HU205625B - Process for amperometric quantative determining 1,4-dihydro-nicotinamide adenine dinucleotide /nadh/ or phosphorilised 1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide /nadph/ in solution and for determining analysing material of enzyme-electrode in one sample - Google Patents
Process for amperometric quantative determining 1,4-dihydro-nicotinamide adenine dinucleotide /nadh/ or phosphorilised 1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide /nadph/ in solution and for determining analysing material of enzyme-electrode in one sample Download PDFInfo
- Publication number
- HU205625B HU205625B HU883273A HU327388A HU205625B HU 205625 B HU205625 B HU 205625B HU 883273 A HU883273 A HU 883273A HU 327388 A HU327388 A HU 327388A HU 205625 B HU205625 B HU 205625B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- electrode
- enzyme
- nadh
- resin
- carbon
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/40—Apparatus specially designed for the use of free, immobilised, or carrier-bound enzymes, e.g. apparatus containing a fluidised bed of immobilised enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
- G01N33/5438—Electrodes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
- C12Q1/005—Enzyme electrodes involving specific analytes or enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3271—Amperometric enzyme electrodes for analytes in body fluids, e.g. glucose in blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/817—Enzyme or microbe electrode
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pathology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Electrodes For Compound Or Non-Metal Manufacture (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás 1,4-dihidronikotin-amidadenin-dinukleotid (NADH) vagy foszforilezett 1,4-dihidronikotinamid-adenin-dinukleotid (NADPH) mennyiségi meghatározására oldatban.
A NADH és oxidált társa, a NAD, kofaktorok számos enzimkatalizált redox reakcióban. Egyes reakciókban egy enzim szubsztrátum NAD kofaktor és egy megfelelő oxidáz vagy dehidrogenáz jelenlétében oxidálódik, NADH-t alakítva ki az oldatban; más reakciókban egy enzim szubsztrátum NADH kofaktor jelenlétében redukálódik, NAD-ot alakítva ki az oldatban. Több esetben a NADH-koncentráció meghatározását alkalmazhatjuk a szubsztrátum koncentráció indikátoraként, vagy egy NADH-t vagy NAD-ot foglalkoztató reakció lefolyásának követésére.
Ismeretes, hogy a NADH-koncentrációt oldatban mérhetjük kolorimetriásan, de a kolorimetriás módszerek általában hátrányosak. Sokkal előnyösebbek az elektrokémiai módszerek, de azok a kísérletek, amelyek a NADH elektrokémiai meghatározására irányultak, eddig nem jártak túl nagy mértékű sikerrel. Ismeretes pl., hogy a NADH-koncentrációt olyan amperometriás vizsgálattal határozhatjuk meg, amelyben a NAD rögzített, ellenőrzött feszültségű elektródnál oxidálódik, és a megfelelő körülmények között áthaladó áramerősség arányos a NADH-koncentrációval. A NADH elektrokémiai oxidációja sajnos nagy túlfeszültséget igényel, és a NADH általában nem oxidálódik teljesen az elektrődfelületen; így több esetben az elektród felülete gyorsan beszennyeződik egy olyan felületi film képződésével, amely hat az elektrokémiai válasz méretére és sebességére (Moiroux I., és Elving P. J.: J. Amer. Chem. Soc. 102, 6533-6538 [1980]; és Johnson D. G., Ryan M. D. és Wilson G. S.: Analyt. Chem. 58, 42R [1986]).
Számos kísérletet végeztek arra, hogy elhárítsák ezeket a problémákat. így pl. javasolták, hogy alkalmazzanak módosított, vezető szerves sók rétegével borított elektródokat (Kulys J. J.: Biosensors, 2, 3-13 [1986]). Egy másik módszerként azt javasolták, hogy alkalmazzunk redox közvetítőt, pl. Meldola kéket, hogy az oxidációs reakciót hatékonyabban rögzítsék az elektródhoz és/vagy csökkentsék az oxidációs potenciált (Gorton L. és munkatársai: J. Electroanalyt. Chem. 161, 103-120 [1984]). Egy másik javaslatban a redox közvetítőket szabad oldatban alkalmazzák. így pl. fenazin-metoszulfátot alkalmaztak módosított pirolitikus grafit elektródokkal (Kimura Y. és Nihi K.: Analytical Sciences, 1,2741 [1985]). További kísérleteket végeztek platina-, grafit- és üvegszerű szénelektródokkal, de eddig a NADH meghatározásához még nem fejlesztettek ki olyan eljárást, amely mind elég gyors, mind elég reprodukálható lenne.
A jelen találmány szerint arra jöttünk rá, hogy a NADH-t teljesen oxidálni lehet, jó amperometriás reakcióval, akár olyan oldatban, amely csak NADH-t tartalmaz, akár olyan oldatban, amely tartalmaz enzimet, enzimszubsztrátumot és NADH-t, olyan típusú aktivált szénelektródot alkalmazva, amelyet a tüzelőanyag cella technológiában alkalmaznak, és amely nemesfém heterogén, gyantához kötött rétegéből áll, előnyösen platinizált, vagy palladizált szén- vagy grafitrészecskéket (amely kifejezések, ahogyan itt használjuk, olyan anyagokat foglalnak magukban, amelyek platina- és/vagy palládium-oxidot tartalmaznak vagy ezekkel vannak kezelve, vagy platina vagy palládium fémet tartalmaznak vagy ezekkel vannak kezelve) tartalmazva természetes vagy szintetikus gyanta kötőanyaghoz kötve, előnyösen szintetikus, hidrofób kötőanyagokhoz, előnyösen fluorozott szénvegyületekhez, legelőnyösebben polietiléntetrafluoretilénhez kötve. Előnyösen olyan platinizált vagy palladizált aktivált szénelektródot alkalmazunk, amelyben szén- vagy grafitrészecskék vannak platinizálva vagy palladizálva; ezeket úgy állítjuk elő, hogy kolloidális platina vagy palládium fémet, vagy platina- vagy palládium-oxidot abszorbeálunk vagy viszünk fel a porszerű részecskékre a megkötés előtt; az így létrejött elektród egy heterógén, porózus aktivált porréteget tartalmaz kolloidális platinával vagy palládiummal, vagy ezek megfelelő oxidjaival, amelyek lényegében egyenletesen oszlanak el a réteg mentén. A platinizált vagy palladizált aktivált szén- vagy grafítrészecskék gyantával kötött rétege lehet öntartó, de általában meg van támasztva valamilyen támasztőanyaggal; ez előnyösen elektromosan vezető szén-papír, amelyhez a platinizált vagy palladizált szén- vagy grafitrészecskék kötődnek felületi rétegként, vagy ezek a részecskék szénrost hálóba vannak impregnálva. Bár a platinizált és palladizált anyagok az előnyösek, más nemesfémet tartalmazó aktivált szénelektródokat, pl. aranyat tartalmazó elektródokat is lehet alkalmazni.
A jelen bejelentésben a „platinizált” és „palladizált” kifejezés magában foglalja a megfelelő oxidokat is, hacsak a szövegösszefüggés nem utal másra.
A jelen bejelentésben az „aktivált” szén, „aktivált” grafit stb. kifejezések nagymértékben porózus, nagy felületű szén- és grafit anyagokra utal, amelyek felület/tömeg hányadosa 50 m2/g vagy nagyobb, általánosabban 200 m2/g-nál nagyobb, pl. 200 és 600 m2/g között van, vagy még ennél is nagyobb. Ilyen nagy felület/tömeg hányadosa anyagokat kaphatunk pl. szén- vagy grafitpor hőkezelésével gőzben vagy CO2-ben, így kapunk olyan nagy felület/tömeg hányadosú terméket, amelyet a szakterületen „aktivált szén”-nek neveznek.
A már említett stabilitáson, reprodukálhatóságon és gyors válaszidőn kívül a jelen anyagoknak további sajátos előnye az, hogy ezeket viszonylag kis potenciáloknál lehet alkalmazni a NADH-koncentrációk követésére, pl. 0-600 mV tartományban, sőt még negatív potenciáloknál is az Ag/AgCl referenciaelektródra vonatkoztatva, míg 750 mV vagy ennél ís több szükséges a NADH-koncentrációk követéséhez, ha üvegszerűszén- vagy grafitelektródokat alkalmazunk. A jelen elektródok tehát viszonylag kis háttér-áramerősséggel, így megnövekedett érzékenységgel jellemezhetők. Ezek az elektródok jellemezhetők alacsony szintű válaszukkal is a lehetséges zavaró anyagféleségekre, pl. húgysavra, amely gyakran jelen van biológiai vagy klinikai mintákban.
HU 205 625 Β
A jelen találmány szerinti eljárásban alkalmazott előnyös elektródszubsztrátumok valójában kereskedelmi forgalomban is kaphatók; ezeket pl. a Prototech Company (Newton Highlands, Massachussets) forgalmazza, és ezeket eddig elektrokatalitikus gázdiffúziós 5 elektródokként alkalmazták fűtőcellákban. Az ilyen anyagok előállítását részletesen leírják a 4044193;
4166 1 43 ; 4293396; és 4478696 lajstromszámú US szabadalmi leírások; ezeket teljes egészükben referenciaként építjük be a jelen leírásba. Részletesebben is- 10 mertetve 15-25 Angström (1,5-2,5 nm) mérettartományban levő részecskeméretű kolloid platina van adszorbeálva a porított szén felületére (amelynek szemcsemérete 50-300 Angström, vagyis 5-30 nm tartományban van); ezt pl. úgy állítják elő, hogy platina- 15 szólt képeznek in situ porított szén jelenlétében, amely úgy működik, mint magképző szer a szól részére. A platinizált szénrészecskéket azután rápréselik egy elektromosan vezető támasztószerkezetre, pl. elektromosan vezető szén-papírra, szintetikusan gyanta kötő- 20 anyagot, előnyösen valamely fluorozott szénhidrogén gyantát, elsősorban politetrafluoretilént alkalmazva.
Egy másik módszer szerint hasonló részecskemérettartományban levő platina- vagy palládium-oxidot alkalmazhatnak a kolloid platina helyett, amelyet hason- 25 lóképpen adszorbeálnak a szén- vagy grafitrészecskékre.
Egy másik módszer szerint, amelyet a 4293396 lajstromszámú US szabadalmi leírás ismertet, a platinizált szénrészecskéket egy előre kialakított, porózus 30 szén szövedékbe impregnálják és kötik a megfelelő fluorozott szénhidrogén gyantát, előnyösen politetrafluoretilént alkalmazva. Meg lehet érteni azonban, hogy a jelen találmány nem korlátozódik a Prototech anyagok alkalmazására, hanem körülöleli a hasonló 35 más olyan szubsztrátumanyagokat is, amelyek platinizált vagy palladizált, vagy más nemesfémet tartalmazó aktivált szén- vagy grafitrészecskék porózus, gyantával kötött rétegét tartalmazzák.
Bár a platinizált vagy palladizált szén- vagy grafitré- 40 szecskák kötésére alkalmazott előnyös kötő gyanták a hidrofób, fluorozott szénhidrogén gyanták, előnyösen a politetrafluoretilén, más alkalmas természetes vagy szintetikus kötő gyantákat is alkalmazhatunk, pl. polietll-metakrilátot, polivinilacetátot, polivinilklorldot, po- 45 likarbonátokat, poli-(4-metil-pentén- l)-poliizoprént, polikloroprént, poli (l,3-butadién)-t, szilikongumit és zselatint.
A kötőanyag és a nemesfém tartalmú aktivált szénvagy grafitrészecskék aránya tömegalapon a 10-75% kö- 50 tőanyag és a 90-25% aktivált szén vagy grafit, előnyösen a 20-50% kötőanyag és ennek megfelelően 80-50% aktiváltszén vagy grafit közti tartományban lehet. A nemesfém, pl. platina vagy palládium, vagy megfelelő oxidjaik, vagy arany terhelése az aktivált szén- vagy grafitrészecs- 55 kéken az 1 és 10% közti tartományban lehet az aktivált szén vagy grafit és a kötőanyag teljes tömegére vonatkoztatva; ez az érték előnyösen 2 és 8%, legelőnyösebben 4 és 6% között van.
A gyanta/aktivált, platinizált vagy palladizált szén- 60 pornak a megfelelő támasztó anyagra való közvetlenül rápréselésre, pl. elektromosan vezető szén-papír felületére való közvetlen rápréselés helyett a kötőanyag és a platinizált vagy palladizált szénpor keverékét megfelelő közömbös közegben szuszpendálhatjuk, és rávihetjük a szubsztrátum felületére szitanyomásos technikával, ezáltal a gyantával kötött, platinizált vagy palladizált szénrészecskék vékony filmjét biztosítva a szubsztrátum felületén.
A NADH oldatban való közvetlen mennyiségi meghatározását illetően a jelen találmány szerinti elektródokat és eljárást lehet alkalmazni az in situ keletkezett vagy elfogyasztott NADH mennyiségi meghatározásához, pl. egy enzim és kofaktora közti enzimes reakció esetében. Az ilyen reakciók között találjuk pl. a piruvát átalakítását laktáttá laktát-dehidrogenáz segítségével, azaz a laktát-dehidrogenáz laktát + piruvát + NADH NAD reakciót, amelyet a NADH-koncentráció csökkentésével lehet követni; vagy a glükóz oxidációját glukolaktonná az alábbi reakció segítségével:
„ glükóz-dehidrogenáz β-D-glükóz + NAD ---->D-glukonolakton + NADH, amely reakciót a NADH-koncentráció növekedésével követhetjük, ahogyan a reakció előrehalad. Ebből a célból a jelen találmány szerint alkalmazott, aktivált, platinizált vagy palladizált szénelektródok rendelkezhetnek valamilyen enzimmel is, pl. laktát-dehidrogenáz vagy glükóz-dehidrogenáz enzimmel, amely be van építve vagy immobilizálva van a gyantával kötött szénrétegbe a szakterületen ismert bármely enzim-immobilizációs technikával, pl. azzal, amelyre nézve kitanítást ad a 0247 850 l.-számú EP szabadalmi közzétételi irat.
Ennek az elgondolásnak egy további módosításában a jelen találmány magában foglal egy felszerelhető, egyszer alkalmazandó enzim-elektródot, és egy olyan eljárást, amelyben az enzim-elektród maga nem csupán az immobilizált enzimet tartalmazza, hanem a megfelelő kofaktort is az enzim számára, vagy NAD-ot, vagy NADH-t, mivel ebben az esetben az enzim-elektródot, amely képes amperometrikusan reagálni az enzim aktivitására, amikor a NADH-koncentrációban történő változással mérjük, alkalmazhatjuk a megfelelő szubsztrátumot tartalmazó mintával, pl. klinikai vagy biológiai mintával érintkeztetve, függetlenül attól, hogy a minta tartalmazza-e a szükséges kofaktort vagy sem, mivel az elektród maga szolgáltatja a szükséges kofaktort. A NAD vagy NADH kofaktort bármilyen alkalmas módon be lehet építeni az elektródba, pl. vagy NAD, vagy NADH megfelelő oldatával impregnálva és szárítva.
Amint a szakterületen jól ismert, az elektród anyagának felülete védve lehet valamely porózus membránnal, pl. 0,03 pm pórusméretű polikarbonát filmmel, de lehet védelem nélkül is. Más alkalmas membrán-anyagot is alkalmazhatunk.
HU 205 625 Β
A találmány további leírásában többször hivatkozunk az ábrákra is, ezek az alábbiak.
Az 1. ábra egy módosított Ránk Brothers elektrokémiai cella vázlatos keresztmetszete, amelyet a jelen találmány szerint az aktivált szénelektródok NADHválaszának vizsgálatára alkalmazunk.
A 2. ábra a NADH cellához való egymás utáni hozzáadásának elektródreakcióját mutatja be, platinizált karbonpapír (PCP) elektródot alkalmazva a jelen találmány szerint.
A 3. ábra a PCP elektród reakcióját mutatja be a NADH-ra különböző egyensúlyban tartott potenciáloknál az Ag/AgCl referenciaelektródokkal szemben.
A 4. ábra az elektród reakcióját mutatja be piroszőlősavban a laktát-dehidrogenáz (ADH) jelenlétében.
Az 5. ábra az elektród reakcióját mutatja be acetaldehidre alkohol-dehidrogenáz (ADH) jelenlétében.
A 6. ábra egy másik olyan görbe, amely a platinizált karbonpapír elektródok reakcióját mutatja be a NADHkoncentrációra a találmány szerint.
A 7. ábra egy másik kísérlet eredményeit mutatja be, az elektród reakcióját jelezve piroszőlősavra.
A 8. ábra az elektród reakcióját mutatja be a glükóz enzimes oxidációjával in situ termelt NADH-ra, glükóz-dehidregenázt alkalmazva.
A 9. ábra hasonló válaszgörbét mutat be platina-oxidot tartalmazó elektródnál.
A 10. ábra a válaszgörbét mutatja be palladizált szénelektródnál.
Az alábbi példákban különböző platinizált vagy palladizált karbonpapír (PCP) elektródokat vizsgálunk NADH-ra adott reakciójukra módosított Ránk oxigén elektród rendszerben (Ránk Brothers, Bottisham, Cambridge), amelyet a mellékelt 1. ábrában be is mutatunk. A módosított Ránk cella rendszer magában foglal egy kétrészes elektrokémiai (3) cellát, amelynek van egy (1) alapja és egy (2) gyűrű alakú köpenye, amely egy h vízkamrát vesz körül, amelyen keresztül víz cirkulálhat, hogy a (3) cella hőmérsékletét szabályozza, a két rész egy rögzített csavarmenetes peremmel van összekapcsolva. Az (1) alapban központilag van elhelyezve egy d platina érintkező gomb, amelyre a papír-elektróda anyaga a vizsgálati lemezre van elhelyezve, és amely a platina érintkezésnél e és f gumi 0-tömítő gyűrűkkel van rögzítve, amikor a (3) cella két része össze van kapcsolva.
A (3) cella csúcsába iktatva, amely természetesen tartalmazza a vizsgálandó NADH-tartalmú oldatot, van egy (4) dugó egy g beállítható peremmel megtámasztva, amelyben egy platina számláló b ellenelektród és egy Ag/AgCl referencia c elektród van. A vizsgálatot különböző potenciáloknál kiegyensúlyozott a munkaelektródokkal hajtjuk végre 100-600 mV tartományban az Ag/AgCl c elektródhoz viszonyítva. Más vizsgálatokat hajtunk végre egy kételektródás cellában, amelyet az 0247850 l.-számú EP szabadalmi közzétételi irat 16. ábrája ismertet, és amelyet itt részletesen ismertetünk. A kételektródás cellás kiviteli módban az elektród anyagot egy d platina érintkező gombbal szemben tartjuk a (3) cella (1) alapjában, egy polikarbonát (0,03 pm pórusméret) membrán segítségével, amelyhez a NADH-t tartalmazó mintát felvisszük. A platina érintkezőt körülvéve, a (3) cella (1) alapjában, de attól elkülönítve egy szigetelő karmantyúval van egy gyűrű alakú Ag/AgCl referencia c elektród. Az elektród-cella különböző potenciálokon van polarizálva az Ag/AgCl c elektródhoz viszonyítva és a kimenő áramerősséget különböző potenciáloknál mérjük.
A találmányt az alábbi példák mutatják be, amelyekben az elektród-anyag platinizált karbonpapír (PCP), úgy, ahogyan a Prototech Company (Newton Highlands, Massachussets) szolgáltatja, amelyeket gázdiffúziós elektródként fejlesztett ki. A PCP elektród anyagot a 4044193 lajstromszámú US szabadalmi leírás kitanítása szerint készítjük, először platinizálva a szénporrészecskéket (Vulcan XC-72, névleges részecskeméret 30 nm) egy platina szulfit-sav komplex oxidatív bomlásával szénpor jelenlétében, H2O2-t alkalmazva, ilyen módon helyezve el a kolloidális platinát (részecskeméret: 1,5-2,5 nm) a szénporrészecskék felületén. A platinizálást követően a platinizált szénport rápréseljük és kötjük egy kereskedelemben kapható, grafitozott, elektromosan vezető karbonpapír felületére, mintegy 50 tömeg% (a platinizált szénporra alapozva) politetrafluoretilént, mint kötőanyagot alkalmazva. Az így létrejött platinizált karbonpapír elektród anyag vastagsága a 0,1 és 0,5 mm közti nagyságrendben van, és a platina-terhelés 0,24 mg.cm'2. Az alábbi vizsgálatok céljára (1-3. példák) a karbonpapír elektród anyagot 5 mm átmérőjű korongokra vágjuk és az 1. ábrában bemutatott elektrokémiai (3) cella rendszer platinizált a munkaelektródjaira szereljük, amint ezt a mellékelt rajzok közül az 1. ábra bemutatja. A mintának kitett karbonpapír elektród tényleges területe minden esetben 0,16 cm2.
Bár a találmányt a következőkben a NADH oldatban való meghatározásával kapcsolatban írjuk le, a foszforilezett 1,4-dihidronikotinamid-adenin-dinukleotid (NADPH), vagyis a foszforilezett NADH is meghatározható pontosan ugyanezzel a technikával. Sőt, mivel a NADPH (vagy NADP) egy sor enzim-katalizált reakcióban szerepel kofaktorként, a jelen találmány szerinti technika lehetővé teszi az ilyen típusú reakciók követését is pontosan ugyanilyen úton, azaz amperometrikusan meghatározva a NADPH-nak vagy fogyasztását, vagy keletkezését oldatban. így az összes utalás, amely NADH-ra vagy NAD-ra vonatkozik, magában foglalja mindezek foszforilezett származékait is, hacsak a szöveg ezt másképpen nem jelzi.
A kapott eredmények az alábbiak:
1. példa
NADH elektrokémiai oxidációja platinizált karbanpapíron (PLP)
Standard potenciosztatikus technikát alkalmazva 2 mmől/l-es NADH-oldatot (trisz.HCl pufferben, pH 9,0) adunk a cellához, amely 2 ml 0,1 mól/l-es foszfát/1 mól/l KC1 pufferoldatot tartalmaz. A platinizált karbonpapír elektródot különböző potenciáloknál kiegyensúlyozzuk az Ag/AgCl referencia-elektródhoz viszonyít4
HU 205 625 Β va. Stabil áram-szinteket alkalmazunk (2. ábra), amelyek arányosak a NADH koncentrációjával (1. táblázat és 3. ábra).
1. táblázat
Platinizált karbonpapír áram-válasza NADH-ra különböző kiegyensúlyozott feszültségeknél
| NADH-kon- centráció | Áram-kimenet A-ban | ||
| 100 mV-nál | 300 mV-nál | 600 mV-nál | |
| 0,95 | 7 | 15 | 28 |
| 1,8 | 13 | 25 | 53 |
| 2,7 | - | 32 | 73 |
| 4,0 | 38 | 42 | 113 |
| 6,6 | 52 | 183 | |
| 10,0 | 60 | - | - |
2. példa
A NADH-elektród rendszer válasza piroszölövasra laktát-dehidrogenáz (LDH) jelenlétében Hasonló cellát szerelünk fel, amely 12,5 mmól/l
NADH-t és 10 mmól/l piroszőlősavat tartalmaz 2 ml foszfát/KCl pufferban (pH 7) 25 °C hőmérsékleten. A munka-, számláló- és referenciaelektródok azonosak az
1. példában leírtakkal. A munkaelektródot 400 mV-nál , egyensúlyozzuk ki, ez 170 μΑ-nál ad állandó jelet a fenti háttérnél. 120 egység LDH hozzáadásánál (XV. szarvasmarhaszív típusú) az áramerősség csökken 92 μΑ/perc kiindulási sebességgel (4. ábra), azt mutatva, hogy a piruvát enzimes átalakulása laktáttá hatásosan követhető az elektródhoz elektrokémiailag kapcsolt NADH segítségével.
3. példa
A NADH-elektród rendszer válasza acetaldehidre alkohol-dehldrogenáz (ADH) jelenlétében PCP elektródon
A cellát úgy szereljük fel, hogy 3 mmól/l NADH-t és 35 mmól/l acetaldehídet tartalmazzon 2 ml trisz.HCl pufferban (pH 9) 25 °C hőmérsékleten. A munka-, számláló- és referenciaelektródok azonosak az 1. példában leírtakkal. A munkaelektródot 400 mV-nél egyensúlyozzuk ki, ez 40 μΑ-nél ad állandó jelet a fenti háttérnél. 2 egység ADH (lómájeredetű) hozzáadására az áramerősség csökken 130 μΑ/perc kiindulási sebességgel (5. ábra), azt mutatva, hogy az acetaldehid enzimes konverziója etanollá hatékonyan követhető az elektródhoz elektrokémiailag kötött NADH segítségével.
A további példákban vagy kételektródos cellás, vagy háromelektródos cellás összeállítást alkalmazunk. A háromelektródos cella az, amelyet korábban leírtunk és az 1. ábrában ábrázoltunk. A kételektródos cella az, amely azonos konstrukciójú a 0 247 850 l.-számú EP szabadalmi közzétételi irat 16. ábrájában ábrázolt konstrukcióval, ezt a leírást referenciaként építjük be a jelen bejelentésbe, ahonnan további részletek ismerhetők meg.
4. példa (6. ábra)
Az adatokat a kételektródos, 200 mV-nál polarizált összeállítást alkalmazva szerkesztjük meg. pH 7,4 puffért alkalmazunk, amely 16 mmól/l NaH2PO4-et, 53 mmól/l Na2HPO4-et, 52 mmól/l NaCl-t és 1,5 mmól/l etilén-diamin-tetraecetsavat tartalmaz. Miután ebben a pufferban stabil háttér-áramerősséget értünk el, a puffért letöröljük a membránról és a NADH azonos pufferban levő mintájával helyettesítjük. A csúcsáramerősséget rögzítjük. A 6. ábra mutatja be a platinizált karbonpapír elektródból jövő válaszokat; ez a Prototech Companytól beszerezhető kereskedelmi termék, amely gyantával kötött, platinizált szénrészecskéket tartalmaz egy elektromosan vezetőképes karbonpapír lapon elhelyezve, ahol a gyantával kötött platinizált szénréteg tömegalapon számítva 50% politetrafluoretilént, 45% finoman eloszlatott szenet (Vulcan XC72) és 5% kolloid, a szénporra előadszorbeált platinát tartalmaz. Abból a célból, hogy a háttéráramot minimálisra csökkentsük, 5 mg/ml fehérje-oldatot (glükóz-oxidáz) adszorbeálunk az elektródra egy éjszakán át a NADH-mérések előtt. Meg kell jegyeznünk, hogy a glükóz-oxidáz az alkalmas fehérjékre csupán egy kiemelt példa.
5. példa (7. ábra)
Ez a példa a találmány alkalmazhatóságát mutatja be NADH-t hasznosító enzimek szubsztrátumainak mérésére. Háromelektródos cellát alkalmazunk, amint korábban leírtuk, de felszereljük mágneses keverőbottal. A munkaelektród platinizált karbonpapír, akárcsak a 4. példában, de L-laktát-dehidrogenáz (szarvasmarhaszív eredetű enzim, EC 1.1.1.27) van immobilizálva az elektródra karbodiimid kapcsolással (lásd a 0247850 l.-számú EP szabadalmi közzétételi iratot), 1 mg/ml laktát-dehidrogenáz oldatot (Sigma Chemicals, XV. típus, 500 egység/mg fehérje) alkalmazva. A cella 12,5 mmól/l NADH-t tartalmaz kiinduláskor, 0,1 mől/1 foszfátot és 1 mól/1 KCl-t tartalmazó pufferban (pH 7). A polarizáló feszültség 350 mV. A berendezést arra alkalmazhatjuk, hogy kövesse a NADH fogyását, amikor piroszőlősav alikvotjait adjuk a sejthez, amint ezt a nevezett ábra bemutatja.
6. példa (8. ábra)
Az 5. példát ismételjük meg azzal a kivétellel, hogy az immobilizált laktát-dehidrogenázt glükóz-dehidrogenázzal helyettesítjük (Bacillus sp. eredetű, a Sigma terméke, 100-300 egység/mg fehérje), amely az elektród felületére hasonló módon van immobilizálva. Míg a laktát dehidrogenázt a piruvát mérésére alkalmazzuk a NADH fogyasztását követve:
piruvát + NADH-► laktát + NAD, addig a glükóz-dehidrogenázt glükóz fogyásának mérésére alkalmazzuk a NADH-termelést követve:
β-D-glükóz + NADH-► D-glükonolakton + NADH.
A cella ph 7-es keveréket tartalmaz, amelynek öszszetétele 0,1 mól/1 foszfát, 0,1 mól/1 KC1 és 2,4 mmól/l NAD.
HU 205 625 Β
7. példa (9. ábra)
A 4. példában körvonalazott eljárást követve a platina-oxid tartalmú szénelektród kimenő áramerősségét mérjük 200 mV-nál (Ag/AgCl referencia-elektróddal szemben) kételektródos cellában különböző NADHkoncentrációknál; ez lényegében lineáris választ ad, amely a platinizált karbonpapír elektródok válaszával ekvivalens. Ebben az esetben az elektród-anyag gyantával (politetrafluoretilén) kötött szénrészecskék (Vulcan XC72) rétegéből áll, amely 5 tömeg% (a gyantával kötött részecskék összes tömegére alapozva) platinaoxidot tartalmaz a szénporrészecskékre előadszorbeálva, valamint 50 tömeg% kötőanyagot és 45 tömeg% szenet, és elektromosan vezető Toray márkájú szénpapír felületére van kötve.
8. példa (10. ábra)
Újból csak a 4. példában körvonalazott eljárást követve palladizált karbonpapír elektród kimenő áramerősségét mérjük 200 mV-nál (Ag/AgCl-lel szemben mérve), a kételektródos felállást követve különböző NADH-koncentrációknál. A reakció (10. ábra) szintén lényegében lineáris. Az elektródanyag az, amelyet a 7. ábrában leírtunk, kivéve, hogy a gyantával kötött szénrészecskék 5 tömeg% előadszorbeált, finoman eloszlatott palládiumot tartalmaznak.
A fenti példák az elektródanyagok alkalmazását mutatják be a NADH gyors és reprodukálható oxidálásának kialakítására. Ezek a reakciók határozott ellentétben vannak azokkal a reakciókkal, amelyet a legtöbb más elektródanyag ad, amint ezt összehasonlító kísérletek demonstrálják platina, üvegszerű szén vagy grafit elektródanyagokat alkalmazva, amely esetben a reakció (ritka kivételektől eltekintve) általában lassú, viszonylag kevéssé érzékeny és sokkal gyengébben reprodukálható. A platinizált vagy palladizált szénelektródok hatékonysága, amelyeket alkalmazunk, úgy tűnik, sajátos heterogén szerkezetük következménye, valamint biológiai molekulákkal, pl. a NADH-val és enzimekkel való összeférhetőségük követekezménye. A NADH oxidációja hatékonyan végbemegy enzimek és szubsztrátumok jelenlétében is, és alkalmazható alapként gyors, NADH-val kapcsolt enzimes mérésekhez. A piruvát (LDH-t alkalmazó) és az acetaldehid (ADH-t alkalmazó) hatékony mérésének lehetőségei világosak a fenti példákból, de nagyszámú hasonló mérés is hozzáférhető ezzel a módszerrel, más enzimeket és szubsztrátumokat alkalmazva.
Claims (14)
1. Eljárás 1,4-dihidronikotinamid-adenin-dinukleotid (NADH) vagy foszforilezett 1,4-dihidronikotinamidadenin-dinukleotid (NADA) vagy foszforilezett 1,4-dihidronikotinamid-ademin-dinukleotid (NADPH) amperometriás mennyiségi meghatározására oldatban, amelynek során a mintát bevisszük egy elektrokémiai cellába (3), amely a vonatkozási elektródhoz (c) képest rögzített feszültségre beállított munkaelektródból (a) és egy - a mintával érintkezésben álló - ellenelektródból (b) áll, és mérjük a keletkezett áramot, azzal jellemezve, hogy munkaelektródként (a) egy préselt szénelektródot alkalmazunk, amely felületükön adszorbeálva finomeloszlású nemesfém vagy nemesfém-oxid-részecskéket tartalmazó finomeloszlású grafit- vagy szénrészecskékből álló porózus, heterogén réteget tartalmaz, amely grafit- vagy szénrészecskéket természetes vagy szintetikus gyanta kötőanyaggal kötjük össze a porózus szerkezet kialakítására.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyanta kötőanyagként fluorozott szénhidrogén alapú gyantát, előnyösen politetrafluor-etilént alkalmazunk.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyantával kötött, nemesfém- vagy nemesfém-oxid-tartalmú szén- vagy grafítrészecskéket gyantával kötött felületi rétegként alakítjuk ki egy alapul szolgáló támasztóanyagon.
4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alapul szolgáló támasztóanyagként elektromosan vezető anyagot, előnyösen egy elektromosan vezető karbonpapír réteget alkalmazunk.
5. Az 1-4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan munkaelektródot (a) alkalmazunk, amely az 5-30 nm iészecskenagyság-tartományba eső grafit- vagy szénrészecskékből álló porózus, szintetikus, fluorozott szénhidrogén gyantával összekötött rétegből áll, mimeliett az összekötést megelőzően a grafit- vagy szénrészecskék felületére adszorpcióval finomeloszlású kolloid platina- vagy palládiumrészecskéket viszünk fel.
6. Az 1-5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy azt NADH vagy NADPH keletkezésének vagy fogyásának megfigyelésére alkalmazzuk olyan enzimes reakcióban, amely egy enzim és szubsztrátuma között megy végbe és amelyben kofaktorként vagy NAD, vagy NADP vesz részt.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan nemesfém tartalmú munkaelektródot (a) alkalmazunk, amelybe az említett enzim be van építve vagy amelyre az említett enzim rögzítve van, és amelyben az elektródot arra alkalmazzuk, hogy az enzim aktivitását a NADH vagy NADPH-koncentráció változása révén amikor is az elektród érintkezésben van az enzim szubsztrátumát tartalmazó mintával, és az enzim és szubsztrátuma közti reakcióban kofaktorként szereplő NAD vagy NADP jelenlétében kövessük.
8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan nemesfém tartalmú munkaelektródot (a) alkalmazunk, amelybe az említett enzim az említett kofaktorral együtt be van építve, vagy amelyre az említett enzim az említett kofaktorral együtt rögzítve van, és ilyen módon a kofaktort az elektród útján visszük be a mintába,
9. Az 1-8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mintaként egy klinikai mintát alkalmazunk.
10. Enzim-elektród elemezendő anyagnak egy mintában való meghatározása, amely elemezendő anyag olyan anyag, amely képes enzimes reakcióba lépni egy enzim6
HU 205 625 Β mel kofaktorként 1,4-dihidronikotinamid-adenin-dinukleotid (NADH), oxidált NADH (NAD), foszforilezett 1,4-dihidronikotinamid-adenin-dinukleotid (NADH) vagy oxidált NAPDH (NADP) jelenlétében, mimellett az enzim-elektród mind az említett enzimet, mind az említett kofaktort egy elektromosan vezető hordozó felületén rögzítve vagy előadszorbeáltatva tartalmazza és képes amperometrikus választ adni a mintával érintkezve az abban jelen levő enzim és enzim-szubsztrát között végbemenő reakcióra, azzal jellemezve, hogy az elektromosan vezető alapul szolgáló támasztóanyag egy préselt, porózus réteg, amely finomeloszlású grafit vagy aktivált szénrészecskékből áll és ezek felületükön adszorbeálva finomeloszlású nemesfém vagy nemesfém-oxid-részecskéket tartalmaznak és e grafit- vagy szénrészecskéket természetes vagy szintetikus gyanta kötőanyag köti össze a porózus réteg kialakítására.
11. A 10. igénypont szerinti enzim-elektród, azzal jellemezve, hogy kötőanyagként fluorozott szénhidrogén gyantát, előnyösen poli-tetrafluor-etilént tartalmaz.
12. A 10. vagy 11. igénypont szerinti enzim-elektród, azzal jellemezve, hogy a gyantával összekötött, nemesfémet vagy nemesfém-oxidot tartalmazó szén- vagy grafitrészecskéket gyantával megkötött rétegként alakítjuk ki egy alapul szolgáló támasztóanyag felületén.
13. A 12. igénypont szerinti enzim-elektród, azzal jellemezve, hogy az alapul szolgáló támasztóanyag elektromos vezetőképességgel rendelkezik, előnyösen elektromosan vezető karbonpapír réteg.
14. A10-13. igénypont szerinti enzim-elektród, azzal jellemezve, hogy ez egy, az 5-30 nm tartományba eső részecskenagyságú grafit- vagy szénrészecskékből álló porózus, gyantával megkötött réteg, a részecskéket szintetikus, fluorozott szénhidrogén gyanta köti össze, és ezek a részecskék finomeloszlású kolloid platina- vagy palládiumrészecskéket tartalmaznak, amelyeket a gyantával való megkötést megelőzően adszorbeáltatunk a grafit- vagy szénrészecskék felületére.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB878710472A GB8710472D0 (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Amperometric method |
| PCT/GB1988/000338 WO1988008447A1 (en) | 1987-05-01 | 1988-04-29 | Amperometric method for the quantitative determination of 1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide (nadh) in solution |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT50863A HUT50863A (en) | 1990-03-28 |
| HU205625B true HU205625B (en) | 1992-05-28 |
Family
ID=10616757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU883273A HU205625B (en) | 1987-05-01 | 1988-04-29 | Process for amperometric quantative determining 1,4-dihydro-nicotinamide adenine dinucleotide /nadh/ or phosphorilised 1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide /nadph/ in solution and for determining analysing material of enzyme-electrode in one sample |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5122456A (hu) |
| EP (2) | EP0289345A1 (hu) |
| JP (2) | JPH01503409A (hu) |
| KR (1) | KR960001501B1 (hu) |
| AU (2) | AU1686188A (hu) |
| CA (1) | CA1304127C (hu) |
| DE (1) | DE3882078T2 (hu) |
| DK (1) | DK169559B1 (hu) |
| ES (1) | ES2058271T3 (hu) |
| FI (1) | FI92221C (hu) |
| GB (3) | GB8710472D0 (hu) |
| HU (1) | HU205625B (hu) |
| IE (1) | IE60238B1 (hu) |
| IL (2) | IL86223A (hu) |
| MX (1) | MX167769B (hu) |
| NO (1) | NO179953C (hu) |
| RU (1) | RU1806187C (hu) |
| WO (2) | WO1988008446A1 (hu) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8710472D0 (en) * | 1987-05-01 | 1987-06-03 | Cambridge Life Sciences | Amperometric method |
| GB8817997D0 (en) * | 1988-07-28 | 1988-09-01 | Cambridge Life Sciences | Enzyme electrodes & improvements in manufacture thereof |
| DE3932247A1 (de) * | 1989-09-27 | 1991-04-04 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Elektrodenmaterial, elektroden, verfahren zur herstellung und verwendung der elektrode |
| TW279133B (hu) * | 1990-12-13 | 1996-06-21 | Elan Med Tech | |
| AT397513B (de) * | 1992-12-15 | 1994-04-25 | Avl Verbrennungskraft Messtech | Amperometrische enzymelektrode |
| US5429735A (en) * | 1994-06-27 | 1995-07-04 | Miles Inc. | Method of making and amperometric electrodes |
| IE72524B1 (en) * | 1994-11-04 | 1997-04-23 | Elan Med Tech | Analyte-controlled liquid delivery device and analyte monitor |
| DE4442253A1 (de) * | 1994-11-28 | 1996-05-30 | Bayer Corp N D Ges D Staates I | Elektrochemischer Enzymbiosensor |
| US6413410B1 (en) | 1996-06-19 | 2002-07-02 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| FR2743575B1 (fr) * | 1996-01-17 | 1998-03-13 | Univ Toulouse | Procede perfectionne de modification en surface d'une electrode pour la realisation d'un reaction electrochimique et electrodes obtenues |
| DE69730612T2 (de) | 1996-11-07 | 2005-01-27 | Cambridge Sensors Ltd., Godmanchester | Elektroden und ihre verwendung in assays |
| WO1998058250A2 (en) | 1997-06-16 | 1998-12-23 | Elan Corporation, Plc | Methods of calibrating and testing a sensor for in vivo measurement of an analyte and devices for use in such methods |
| KR100491316B1 (ko) * | 2002-05-29 | 2005-05-24 | 삼성엔지니어링 주식회사 | 망간이 고정된 흑연 또는 뉴트랄 레드가 결합된 흑연을포함하는 ｎａｄ(ｐ)+ 또는 ｎａｄ(ｐ)ｈ의 직접 환원또는 산화용 전극 |
| ES2441361T3 (es) | 2007-09-18 | 2014-02-04 | Ultizyme International Ltd. | Electrodo enzimático |
| JP5362406B2 (ja) * | 2009-03-25 | 2013-12-11 | 三洋電機株式会社 | 燃料電池 |
| JP5930810B2 (ja) | 2011-04-26 | 2016-06-08 | アークレイ株式会社 | 分析用具 |
| US9660240B2 (en) * | 2011-07-07 | 2017-05-23 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Secondary battery including separator containing electroconductive porous layer sandwiched between electroconductive material-free porous layers |
| WO2020148414A1 (en) | 2019-01-18 | 2020-07-23 | Frieslandcampina Nederland B.V. | Shaped cheese product |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4044193A (en) * | 1971-06-16 | 1977-08-23 | Prototech Company | Finely particulated colloidal platinum compound and sol for producing the same, and method of preparation of fuel cell electrodes and the like employing the same |
| SU593439A1 (ru) * | 1975-08-04 | 1980-10-07 | Ордена Трудового Красного Знамени Институт Химических Наук Ан Казахской Сср | Способ получени электропроводных фермент-ковакторных систем |
| US4166143A (en) * | 1977-01-24 | 1979-08-28 | Prototech Company | Control of the interaction of novel platinum-on-carbon electrocatalysts with fluorinated hydrocarbon resins in the preparation of fuel cell electrodes |
| US4321123A (en) * | 1978-04-21 | 1982-03-23 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Coenzyme immobilized electrode |
| JPS5816695B2 (ja) * | 1978-04-24 | 1983-04-01 | 松下電器産業株式会社 | 酵素電極 |
| JPS584982B2 (ja) * | 1978-10-31 | 1983-01-28 | 松下電器産業株式会社 | 酵素電極 |
| US4293396A (en) * | 1979-09-27 | 1981-10-06 | Prototech Company | Thin carbon-cloth-based electrocatalytic gas diffusion electrodes, and electrochemical cells comprising the same |
| US4478696A (en) * | 1982-07-21 | 1984-10-23 | Prototech Company | Ionizable reducing and oxidizing gaseous supply means and process for catalytic barriers and electrodes |
| GB8606824D0 (en) * | 1986-03-19 | 1986-04-23 | Univ Strathclyde | Biochemical detector |
| GB8612861D0 (en) * | 1986-05-27 | 1986-07-02 | Cambridge Life Sciences | Immobilised enzyme biosensors |
| GB8710472D0 (en) * | 1987-05-01 | 1987-06-03 | Cambridge Life Sciences | Amperometric method |
-
1987
- 1987-05-01 GB GB878710472A patent/GB8710472D0/en active Pending
-
1988
- 1988-04-28 IL IL86223A patent/IL86223A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-04-28 IL IL86222A patent/IL86222A0/xx unknown
- 1988-04-28 IE IE127488A patent/IE60238B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-04-29 JP JP63503839A patent/JPH01503409A/ja active Pending
- 1988-04-29 AU AU16861/88A patent/AU1686188A/en not_active Abandoned
- 1988-04-29 JP JP63503840A patent/JP2528956B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 KR KR1019880701786A patent/KR960001501B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-04-29 HU HU883273A patent/HU205625B/hu unknown
- 1988-04-29 GB GB8810180A patent/GB2204415B/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 ES ES88303921T patent/ES2058271T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 EP EP88303922A patent/EP0289345A1/en not_active Withdrawn
- 1988-04-29 AU AU16862/88A patent/AU612366B2/en not_active Expired
- 1988-04-29 GB GB8810181A patent/GB2204698B/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 EP EP88303921A patent/EP0289344B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 US US07/295,035 patent/US5122456A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 WO PCT/GB1988/000337 patent/WO1988008446A1/en unknown
- 1988-04-29 WO PCT/GB1988/000338 patent/WO1988008447A1/en active IP Right Grant
- 1988-04-29 DE DE88303921T patent/DE3882078T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-02 MX MX011347A patent/MX167769B/es unknown
- 1988-05-02 CA CA000565696A patent/CA1304127C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-30 RU SU884613363A patent/RU1806187C/ru active
- 1988-12-30 NO NO885836A patent/NO179953C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-12-30 FI FI886050A patent/FI92221C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-12-30 DK DK731988A patent/DK169559B1/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU205625B (en) | Process for amperometric quantative determining 1,4-dihydro-nicotinamide adenine dinucleotide /nadh/ or phosphorilised 1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide /nadph/ in solution and for determining analysing material of enzyme-electrode in one sample | |
| US5508171A (en) | Assay method with enzyme electrode system | |
| JP3056221B2 (ja) | 酵素電極およびその製造方法 | |
| Pandey et al. | Acetylthiocholine/acetylcholine and thiocholine/choline electrochemical biosensors/sensors based on an organically modified sol–gel glass enzyme reactor and graphite paste electrode | |
| NO176920B (no) | Enzymelektrode | |
| Gavalas et al. | Phosphate biosensor based on polyelectrolyte-stabilized pyruvate oxidase | |
| US20170191105A1 (en) | Enzyme electrode | |
| Li et al. | A new handheld biosensor for monitoring blood ketones | |
| Jiang et al. | Amperometric ethanol biosensor based on integration of alcohol dehydrogenase with Meldola's blue/ordered mesoporous carbon electrode | |
| Laurinavicius et al. | Amperometric glyceride biosensor | |
| Kulys | Amperometric enzyme electrodes in analytical chemistry | |
| Loughran et al. | Amperometric detection of histamine at a quinoprotein dehydrogenase enzyme electrode | |
| ERDEM et al. | Electrochemical biosensor based on horseradish peroxidase for the determination of oxidizable drugs | |
| Yao et al. | Electroanalytical properties of aldehyde biosensors with a hybrid-membrane composed of an enzyme film and a redox Os-polymer film | |
| JPH09297121A (ja) | コレステロールセンサ | |
| Pundir | Fabrication of Pt based amperometric cholesterol biosensor using cellulose acetate membrane | |
| Mizutani et al. | Highly-Sensitive Measurement of Dihydroxyphenols Using Carbon Felt Electrode Impregnated with Fructose Dehydrogenase-Containing Solution. | |
| Mizutani et al. | Rapid measurement of cholinesterase activity using an amperometric enzyme electrode based on lipid-modified choline oxidase | |
| Kulys | Amperometrische Enzymelektroden in der analytischen Chemie | |
| CA2512380A1 (en) | Cholesterol enzyme electrode |