FI92221C - Amperometrinen menetelmä 1,4-dihydronikotiiniamidiadeniinidinukleotidin (NADH) kvantitatiiviseksi määrittämiseksi liuoksessa - Google Patents
Amperometrinen menetelmä 1,4-dihydronikotiiniamidiadeniinidinukleotidin (NADH) kvantitatiiviseksi määrittämiseksi liuoksessa Download PDFInfo
- Publication number
- FI92221C FI92221C FI886050A FI886050A FI92221C FI 92221 C FI92221 C FI 92221C FI 886050 A FI886050 A FI 886050A FI 886050 A FI886050 A FI 886050A FI 92221 C FI92221 C FI 92221C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- electrode
- nadh
- carbon
- enzyme
- resin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/40—Apparatus specially designed for the use of free, immobilised, or carrier-bound enzymes, e.g. apparatus containing a fluidised bed of immobilised enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
- G01N33/5438—Electrodes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
- C12Q1/005—Enzyme electrodes involving specific analytes or enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3271—Amperometric enzyme electrodes for analytes in body fluids, e.g. glucose in blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/817—Enzyme or microbe electrode
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Electrodes For Compound Or Non-Metal Manufacture (AREA)
Description
92221
Amperometrinen menetelmS 1,4-dihydronikotiiniamidiadenii-nidinukleotidin (NADH) kvantitatiiviseksi maarittamiseksi liuoksessa -
Amperometrisk metod f6r kvantitativ bestamning av 1,4-di-hydronikotinamidadenindinukleotid (NADH) i ldsning TSma keksintd koskee menetelmaa 1,4-dihydronikotiini-amidiadeniinidinukleotidin (NADH) kvantitatiiviseksi maarittamiseksi liuoksessa.
NADH ja sen hapettunut vastine NAD ovat kofaktoreita lu-kuisissa entsyymikatalysoiduissa redoks-reaktioissa. ErSissS niista entsyymisubstraatti hapetetaan kofaktorin NAD ja sopivan oksidaasin tai dehydrogenaasin lSsnSolles-sa, jolloin saadaan NADH liuoksessa; toisissa entsyymisubstraatti pelkistetaan kofaktorin NADH lMsnSollessa, jolloin saadaan NAD liuoksessa. Useissa tapauksissa voi-daan NADH-konsentraation maaritysta kayttaa osoittamaan substraatin konsentraatiota, tai sen avulla voidaan seura-ta sellaisen entsyymireaktion kulkua, johon kuuluu NADH (tai NAD).
On tunnettua, etta NADH-konsentraatio liuoksessa voidaan mitata kolorimetrisesti, mutta kolorimetriset menetelmMt ovat yleisesti ottaen epaedullisia. sahkfikemialliset mene-telmat ovat paljon edullisempia, mutta yritykset NADH:n ·; maarittamiseksi sahkdkemiallisesti eivat tahan mennessa ole olleet kovinkaan menestyksellisia. Tiedetaan esimer-kiksi, etta NADH-konsentraatio voidaan maarittaa ampero-metriselia analyysilia, jossa NADH hapetetaan elektrodilla kiinteaiia, saadetylia potentiaalilla, jolloin virrankulku on sopivissa oloissa verrannollinen NADH-konsentraatioon. Valitettavasti NADH:n sahkdkemialliseen hapetukseen vaadi-taan suuri ylipotentiaali, eika NADH yleensa hapetu puh-taana elektrodin pintaan; monissa tapauksissa esimerkiksi pintakalvon muodostuminen tukkii nopeasti elektrodin pin-nan, mika vaikuttaa sahkdkemiallisen vasteen suuruuteen ja nopeuteen: I. Moiroux and P.J. Elving, J.Amer.Chem.Soc.
2 92221 (1980) 102, 6533-6538, ja D.G. Johnson, M.D. Ryan and G.S. Wilson, Analyt. Chem. (1968) 58, 42R.
NSitS ongelmia on yritetty vSlttSS monin tavoin. On esi-merkiksi ehdotettu kSytettavHksi modifioituja elektrodeja, jotka on paailystetty johtavien orgaanisten suolojen ker-roksella: J.J. Kulys, Biosensors (1986) 2, 3-13. Vaihtoeh-toisesti on ehdotettu kaytettåvåksi adsorboitua redoks-vSlittajSS kuten Meldolan sinista hapetusreaktion kytkemi-seksi tehokkaammin elektrodiin ja/tai alentamaan hapetus-potentiaalia: L. Gorton et al., J.Electroanalyt.Chem. (1984) 161, 103-20. Eraassa toisessa ehdotuksessa redoks-vaiittajia on kaytetty vapaassa liuoksessa. Metoksifenat-siinimetosulfaattia on esimerkiksi kaytetty modifioidun pyroliittisen grafiittielektrodin kanssa: Y. Kimura ja K. Nihi, Analytical Sciences (1985), 1_, 271-4. MyOs platina-, grafiitti- ja lasihiilielektrodeilla on suoritettu kokei-luja, mutta tahan asti ei ole kehitetty minkaanlaista s3h-kdkemiallista menetelmaa NADH:n maarittamiseksi, joka oli-si seka nopea etta toistettavissa.
Taman keksinnOn mukaisesti on nyt yliattaen havaittu, etta NADH voidaan hapettaa puhtaana ja hyvaiia amperometriselia vasteella seka puskuriliuoksissa, jotka sisaitavat pelkas-taan NADH:ia, etta liuoksissa, jotka sisaitavat entsyymia, entsyymisubstraattia ja NADH:ia, kayttamaiia tyypiltaan polttokennotekniikassa kaytettya aktiivihiilielektrodia, joka muodostuu heterogeenisesta hartsisidotusta jalometal-likerroksesta, joka sisaitaa suositeltavasti platinoituja tai palladoituja (joita termej 3 tassa kaytetaan tarkoitta-maan materiaaleja, jotka sisaitavat platina- ja/tai palla-diumoksidia tai ovat niilia kasiteltyja, samoinkuin materiaaleja, jotka sisaitavat platina- ja/tai palladiummetal-lia tai ovat niilia kasiteltyja) hiili- tai grafiittipar-tikkeleja, jotka on sidottu luonnon tai synteettiselia hartsisideaineella, suositeltavasti synteettiselia, hydro- 3 92221 fobisella sideaineella, kuten hiilifluorihartsilla, suosi-teltavimmin polytetrafluorietyleenilia. Suositeltavasti kSytetaan platinoitua tai palladoitua aktiivihiilielektro-dia, jossa hiili- tai grafiittipartikkelit on platinoitu tai palladoitu adsorboimalla tai saostamalla kolloidista platina- tai palladiummetallia tai platina- tai palladiu-moksidia jauhepartikkelien pinnalle ennen sitomista, jol-loin syntyva elektrodi muodostuu heterogeenisesta huokoi-sesta aktiivihiilijauhekerroksesta, jossa on kolloidista platinaa tai palladiumia, tai vastaavia oksideja, olennai-sesti tasaisesti kerrokseen jakautuneena. Platinoitujen tai palladoitujen aktiivihiili- tai -grafiittipartikkelien hartsisidottu kerros voi olla itsekantava, mutta tavalli-sesti se on tukielimen kannattama, suositeltavasti sahkda johtavan tukielimen, ja suositeltavasti sMhkea johtavan hiilipaperikerroksen, johon platinoidut tai palladoidut hiili- tai grafiittipartikkelit on sidottu pintakerroksek-si tai imeytetty hiilikuitukudokseen. Vaikka platinoidut ja palladoidut materiaalit ovat suositeltavia, voidaan myfis muita jalometalleja sisSltSvia aktiivihiilielektrode-ja, esim. kultaa sisaitavia elektrodeja, kayttaa.
Termeihin "platinoitu" ja "palladoitu" sisaityvat tass3 oksidit, ellei asiayhteydesta muuta ilmene.
Myds tassa kaytetyt termit "aktiivihiili", "aktiivigra-fiitti", jne. viittavat erittain huokoisiin, suuripinta-alaisiin hiili- ja grafiittimateriaaleihin, joiden pinta-alat ovat 50 m2/g tai suurempia, ja tavallisemmin yli 200 m2/g, esim. 200-600 m2/g tai suurempia. Tailaisia suuri-pinta-alaisia materiaaleja saadaan esimerkiksi lampdka-sittelemaiia hiili- tai grafiittijauheita hdyryssa tai C02:ssa siten, etta saadaan suuripinta-alainen tuote, jota alalla yleisesti kutsutaan "aktiivihiileksi".
Aivan erillisena jo mainituista stabiilisuudesta, toistet-tavuudesta ja nopeista vasteajoista nyt kyseessa olevien 4 92221 materiaalien erityisenS lisSetuna on se, etta niita voi-daan kSyttaa NADH-konsentraatioiden seuraamiseen suhteel-lisen alhaisilla potentiaaleilla, esim. alueella 0-600 mV tai jopa negatiivisilla potentiaaleilla suhteessa standar-di Ag/AgCl-referenssielektrodiin, esim. 750 mV:iin ja suu-rempaan, joka tarvitaan NADH-konsentraatioiden seuraamiseen lasihiili- tai grafiittielektrodeja kayttamaiia. Kek-sinndn elektrodeille on siten luonteenomaista suhteellisen pieni taustavirta ja sen vuoksi parantunut herkkyys. Elektrodeille on myds luonteenomaista niiden pieni vaste mahdollisille hSiritseville aineille, kuten virtsahapolle, jota biologisissa tai kliinisissS nSytteissS saanndllises-ti on lasna.
TSmSn keksinnfin mukaisesti kSytetyt suositellut elektrodi-substraatit ovat itse asiassa kaupallisesti saatavia mate-riaaleja, joita myy Prototech Company, Newton Highlands, Massachusetts, ja joita tahSn asti on kMytetty sShkOkata-lyyttisinS kaasudiffuusioelektrodeina polttokennoissa. TMllaisten materiaalien valmistusta on kuvattu yksityis-kohtaisesti US-patenteissa 4,044,193, 4,166,143, 4,293,396 ja 4,478,696, joista yksityiskohtaiset tiedot on ldydettS-vissS. Yleisesti ottaen kuitenkin kolloidista platinaa, jonka hiukkaskoko on alueella 15-25 ÅngstrdmiS (1,5-2,5 nm), adsorboidaan jauhemaisen hiilen (hiukkaskoko 50-300 ÅngstrOmia/5-30 nm) pinnalle muodostamalla platinasooli in situ jauhemaisen hiilen lSsnSollessa, joka toimii soolin kiteytymisaineena. Platinoidut hiilipartikkelit valetaan sitten sShkSS johtavalle tukirakenteelle, esim. sShkOS johtavalle hiilipaperille kSyttSmaiia synteettista hartsi-: sideainetta, suositeltavasti fluorattua hiilivetyhartsia, ja erityisesti polytetrafluorietyleenia. Vaihtoehtoisesti voidaan kolloidisen platinan sijasta kayttaa hiukkaskoko-alueeltaan vastaavaa platina- tai palladiumoksidia ja ad-sorboida se samalla tavalla hiili- tai grafiittipartikke-leihin.
5 92221 US-patentissa 4,293,396 kuvatussa vaihtoehdossa platinoi-dut hiilipartikkelit imeytetSSn esimuodostettuun hiilikan-kaaseen ja sidotaan siihen hiilifluorihartsia, suositelta-vasti polytetrafluorietyleenia, kSyttSmSllcL On kuitenkin selvSS, ettei tSmS keksintd rajoitu Prototechin materiaa-lien kSyttSmiseen, vaan sen piiriin kuuluvat my6s muut vastaavanlaiset substraattimateriaalit, jotka kåsittavSt huokoisen hartsisidotun kerroksen platinoituja tai palla-doituja tai muuta jalometallia sisMltSvici aktiivihiili-tai -grafiittipartikkeleita.
Vaikka suositellut platinoitujen tai palladoitujen hiili-tai grafiittipartikkelien sitomiseen kSytetyt hartsiside-aineet ovat hydrofobisia hiilifluorihartseja, erityisesti polytetrafluorietyleenia, my6s muita sopivia luonnon tai synteettisifi hartsisideaineita voidaan kSyttaa, esimerk-keina polyetyylimetakrylaatti, polyvinyyliasetaatti, poly-vinyylikloridi, polykarbonaatit, poly(4-metyylipenteeni- 1) polyisopreeni, polykloropreeni, poly (1,3-butadieeni), silikonikumi ja gelatiini.
Sideaineen ja jalometallia sisaitavien aktiivihiili- tai -grafiittipartikkelien vaiiset suhteelliset maarat voivat olla 10-75% sideainetta ja 90-25% aktiivihiilta tai -grafiittia, suositeltavasti 20-50% sideainetta ja vastaa-vasti 80-50% akttivihiilta tai -grafiittia, painosta las-kettuna. Jalometallin, esim. platinan tai palladiumin tai niiden vastaavien oksidien tai kullan maara aktiivihiili-tai -grafiittipartikkeleilla voi olla 1-10% laskettuna ak-tiivihiilen tai -grafiitin ja sideaineen kokonaispainosta, suositeltavasti 2-8%, suositeltavimmin 4-6%.
Sen sijaan, etta hartsi/platinoitu tai palladoitu aktiivi-hiilijauhe valettaisiin suoraan sopivan tukirakenteen pin-nalle, esim. suoraan sahkda johtavan hiilipaperin pinnal-le, voidaan sideaineen ja platinoidun tai palladoidun hii- 6 92221 lijauheen seos suspensoida sopivaan inerttiin vSliainee-seen ja levittsa substraatin pinnalle silkkipainoteknii-kalla ja siten muodostaa ohut kalvo hartsisidottuja plati-noituja tai palladoituja hiilipartikkeleja substraatin pinnalle.
NADH:n suoran kvantitatiivisen mittauksen liuoksessa li-såksi voidaan tSman keksinnSn elektrodeja ja menetelmaa kSyttaa sen NADH:n kvantitatiiviseen maaritykseen, joka on muodostunut tai kulunut in situ esimerkiksi entsyymin ja sen kofaktorin vSlisessS entsymaattisessa reaktiossa. TM1-laisia reaktiota ovat esimerkiksi pyruvaatin muutos lak-taatiksi laktaattidehydrogenaasilla, ts. reaktio laktaattidehydrogenaasi
pyruvaatti + NADH -> laktaatti + NAD
jota reaktiota voidaan seurata NADH-konsentraation laskus-ta; ja glukoosin hapetus glukonolaktoniksi reaktiolla glukoosi
β-D-glukoosi + NAD -> D-glukonolaktoni + NADH
dehydrogenaasi jota voidaan seurata NADH-konsentraation kasvusta reaktion edistyessS. TStS vårten keksinndn mukaisesti kSytetyissS platinoiduissa tai palladoiduissa aktiivielektrodeissa voi olla entsyymi kuten laktaattidehydrogenaasi tai glukoosi-dehydrogenaasi mukana hartsisidotussa hiilikerroksessa tai immobilisoituna sille jollakin sopivalla alalla tunnetulla ; entsyymi-immobilisointitekniikalla, kuten esimerkiksi EP- hakemuksessa 0 247 850 on kuvattu.
T8mSn suoritusmuodon lisSmuunnoksena keksinndn tuloksena on my6s kertakSyttdinen entsyymielektrodi ja menetelmS, joissa entsyymielektrodi sisSltSS sekS immobilisoidun ent- • 7 92221 syymin etta myds sopivan kofaktorin talle entsyymille, ta-pauksesta riippuen NAD:n tai NADH:n, jolloin entsyymi-elektrodi kykenee vastaamaan amperometrisesti entsyymin aktiivisuuteen, mika maaritetaan NADH-konsentraation muu-toksena, ollessaan kosketuksessa naytteen kanssa, esim. kliinisen tai biologisen naytteen, joka sisaitaa talle entsyymille relevantin substraatin, riippumatta siita, sisaitaakO nayte vaadittavan kofaktorin, koska se on elektrodissa itsessaan. NAD- tai NADH-kofaktori voidaan lisata elektrodiin milla tahansa sopivalla tavalla, kuten imeyttamaiia sopivalla NAD:n tai NADH:n liuoksella ja kui-vaamalla.
Kuten alalia on myds hyvin tunnettua, elektrodimateriaalin pinta voidaan jattaa suojaamatta tai suojata huokoisella membraanilla, kuten polykarbonaattikalvolla, jonka huokos-koko on esim. noin 0,03 /um. My5s muita sopivia membraani-materiaaleja voidaan kayttaa.
Keksintda kuvataan yksityiskohtaisemmin oheisiin piirus-tuksiin liittyen, joissa:
Kuva 1 on kaaviomainen leikkauskuvanto modifioidusta Rank Brothers-sMhkdkemiallisesta kennosta, jota kaytetaan tes-taamaan keksinndn mukaisten aktiivihiilielektrodien NADH-vastetta;
Kuva 2 esittaa elektrodin vastetta perakkaisiin NADH-lisayksiin kennoon kun kaytetaan taman keksinndn mukaista platinoitua hiilipaperielektrodia (PCP);
Kuva 3 esittaa PCP-elektrodin vastetta NADH:Ile eri pusku-roimispotentiaaleissa (poising potentials) verrattuna Ag/AgCl-referenssi-elektrodiin;
Kuva 4 esittaa elektrodin vastetta palorypaiehapolle lak-.· taattidehydrogenaasin (LDH) lasnaollessa; 8 92221
Kuva 5 esittaa elektrodin vastetta asetaldehydille alkoho-lidehydrogenaasin (ADH) lasnaollessa;
Kuvan 6 k3yr3 esittaa platinoitujen hiilipaperielektrodien vastetta NADH-konsentraatiolle t3m3n keksinnOn mukaisesti;
Kuva 7 esittaa eraan kokeen tuloksia elektrodin vasteesta palorypaiehapolle;
Kuva 8 esittaa elektrodin vastetta NADH:lle, jota muodos-tetaan in situ glukoosin entsymaattisella hapetuksella glukoosidehydrogenaasia kayttamaiia;
Kuva 9 esittaa vastaavanlaista vastekayraa platinaoksidia sisaitavana elektrodilla; ja
Kuva 10 esittaa vastekayraa palladoidulle aktiivihiili-elektrodille.
Seuraavissa esimerkeissa testattiin erilaisten platinoitujen tai palladoitujen hiilipaperielektrodien (PCP) vastetta NADH:Ile modifioidussa Rank- happielektrodijarjestel-massa (Rank Brothers, Bottisham, Cambridge), joka on esi-tettu oheisissa piirustuksissa (kuva l). Modifioitu Rank-kennojarjestelma kasittaa kaksiosaisen kennon, jossa on pohja (1) ja rengasvaippa (3), joka sulkee sisaansa vesi-kammion (h), jonka 13pi voidaan kierrattaa vetta kennon lampdtilan saatamiseksi, jolloin n3m3 kaksi osaa on kiin-nitetty toisiinsa kierreholkilla (2). Pohjan (l) keskelia on platinakontaktinappi (d), jolle on asetettu paperie-lektrodimateriaalia oleva testikiekko (a), jota pidetaan paikallaan platinakontaktilla kumisilla O-rengastiivis-teilia (e) ja (f) kun kennon kaksi osaa kytketaan yhteen.
Kennon, joka tietysti sisaitaa NADH:a sisaitavaa testi-liuosta, yiapaahan on tydnnetty tulppa (4), jota kannattaa 9 92221 saadettava kaulus (g), ja johon on asennettu platinavasta-elektrodi (b) ja Ag/AgCl-referenssielektrodi (c). Testit suoritettiin tyOelektrodilla, joka puskuroitiin eri poten-tiaaleissa alueella 100-600 mV suhteessa Ag/AgCl-elektro-diin. TestejS suoritettiin myds EP-hakemuksen 0 247 850 kuvassa 16 esitetyssa kaksielektrodisessa kennossa, joka mainitussa hakemuksessa on yksityiskohtaisesti kuvattu. Kaksielektrodisen kennon suoritusmuodossa elektrodimateri-aalia pidetaan platinakontaktinappia vasten kennon pohjas-sa kayttamaiia polykarbonaattimembraania (huokoskoko 0,03 /um), jolle NADH:a sisaitava n3yte tuodaan. Platinakontak-tia ympardi kennon pohjalla, mutta eristekauluksella siita erotettuna, renkaanmuotoinen Ag/AgCl-referenssielektrodi. Elektrodikenno polaroidaan eri potentiaaleilla suhteessa Ag/AgCl-elektrodiin ja antovirtaa seurataan eri potentiaaleilla.
Keksintda havainnollistetaan vieia seuraavilla esimerkeil-ia, joissa elektrodimateriaali on platinoitua hiilipaperia (PCP), toimittaj a Prototech Company, Newton Highlands, Massachusetts, ja toimittajan suunnittelema kaasudiffuu-sioelektrodiksi. PCP-elektrodimateriaali valmistetaan US-patentin 4,044,193 mukaisesti platinoimalla ensin hiili-jauhepartikkeleita (Vulcan XC-72, nimellishiukkaskoko 30 nm) hapettavalla kompleksisen platinasulfiittihapon hajot-tamisella hiilijauheen lasnaollessa H202:ta kayttamaiia siten saostaen kolloidista platinaa, hiukkaskoko 1,5-2,5 nm, hiilijauhepartikkelien pinnalle. Platinoinnin jaikeen platinoitu hiilijauhe sitten valetaan ja sidotaan kaupal-lisen, grafitoidun sahkda johtavan hiilipaperin pinnalle : kayttaen sideaineena noin 50% platinoidun hiilijauheen painosta laskettuna polytetrafluorietyleenia. Saadun platinoidun hiilipaperielektrodimateriaalin paksuus on alueella 0,1-0,5 mm ja platinamaara 0,24 mg.cm-2. Seuraavia testeja vårten (esimerkit 1-3) hiilipaperielektrodimateri-aali leikattiin halkaisijaltaan 5 mm:n kiekoiksi ja asen- 10 92221 nettiin oheisten piirustusten kuvassa l esitetyn kennojar-jestelman platinoidulle tydelektrodille. NMytteelle altis-tunut hiilipaperielektrodin todellinen pinta-ala on kussa-kin tapauksessa noin 0,16 cm2.
Saadut tulokset ovat seuraavat: ESIMERKKI 1 NADH:n sShkfikemiallinen hapettuminen platinoidulla hiili-paperilla (PCP) KSyttSen potentiostaattista standarditekniikkaa lisSttiin 20 mM NADH-liuosta tris/HCL pH 9 puskurissa kennoon, joka sisalsi 2 ml 0,1 M pH 7 fosfaatti/1 M KCl puskuriliuosta. Platinoitu hiilipaperielektrodi (PCP) puskuroitiin eri po-tentiaaleissa Ag/AgCl-referenssielektrodin suhteen. Vasta-elektrodi oli platinaa. Saatiin stabiilit virtatasot (kuva 2), jotka olivat verrannollisia NADH-konsentraatioon (taulukko 1 j a kuva 3).
Taulukko 1
Platlnoidun hlilipaperin virtavaste NADH:Ile eri puskuroimispotentiaaleissa NADH-konsentraatio/mM Antovirta /UA jannitteelia 100 mV 300 mV 600 mV 0,95 7 15 28 1,8 13 25 53 2,7 - 32 73 4,0 38 42 113 6,6 - 52 183 10,0 60 li 11 92221 ESIMERKKI 2 NADH-elektrodijårjestelman vaste palorypSlehapolle lak-taattldehydroqenaasln (LDH) lasnaollessa
Kaytettiin samanlaista kennoa, joka sisaisi 12,5 mM NADH ja 10 mM palorypaiehappoa 2 ml:ssa pH 7 fosfaatti/KCl pus-kuria 25°C:ssa. Tyd-, vasta- ja referenssielektrodit oli-vat kuten esimerkissa 1. Tydelektrodi puskuroitiin 400 mV:ssa ja saatiin 170 /uA:n vakiosignaali taustan yiapuo-lella. Run lisattiin 120 yksikkda LDH (hardn sydan Type XV), virta laski alkunopeudella 92 /uA/min (kuva 4) osoit-taen, etta pyruvaatin entsymaattista muutosta laktaatiksi voidaan tehokkaasti seurata elektrodiin sahkdkemiallisesti kytketyn NADH:n vaikutuksen kautta.
ESIMERKKI 3 NADH-elektrodljarjestelman vaste asetaldehydille alkoholi-dehydroqenaasin (ADH) lasnaollessa PCP-elektrodilla
Kaytettiin kennoa, joka sisaisi 3 mM NADH ja 35 mM asetaldehydia 2 mlrssa pH 9 tris/HCl puskuria 25eC:ssa. Tyd-, vasta- ja referenssielektrodit olivat kuten esimerkissa 1. Tydelektrodi puskuroitiin 400 mV:ssa ja saatiin 40 /uA:n vakiosignaali taustan yiapuolella. Kun lisattiin 2 yksikkda ADH (harMn maksa), virta laski alkunopeudella 130 /UA/min (kuva 5) osoittaen, etta asetaldehydin entsymaattista muutosta etanoliksi voidaan tehokkaasti seurata elektrodiin sahkdkemiallisesti kytketyn NADH:n vaikutuksen kautta.
Seuraavissa esimerkeissa kaytettiin joko kahden elektrodin kennoa tai kolmen elektrodin kennojMrjestelya. Kolmen elektrodin kenno oli kuten tMssa kuvaan l liittyen kuvat-tiin. Kahden elektrodin kenno oli rakenteeltaan samanlai- 12 92221 nen kuin EP-hakemuksen 0 247 850 kuvassa 16 esitetty, jo-hon julkaisuun viitataan lisSyksityiskohtien suhteen.
ESIMERKKI 4 (kuva 6)
Tiedot kerSttiin kayttamaiia kaksielektrodirakennetta, jo-ka polaroitiin 200 mV:ssa. Puskurina kaytettiin 16 mmol/L NaH2P04, 53 mmol/L Na2HP04, 52 mmol/L NaCl, 1,5 mmol/L etyleenidiamiinitetraetikkahappoa, pH 7,4. Kun taiia pus-kurilla oli saavutettu stabiili taustavirta, puskuri pyy-hittiin pois membraanista ja korvattiin NADH-nMytteilia samassa puskurissa. Huippuvirta merkittiin muistiin. Kuva 6 esittaa vasteet platinoidulla hiilipaperielektrodilla, jollaisia on kaupallisesti saatavilla Prototech Companyl-ta, ja jotka muodostuvat hartsisidotuista platinoiduista hiilipartikkeleista, jotka on saostettu sahkoa johtavalle hiilipaperitausta-arkille, jolloin hartsisidottu platinoi-tu hiilikerros sisaitaa painosta laskettuna 50% polytet-rafluorietyleenia, 45% hienojakeista hiilta (Vulcan XC72) ja 5% hiilijauheelle esiadsorptoitua kolloidista platinaa. Taustavirran minimoimiseksi elektrodille adsorboltiin yOn yli 5 mg/ml proteiiniliuosta (glukoosioksidaasi) ennen NADH-mittauksia. On huomattava, etta glukoosioksidaasi on vain yksi esimerkki sopivista proteiineista.
ESIMERKKI 5 (kuva 7)
T3ma havainnollistaa keksinndn kayttOkelpoisuutta NADH:a hyddyntavien entsyymisubstraattien mittaukseen. Kaytettiin edelia kuvattua kolmielektrodikennoa, mutta se varustet-tiin magneettisella sekoitussauvalla. Tydelektrodi oli platinoitua hiilipaperia kuten esimerkissa 4, mutta elektrodille immobilisoitiin L-laktaattidehydrogenaasia (EC
1.1.1.27 haran sydamesta) karbodi-imidikytkennaiia, kts. EP-A-0 247 850, mutta kayttamaiia laktaattidehydrogenaasin 1 mg/ml liuosta (Sigma Chemicals, type XV, 500 yksikkda/mg
II
• 13 92221 proteiinia). Alussa kenno sisaisi 12,5 mmol/L NADH pusku-rissa 0,1 mol/L fosfaattia/1 mol/L KCl, pH 7. Polarointi-potentlaali oli 350 mV. Laitetta voitiin kayttaa seuraa-maan NADH:n kulutusta, kun kennoon lisattiin tasamaaria palorypaiehappoa, kuten kuvasta nahdaan.
ESIMERKKI 6 (kuva 8)
Toistettiin esimerkki 5 paitsi etta immobilisoitu laktaat-tidehydrogenaasi korvattiin glukoosidehydrogenaasilla (EC 1.1.1.47, Bacillus spp, toimittaja Sigma, 100-300 U/mg proteiinia), joka immobilisoitiin elektrodille samalla ta-valla. Kun laktaattidehydrogenaasia kaytetaan NADH-kulutusta seuraamalla mittaamaan palorypaiehappoa
pyruvaatti + NADH -> laktaatti + NAD
kaytetaan glukoosidehydrogenaasia NADH:n muodostusta seuraamalla mittaamaan glukoosia:
β-D-glukoosi + NAD -> D-glukonolaktoni + NADH
Kenno sisaisi 0,1 mol/L fosfaattia/0,1 mol/L KCl/2,4 mmol/L NAD, pH 7.
ESIMERKKI 7 (kuva 9)
Esimerkissa 4 kuvatulla menettelylia mitattiin platinaok-sidia sisaitavan hiilielektrodin virta 200 mV:ssa (Ag/AgCl-referenssielektrodin suhteen) kaksielektrodiken-nossa erilaisissa NADH-konsentraatioissa, jolloin saatiin olennaisesti lineaarinen vaste, joka vastaa platinoiduilla hiilipaperielektrodeilla saatua. T3ssa tapauksessa elekt-rodimateriaali muodostuu kerroksesta hartsisidottuja (polytetrafluorietyleeni) hiilipartikkeleita (Vulcan XC72), jolloin hiilijauhepartikkeleille on esiadsorboitu 5 « 14 92221 paino% (laskettuna hartsisidottujen partikkelien kokonais-painosta) platlnaoksidia; ja sideainetta oxi 50 paino% seka hiiltS 45 paino%, ja n3ma on sidottu s3hkCa johtavan Toray (tavaramerkki) hiilipaperin pinnalle.
ESIMERKKI 8 (kuva 10)
Mitattiin jalleen esimerkissa 4 kuvatulla menettelylia palladoidun hiilipaperielektrodin virta 200 mV:ssa (Ag/AgCl:n suhteen) kaksielektrodikennorakennetta kayttaen eri NADH-konsentraatioissa. Vaste on jalleen olennaisesti lineaarinen (kuva 10). Elektrodimateriaall on kuten esimerkissa 7 on kuvattu, paitsi etta hartsisidotut hiili-partikkelit sisaitavat 5 paino% esiadsorboitua hienoja-keista palladiumia.
Edelliset esimerkit osoittavat elektrodimateriaaleilla saatavan nopean ja toistettavan NADH:n hapettumisen. N3ma vasteet eroavat merkittav3sti niista, jotka useimmilla muilla elektrodimateriaaleilla saadaan, kuten n3hd33n ver-tailukelpoisista kokeista, joissa kaytetaan platina-, lasihiili- tai grafiittielektrodimateriaaleja, jotka (harvoin poikkeuksin) yleensa ovat hitaita, suhteellisen epaherkkia, ja joilla toistettavuus on paljon huonompi. Kayttamiemme platinoitujen tai palladoitujen hiilielektro-dien tehokkuus n3ytt33 johtuvan niiden erityisen hetero-geenisesta rakenteesta ja sen yhteensopivuudesta biologisten molekyylien, kuten NADH:n ja entsyymien kanssa. NADH:n hapettuminen etenee myOs tehokkaasti entsyymien ja subs-traattien 13sn3ollessa, ja sita voidaan k3ytt33 perustana nopeille NADH-kytketyille entsymaattisille analyyseille. Edellisista esimerkeista k3y selvaksi mahdollisuus pyru-vaatin (LDH:ta k3ytt3en) ja asetaldehydin (ADH:ta kayttaen) tehokkaaseen analyysiin, mutta hyvin suuri m33ra vas-taavia analyyseja on myds suoritettavissa muita entsyymeja ja substraatteja kayttamaiia.
15 92221
Vaikka keksintfiS on tSssS kuvattu liittyen yksinomaan NADH:n maSritykseen liuoksessa, voidaan fosforyloitu 1,4-dihydronikotiiniamidiadeniinidinukleotidi (NADPH), ts. fosforyloitu NADH, maarittaa tasmaileen samalla tekniikal-la. Koska NADPH (tai NADP) lisSksi on kofaktori valitussa ryhmSssa entsyymikatalysoituja reaktioita NADHrn (tai NAD:n) sijasta, tSmSn keksinndn tekniikka mahdollistaa tSllaisten reaktioiden seuraamisen tSsmSlleen samalla ta-valla, ts. mSarittamaiia amperometrisesti joko NADPH:n ku-lutus tai tuotanto liuoksessa. Siten aina kun tassa asia-kirjassa on puhuttu NADHrsta tai NADista, on tarkoitettu my6s niiden fosforyloituja johdannaisia ellei asiayhtey-desta muuta ilmene.
Claims (9)
16 92221
1. Menetelma 1,4-dihydronikotiiniamidiadeniinidinukleotidin (NADH) kvantitatiiviseksl mSSrittSmiseksi liuoksessa, jossa menetelmSssS NADH:a sisSltavS liuos saatetaan kosketukseen aktiivihiilielektrodin kanssa ja aktiivihiilielektrodi pide-taan sSSdetyssa kiinteSssS potentiaalissa, joka voi aikaan-saada NADH:n hapettumisen elektrodin pinnalla, ja mitataan hiilielektrodin antovirta, tunnettu siita, etta me-netelmSssa kSytetSSn jalometallia sisSltåvåa aktiivihiili-elektrodia, joka kSsittaa aktiivihiili- tai -grafiittipar-tikkelien huokoisen, heterogeenisen, hartsisidotun kerrok-sen, jossa aktiivihiili- tai -grafiittipartikkeleille on esiadsorboitu hienojakeista jalometallia tai vastaavia oksi-deja, ja ne on sidottu toisiinsa luonnon tai synteettiselia hartsisideaineella.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta hartsisideaine on hiilifluorihartsi, mieluimmin polytetrafluorietyleeni.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta hartsisidotut jalometallia sisaitavat hiili- tai grafiittihiukkaset on muodostettu hartsisidotuksi pintakerrokseksi alia olevalle sahk53 johtavalle tukielimel-le.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta sahkda johtava tukielin on sahkda johtava hiili-paperikerros, johon jalometallia sisaitavat hiili- tai gra-fiittipartikkelit on sidottu pintakerrokseksi. 1 2 3 Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelma, 2 tunnettu siita, etta hiili- tai grafiittipartikkelit 3 ovat esiplatinoituja tai esipalladoituja partikkeleita, joi-den hiukkaskoko on alueella 5-30 nm ja joissa on hienojakeis- 17 92221 ta, kolloidista platinaa tal palladiumia esiadsorboituna gra-fiitti- tai hiilipartikkeleille, jolloin kolloidisten platina- tai palladiumhiukkasten hiukkaskoko on alueella 1,5-2,5 nm.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmS, tunnettu siita, etta sita kaytetaan seuraamaan NADH: n tuotantoa tai kulutusta entsymaattisessa reaktiossa entsyy-min ja sen substraatin vaiilia, jossa joko NADH tai NAD on mukana kofaktorina, ja jossa kaytetaan jalometallia sisålta-vSS hiilielektrodia, jolle tai johon entsyymi on lisatty tai immobilisoitu, ja jossa elektrodia kaytetaan seuraamaan ent-syymin aktiivisuutta NADH-konsentraation muutoksen kautta, kun elektrodi on kosketuksessa entsyymisubstraatin sisaita-v3n naytteen kanssa ja joko NAD:n tai NADH:n lasnaollessa kofaktorina, joka kuuluu entsyymin ja sen substraatin vaii-seen reaktioon.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta siina kaytetaan jalometallia sisaitavaa elektrodia, jolle tai johon entsyymi on lisatty tai immobilisoitu yhdessa NADH tai NAD kofaktorin kanssa, tapauksesta riippuen, jolloin NADH tai NAD kofaktori n3in lisataan naytteeseen elektrodin kautta. 1 Patenttivaatimuksen 7 menetelmassa kaytettavaksi tarkoi-tettu kertakayttOinen entsyymielektrodi, tunnettu siita, etta se muodostuu aktiivihiilielektrodista, joka ka-sittaa tai sisaitaa aktiivihiili- tai -grafiittipartikkelien huokoisen, hartsisidotun, heterogeenisen kerroksen, jonka aktiivihiili- tai -grafiittipartikkeleille on esiadsorboitu hienojakeista jalometallia tai vastaavaa oksidia, ja partik-kelit on sidottu toisiinsa synteettiselia hydrofobisella hartsisideaineella, jolloin hartsisidottuun kerrokseen tai kerrokselle on immobilisoitu entsyymia yhdessa NAD:n tai NADH:n kanssa entsyymin kofaktorina, elektrodin vastatessa 18 92221 amperometrisesti entsyymin aktiivisuuteen sen substraatin ja NAD:n tai NADH:n, tapauksesta riippuen, lasnMollessa.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen kertakMyttOinen entsyymi-elektrodi, tunnettu siita, etta aktiivihiilielektro-diin kuuluu huokoinen, hartsisidottu, heterogeeninen pinta-kerros, jossa on esiplatinoituja tai esipalladoituja aktii-vihiili- tai -grafiittipartikkeleita, jotka on sidottu hii-lifluorihartsilla, ja jota tukee alla oleva tukielin, ja jo-hon tai jolle entsyymi ja kofaktori on immobilisoitu.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen kertakayttfiinen entsyy-mielektrodi, tunnettu siita, etta esiplatinoitujen tai esipalladoitujen aktiivihiili- tai grafiittipartikkelien hartsisidotun kerroksen alla oleva tukielin muodostuu sahkea johtavasta hiilipaperista. Il ιβ 92221
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8710472 | 1987-05-01 | ||
| GB878710472A GB8710472D0 (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Amperometric method |
| PCT/GB1988/000338 WO1988008447A1 (en) | 1987-05-01 | 1988-04-29 | Amperometric method for the quantitative determination of 1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide (nadh) in solution |
| GB8800338 | 1988-04-29 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI886050A FI886050A (fi) | 1988-12-30 |
| FI92221B FI92221B (fi) | 1994-06-30 |
| FI92221C true FI92221C (fi) | 1994-10-10 |
Family
ID=10616757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI886050A FI92221C (fi) | 1987-05-01 | 1988-12-30 | Amperometrinen menetelmä 1,4-dihydronikotiiniamidiadeniinidinukleotidin (NADH) kvantitatiiviseksi määrittämiseksi liuoksessa |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5122456A (fi) |
| EP (2) | EP0289345A1 (fi) |
| JP (2) | JPH01503409A (fi) |
| KR (1) | KR960001501B1 (fi) |
| AU (2) | AU1686188A (fi) |
| CA (1) | CA1304127C (fi) |
| DE (1) | DE3882078T2 (fi) |
| DK (1) | DK169559B1 (fi) |
| ES (1) | ES2058271T3 (fi) |
| FI (1) | FI92221C (fi) |
| GB (3) | GB8710472D0 (fi) |
| HU (1) | HU205625B (fi) |
| IE (1) | IE60238B1 (fi) |
| IL (2) | IL86223A (fi) |
| MX (1) | MX167769B (fi) |
| NO (1) | NO179953C (fi) |
| RU (1) | RU1806187C (fi) |
| WO (2) | WO1988008446A1 (fi) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8710472D0 (en) * | 1987-05-01 | 1987-06-03 | Cambridge Life Sciences | Amperometric method |
| GB8817997D0 (en) * | 1988-07-28 | 1988-09-01 | Cambridge Life Sciences | Enzyme electrodes & improvements in manufacture thereof |
| DE3932247A1 (de) * | 1989-09-27 | 1991-04-04 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Elektrodenmaterial, elektroden, verfahren zur herstellung und verwendung der elektrode |
| TW279133B (fi) * | 1990-12-13 | 1996-06-21 | Elan Med Tech | |
| AT397513B (de) * | 1992-12-15 | 1994-04-25 | Avl Verbrennungskraft Messtech | Amperometrische enzymelektrode |
| US5429735A (en) * | 1994-06-27 | 1995-07-04 | Miles Inc. | Method of making and amperometric electrodes |
| IE72524B1 (en) * | 1994-11-04 | 1997-04-23 | Elan Med Tech | Analyte-controlled liquid delivery device and analyte monitor |
| DE4442253A1 (de) * | 1994-11-28 | 1996-05-30 | Bayer Corp N D Ges D Staates I | Elektrochemischer Enzymbiosensor |
| US6413410B1 (en) | 1996-06-19 | 2002-07-02 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| FR2743575B1 (fr) * | 1996-01-17 | 1998-03-13 | Univ Toulouse | Procede perfectionne de modification en surface d'une electrode pour la realisation d'un reaction electrochimique et electrodes obtenues |
| DE69730612T2 (de) | 1996-11-07 | 2005-01-27 | Cambridge Sensors Ltd., Godmanchester | Elektroden und ihre verwendung in assays |
| WO1998058250A2 (en) | 1997-06-16 | 1998-12-23 | Elan Corporation, Plc | Methods of calibrating and testing a sensor for in vivo measurement of an analyte and devices for use in such methods |
| KR100491316B1 (ko) * | 2002-05-29 | 2005-05-24 | 삼성엔지니어링 주식회사 | 망간이 고정된 흑연 또는 뉴트랄 레드가 결합된 흑연을포함하는 ｎａｄ(ｐ)+ 또는 ｎａｄ(ｐ)ｈ의 직접 환원또는 산화용 전극 |
| ES2441361T3 (es) | 2007-09-18 | 2014-02-04 | Ultizyme International Ltd. | Electrodo enzimático |
| JP5362406B2 (ja) * | 2009-03-25 | 2013-12-11 | 三洋電機株式会社 | 燃料電池 |
| JP5930810B2 (ja) | 2011-04-26 | 2016-06-08 | アークレイ株式会社 | 分析用具 |
| US9660240B2 (en) * | 2011-07-07 | 2017-05-23 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Secondary battery including separator containing electroconductive porous layer sandwiched between electroconductive material-free porous layers |
| WO2020148414A1 (en) | 2019-01-18 | 2020-07-23 | Frieslandcampina Nederland B.V. | Shaped cheese product |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4044193A (en) * | 1971-06-16 | 1977-08-23 | Prototech Company | Finely particulated colloidal platinum compound and sol for producing the same, and method of preparation of fuel cell electrodes and the like employing the same |
| SU593439A1 (ru) * | 1975-08-04 | 1980-10-07 | Ордена Трудового Красного Знамени Институт Химических Наук Ан Казахской Сср | Способ получени электропроводных фермент-ковакторных систем |
| US4166143A (en) * | 1977-01-24 | 1979-08-28 | Prototech Company | Control of the interaction of novel platinum-on-carbon electrocatalysts with fluorinated hydrocarbon resins in the preparation of fuel cell electrodes |
| US4321123A (en) * | 1978-04-21 | 1982-03-23 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Coenzyme immobilized electrode |
| JPS5816695B2 (ja) * | 1978-04-24 | 1983-04-01 | 松下電器産業株式会社 | 酵素電極 |
| JPS584982B2 (ja) * | 1978-10-31 | 1983-01-28 | 松下電器産業株式会社 | 酵素電極 |
| US4293396A (en) * | 1979-09-27 | 1981-10-06 | Prototech Company | Thin carbon-cloth-based electrocatalytic gas diffusion electrodes, and electrochemical cells comprising the same |
| US4478696A (en) * | 1982-07-21 | 1984-10-23 | Prototech Company | Ionizable reducing and oxidizing gaseous supply means and process for catalytic barriers and electrodes |
| GB8606824D0 (en) * | 1986-03-19 | 1986-04-23 | Univ Strathclyde | Biochemical detector |
| GB8612861D0 (en) * | 1986-05-27 | 1986-07-02 | Cambridge Life Sciences | Immobilised enzyme biosensors |
| GB8710472D0 (en) * | 1987-05-01 | 1987-06-03 | Cambridge Life Sciences | Amperometric method |
-
1987
- 1987-05-01 GB GB878710472A patent/GB8710472D0/en active Pending
-
1988
- 1988-04-28 IL IL86223A patent/IL86223A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-04-28 IL IL86222A patent/IL86222A0/xx unknown
- 1988-04-28 IE IE127488A patent/IE60238B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-04-29 JP JP63503839A patent/JPH01503409A/ja active Pending
- 1988-04-29 AU AU16861/88A patent/AU1686188A/en not_active Abandoned
- 1988-04-29 JP JP63503840A patent/JP2528956B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 KR KR1019880701786A patent/KR960001501B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-04-29 HU HU883273A patent/HU205625B/hu unknown
- 1988-04-29 GB GB8810180A patent/GB2204415B/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 ES ES88303921T patent/ES2058271T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 EP EP88303922A patent/EP0289345A1/en not_active Withdrawn
- 1988-04-29 AU AU16862/88A patent/AU612366B2/en not_active Expired
- 1988-04-29 GB GB8810181A patent/GB2204698B/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 EP EP88303921A patent/EP0289344B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 US US07/295,035 patent/US5122456A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-29 WO PCT/GB1988/000337 patent/WO1988008446A1/en unknown
- 1988-04-29 WO PCT/GB1988/000338 patent/WO1988008447A1/en active IP Right Grant
- 1988-04-29 DE DE88303921T patent/DE3882078T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-02 MX MX011347A patent/MX167769B/es unknown
- 1988-05-02 CA CA000565696A patent/CA1304127C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-30 RU SU884613363A patent/RU1806187C/ru active
- 1988-12-30 NO NO885836A patent/NO179953C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-12-30 FI FI886050A patent/FI92221C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-12-30 DK DK731988A patent/DK169559B1/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI92221C (fi) | Amperometrinen menetelmä 1,4-dihydronikotiiniamidiadeniinidinukleotidin (NADH) kvantitatiiviseksi määrittämiseksi liuoksessa | |
| Dicks et al. | Mediated amperometric biosensors for D-galactose, glycolate and L-amino acids based on a ferrocene-modified carbon paste electrode | |
| Zhao et al. | Direct electron transfer at horseradish peroxidase—colloidal gold modified electrodes | |
| US4356074A (en) | Substrate specific galactose oxidase enzyme electrodes | |
| NO176920B (no) | Enzymelektrode | |
| Gavalas et al. | Phosphate biosensor based on polyelectrolyte-stabilized pyruvate oxidase | |
| Lei et al. | Immobilization of enzymes on the nano‐Au film modified glassy carbon electrode for the determination of hydrogen peroxide and glucose | |
| Wang et al. | Carbon felt-based bioelectrocatalytic flow-through detectors: Highly sensitive amperometric determination of H2O2 based on a direct electrochemistry of covalently modified horseradish peroxidase using cyanuric chloride as a linking agent | |
| Bardeletti et al. | Amperometric enzyme electrodes for substrate and enzyme activity determinations | |
| Miscoria et al. | Enzymatic biosensor based on carbon paste electrodes modified with gold nanoparticles and polyphenol oxidase | |
| Jiang et al. | Amperometric ethanol biosensor based on integration of alcohol dehydrogenase with Meldola's blue/ordered mesoporous carbon electrode | |
| Wollenberger et al. | Quinoprotein glucose dehydrogenase modified carbon paste electrode for the detection of phenolic compounds | |
| US5378332A (en) | Amperometric flow injection analysis biosensor for glucose based on graphite paste modified with tetracyanoquinodimethane | |
| Kulys | Amperometric enzyme electrodes in analytical chemistry | |
| ERDEM et al. | Electrochemical biosensor based on horseradish peroxidase for the determination of oxidizable drugs | |
| Mazzei et al. | Peroxidase based amperometric biosensors for the determination of γ-aminobutyric acid | |
| Palleschi et al. | Amperometric probe for 3-hydroxybutyrate with immobilized 3-hydroxybutyrate dehydrogenase | |
| Kelly et al. | Amperometric immunosensor for lactate dehydrogenase LD-1 | |
| Wang et al. | Phenazine-dye-and Enzyme-modified Plastic Formed Carbon Electrode for Amperometric Dihydronicotinamide Adenine Dinucleotide and Glucose Sensing. | |
| EP0667521A1 (en) | Bod sensor and bod measuring method | |
| Yi-Tao et al. | Electrocatalytic oxidation and flow detection of NAD (P) H at a histidine modified silver electrode | |
| Mizutani et al. | Highly-Sensitive Measurement of Dihydroxyphenols Using Carbon Felt Electrode Impregnated with Fructose Dehydrogenase-Containing Solution. | |
| Kulys | Amperometrische Enzymelektroden in der analytischen Chemie | |
| Naser | Design and characterization of novel electrochemical biosensors | |
| Scheller et al. | Electro-Enzymatic Studies of the Interfacial Behaviour of Proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: CAMBRIDGE LIFE SCIENCES PLC |
|
| MA | Patent expired |