hexán-elegyből átkristályosítunk.
Kitermelés 7,6 g, amely az elméleti hozam 22,6%-a. Op. 92,8 ’C.
8. példa
N-(Nitro-oxi-N’-acetil-D,L-szeril)-cisztein-etil-észter előállítása
I. lépés: Nitro-oxi-N-acetil-D,L-szerin előállítása
II, 8 g (0,08 mól) N-acetil-D,L-szerint 50 ml ecetsavban oldunk. 5-10 °C-on először 6,27 ml (0,15 mól) salétromsavat, majd 14,17 ml (0,15 mól) ecetsavanhidridet csepegtetünk a reakcióelegyhez és éjszakán át keverjük. A kapott oldatot 200 ml jeges vízzel elegyítjük és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal extraháljuk. A nátriumhidrogén-karbonátos fázist tömény hidrogén-klorid-oldattal megsavanyítjuk és etil-acetáttal extraháljuk. A kapott extraktumot forgó elpárologtatóban bepároljuk, amikoris sűrűnfolyó olajat kapunk.
Kitermelés: 11,98 g - az elméleti érték 72%-a.
2. lépés: N-(nitro-oxi-N’-acetil-D,L-szerin-ciszteinetil-észter előállítása
11,98 g nitro-oxi-N-acetil-D,L-szerint a 3. példa 3. lépésében leírtak szerint ciszterin-etil-éterrel reagáltatunk. Közepes nyomású kromatografálás után 4,26 g olajat kapunk, ami az elméleti érték 21%-ának felel meg (magas nyomású kromatográfia: 98,3%).
A kapott olaj tömegspektroszkópiai vizsgálati eredménye: m+ 323 és (m+l)+ 324, fragmentálás igazolja a szerkezetet.
9. példa
N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil)-S-hexanoiTcisztein-etiT észter előállítása g (0,07 mól) N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-ciszteinetil-észtert 200 ml diklór-metánban oldunk, majd az oldatot 11,2 ml (0,08 mól) hexanoil-kloriddal elegyítjük. Ezt követően 5-10 ’C-on 11 ml (0,08 mól) trietilamint csepegtetünk hozzá. A reakcióelegyet 15 órán át utánkeverjük, majd egymás után 5%-os hidrogén-klorid-oldattal, tömény nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. A diklór-metános fázist bepároljuk. Közepes nyomású folyadékkromatografálás után 8,28 g olajat kapunk, ami az elméleti kitermelés 31,25%-a (HPLC: 97,3%-os). A kapott olaj tömegspektroszkópiai vizsgálati eredménye: m+ 392 és (m+l)+ 393, fragmentálás igazolja a szerkezetet.
Hasonló módon, jó kitermeléssel állítjuk elő a tiszta S-oktanoil-, S-benzoil-, S-szukcinoil-etil-észter-származékokat, valamint a tiokarbonátokat (-S-CO2-R).
10. példa
N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil )-S-( etoxi-karbonil-metil)cisztein-etil-észter előállítása
14,4 g (0,061 mól) etoxi-karbonil-metil-ciszteinetil-észtert és 11,05 g (0,068 mól) 3-nitro-oxi-pivalinsavat 150 ml diklór-metánban oldunk. 15-25 ’C-on hozzácsepegtetjük 14 g (0,068 mól) 1,3-diciklohexilkarbodiimid 50 ml diklór-metánnal készült oldatát. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 15 órán át utánkeverjük, majd a karbamidot kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk. Oszlopkromatográfiás feldolgozás után 8,5 g olajat kapunk = az elméleti érték 36,6%-a, tömegspektroszkópiai vizsgálati eredmény: m+ 380 és (m+l)+ 381, fragmentálás igazolja a szerkezetet.
11. példa
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-S-karbamoil-cisztein-etilészter előállítása
0,05 mól karbamoil-cisztein-észtert és 0,05 mól 37
HU 209 716 Β nitro-oxi-pivalinsavat 100 ml diklór-metánban oldunk. Szobahőmérsékleten 0,5 mól, 50 ml diklór-metánban oldott 1,3-diciklohexil-karbodiimidet csepegtetünk a reakcióelegyhez. Oszlopkromatográfiás feldolgozás után 24%-os kitermeléssel kapjuk a címben megnevezett vegyületet, melynek olvadáspontja 58 °C.
12. példa
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil')-homocisztein-tiolakton előállítása g (0,03 mól) nitro-oxi-pivalinsavat és 4,7 g (0,03 mól) homocisztein-tiolakton-hidrokloridot 50 ml tetrahidrofuránban szuszpendálunk. 2,4 g piridin hozzáadása után 5-10 °C hőmérsékleten hozzácsepegtetjük 6,2 g 1,3-diciklohexil-karbodiimid 20 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát. A kapott terméket oszlopkromatográfiásan feldolgozzuk, majd hexán/etanol elegyből átkristályosítjuk.
Kitermelés: 0,51 g = az elméleti érték 6,5%-a. Olvadáspont: 88,6 ’C.
Elemanalízis adatok:
talált: C: 41,43, H:5,44, N:30,l%;
számított: C: 41,21, H:5,38, N: 30,5%.
13. példa
N-(12-Nitro-oxi-lauroil)-S-acetil-cisztein-Tyr-ProPhe-Pro-Gly-metil-észter g (10 mmól) N-(12-Nitro-oxi-lauroil)-S-acetil-cisztein és 10 mmól pepiidet 80 ml diklór-metánban oldunk. Szobahőmérsékleten hozzácsepegtetjük 2,06 g (10 mmól) 1,3-diciklohexil-karbodiimid 20 ml diklórmetánnal készített oldatát. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 15 órán át utánkeverjük. A diciklohexil-karbodiimid-karbamidot kiszűrjük és a diklór-metánt eltávolítjuk. A maradékot közepes nyomású kromatográfiával feldolgozzuk.
Kitermelés: 3,87 g
Olvadáspont: 68,4 g (diizopropil-éterből kristályosítva).
Valamely pepiidnek N-terminális végével az N-(12Nitro-oxi-lauroil)-S-acetil-cisztein C-terminális végéhez való kapcsolását analóg módon végezzük, ahogyan az alábbiakban ismertetett Tyr-Pro-Phe-Gly-metilészter pentapeptid szintézisét.
14. példa
Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-metil-észter szekvenciája pentapeptid szintézise
A) szintézis-terv
Az amin-komponenst -150 ’C-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten dimetil-formamidban egy Zaminosav-izobutil-karbonsav (ahol Z védőcsoportként szolgál és N-benzil-oxi-karbonil-védőcsoportot képvisel (vegyes anhidridjének 0,5 mólos feleslegével 24 órán át reagáltatjuk.
A vegyes anhidridet dimetil-formamidban -15 ’Con vagy ez alatti hőmérsékleten 10-15 perc alatt, Zaminosav-származék és N-metil-morfolin 6%-os feleslegének alkalmazásával a klór-hangyasav-izobutil-észteren keresztül képezzük. Ezután a vegyes anhidrid feleslegét elbontjuk. A reakciótermék pH-értékt 0 ’Con vizes, telített kálium-hidrogén-karbonát-oldattal 8ra állítjuk be s 30 percen át 0 ’C-on keveqük.
A peptideket etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetát/peptid keveréket - a Z-aminosav-káliumsó eltávolítására - nátrium-klorid/víz eleggyel háromszor, és vízzel is háromszor mossuk, és ledesztilláljuk. Az így előállított pepiidet, amely még tartalmazza a Z védőcsoportot, metanolban hidrogénezzük. Ennek során 100-500 mg palládiumozott aktív szén katalizátort adunk peptid mmólonként. A szén-dioxid lehasítását bárium-hidroxid-oldattal ellenőrizzük. A katalizátort kiszűqük, Schleicher és Schüll-féle, 595 sz. szűrőpapírt alkalmazva, vízzel alaposan mossuk és a szűrletet forgó elpárologtatóban (Büchi, Rotavapor RE) bepároljuk. A kívánt peptid a maradékban van.
B) A Tyr-Pro-Phe-Gly-metil-észter pentapeptid szintézise
1. lépés
a) A vegyes anhidrid előállítása (Z-Phe-Pro-vegyes anhidrid)
640 mg (1,6 mmól, megfelelő 6%-os feleslegnek) mennyiségű Z-L-Phe-L-Pro (ahol Z védőcsoportként szolgáló benzil-oxi-karbonil-csoport) dipeptidet 20 ml dimetil-formamidban 200 μΐ (1,5 mmól) klór-hangyasav-izobutil-észterrel -15 ’C-on 15 percig reagáltatunk, 170 μΐ N-metil-morfolin előzetes hozzáadása után.
b) Az amin-komponens előkészítése
125,6 mg (1,0 mmól) glicerin-metil-észter-hidrokloridot 20 ml dimetil-formamidban -15 ’C-on oldunk, 110 μΐ (1 mmól) N-metil-morfolin hozzáadása mellett.
2. lépés
Az 1/a lépés vegyes anhidridjét az 1/b aminokomponensével reagáltatjuk. A Z-Phe-Pro-vegyes anhidridet a glicin-metil-észterrel 40 ml dimetil-formamidban -15 ’C-on 4 órán át reagáltatjuk.
-15’C
Z-Phe-Pro-vegyes anhidrid + Gly-Me-észter->
óra —->Z-Phe-Pro-Gly-Me-észter
Feldolgozás előtt a vegyes anhidrid 50%-os feleslegét elbontjuk. A reakciótermék pH-értékét 0 ’C-on vizes, telített kálium-hidrogén-karbonát-oldattal 8-ra állítjuk be és 0 ’C-on 30 percen át keveqük. Ezt követően a peptidet 50-100 ml etil-acetáttal extraháljuk; az etil-acetát/peptid-keveréket telített, vizes nátrium-klorid oldattal mossuk. Egy további, vízzel végzett befejező mosás után az etil-acetátos fázist bepároljuk.
3. lépés
A védőcsoport lehasítása hidrogénezés útján
A peptidet 30 ml metanolban oldjuk és hozzáadunk 100 mg palládiumozott aktív szenet (Merck-gyártmány). A levegőnek nitrogén bevezetésével való eltávolítása után a reakcióedénybe hidrogéngázt vezetünk. A hidrogénezést 25-30 ’C-on hajtjuk végre. A hidrogénezés akkor fejeződött be, ha több szén-dioxid már nem válik szabaddá, vagyis amennyiben a vizes bárium-hidroxid-ol8
HU 209 716 B dattal végzett ellenőrzésnél nem képződik csapadék. Az oldatot leszűrjük, vízzel mossuk és forgó elpárologtatóban bepároljuk. Ezt a visszamaradó közbenső terméket azután a 4. lépésben aminokomponensként alkalmazzuk.
4. lépés
a) A vegyes anhidrid előállítása (Z-Pro-vegyes anhidrid)
374 mg (1,5 mmól) Z-L-prolint 15 ml dimetil-formamidban - 170 μΐ (1,5 mmól) N-metil-morfolin hozzáadásával - oldunk és 180 μΐ (1,4 mmól) klór-hangyasav-izobutil-észterrel -15 °C-on 15 percig reagáltatjuk.
b) a 4/a lépés vegyes anhidridjét a 3. lépés aminkomponensével reagáltatjuk.
Z-L-Pro-anhidrid + Phe-Pro-Gly-Me-észter 15 ml 15 °C
DMF->Z-Pro-Phe-Gly-Me-észter óra
A vegyes anhidrid feleslegének elbontását, az extrakciós lépéseket, a hidrogénezést az előzőekben leírtakkal azonosan végezzük.
A 4/b végtermék amin-komponensként szolgál az
5. lépés számára. Az aminosav-összetétel hidrolízis utáni ellenőrzése ennek a pepiidnek a helyes aminosavrelációját igazolta.
5. lépés
a) A vegyes anhidrid előállítása (Z-Tyr-vegyes anhidrid)
629,24 mg (1,4 mmól) N,O-di-Z-L-tirozint 15 ml dimetil-formamidban oldunk, 165 μΐ (1,4 mmól) Nmetil-morfolin hozzáadása mellett és 175 μΐ (1,3 mmól) klór-hangyasav-izobutil-észterrel reagáltatjuk, -15 °C-on, 15 percig.
b) az 5/a lépés vegyes anhidridjét a 4Po lépés végtermékével reagáltatjuk, oly módon, hogy a 4/b lépés végtermékét 15 ml dimetil-formamidban oldjuk és -15 °C-on 4 órán át reagáltatjuk az 5/a lépés vegyes anhidridjével.
A vegyes anhidrid feleslegének elbontását, az extrahálást és a hidrogénezést a fentiekben leírtak szerint végezzük.
A savas hidrolízis után elvégzett aminosav-analízis a helyes aminosav-arányt igazolta, a Tyr-Pro-Phe-ProGly-metil-észter peptapeptidnek megfelelően.
15. példa
Sók előállítása
N-(12-Nitro-oxi-lauroil)-S-pivaloil-cisztein-nátriumsó előállítása
446 mg N-(12-Nitro-oxi-lauroil)-S-pivaloil-ciszteint 50 ml etil-acetátban oldunk. Nitrogénatmoszférában lassan hozzácsepegtetjük 40 mg (1 mmól) nátrium-hidroxid és 5 ml etanol oldatát. A kivált terméket leszívatjuk és vákuumban szántjuk.
Kitermelés: 480 mg.
Olvadáspont: 118-125 ’C (bomlik).
N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil )-S-pivaloil-cisztein-trietanol-amin-só előállítása
1,75 g (5 mmól) N-(3-nitro-oxi-lauroil)-S-pivaloilciszteint 20 ml diklór-metánban oldunk. Nitrogénatmoszférában, szobahőmérsékleten hozzácsepegtetjük 750 mg (5 mmól) trietanol-amin 10 ml diklórmetánnal készített oldatát. A diklór-metánt teljesen elpárologtatjuk.
Kitermelés: 2,5 g vöröses olaj, amely 5-7 ’C-on megszilárdul.
Tömegspektroszkópiai adatok: m+ 470 és (m+l)+ 471, fragmentálás igazolja a szerkezetet.
A találmány szerinti eljárással előállítható új szerves nitrátoknak a hatását a következő módszerek segítségével közelebbről megvilágítjuk.
16. példa
Az előző példákban leírtak szerint állítjuk elő a következő vegyületeket:
N-(2-nitro-oxi-acetil)-cisztein-etil-észter, op.: 76,1 ’C N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-acetil-cisztein-etil-észter, op.:
57.8 ’C
N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-propionil-cisztein-etil-észter, op.: 71,7 ’C
N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-pivaliol-cisztein-etil-észter, op.: 91,7 ’C
N-(2-nitro-oxi-acetil)-metionin-metil-észter, op.:
58.8 ’C
N-(2-nitro-oxi-propionil)-cisztein, olaj, metil-észterré való átalakítás után m+ 266 és (m+l)+ 253, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(2-nitro-oxi-propionil)-cisztein-etil-észter, op.:
92.8 ’C
N-(2-nitro-oxi-propionil)-metionin-metil-észter, op.:
73.1 ’C
N-(2-nitro-oxi-butiril)-cisztein, olaj, metil-észterré való átalakítás után m+ 266 és (m+l)+ 267, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(2-nitro-oxi-butiril)-cisztein-etil-észter, op.: 50,3 ’C N-(2-nitro-oxi-butiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter, op.: 61,6 ’C
N-(2-nitro-oxi-butiril)-S-butiril-cisztein-etil-észter, op.: 68,8 ’C
N-(2-nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter, op.:
48.1 ’C
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein, olaj, metil-észterré való átalakítás után m+ 266 és (m+l)+ 267, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(2-nitro-oxi-izobutiriI)-cisztein-etil-észter, op.:
53,6 ’C
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-benzol-cisztein-etil-észter, op.: 98,0 ’C
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-pivaliol-cisztein-etil-észter, op.: 83,7 ’C
N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-metionin-metil-észter, op.:
42,4 ’C
N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein, olaj, metil-észterré való átalakítás után m+ 266 és (m+l)+ 267, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein-etil-észter, op.:
77.8 ’C
N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter, op.: 81,9 ’C
HU 209 716 Β
N-(3-nitro-oxi-butiril)-S-propionil-cisztein-etil-észter, op.: 88,1 °C
N-(3-nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter, olaj, metilészterré való átalakítás után m+ 308 és (m+l)+ 309, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(3-nitro-oxi-butiril)-homocisztein-tiolakton, op.:
68.5 °C
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein, olaj, metil-észterré való átalakítás után m+ 278 és (m+l)+ 279, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter, op.: 22 °C N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter-S-karbonát, op.: 36 °C
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-acetil-cisztein-etil-észter, op.: 5 °C
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-propionil-cisztein-etil-észter, m+ 350 és (m+l)+ 351, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-butiril-cisztein-etil-észter, op.: 5 °C
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-izobutiril-cisztein-etil-észter, m+ 364 és (m+l)+ 365, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-pivaloil-cisztein-etil-észter, op.: 45 °C
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-benzol-cisztein-etil-észter, op.: 51 °C
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin-etil-észter, m+ 322 és (m+l)+ 323, fragmentálás igazolja a szerkezetet N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin, metil-észterré való átalakítás után m+ 308 és (m+l)+ 309, fragmentálás igazolja a szerkezetet
N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-homocisztein-tiolakton, op.:
88.6 °C
N-(2-nitro-oxi-hexanoil)-cisztein-etil-észter, op.: 51,4 °C N-(3-nitro-oxi-hexanoil)-metionin-metil-észter, op.:
44,2 °C
N-(12-nitro-oxi-lauroil)-cisztein, op.: 74—75 °C N-(12-nitro-oxi-lauroil)-cisztein-etil-észter, op.: 5960 °C
N-(12-nitro-oxi-lauroil)-S-acetil-cisztein-etil-észter, op.: 31,5 °C
N-(12-nitro-oxi-lauroil)-S-pivaloil-cisztein-etil-észter, op.: 75,7 °C
A találmány szerinti eljárással előállítható, új szerves nitrátoknak a hatását a következő módszerek segítségével közelebbről megvilágítjuk.
1. farmakológiai vizsgálat
Az új szerves nitrátoknak a befolyása éber kutya keringési paramétereire a nitráthatás bizonyításához
A vizsgálat célja annak megállapítása, hogy az új szerves nitrátok hogyan hatnak éber kutya különböző keringési paramétereire intravénás és orális alkalmazás esetén. Valamennyi vizsgálatot trenírozott kutyákkal végezzük. A keringési paramétereket artériás katéterpillanatmanométerrel (tipmanométer) és egy a V jugularison át bevezetett beúsztatott katéterrel mérjük. Az artériás rendszerre gyakorolt hatás leírásában a szisztolés (SAP - systolic artériái pressure), a közepes (MAP mean artériái pressure) és a diasztolés (DAP - diastolic artériái pressure) vérnyomást (PP = blood pressure), valamint a szívfrekvenciát (HR = heart rate) mérjük. Ezekből számítjuk a perifériás ellenállást (TPR = totál periphere resistance) és az artériás szélkamra (COMPL) tágíthatóságát. A kis nyomású rendszert a központivénás nyomás (CVP = Central venous pressuse) és a tüdőartériás nyomás (PAP = pulmonal artériái pressure) útján írjuk le. Viszonyítási anyagként izoszorbid-5-mononitrátot (ISM-5) alkalmazunk.
A mellékelt 111-118. és 211-218. ábrák grafikusan mutatják be a találmány szerinti eljárással előállított szerves nitrátok hatásspektrumát.
Az 111-118. ábrákon orálisan és intravénásán adagolt ISM-5 hatását szemléltetik. Mindkét alkalmazás után az ISM-5 gyengén csökkenti a szisztolés vérnyomást, a közepes vérnyomást alig befolyásolja és a szélkamra tágíthatósága láthatóan növekszik, míg a vérnyomás a kis nyomású nyomásrendszerben csökken.
A 211-218. ábrák az N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin-etilészter (Nitrato-Piv-Meth-Et) megfelelő hatásait mutatják a megfelelő keringési szakaszokban. Az összehasonlítás az intravénás és az orális alkalmazás között itt is jó biofelhasználhatóságra utal.
Az N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etilészter ugyancsak jó biofelhasználhatóságot és nitráttipikus hatásmechanizmust mutat.
Az eredmények azt mutatják, hogy mindkét vizsgált anyag ISM-5-tel összehasonlító hatással és jó biofelhasználhatósággal rendelkezik.
2. farmakológiai vizsgálat
Az új szerves nitrátok hatása a koronáriás áramlás növekedésére izolált (elkülönített), perfundált (átáramoltatott) szíven a kimaradó tolerancia bizonyítására
Ezzel a vizsgálattal az volt a célunk, hogy megállapítsuk az új szerves nitrátvegyületek hatását és tolerancia létrejöttét izolált, perfundált patkányszíven. Ehhez a patkányszívet izoláltuk és „working heart”-ként (működő szívként) készítettük el.
A szív ennél a vizsgálatnál egy meghatározott keringési munkát végzett, amely meghatározott oxigénfelhasználást és koronaria-áramlást eredményezett. A nitrát-típusú vegyületek hatása ennél a modellnél a gyógyszer által kiváltott koronaria-áramlásnövekedésen mérhető.
Egy izolált, működő patkányszíven a koronáriás véredények ellenállását választottuk paraméterként a nitráthatás bizonyításához. Körülbelül 1 g tömegű patkányszívet a bal előudvaron (pitvaron) keresztül egy plazmához hasonló oldattal, amely tápanyagokat tartalmaz és oxigénnel fel van dúsítva, perfundálunk. A bal kamra az oldatot meghatározott nyomás ellenére az aortába szivattyúzza. A fiziológiai körülményeknek megfelelően ennek az oldatnak egy része a koronáriavéredényeken át áramlik a szív saját ellátására. Meghatározott szívműködésnél ez a rész, amelyből a koronáriás ellenállás számítható, állandó. Valamely nitrát
HU 209 716 Β vagy más-más koronáriatágító gyógyszerek adagolása esetén ezek csökkentik a koronária-ellenállást. Abban az esetben, ha a szívbe valamely szerves nitrát egy állandó mennyiségét visszük be, az ellenállás kezdeti csökkenése után 20 percen belül részleges hatáscsökkenés mutatkozik. Ezek az anyagok ezen a modellen ugyancsak koronáriaértágító hatást mutatnak, amelyet azonban nem követ hatásvesztés. Még 60 perc múlva is teljesen megvan a koronaria-ellenállás csökkenése. A vizsgálandó anyagokat mólegyenértéknyi adagolásban 104 mól nitroglicerin-trinitráttal hasonlítottuk össze. Nitroglicerin folyamatos infúziója 7,6 ± 1,88 ml/perc * gww/± SD/nagyságú gyors koronaria-áramlásnövekedést eredményez. Az áramlás 20 percen belül 55,9%kal csökken. További perfuzió esetén a nitroglicerinhatás változatlan marad. Az új nitrátok ennél a kísérleti modellnél ugyancsak koronaria-áramlásnövekedést mutatnak, amelyet minden esetben csak nagyon csekély mértékű hatáscsökkenés követ. Ez az eredmény arra mutat, hogy a leírt vegyületek nem mutatnak tolerancia-visszatartást, ahogy a hagyományos nitrátok.
1. táblázat
Új szerves nitrátok hatása koronaria-áramlásos izolált patkányszíven nitroglicerinnel összehasonlítva x ± SEM, n = 7
| Legnagyobb koronaria áramlásnövekedés (mól/perc * gww) | Hatáscsökkenés (%) | |
| 100 μΜ nitroglicerin | 7,6 ±0,71 | 56,0 |
| 100 μΜ N-(3-nitrooxi-pivaloil)-ciszterin-etilészter | 6,6 ±0,88 | 5,2 |
| 100 μΜ N-(3-nitrooxi-pivaloil)-metionin-etilészter | 8,3 ± 0,92 | 7,0 |
± SEM = középérték szabványeltérése n = szabványeltérések száma
Végül az N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-ciszterin-etilészter (Nitrato-Piv-Gy-Et) tengerimalac-szívre gyakorolt hatását vizsgáltuk. A Nitrato-Piv-Cys-Et a working heart modellen (tengerimalac-szíven) a koronariaáramlásának a koncentrációtól függő fokozásához vezet már nagyon kis adagolási tartományban. Egy 25% áramlásnövekedés elérhető már 380 g nitro-oxi-PivCys-Et/liter perfúziós közeggel, amely 1,3 mól/liternek felel meg. A megfelelő koncentráció glicerol-trinitrátra (GTN) 5 mg/literrel legalább 12 faktorral nagyobb. A nitro-oxi-Piv-Cys-Et tehát nagyon véredényaktív vegyület. A koronariatágító hatás gyengítése, amely a toleranciafejlődés kifejezése, semmiféle adagolás közben nem volt megállapítható egyórás perfuzió alatt. Ebből arra lehet következtetni, hogy a Nitro-oxiPiv-Cys-Et a CTN-hez viszonyítva nem okoz véredénytoleranciát.
Nitro-oxi-Piv-Cys-Et az izolált guanilátcikláz mellett az enzimkoncentrációtól függő aktivizálásához vezet az időegység alatt megnövekedett cGMP kapcsolatnak megfelelően. Ennek a vegyületnek a klasszikus szerves nitrovegyületekhez viszonyítva az érdekessége az, hogy az aktivitás in vitro cisztein jelenlétében is végbemegy. Ez magyarázza egyidejűleg azt a megfigyelést, hogy a Nitro-oxi-Piv-Cys-Et és a kémiai vegyületek például az úgynevezett „working heart modell”-en nem okoznak semmiféle toleranciát, ez olyan felismerés, amely hosszú ideig ható klinikai alkalmazás esetén nagy gyakorlati jelentőséggel bír. A guanilátcikláz félmaximális aktiválásához (ED50) szükséges koncentráció 200 mól/liter körül van. Az összehasonlító érték CTN-re (5 mmól/cisztein jelenlétében) összehasonlításképpen 80 mól/liter körül van.
17. példa
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-L-cisztein-amid előállítása
4,3 g (27,5 mmól) L-cisztein-amid.HCl-t és 7,5 g (55,0 mmól) nátrium-acetát.3H2O-t 10 ml vízben oldunk, ehhez az oldathoz szobahőmérsékleten mintegy 30 perc alatt keverés közben hozzácsepegtetjük 5 g (27,5 mmól) NO2 pivaloil-klorid 40 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát, ekkor két fázis keletkezik. 55 ml víz és 110 ml tetrahidrofurán részletekben való hozzáadásával megkíséreljük, hogy egy fázist kapjunk, ez azonban sikertelen. 2 órás, szobahőmérsékleten végzett keverés után vékonyrétegkromatografálást végzünk, ekkor mindkét fázisban termék keletkezik. Az egész reakcióelegyet Rotavaporon (forgó bepárologtatón) bepároljuk. A maradékot összekeveijük 200 ml metilén-kloriddal és 50 ml vízzel. Az elkülönített szerves fázist egymás után kétszer, egyenként 20 ml In HCl-lel és egyszer 20 ml vízzel mossuk. Ametilén-kloridos fázist Rotavaporon szárazra pároljuk. Az olajos, 6,1 g mennyiségű nyersterméket (az elméleti kitermelés 83,6%-a) oszlopon kromatografálva tisztítjuk.
Kitermelés: 0,76 cím szerinti vegyület = 10,4% az elméletinek.
HPLC-eredmény: 93,1%-os (100%-os módszer). Tömegspektroszkópiai eredmény: m+ és fragmentálás interpretálható.
18. példa
N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil )-L-cisztein-N’-metil-amid előállítása
4,6 g (26,9 mmól) L-cisztein-N-metil-amid.HCl-t és 7,3 g (53,8 mmól) nátrium-acetát.3H2O-t 35 ml vízben és 35 ml dioxánban nitrogénatmoszférában oldunk. Keverés közben, kb. 1 óra alatt, 2-5 °C-on hozzácsepegtetjük 4,9 g (26,9 mmól) nitro-oxi-pivaloilklorid 35 ml dioxánnal készített oldatát (1. fázis). Mintegy 1 órás keverés után (5 °C) a dioxánt Rotavaporon majdnem teljesen ledesztilláljuk. A visszamaradó vizes fázis a kivált olajjal 100 ml diklór-metánnal egyszer és 50 ml diklór-metánnal ugyancsak egyszer extraháljuk. Az egyesített diklór-metános fázisokat egyenként 30 ml 1 mólos HCl-lel kétszer és 30 ml vízzel egyszer mossuk. A diklór-metános fázisokat Rota11
HU 209 716 Β vaporon szárazra pároljuk. A maradék 7,5 g, az elméleti érték 99,8%-a. Oszlopkromatográfiás tisztítás és vízmetanol (7,3 arányú) elegyéből végzett kristályosítás után 2,3 g kristályos terméket kapunk (= 30,6%-a az elméletinek).
HPLC: 99,3%-os.
Op.:91,6 ’C.
Tömegspektroszkópiai eredmény: m+ és fragmentálás interpretálható.
19. példa
N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil )-L-cisztein-N ’,N'-( dietil)amid előállítása
15,96 g (0,075 mól) L-cisztein-dietil-amid-hidrokloridotés 18,37 g (0,135 mól) nátrium-acetát-trihidrátot 50 ml vízben oldunk. 50 ml diklór-metán hozzáadása után 5-10 ’C-on hozzácsepegtetjük 10,9 g (0,06 mól) 3-nitro-oxi-pivaloil-klorid 50 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakcióelegyet 2 órán át utánkeverjük, a szerves fázist elkülönítjük és egyenként 25 ml 1 mólos HCL-lel kétszer mossuk. Nátriumszulfát felett végzett szárítás után a diklór-metánt teljesen eltávolítjuk. Maradék 16,93 g olaj.
HPCL: 94,6%-os.
Tömegspektroszkópiai eredmény: m+ és fragmentálás interpretálható.
20. példa
N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-L-ciszteinoil-piperidin előállítása
16,86 g (0,075 mól) N-L-cisztenoil-piperidin-hidrokloridotés 18,37 g (0,135 mól) nátrium-acetát-trihidrátot 50 ml vízben oldunk. 50 ml diklór-metán hozzáadása után 5-10 ’C-on hozzácsepegtetjük 10,9 g 3-(nitro-oxi)-pivaliol-klorid 50 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten utánkeverjük, a szerves fázist elkülönítjük és egyenként 45 ml, 1 mólos HCl-lel kétszer mossuk. Nátrium-szulfát felett végzett szárítás után a diklór-metánt teljesen eltávolítjuk. Maradék: 18,68 g (az elméleti érték 93,4%-a).
Oszlopkromatografálás feldolgozás és metanol-víz elegyéből végzett kristályosítás után 8,51 g (az elméleti 42,5%-a) terméket kapunk.
HPLC: 97,6%-os.
Op.: 81,9 ’C.
Tömegspektroszkópiai eredmény: m+ és fragmentálás interpretálható.
27. példa [N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-S-pivaloil]-D-ciszteinetil-észter előállítása
7. lépés
N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil )-D-cisztein-etil-észter előállítása
13,93 g (0,075 mól) D-cisztein-etilészter.HCl-t és 18,37 g (0,135 mól) nátrium-acetát-trihidrátot keverés közben vízben oldunk, majd az oldathoz 47,0 ml diklór-metánt adunk, ezt követően erős keverés közben
10,90 g (0,060 mól) 3-(nitro-oxi)-pivaloil-klorid 37,5 ml diklór-metánnal készített oldatát csepegtetjük hozzá, 2 óra alatt, erős hűtés közben, 10 ’C-on (exoterm reakció). Ezután 30 percig utánreagáltatjuk, 10 ’C-on, keverés közben. Az elkülönített diklór-metános fázist egymás után egyszer 30 ml In HCl-lel és 13,4 g In HCl-lel mossuk. A diklór-metános fázist 30 percig keverjük 15 g nátrium-szulfáttal, majd a nátrium-szulfátot leszívatjuk.
Kitermelés: 17,66 g cím szerinti vegyület. HPLC-eredmény: 98,1%-os (100%-os módszer).
Op.: 20 ’C alatt.
2. lépés [N-( 3-Nitro-oxi-pivaloil )-S-pivaloilJ-D-ciszteinetil-észter előállítása
9,02 g N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-D-cisztein-etil-észtert 50 ml diklór-metánban oldunk. Az oldatot 2,5 ’Cra lehűtjük és összekeverjük 3,92 g pivaloil-kloriddal, majd másfél óra alatt, 5-10 ’C-on hozzácsepegtetjük 3,29 g trietil-amin 10 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk, majd egymás után 10 ml 1 mólos HCllel, 7,5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist elkülönítjük és teljesen bepároljuk. Maradékként 11,32 g terméket kapunk.
A nyersterméket 40 ml etanollal és 15 ml víz elegyéből kristályosítjuk.
Kitermelés: 7,06 g.
/alfa/20]) = +46,07° (c = 1 metanol).
22. példa [N-(3-Nitro-oxi-pivaloil)-S-etoxi-karbonil ]-L-cisztein-etil-észter előállítása
60,04 g = 0,204 mól N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-L-cisztein-etil-észtert és 5,6 g dimetil-amino-piridint 300 ml diklór-metánban oldunk. 5-10 ’C-on, mintegy 15 perc alatt 22,82 g = 0,204 mól klór-hangyasav-etil-észtert, majd ugyanezen a hőmérsékleten 20,64 g = 0,204 mól trietil-amin 100 ml diklór-metánnal készített oldatát csepegtetjük. A reakcióelegyet éjszakán át utánkeverjük és egymás után 10 ml tömény nátrium-hidrogén-karbonátoldattal, 100 ml 1 mólos HCl-lel és 50 ml 1 mólos HCllel mossuk. Nátrium-szulfáton végzett szárítás után a diklór-metánt teljesen eltávolítjuk. Maradék: 52,6 g termék.
A teljes maradékot 150 ml etanolból kristályosítjuk. Kitermelés: 17,42 g.
Op.: 36,2 ’C.
Tömegspektroszkópiai eredmény: m+ és fragmentálás interpretálható.
23. példa
15,42 g Ξ 0,087 mól penicillamin-etil-észtert és 21 gs 0,16 mól nátrium-acetátot nitrogénatmoszférában 70 ml víz és 70 ml diklór-metán keverékében addig keverünk, míg mindkét fázis tiszta oldatot eredményez. 5-10 ’C-on, keverés közben 2 óra alatt hozzácsepegtetjük 13,16 = 0,073 mól 3-nitro-oxi-pivaloilklorid 50 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakcióelegyet 2 órán át utánkeverjük és a fázisokat szétvá12
HU 209 716 Β lasztjuk. A szerves fázist egymás után 50 ml 1 mólos HCl-lel és vízzel mossuk. Nátrium-szulfáton végzett szárítás után a szerves fázist rotációs elpárologtatóban teljesen eltávolítjuk.
Maradék: 19,0 g.
A maradékot oszlopkromatográfíásan tisztítjuk. Kitermelés: 11,36 g olajos maradék.
HPLC: 98,2%-os (100%-os módszer).
Tomegspektroszkópiai eredmény: m+ és fragmentálás interpretálható.
Claims (8)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás (I) általános képletű új szerves nitrátoka képletbenR jelentése hidroxilcsoport, 1-4 szénatomos alkoxicsoport, aminocsoport, 1-4 szénatomos alkil-amino-csoport, di(l^l szénatomos alkil)-amino-csoport, (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil-(l-4 szénatomos alkoxi)-csoport, fenil-(l-4 szénatomos alkoxi)-csoport, di(l—4 szénatomos alkil)-amino-(l4 szénatomos alkoxi)-csoport, (1-4 szénatomos alkoxi)-Gly-Pro-Phe-Pro-Tyr-csoport, 5 szénatomos cikloalkil-amino-csoport,R1 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy 2-5 szénatomos alkanoil-amino-csoportR2 jelentése hidrogénatom, 1—4 szénatomos alkilcsoport vagy 2-5 szénatomos alkanoil-amino-csoport,R5 jelentése merkapto-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, (1-7 szénatomos alkanoil)-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, benzoil-tio(l~4 szénatomos alkil)-csoport, (1-4 szénatomos alkil)-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, amino-karbonil-tio-(l—4 szénatomos alkil)-csoport, (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil-(l-4 szénatomos alkil)-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, HO-CO-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, 1-4 szénatomos alkoxi-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoport, vagyR és R5 tiolakton képződése közben egymással összekapcsolódhat, m értéke 0, 1,2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9 vagy 10, s értéke 0 vagy 1, valamint ezek gyógyszerészetileg elfogadható sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy az NO2-O(C2-C21szénatomos)-zsírsavakat vagy ezek reakcióképes származékait, így észtereit vagy savhalogenidjeit, a cisztein, homocisztein, metionin, β,β-dimetil-cisztein vagy egy peptid aminocsoportjával kondenzáljuk, és/vagy kívánt esetben egy további reakciólépéssel az R5 oldalláncban a merkapto-(l-4 szénatomos alkil)-csoportot (1-4 szénatomos alkoxi)-karbonil-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoportra vagy (1-7 szénatomos alkanoil)-tio-(l-4 szénatomos alkil)-csoportra cseréljük és/vagy kívánt esetben a kapott vegyületet sóvá alakítjuk át.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy nitro-oxi-zsírsavként 2-6 szénatomos lánchoszszúságú, egyenes vagy elágazó láncú, racém vegyületet vagy optikai izomert használnuk.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aminosavként ciszteint, metionint vagy homociszteint használunk.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aminosavként sztereokémiái Lformájú savakat alkalmazunk.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aminosavként metil-, etil- vagy propilészter alakjában lévő ciszteint és/vagy metionint alkalmazunk.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan ciszteint használunk, amely az SH-csoporton 1-7 szénatomos alkánkarbonsavakkal észterezett.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás a következő (I) általános képletnek megfelelő - vegyületek előállítására:N-(2-nitro-oxi-acetil)-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-acetil-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-propionil-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-acetil)-S-pivaliol-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-acetil)-metionin-metil-észter,N-(2-nitro-oxi-propionil)-cisztein,N-(2-nitro-oxi-propionil)-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-propionil)-metionin-metil-észter,N-(2-nitro-oxi-butiril)-cisztein,N-(2-nitro-oxi-butiril)-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-butiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-butiril)-S-butiril-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein,N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-benzoil-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-S-pivaliol-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-izobutiril)-metionin-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein,N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-izobutiril)-S-acetil-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-butiril)-S-propionil-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-butiril)-metionin-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-butiril)-homocisztein-tiolakton,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-cisztein-etil-észter-S-karbonát,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-acetil-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-propionil-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-butiril-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-izobutiril-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-pivaloil-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-S-benzol-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-metionin,N-(3-nitro-oxi-pivaloil)-homocisztein-tiolakton,N-(2-nitro-oxi-hexanoil)-cisztein-etil-észter,N-(2-nitro-oxi-hexanoil)-S-propionil-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-hexanoil)-cisztein-etil-észter,N-(3-nitro-oxi-hexanoil)-metionin-metil-észter,N-(12-nitro-oxi-lauroil)-cisztein,N-(12-nitro-oxi-lauroil)-cisztein-etil-észter,HU 209 716 BN-(12-nitro-oxi-lauroil)-S-acetil-cisztein,N-(12-nitro-oxi-lauroil)-S-pivaloil-cisztein azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazunk.
- 8. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, az- 5 zal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű vegyületet - a képletbenR, R1, R2, R5 jelentése, m és s értéke az 1. igénypontban megadottakkal megegyező - és/vagy ezek gyógyszerészetileg elfogadható sóját vagy ezek keverékeit a gyógyszerek előállításánál szokásos adalékanyagokkal és/vagy segédanyagokkal összekeverjük és gyógyszerészeti készítményekké feldolgozzuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3831311 | 1988-09-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT51229A HUT51229A (en) | 1990-04-28 |
| HU209716B true HU209716B (en) | 1994-10-28 |
Family
ID=6362967
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU894831A HU209716B (en) | 1988-09-15 | 1989-09-14 | Process for preparing organic nitrates containing sulphur and pharmaceutical preparations containing the same as ingredient |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0362575B1 (hu) |
| JP (1) | JP2628756B2 (hu) |
| AT (1) | ATE121077T1 (hu) |
| CZ (1) | CZ284586B6 (hu) |
| DE (1) | DE58909173D1 (hu) |
| DK (1) | DK452989A (hu) |
| ES (1) | ES2073418T3 (hu) |
| FI (1) | FI95569C (hu) |
| HR (1) | HRP920987A2 (hu) |
| HU (1) | HU209716B (hu) |
| IE (1) | IE65918B1 (hu) |
| PL (1) | PL163343B1 (hu) |
| PT (1) | PT91702B (hu) |
| SK (1) | SK280513B6 (hu) |
| YU (1) | YU48302B (hu) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4011505C2 (de) * | 1990-04-10 | 1995-01-12 | Sanol Arznei Schwarz Gmbh | Nitratoalkancarbonsäure-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel |
| US5284872A (en) * | 1989-09-12 | 1994-02-08 | Schwarz Pharma Ag | Nitrato alkanoic acid derivatives, methods for their production, pharmaceutical compositions containing the derivatives and medicinal uses thereof |
| NL9001955A (nl) * | 1990-09-05 | 1992-04-01 | Cedona Pharm Bv | Nieuwe thiazolidinederivaten. |
| JP3361836B2 (ja) * | 1991-07-04 | 2003-01-07 | 三共株式会社 | アミノ酸誘導体 |
| FR2680173A1 (fr) * | 1991-08-07 | 1993-02-12 | Hoechst Lab | Nitrates organiques, leurs procedes de preparation et leur utilisation dans le traitement de maladies cardiovasculaires . |
| DE4321306A1 (de) * | 1993-06-26 | 1995-01-05 | Sanol Arznei Schwarz Gmbh | Disulfide |
| US5807847A (en) * | 1996-06-04 | 1998-09-15 | Queen's University At Kingston | Nitrate esters |
| ES2142773B1 (es) * | 1998-10-07 | 2001-01-01 | Lacer Sa | Derivados de mononitrato de isosorbida y su empleo como agentes vasodilatadores con tolerancia desminuida. |
| ES2604562T3 (es) | 2007-02-05 | 2017-03-07 | Nicox Science Ireland | Compuestos donantes de óxido nítrico |
| EP2149576A1 (en) | 2008-07-22 | 2010-02-03 | Lacer, S.A. | Isosorbide Nitrates having vasodilating activity |
| CN103739499B (zh) | 2011-10-24 | 2016-09-07 | 尼科斯科学爱尔兰公司 | 醌基一氧化氮供体化合物 |
| WO2014169976A1 (en) | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Nicox Science Ireland | Quinone based nitric oxide donating compounds |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3512627A1 (de) * | 1985-04-06 | 1986-10-09 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Amino-propanol-derivate, verfahren zu deren herstellung, verwendung derselben und diese enthaltende arzneimittel |
-
1989
- 1989-07-25 JP JP1192477A patent/JP2628756B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-09 EP EP89116700A patent/EP0362575B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-09 AT AT89116700T patent/ATE121077T1/de active
- 1989-09-09 ES ES89116700T patent/ES2073418T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-09 DE DE58909173T patent/DE58909173D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-12 YU YU176289A patent/YU48302B/sh unknown
- 1989-09-13 IE IE293289A patent/IE65918B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-09-13 PT PT91702A patent/PT91702B/pt unknown
- 1989-09-14 DK DK452989A patent/DK452989A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-09-14 CZ CS895303A patent/CZ284586B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1989-09-14 HU HU894831A patent/HU209716B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-09-14 PL PL89281420A patent/PL163343B1/pl unknown
- 1989-09-14 FI FI894350A patent/FI95569C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-09-14 SK SK5303-89A patent/SK280513B6/sk unknown
-
1992
- 1992-10-02 HR HRP920987AA patent/HRP920987A2/hr not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ530389A3 (cs) | 1998-11-11 |
| DK452989A (da) | 1990-03-16 |
| EP0362575B1 (de) | 1995-04-12 |
| PT91702B (pt) | 1995-06-30 |
| PT91702A (pt) | 1990-03-30 |
| HUT51229A (en) | 1990-04-28 |
| DE58909173D1 (de) | 1995-05-18 |
| DK452989D0 (da) | 1989-09-14 |
| CZ284586B6 (cs) | 1999-01-13 |
| YU48302B (sh) | 1998-05-15 |
| IE892932L (en) | 1990-03-15 |
| ES2073418T3 (es) | 1995-08-16 |
| YU176289A (en) | 1992-02-20 |
| SK530389A3 (en) | 2000-03-13 |
| IE65918B1 (en) | 1995-11-29 |
| PL163343B1 (pl) | 1994-03-31 |
| FI894350A0 (fi) | 1989-09-14 |
| HRP920987A2 (hr) | 1994-04-30 |
| FI95569B (fi) | 1995-11-15 |
| JPH0291054A (ja) | 1990-03-30 |
| FI95569C (fi) | 1996-02-26 |
| FI894350A (fi) | 1990-03-16 |
| JP2628756B2 (ja) | 1997-07-09 |
| ATE121077T1 (de) | 1995-04-15 |
| SK280513B6 (sk) | 2000-03-13 |
| EP0362575A1 (de) | 1990-04-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5428061A (en) | Organic nitrates and method for their preparation | |
| US5284872A (en) | Nitrato alkanoic acid derivatives, methods for their production, pharmaceutical compositions containing the derivatives and medicinal uses thereof | |
| KR100265181B1 (ko) | 디설파이드 그룹을 함유하는 니트레이트 | |
| EP0318377B1 (fr) | Nouveaux composés énantiomères dérivés d'amino-acides, leur procédé de préparation et leurs applications thérapeutiques | |
| EP0274453A2 (fr) | Nouveaux composés à activité d'inhibiteurs de collagénase, procédé pour les préparer et compositions pharmaceutiques contenant ces composés | |
| EP0649303A1 (en) | Substituted arginines and substituted homoarginines and use thereof | |
| HU209716B (en) | Process for preparing organic nitrates containing sulphur and pharmaceutical preparations containing the same as ingredient | |
| JP3457687B2 (ja) | 白内障治療用薬剤 | |
| RU2017748C1 (ru) | Производные нитратоалкановых кислот или их фармацевтически приемлемые соли | |
| WO1993003037A1 (fr) | Nitrates organiques, leurs procedes de preparation et leur utilisation dans le traitement de maladies cardiovasculaires | |
| SK43499A3 (en) | New pentaerythritol derivatives, their production and use and intermediates for their synthesis | |
| US6365611B1 (en) | Pentaerythrite derivatives, the production and use thereof and intermediate products for the synthesis of the same | |
| EP0723974A1 (fr) | Dérivés de mercaptoalcanoyldipeptides, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent | |
| US9387185B2 (en) | N-ω-hydroxy-L-arginine derivatives for the treatment of diseases | |
| SI8911762A (sl) | Novi organski nitrati in postopki za njihovo pripravo | |
| Khedouri et al. | Studies on Latent Derivatives of Aminoethanethiols as Potentially Selective Cytoprotectants. VI. Synthesis of N-(2-Mercaptoethyl) carbamoylamino Acids | |
| GB2067999A (en) | Epoxysuccinic Acid Derivatives | |
| WO2002016405A1 (en) | S-nitrosothiols and their use as medicaments for cardiovascular diseases | |
| CZ9904380A3 (cs) | Nové deriváty pentaerythritolu, jejich výroba a použití a meziprodukty pro jejich synté |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |