HU194304B - Process for stabilizing activity of immobilized enzyme - Google Patents
Process for stabilizing activity of immobilized enzyme Download PDFInfo
- Publication number
- HU194304B HU194304B HU852958A HU295885A HU194304B HU 194304 B HU194304 B HU 194304B HU 852958 A HU852958 A HU 852958A HU 295885 A HU295885 A HU 295885A HU 194304 B HU194304 B HU 194304B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- enzyme
- activity
- fructose
- glucose
- carrier
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 25
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 title 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 94
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 37
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims abstract 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 35
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 35
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 34
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 28
- 108700040099 Xylose isomerases Proteins 0.000 claims description 21
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 18
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 16
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 3
- -1 dimethylaminoethyl cellulose gel Chemical compound 0.000 claims description 2
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229920002491 Diethylaminoethyl-dextran Polymers 0.000 claims 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N fructose group Chemical group OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 claims 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 78
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 15
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 9
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 8
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 8
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 6
- 108010042194 dextransucrase Proteins 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 5
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 108010027388 phenol 2-monooxygenase Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 3
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 2
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 2
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 2
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RAGSWDIQBBZLLL-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethyl(diethyl)azanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCCl RAGSWDIQBBZLLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 7-[(6,8-dichloro-1,2,3,4-tetrahydroacridin-9-yl)amino]-n-[2-(1h-indol-3-yl)ethyl]heptanamide Chemical compound C1CCCC2=NC3=CC(Cl)=CC(Cl)=C3C(NCCCCCCC(=O)NCCC=3C4=CC=CC=C4NC=3)=C21 ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010025188 Alcohol oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000052866 Amino Acyl-tRNA Synthetases Human genes 0.000 description 1
- 108700028939 Amino Acyl-tRNA Synthetases Proteins 0.000 description 1
- 244000186140 Asperula odorata Species 0.000 description 1
- 101710113083 Carbamoyl-phosphate synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- 235000008526 Galium odoratum Nutrition 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 235000019759 Maize starch Nutrition 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 102100021969 Nucleotide pyrophosphatase Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241000187417 Streptomyces rubiginosus Species 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003977 aminoacylase I Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- MSJMDZAOKORVFC-UAIGNFCESA-L disodium maleate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O MSJMDZAOKORVFC-UAIGNFCESA-L 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 235000021433 fructose syrup Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 108010090785 inulinase Proteins 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920001568 phenolic resin Polymers 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 108010001816 pyranose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Charge And Discharge Circuits For Batteries Or The Like (AREA)
- Circuits Of Receivers In General (AREA)
Description
A találmány {mmobilizált enzim aktivitásának a szlntentartására alkalmas eljárásra vonatkozik.
A találmány tárgya közelebbről megjelölve eljárás valamely immobfllzált enzim aktivitásának a kívánt szinten való tartására valamely folyamatos átalakítási eljárásban.
Jóllehet protein immobfllzálására már a korai 1920-as években találhatók utalások [Nelson, J. M. és D. 1. HJtchcocks, J. Amer. Chem. Soc. 46 : 1956 (1921)], beható érdeklődés azonban a jelenség iránt csupán a század utolsó negyedétől kezdve újult fel. Az immobilizáló módszerek négy általános osztályba sorolhatók: (1) megkötés (2) térhálósítás, (3) kovalens kapcsolás és (4) adszorpció.
A megkötéses módszerek általában térhálósított gélekkel történő elzáráson vagy üreges szálakkal, Öposzóma-makromolekulákkal és hasonlókkal való bekapszuláláson alapszanak. A térhálósítás az enzimek úgynevezett bi vagy multifunkciós térhálósító reagensekkel való módosítását foglalja magában, amelyet gyakran adszorpció vagy bekapszulázás követ. A kovalens kapcsolás a legszélesebb körben vizsgált módszer, amely az enzimnek valamely hordozóanyaghoz olyan funkciós csoportok segítségével történő kovalens kötését foglalja magában, amelyek nem lényegesek az enzim biológiai aktivitása szempontjából. Az adszorpció az enzimnek valamely adszorbenshez való egyszerű érintkeztetésével létrejött folyamat, amelynél az immobflizálás az enzim és az adszorbens közötti viszonylag gyenge kötőerők egymás közötti hatásából adódik.
Az immobilizálásnak ez az utóbbi módszere az, amely közvetlen rokonságban van a találmánnyal, ezért az adszorpció egyes elveit az alábbiakban bővebben kifejtjük. A megkötés, a térhálósítás és a kovalens kapcsolás széleskörű vizsgálata folyik, amelyet például a Weetal, Η. H., ed. „Immob^zed Enzymes, Antigens, Antibodies and Peptídes M. Dekker, New York, (1975) vagy Zaborsky 0. R. „Immobilized Enzymes” CRS Press, Cleveland (1973) irodalmi helyek Ismertetnek.
Az adszorpcióra vonatkozó korai kimutatások azt mutatták, hogy bizonyos esetekben az adszorpció az enzim részletes vagy teljes inaktiválásához vezetett. Ennélfogva úgy véljük, hogy valamely alkalmas adszorbens a találmány szerinti gyakorlat számára az, amelynek viszonylag nagy az affinitása az enzimhez, de még csak kis mértékű az inaktiválása.
Az adszorpciós Immobflizálás alumíniumklorid, bentonlt, kalcium-karbonát, cellulóz, kollagén, ioncserélő gyanta, kalinjt, Sephadex, szilikagél és titánnal bevont saválló acél hordozóanyagokkal ismert.
Ahogy később ismertetjük, a találmány szerinti eljárás az adszorbeáit enzim-rendszerek széles körénél alkalmazható, de különösen alkalmas immobflizált glukóz-izomerázt használó folyamatok javítására.
A legtöbb fruktózt iparilag (keményítőből származó) glükóz fruktózzá való izomerizálásával állítják elő valamely alkalmas reaktorban, amelynek során glükóz-oldatot vezetnek át immobfllzált glukóz-izomeráz-ágyon. A távozó termékfolyadék fruktóztartalmát jeflegzetesen állandó szinten, például 40-44%-on tartják a reaktoron való átfolyási sebesség szabályozásával. Mihelyt az immobilizált enzim természetes módon bomlik hő hatására és kémiai anyagok okozta inaktiválódás folytán, az átfolyási sebességet szabályos időközökben csökkentik. Abbán az esetben, ha az átfolyási sebesség azt az értéket éri el‘, amelynél további csökkentés nem kedvező, akkor az immobilizált enzimet új immobfllzált enzimággyal helyettesítik. Mivel valamely kolonna átfolyási sebessége annak élettartama alatt változhat, például 50 GPM-től 5 GPM-lg, számos kolonnát kell üzemeltetni közelítően állandó termelési sebesség elérésére.
Különösen használható rendszerek vannak leírva glukóz-izomeráz immobflizálására a 3,788.945, a 3,909.345, a 4,110.164, a 4,168.250 és a 4,355.117 számú USA-beli szabadalmi leírásokban. A 3,960. 663 számú USA-beli szabadalmi leírásban ismertetett megoldás szerint oldható glukóz-izomerázt adnak szabályos időközökben a betáplált glükózárammal együtt az izomerizáló reaktorba, amely ímmobflizájt glukóz-izomerázt tartalmaz. A glukóz-izomerázt valamely erős bázisú anioncserélő gyantán immobfllzálják, amely felvevőképességéig van töltve oldható glukóz-lzomerázzal. Mihelyt az enzim bomlik, adszorpciós tulajdonságai megváltoznak, így az inaktív enzim leválik a hordozóanyagról és megjelenik a távozó folyékony termékben. E szabadalom szerint az elbomlott enzimet úgy helyettesítik, hogy a hordozóanyagot friss enzimmel éríntkeztetik olyan mennyiségben, amennyi elegendő a hordozóanyag teljes újratöltéséhez. Mivel a kimerült enzim folyamatosan válik az adszorbensről, a távozó folyékony terméket további lépésben tisztítani kell a szennyező enzim eltávolítása érdekében.
A találmány szerinti eljárás jelentős előnyökkel rendelkezik a hagyományos megoldásokhoz viszonyítva, mivel: (1) a műveletek egyszerűsítését, teszi lehetővé - megszüntethető a reaktoráramok szabályos időközökben történő beállítása; (2) csökkenthető a beruházás nagysága — kisebb reaktorokra van szükség néhány nagy reaktorral szemben, így megszüntethető az átfolyási sebesség ingadozása; (3) javítható a termelés szabályozása, illetve ellenőrzése - nagyobb fruktóz-szinteket lehet elérni anélkül, hogy szükség lenne az átfolyási sebesség csökkentésére több oldható enzimnek a reaktorba való adagolásával, és (4) csökkenthetők a termék finomítás! költségei - mivel a nagyon lassú átfolyási sebességek és ennélfogva a hosszú tartózkodási idők megszüntethetek, így kisebb mértékű az elszíneződés és a szagképződés.
A találmány tárgya tehát eljárás valamely immobilizált enzim állandó aktivitásának a fenntartására valamely reaktorban, amelynek során szflárd hordozóanyagon az adszorpció körülményei között az enzim olyan mennyiségét adszorbeáljuk, amely az aktivitás előre meghatározott szintjét képviseli és ez kevesebb a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességénél, majd további enzimmennyiségeket adszorbeálunk a hordozón az előre meghatározott aktivitás fenntartására, mihelyt az előzőleg adszorbeáit enzim aktivitása az előre meghatározott szint alá csökken.
Az enzim szabályos időközökben való adagolását addig folytatjuk, ameddig a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességét el nem érjük. A találmány szerinti eljárás jól felhasználható arra, hogy fenntartsuk valamely glukóz-izomeráz reakcióképességét, Így felhasználhatjuk fruktóznak glukózból való előállitására.
Valamely immobilizált enzimes eljárás hatásossá-22
194 304 gának a legnagyobb meghatározó tényezője annak az időtartamnak a hossza, ameddig az enzkntöltés hatásos marad. Ahogy az előzőekben említettük, az enzim természetes úton bomlik az eljárás előrehaladtával. JóDehet nem ragaszkodunk egy meghatározott elmélethez az enzimbomláshoz kapcsolódóan, de úgy véljük, hogy a hőhatás és a kémiai befolyás hozzájárul a bomláshoz.
Ennek a problémának a megoldása az, hogy csökkentjük a reagensek átfolyását az immoblizált rendszeren, amint a rendszer hatásossága csökken. Mivel azonban az átfolyási sebesség 10 vagy nagyobb faktorral változhat, arra van szükség, hogy egy kolonnasort hozzunk létre annak érdekében, hogy biztosítsuk a folyamatos teljesítményt. Más megoldás az lehet, hogy szabályos Időközökben leállítjuk a rendszer működését, eltávolítjuk a kimerült enzimet és újra töltjük friss enzimmel a hordozóanyagot vagy ahogy a 3,960.663 számú USA-beli szabadalomban leírták — meghatározott időközökben friss enzimet adagolunk és a kimerült enzimet az elutáumba vezetjük.
A találmány szerinti módszer az előzőekben említett eljárás megközelítése annyiban, hogy friss enzimet adhatunk a rendszerhez anélkül, hogy szüneteltetnénk a műveletet, a teljesítményt állandó szintben tarthatjuk vagy - kívánt esetben — növelhetjük és a távozó folyékony termék lényegében mentes marad kimerült enzimtől.
A találmány szerinti eljárás olyan módszert ad, amelynél az lm mobilizált rendszer készítésének a kezdetén az enzimet olyan mennyiségben· adjuk a hordozóanyaghoz, amely kevesebb az adszorbens legnagyobb felvevőképességénél, például a hordozóanyag nem teljes mértékben töltött, így az állandó teljesítményt fenntartjuk friss enzimnek a bevitelével, amint az szükséges, mindaddig, ameddig a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességét el nem éljük.
Mivel az immobilizáláson nyugvó adszorpciós módszerek visszatükrözik az enzimtöltés és a hordozóanyag közötti kölcsönhatásokat, az enzim és a hordozóanyag közötti hídrofób kölcsönhatásokat és hasonló jelenségeket, a különleges enzim-hordozóanyag kombináció megválasztását tapasztalati úton kell meghatározni.
Használható hordozóanyagok a következők:
1. Gyengén bázisos poUsztirolgyanták, így az Amberlite IRA-93, Diaion WA-30, Diaion WA-11, Amberlite IR-45,
2. Gyengén bázisos (-N/R)2 fenol-formaldehldgyanták, így a Duolite EA-561, Duolite ES-562, Duolite ES-568,
3. Erősen bázisos ( N/R)3polisztírol-gyanták, így az XE-352, Amberlite IRA-900, Amberlite IRA-904, Amberlite IRA-938, GIA-01, Diaion PA-308, Diaion PA-304, Diaion SA-21 A, Sumltomo Resin,
4. Micellás enzimadszorbensek, fgy a DEAFSephadex (derivált térhálósított dextrán), DEAEGlycophase (szabályozott pórusú szénhidráttal bevont és derivált üveg), OAE-Glycophase (erősen bázisos a fentihez képest), DEAE-Blogel A (derivált térhálósított agarózgél gömbök), Selectacel DEAE cellulóz granulátum), Vlstec D2 és D3 (DEAEcellulóz granulátum viszkózból), DEAE Sephacel (gömbalakú DEAE-cellulóz), DEAE-cellulózgömbök (4,080.022 számú USA-beÚ szabadalom), szabályozott pórusú üveg és szabályozott pórusú alumíniumoxid, titándjoxld, cirkóniumoxld.
Előnyös olyan hordozóanyagok használata, amelyek gyengén bázikus anjoncserélő anyagok. Legelőnyösebbek a DEAE-Sephadex vagy a DEAE-Cellulose típusú hordozóanyagok.
Az enzimek széles változata adszorbeálható a fenti hordozóanyagokra. A megfelelő hordozóanyagot a szakember könnyen kiválaszthatja anélkül, hogy szüksége lenne kísérletezésre. Az előnyösen alkalmazható enzimek a glukóz-izom eráz, a glukoamfláz, az aminoaciláz, invertáz, /J-glukamáz, a glukóz-1-oxldáz és a glukóz-2-oxjdáz'.
Abban az esetben, ha az immobfllzálás egyedül elektrosztatikus vonzáson alapszik, akkor lehetőség van a kötések szétbontására, ha az ionerősség, pH vagy a reakcióhőmérséklet változik. Előnyös, ha olyan enzimet választunk, amely nagyon erősen kötődik a hordozóanyaghoz annak érdekében, hogy a lehető legkisebbre csökkentsük ezeket a hatásokat. Más változatban lehetőség van a protein-töltés növelésére kémiai módosítássál, ahogy ezt amílo-glukozidázzal végezte Solomon és Levine [Biotechn. Bioeng. 16 : 1161 (1974)]. Egy különösen használható enzim a találmány szerinti gyakorlatban a glukóz-izomeráz.
Az alábbi példákban, melyek a találmány szemléltetésére szolgálnak, az eljárást részletesen leírjuk egy különleges enzim/hordozóanyag kombinációra.
1. példa
Ebben a példában azt írjuk le, hogy szabályos időközökben részben tisztított, oldható glukózizomerázt viszünk be egy izomerációs reaktorba, amely részben töltött vivőanyagot tartalmaz és ezt olyan mennyiségben visszük be, hogy lényegében állandó izomerizációs sebességet tartsunk fenn emelt szinten további 19 hétig.
Az oldható enzim tisztítása
1460 ml mennyiségű Streptomyces rublginosus fermentációs táptalajt szűrünk és a sejteket ismét szuszpendáljuk 730 ml ionmentesített vízben, majd még kétszer szüljük. Ezután a sejteket feliszapoljuk 1460 ml ionmentesített vízben. A szuszpenzió pHját 6,5-re állítjuk be hígított HCl-lel és 10 mg lizozjm-ot és 1700 ppm Variquat-ot (dimetfl-alkilbenzilammónium-klorid) adunk hozzá. Az elegyet 40°C-on 3,6 óra hosszat inkubáljuk óvatos felső keverés közben annak érdekében, hogy kivonjuk az oldható izomerázt a sejtekből. Az oldható enzimet szűréssel kinyerjük a roncsolt sejtekből és vizsgáljuk 18 IGIU/mlnél. [Lloyd, N. E., Khaleeluddín, K és Lamm, W. R. (1972), Cereal Chem. 49, 544 oldal irodalmi helyen Ismertetett módon]. Az IGIU (International Glucose Isomerase Unit — nemzetközi glükóz Izomeráz egység) az enzim olyan mennyisége, amely katalizálja D-glükóznak D-fruktózzá való átalakítását 1 pmól/ perc sebességnél és meghatározott körülmények kiözött (pH = 7,0, 60öC, 2,0 mól glükóz, 0,2 mól Mg**, 0,001 mól Co ,’ 0,2 mól nátrium-maleát-puffer).
Vivőanyag immobiiizáidshoz
Oldható glükóz-izomeráz immobllizálásához granulált DEAE-cellulózt (GDC) használunk. Az általános készítési mód abban áll, hogy őrölt cellulózt és nehezítő anyagot műanyaggal agglomerálunk és utána a cellulózt dletfl-aminoetfl-kloriddal reagáltatjuk annak érdekében, hogy gyenge bázisú anyaggá alakítsuk, ahogy a 4,355.117 számú USA-beli szabadalomban le van írva.
194 304 kg C-100 őrölt cellulóz és 11 Lg kalcínált alumínlum-oxjd keverékét 27 kg nagy szilárdságú poHsztlrollal 200°C-os hengerezéken addig kezeljük, ameddig a műanyag meg nem olvad és a keverék homogén nem lesz. A granulált homogén cellulóz-elegyet lehűtjük, megőröljük olymódon, hogy többször átvisszük kalapácsos malmon és utána szitáljuk valamely 40-80 mesh méretű szitán (USA szabvány) Ilyen szemcseméretű frakció elkülönítése végett. A szítált anyagból 16 kg-ot feBszapoIunk olyan alkáll-szulfát-oldattal, amely 17 kg nátrium-szulfátot, 2,2 kg nátrium-hidroxidot és 19 liter vizet tartalmaz. A szuszpenziót 40eC-ra melegítjük, és
6,4 kg 50 %-os dietíl-aminoetíl-klorid-hídroklorid vizes oldatot adunk a szuszpenzióhoz keverés közben 115 ml/perc sebességgel (körülbelül 1 óra leforgása alatt). A szuszpenziót további 30 percig keverjük, 3,2 liter 50%-os NaOH-oldatot adunk hozzá és újból hozzávezetünk 6,4 kg 50%-os dietfl-amlnoetfl-klorjd-hidroklorid-oldatot. A szuszpenziót 60eCra melegítjük, 57 liter vízzel hígítjuk, a pH-t 4,5-re állítjuk be HCl-lel és 60 mesh méretű rázószltán mossuk. A GDC-t ismét feliszapoljuk, a pH-t 7,0—
7,5-re állítjuk be és egy 0,25 mm szíta lyukbőségfl szitán víztelenítjük.
A vivőanyag adszorpciós felvevőképességét úgy méljük, hogy 100 ml oldható enzimet adunk 2,63 g száraz bázisos vivőanyaghoz, a pH-t 7,0-re állítjuk be és a szuszpenziót óvatosan keverjük 5 óra hosszat. Az adszorpciót úgy követjük, hogy egyenértékű mennyiségeket meghatározott időközökben szűrünk és mérjük az oldható izomeráz aktivitását. -
| Idő | Oldható aktivitás | Adszorbeált |
| óra | IGlU/ml | |
| 0 | 18,0 | 0 |
| 0,25 | 12,7 | 29,4 |
| 1 | 5,8 | 67,8 |
| 2 | 2,5 | 86,1 |
| 3 | 1,2 | 93,3 |
| 4 | 0,4 | 97,8 |
| 5 | 0 | 100 |
A vivőanyag mért felvevőképessége oldható izomerázra körülbelül 584 lGIU/g szárazanyag.
Kezdeti enzim-immobilizáTás GDC-n
GDC vívőanyagot részlegesen töltünk oldható izomerázzal körülbelül 25% felvevőképességig. Ennek során GDC-t (14,8 g szárazanyag) feliszapolunk ionmentesített vízben és a pH-t 7,0—7,1-re állítjuk be. A szuszpenziót levegőmentesítjük vízsugárszivattyúval létesített vákuumban szobahőmérsékleten 60 percig és utána 24 mm átmérőjű és 288 mm hosszú Ace Glass Adjustachrom köpennyel ellátott üvegkolonlában töltjük, amely frlttelt fenékkel rendelkezik. Az ágyat 85 mm mélységig megtöltjük. Ezután üveggömböcskéket helyezünk az ágy tetejére (96 mm) az áramlás elosztására. A GDC-t megtöltjük olymódon, hogy 145 ml (2600 IGIU) oldható izomerázt folyatunk lefelé az ágyon keresztül 1 ml/perc sebességgel szobahőmérsékleten. Oldható aktív anyag nem megy át az ágyon.
Immobílizált izomeráz-aktivitás vizsgálata
A vízköpenyt a kolonnán 61 C-ra temperáljuk, majd 50%-os kristályos glükóz-oldatot, amelynek a
Rli ja 7,8 és 5 mmól MgSO4-et, valamint 5 mmól lallSOj-at tartalmaz, Indítunk lefelé az Immobflizált Izomeráz-ágyon át 0,4 ml/perc átfolyási sebességgel. Az oszlopot 16 óra hosszat járatjuk. Elemzés céljára ezután mintát veszünk a termékből és az immobfllzált izomeráz aktivitását a következő egyenlettek meghatározzuk.
c = RC I„ —I„
Et In
Ebben a képletben
Et » teljes immobjlizált aktivitás IGIU-ban R * átfolyási sebesség ml/órában C monoszaharid-koncentráció g/ml-ben kr = reakciósebességi állandó 61 °C-on (0,019 g/IGIU/óra)
I - távozó termék izomeré dós foka _ fruktóz-koncentrádó_ monoszacharld-koncentrádó I = I beáramló anyag = 0 kristályos dextrózra Ie = I egyensúlynál = 0,510 61 C* -on e Az I izomerádós fokot polarimetriásan mérjük a következő módon. A kolonnába bevitt anyag és a távozó termék mintáit 20-szorosára hígítjuk ionmentesített vízzel, majd 1 óra hosszat állni hagyjuk azért, hogy a rotációs egyensúlyt elérjük. A rotációs méréseket Perkin-Elmer Model 241 polariméteren méljük 25 C°-on egy 576 nm hullámhosszúságú higanyforrással. Az eszközt vízzel nullázuk a cellában és a rotációértékeket a hígított betáplált anyag és a távozó termék fokában mérjük.
bemenő rotádó - kimenő rotádó
I “ g monoszacharid/ml hígított bemenő (x faktor) vagy elmenő anyag (2) ahol I = I - Ιθ faktor = 7-7—7“—β-——Ι/[%] - (Ofl)
D = hígítás! faktor (5 ml — 100 ml) = 20
L = polariméter cellahossza - 1 dm (aj - [aj = fajlagos rotádó (forgatóképesség) változása tiszta glükóznak tiszta fruktózzá történő alakítására: higanyfénnyel mérve = 167,35 faktor = 0,1195
A kísérleti módszerrel meghatározott immobflizált aktivitás 1548 IGIU-nak adódott, amely azt mutatja, hogy a vivőanyagra töltött 2600 IGIU oldható aktivitásból 60% jelent immobílizált aktivitást.
Izomerizálás és enzimadagolds szabályos időközökben
Szárazanyagra számítva 95% glükózt, 5 mmól MgS04-et és 5 mmól NaHSO3-at tartalmazó 50%-os kukóricakeményítő hldrolizátum-oldat pH-ját 7,8-ra állítjuk be és elkezdjük lefelé folyatni immobílizált izomeráz-ágyon keresztül 61°C-on. A kezdeti átfolyási sebességet az (1) egyenletből számítjuk, amely szerint a fruktózzá történő átalakulás körülbelül 44%hak adódik. Ezt körülbelül 17 ml/óra átfolyási sebességet állandóan fenntartjuk, kivéve az immobílizált aktivitás mérése alatt. A távozó tennék fruktóztartalmát lényegében az izomerizádó fokának a meghatározására leírt módszenei mérjük fruktóz%= 100 Ij, e képletben d = a távozó termék monoszacharld tartalma az összes szárazanyag részeként kifelezve.
A fruktózszint fokozatosan körülbelül 40%-ra csökken 16 napos időszak alatt. Ekkor először adagoljuk az oldható enzimet. Az Immobílizált aktivitás vizsgálata azt mutatja, hogy körülbelül 800 IGIU
194 304 szükséges az aktivitásveszteség pótlására és a fruktózzá alakulás 44%-ra való emelésére.
Ennek megfelelően glükóz-oldathoz, amely a fenti sókat tartalmazza. A kolonna betápláló vezetékét az g enzimet tartalmazó glükóz-oldathoz kapcsoljuk és 0,3 inl/perc sebességgel engedjük lefolyni az egészet.
Az enzhnadszorpdós folyamat alatt képződő termékből mintát veszünk és megvizsgáljuk. A vizsgálat eredménye azt mutatja, hogy oldható izomerázt nem tartalmaz. A vizsgálatot úgy végezzük, hogy a 10 terméket tartalmazó mintát 16 óra hosszat inkubáljuk 61°C-on és méljük a fruktóztartalom növekedését. Ezután kristályos glükózból készült oldatot folyamatosan táplálunk be azért, hogy vizsgáljuk a további immobüizáit aktivitást. A tápvezetéket vissza- 1_ kapcsoljuk a keményítő-hidrolizátumhoz és a távo- 155 zó termék fniktózszintjét 44%-ra állítjuk.
A folyamatsort, amely abban áll, hogy a fruktózszintet a távozó termékben fokozatosan körülbelül 40%-ra engedjük csökkenni, a tápvezetéket egy kristályos glükózból készült oldathoz kapcsoljuk az 20 Immobilizált aktivitás mérésére, oldható enzimet adagolunk a betáplálásra kerülő glükózáramba, újból megvizsgáljuk az immobilizált aktivitást és a tápvezetéket visszakapcsoljuk a kukoricakeményítőhidrolizátumhoz, 17 héten keresztül fenntartjuk.
A kísérlet fennmaradó 10 hete alatt a folyamatsort 25 módosítjuk annak érdekében, hogy megszüntessük az immobilizált aktivitás mérését az enzimadagolás előtt és után. Ezután szabályos időközökben állandó oldható enzimmennyiséget adagolunk. A fruktóztartalmat csupán az önkényesen megválasztott 40—
44% határok között engedjük változni, amelyet az átfolyási sebességgel tartunk ezen az állandó szinten. Természetesen szőkébb határokat is választhatunk, de ez az oldható enzim gyakoribb adagolását teszi szükségessé.
7,5 hetes működés után az enzimaktívltást megkétszerezzük a kolonnában, amelynek csupán olyan hatása van a műveletekre, hogy az átfolyási sebesség növelése válik szükségessé a 40-44%-os fruktóztartalom elérése céljából. Mintegy 13 hetes üzemeltetés után a sószinteket a betáplálásra kerülő kukoricakeményítő-hidrolizátumban 1 mmól MgS04-re (5 mmólról) és 2 mmól NaHSO3-ra (5 mmólról) csökkentjük.
Az enzimtöltés során a távozó tennék vizsgálata a 20. hétnél bizonyos csökkenést mutat az oldható aktivitásban. A hiány észlelése előtti utolsó enzimadagolás az összes adszorbeált enzim értékét 649 IGIU/g-ra növeli vagy szorosan megközelíti a kezdetben mért 684 IGIU/g értéket. A hiány növekszik az ezt követő utánadagolási műveletek során, bár elegendő friss enzim adszorbeálódott ahhoz, hogy a fruktózzá alakulást 40% felett tartsuk. Az a tény, hogy még enzim adszorbeálódott a kezdeti mérés után, a felvevőképesség növekedését mutatja és bizonyos mennyiségű Inaktív enzim deszorbeáiódott.
Az I. táblázat összefoglalja a fruktóztermelést és az enzimadagolást 27 hetes kísérlet Idejére. A termelt fruktóz mennyiségét a szárazanyagra számított 43%os fruktózszirup gramm-mennyiségeként fejezzük ki. A hetenkénti tényleges fruktóztermelés adatait 43%-os fruktóztermelésre szabályoztuk.
I. Táblázat
Izomeráció és enzimadagolás összefoglalása
| Hét | Enzimadagolás IGIU | Enzimfelhalmo- zódás IGIU | Átlagos fruktóz % | Felhalmozódó fruktóz g 43% szárazanyag | Enzimhatásosság IGIU/g 43%-os fruktóz |
| 1 | 2600 | 2600 | 43,7 | 2059 | 1,26 |
| 2 | 42,5 | 3606 | 0,72 | ||
| 3 | 720 | 3320 | 39,1 | 4851 | 0,68 |
| 4 | 42,3 | 6533 | 0,51 | ||
| 5 | 43,1 | 8292 | 0,40 | ||
| 6 | 41,6 | 9891 | 0,34 | ||
| 7 | 39,8 | 11298 | 0,29 | ||
| 8 | 3200 | 6520 | 39,5 | 12379 | 0,53 |
| 9 | 44,7 | 15293 | 0,43 | ||
| 10 | 44,6 | 18302 | 0,36 | ||
| 11 | 43,5 | 20476 | 032 | ||
| 12 | 43,6 | 22789 | 0,29 | ||
| 13 | 470 | 6990 | 41,1 | 24856 | 0,28 |
| 14 | 940 | 7930 | 41,4 | 26764 | 030 |
| 15 | 44,3 | 29322 | 0,27 | ||
| 16 | 40,4 | 31298 | 0,25 | ||
| 17 | 940 | 8670 | 43,4 | 33733 | 0,26 |
| 18 | 40,7 | 35433 | 0,24 | ||
| 19 | 940 | 9610 | 43,2 | 37949 | 0,25 |
| 20 | 940 | 10550 | 42,7 | 40162 | 036 |
| 21 | 42,0 | 42264 | 0,25 | ||
| 22 | 940 | 11490 | 433 | 44497 | 036 |
| 23 | 41,9 | 46730 | 0,25 | ||
| 24 | 940 | 12430 | 41,9 | 48810 | 035 |
| 25 | 44,5 | 51011 | 0,24 | ||
| 26 | 43,0 | 52737 | 0,24 | ||
| 27 | 770 | 13200 | 41,1 | 54528 | 034 |
194 304
2. példa
Valamely kolonnát üzemeltetésre elkészítünk olymódon, hogy nagy tisztaságú oldható gjükóz-lzomerázt használunk a vivőanyag részleges terhelésére, illetve töltésére kezdetben és az ezt követő adagoláshoz. A kolonnában végzett műveletek ugyanazok, mint az 1. példa esetében annyiban, hogy a kukoricakeményítő-hidrolizátum átfolyási sebességét állandó értéken tartjuk és az oldható enzim a kristályos glükóz-oldatban történő betáplálását a beadagoló vezeték segítségével végezzük. Ilymódon a fruktózzá való átalakulását 40—44% értéken tartjuk 14 hétig. A betáplált 45%-os kukoricakeményítő hidrolizátum körülbelül 95% glükózt, 1,5 mmól MgS04-et és 2,0 mmól NaHSO3-at tartalmaz. A betáplált anyag pHját 7,8 körüli értékre szabályozzuk, így a távozó termék pH-ja 7,5 lesz. Az immobilizált enzimágy hőmérsékletét 60 C°-on tartjuk.
Oldható glükóz-izomeráz tisztítása
Streptomyces rubiginosus fermentációs táptalajt extrahálunk avégett, hogy felszabadítsuk az oldható glükóz-izomerázt a sejtekből az 1. példában megadott módon azzal az eltéréssel, hogy a sejteket nem választhatjuk el a táptalajtól és az extrahálás előtt mossuk. Ezután egy 2350 ml-es adag szűrt kivonatot tisztítunk szemcsés DEAE-ceDulóz kolonnán való frakcionálással. A szemcsés DEAE-cellulóz kolonna ugyanolyan anyagból áll, mint az immobilizált enzim részére alkalmazott vivőanyag az 1. példánál. A kolonna elkészítéséhez 300 g szárazanyagra számított GDC-t egyensúlyba hozunk 10 mmól Trispufferrel és a szuszpenziót egy 48 mm-es kromatografáló kolonnába töltjük egységes ágy készítése érdekében. A kolonnát 2 liter 10 mmólos Tris-pufferrel mossuk, ameddig a távozó termék pH-ja körülbelül 7 nem lesz.
A 29,3 IGIU/ml-t tartalmazó enzim-oldatot az előkészített kolonnán lefelé folytatjuk 5 ml/perc átfolyási sebességgel. Az enzim bevitele után a kolonnát 3,5 liter 10 mmólos Tris-pufferrel készített 0,1 mólos NaCl-oldattal mossuk 7-es pH-η 10 ml/perc átfolyási sebesség mellett. A távozó termék enzimtartalmát frakciónként ultraibolya abszorpcióval és enzimpróbával mutatjuk ki. Azokat a frakciókat, amelyeknek nagyobb az IGIU/ml-tartalmuk 20-nál, összegyűjtük (900 ml) és ultraszűréssel tisztítjuk. Az összegyűjtött frakciók ultraszűrését egy Amicon XM-100 membránnal végezzük egy Amicon 407 cellában keverés közben 0,7 105 Pa nitrogéngáz légkörben. Az ultraszűrőn visszamaradt anyag 800 IGlU/ml körülbelül 50%-os tisztaságú enzim. Vivőanyag immobiKzáláshoz
GDC vivőanyagot (7,75 g szárazanyag) bevi..Λ szünk egy 1. példában leírt üvegkolonnába. A vivőanyagot tisztított enzimmel töltjük felvevőképességének körülbelül 25%-álg olymódon, hogy az oszlopon lefelé szivattyúzunk 50%-os kristályos glükóz-oldatot (pH = 7,8, 4 mmól MgSO4, 5 mmól NaHS03), amely 136 ml 1/40-re hígított tisztított enzimet (2720 IGIU) tartalmaz, 0,4-0,7 ml/perc átfolyási sebességgel. A távozó folyadékban nem volt kimutatható oldható enzim. A kristályos glükózoldat (pH = 7,8, 5 mmól MgS04) 5 mmól NaHSO3) átfolyatását folytatjuk és a kolonna-köpenyt vízzel temperáljuk, olymódon, hogy a kolonnaágy hőmér20 séklete 60°C legyen.
immobilizált aktivitás vizsgálata
Az immobilizált aktivitást az 1. példában leírt módszerrel határozzuk meg. Az aktivitás mértéke Í686 IGIU volt, amely 62% adszorpciót képvisel.
Izomerizálás és enzimadagolás szabályos időközökben
Kukoricakeményítő-hidrolizátumot vezetünk át immobolizált enzimágyon és az átfolyást úgy irányítjuk, hogy a fruktózzáalakulás 40—44% legyen. Az át__ folyási sebességet körülbelül 0,35 ml/perc állandó értéken tartjuk a kísérlet folyamán. Amint a fruktózszint csökken az enzim bomlása miatt, akkor körülbelül 20 ml 434 IGIU értékű hígított, tisztított oldható izomerázt adunk egy 50%-os kristályos glükózoldathoz (pH = 7,8,5 mmól MgS04, 5 mmól gg NaHSO3 ) és az oldatot átszivattyúzzuk az ágyon körülbelül 0,4 ml/perc sebességgel. Adszorpció után a betápláló vezetéket visszacsatoljuk a kukoricakeményít-hidrolátumhoz. A Π. táblázatban az izomerálás előrehaladását és az enzimadagolást foglaljuk össze. Miként az 1. példánál, úgy itt is állandó fruk40 tóz7.á történő átalakulást tartunk fenn állandó átfolyási sebességgel olymódon, hogy szabályos időközökben oldható izomerázt adagolunk.
Π. Táblázat
Izomerizáció és enzímadagolás összefoglalása
| Hét | Enzimadagolás IGIU | Enzimfelhalmozó- zodás IGIU | Átlagos fruktóz ? % | Felhalmozódó fruktóz g 43 % szárazanyag | Enzimhatásosság IGIU/g43 %-os szárazanyag |
| 1 | 2720 | ' 2720 | 33,5 | 1608 | 1,69 |
| 2 | 434 | 3154 | 413 | 3149 | 1,00 |
| 3 | 434 | 3588 | 42,9 | 4756 | 0,75 |
| 4 | 3588 | 43,6 | 6117 | 0,59 | |
| 5 | 434 | 4022 | 42,3 | 8236 | 0,49 |
| 6 | 4022 | 43,1 | 9664 | 0,42 | |
| 7 | 434 | 4456 | 41,6 | 11240 | 0,40 |
| 8 | 434 | 4890 | 41,0 | 12924 | 0,38 |
| 9 | 4890 | 41,9 | ! 14585 | 0,34 | |
| 10. | 434 | 5324 | 45,1 | 16366 | 0,33 |
| 11 | 5324 | 43,2 | 18152 | 0,29 | |
| 12 | 434 | 5758 | 42,1 | 19535 | 0,29 |
| 13 | 5758 | 42,4 | 21108 | 0,27 | |
| 14 6 | 5758 | 39,7 | 22624 | 0,25 |
194 304
A fenti példák egy előnyösen alkalmazható enzimrendszerre vonatkoznak, de a szakember minden különösebb nehézség nélkül más enzlm/hordozó kombi nációt is kiválaszthat, mely a találmány szerinti el Q járás során jó eredménnyel felhasználható.
Az alábbi táblázat (Handbook of enzyme blotechnology, fírst publlshed in 1985, Ellis Hozwood Limited) néhány működőképes enzlm/hordozó kombinációt Ismertet.
Ionos kötéssel előállított immobilizált enzimek
Hordozó
Anion cserélők DEAE-cellulóz
Enzim
Irodalom
AE-ceDulóz TEAE-cellulóz _ DEAE-Sephadex®
OAE-Sephadex®
DEAE-BituGer A Amberlite^ IRA 93 Amberllte® IRA 94 Amberlite® IRA 910 Amberlite® IRA 938 Kation cserélők CM-cellulóz
Cellulóz foszfát
CM-Sephadex,
SP-Sephadex®
Dextran szulfát Amberlite® IRC-50 Amberllte® IRC-200
Glükoamfláz (EC 3.2.1.3)
Foszfodiészteráz (EC 3.1.4.1) D-glükóz-izomeráz (EC 5.3.1.18)
Inulináz (EC 3.2.1.7)
Metanol oxidáz i Dextranszukráz (EC 2.4.1.5)
Aminoacfláz (EC 3.5.1.14)
Korldazon dihidrodlal deWdrogenáz A és B D-glükóz-izomeráz (EC 5.3.1.18) Pullulanáz (EC 3.2.1.41) D-glükóz-izomeráz (EC 5.3.1.18)
Fenol 2-monooxigenáz (EC 1.14.13.7) Dextranszukráz (EC 2.4.1.5) /3D-fruktofuranozidáz (EC 3.2.1.26) Hexokináz (EC 2.7.1.1)
Kreatin kináz (EC 2.7.3.2) '
Karbamojl foszfát szintetáz (EC 6.3.4.16/6.3.5.5)
Fenol 2-monooxlgenáz (EC 1.14.13.7) D-glükóz oxidáz (EC 1.1.3.4) β-D-fruktofuranozidáz (EC 3.2.1.26) D-gJükóz óxldáz-(EC 1.1.3.4)
D-glükóz oxidáz (EC 1.1.3.4)
Penicillin amldáz (EC 3.5.1.11) Aminoacil-tRNA szlntetázok β-D-fruktofuranozidáz (EC 3.2.1.26) Dextranszukráz (EC 2.4.1.5),
Glükoamfláz (EC 3.2.1.3)
Laktát dehidrogenáz (EC 1.1.1.27) Koleszterol oxidáz (EC 1.1.3.6( 0-D-fruktofuranozidáz (EC 3.2.1.26) Oltóenzim
Maeda et al. (1979)
Aukatí etal. (1978)
Huitron Limon-Lason (1978) Guiraud et al. (1981)
Barratl etal. (1978)
Kaboli Reilly (1980)
Szwajcer et al. (1981)
Kefleretal. (1979)
Huitron Limon-Lason (1978) Ohba etal. (1978)
Huitron limön-Lason (1978) Kjellén Neujahr (1979 1980) Kaboli Reilly (1980)
Woodward Wiseman (1978) Miura et al (1979)
Miura et al. (1979)
Miura et al. (1979)
Kjellén Neujahr (1979 1980) Kiéi etal. (1978)
Ooshima et al. (1980)
Kiéi et al. (1978)
Kiél et al (1978)
Carleysmlth et al (1980)
Yamada (1978)
Woodward Wisemann (1978) Kaboli Reilly (1980)
Adachi et al. (1978)
Klinov et al. (1979)
Cheetham (1979)
Ooshima et al. (1980)
Gouges et al. (1979)
Claims (15)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás Immobilizált enzim aktivitásának szlntentartására valamely reaktorban, azzal jelle- 45 m e z v e, hogya) szilárd hordozóanyagon az adszorpció körülményei között az enzim olyan mennyiségét adszorbeáljuk, amely az aktivitás egy előre meghatározott szintjét képviseli és ez kisebb a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességénél, 50b) az enzlmaktívitást folyamatosan ellenőrizzük, ésc) további enzimmmenylségeket adszorbeálunk a hordozóanyagon az előre meghatározott aktivitásszint fenntartására, mihelyt — a mérés alapján — az előzőleg adszorbeált enzim aktivitása az előre mégha- 55 tározott szint alá csökken.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hordozóanyagként gyengén bázisos anioncserélő adszorbenst használunk.
- 3. A 2. Igénypont szerinti eljárás, azzal jel- -q 1 em e z v e, hogy gyengén bázisos anioncserélő ou adszorbensként sztriol-divinll-benzol kopolimert, poUsztírol-fenol gélt, polisztírol-poliamin gélt, dietíl-amlno-etll keresztkötéses dextrán-ágy gélt vagy dletfl-amlno-etfl cellulóz gélt használunk.
- 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szilárd hordozóként dietfl-amlno-etfl keresztkötéses dextrán-ágy gélt vagy dletö-amlno-etil cellulóz gélt használunk.
- 5. Az 1-4. Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal j e 11 e m e z v e, hogy a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességének 1-90%-át kitevő enzimmennyiséget alkalmazunk.
- 6. Az 5. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett felvevőképesség 10—50%-ának megfelelő enzimmennyiséget alkalmazunk.
- 7. A 6. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett felvevőképesség 25%ának megfelelő enzimmennyiséget alkalmazunk.
- 8. Áz 1-7 Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az enzimaktivitást úgy ellenőrizzük, hogy szabályos időközök-72194 304 ben meghatározzuk az enzim által képzett tennék mennyiségét.
- 9. Az 1-8. Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a további enzimmennyiséget az immobfljzált enzimreakció folyamata során adagoljuk.
- 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzaljel1 e m e z v e, hogy a további enzimet a betáplált anyagba visszük be.'.
- 11. Az 1. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy enzimként glükóz-izomerázt használunk.
- 12. A 11. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy termékként fruktózt állítunk elő és a betáplált anyag glükózt tartalmaz.
- 13. Az 1-12. Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan enzimet használunk, amely az eljárás során mind aktív, mind Inaktív formában a hordozón adszorbeálva van jelen.
- 14. A 11. vagy 12. igénypont szerinti eljárás, azzál jellemezve, hogy az immobfilzált glükóz-izomerázt valamely glükóz-oldattal étintkez5 tétjük olymódon, hogy folyamatosan termeljünk 40-44% fruktózt.
- 15. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogya) valamely szilárd hordozóanyagra adszorpciós körülmények között olyan glükóz-izomeráz mennyl10 séget adszorbeálunk, amennyi képes arra, hogy 40— 44% fruktózt tartalmazó terméket képezzen, és amely a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességének 3 25%-a.b) ellenőrizzük a 40-44% fruktózt tartalmazó # - termék képződését és 1 ° c) további glükóz-izomeráz mennyiségeket adszorbeálunk a hordozóanyagra annak érdekében, hogy fenntartsuk a 40- 44% fruktózt tartalmazó tennék képzését, mihelyt az előzőleg adszorbeált glükóz-Izomeráz által termelt fruktóz 40% alá csökken.rajz nélkül
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63687984A | 1984-08-02 | 1984-08-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT39206A HUT39206A (en) | 1986-08-28 |
| HU194304B true HU194304B (en) | 1988-01-28 |
Family
ID=24553722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU852958A HU194304B (en) | 1984-08-02 | 1985-08-01 | Process for stabilizing activity of immobilized enzyme |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0171258B1 (hu) |
| JP (1) | JPH0611234B2 (hu) |
| AT (1) | ATE71142T1 (hu) |
| BE (1) | BE903010A (hu) |
| CA (1) | CA1248896A (hu) |
| CH (1) | CH664973A5 (hu) |
| DE (1) | DE3585060D1 (hu) |
| FI (1) | FI91279C (hu) |
| FR (1) | FR2568586B1 (hu) |
| HU (1) | HU194304B (hu) |
| IT (1) | IT1187722B (hu) |
| LU (1) | LU86030A1 (hu) |
| SU (1) | SU1720492A3 (hu) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62248487A (ja) * | 1986-04-22 | 1987-10-29 | Dentaru Kagaku Kk | グルカナーゼを固定化したアパタイトおよびその製造法 |
| CA2778095A1 (en) * | 2012-05-17 | 2013-11-17 | Co2 Solutions Inc. | Activity replenishment and in situ activation for enzymatic co2 capture packed reactor |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS571997B2 (hu) * | 1973-09-13 | 1982-01-13 | ||
| ES429986A1 (es) * | 1973-09-13 | 1977-05-16 | Cpc International Inc | Un procedimiento para preparar un producto portador de levu-losa. |
| DE2821890A1 (de) * | 1978-05-19 | 1979-11-22 | Dynamit Nobel Ag | Verfahren zur regenerierung von enzym-immobilisaten |
| CA1143308A (en) * | 1980-03-10 | 1983-03-22 | Guan-Huei Ho | High performance immobilized enzyme compositions by multi-layering immobilization offering a high amount of activity per unit volume |
| US4411996A (en) * | 1982-06-30 | 1983-10-25 | Nabisco Brands, Inc. | Process for isomerizing glucose |
-
1985
- 1985-07-31 EP EP85305446A patent/EP0171258B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-31 AT AT85305446T patent/ATE71142T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-07-31 LU LU86030A patent/LU86030A1/fr unknown
- 1985-07-31 CH CH3313/85A patent/CH664973A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1985-07-31 JP JP60170545A patent/JPH0611234B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-31 DE DE8585305446T patent/DE3585060D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-01 HU HU852958A patent/HU194304B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-08-01 IT IT21816/85A patent/IT1187722B/it active
- 1985-08-01 SU SU853938656A patent/SU1720492A3/ru active
- 1985-08-01 FR FR858511801A patent/FR2568586B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1985-08-02 CA CA000488026A patent/CA1248896A/en not_active Expired
- 1985-08-02 FI FI852989A patent/FI91279C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-08-02 BE BE0/215430A patent/BE903010A/fr not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| LU86030A1 (fr) | 1986-02-12 |
| FI852989A0 (fi) | 1985-08-02 |
| FI91279C (fi) | 1994-06-10 |
| JPS6140791A (ja) | 1986-02-27 |
| FI91279B (fi) | 1994-02-28 |
| EP0171258B1 (en) | 1992-01-02 |
| CA1248896A (en) | 1989-01-17 |
| IT1187722B (it) | 1987-12-23 |
| HUT39206A (en) | 1986-08-28 |
| JPH0611234B2 (ja) | 1994-02-16 |
| BE903010A (fr) | 1986-02-03 |
| SU1720492A3 (ru) | 1992-03-15 |
| EP0171258A2 (en) | 1986-02-12 |
| FR2568586B1 (fr) | 1990-04-13 |
| IT8521816A0 (it) | 1985-08-01 |
| EP0171258A3 (en) | 1989-04-12 |
| ATE71142T1 (de) | 1992-01-15 |
| CH664973A5 (fr) | 1988-04-15 |
| DE3585060D1 (de) | 1992-02-13 |
| FI852989L (fi) | 1986-02-03 |
| FR2568586A1 (fr) | 1986-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4713333A (en) | Immobilization of biocatalysts on granular diatomaceous earth | |
| JPH02291265A (ja) | 水―不溶性グルコースイソメラーゼ結晶およびその製造法 | |
| KR940005581B1 (ko) | 효소의 고정화방법 및 고정화 효소 | |
| JPH082311B2 (ja) | ポリアゼチジンポリマー固定化微生物細胞による有用物質の製造方法 | |
| FI79557C (fi) | Foerfarande foer isomerisering av glukos till fruktos. | |
| US5177005A (en) | Method for maintaining immobilized glucose isomerase activity during continuous isomerization of glucose to fructose | |
| HU194304B (en) | Process for stabilizing activity of immobilized enzyme | |
| US4614548A (en) | Chromatographic separation of dextrose from starch hydrolysate | |
| CA1178550A (en) | Process for producing glucose/fructose syrups from unrefined starch hydrolysates | |
| US4347322A (en) | Chromatographic process for enzyme purification | |
| WO1981001418A1 (en) | Process for isomerizing glucose to fructose | |
| US3941655A (en) | Method for recovering xylose isomerase | |
| CA1213235A (en) | Process for preparing high dextrose starch hydrolysates from immobilized glucoamylase | |
| CA1127573A (en) | Method using glucoamylase immobilized on porous alumina | |
| JP2000513570A (ja) | 固定化された微生物によるイソマルツロースの製造方法およびそのための担体 | |
| CA1281675C (en) | Product and process for increasing enzyme adsorption | |
| US4343902A (en) | Production of immobilized glucose isomerase | |
| US4665025A (en) | Process for the preparation of isoglucose | |
| EP0014866B1 (en) | An immobilized glucose isomerase system and a process for the isomerization of glucose using said system | |
| KR0181701B1 (ko) | 효소 흡착력을 증가시키기 위한 복합재 및 이의 제조방법 | |
| KR860000306B1 (ko) | 글루코오스의 이성화 방법 | |
| KR870001148B1 (ko) | 고착글루코오스 이성화 효소의 제조방법 | |
| JPS62134088A (ja) | 固定化酵素 | |
| JP2778975B2 (ja) | マルトシル―サイクロデキストリンの製造方法 | |
| AU6577880A (en) | Process for isomerizing glucose to fructose |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: STABRA AG,HU |
|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |