HU189706B - Improved process for the production of interferon - Google Patents
Improved process for the production of interferon Download PDFInfo
- Publication number
- HU189706B HU189706B HU832194A HU219483A HU189706B HU 189706 B HU189706 B HU 189706B HU 832194 A HU832194 A HU 832194A HU 219483 A HU219483 A HU 219483A HU 189706 B HU189706 B HU 189706B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- interferon
- cells
- yield
- induction
- alkyl
- Prior art date
Links
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims abstract description 56
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims abstract description 56
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 33
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 29
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- AVQQQNCBBIEMEU-UHFFFAOYSA-N 1,1,3,3-tetramethylurea Chemical compound CN(C)C(=O)N(C)C AVQQQNCBBIEMEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- FZERHIULMFGESH-UHFFFAOYSA-N N-phenylacetamide Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC=C1 FZERHIULMFGESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- -1 alkanoyl carboxylic acid Chemical class 0.000 claims description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 7
- CPJSUEIXXCENMM-UHFFFAOYSA-N phenacetin Chemical compound CCOC1=CC=C(NC(C)=O)C=C1 CPJSUEIXXCENMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N piperidin-2-one Chemical compound O=C1CCCCN1 XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- GGYVTHJIUNGKFZ-UHFFFAOYSA-N 1-methylpiperidin-2-one Chemical compound CN1CCCCC1=O GGYVTHJIUNGKFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BNQSTAOJRULKNX-UHFFFAOYSA-N N-(6-acetamidohexyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NCCCCCCNC(C)=O BNQSTAOJRULKNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000003869 acetamides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960001413 acetanilide Drugs 0.000 claims description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940054066 benzamide antipsychotics Drugs 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical class NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 1
- OAERLTPBKQBWHJ-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylhexanamide Chemical compound CCCCCC(=O)N(C)C OAERLTPBKQBWHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ILVXOBCQQYKLDS-UHFFFAOYSA-N pyridine N-oxide Chemical compound [O-][N+]1=CC=CC=C1 ILVXOBCQQYKLDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 71
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 14
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 description 8
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 5
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 4
- PMDCZENCAXMSOU-UHFFFAOYSA-N N-ethylacetamide Chemical compound CCNC(C)=O PMDCZENCAXMSOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- NCCHARWOCKOHIH-UHFFFAOYSA-N n-methylbenzamide Chemical compound CNC(=O)C1=CC=CC=C1 NCCHARWOCKOHIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- RYECOJGRJDOGPP-UHFFFAOYSA-N Ethylurea Chemical compound CCNC(N)=O RYECOJGRJDOGPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XGEGHDBEHXKFPX-UHFFFAOYSA-N N-methyl urea Chemical compound CNC(N)=O XGEGHDBEHXKFPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OHLUUHNLEMFGTQ-UHFFFAOYSA-N N-methylacetamide Chemical compound CNC(C)=O OHLUUHNLEMFGTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 229940113088 dimethylacetamide Drugs 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 3
- YBBLOADPFWKNGS-UHFFFAOYSA-N 1,1-dimethylurea Chemical compound CN(C)C(N)=O YBBLOADPFWKNGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWAVGZYKJNOTPX-UHFFFAOYSA-N 1,3-diethylurea Chemical compound CCNC(=O)NCC ZWAVGZYKJNOTPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZFPGARUNNKGOBB-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-2-pyrrolidinone Chemical compound CCN1CCCC1=O ZFPGARUNNKGOBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MNOILHPDHOHILI-UHFFFAOYSA-N Tetramethylthiourea Chemical compound CN(C)C(=S)N(C)C MNOILHPDHOHILI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- DNSISZSEWVHGLH-UHFFFAOYSA-N butanamide Chemical compound CCCC(N)=O DNSISZSEWVHGLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000010855 food raising agent Nutrition 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- AJFDBNQQDYLMJN-UHFFFAOYSA-N n,n-diethylacetamide Chemical compound CCN(CC)C(C)=O AJFDBNQQDYLMJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GYLDXXLJMRTVSS-UHFFFAOYSA-N n-butylacetamide Chemical compound CCCCNC(C)=O GYLDXXLJMRTVSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940080818 propionamide Drugs 0.000 description 2
- ZQZJKHIIQFPZCS-UHFFFAOYSA-N propylurea Chemical compound CCCNC(N)=O ZQZJKHIIQFPZCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinon Chemical compound CN1CCN(C)C1=O CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940057054 1,3-dimethylurea Drugs 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- BMTAFVWTTFSTOG-UHFFFAOYSA-N Butylate Chemical compound CCSC(=O)N(CC(C)C)CC(C)C BMTAFVWTTFSTOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- MGJKQDOBUOMPEZ-UHFFFAOYSA-N N,N'-dimethylurea Chemical compound CNC(=O)NC MGJKQDOBUOMPEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FQKKPLXFGDCBJT-UHFFFAOYSA-N N-(5-Acetamidopentyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NCCCCCNC(C)=O FQKKPLXFGDCBJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- MJNIWUJSIGSWKK-UHFFFAOYSA-N Riboflavine 2',3',4',5'-tetrabutanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)C(OC(=O)CCC)C(OC(=O)CCC)CN1C2=CC(C)=C(C)C=C2N=C2C1=NC(=O)NC2=O MJNIWUJSIGSWKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000003377 anti-microbal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N hexanamide Chemical compound CCCCCC(N)=O ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- XGEGHDBEHXKFPX-NJFSPNSNSA-N methylurea Chemical compound [14CH3]NC(N)=O XGEGHDBEHXKFPX-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- VJPODIJDERZHMG-UHFFFAOYSA-N n-(6-hydroxyhexyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NCCCCCCO VJPODIJDERZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQMWGNLDKKJHFU-UHFFFAOYSA-N n-(7-acetamidoheptyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NCCCCCCCNC(C)=O ZQMWGNLDKKJHFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003585 thioureas Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/811—Interferon
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Electroluminescent Light Sources (AREA)
Description
Az interferon olyan fehérje, amely a celluláris anyagcserefolyamatok - így az RNS és fehérjeszintézis — befolyásolásával nem specifikus vírusellenes hatással rendelkezik, legalábbis a homológ sejtekben. Az interferonok potenciális vírus- és rákellenes gyógyszerként széles érdeklődésre tartanak számot. Számos interferon-típus ismeretes, így az alfa-(leukocita), béta-(fibroblaszt) és gamma-(immun)-interferonok. A jelen találmány alfa-interferonok előállítására vonatkozik.
Az alfa-interferonok elsődleges forrásai az emberi fehérvérsejtek, de ezek révén nem biztosítható a klinikai célokra szükséges mennyiségű alfa-interferon. Újabban olyan eljárásokat írtak le, amelyekben az alfa-interferont transzformált emberi sejtekkel, nevezetesen emberi limfoblasztoid sejtekkel állítják elő. (Advances im Experimental Medicine and Biology 1978, 110, 61—74, J. Clinical Microbiology
1978, 7, 44—51), sőt legújabban az alfa-interferon nagyléptékű előállítását is megvalósították. (Antimicrobal Ágenst and Chemotherapy 1979 15,420— 427, Texas Report Bioi. Med. 1981-82. 41, 175— 178).
A humán limfoblasztoid sejtekből való alfa-interferon előállítás lépései a következők:
i) a limfoblasztoid sejtek tenyésztése alkalmas tápközegben, ii) induktor hozzáadásával a sejtek interferon-termelésre való serkentése, iii) az indukciót követően a sejtek inkubálása, majd iv) a képződött interferon kinyerése.
Számos technika ismeretes az ilyen eljárással történő interferon előállítás hozamának növelésére.
Az egyik ilyen módszer szerint például a limfoblasztoid sejteket, az indukció előtt bizonyos ideig „előkezelő szerrel vagy „stimulátorral kezelik. így a 0 000 520 számú európai szabadalmi leírás olyan eljárást ismertet az interferonhozam növelésére, amelyben az előkezelést karbonsavval vagy vannak sójával, nevezetesen nátrium-butiráttal végzik. Az irodalomban hasonló előkezeléses eljárások ismeretesek egy sor más vegyület alkalmazásával (Virology
1979, 99, 158—166, 0 008 391 számú európai szabadalmi leírás) is.
Az ilyen módszereknél általában az indukció előtt a sejteket bizonyos ideig, például kb. 48 óráig kezelik, majd az indukció előtt az előkezelő szert eltávolítják.
Egy más eljárás szerint az interferonhozam növelése elérhető úgy is, hogy a tenyésztett sejtek hőmérsékletét az indukció során, vagy utána csökkentik (Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1973, 70, 3909-3913, Japanese J. Microbiology 1974 18, 217-222, Microbiol. Immunoi. 1980 24, 907-914, J. Gén Virology 1981 56 163-174).
Az irodalomból korábban az volt ismeretes, hogy az előzőekben idézett „stimulátorok adagolása az indukció során vagy azt követően előnytelenül befolyásolja a sejtek interferonhozamát. Különösen vonatkozik ez a karbonsavakra, így például a vajsavra (Virology 1979 99, 158-166, Bíochem. Biophys. Rés. Commun. 1981 103,806—812).
Azt találtuk, hogy bizonyos vegyületek (a továbbiakban hozamnövelő szerek (adagolása a limfoblasztoid sejtek indukciója során vagy röviddel azt követően, fokozza az interferonhozamot.
A találmány ennek megfelelően elsősorban interférőn előállítására szolgáló eljárásra vonatkozik, amelynek során az indukálható limfoblasztoid sejteket induktor hozzáadásával serkentjük interferon termelésére, azzal jellemezve, hogy a sejteket indukálásuk során, vagy röviddel azt követően találmányban ismertetett hozamnövelő szerrel kezeljük.
Az interferon előállításához a limfoblasztoid sejteket az igényeknek megfelelően választjuk, így például az emberek gyógykezelésére szánt interferon esetében rendszerint emberi sejteket alkalmazunk. Előnyösen használhatók fel ilyen célra a Namalwa sejtek vagy más alkalmas limfoblasztoid sejtvonalak. Tenyészetben elszaporítható limfoblasztoid sejtvonalak problémamentesen származtathatók emberi perifériás vérből eredő leukociták tenyészetéből közismert módszerekkel. (Hope, J. H., Home, Μ. K., Scott, W„ Int. J. Cancer, 1978, 3, 857866, Hope, J. H., Home, Μ. K. Scott, W., Int. J. Cancer 1969, 4, 255—260, Chang, R. S., Goidén, H. D., Natúré 1971, 234, 359-360) Ennek megfelelően egészséges vagy beteg egyénekből egyaránj nyerhetők leukociták, amelyek vagy „spontán származtathatók, amennyiben már eleve fertőzöttek Epstein-Barr vírussal (EBV), vagy pedig EBV-sal nem fertőzött leukociták tenyészetéből származtathatók pl. köldökzsinór véréből nyert leukociták, amelyekhez EBV-t adunk.
Limfoblasztoid sejtvonalak könnyedén nyerhetők Burkitt limfomában szenvedő betegek sejtjeiből, mivel ezek már eleve fertőzöttek EBV-sal. Egy bizonyos sejtvonalat, a Namalwát G. Klein professzor származtatta Stockholmban (Nyormoi, O., Klein, G., Adams, A., Dombos, L., Int. J. Cancer 1973, 12, 396—408) egy ilyen nevű afrikai leánygyermek sejtjeiből. Úgy találták, hogy ennek a sejtvonalnak a sejtjei megfelelő serkentés esetén rengeteg interferont képesek termelni (Strander, H., Mogesen,
K. E., Cantell, K., J. Clin. Microbiol. 1975, 1, 116— 117, Christophinis, G. J., Síeli, C. M. and Finter, N. B., J. Gén. Virol. 1981, 52, 169-171). Ennek a sejtvonalnak egy szubkultúráját 1975. januárjában kaptuk Dr. Ion Gressertől (Villejuif, Franciaország). Ekkor szoktatták a sejtvonalat 10% magzati borjúszérummal kiegészített RMPI 1640 táptalajon való növekedéshez.
A sejteket a Wellcome Research Laboratories cég kutatói szoktatták 5-7% 6-8 hónapos borjúkból származó szérummal kiegészített ugyanolyan táptalajon való növekedéshez és a tenyészetet 18 hónapon át hetenként kétszer-háromszor oltották át. Ezekből a sejtekből Alapbankot hoztak létre, amely most a Namalwa (WRL elnevezést viseli, számos, folyékony nitrogénben tárolt ampullával. A sejtek mentesnek mutatkoztak a mycoplazmás fertőzéstől és mintákat helyeztek letétbe az ATCC (American Type Culture CoŰection) törzsgyűjteményben (1978. július 7-én CRL 1432. számon). A későbbi példákban Namalwa (WRL sejtek szerepelnek, de a találmány éppúgy alkalmazható más Namalwa szubkultúrákra, valamint egyéb, alkalmas limfoblaszfpid sejtekre is.
A „hozamnövelő szer kifejezés minden olyan vegyületre vonatkozik, amely az indukció során vagy röviddel azt követően adagolva jelentősen növeli az interferonhozamot a szer távollétében kapott értékhez képest.
Nagyszámú különböző vegyület bizonyult hatékony hozamnövelő szemek. Ezek közül számosakat
189 706 említettek korábban „stimulátorként” a sejtek indukciót megelőző előkezelésére. A legelőnyösebb stimulátorok azonban, az alkánsavak (különösen a vajsav) és sóik, valamint a szteroidok (például a dexametazon), nem hozamnövelő szerek, sőt csökkentik az interferonhozamot, amennyiben jelen vannak az indukció alatt vagy után.
Az egyes hozamnövelő hatású vegyületeket a Friend-sejtek differenciálódását kiváltó hatással is rendelkeznek (jóllehet nem minden Friend-sejt van hozamnövelő hatása). (Kémiailag kiváltott patkány eritrolukémia differenciálódás, Reuben, R. C. és munkatársai, Biochemica et Biophysica Acta, 1980,605,325—346).
Hatásos hozamnövelő szerek a következő vegyületek: N-Acetil-p-amino-fenol,
Acetamid és adott esetben egy hidroxilcsoporttal helyettesített N-(l-6 szénatomos alkil- és dialkil)-acetamidok (pl. N-metil-acetamid,
Ν,Ν-dimetil-acetamid, N-etil-acetamid, N,N-dietil-acetamid, N-butil-acetamid, N-acetil-6-hidroxi-hexil-amin),
Acetanilid és rövid szénláncú alkoxi-acetanilidek (pl. p-etoxi-acetanilid),
4-8 szénatomos alkilén-bisz-acetamidok (mint például hexametilén-bisz-acetamid, pentametilén-bisz-acetamid, heptametilén-bisz-acetamid),
Ν,Ν-Diemtil-hexánamid,
Dimetil-szulfoxid,
Rövid szénláncú alkánsav-amidok (pl.: propionamid, butiramid),
Rövid szénláncú alkil-benzamídok (pl.: N-metil-benzamid),
Rövid szénláncú alkil-2-imidazolidinonok (pl.: 1,3-dimetil- 2-imidazolidinon),
1- rövid szénláncú alkil-2-pirrolidinonok (pl.: 1-metil-2-pirrolidinon,
-etil-2-pirrolidinon,
2- Piperidon és 1-rövid szénláncú alkil-2-piperidonok (pl.: 1-metil-2-piperidon),
Piri din-N-oxid, valamint
Karamid- és tiokarbamid-származékok (pl.: tetrametil-tiokarbamid, rövid szénláncú alkil-karbamidok, amilyen például az 1-metil-karbamid, 1-etil-karbamid, 1-propil-karbamid, 1,1-dimetil-karbamid, 1,3-dimetil-karbamid, 1,3-dietil-karbamid).
Különösen előnyös vegyületek a következők: N-acetil-p-amino-fenol,
N,N-dimetil-acetamid,
13-dimetil-2-imidazolídinon, dimetil-szulfoxid, p-etoxi-acetanilid, hexametilén-bisz-acetamid,
N-metil-acetamid,
1-m'til-piperidon, l-metil-2-pirrolidon, valamint tetrametil-karbamid. „
Az itt szereplő „rövid szénláncú alkil megjelölés 1-4 ezénatomos alkilcsoportot jelent. Az interferontermelés érdekében a kiválasztott sejteket először is tenyészteni kell olyan körülmények között, amelyek a szakirodalom szerint az adott sejttípusnak vagy törzsnek megfelelnek. A humán limfoblasztoid sejtek - amilyen a Namalwa sejtvonal is — például jól nőnek a szérummal - ez általában 5-10 térfogatszázalék borjú- vagy lószérum — kiegészített RPMI 1640 tápközegben (MOORE, G. E., és munkatársai.,
J. Amer. Med. Assoc. 1967. 199, 519—524).
A limfoblasztoid sejtekkel (például a Namalwa sejtekkel) történő interferontermelés során először Is a sejteket addig tenyésztjük, amíg megfelelő koncentrációjú szuszpenziót kapunk.
Az interferontermeléshez szükséges koncentrációk, körülmények, stb., a szakemberek körében közismertek és nyilvánvalóak.
Ennek a lépésnek a során adagoljuk a hozamnövelő szert. Legjobb a szert az indukció során hozzáadni (azaz, amikor az indukáló anyagot, pl.: Sendai vírust adják a tenyészethez az interferontermelés kiváltása céljából) vagyis a hozamnövelő szer már eleve jelen lehet a sejtszuszpenzió tápközegében közvetlenül az indukálás előtt, vagy pedig közvetlenül az indukció után adandó a sejtszuszpenzióhoz. Mindazonáltal a találmány szerinti előnyös hatás akkor is tapasztalható, ha a hozamnövelő szer hozzáadása valamivel később, de az indukciót követő két órán belül történik.
A hozam növelő szer alkalmazott mennyiségét a sejtvonalra gyakorolt toxieitása korlátozza, de ez a mennyiség olyan legyen, hogy növelje az interferonhozamot. A toxikus és a hozamnövelő hatás eredőjeként kapható optimális koncentráció az egyes hozamnövelő szereknél más és más, de általában 0,1 és 500 mM, előnyösen 1 és 200 mM, legelőnyösebben 5 és 50 mM között.
Az indukció és az ezt követő inkubáció bármely ismert módon történhet az interferontermelés érdekében. A sejtek például újraszuszpendálhatók RPMI 1640 tápközegben — szérum nélkül, vagy 5 térfogatszázalék szérummal kiegészítve ) 0,25 és 6xlOe sejt/ ml, előnyösen 0,5 és 3x10* sejt/ml koncentrációhatárok közé. Ezután alkalmas induktort — amilyenek a vírusok, így például a Sendai vírus (Johnston, M. D. J. Gén. Virol, 1981 56, 175-184) — adunk a sejtszuszpenzióhoz 5 és 200 Hemagglutinációs Egység/ml (HAU/ml), előnyösen pedig 20 és 50 HAU/ml közötti végkoncentrációban. Alapos keverés után a sejtszuszpenziót 34-37°C hőmérsékleten 12-48 órán át inkubáljuk. Például 35°C-on éjszakán át inkubálva a sejttenyészetet a keletkező interferon a sejtekből a tápközegbe kerül. Ezután a sejteket például centrifugálással eltávolítjuk és így nyers interferont tartalmazó felülúszóhoz jutunk, amely szükség esetén ismert módon tisztítható. (Hemagglutinációs egység meghatározása: Granóff A. és mtsai, Studies on the Interaction of the Large and Small Heamagglutinating Components of Newcartle Disease Viras with Red Blood Cells, J. Of Immunologie, 1954, 72, 329—339). A hozam növekedése a hozamnövelő szer használata esetén igen jelentős, a hozam elérheti a szer távollétében mért érték ötszörösét is.
A hozamnövelő szer hatásmechanizmusa jelenleg még nem teljesen tisztázott. A bizonyítékok azonban arra utalnak, hogy az interferontermelés sebessége hosszabb ideig növekszik, mint a szer távollétében. Ez a jelenség annak tulajdonítható, hogy az interferon m-RNS hosszabb időn keresztül képződhet, vagyis valódi szuperindukcióról van szó. Ennek megfelelően a találmány egyidejűleg olyan interferon előállítási eljárásra is vonatkozik, amelynek során az indukálható lirr ^oblasztoid sejteket induktor hozzáadásával serkentik interferon termelésére, azzal jellemezve, hogy az indukciót követően az interferon termelés sebességének növekedése jelentősen hosz-31
189 706 szabb ideig tart, miflt egyébként.
Az „egyébként kifejezés olyan interferon előállítási eljárást takar, amelynek során az interferont limfoblasztoid sejtekkel a szakirodalomban ismert módon állítják elő, anélkül azonban, hogy az interferon képződési sebesség növekedésének időtartamát bármely módon befolyásolnák,
Az interferon képződési sebesség növekedési időintervallumának megnyúlása elérhető az interferon mRNS átíródási időszakának megnövelésével, azaz szuperindukció révén.
Ez az időtartam növekedés kényelmesen megvalósítható a jelen találmányban szereplő hozamnövelő szerek és körülmények alkalmazásával. A találmány így olyan módszerre is vonatkozik, amellyel az interferon termelés időszaka megnyújtható a hagyományos, ismert módszerekkel történő interferontermelés során tapasztalhatóhoz képest.
A jelen találmány igen előnyösen kombinálható ismert módszerekkel a limfoblasztoid sejtvonalakkal való interferon előállítás hozamának növelésére, így a hőmérséklet csökkentés és az indukció előtt a stimulátorral történő előkezelés egyaránt kombinálható az itt ismertetett módszerekkel és a kombináció révén jobb hozammal kapható az interferon, mint az egyes módszerekkel külön-külön. Különösen a sejtek indukció előtti, stimulátorral történő előkezelése (0 000 520 és 0 008 391 számú európai szabadalmi leírások, mindkettőre hivatkozunk is a jelen találmányban) bizonyultak előnyösnek.
Midőn valamely stimulátor hozamnövelő szerként is alkalmazható, ugyanazon vegyűlet két funkcióját is kihasználhatjuk. Előnyösen azonban az előkezelést a 0 000 520 számú európai szabadalmi leírás szerinti módszenei végezzük, vagyis alkánsawal vagy sójával, nevezetesen vajsavval vagy nátrium-butiráttal.
Ennek megfelelően a találmány tárgya még olyan interferon előállítására szolgáló eljárás is, amelynek során interferon termelésre serkenthető limfoblasztoid sejtekhez — amelyeket előzőleg megfelelő ám nem toxikus mennyiségű stimulátort tartalmazó közegben inkubáltak — induktort és az indukció során, vagy röviddel azután, az előzőkben ismertetett hozamnövelő szert adnak.
A találmány tárgya továbbá olyan, interferon előállítására szolgáló eljárás is, amelynek során interferon termelésére serkenthető limfoblasztoid sejtekhez — amelyeket előzőleg megfelelő, ám nem toxikus mennyiségű stimulátort tartalmazó közegben inkubáltak - induktort adunk és amelynél az Indukció utáni időszak, amikor az interferon képződés sebessége növekszik, jelentősen meghosszabbodik.
A következő példák a találmányt szemléltetik, anélkül azonban, hogy tárgykörét korlátoznák.
1. példa
Hozamnövelő szerek hatása az interferon termelésre
Kisérletsorozatot végeztünk, amelynek során Namalwa/WRL sejteket 5% felnőtt marha szérumot, polimixint, neomicint és a pH szabályozására nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó PRMI 1640 táptalajon tenyésztettünk. Midőn a sejtkoncentráció 2x10* sejt/ml értéket ért el, mintát vettünk belőle, amelyet az említett táptalajjal duplájára higítottunk. A sejtszuszpenzióhoz ezután 1 mM nátrium-butirátot adtunk, majd keverés közben 37°C-on 48 órán át inkubáltuk. Az inkubációs periódus után 800 g-val történő centrifugálással a sejteket elválasztottuk, és 2% felnőtt marha szérumot tartalmazó RPMI 1640 táptalajjal 3x10* sejt/ml koncentrációjú szuszpenziót készítettünk belőlük. A sejtszuszpenzióhoz az interferonképzés indukálására 10 HAU/ ml Sendai vírust adtunk, majd az indukált sejteket 10 ml-enként 25 cm3-es műanyag lombikokba szétmértük. Az egyes lombikokat az 1. Táblázatban szereplő módon különböző hozamnövelő szerekkel kezeltük. Két lombikot hagytunk meg adagolatlan kontrollnak. A sejteket 24 óra múltán centrifugálással (800 g, 5 perc) eltávolítottuk és az interferont tartalmazó tiszta felülúszót, pH 2-re savanyítottuk, 24 órán át 4°C-on tartottuk, majd meghatároztuk az interferon tartalmat. A standard kontrolihoz (adagolatlan) viszonyított interferon-titer növekedést mindegyik hozamnövelő szerre kiszámítottuk. Az
| eredmények az I. táblázatban | szerepelnek: | |
| Az indulált tenyészethez | A hozam- | A kontroll- |
| adott hozamnövelő szer | növelő szer ’ végkoncentrációja (mM) | viszonyított relatív hozam- növekedés |
| Acetamid | 20 | 2 |
| Acetanilid | 2 | 2 |
| N-acetil-6-hidroxi-hexil-anin | 5 | 3 |
| N-butil-acetamid | 5 | 5 |
| Butiramid | 10 | 3 |
| N,N-dietil-acetamid | 10 | 4 |
| 1,3-dietil-karbamid | 5 | 3 |
| Ν,Ν-dimetil-acetamid | 5 | 2 |
| N ,N -dimetil-hexán amid | 3 | 2 |
| 1,3-dimetil-2-imidazolidin | 2 | 3 |
| EÍmetil-szulfoxid | 140 | 4 |
| 1,1-dimetil-karbamid | 10 | 2 |
| 1,3-dimetil-karbamid | 5 | 3 |
| p-etoxi-acetanilid | 2 | 2 |
| N-etil-acetamid | 10 | 3 |
| N-etil-pirrolidinon | 5 | 3 |
| Etil-karbamid | 20 | 3 |
| Hexametilén-bisz-acetamid | 5 | 7 |
| p-hidroxi-acetanilid | 5 | 3 |
| N-metil-acetamid | 10 | 2 |
| N-metil-benzamid | 4 | 3 |
| N-metil-2-piperidon | 5 | 3 |
| N-metil-2-pirrolidinon | 10 | 4 |
| Metil-karbamid | 50 | 2 |
| 2-piperidon | 25 | 2 |
| Propionamid | 20 | 3 |
| Propil-karbamid | 10 | 3 |
| Piridin-N-oxid | 50 | 4 |
| Tetrametil-tiokarbamid | 5 | 4 |
| T etram etil-karbamid | 8,4 | 6 |
2. Példa
Hozamnövelő szerek hatása az interferon termelésre butirátos előkezeléssel illetve anélkül
Az 1. Példa szerint előállított Namalwa/WRL sejtszuszpenzlót friss táptalajjal 1x10* sejt/ml koncentrációjúra hígítottuk. A tenyészetet két egyenlő részre osztottuk és az egyikhez 1 mM nátrium-butírátot adtunk. Mindkét tenyészetet 48 órán át keverés közben inkubáltuk, majd Sendai vírussal indukáltuk az 1. Példa szerinti módon. Az Indukált
189 706 sejtszusz penziókhoz a 2. Táblázatban szereplő hozamnövelő szereket adtuk. Az interferon kinyerését és meghatározását az 1. Példa szerinti módon végeztük.
| A Namalwa Az indukciókor | A hozam- | Interferon | |
| sejtek elő- | adagolt ho- | növelő szer | hozam a |
| kezelése | zamnövelő- | koncentrá- | kontrolihoz |
| során alkal- | szer | • ciója | viszonyítva |
kalmazott (mM) nátrium-butirát koncentrá-
| ció (mM) | |||
| 0 | kontrol | _ | 1 |
| 0 | (adagolatlan) acetanilid | 2 | 3 |
| 0 | Ν,Ν-dimetil- -acetamid | 5 | 3 |
| 0 | dimetil-szulfoxid | 140 | 2 |
| 0 | N-metil- -benzamid | 4 | 3 |
| 0 | tetrametil- -karbamid | 8,4 | 6 |
| 1 | kontroll (adagolatlan) | 1 | |
| 1 | acetanilid | 2 | 2 |
| 1 | N,N-dimetil- -acetamid | 5 | 2 |
| 1 | dimetil-szulfoxid | 140 | 2 |
| 1 | N-metil- -benzamid | 4 | 3 |
| 1 | tetrametil- -karbamid | 8,4 | 3 |
3. Példa
Dimetil-szulfoxid stimulátorként és hozamnövelőként egyaránt történő alkalmazása
Az 1. példa szerint előállított Namalwa/WRL sejtszuszpenziót friss táptalajjal 1x10* sejt/ml koncentrációjúra hígítottuk. A tenyészetet két egyenlő részre osztottuk és az egyikhez 140 mM dimetil-szulfoxidot adtunk. Mindkét tenyészetet 48 órán át keverés közben inkubáltuk, majd 800 g-n centrifugáltuk és a sejteket friss táptalajban (3x10* sejt/ ml) szuszpendáltuk. Az interferon indukciót az 1. Példa szerint végeztük, és az egyik előkezelt és inkubált, valamint az egyik előkezeletlen indukált sejtszuszpenzióhoz 140-140 mM dimetil-szulfoxidot adtunk. Az interferon kinyerése és meghatározása 24 óra múltán az 1. Példa szerinti módon történt.
| A Namalwa sej | Az indukciókor | Interferon- |
| tek előkezelésére | hozzáadott di- | títer(10g10 |
| alkalmazott di- | metil-szulfoxid | referenciaegység |
| metil-szulfoxid | koncentrációja | (ml) |
| koncentráció | (mM) | |
| (mM) | ||
| 0 | 0 | 3,55 |
| 140 | 0 | 4,0 |
| 0 | 140 | 3,9 |
| 140 | 140 | 43 |
4. Példa
Az interferonképződés kinetikája hozamnövelő szer jelen- illetve távollétében, butirátos előkezeléssel, illetve anélkül
Az 1. Példa szerint előállított Namalwa/WRL sejtszuszpenziót friss táptalajjal 1x10* sejt/ml koncentrációjúra hígítottuk. A tenyészetet két egyenlő részre osztottuk és az egyikhez 1 mM nátrium-butirátot adtunk. Mindkét tenyészetet 48 órán át keverés közben inkubáltuk, majd 800 g-n centrifugáltuk és a sejteket friss táptalajban (3x10® sejt/ml) szuszpendáltuk. Az interferon indukciót az 1. Példa szerint végeztük és az előkezelt és indukált, valamint az előkezeletlen indukált sejtszuszpenziók feléhez 8,4-8,4 mM tetrametil-karbamidot adtunk. A tenyészetek másik fele nem kapott tetrametil-karbamidot. Az ilyen módon kapott négy csoportból (előkezelt, hozamnövelővel, előkezelt, hozamnövelő nélkül) kétóránként 800 g-n centrifugáltunk tenyészet-mintákat. A táptalajt eltávolitottuk és a sejttömeget alaposan lecsepegtettük. A sejteket eredeti térfogatúra friss táptalajban felvettük, majd tetrametil-karbamidot adtunk a sejtszuszpenzióhoz, amennyiben a centrifugálás előtt is volt benne. További két óra inkubálás után az interferont kinyertük és meghatároztuk az 1. Példa szerinti módon.
Interferon titer(10glo referenciaegység/ml) Az induk Előkezeletlen Namalwa Előkezelt Namalwa dó és az in- sejtek (ImM nátriumterferon ki- butilát
| nyerése kö- | Hozam- | 8,4 mM | Hozam- | 8,4 mM |
| zött eltelt | növelőszer | tetrametU- | növelőszer | tetramefil- |
| Idő (óra) | néikül | -karbamid- dal | nélkül | -karbamid- dal |
| 0-2 | 0,75 | 0,75 | 1,05 | 1,05 |
| 2-4 | 0,75 | 0,75 | 2,6 | 2,7 |
| 4-6 | 1,8 | 1,7 | 4,05 | 4,2 |
| 6-8 | 2,55 | 2,9 | 4,25 | 4,65 |
| 8-10 | 2,7 | 3,5 | 4,1 | 4,9 |
| 10-12 | 2,8 | 3,75 | 3,55 | 4,65 |
| 12-14 | 2,6 | 3,75 | 3,55 | 4,5 |
| 14-16 | 2,6 | 3,7 | 3,25 | 4,1 |
| 16-^18 | 2,45 | 3,55 | 3,15 | 3,95 |
5. Példa
Az Indukció során adagolt butirát hatása butirátos előkezeléssel illetve anélkül.
Az 1. Példa szerint előállított Namalwa/WRL sejtszuszpenziót 800-g-on centrifugáltuk, a sejteket friss táptalajban felszuszpendáltuk (3x10® sejt/mi), majd elvégeztük az interferon indukciót az 1. Példa szerinti módon. Közvetlenül a Sendal vírussal való indukció után az alábbi táblázatban szereplő koncentrációban nátrium-butirátot adtunk a sejtekhez. Az interferon kinyerése és meghatározása 24 óra múltán az 1. Példa szerinti módon történt.
189 706
Az indukált tenyészethez adott nátrium-butirát koncentrációja (mM)
0,1
0,2
0,5
Interferon titer (lógj o referenciaegység (ml) 438
432
433 4,27 4,17 4,14 3,93 3,83
Claims (10)
1. Javított eljárás interferon előállítására, amelynek során indukálószert és adott esetben stimulálószert adunk az interferon termelésére indukálható limfoblasztoid sejtekhez, azzal jellemezve, hogy a sejteket az indukáláskor vagy közvetlenül azután hozamnöveíő szerrel kezeljük, hozamnövelő szerként N-acetil-p-amino-fenolt, acetamidot, adott esetben egy hidroxilcsoporttal helyettesített N-(l-6szénatomos alkil és dialkil)-acetamidokat, acetanilidet, 1-4 szénatomos alkoxi-acetanilideket, 4-8 szénatomos alkilén-bisz-aeeíamidokat, N,N-dimetil-hexánarnidot, dimetil-szuífoxidot, 1-6 szénatomos alkánsav-amidokat, 1-4 szénatomos alkil-benzamidokat, mono- vagy di(l-4 szénatomos alkil)-2-imidazolidinokat, 1-(1-4 szénatomos alkü)-2-pirrolidinokokat, 2-piperidont, 1-(1-4 szénatomos alkil)-2-pipridonokat, piridin-N-oxidot vagy egy-négy (14 szénatomos alkilcsoporttal helyettesített karbamidot vagy tiokarbamidot alkalmazva.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal j el lémé z v e, hogy hozamnövelő szerként N-acetil5 -p-amino-fenolt, Ν,Ν-dimetil-acetamidot, 13-dimetil-2-imidazolidinont, dlmetil-szulfoxldot, p-etoxi-acetanilidet, hexametilén-bisz-acetamidot, 1-metil-piperidinont vagy tetrametil-karbamidot alkalmazunk.
3. Az 1-2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hozamnövelő
10 szert 0,1—500 mmól mennyiségben alkalmazzuk.
4. A 3. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hozamnövelő szert 1 -200 mmól mennyiségben alkalmazzuk
5. A 3. igénypont szerinti eljárás azzal j e 11 em e z v e, hogy a hozamnövelő szert 5-50 mmól '0 mennyiségben alkalmazzuk.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal j el lemezve, hogy a hozamnöveíő szert az indukcióval egy időben alkalmazzuk.
7. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti el2Q járás, azzal jellemezve, hogy a hozamnövelő szert az indukálószer adagolása utáni 2 órán belül adagoljuk.
8. A 7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal j el 1 e me z v e, hogy a sejteket az indukálás előtt stimulátorral előkezeljük.
25
9. A 8. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy stimulátorként 1-6 szénatomos egyenes szénláncú alkanoilkarbonsavat vagy annak valamilyen sóját használjuk.
10. A 9. igénypont szerinti eljárás azzal j e 11 em e z v e, hogy alkanoil karbonsavként vajsavat
30 használunk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8217884 | 1982-06-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU189706B true HU189706B (en) | 1986-07-28 |
Family
ID=10531183
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU832194A HU189706B (en) | 1982-06-21 | 1983-06-20 | Improved process for the production of interferon |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4780413A (hu) |
| EP (1) | EP0097353B1 (hu) |
| JP (1) | JPH0636751B2 (hu) |
| AT (1) | ATE55620T1 (hu) |
| AU (1) | AU572783B2 (hu) |
| CA (1) | CA1211397A (hu) |
| CS (1) | CS251766B2 (hu) |
| DE (1) | DE3381805D1 (hu) |
| DK (1) | DK283683A (hu) |
| ES (1) | ES523424A0 (hu) |
| FI (1) | FI832252L (hu) |
| GB (1) | GB2122207B (hu) |
| HU (1) | HU189706B (hu) |
| IL (1) | IL69027A (hu) |
| IT (1) | IT1172270B (hu) |
| PL (1) | PL141593B1 (hu) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2572093A1 (fr) * | 1984-10-22 | 1986-04-25 | Anda Biolog | Nouveau milieu de culture cellulaire contenant des cellules de rate humaine, procede de culture utilisant ce milieu de culture, lignees de cellules lymphoblastoides obtenues, application a la production d'interferon, procede de preparation d'interferon et interferon ainsi produit |
| US5681718A (en) | 1986-03-14 | 1997-10-28 | Celltech Limited | Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof |
| US5705364A (en) * | 1995-06-06 | 1998-01-06 | Genentech, Inc. | Mammalian cell culture process |
| US6656466B1 (en) | 1995-06-06 | 2003-12-02 | Genetech, Inc. | Human tumor necrosis factor—immunoglobulin(TNFR1-IgG1) chimera composition |
| US5721121A (en) * | 1995-06-06 | 1998-02-24 | Genentech, Inc. | Mammalian cell culture process for producing a tumor necrosis factor receptor immunoglobulin chimeric protein |
| US5840565A (en) | 1995-08-22 | 1998-11-24 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhancing the production of viral vaccines in PKR-deficient cell culture |
| US6855519B2 (en) | 1995-08-22 | 2005-02-15 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhancing the production of interferon in cell culture |
| SE513313C2 (sv) * | 1998-12-29 | 2000-08-21 | Bionative Ab | Modifierad interferonproduktion |
| EP1620457A2 (en) * | 2003-04-25 | 2006-02-01 | Immunex Corporation | Inducers of recombinant protein expression |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3773924A (en) * | 1970-12-24 | 1973-11-20 | M Ho | Interferon production |
| CS215108B2 (en) * | 1977-07-15 | 1982-07-30 | Wellcome Found | Method of making the interferrone |
| DE2821466A1 (de) * | 1978-05-17 | 1979-11-29 | Thomae Gmbh Dr K | Verbessertes verfahren zur herstellung von humaninterferon |
| EP0005476B1 (de) * | 1978-05-17 | 1981-12-30 | Dr. Karl Thomae GmbH | Verfahren zur Herstellung von Humaninterferon |
| ES8101067A1 (es) * | 1978-08-25 | 1980-12-01 | Thomae Gmbh Dr K | Procedimiento para la preparacion de nuevos bencimidazoles sustituidos en posicion 5 o 6 con un anillo de piridazinona |
| EP0014050A3 (en) * | 1979-01-16 | 1980-10-01 | Beecham Group Plc | Interferon production |
| EP0030094A1 (en) * | 1979-11-30 | 1981-06-10 | Beecham Group Plc | Calcium enhanced interferon production process |
-
1983
- 1983-06-20 DK DK283683A patent/DK283683A/da not_active Application Discontinuation
- 1983-06-20 AT AT83106006T patent/ATE55620T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-06-20 CA CA000430775A patent/CA1211397A/en not_active Expired
- 1983-06-20 FI FI832252A patent/FI832252L/fi not_active Application Discontinuation
- 1983-06-20 JP JP58110756A patent/JPH0636751B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1983-06-20 IT IT48536/83A patent/IT1172270B/it active
- 1983-06-20 EP EP83106006A patent/EP0097353B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-06-20 AU AU15935/83A patent/AU572783B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1983-06-20 IL IL69027A patent/IL69027A/xx unknown
- 1983-06-20 PL PL1983242612A patent/PL141593B1/pl unknown
- 1983-06-20 ES ES523424A patent/ES523424A0/es active Granted
- 1983-06-20 GB GB08316758A patent/GB2122207B/en not_active Expired
- 1983-06-20 HU HU832194A patent/HU189706B/hu unknown
- 1983-06-20 DE DE8383106006T patent/DE3381805D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1983-06-20 CS CS834518A patent/CS251766B2/cs unknown
-
1985
- 1985-08-26 US US06/769,670 patent/US4780413A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4780413A (en) | 1988-10-25 |
| ES8504934A1 (es) | 1985-04-16 |
| ATE55620T1 (de) | 1990-09-15 |
| DE3381805D1 (de) | 1990-09-20 |
| DK283683D0 (da) | 1983-06-20 |
| GB8316758D0 (en) | 1983-07-20 |
| ES523424A0 (es) | 1985-04-16 |
| PL141593B1 (en) | 1987-08-31 |
| JPS596896A (ja) | 1984-01-13 |
| IL69027A0 (en) | 1983-10-31 |
| FI832252A0 (fi) | 1983-06-20 |
| FI832252L (fi) | 1983-12-22 |
| GB2122207A (en) | 1984-01-11 |
| PL242612A1 (en) | 1984-08-13 |
| CS251766B2 (en) | 1987-08-13 |
| CS451883A2 (en) | 1986-12-18 |
| IT8348536A0 (it) | 1983-06-20 |
| CA1211397A (en) | 1986-09-16 |
| EP0097353B1 (en) | 1990-08-16 |
| IL69027A (en) | 1988-08-31 |
| EP0097353A3 (en) | 1987-08-05 |
| AU572783B2 (en) | 1988-05-19 |
| IT1172270B (it) | 1987-06-18 |
| JPH0636751B2 (ja) | 1994-05-18 |
| AU1593583A (en) | 1984-01-05 |
| EP0097353A2 (en) | 1984-01-04 |
| DK283683A (da) | 1983-12-22 |
| GB2122207B (en) | 1986-02-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4276282A (en) | Interferon and preparations containing interferon | |
| JPH11511324A (ja) | 細胞培養でインターフェロン産生を高める方法 | |
| Katamine et al. | Epstein–Barr virus transforms precursor B cells even before immunoglobulin gene rearrangements | |
| US5518899A (en) | Preparation of human myelomonocyte interferon-gamma | |
| US4621050A (en) | Process for the production of human colony-stimulating factor | |
| US4216203A (en) | Process for producing interferon | |
| KR920006868B1 (ko) | 인터페론의 제조방법 | |
| HU189706B (en) | Improved process for the production of interferon | |
| FI72143B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon | |
| KR930000188B1 (ko) | 신규 림포카인(lymphokine), 이 림포카인에 특이적인 모노클로날 항체 및 이들의 제조방법 | |
| CA1340698C (en) | Preparation and uses of interferon-gamma | |
| DE2821466A1 (de) | Verbessertes verfahren zur herstellung von humaninterferon | |
| JP2926409B2 (ja) | 癌転移抑制因子の製造方法 | |
| DE2946275C2 (hu) | ||
| DE3879622T2 (de) | Aminopimelinsäure-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Arzneimittel. | |
| Srivastava et al. | Polyribosomes and Protein Synthesis in «Tribolium Confusum» Duval (1) | |
| JPS63152993A (ja) | γ―インターフェロンの製造方法 | |
| EP0062085A1 (de) | Verbessertes Verfahren zur Herstellung von Humaninterferon aus lymphoblastoiden Zellen | |
| Zenobia et al. | Interferon: Its Induction and Antiviral Activity | |
| Lebedeva | Changes in the physicochemical and enzymic properties of myosin during ontogeny | |
| WO9118973 | Patent bibliography | |
| SU1681426A1 (ru) | Способ получения вещества, восстанавливающего дыхательную функцию легких | |
| Bykovskaya et al. | Proliferation and cytotoxicity of thymus lymphocytes in vitro | |
| DE2304846A1 (de) | Verfahren zur anreicherung und reinigung von l-lysinoxygenase, sowie ihre verwendung als arzneimittel | |
| JPS6323176B2 (hu) |