HU209574B

HU209574B - Process for producing pyrimidine derivatives and pharmaceutical preparations containing them

Info

Publication number: HU209574B
Application number: HU148892A
Authority: HU
Inventors: Akira Awaya; Mitsuyuki Takesue; Takumi Kitahara; Kazutoshi Horikomi; Tadayuki Sasaki; Akira Mizuchi; Noriaki Kihara; Ikuo Tomino
Original assignee: Mitsui Petrochemical Ind; Mitsui Pharmaceuticals
Priority date: 1988-12-29
Filing date: 1989-12-22
Publication date: 1994-08-29
Also published as: HUT61293A; HU9201485D0; HUT61313A; HU210001B; HU9201488D0; HU209594B; HUT61288A; HU9201487D0

Description

A találmány tárgya eljárás új pirimidin-származékok, illetve farmakológiailag elfogadható sóik és az ezeket tartalmazó, állatok perifériás és központi idegrendszere megbetegedéseinek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására.

A 23 394/1971 számú közrebocsátott japán szabadalmi bejelentés az (A) általános képletű aminopirimidineket ismerteti, ahol

A jelentése 16 szénatomszámig terjedő alkiléncsoport vagy aminocsoporttal helyettesített rövidszénláncú alkiléncsoport vagy egy 2-5 szénatomos acilaminocsoport.

M jelentése hidrogén-, nátrium-, kálium-, ammónium-, magnézium-, kalciumatom vagy egy szerves bázikus ammóniumsó, n értéke megegyezik az M vegyértékszámával, amelyek fontos terápiás aktivitással rendelkeznek, különösen anti-melankolikus és pszichoanaleptikus szerként alkalmazhatók a pszichózis területén.

A 22 044/1976 számú japán szabadalmi bejelentés szerint a 2-izopropil-amino-pirimidin diklór-rövidszénláncú karbonsav-sói, mint például a 2-izopropil-aminopirimidin-diklór-acetát, neurológiai betegségre terápiás szerekként alkalmazható.

A 100 477/1977 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés szerint a 2-izopropil-amino-pirimidinfoszfát neurológiai megbetegedések terápiás szereként alkalmazható.

A 393/1980 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a 2-izopropil-amino-pirimidin nagy kitermeléssel történő előállítását ismerteti. A leírás egyik kiviteli példája a 2-izopropil-amino-pirimidin 60%-kal történő előállítását írja le. A 122 768/1980 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a (B) általános képletű

2-izopropil-amino-pirimidin hidroxil-származékait ismerteti, ahol

A⁴, A⁵ és A⁶ jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, és ezek közül legalább egy hidroxilcsoportot jelent, amelyek idegek regenerálása területén és miodisztrófia kezelésére alkalmazhatók.

A 145 670/1980 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a (C) általános képletű 2-izopropil-aminohalogén-pirimidin-származékokat ismerteti, ahol A₄', A₅' és Ag' jelentése hidrogén- vagy halogénatom, és ezek közül legalább egy halogénatomot képvisel, amelyek különböző neurológiai megbetegedések és miodisztrófia kezelésére alkalmazhatók.

A145 671/1980 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a 2-izopropil-amino-pirimidin egy hidroxilszármazékának előállítását ismerteti.

A151 571/1980 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a 2-izopropil-amino-5-halogén-pirimidineket mint a neurológiai megbetegedések fontos terápiás anyagait ismerteti.

A 10 177/1981 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a 2-izopropil-amino-pirimidin előállítását ismerteti lényegében véve kvantitatív kitermeléssel a 2metil-szulfonil-pirimidin izopropil-aminnal történő aminálása útján.

A 26 880/1981 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a 2-izopropil-amino-pirimidin előállítását ismerteti bisz(izopropil-guanidin)-szulfát 1,1,3,3-tetraetoxi-propánnal történő reagáltatása útján.

A 90 013/1981 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés miodisztrófia, miopátia, izommerevség és/vagy neuro-muszkuláris transzmisszió diszfunkciója terápiás szereként alkalmazható, helyettesített pirimidin-származékokat, illetve ezek terápiásán elfogadható sóit vagy metabolitjait ismerteti. Hatóanyagként azonban csak különböző sókat, például a 2-izopropil-amino-pirimidin ortofoszfátját ismerteti.

A 65 873/1986 számon közzétett japán szabadalmi bejelentés a (D) általános képletű 2-piperazino-pirimidineket ismerteti, ahol

R¹ jelentése hidrogénatom vagy aralkilcsoport, és

Y jelentése egy szerves csoport, amelyek rizsföldeken és felföldi farmokon herbicidként alkalmazhatók.

A WO 87/04928 számon közzétett nemzetközi PCT bejelentés neurológiai megbetegedések terápiás szereként bizonyos 2-piperazino-pirimidin-származékokat és farmakológiailag elfogadható sóikat ismerteti.

A találmány tárgya eljárás új pirimidin-származékok és farmakológiailag elfogadható sóik előállítására, továbbá ezeket tartalmazó olyan gyógyszerkészítmények előállítására, amelyek neurológiai betegségek és gerinc-idegösszeomlás gyógyítására, továbbá idegsejtek regenerálására alkalmasak, perifériás idegrendellenességek, agyi-gerinci sérülések esetén, továbbá a központi idegrendszer olyan betegségei esetén alkalmazhatók, amelyek a pszichózistól eltérőek, és amelyekben a működési rendszer abnormalitása vagy a kémiai transzmitterek metabolikus rendszerének abnormalitása tekinthető primer tényezőnek, továbbá agyi betegségek kezelésére, amelynek során a tanulás és a memória megjavul, illetve regenerálódik, és amely készítményeknek csekély mellékhatása, például máj károsító hatása van.

A találmány szerinti eljárás előállított vegyületeket az (I) általános képlet szemlélteti, ahol X jelentése (c) képletű csoport, (e) általános képletű csoport, ahol n értéke 4, 5 vagy 6;

(f) általános képletű csoport, ahol

R⁵ jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport,

Y jelentése -CH₂R⁹ általános képletű csoport, ahol R⁹ jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, 1-7 szénatomos alkoxicsoport, 1-7 szénatomos alkil-tio-csoport vagy di-(l—7 szénatomos alkil)-amino-csoport;

Z jelentése (1-7 szénatomos alkoxi)-karbonil-csoport.

R⁵ jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport, amely lehet egyenes vagy elágazó, előnyösen 1-4 szénatomos. Ilyenek például a metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, szek-butil-, izobutil- és terc-butil-csoport.

Az (I) általános képletben X jelentése (c), (e) vagy (f) képletű csoport.

Az (I) általános képletben Y jelentése -CH₂R⁹, ahol

HU 209 574 Β

R⁹ jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, 1-7 szénatomos alkoxicsoport, 1-7 szénatomos alkoxicsoport, 1-7 szénatomos alkil-tio-csoport vagy dí-(l—7 szénatomos alkil)-amino-csoport.

Az R⁹ helyén előforduló 1-6 szénatomos alkilcsoportok lehetnek azok, amelyeket az R⁵ csoport esetén felsoroltunk.

Az (I) általános képletű vegyületek közül példaképpen felsoroljuk a következő vegyületeket:

(800) képletű vegyület, (804) képletű vegyület, a (800) képletű vegyület maleátja, (808) képletű vegyület, (812) képletű vegyület, a (808) képletű vegyület maleátja, (816) képletű vegyület, (820) képletű vegyület, (824) képletű vegyület, (828) képletű vegyület, a (824) képletű vegyület maleátja.

Az (I) általános képletű vegyületek ismert módszerekkel állíthatók elő, különösen azokkal a módszerekkel, amelyeket a 140 568/1986 és a 87 627/1986 számú közrebocsátott japán szabadalmi bejelentések ismertetnek, vagy előállíthatok az így kapott intermedierek ismert módszerekkel történő kezelésével (például a védőcsoportok eltávolítása redukcióval). Ezen vegyületek előállítását a példákban részletesen ismertetjük.

Az (I) általános képletű vegyületek előállíthatok az A reakcióvázlaton bemutatott módon.

A (IV) és (V) általános képletű vegyületeket előnyösen 20 és 100 °C közötti hőmérsékleten, vízben, metanolban, etanolban, THF-ben vagy DMF-ben reagáltatjuk. A (IV) általános képletű vegyületek a 2 425 341 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerinti módon, az (V) általános képletű vegyületek pedig a Journal of Chemical Society Perkin 1464 (1979) irodalmi helyen ismertetett módon állíthatók elő.

Az olyan (I) általános képletű vegyületek, ahol Y jelentése -CH₂R⁹ és R⁹ jelentése hidrogénatomtól és 1-6 szénatomos alkilcsoporttól eltérő, és Z jelentése (1-7 szénatomos alkoxi)-karbonil-csoport, előállíthatok a B reakcióvázlaton bemutatott módon is.

A (VI) általános képletű vegyületek előállíthatok a 65 873/1986 számú közrebocsátott japán szabadalmi bejelentés szerinti módszerekkel (7. előállítási módszer), azzal az eltéréssel, hogy benzil-piperazin helyett X-et alkalmazunk. Az olyan (I) általános képletű vegyületeket. ahol Y jelentése -CH₂R₉ képletű csoport és Z jelentése (1-7 szénatomos alkoxi)-karbonil-csoport és R⁹ hidrogénatomtól és 1-6 szénatomos alkilcsoporttól eltérő, úgy állíthatjuk elő, hogy egy (VI) általános képletű vegyületet és egy R⁹H általános képletű vegyületet általában egy bázis, így egy szerves bázis, például piridin vagy trietil-amin vagy egy szervetlen bázis, például kálium-karbonát, nátrium-karbonát, káliumhidroxid, nátrium-hidroxid, kálium-hidrid vagy nátrium-hidrid jelenlétében, inért oldószerben, mint például toluolban vagy tetrahidrofuránban vagy oldószer jelenléte nélkül reagáltatunk.

Kutatásaink során úgy tapasztaltuk, hogy az (I) általános képletű vegyületek neurológiai betegségek kezelésére használhatók.

Az (I) általános képletű vegyületeket farmakológiai kompozíciók formájában alkalmazzuk különböző úton, például orálisan, szubkután, intramuszkulárisan, intravénásán, intrarinálisan, bőrön át vagy végbélen keresztül.

A találmány tárgya továbbá eljárás farmakológiai készítmények előállítására, amelyek hatóanyagként (I) általános képletű vegyületet vagy ezek farmakológiailag elfogadható sóját tartalmazzák. Farmakológiailag elfogadható sók lehetnek például a savaddíciós sók és a kvaterner ammónium (vagy amin) sók.

Az (I) általános képletű vegyületek farmakológiailag elfogadható sói az olyan savakkal alkotott sók, amelyek farmakológiailag elfogadható, nemtoxikus savaddíciós sókat képeznek, amelyek például a következő anionokat tartalmazhatják: hidroklorid, hidrobromid, szulfát, biszulfit, foszfát, hidrofoszfát, acetát, maleát, fumarát, szkucinát, laktát, tartarát, benzoát, citrát, glukonát, glukanát, metánszulfonát, p-toluolszulfonát, naftalinszulfonát vagy ezek hidrátjai, továbbá kvaterner ammónium (vagy amin) sók, vagy ezek hidrátjait.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények elkészíthetők például tabletta, kapszula, por, granulátum, pirula, ostya, kapszula, elixír, emulzió, oldat, szirup, szuszpenzió, aeroszol, kenőcs, aszeptikus injekció, olvadt kataplazma, szalag, lágy vagy kemény zselatinkapszula, kúp és aszeptikusán csomagolt por formájában. Farmakológiailag elfogadható hordozóként alkalmazhatunk például laktózt, glükózt, szacharózt, szorbitot, mannitot, kukoricakeményítőt, kristályos cellulózt, gumiarábikumot, kalciumfoszfátot, alginátokat, kalcium-szilikátot, mikrokristályos cellulózt, polivinil-pirrolidont, tragantgyantát, zselatint, szirupot, metil-cellulózt, karboxi-metil-cellulózt, metil-hidroxi-benzoesav-észtereket, propil-hidroxi-benzoesav-észtereket, talkumot, magnézium-sztearátokat, inért polimereket, vizet és ásványi olajokat.

A szilárd és a folyékony kompozíciók tartalmazhatják a fenti töltőanyagokat, továbbá kötőanyagokat, síkosítóanyagokat, nedvesítőszereket, dezintegrálószereket, emulgeálószereket, szuszpendálószereket, konzerválószereket, ízesítőszereket és édesítőszereket. A találmány szerinti eljárással előállított készítmények előállíthatok olyan formában, hogy a betegnek adagolva a hatóanyag gyorsan, folyamatosan vagy lassan szabaduljon fel.

Orális adagolás során az (I) általános képletű vegyületeket hordozóval vagy hígítóanyaggal keverve tablettává, kapszulává, stb.-vé alakítjuk. Parenterális adagolás esetén a hatóanyagot 10%-os vizes glükózoldatban, izotóniás sóoldatban, steril vízben vagy hasonló folyadékban oldjuk, fiolába vagy ampullába töltjük, intravénás, infúzió vagy injekció vagy intramuszkuláris injekció céljára. A közeg előnyösen egy helyi érzéstelenítőt, konzerválószert és egy puffért is tartalmazhat. A stabilitás javítása érdekében a kompozíciót a fiolába vagy ampullába történt töltés után liofilizálhatjuk. A parenterális adagolásra szánt készítményeket elkészít3

HU 209 574 B hetjük a bőrön át ható készítmény formájában is, azaz kenőcs vagy kataplazma formájában. Ebben az esetben az olvadt kataplazma vagy a szalag előnyös.

A találmány szerinti eljárással előállított kompozíció dózisegységenként 0,1-2000 mg, előnyösen 0.51000 mg hatóanyagot tartalmazhat.

Az (I) általános képletű vegyületek széles dózishatárok között hatékonyak. A vegyület naponta adagolható mennyisége például 0,03 mg/kg és 100 mg/kg között változhat. A vegyület aktuális adagolandó mennyiségét az orvos határozza meg, például az adagolandó vegyület típusától, a kezelendő személy korától, testtömegétől és általános állapotától, valamint az adagolás módjától függően. Az adagolás történhet naponta 1-6, általában 1-4 alkalommal.

Az (I) általános képletű vegyületek a perifériás idegrendszer és a központi idegrendszer rendellenességeinek gyógyítására alkalmasak. Kívánt esetben legalább egy más, hasonlóan hatásos hatóanyaggal együtt is adagolható. Ilyen hatóanyagok lehetnek például a gangliozidok, mecobalamin és izaxonin.

Az (I) általános képletű vegyületek előállítását, és ezek biológiai aktivitását a következő, nem korlátozó jellegű példákkal szemléltetjük.

1. példa

2-Izopropil-amino-4-metil-5-metoxi-karbonil-pirimidin (800. számú vegyület) előállítására

18,2 g (0,12 mól) N-amidino-izopropil-amin-szulfátot hozzáadunk 13,0 g (0,12 mól) kálium-terc-butoxid 200 ml metanollal készült oldatához, és az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig keverjük. Ezután 0 ’C hőmérsékleten 30 perc alatt hozzáadunk 18,5 g (0,12 mól) metil-2-metoxi-metilén-aceto-acetátot, és az elegyet 3 óra hosszat keverjük. Az oldószert lepároljuk, és a maradékot dietil éterrel extraháljuk, szilikagél oszlopon kromatografálva tisztítjuk, így 10,6 g (kitermelés; 44%) cím szerinti terméket kapunk sárga szilárd anyag formájában. Op.: 118-119 °C. 'H-NMR spektrum (deuterokloroform, Ő ppm):

1,26 (6H, d, J = 7 Hz), 2,66 (3H, s), 3,87 (3H, s), 4,25 (1H, sex, J = 7 Hz), 5,40 (1H, széles s), 8,80 (1H, s).

2. példa

2-Piperidino-4-metoxi-metil-5-metoxi-karbonil-pirimidin (820. számú vegyület) előállítására 0,19 g (7,8 mmól) nátrium-hidridet hozzáadunk ml metanolhoz, és ehhez szobahőmérsékleten hozzáadunk 2,1 g (7,8 mmól) 2-piperidino-4-klór-metil-5metoxi-karbonil-pirimidint. Az elegyet 3 óra hosszat keverjük. Ezután az oldószert lepároljuk, a maradékhoz vizet adunk, és az elegyet etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos fázist vízmentes nátrium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot szilikagél oszlopon kromatografálva tisztítjuk, így 0,90 g (kitermelés: 44%) cím szerinti terméket kapunk fehér szilárd anyag formájában. Op.: 89-92 °C. 'H-NMR spektrum (deuterokloroform, δ ppm):

1,70 (6H, m), 3,54 (3H, s), 3,86 (3H, s), 3,92 (4H, m), 4,83 (2H, s), 8,82 (1H, s).

Ugyanilyen módon állítjuk elő a következő vegyületeket.

1. táblázat

Vegyület száma	Kitermelés (%)	Op. (’C)	* H-NMR spektrum (CDCI3 oldat, ppm
808	53	olaj	1,35 (3H, t,J = 7 Hz, 1,66 (6H, m), 2,44 (3H, s), 3,90 (2H, s), 3,92 (4H, m), 4,30 (2H, q, J = 7 Hz), 8,90 (1H, s)
816	35	olaj	1,40 (3H, t, J = 7 Hz), 1,70 (6H, m), 2,21 (3H, s), 3,92 (4H, m), 4,06 (2H, s), 4,36 (2H, q, J = 7 Hz), 8,91 (1H, s)
824	90	olaj	1,22 (6H, d,J = 8 Hz), 1,33 (3H, t, J = 8 Hz), 2,36 (6H, s), 3,84 (2H, s), 5,5 (1H, széles s), 8,78 (1H, s)

3. példa

2-Izopropil-amino-4-metil-5-metoxi-karbonll-pirimidin-maleát (804. számú vegyület) előállítása 2,48 g (1,9 mmól) 2-izopropil-amino-4-metil-5metoxi-karbonil-pirimidint és 1,38 g (11,9 mmól) maleinsavat feloldunk 20 ml etanol és 20 ml kloroform elegyében, és az oldatot 3 hosszat keverjük. Az oldószereket lepároljuk, és a maradékhoz 0 °C hőmérsékleten dietil-étert adunk kristályosítás céljából, így 3,21 g (kitermelés: 83%) cím szerinti terméket kapunk halványsárga kristályok formájában. Op.: 7579 ’C.

'H-NMR spektrum (deuterokloroform, δ ppm):

1,33 (6H, d, J = 7 Hz), 2,85 (3H, s), 3,95 (3H, s),

4,36 (1H, sex, J = 7 Hz), 6,40 (2H, s), 9,08 (1H, széles s). Ugyanilyen módon állítunk elő a következő vegyületeket.

2. táblázat

Végűiét száma	Kiter- melés (%)	Op. (’C)	'H-NMR spektrum (CDC1₃ oldat
812	74	115,5-118,5	1,40 (3H, t, J = 7Hz), 1,68 (6H, m), 3,08 (3H, s), 3,92 (4H, m), 4,34 (2H, q, J = 7Hz), 4,72 (2H, s), 6,32 (2H, s), 8,90 (1H, s)
828	67	111-121	1,30 (6H, d,J = 8Hz), 1,40 (3H, t,J = 8Hz), 3,07 (6H, s), 4,34 (2H, q, J = 8 Hz, 4,66 (2H, s), 6,32 (2H, s), 8,92 (1H, s), 1,2-2,2 (12H, m), 3,26 (3H, s)

HU 209 574 B

IB példa mg hatóanyagot tartalmazó, következő összetételű tablettákat készítjük el:

Tablettánként
Hatóanyag	10 mg
Kukoricakeményítő	55 mg
Kristályos cellulóz	35 mg
Poíivinil-pirrolidon (10%-os vizes oldat)	5 mg
Karboxi-metil-cellulóz-kalcium	10 mg
Magnézium-sztearát	4 mg
Talkum	lmg
Összesen:	120 mg
A hatóanyagot, kukoricakeményítőt	és a kris-

tályos cellulózt egy 0,177 mm lyukméretű szitán átengedjük, és jól összekeverjük. Az elkevert port polivinil-pirrolidon-oldattal granuláljuk, és egy 1,00 mm lyukméretű szitán engedjük át. A kapott granulátumot 50-60 °C hőmérsékleten szárítjuk, és újra átengedjük egy 1,00 mm lyukméretű szitán. A granulátumhoz hozzáadjuk az összekevert és egy 0,177 mm lyukméretű szitán átengedett karboxi-metil-cellulóz-kalciumot, magnézium-sztearátot és talkumot. A kapott elegyet homogénen elkeverjük, és egy tablettázógépen 120 mg méretű tablettákká alakítjuk.

2B példa

200 mg hatóanyagot tartalmazó, következő összetételű tablettákat készítjük:

Tablettánként

Hatóanyag 200 mg

Kukoricakeményítő 50 mg

Kristályos cellulóz 42 mg

Szilícium-dioxid 7 mg

Magnézium-sztearát 1 mg

Összesen: 300 mg

A komponenseket átengedjük egy 0,177 mm lyukméretű szitán, és alaposan elkeveijük. A kapott porkeveréket nyomás alatt megolvasztjuk, és 300 mg tömegű tablettákká alakítjuk.

3B példa

100 mg hatóanyagot és a következő komponenseket tartalmazó tablettákat készítjük:

Kapszulánként

Hatóanyag 100 mg

Kukoricakeményítő 40 mg

Laktóz 5 mg

Magnézium-sztearát 5 mg

Összesen: 150 mg

A komponenseket összekeverjük, egy 0,177 mm lyukméretű szitán átengedjük és alaposan összekeverjük. Akapott porkeveréket 150 mg-onként kapszulákba töltjük.

4B példa mg hatóanyagot tartalmazó, a következő összetételű injektálható készítményt készítjük:

Fiolánként

Hatóanyag 5 mg

Mannit 50 mg

Alkalmazás előtt a komponenseket 1 ml injekciós desztillált vízben feloldjuk és adagoljuk.

5B példa mg hatóanyagot tartalmazó, a következő összetételű injektálható készítményt töltjük ampullákba:

Ampullánként

Hatóanyag 50 mg

Nátrium-klorid 18 mg

Injekciós desztillált víz szükséges mennyiség

Összesen: 2 ml

6B példa

17,5 mg hatóanyagot tartalmazó tapaszt készítünk a következőképpen.

tömegrész poli(ammónium-akrilát)-ot feloldunk 60 tömegrész vízben. 2 tömegrész glicerin-diglicidilétert feloldunk 10 tömegrész vízben melegítés közben. Ezenkívül 10 tömegrész poilietilén-glikolt (polimerizációs fok 400), 10 tömegrész vizet és 1 tömegrész hatóanyagot oldódásig keverünk. Keverés közben a vizes poli(ammónium-akrilát)-oldathoz hozzáadjuk a vizes glicerin-diglicidil-éter és a hatóanyag oldatát, majd polietilén-glikolt és vizet adunk hozzá és jól elkeverjük. A kapott hidrogél-oldatot rugalmas műanyag filmre visszük fel olyan mennyiségben, hogy a hatóanyag emsénként 0,5 mg legyen. A felületet leválasztható papírral fedjük be, és 35 cm²-es darabokra vágjuk.

7B példa mg hatóanyagot tartalmazó tapaszt készítünk a következő eljárással. Vizes szolt készítünk a következő komponensekből: 100 tömegrész poli(nátrium-akrilát), 100 tömegrész glicerin, 150 tömegrész víz, 0,2 tömegrész triepoxi-propil-izocianurát, 100 tömegrész etanol, 25 tömegrész izopropil-mirisztát, 25 tömegrész propilén-glikol és 15 tömegrész hatóanyag. A kapott szolt 100 pm vastagságban egy nem-szövött rayon textíliából és polietilén-filmből álló összetett film nem-szövött textil felületére visszük fel, így hatóanyagot tartalmazó tapadós réteget alakítunk ki. A rétegben a felszabadítást biztosító komponensek (izopropil-mirisztát és propilén-glikol) aránya körülbelül 30 tömeg%. A tapadós réteget 25 °C hőmérsékleten 24 óra hosszat térhálósítjuk, és a tapadós réteg felületére egy eltávolítható filmet helyezünk. A kialakított többrétegű filmet ezután 35 cm²-es darabokra vágjuk.

Az (I) általános képletű vegyületek idegrendszeri sejtekre kifejtett biológiai aktivitását in vitro vizsgáltuk. Vizsgálati sejtekként egér neuroblasztóma neuro2a sejtvonal (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) NS-20Y, stb. sejteket alkalmaztunk, amelyeket idegrendszeri sejtek vizsgálatához tenyésztettek ki. Az említett idegsejteket 37 °C hőmérsékleten, 5% széndioxidot tartalmazó gáz jelenlétében inkubátorban növesztgettük, és meghatározott ideig a találmány szerinti eljárással előállított vegyületekkel együtt tenyésztettük. Az eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek az idegsejtekre növekedés-fokozó aktivitást, neurit-kép5

HU 209 574 B ző hatást és sarjadzást elősegítő aktivitást fejtenek ki, amely aktivitások szignifikánsan magasabbak, mint a kontroll, illetve azonosak, vagy magasabbak, mint a kontroll hatóanyagként alkalmazott izoxanin (28 548/1984 számú közzétett japán szabadalmi bejelentés szerinti vegyület) aktivitása.

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek patkány PC-12 paraganglióma sejtvonalra kifejtett biológiai aktivitását szintén vizsgáltuk. Amikor a PC-12 sejtekhez NGF-t adunk, a neuritok sarjadzanak. Úgy találtuk, hogy amikor egyidejűleg a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket adagoltuk, az NGF PC-12 sejtekhez való kötődése és az NGF sejtekbe történő bejutása fokozódik, és a neuritok sarjadzása szintén fokozódik. Amikor a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek hatását az NGF nyúl felső nyaki ganglionhoz való kötődésére nézve vizsgáltuk, úgy találtuk, hogy a vegyületek fokozzák az NGF kötődését. Elzúzott ülőideggel rendelkező patkányokkal modelleztük a perifériás idegi rendellenességeket, és a találmány szerinti elljárással előállított vegyületek hatását ezen vizsgáltuk. Kimutattuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek elősegítik a két ujj közötti távolság helyreállítódását, és a talpemelő izom normál tömegre történő visszaállítását.

A központi idegrendszer rendellenességére patkány és egér modelleket készítettünk, és a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek farmakológiai hatását ezeken vizsgáltuk. Nevezetesen patkány agy fekete dopaminsejtjeit nagyon kis mennyiségű

6-hidroxi-dopamin injektálásával kémiailag elroncsoltuk a mozgásos bizonytalanság indukálására. Két héttel később embrió agy dopamin sejteket ültettünk be a patkány agy farkos nukleuszainak megsértett oldalára, és megkíséreltük kijavítani a mozgásos zavart. Nevezetesen, a beültetés napján kezdve a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket intraperitoneálisan adagoltuk minden nap két héten keresztül, és vizsgáltuk a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek hatását a mozgásos bizonytalanság javítására és az átültetett sejtek növekedésére nézve. Úgy találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek elősegítik a mozgásos zavar javulását.

Higanymérgezéssel hoztunk létre idegkárosodást patkányokban és egerekben, és a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek erre kifejtett aktivitását vizsgáltuk. Úgy találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek elősegítik a kémiailag indukált zavar gyógyulását és a normál körülmények helyreállását, és elősegítik a tanulás és a memória helyreállását és javulását.

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek tehát alkalmasak emlősök különböző neurológiai betegségeinek, így például a perifériás és központi idegek zavarainak gyógyítására, továbbá a tanulás és a memória javítására.

Ilyen idegbetegségként említhetők különböző típusú idegbetegségek, beleértve például különböző idegzavarokat, amelyekhez mozgásos, érzékelő vagy objektív hajlító lassulás társul, továbbá alkohollal vagy gyógyszerrel indukált, diabetikus és metabolikus vagy idiopatikus perifériás idegi zavarokat, beleértve a baleseti, gyulladásos vagy immunológiai ideggyökér károsodást. Közelebbről említhetők például az arcidegbénulás, ülőideg paralízis, gerinc izom sorvadás, izom táplálási zavar, nehézkedési izomgyengeség, szklerózis multiplex, izomsorvadásos szklerózis laterális, akut többközpontú agyvelőgyulladás, Guillan-Barre-szindróma, vakcinázás utáni agy-gerincvelő gyulladás, SMON-betegség, elmebaj, Alzheimer- szindróma, koponyasérülés utáni állapot, agyi iszkémia, agyinfarktus vagy agyvérzés utókövetkezménye, agy- és gerincsérülés, reuma. Az említett példák nem korlátozó jellegűek.

A toxicitási vizsgálatokban a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek csak gyengén bizonyultak toxikusnak, és gyenge mellékhatásokkal rendelkeznek, így alkalmasak és biztonságosak gyógyszerkészítmények hatóanyagaiként.

1. kísérleti példa

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek neuroblasztóma sejtekre kifejtett hatását a következő módszerrel vizsgáltuk.

10% FCS-t tartalmazó, Dulbecco által módosított Eagle-féle tápközegen (DMEM, 100 egység/ml penicillin G nátrium és 100 mikrogram/ml sztreptomicinszulfát tartalommal) logaritmikus növekedési szakaszban levő neuro 2a egérsejtekkel egy 48 mélyedéses lapot oltottunk be úgy, hogy a sejtszám 1000/mélyedés legyen, és mélyedésenként 0,25 ml tápközegen tenyésztettük 5% szén-dioxid gázt tartalmazó levegőben 37 °C hőmérsékleten. Ezután a tápközeggel azonos mennyiségű (0,25 ml) 4%-os vizes glutáraldehid oldatot adtunk minden mélyedéshez, és a tenyésztett folyadékot szobahőmérsékleten 2 óra hosszat állni hagytuk a sejtek rögzítésére. Ezután vízzel mostuk, és 0,05%-os vizes metilén-kék-oldattal megfestettük a sejteket. Mikroszkóp alatt megszámoltuk azokat a sejteket, amelyek kinövő neuritokat tartalmaztak, azaz azokat a sejteket, amelyek legalább egy olyan neuritot tartalmaztak, amelynek a hossza legalább kétszerese a sejt nagyobbik átmérőjének, és az ilyen sejtek arányát számítottuk az összes sejtre vonatkoztatva. Egy mélyedést 5 vagy több látómezőnyi területen figyeltünk meg (a mélyedés teljes felületének legalább 2%-a) folyamatosan a mélyedés közepén elhelyezett jeltől jobbra és balra, és több mint 200 sejtet számoltunk meg. Minden vegyületet 6 különböző koncentrációban vizsgáltunk, és minden koncentrációnál 3 párhuzamos mérést végeztünk. Az eredményeket átlag ± standard deviáció formájában fejeztük ki, és a 3. táblázatban foglaltuk össze.

Egér neuroblasztóma NS-20Y sejteket hasonlóképpen tenyésztettünk egy tálban, amely poliornitinnel volt bevonva, és a vegyületek hatását vizsgáltuk. A 24 és 48 óra után kapott eredményeket a tenyésztés kezdetétől számítva, a 4. táblázatban foglaltuk össze.

HU 209 574 B

3. táblázat Hatás a neuro-2a-ra

Kísérletek száma	Vegyület	A sejt átmérőjének legalább kétszeres hosszúságú neuritokkal rendelkező sejtek száma az összes sejtre vonatkoztatva (%) (a vegyület koncentrációja)
16	812	3,5±0,5 (0,1 mmold), 3,4±0,5 (0,3 mmól/1)
816	4,7±2,1 (0,03 mmol/1), 4,0±0,3 (0,1 mmól/1)
820	8,4±1,1 (1 mmol/1), 8,8±2,3 (3 mmól/1
800	11,4±1,2 (0,3 mmol/1) 25,7±1,9 (1 mmol/1),22,3±0,7 (3 mmol/1), 16,9±0,8 (10 mmól/1)
16	828	7,3±1,6 (0,3 mmol/1), 6,l±2,0 (1 mmól/1)
izaxonin	27,0±3,8 (10 mmol/1)
kontroll	2,3±0,4
23	804	9,4±1,3 (0,3 mmol/1), 13,0+2,1 (0,5 mmól/1)
izaxonin	28,5±5,4 (10 mmol/1)
kontroll	l,4±0,2

4. táblázat

NS 20Y-sejtekkel szembeni aktivitás

Vegyület	sejtek száma, amelyekben neuritok jelentek meg, az összes sejt száma (a vegyület koncentrációja)
24 óra	48 óra
804	8/55 (0,25 mmol/1) 7/50 (0,5 mmol/1)	25/51 (0,5 mmol/1) 8/50 (0,25 mmol/1)
kontroll	4/50	0/50
820	5/53 (0,5 mmol/1) 4/50 (0,1 mmol/1)	5/55 (0,25 mmol/1) 4/50 (0,1 mmol/1)
kontroll	3/50	0/50
828	10/58 (0,3 mmol/1) 5/59 (0,5 mmol/1)	6/50 (0,3 mmol/1) 5/51 (0,5 mmol/1)
kontroll	2/50	2/51
812	11/50 (1,0 mmol/1) 9/50 (0,1 mmol/1)	9/50 (0,3 mmol/1 5/51 (0,5 mmol/1)
kontroll	2/53	2/50

2. kísérleti példa

Higanymérgezéssel indukált idegi rendellenességgel rendelkező egerek tanulásának és memóriájának javítása és regenerálódása Ί hetes, hímnemű BalbC egereket egy T-formájú labirintusban tanítottuk hetente háromszor, hogy egy kiindulási pontról egyenes irányba fussanak egy biztonságos területre. Ezután orálisan metil-merkuri-kloridot (MMC) adagoltunk 6 mg/kg/nap dózisban 6 napig. A kontrollcsoport egerei 0,1 ml/10 g/nap dózisban sóoldatot kaptak. Az MMC adagolása másnapjától kezdve a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket adagoltunk intraperitoneálisan 10 napig. A hatóanyag adagolása után a 6. napon (azaz a kísérlet kezdetétől számítva a 12. napon) a T-formájú labirintus tanulását újrakezdtük, és az egerek futási viselkedését megfigyeltük. Megszámoltuk azokat az egereket, amelyek az újrakezdés után a 10. és 11. napon (azaz a kísérlet kezdetétől számítva a 21. és 22. napon) képesek voltak kísérletezni a T-formájú labirintusban, és ezeket vettük a nevezőnek. Megszámoltuk azokat az egereket, amelyek 5 másodpercen belül 10 kísérletből legalább nyolcszor biztonságos helyre futottak, és ezeket vettük a számlálónak. A tesztállatok számának a csökkenése az MMC mérgezés következménye volt. Mértük azt az időt (másodperc), amelyre az állatoknak szükségük volt ahhoz, hogy biztonságos helyre fussanak, és számítottuk az átlag + standard hiba (SE) értéket.

Az eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek javítják az egerek tanulását és memóriáját, és ennek regenerálódását.

3. kísérleti példa

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek akut toxicitását a következő módszerrel vizsgáltuk.

Kísérleti állatként hímnemű, 5 hetes ddy törzsbeli egereket használtunk, 4-6 állatot csoportonként. A vegyületeket intraperitoneálisan adagoltuk, és a toxicitást az adagolás után 24 órával értékeltük ki. A 804. sz. vegyület LD₅₀ értéke 500 és 2000 mg/kg közötti.

A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek elősegítik az idegsejtek szaporodását és képződését, a neuritok sarjadzását, az idegek regenerálódását és a mozgásos funkciók regenerálódását patkányokban és egerekben, amelyek idegrendszeri zavarral rendelkeznek, és alkalmasak idegbetegségek, például perifériás idegek és központi idegek zavarainak és elmebetegségnek a gyógyítására. Alkalmasak érzékelő és észlelő funkciót ellátó és autonóm funkcióval rendelkező idegszövetek és sejtek neurológiai betegségeinek gyógyítására és regenerálására.

Úgy találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek biológiai aktivitása azonos vagy jobb, mint az izaxonin és mekobalamin hatása, amint ezt a kísérleti példák és a táblázatok mutatják. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek tehát nagy aktivitású és biztonságos hatóanyagok, csekély toxicitással alkalmazhatók.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás (I) általános képletű vegyületek és farmakológiailag elfogadható sóik előállítására, ahol a képletben

X jelentése (c) képletű csoport, (e) általános képletű csoport, ahol n értéke 4, 5 vagy 6, (f) általános képletű csoport, ahol

R⁵ jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport,

Y jelentése -CH₂R⁹ általános képletű csoport, ahol R⁹ jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, 1-7 szénatomos alkoxicsoport, 1-7 szénato7

HU 209 574 Β mos alkil-tio-csoport vagy di-(l— 7 szénatomos alkil)-amino-csoport;

Z jelentése (1-7 szénatomos alkoxi)-karbonil-csoport, azzal jellemezve, hogy

a) egy (IV) általános képletű vegyületet, ahol X 5 jelentése a fend, egy (V) általános képletű vegyülettel reagáltatunk, ahol R⁹ jelentése a fenti és R¹⁰ jelentése

1-7 szénatomos alkilcsoport, vagy b) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R⁹ hidrogénatomtól és 1-6 szénatomos alkilcsoporttól eltérő, egy 10 (VI) általános képletű vegyületet, ahol X jelentése a fenti és R¹⁰ jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport, egy megfelelő R⁹H általános képletű vegyülettel - ahol R⁹jelentése az itt megadott - reagáltatunk, és kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületeket farmakológiailag elfogadható sóvá alakítjuk.
2. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületet, ahol a képletben X, Y és Zjelentése az 1. igénypont szerinti, vagy farmakológiailag elfogadható sóját a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító- és/vagy egyéb segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.