HU195774B

HU195774B - Process for producing new delta-butirolactame derivatives and pharmaceutical compositions containing them as active component

Info

Publication number: HU195774B
Application number: HU853219A
Authority: HU
Inventors: Yan-Rong Chen; Liang Huang; Ulrich Benz; Ming-He Yang; Geng-Tao Liu
Original assignee: Chinese Acad Med Science; Bayer Ag
Priority date: 1984-08-24
Filing date: 1985-08-23
Publication date: 1988-07-28
Also published as: DK385285A; KR860001787A; JPH0660159B2; ES546381A0; EP0172514A1; PT81005A; US4879390A; PT81005B; ES8704457A1; EP0172514B1; HUT38904A; AU571729B2; GR852050B; ES8609241A1; IL76157A; ES554061A0; DK385285D0; FI853228A0; ATE46504T1; ZA856414B

Description

A találmány tárgya eljárás új fenil- és benzil-é-butirolaktám-ezármazékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállításéra.

Az új fenil- és benzil-helyetteeítetl £-butirolaktám-származékok (a továbbiakban claueenaraid ás származékai) hipoxiától és amnéziától védő hatásúak.

A clausenamidot a Rutaceae Clausena fajba tartozó növényekből izoláljuk.

A Rutaceae Clausena anicatáról leírták, hogy Afrika egyes területein népi gyógyszerként használatos [Mester I. és munkatársai: Planta Medica 32 (l) 81, 19771. Azt is közölték, hogy a Clausena indica Oliv. kardiovaszkuláris hatású, és hogy a Clausena pentaphalla (Roxb.) DC-ből elkülönített két kumarinszármazék, a C.lausmarin A és B spazmolitikus aktivitásúak [Dhan Prakash és munkatársai: Phytocheiu. 17, 1194 (1978);

Aboo Shoeb és munkatársai J. C. S. Chem. Comraun. 281, (1978)). A különböző Clausena fajok gyökereiből, száraiból és más részeiből eddig már körülbell 50 alkotóanyagot különítettek el. Ezek legtöbbje kumarin-, karbazolés terpenszérmazék. Ezideig összesen kétféle lineáris karbonsavamidot talállak Clausena fajok leveleiben [5· R. Johns éa munkatársai: Aust. J, Chem. 20, 2795, (1967); Dhan Prakash és munkatársai: Indián J. Chem. Sect. Β 19B (12) (1975)].

Ügy találtuk, hogy a Clausena lansium levelei fenil- és benzilcsoporttal helyettesített é-butirolaktámot tartalmaznak két sztereoizomer formában: az (la) képletű clausenamid és az (lb) képletű vegyüiet formájában, valamint egy ezekkel szerkezetileg közeli rokonságban lévő biciklusos butirolaktáraot ia tartalmaznak.

Azt tapasztaltuk, hogy a clausenamid és származékai számos értékes gyógyászati hatással bírnak. E vegyületek szerkezetét kémiai Bzártnazékképzéssel és spektroszkópiás adatok alapján állapítottuk meg.

A találmány szerint előállított clausenamid-származékok (Id) általános képletében

R¹	jelentése hidrogénatom, 2-5 szénatomos alkanoíl-CBoport, vagy R¹ és R³ együtt vegyértékkőtest alkot,
R¹	jelentése hirogénatom, hidröxilcsoport, 2-5 azénatomos alkanoil-oxi-caoport,
R^J	jelentése hidrogénatom,
R*	jelentése hidrogénatom vagy
R³ és R«	vegyértékkötést alkot vagy

R² és R³ együtt oxocsoportot alkot.

Az aikanoilcsoport helyettesítők közül előnyös az acetilcsoport.

Az (Id) általános képletű vegyületek közül előnyösek azok, amelyekben R² jelentése hidrogénatom és a többi helyettesítő jelentése az előzőekben megadott.

Az előzőekben említett, a Clausena lunsium leveleiből izolálható vegyületek az (la), (Ifc), illeLve (Jc) képletben bemutatott szerkezetűek. A vegyületek térbeli szerkezetét röntgensugár kristály-diffrakcióval igazoltuk.

A találmány szerint az (la) képletű clausonainidot. az alábbi eljárással izoláljuk:

a) a Clausenu lansium leveleit forrásban lévő vízzel kezeljük;

b) a tömény vizes extraktumot abszorbenseel, például azilikagéllel, alumínium-oxiddal, homokkal, celliltel, cellulózzal vagy poharaiddal keverjük össze;

c) azt abszorbenst szerves oldószerrel, például kloroformmal, etil-acetáttal, éterrel, metilén-kloriddal vagy etilé n-kloriddal, előnyösen kloroformmal extraháljuk;

d) a szerves eluátumot betöményítjük és

e) a kapott koncentrátumot hideg 1-6 ezénatomos alkohollal vagy 2-6 szénatomos ketonnal, például metanollal mossuk.

A találmány körébe tartozik még az (Ic) képletű vegyüiet előállítási eljárása is, amely a kővetkező lépésekből áll:

a) a Clausena lansium leveleit forrásban lévő vízzel kezeljük;

b) a tömény vizes extraktumhoz híg savai, például hidrogén-kloridot adunk;

c) a felülúszót kationcserélő gyantán, előnyösen H*-formában lévő gyantán engedjük át;

d) a gyanát bázissal, előnyösen vizes ammóniával kezeljük;

e) a gyantát szerves oldószerrel, például éterekkel kloroformmal, metilén-kloriddal, 1-6 szénatomos alkoholok ecetsav-észterével, vagy 2-6 szénatomos ketonokkal, előnyösen dietil-éterrel kezeljük;

f) a kapott tömény extraktumot szilícium-dioxidon vagy alumínium-oxidon kromatografáljuk kloroform, metilén-klorid-éter, vagy kloroform-metanol elegy eluensként való alkalmazásával éti g} az (1c) vegyületnek megfelelő R/-értéku eluátuinokat (szilikagélen kloroform eluens alkalmazásával Rr=0,80) összegyűjtjük és besűrítjük.

A találmány körébe tartozik az (lb) képletű vegyüiet izolálási eljárása is, amelyet a következő módon végzünk:

a) Clausena lansium leveleit forrásban lévő vízzel kezeljük;

b) a vizet lepároljuk az extraktumról éa a visszamaradó anyagot híg savban, például hidrogén-kloridban oldjuk;

c) a felülúszót a kationcserélő gyantán, előnyösen H’-forinájú gyantán engedjük át;

a) a gyantát bázissal, például vizes ammóniával kezeljük;

e) a gyantát szerves oldószerrel, például éterekkel, kloroformmal, metilén-kloriddal, 1-6 szénatomon alkoholok ecetsav-ószterével vagy 2-6 szénatomos ketonokkal extrahüljuk;

f) a tömény extraktumot szilicium-dioxidon vagy aluminium-oxidon kromatografáljuk, fi eluensként kloroformot, metilén-kloridot, étert vagy kloroform-metanol elegyet alkalmazunk ég

g) az (Ib) képletű vegyületnek megfelelő eluálumokat (vókonyrétegkromatográfiás ellenőrzés alapján) összegyűjtjük, majd bepároljuk (az Rf érték szilikagélen, kloroform eluenssei 0,20).

A fenti módon kapott nyerstermékeket előnyösen alkoholból, például metanolból vagy etanolból átkristályositjuk.

Az (la), (Ib) és (Ic) képletű vegyietekből az egyéb (Id) általános képletű vegyületek redukálással, példái katalitikus hidrogénézéssel, oxidálással, például króm-oxiddal, észter- és éterképzéssel állíthatók elő önmagukban ismert eljárásokkal.

Az (Id) általános képletű vegyületek állatkísérletekben vizsgálva határozott, agyi hipoxiától és amnéziától védő hatást mutatnak, amely hatás jelentősen nagyobb az agyterápiában és nootropikumként alkalmazott, szerkezetileg az (Id) általános képletű vegyületekhez legközelebb álló (II) képletű piracetam hatásánál.

Az (Id) általános képletű vegyületek állatoknak még igen magas dózisban adagolva sem okoznak jelentős viselkedésbeli változást. A hipoxiától védő hatást nyilvánvalóan nem valamely nemspecifikus nyugtató hatás okozta, amely csökkent oxigénigényt idézne elő. Az (Id) általános képletű vegyületek akut toxicitását igen alacsonynak találtuk.

A találmány szerint a gyógyászati készítményeket előállíthatjuk például kenőcsők, gélek, paszták, krémek, permetek (beleértve az aeroszolos permeteket is), borogató folyadékok, szuszpenziók, oldatok és emulziók formájában; amelyek a hatóanyagot vizes vagy nem vizes hlgítóanyaggal hígítva, szirupok, granulumok vagy porok formájában tartalmazzák.

A készítményeket előnyösen eteril izotóniás vizes oldat formájában vagy tabletták, kapszulák, pilulák és kúpok formájában készítjük el. Ezekben a készítményekben a találmány szerint előállított vegyületeket önmagukban vagy segédanyaggal összekeverve alkalmazzuk.

A gyógyászati készítményekben, például granulátumokban, amelyeket tablettákká, drazsékká, kapszulákká és pilulákká formálunk, a következő segédanyagokat használjuk:

a) töltőanyagok, például keményítő, cukrok és kovasav;

h) kötőanyagok, például celiulózszármazékok, alginátok, zselatin vagy poliívinil-pirrolidon);

c) nedveaítószerek, például glicerin;

d) szétesést elősegítő szerek, például agar-ügar, kalcium-karbonát vagy nátrium-hidrogén-karbonát;

e) felszívódást gyorsító anyagok, például kvaterner ammónium vegyületek;

f) felületaktív szerek, például etil-alkohol;

g) abszorbeáló hordozóanyagok, például kaolin vagy hentonil;

h) csúszást elősegítő anyagok, például talkum, kalcium- és magnézium-sztearát és szilárd poti( éti lén-glikol)-ok.

Λ tabletták, kapszulák és pilulák formájában előállított készítményeket szokásos bevonatokkal, burkokkal és védómátrixokkal láthatjuk el, amelyek inattosító anyagot is tartalmazhatnak. A készítményeket úgy is kialakíthatjuk, hogy az aktív anyag a bélli-aktusnak csuk vagy főként egy szakaszán, lehetőleg egy adott időtartam alatt szabaduljon fel belőlük. A bevonatok, burkok és védőmátrixok például polimerekből vagy viaszokból készíthetők.

A hatóanyag mikrokapszulák alakjában is formálható az előzőekben felsorolt segédanyagok közül egyet vagy többet felhasználva,

A gyógyászati készítményeket és a gyógyszereket bármely, szakember számára ismert eljárással előállíthatjuk, például a hatóanyagot vagy hatóanyagokat egy vagy tóbb segédanyaggal összekeverve gyógyászati készítménnyé, például granulátummá alakítjuk, majd ezt gyógyszerré, például tablettává alakítjuk.

A találmány szerint előállított gyógyászati készítmények előnyösen 0,1-99,5 t% még előnyösebben 0,5-95 t% hatóanyagot tartalmaznak.

A gyógyszeradagolás előnyös napi dózisa 0,001-0,2 mg hatóanyag.

Az alábbiakban a találmányt példákban mutatjuk be.

I. Példa

Clausenamid {(fa) képletű vegyület/ izolálása kg szárított Clausena lansium (Lour) Skeels levelet vízzel forralunk. A vizes extraktumot 18 kg nyers sziruppá töményitjük be. A nyers szirupot szilikagéllel keverjük össze, majd a sziíikagélt kloroformmal extruhóljuk. A kloroformos extraktumot besűrítjük és a kapott barna szirupot hideg metanollal mossuk. Az így kapott sárgás port metanolból átkristályosítva tűkristélyok formájában nyerjük a clausenamidot.

A kapott clausenamid jellemzői a következők: fehér Lükristáiyok, op. 239-2-10 *C, [ccl^J1»=0,00 (0,53, metanol); a molekulukőplcl az elemzési eredmények és a nagy felbontású MS (M*: 297, 1364) alapján (CmHuNOa; forró metanolban, DMSO-ban, DMF-ban oldható, szokásos szerves oldószerekben, például kloroformban, diklór-inetánban, éterben, elil-acetátban, sth. gyengén oldódik.

ÍR V^Br»*»ciir*: 3-100, 3310, (OH), 1080 (amid), 1600, 1580, 1490, 1450, 740, 690 (uionoszubsztituált gyűrűk).

Η ljVx^Me0H««nm (Ige): 257 (2,70).

Nagy felbontású MS m/z: 297,1364 (M\

CuHieNCb), 298, 1148 (CieHa»NO₃), 191,0946 (CnHnNOa), 190,0881 (CnHiaNOa), 174,0912 (CuHiaNO), 162,0924 (CioHuNO), 144,0815 (CiöHioN), 134,0687 (CsHuO), 133,0646 <C»H₉0).

Elemzési eredmények:

talált: C%=72,39; H%=6,39; N%=4,5L foc]í^M*^a=-4<J® (0,225, metanolban),

Elemzési eredmények a CuHnNüa képlet alapján:

számítolt: C%=77,42; HX=6,09; N%=5,02;

taráit: C%=77,06; Il%=6,13; N%r4,7ti.

Nagy felbontású MS: (M*+l)=280,1371

111 7^κ**^γ·βχΓ4ιγ*: 1690 (amid-karbon.il), 308(1,

3060, 3010, 1600, 1500, 750, 730, 705, 700.

UV X^MeüHna>run (lg ε): 209 (4,35), 257 (2,60).

1. Táblázat

Clausenamid ((la) képletű vegyület] ¹H-NMR spektruma, kémiai eltolódások

2. Táblázat

Az (Ic) képletű vegyület ‘H-NMK spektruma 15 (deuterokloroforinban), kémiai eltolódások

PPm	hidrogén
3.05 (s; 3H)	N-CHa
3.50 (dd, J=10,8; IH)	C.-H
3.90 (d, J=10; IH)	Cj-H
4.30 (dd, J=8,2; IH)	Cs-H
4.65 (d, J=2; IH)	C,-H
4.70-5.40 (m; 2H)	OH
6.50-6.70 (m; 2H)	aromás H
6.90-7.30 (m; 8H)	aromáe H

ppm	hidrogén
2.15 (β; 3H)	N-Clh
3.50 (b; IH)	C.-H
4.19 Is; IH)	Cs-H
4.31 (b; IH)	Ca-H
5.30 Is. IH)	C7-ÍI
7.10-7.50 (; I0H)	aromás H

A ¹³C-NMR adatok a 9. táblázatban szerepelnek.

A clausenamid kémiai szerkezetét röntgensugár diffrakciós adatokkal is igazoltuk.

2. Példa

Az (Ib) és az (Ic) képletű vegyületek izolálása.

kg szárított Clausena Lansirum (Lour) Skeels levelet vízzel forralunk. A vizes extraktumot 18 kg nyers sziruppá tóményítjük be. 16 kg nyers szirupot 80 1 0,06 n hidrogén-kloriddal kezelünk és a felülúszót 48 kg Na*-formájú kationcserélő gyantából kapott nedves, H*-formájú kationcserélő gyantán engedjük át. A gyantát ezután ionmentes vízzel mossuk, 32,2 1 2%-os vizes ammóniutn-hidroxiddal kezeljük, majd 60 l dietil-éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumot besűrítjük, a maradékot kloroformban felvesszük és szilikagél oszlopon többször átengedjük, az arányt 100:1 és 20:1 között változtatjuk. Eluensként kloroformot alkalmazunk. Az Rf=0,80-as eluátumot í(Ic) képletű vegyület] és az Rr=0,20-as eluátumot [(Ib) képletű vegyület] gyűjtjük, majd besűrítjük. Az így kapott kristályokat metanolból átkristályositjuk, 0,18 g fehér, prizmás kristálya (le) képletű vegyületet - olvadáspontja 1.64-166 °C - és 3,31 g fehér, hexaéderes kristályát (Ib) képletű vegyületet - olvadáspontja 205-206 - nyerünk.

Az (Le) képletű vegyület jellemzői:

A ¹³C-NMR adatok a 9. táblázatban szerepelnek.

Az (Ib) képletű vegyület jellemzői: [cí]b^1ö=0,00 (0,29 metanolban)

Elemzési eredmények a CimHisNO3 képlet alapján:

si-.ámitott: C%=72,76; H%=6,45; N%=4,72;

talált: C%=73,00; H%=6,46; N%=4,50.

Nagy felbontású MS: (M*+l)=298,1453 (CisHsoNCh)

IR ^«wcnr¹: 3440, 3340 (OH), 1660 (amid-karbonil), 3060, 3030, 1600, 1490, 750, 770 (monoszubsztituált benzol)

UV X^MeOlfiaai nm (lg e): 258 (2,59)

3. Táblázat

Λζ (Ib) képletű vegyület Ή-ΝΜΗ spektruma (DMSO-ban), kémiai eltolódások 50 ppm hidrogén

90 (s; 3Ϊ1)

3 07 (t; J=7; Ilii

89 (m; 2H)

00 (dd, J=5,3; IH) 5 53 (d, J=7; Ili) θθ 5.73 (d, .1=5; 111)

6.75-6.93 (in; 211) 6.95-7,33; (m; Hit)

N-CHa

Ci-H

Cj-H; C₅-H C₇-ll

Cj-ΌΙϊ; LhO adagolásakor eltűni C7-OH; IhO; adagolásakor eltűnt aromás ll aromás ll

1957^f14

ΙΟ

A^l3C-NMR adatok a 9. táblázatban szerepelnek.

3. Példa

Az (Id) általános kcpletű clausenamid-Hzármazékok szintézise [a helyettesítők térállása azonos az (la) képletű clauaenamidnál megadott térálléseal]:

a) Az R^l=CHsCO-; R²rCHaCOO-; R³=R⁴=H helyettesítőket tartalmazó (Id) általános képletű vegyület előállítása

600 mg clausenamidot 100 ml 1*4 arányú vízmentes piridin - ecetsav anhidrid elegyben oldunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 24 órán át keverjük, majd 30 ml jeges vízre öntjük ée dietil-éterrel háromszor extraháljuk. Az éteres extraktumokat egymást követően 15 ml 2%-os hidrogén-kloriddal, 25 ml, 20 ml, majd 15 ml vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Ezután az extraktumból az oldószert eltávolítjuk. Ily módon 750 mg átlátszó szirupot nyerünk. Ezt a nyersterméket metanolból átkristályositva 570 mg fehér, hexaéderes terméket nyerünk. A kapott termék olvadáspontja 165-167 ®C.

Elemzési eredmények a CaaHaaNOs képlet alapján:

számított: C%=69,29; H%=6,04; N%=3,67;

talált: C%=69,12; H%=6,04; N%=3,68.

IR ·3^ΚΒγ»8χ cm¹: 1735 (észter-karboníl),

1715 (váll., észter-karboníl), 1700 (amid-karbonil), 1215 (C-O).

MS m/z (%): 382 tM*+l; 0,5), 261 (0,3), 232 (17), 172 (100), 144 (9), 91 (8), 43 (40).

4. Táblázat ¹H-NMR (CDCU-ban), kémiai eltolódások

ppm	hidrogén
1.88 (b; 3H\|	CHaCOO
1.98 (s; 3H)	CHaCOO
2.59 (s; 3H)	N-CHa
4.07 (dd, J:10.8; IH)	C.-H
4.43 (dd, J=8.2; IH)	Cs-H
5.72 (d, J=10; IH)	Ca-B
5.74 (d, J=2; 1K)	C.-H
6.08-7.50 (m; 10H1	aromás H

b) Az R^l=CfUCO-; R^a=R^a=R*=H helyettesítőket tartalmazó (Id) általános képletű vegyület előállítása

500 mg 3a) példa szerinti terméket 40 ml metanolban 200 nig ezénhordozós palládiumkatalizátor jelenlétében 40 ®C hőmérsékleten, 1,96.10* Pa nyomáson 7,5 órán át hidrogénezünk. A katalizátor eltávolítása után a reakcióelegyből eltávolítjuk az oldószert. Ily módon 464 mg átlátszó szirupot nyerünk. Ezt a Hzirupot bziliciuin-ditoi időn krnuinl.ogrnfiílvn a cím szerinti termékei nyerjük Huim-f formában. A termék Hf értéke 0,58 szilicium-dioxid vékonyrétegen, 95:5 arányú benzo) - melano) futtal.óelegy alkalmazásával.

IR ciir¹: 1740 íészter-karbonil),

1710 (uuiid-karhonil), 1203 (C-O).

5. Táblázat *H-NMR (CDCU-ban), kémiai eltolódások

PPm	hidrogén
2.10 (e; 3il)	CHsCOO
2.49 (dd, J=2.K; 211)	c.,-11
2.56 (a; 311)	N-CHa
3.78-4.18 (nr, 211)	C.-H, Cs-H
G.03 (d, J=lü; IH)	Ca-H
6.78-7.00 (n.; 2H)	aromás H
7.11-7.51 (ni; 8H)	aromás 11

MS m/z (%): 324 (M+l; 37), 264 (M-60; 4), 232 (M-91; 39), 172 (M-60-91; 100), 91 (39).

c) Az RíxR’zRSrR^sH helyettesitőket tartalmazó (Id) általános képletű vegyület előállítása mg 3b) példa szerinti terméket 2 ml 2%-ob KOH-metanolban vízfürdőn 50 percig melegítünk. Ezután 2 ml vizet, 5 ml kloroformot és 2 ml metanolt adunk a reakcióelegyhez. A kloroformos fázist elkülönítjük, nátrium-szulfáton szárítjuk, majd besűrítjük. Az így kapott átlátszó szirupot éter hozzáadásával kristályosítjuk. Fehér kristályos anyagot, nyerünk. A kapott, cim szerinti termék olvadáspontja 123-125 ^eC.

IR -s^Kllruai r.nr^J: 3290 (OH), 1680 (amid-kurbonil)

MS m/z {%): 282 (M+l; 5), 190, (1) képletű csoport; 100, 162 (190-CO; 3fi), 134 (47), 91 (42).

d) Aí Η⁴+Η’:0 helyettesiiókel tartalmazó (ld) általános képiéi ü vegyüld előállítása

1,5 g clausenamidot 20 ml piridinben 30 nil Confortb reagenseel oxidálunk. (A Conforth reagenst úgy készítjük, hogy 27 ml jégbe hűtött piridinbt: 3 g Or<h 3 ml vízben készült oldalát, adjuk.) A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, ezután 100 ml vízbe öntjük, majd dietil-éterrel extraháljuk. Az éteres oldatot vízzel kétszer mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldatból az oldószert eltávolítjuk, és a visszamaradó η

anyagot metanolból kristályosítjuk. A cím szerinti terméket fehér prizmák formájában nyerjük. A kapott termák olvadáspontja 207-210 °C.

|,fb”=0,00 (0,26 CHCb-banJ in -j^KBr»ax cm-¹: 3260 (OH), 1690 (aromás keton), 1670 (amid-karbonil), 3060, 3040,

1600, 1500.

UV >«-««.„ nm (lg ε): 205 (4,31), 252 (4,07) MS m/z (X) 295 (M*; 1) 190 (1) képletű csoport, 100, 162 (19O-C0; 45), 134 (70), 133 (40), 105 (35), 91 (20), 77 (50).

6. Táblázat ^!H-NMR (CDCb-ban), kémiai eltolódások

PPm	hidrogén
2.01 <br; 1H)	OH
2.92 (s; 3H>	N-CHa
3.86 (t, J-8; 1H)	Ca-H
4.95 (d, J=8; 1H)	C₅-H
5.40 (d, Jr8; 1H)	c₃-h

e) Az Ri=R^{* * * * 8}=H; R’+R^vegyértékkótés helyettesítőket tartalmazó (Id) általános képlet vegyületek előállítása

150 mg clausenamídot leforraaztott csőben 30 ml 6 n hidrogén-kloriddal kezelünk. A kezelés végén fehér petyhek jelennek meg az oldatban. Az elegyet szűrjük, majd a szűrletet 60, 50, majd 40 ml éterrel extraháljuk. Az éterea extraktumokat egyesítjük és vízzel egyszer mossuk. Az extraktumot szárítjuk, és az étert eltávolítjuk belőle. Ily módon átlátszó szirupot nyerünk, amelyet éterből kristályosítunk. A nyers reakcióterméket éterből átkristályosítjuk. A cím szerinti terméket fehér tukristályok formájában nyerjük. A kapott termék olvadáspontja 188-190 °G.

Nagy felbontású MS: 279,1176 (A CwHwNOj képletre számított: 279,1259).

MS m/z (X): 279 (M*, 100)

IR ι^ΚΒγ·μ cm·¹: 3300 (OH), 1680 (amid-karbonil), 1600, 1490, 768, 750, 710.

UV λ^ΜβθΗ»„ nm (lg e): 220 (3,60), 263 (2,90).

7. Táblázat ^lH-NMR (CDCb-ban), kémiai eltolódások ppm hidrogén

2.57 (s; 1H) OH (DjO adagoláskor eltűnt)

N-CHj

3.99 (in; 111)

4.36 (m; 3H)

90-7.55 (rn; 9(1) aromás

A ^UC-NMK adutok a 9. táblázatban szerepelnek.

f) Az IU'-i'IíjCO-; R^a=H; R^a+l?-kámiai kötés helyettesítőket tartalmazó (lel) általános képletű vegyület előállítása mg 3e) példa szerinti vegyületet 1,5 ml 1:1 iirányú ecetsavanidrid - piridin elegyben oldunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten kél napig állni hagyjuk. Ezután az illékony komponenseket vákuumban kiaesztilláijuk az elegyből. A visszamaradó anyagot 3 ml kloroformban oldjuk. A kloroformos oldaLol 2 ml 10%-os ainmónium-hidroxiddal, majd háromszor 2 ml vízzel mossuk. Ezután az oldatból az oldószert eltávolítjuk. Iiy módon a cím szerinti terméket amorf, szilárd anyag formájában nyerjük. A kapott tennék olvadáspontja 148-151 °C.

Jíi ·|^ω*«4χ cin'¹; 1745 (észter-karbönil), 1710 (amid-karbonil), 1230 (C-O), 3060, 3030, 1600, 1500, 750, 720, 700.

MS m/z (X): 321 (M‘; 5), 279 (30), 261 (M-ClbCÜO; 100).

8. Táblázat ’H-NMH (CDCb-ban), kémiai eltolódások ppin hidrogén

.22	(s; 3H)		CHaCO
.09	(s; 31!)		N-CHa)
.00	(dd, J-7.	.2; 11!)	Cs-H
.34	(dd, .1-7,	.3; 1H)	C4-I1
.51	(d, Jz2;	1H)	C₃-ll
.30	(d, 3^3;	111)	Ca-H
.00-	-7.80 (m;	9)1)	aromás H

4. Példa

Az (1b) képletű vegyület származékainak előállítása

a) 150 mg (Ib) képletű vegyületeket ml 1:1 arányú piridin-ecetsavanhiririd Hegyben oldunk, és az elegyet ezobahömérlékleten 2 nupig keverjük, majd jégre öntjük és kloroformmal extraháljuk. Az extraktu inból a kloroformot eltávolítjuk, majd a visszamaradó anyagot metanolból kristályosítjuk. Uy módon 135 mg acélától nyerünk hexaéderes kristályok formájában. A kapott ‘.érmék olvadáspontja 125-126 ^eC.

2.96 (s; 3H)

19574 H

b) ISO mg (Ib) képletű vegyületet 2 ml piridinben 3 ml Conforth reagenssel oxidálunk. (A Conforth reagenst úgy készítjük, hogy 2,7 ml jégbe hűtött piridinbe 0,3 g CrOj 0,3 ml vízben készült oldatát adjuk.) A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, majd 10 ml vízbe öntjük és dietil-óLerrel extraháljuk. Az éteres oldatot vízzel háromszor mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldatból az oldószert eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot metanolból átkristályo5 sítva 57 mg szilárd, kristályos anyagól, nyerünk. A kapott termék olvadáspontja 202-205 ^ÜC.

9. Táblázat ^WC-NMR (CDCh-ban), kémiai eltolódások

Szén	Clausenamid {(la) képletű vegyület] (ppm)	A 3e) példa terméke (ppm)	(Te) képletű vegyület {ppm)	(Ib) képletű vegyület (ppin)
2	173.6	174.6	172.2	Í72.2
3	68.9	75.6	80.3	69.3
4	49.9	55.9	50.7	46.7
5	65.3	72.2	70.1	68.4
6	3Q.4	29.0	27.3	28.2
7	71.9	51.5	82.5	77.3
1’ 2’	136.0	134.9 143.4	133.3	1.40.5
1”	140.5	141.6	139.1	14 LH
aromás	126.3	128.9	125.4	125.9
szén	128.9	124.9	128.5	128.5

I. Vizsgálati példa

A találmány szerint előállított vegyüle- $5 tek hatása a májfunkcióra

A vizsgálatokban 18-22 g testtömegű hím Kunming egereket alkalmazunk. A vizsgálandó vegyületeket 5%-os Tween 80 oldat- 40 bán szuBzpendálva orálisan szondán át adjuk be. Azonos módon adjuk be a kontrollállatoknak az 5%-os Tween 80 oldat hordozóanyagot.

Az in vitro kísérletekhez a vizsgálandó anyagokat dimetil-formamidban oldjuk és közvetlenül adjuk az inkubációs elegybe.

A hepatotoxikus hatás vizsgálatára a szérum transzaminázt (SGPT) és a máj triglicerideket mérjük ée a méjszővetek patológiás vizsgálatát végezzük el. A májléziót főként a 60 gyulladás és az elhalás mértéke alapján értékeljük, az értékelést 0-4 fokozatba sorolva adjuk meg.

a) Májvédő hatáe 55

Az egereket három csoportba osztjuk. A kontrollcsoportot a hordozóanyaggal kezeljük. A másik kél csoportnak két 250 mg/kg-os dózisban 8 órás időközökben beadjuk a 60 vizsgálandó vegyületet. A vegyület második adagolása után 24 órával ip. beadunk 10 ml/ /kg 0,1 %-os növényi olajos szén-tetrakloridnt. Az egereket ezután Ifi órán át éheztetjük, majd dekapitálással leöljük. Meghatároz- 65 zuk az SGPT'-L és májlipideket. A máj egy darabjából patológiás megfigyelésre metszetet készítünk.

Amint az 10. táblázatban látható, mind a clausenamid, mind az (Ic) képletű vegyület szignifikánsan csökkenti a ezén-tetrakloriddal mérgezeLt patkányok SGPT szintjét.

10. Táblázat

Szén-tetrakloriddal mérgezett egerek SGPT 45 szintjére kifejtett hatás (9 egér/csoportl

	SGPT egység % X+SE	P
Kontroll	16781261	<0.01
(1c) képletű	391+94
vegyület
Clausenamid	617±323	<0.01

b) Clausenamid védő hatása szén-tetrakloriddal, tioacetamiddal és acetomirioferinel szemben

A szén-tatraklorid hepatotoxikus hatásától védó hálás vizsgálatánál ismertetettek szerint járunk el. Az aktív vegyületeket 125 és 250 mg/kg dózisban alkalmazzuk. Λ II. táblázatban ismertetett adatok azt mutatják, hogy a clHuseunmid 125 és 250 mg/kg dó/isii

195771

Ui bán ia jelentősen csökkenti az SGPT mennyiségének ezén-tetraklorid hatására bekövetkező növekedését. A 250 mg/kg dózisú hatóanyaggal kezelt egerek májának károsodása, így a gyulladás és az elhalás, sokkal kevésbe volt súlyos, mint a kontroll állatoké. A mójlipidek mennyisége nem csökkent.

11. Táblázat

Védőhatás szén-tetraklorid hepatotoxikus hatásával szemben egérben

Csoport	SGPT egységé X±SE	Máj lipidel. mg/g máj X+SE	Májléziő
Gyulladás fokozata	Elhalás fokozata
Kontroll	3016+23	21.0i4.2	1.70	2.33
Clausenamid
125 mg/kg x 2	2365+245*	21.614.4	-	-
250 mg/kg x 2	1900+257“	13.4+3.0	0.38	1.33

Kilenc egér/csoport ^lp<0,05; »» p<0,01

Másik kísérletben az egereknek először 25 10 mg/kg 0,15%-os növényi olajos széntetrakloridot injektáltunk be másnaponként, őszszesen 3 dózist. Az egerek napi 250 mg/kg-os clausenaraidos kezelését az első szén-tetraklorid beinjektólásától számítolt 2-5. napon 30 végeztük. Az SGPT meghatározását és a májszövetek patológiás vizsgálatát a kísérlet 7. napján végeztük. Az eredmények azt mutatják, hogy a vegyületek szignifikáns SGPT csökkentő halast fejtenek ki, de nincsenek 35 haLással a májlézióra. Eredményeinket a 12. táblázatban mutatjuk be.

12. Táblázat

Terápiás hatás egérben szén-tetrakloríd hepatotoxikus hatásával szemben

Csoport	Egerek száma	SGPT P egység» X±SE
Kontroll Clausena- mid	8	2695+110
(250 mg/kg/ /nap x 4)	8	1718±224 <0.01

A tioacetamid hepatoxikus hatásának vizsgálatánál az első vizsgálatban ismertetett módon járunk el, kivéve, hogy szén-letraklorid helyett 50 mg/kg tioacetamidot adunk be θθ az állatoknak. A 13. táblázatban közölt eredményeink azt mutatják, hogy a clausenamid jelentősen csökkenti az SGPT szintet.

13. Táblázat tédőhatás tioacatamid hepatotoxikus hatásával szemben egérben

Csoport

SGPT egység %

Máj lipidek XíSE

X±SE

Kontroll	1696+231	61rl 1.7
Clausenamid (250 mg/ /kg x 2)	718±229‘	39-:3.9

Kilenc egér/caoport * p<0.01

Az acetaminofen hapatotoxikus hatásától védő hatást a kővetkező módon vizsgáljuk. Egereknek két egymást követő napon két azonos, 250 mg/kg-os dózie clausenamidot adunk be. A második dózis beadása után 6 órával 150 mg/kg acetaminofent injektálunk az állatokba. Az acetaminofen beadásától számítva 20 óra múlva meghatározzuk az SGPT szintet és megvizsgáljuk a májszöveteket. Λ 11. táblázatban megadott eredményeink mutatják, hogy a clausenamid mind az SGPT szintet, mind a májkárosodás mértékét jelentősen csökkenti.

}8

14. Táblázat

Védöhatás egerekben acetarninofen hepatotoxikus hatásával szemben

15. Táblázat

Szer ura- ós májtriiiiszauúnázra gyakorolt hatás normál egerekben

Paraméter	Kontroll	Clausenamid 250 mg/kg x 3
SGPT egységé	2778+270	697+163«
Máj lipidek mg/g	79+13	82*17
Máj gyulladás (fokozat)	0.5	0.1
Máj elhaIbb (fokozat.)	1.4	0

Kilenc egér/ceoport «p<0.01

c) Normál egerek szérum- és májtranszamináz (GPT) szintjére gyakorolt hatás

Az egyik csoport egérnek hordozóanyagot, a másiknak clausenamidot adunk be 250 mg/kg mennyiségben hét egymást követő napon át, naponta egyszer. A ezérum- és máj-transzamináz szintet az utolsó adagolás után 24 órával határozzuk meg. A 15. táblázatban látható, hogy a clausenamiddal kezelt állatok SGPT szintje kevéssel magasabb, mint a kontroll állatoké, de a különbség nem szignifikáns. Hasonló eredményt kaptunk a GPT szintre.

Csoport	SGPT egység % X-SH	l.tiPT egység/JOlJ mg K + SE
Kontroll	217· 17.5	260 + 11.6
Clausena-	252*22.1«	292*8.0«
mid (250 mg/kg/n.ip	X 7)

Nyolc egér/csoport *p>0.05

d) Máj mikroszomális citokróm P-450 inkubálása

A máj mikroszomális citokróm P-450 kulcsszerepet játszik a xennbiotikumok iné25 regtelenitésébun. Egereknek 3 napon ál naponta egyszer 250 mg/kg clauaenainitiol adunk. A kontrollcsoportnak hordozóanyagot adunk be. Az állatokat éjszakán át éheztetjük, majd leüljük. A májiiiikroszőmákal kipreparáljuk, és meghatározzuk a mikroszomális monooxigeriázokat. Eredményeinket a 16. táblázatban ismertetjük. A máj citokróm P-450, citokróni bs. a NADPH-ciLokróni c reduktáz, az aminopirin demetiláz és a benzo(a)pirén hidroxiláz aktivitások mind azignifikánsuri nőttek.

16. Táblázat

Máj mikroszoraálie citokróni P-450 indukáláaa egérben

	Kontroll	Clausenamid 250 mg/kg/nap x 3
Máj tömege gX	4.0*0.2	5.4+0.2»
Mikroszomális fehérje mg/g máj	6.3*0.3	9.1*0.6
Citokróm P-450 nmol/mg fehérje	0.87*0.07	1.14+0.07»
NADPH-citokróm c reduktáz, nmol	103+2.5	117+2.5«*
reduklált citokróm c/perc/mg/fehérje
Citokróni bs nmol/mg fehérje	0.1510.01	0.19-0.01
Aminopirin demetiláz nmol	81.7 6.3	1265.2«
HCHO/perc fehérje
AKII nmol/perc/rag fehérje	2.6.Ό.4	5.710.76«

Hat egér/csoport «Ρ 0.01

Egy másik kísérletben az egereknek 250 mg/kg clausenamidot adunk. A clausenamid beadása után 1 és 24 óráival ip. beinjek- 65 tálunk ‘Al mg/kg iiátrinni -pe'utübarbitalt. Megállapítjuk nr. állatok alvásidejét a l'tdegyenesedáíu reflex („righting reflex! eltűnése és visszatérése közötti időlarhuii fe|~ .jegyzésével. Eredményeink a 17. táblázatban ismertetjük.

17. Táblázat

Barbiturát - alvásidőre gyakorolt hatás egérben

Barbiturát	Csoport	A vegyület és a barbiturát beadása közötti időtartam	Alvásidő (perc) XtSE	P
Pentobarbital	Kontroll		7l±7
50 mg/kg	Clausenamid	1 óra	152»17	<0.01
	250 mg/kg Clausenamid 250 mg/kg	24 óra	4tí±6	<0.01
Barbitál	Kontroll		197±27
200 mg/kg	Clausenamid	1 óra	172±13	>0.05

250 mg/kg

Tíz egár/eeoport

A clausenamidot 24 órával a pentobarbital beadása előtt beadva az egerek alvásideje szignifikánsan megrövidült, míg a clausenamidot a pentobarbital beadása előtt csak egy órával beadva viszont az alvásidő nem csökkent, hanem jelentősen megnőtt. Azonban a korábban beadott, a májban még nem metabolizálódott clausenamid nincs hatással az egér barbitállal indukált alvásidejére. Ez azt jelenti, hogy az alvásidő clausenamid hatására bekövetkező meghosszabbodása a máj gyógyszermetabolizáló enzimje gátlásának következménye. Ennek megfelelően a clausenamid kétfázisú hatást fejt ki a máj mikroszomális citokróm Ρ-450-re, azaz gátlást, majd ezt követő indukálást.

e) Akut toxicitasi vizsgálat g/kg dózisú clausenamidot egyszeri orális adagként adunk be. A 10 állatból álló csoportból 7 napon belül egy sem pusztult el.

tatja a légzés jeleit. A dobozi felnyitjuk és a kezeit csoport életben lévő állatait megszámoljuk.

A két csoport túlélő állatai számának különbségét Fischer és Yates (1963) X²tesztje alapján értékeljük (Thomann és munkatársai, 1975). Eredményeinket a 18. táblázatban ismertetjük.

18. Táblázat

Dózis (mg/kg p.o.)	TúléLők/összee állat	Hatás <%)
kontroll	clausenamid
10	9/60	19/60	19.6
30	9/60	31/60	41.1
100	9/60	40/60	58.8
p=0.05

2. Vizsgálati példa

Egerek hipoxia-türésónek növekedése clausenamid hatására g testtőmegú hím egerek csoportjait két kamrára osztott műanyag dobozba helyezzük. A doboz mérete 15*28*40 cm, amely 16,8 1 térfogatnak felel meg. A kamrákba egyenként 20 egeret helyezünk. A dobozon 3,5% oxigént és 96,5% nitrogént tartalmazó gázelegyet áramoltatunk át 4 1/perc sebességgel. Az állatoknak vizsgálat előtt 30 perccel adjuk be a vizsgálandó anyagot, illetve a hordozóanyagot.

Az oxigénhiányos elegy átáramoltatásának megkezdése után körülbelül 7 perccel az állatok elpusztulnak. A kísérletet akkor állítjuk Is, amikor a baloldali kamrában, azaz a kontrollcsoportban már csak három állat muA táblázatból látható, hogy a clausenaniddal kezelt állatok szignifikánsan jobban tűrték az oxigénhiányt, mint a kontrollcsoport. A 100 mg/kg p.o. clausenamid adagolá50 savai elért 59%-os túlélési aránynövekedés csak nagyon kevés anyaggal (barbiturátok) érhető el.

gg 3. Vizsgálati példa

Clausenamid hatása patkány retrogréd amnéziájára hipoxiée körülmények között θθ A 39 cm hosszú, 21 cm magas és 21 cm széles berendezés két részből áll, egy 29 cm hosszú átlátszó műanyag részből és egy 10 cm hosszú feketére festett részből. A berendezés alapzatán nagyobb közökkel elhe65 ’yezet fémrácsozatok vannak, amelyek egy s ideig 1,6 mA erősségű áramot kibocsátó stimuláló berendezéshez vannak kapcsolva.

A berendezés két terét lezárható ajtó köti össze egymással.

100-120 g testtőmegű hím patkányokat egyenként helyezünk a berendezés nagyobb terébe, és 3 percig hagyjuk, hogy a berendezés mindkét részét megismerjék.

Ezután az állatokat a kisebb, sötét térbe helyezzük, a két teret Összekötő ajtót lezárjuk, és az állatokat árammal, a lábukon át sokkoljuk. Ezután az állatokat 3,3% oxigént ée 96,2% nitrogént tartalmazó gázeleggyel levegőztetett légszegény ketrecbe helyezzük. Az álatokat addig tartjuk ilyen oxigénszegény körülmények között, amíg zihálni nem kezdenek, ami a légzés elégtelenségét jelzi, (maximum 15 perc).

óra múlva a patkányokat ismét az előbbi berendezés világos terébe helyezzük. A megfigyelési idő 3 perc.

Egy kísérletet 15 állattal végzünk, amelyeket 3 csoportba osztunk.

A csoport: kontrollcsoport, amelyet nem teszünk ki oxigénszegény körülményeknek;

B csoport: kontrollcsoport, amelyet az első gyakorlás után oxigénszegény körülményeknek teszünk ki;

C csoport: kezelt állatok, amelyeket az első gyakorlás után oxigénszegény körülményeknek teszünk ki.

Értékelés: Azt az időt, amely ahhoz szükséges, hogy az állat a berendezés sötét térfelébe belépjen s-ban mérjük.

A két kontrollcsoport közötti időkülönbséget 100%-nak tekintjük (A-B=100%).

Kiszámítjuk a B kontrollcsoport és a C kezelt csoport közötti időkülönbséget százalékban (C-B=X%). Az X értéket a vizsgált anyag antiamnéziás hatására jellemzőnek tekintjük.

19. Táblázat

Clausenamid	X
(mg/kg p.o.)	(X)
3	47
10	65
30	100
SZABADALMI	IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az (ld) általános képletű ve-

Claims

1. Eljárás az (ld) általános képletű vegyületek előállítására - a képletben R¹ jelentése hidrogénatom, 2-5 szénatomos alkanoilcsoport, vagy R^l és R³ együtt vegyértékkőtést alkot,

R² jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport,

2-5 szénatomos alkanoil-oxi-csoport,

R³ jelentése hidrogénatom,

R⁴ jelentése hidrogénatom vagy

R³ és R⁴ vegyértékkötést alkot vagy R² és R³ együtt oxocsoportot alkot azzal jellemezve, hogy

a) az (la) képletű clausenamid előállítására

í) Clauaena lansium leveleit forrásban lévő vízzel kezeljük, ii) a kapott tömény vizes extraktumot adszorbenssel, előnyösen szilikagéLlel összekeverjük, iii) az adszorbenst szerves oldószerrel, előnyösen kloroformmal extraháljuk, iv) a szerves eluátumot betöményítjük,

v) a kapott koncentrátumot hideg, 1-6 szénatomos alkohollal vagy 2-6 szénatomos ketonnal mossuk, vagy

b) az (lb) és/vagy (Ic) képletű vegyületek előállítására

i) Clausena lansium leveleit, forrásban lévő vízzel kezeljük, ii) a kapott tömény vizes extraktumhoz híg savat adunk, majd iii) a felülúszót kationcseréló gyantán engedjük át; majd iv) a gyantát bázissal, előnyösen vizes ammóniával kezeljük, ezután

v) a gyantát szerves oldószerrel extraháljuk, és vi) az extraktumot szilícium-dioxidon vagy alumínium-oxidon kromatografáljuk, eluensként kloroformot, raetilén-kloridot, étert vagy kloroform - metanol elegyet alkalmazunk, és vii) az (lb) és (Ic) képletű vegyuleteknek megfelelő Rf értékű frakciókat összegyűjtünk és betöményítjük, ás kívánt esetben az a) vagy b) eljárással kapott terméket

i) az R^l és/vagy az R² helyettesítőknek megfelelő helyen acilezzük és kívánt esetben.

ii) az i) műveletben kapott terméket hidrogénezzük, majd kívánt esetben üi) a ii) műveletben kapott terméket nyomás alatt tömény savval kezeljük hidrolizáljuk, vagy kívánt esetben iv) az a) vagy b) eljárás szerint kapott (la) vagy (íb) képletű vegyületet oxidáljuk, vagy kívánt esetben

v) az a) eljárás szerint kapott vegyületet nyomás alatt tömény savval kezeljük, és kívánt esetben vi) az v) műveletben kapott terméket acilezzük.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás az (ld) általános képletű, Rí és Ra helyettesítőkként 1-4 szénatomos alkanoil-, előnyösen acetilcsoportot tartalmazó vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás az (ld) általános képletű vegyületek szűkebb kőrét képező (le) képletű vegyület sztereoizoraerjeinek előállítására, azzal jellemezve, hogy Clausena lansium leveleit az 1. igénypont a) vagy b) eljárásának megfelelően kezeljük.

4. Eljárás akut és krónikus vírusos hepatitisz, máj intoxikáció, hipoxia és amnézia kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként az 1. igénypont szerint előállított (14) általános képletű vegyületeket - a helyettesítők jelentése az 1» igénypontban meg5 adott - gyógyászati célra alkalmas hordozó és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk.