HU203131B - Process for producing new 1,12-dihydroxy-1,6,12,13-tetraaza-dicyclodokosan-2,5,13,16-tetron and pharmaceutical compositions containing them as active components - Google Patents

Process for producing new 1,12-dihydroxy-1,6,12,13-tetraaza-dicyclodokosan-2,5,13,16-tetron and pharmaceutical compositions containing them as active components Download PDF

Info

Publication number
HU203131B
HU203131B HU873357A HU335787A HU203131B HU 203131 B HU203131 B HU 203131B HU 873357 A HU873357 A HU 873357A HU 335787 A HU335787 A HU 335787A HU 203131 B HU203131 B HU 203131B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
bisucaberin
dihydroxy
tetron
tetraaza
medium
Prior art date
Application number
HU873357A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT46364A (en
Inventor
Masaaki Ishizuka
Toshiuki Kameyama
Shogo Kurasawa
Yoshiro Okami
Atsushi Takahashi
Hamao Umezawa
Original Assignee
Microbial Chem Res Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Microbial Chem Res Found filed Critical Microbial Chem Res Found
Publication of HUT46364A publication Critical patent/HUT46364A/hu
Publication of HU203131B publication Critical patent/HU203131B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás az új 1,12-dihidroxi1,6,12,17-tetraaza-ciklodokozán-2,5,13,16-tetron és ezt a vegyületet hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. Az (I) képlettel jellemezhető vegyületet a továbbiakban a Bisucaberin fantázianév alatt fogjuk említeni.
Először mi kezdtünk mikroorganizmusok által termelt, tumorelleni hatású anyagokat kutatni és kifejleszteni, és sikerült is néhány gyógyászatilag hatásos vegyületet találni, így a belomicin A és B vegyületeket [Umezawa, H. és munkatársai: I. Antibiot., 19A, 200 (1966)], valamint az aclacinomicint [Oki, T. és munkatársai: I. Antibiot., 30,683 (1977)]. Az eddig ismert, a tumorsejtek szaporodásának gátlására képes vegyületeknek azonban hátrányosan nagy a toxicitásuk.
Felismertük, hogy az Anteromonas genuszhoz tartozó mikroorganizmusok olyan új anyagot képesek előállítani, amelynek tumor elleni hatása van, különösen makrofág jelenlétében, ugyanakkor csekély a toxicitása.
A fentiek alapján a találmány tárgya eljárás az (I) képletű Bisucaberin előállítására. A találmány szerinti eljárás lényege az, hogy az Alteromonas haloplanktis fajhoz tartozó és Bisucaberint termelni képes valamelyik mikroorganizmust, célszerűen az Alteromonas haloplanktis SB-1123 mikroorganizmust tenyésztjük, majd a Bisucaberin-t a fermentléből elkülönítjük.
A Bisucaberin fizikokémiai tulajdonságai a következők:
(a) Külső megjelenés: színtelen kristályok (b) Olvadáspont: 190 ’C (bomlik) (c) Ibolyántúli abszorpciós spektrum:
Xmax (ε) - 215 nm (5740) matanolban, 215 nm (5700) 0,1 n sósavoldat és metanol elegyében (d) Molekulatömeg:
m/Z = 401 (MH+) SIMS-nél (szekunder ion tömegspektrometria) m/Z = 401 (MH+) EIMS-nél (elektron ion tömegspektrometria) (e) Összegképlet: C18H32N4O6 (f) Elemzési eredmények:
számított: C = 54,00% H = 8,00% N = 14,00% O = 24,00%;
talált C = 53,69% H = 7,97% N = 13,20% O = 25,14%.
(g) Infravörös abszorpciós spektrum: lásd az 1. ábrát (h) Proton-NMR-spektrum: lásd a 2. ábrát (i) 13C-NMR-spektrum: lásd a 3. ábrát
0) Oldékonyság: oldható dimetil-szulfoxidban, gyengén oldódik etanolban és rosszul oldódik vagy oldhatatlan vízben (k) Színreakciók: pozitív molibdén-kénsav reakcióban, tolidin-reakcióban és vas(III)-ldorid-reakcióban, negatív ninhidrin- reakcióban (l) Vékonyrétegkromatográfia szilikagélen (a Merck cég 5715 számú terméke):
Rf = 0,52 kloroform és metanol 90:10 térfogatarányú elegyével
Rf = 0,38 kloroform és metanol 92:8 térfogatarányú elegyével (m) Nagyfeszültségű papírelektroforézis (3000 V, 20 perc):
Rm = 0,0 hangyasav, ecetsav és viz 1:3:36 térfogatarányú elegyével, relatív mozgékonyságként megadva, az alanin mozgékonyságát 1,0-nak véve.
Az ismert anyagok egyike sem mutatja a fentiekben felsorolt jellemzőket, így tehát a Bisucaberin-t új anyagnak kell tekinteni.
Miként említettük, a találmány szerinti eljárás során az Alteromonas genuszhoz tartozó, Bisucaberin-t termelő mikroorganizmus tenyésztésével kapott fermentléből különítjük el a Bisucaberin-t. A Bisucaberin-t termelő mikroorganizmusokra példaképpen az Alteromonas haloplanktis SB-1123 törzset említhetjük. Ezt a törzset mi különítettük el talajmintából, amelyet Japánban az Aomori Prefektúrában mélytengeri régióban az altalajból különítettünk el. Ennek a törzsnek a mikrobiológiai jellemzői a következők:
(a) Morfológiai jellemzők:
1) a sejtek alakja és dimenziói: rúd alakú sejtek, 0,5-0,8 pm· 1,5-2,0 pm
2) mobilitás: mozgékony
3) spórák: nincsenek
4) Gram-féle festés: negatív (b) Tenyésztési jellemzők különböző táptalajokon:
1) húsleves-agar lemezes táptalaj: nincs növekedés
2) Z-médium-agar lemezes táptalajon: közepes növekedés, körkörös, lapostól konvexig, teljes, lágy, nedves-lumineszcens, átlátszó, halványsárga (Z-médium: 7,2 pH-jú tengervíz, amely 0,5% polipeptont és 0,1% élesztő extraktumot tartalmaz)
3) húsleves-agar ferde táptalajon: nincs növekedés
4) Z-médium-agar ferde táptalajon: közepes növekedés, némileg szóródó, nedves-lumineszcens, vajszerűen halványsárga
5) húsleves-folyékony táptalajon: nincs növekedés
6) húsleves-tengervíz folyékony táptalajon: közepes növekedés
7) húsleves-zselatin „stáb” táptalajon: nincs változás
8) húsleves-tengervíz-zselatin „stáb” táptalajon: elfolyósodás (c) Fiziológiai jellemzők:
1) nitrátok redukálása: negatív
2) denitrifikációs reakció: negatív
3) MR-teszt: negatív
4) VP-teszt: negatív
5) hidrogén-szulfíd termelése: negatív
6) keményítő hidrolizálása: negatív
7) pigmentek termelése: nem termel vízoldható pigmenteket
8) oxidáz: pozitív
9) kataláz: pozitív
10) növekedési tartományok: hőmérséklet: jó növekedés 10 ’C és 34 ’C között (optimális tar-21
HU 203 131 Β tomány: 14-30 ’C), nincs növekedés 4 ’C- nál és 39 ’C-nál pH: 6-9
11) viselkedés oxigénnel szemben: aerob
12) Hugh-Leifson-módszer szerinti O-F-teszt: nem termel savakat
13) dekarboxiláz-reakció: negatív lizinre és argininre
14) tápanyag-szükséglet: nincs növekedés tengervíz vagy hasonló összetételű, szervetlen sókat tartalmazó oldat távollétében
15) vegyületek hasznosítása:
D-glükóz +, N-acetil-glükózamin +, D-mannóz +, borostyánkősav +,
D-fruktóz +, fumársav +, szacharóz +, citromsav +, maltóz +, akonitsav -, cellobióz -, eritrit -, melibióz -, mannit -, laktóz glicerin -,
L-treonin -, y-amino-vajsav -,
L-tirozin ±, D-szorbit -, putrescin -, maleinsav -, keményítő ±, α-ketoglutársav -, glükonsav -.
16) DNA GC-tartalma: 44,1%.
A mikroorganizmus fentiekben említett mikrobiológiai jellemzői a következőképpen foglalhatók össze:
(1) A mikroorganizmus tengeri baktérium.
(2) Csak aerob körülmények között növekszik.
(3) Gram-negatív bacillus.
(4) Mozgékony sejtvégi ostora segítségével.
(5) Szacharidokat oxidatív módon bontja és hasznosítja.
(6) DNA-GC tartalma: 44,1%.
A fentiekben ismertetett jellemzők fényében a Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology című könyv (megjelent Krieg, N.R. és Holt, J.G. szerkesztésében a Williams és Wilkins Co. baltimore-i, amerikai egyesült államokbeli kiadó gondozásában) 1984-ben kiadott első kötetében végzett kutatás azt az eredményt hozta, hogy a fenti mikroorganizmus szoros összefüggésben van az Alteromonas genusszal. így tehát a mikroorganizmust az Alteromonas genuszhoz tartozó baktériumként azonosítottuk.
A speciesen a későbbiekben végzett vizsgálatok azt mutatták, hogy a mikroorganizmus azonos az Alteromonas haloplanktis mikroorganizmussal a következő fontosabb jellemzők alapján: nem növekszik 4 'C-on; hasznosít olyan vegyületeket, mint a D-mannóz, szacharóz, maltóz, N-acetil-glükóz-amin, borostyánkősav, fumársav és citromsav (ezek szénforrások); nem hasznosít olyan vegyületeket, mint az eritrit, glicerin, szorbit, maleinsav és α-keto-glutársav (ezek szénforrások); és nem képez oldható pigmenteket. Bár az a tény, hogy szénforrásként nem képes hasznosítani az akonitsavat, nincs összhangban a szakirodalmi leírással, ez a tény nem olyan jelentős különbség, hogy ezt a mikroorganizmust meg lehessen különböztetni az Alteromonas haloplanktis-tól. így tehát a mikroorganizmust Alteromonas haloplanktis-ként (ZoBell és Upham 1944, Reichelt és Baumann 1973) azonosítottuk. Ugyanakkor azt sem tudjuk biztosan, hogy az a tény, hogy ez a mikroorganizmus nem tudja hasznosítani az akonitsavat, befolyásolja-e egyáltalán a Bisucaberint termelő képességet, de általában az akonitsav hasznosíthatósága nincs semmilyen összefüggésben a Bisucaberin termelésével.
A mikroorganizmust Alteromonas haloplanktis SB1123 név alatt a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Sciences and Technology, Ministry of International Trade and Industry of Japan törzsgyűjteményben deponáltuk, ahol a FERM P-8803 deponálási számot kapta, erről a FERM BP-1360 számra lett áthelyezve. A mikroorganizmuson túlmenően a találmány szerinti eljárás természetesen megvalósítható a mikroorganizmus mesterséges vagy spontán mutációja útján kapott variánsok bármelyikével, feltéve, hogy ezek képesek Bisucaberin-t termelni. Figyelembe véve, hogy az Alteromonas haloplanktis SB-1123 tengervizet tartalmazó táptalajban termel Bisucaberin-t, és maga is az óceánból származó mikroorganizmus, feltételezhető, hogy más Alteromonas specieszek is termelnek Bisucaberin-t.
A Bisucaberin-t termelni képes mikroorganizmus tenyésztését olyan táptalaj felhasználásával végezzük, amelyet úgy állítunk elő, hogy szénforrásokat, nitrogénfoirásokat, szervetlen ionokat és kívánt esetben vitaminokat és aminosavakat oldunk fel tengervízben (beleértve a mesterséges tengervizet is). Szénforrásként bármely, a mikroorganizmusok tenyésztéséhez szokásosan használt szénforrást használhatunk. Előnyös példaként említhetjük a szénhidrátokat, így például a glükózt, szacharózt, keményítőt és dextrint. Nitrogénfoirásként is bármely, a mikroorganizmusok tenyésztéséhez szokásosan használt nitrogénforrást használhatunk. Példaként említhetjük a peptont, keményítőextraktumot, húsextraktumot, kukoricalekvárt, szójalisztet, kazeint és az ammónium ionokat. A Bisucaberin hatékony termelése céljából előnyösen úgy járunk el, hogy szárított tintahalból és/vagy szárított szardíniából, előnyösen Eugraulis japonica-ból - ezeket feldolgozott formában, például őrölt formában használva - mesterséges tengervízzel készült táptalajt használunk. A tenyésztést előnyösen folyékony kultúrában, keverés és levegőztetés mellett végezzük. A tenyésztési hőmérsékletet rendszerint 10 ’C és 35 ’C, előnyösen 24 ’C és 30 ‘C között választjuk meg. A tenyésztést addig végezzük, míg a feimentlében elegendő mennyiségű Bisucaberin halmozódik fel. Ehhez rendszerint 16 óra és 5 nap közötti időre van szükség.
A fermentléből a Bisucaberin elkülönítését szokásos módon végezhetjük. így például úgy járhatunk el, hogy a feimentlét centrifugáljuk, majd a felülúszót átbocsátjuk szintetikus abszorbens gyantából készült rétegen, majd a terméket tartalmazó frakciókat addig koncentráljuk, míg kristályok csapódnak ki. Végül a kristályokat tisztítjuk.
A találmány szerinti eljárással előállított Bisucaberin tumor elleni hatású. így például növeli a makrofá3
HU 203 131 Β goknak rákos sejtekkel szemben kifejtett citolitikus aktivitását és gátolja a rákos sejtek osztódását.
A találmányt közelebbről a következő kiviteli példákkal kívánjuk megvilágítani.
1. példa liter, 7,2 pH-jú, 2% tintahalat és 1% szárított szardíniát (Eugraulis japonica) - mindkettőt őrölt formában - tartalmazó és készeresére hígított mesterséges tengervízzel (a Jamarin Laboratory Inc. japán cég által Jamarin S márkanév alatt forgalmazott termék) készült táptalajjal beoltunk az Alteromonas haloplanktis SB1123 (FERM BP-1360) törzzsel. A tenyészetet ezután rázatás közben 3 napon át 27 ’C-on inkubáljuk.
A tenyészetet ezt követően centrifugáljuk, majd a felülúszóból 7 litert átbocsátunk 500 ml Diaion HP-20 gyantával (a Mitsubishi Kaséi Ltd. tokiói cég gyártja) töltött oszlopon. Az oszlopot 5 liter vízzel mossuk, majd aceton és víz 50:50 térfogatarányú elegyével eluáljuk, 2 literes aktív frakciókat szedve. Az egyesített aktív frakciókat csökkentett nyomáson betöményítjük, a nyers kristályok kicsapása céljából. A kristályokat acetonnal, majd etil-acetáttal mossuk, amikor is a Bisucaberin kristályait kapjuk 2 g mennyiségben.
Ha a kristályok barna színűek annak következtében, hogy szennyeződést tertalmaznak, könnyen átalakíthatok színtelen, lemezszerű tiszta kristályokká a következőképpen: szilikagéllel töltött oszlopon kromatografálásnak vetjük a kristályokat alá, eluálószerként kloroform és metanol 96:4 térfogatarányú elegyét használva. Az aktív frakciókat összegyűjtjük, majd bepároljuk, amikor is tiszta Bisucaberin-t kapunk.
2. példa
Ebben a példában a Bisucaberin-nek a makrofágok által rákos sejtekre kifejtett citolitikus aktivitás vonatkozásában mutatott hatását vizsgáljuk.
Peritoneális exudátumban található sejtekből makrofágokat nyerünk azáltal, hogy 8 hetes nőstény egereknek (C3H/HeN törzs) 10%-os proteosz-peptont (a Difco cég terméke) intraperitoneálisan injektálunk, majd a műanyaghoz nem tapadó sejteket elkülönítjük. Kísérleti rákos sejtként fibroszarcoma L-l023 sejteket (a National Institute of Health tokiói kutatóintézetből, Dr. Tokunaga, T. kutatótól kaptuk) használunk, amelyeket az említett törzshöz tartozó egerekben metil-kolantrén beadása útján váltunk ki, majd ezeket a sejteket előzetesen jelezzük triciált timidinnel. A sejtek tenyésztését RPMI 1640 jelzésű táptalajon (a GIBCO Life Technologies Inc., Grand Island, New York állam, Amerikai Egyesült Államok, terméke) 37 ’C-on 5% szén-dioxid jelenlétében végezzük.
lyukú mikrolemez lyukaiba lyukanként 2·105 sejtet mérünk be a makrofágokból és 1-104 sejtet mérünk be a kísérleti rákos sejtekből, majd előre meghatározott mennyiségű Bisucaberin jelenlétében 2 napon át inkubálást végzünk. Ezután mérjük a lízist szenvedett rákos sejtekből felszabaduló tríciumnak a táptalaj felülúszójából átjutó mennyiségét. A kapott eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg. A citolitikus ak4 tivitást a következő egyenlet alapján kiszámított %-os citolízisként adjuk meg:
%-os citolízis - [(a kísérleti feszabadulás mennyisége) - (a spontán felszabadulás mennyisége)] / [(a maximális felszabadulás mennyisége) - (a spontán felszabadulás mennyisége)], mely egyenletben a (spontán felszabadulás menynyisége) az az érték, amelyet akkor kapunk, amikor nem adunk mintát a tenyészethez, és (a maximális felszabadulás mennyisége) az az érték, amelyet akkor kapunk, amikor a makrofágok helyett 0,5% SDS-t adagolunk.
1. táblázat
Beadagolt Bisucaberin 4 mennyisége (pg/ml, végső koncentráció) Százalékos Makrofágok (%) citolízis - Makrofágok (%)
67 38,6 41,5 15,3
33 64,8 71,8 12,0
11 45,7 47,1 6,5
3,6 13,3 14,8 0,3
1,2 2,8 - -
0 0 - 0
3. példa
Vizsgáljuk a Bisucaberin-nek egereknél a leukémia L-1210 sejtek és az IMC karcinóma sejtek (saját tenyésztésünk) növekedésének gátlásában kifejtett hatását. A kísérleti körülmények a következők:
(1) Tumorsejtek:
a) L-1210: 10% borjú szérumot tartalmazó MEM-táptalajon egyszeri passzázzsal tenyésztett
b) IMC-karcinóma: 10% boíjúembrió szérumot tartalmazó RPMI 1640 táptalajon végzett passzázzsal tenyésztett.
A kísérleteket megelőző napon kezdett tenyésztés során az exponenciális fázist elért tumorsejteket használjuk fel a kísérletek során.
(2) Minta:
Bisucaberin-t feloldunk dimetil-szulfoxidban, amelynek térfogatát úgy választjuk meg, hogy a végső oldat térfogatának 10%-át adja. Az oldathoz 5 μΐ mennyiségben Tween 80 márkanevű felületaktív anyagot adunk, majd MÉM táptalajjal (a korábban említett GEBCO cég terméke) a hatóanyag koncentrációját 2 mg/ml-re állítjuk be. Ezt a törzsoldatot hígítjuk azután sorozatban hat fokozatban az említett táptalajjal, minden egyes esetben négyszeres hígítási arányt alkalmazva.
(3) Módszer
a) 96 lyukú mikrolemezbe lyukanként a mintaoldatból 10 pl-t töltünk, minden egyes kísérleti körülmény esetében 3-3 lyukat hasznosítva.
HU 203 131 Β
b) A tumorsejteket a tenyésztéshez használt megfelelő táptalajokban szuszpendáljuk 1·105 sejt/ml arányban, majd ezeket a szuszpenziókat felvisszük a mikrolemezre, egy-egy lyukba 0,2 ml-t juttatva.
c) Szén-dioxidos inkubátorban 37 °C-on 48 órán át tenyésztést végzünk, majd elveszünk 0,1 ml sejtszuszpenziót és ezt százszorosára hígítjuk ISOTON Π jelzésű anyaggal, vagy fiziológiás sóoldattal. Az így kapott hígításban a sejtek számát Coulter típusú számlálóval megszámoljuk.
d) A sejtnövekedés százalékos gátlását a kontrollal összehasonlításban a mintaoldat minden egyes hígítására kiszámítjuk. A kapott eredményeket felvisszük megfelelő papírra, hogy létrehozzuk a Bisucaberin koncentrációja és a százalékos gátlás összefüggése adta görbét. Ebből a görbéből meghatározzuk az ICso értéket, azaz azt az értéket, amely megfelel a Bisucaberin 50%-os gátlást biztosító koncentrációjának. A százalékos gátlási és IC50 értékeket a 2. és 3. táblázatokban adjuk meg.
2. táblázat
Tumor- sejtek A minta koncentrációja (pg/ml) Sejtszám Százalékos gátlás
L-1210 kontroll 2888±106
Bisucaberin 100,0 429±47 85
25,0 425±3 85
6,25 908±ll 69
1,56 2428±100 16
0,39 2727±151 6
IMC kontroll 3910+96
karci- Bisucaberin 100,0 557±26 86
nóma 25,0 547±16 86
6,25 1712±24 56
1,56 3374±44 14
0,39 3602±2 8
Visszatérve az ábrákra, a 2. ábra tehát a Bisucaberin infravörös abszoipciós spektrumát mutatja be. A 3. ábrán referenciaanyagként tetrametil-szilánt használva, dő-DMSO-val készült oldatban a Bisucaberin protonNMR-spektrumát adjuk meg. A 4. ábrán referenciaanyagként DMSO-t használva dö-DMSO-val készült oldatban a Bisucaberin 13C-NMR-spektrumát adjuk meg.
4. példa pmól/ml foszfatidil-kolint, 2 pmól/ml foszfatidilszerint és 1 mg/ml Bisucaberin-t tartalmazó kloroformos oldatot lombikban csökkentett nyomáson filmmé bepárolunk, majd liposzóma-készítményt állítunk elő úgy, hogy Nortex-keverővel vizet adagolunk a kloroformnak vákuumban való tökéletes eltávolítása után. Ezután 0,2 pm lyukméretű membrán-szitán át való szűréssel sterilizálást végzünk. Ez a művelet a liposzómák szemcseméretét egységesíti. A készítmény 4 ‘C-on több, mint egy hónapon át biztonságosan tárolható nitrogéngáz alatt. A készítmény felhasználható orálisan, nem- orálisan vagy helyileg.

Claims (3)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás az új (I) képletű l,12-dihidroxi-l,6,12,17tetraaza-ciklodokozán-2,5,13,16-tetron előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Alteromonas haloplanktis fajhoz tartozó mikroorganizmust tenyésztünk, majd a fenti vegyületet a fermentléből elkülönítjük.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az Alteromonas haloplanktis fajhoz tartozó mikroorganizmusként az Alteromonas haloplanktis SB1123 (FERM BP-1360) törzset tenyésztjük.
  3. 3. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) képletű vegyületet a gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
    3. táblázat Tumorsejtek IC50 (pg/ml) L-1210 3,9 EMC karcinóma 5,1
HU873357A 1986-07-22 1987-07-21 Process for producing new 1,12-dihydroxy-1,6,12,13-tetraaza-dicyclodokosan-2,5,13,16-tetron and pharmaceutical compositions containing them as active components HU203131B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP61170856A JPS6327484A (ja) 1986-07-22 1986-07-22 ビスカベリンおよびその製造法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT46364A HUT46364A (en) 1988-10-28
HU203131B true HU203131B (en) 1991-05-28

Family

ID=15912586

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU873357A HU203131B (en) 1986-07-22 1987-07-21 Process for producing new 1,12-dihydroxy-1,6,12,13-tetraaza-dicyclodokosan-2,5,13,16-tetron and pharmaceutical compositions containing them as active components

Country Status (8)

Country Link
US (1) US4870172A (hu)
EP (1) EP0254223A1 (hu)
JP (1) JPS6327484A (hu)
DK (1) DK380887A (hu)
FI (1) FI873195A (hu)
HU (1) HU203131B (hu)
PT (1) PT85372B (hu)
ZA (1) ZA875338B (hu)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3038064B2 (ja) * 1991-10-07 2000-05-08 日清製粉株式会社 インドール誘導体およびこれを有効成分とする抗潰瘍薬
IL107017A (en) * 1992-09-18 1998-01-04 Sankyo Co History of thiomarinol, processes for their preparation, and pharmaceutical preparations containing them
US5298618A (en) * 1992-11-23 1994-03-29 Texaco Chemical Company Macrocyclic oxamides
US5840656A (en) * 1994-02-23 1998-11-24 Auxein Corporation Method for increasing fertilizer efficiency
US6534446B1 (en) 1994-02-23 2003-03-18 Emerald Bioagriculture Corporation Method to mitigate plant stress
US5439873A (en) * 1994-02-23 1995-08-08 Plant Growth Development Corporation Method for stimulating plant growth using GABA
TW200819540A (en) 2006-07-11 2008-05-01 Genelux Corp Methods and compositions for detection of microorganisms and cells and treatment of diseases and disorders

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2803528C2 (de) * 1977-03-09 1984-10-18 Tabushi, Iwao, Kyoto Schwermetallionen-Adsorbens und dessen Verwendung zum Adsorbieren von Schwermetallionen

Also Published As

Publication number Publication date
PT85372A (en) 1987-08-01
FI873195A0 (fi) 1987-07-20
PT85372B (pt) 1990-04-30
JPS6327484A (ja) 1988-02-05
HUT46364A (en) 1988-10-28
ZA875338B (en) 1988-03-30
US4870172A (en) 1989-09-26
DK380887A (da) 1988-01-23
DK380887D0 (da) 1987-07-21
EP0254223A1 (en) 1988-01-27
FI873195A (fi) 1989-01-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR850001050B1 (ko) 악타플라닌의 가비당체의 제조방법
HU211514A9 (en) Fr 901228 substance and preparation thereof
EP0182315B1 (en) Novel antibiotic nk84-0218 pharmaceutical compositions containing it and process for the production of the same
HUT58820A (en) Process for producing new polypeptides
HU203131B (en) Process for producing new 1,12-dihydroxy-1,6,12,13-tetraaza-dicyclodokosan-2,5,13,16-tetron and pharmaceutical compositions containing them as active components
WO2007007399A1 (ja) チアゾール系化合物
KR100271997B1 (ko) Fa-70d물질, 이를 생산하기 위한 방법 및 그 용도
JP2004210648A (ja) 新規マクロライド化合物及びその製造方法
TOKI et al. PS-990, A NOVEL NEURITOGENIC COMPOUND FROM Acremoniums p.
Freitag et al. New aminocoumarin antibiotics from a cloQ-defective mutant of the clorobiocin producer Streptomyces roseochromogenes DS12. 976
JPH07313180A (ja) 新規ポリエン化合物
JPS6310797A (ja) 抗生物質ｆ―０７６９
MXPA02000173A (es) Nuevos alcaloides de indolocarbazola de un actinomiceto marino.
US5770587A (en) Antifungal agents
KR0184752B1 (ko) 신규한 마크롤라이드계 항생물질과 그를 생산하는 미생물
EP0381124B1 (en) Novel antibiotic nk130119, process for production of the same and application of the same
JP2000239266A (ja) 新規ポリエン系抗生物質
JP2856379B2 (ja) 蛋白質脱リン酸化酵素阻害剤及び抗腫瘍剤
US5702929A (en) Antifungal agent
JPH04243894A (ja) 新規ｑ−６４０２化合物およびその製造法
HU203582B (en) Process for producing amicin, amicin derivatives and pharmaceutical compositions containing them, and fungicide compositions containing them
JPS6250474B2 (hu)
JPS5946502B2 (ja) 新規抗生物質ポリミキシンｔ↓１
JPH03206099A (ja) 抗生物質ｋｓｙ―５およびその製造法
JPH07188286A (ja) 環状デプシペプチド及びこれを含有する強心剤