FI72143B - Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon Download PDFInfo
- Publication number
- FI72143B FI72143B FI801668A FI801668A FI72143B FI 72143 B FI72143 B FI 72143B FI 801668 A FI801668 A FI 801668A FI 801668 A FI801668 A FI 801668A FI 72143 B FI72143 B FI 72143B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- interferon
- type
- human
- leukocytes
- activity
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/811—Interferon
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/84—Bones; tendons; teeth; cartilage
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
fR, .. KUULUTUSJULKAISU 7 O i a 7 Bj 11 utläggn,ngsskr,ft ^ O X ' i vintti I.IJ 0 .'il i C L· e«Ä2)J 45 Γ“ ;e t :;.c Vclnt 15 04 1U37 (511 Kv Ik */lnt.CI 4 c 12 p 21/02’ A 61 K kS/0Z> (51) Kv.lk. /lnt.CI. ς 97 « } 5/26 ^ 0 jy| I FINLAND (21) Patenttihakemus — Pate nt» nsökning 8 01 668 (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag 22.05-80 (N) (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 22.05-80 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlig 25-11 -80
Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm.— 31-12.86
Patent- och registerstyrelsen ' ' Ansökan utlagd och Utl.skriften publicerad (86) Kv. hakemus — Int. ansökan (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Begärd prioritet 2^.05-79 Japani-Japan(JP) 63210/79 (71) Ken Hayashibara, 9~8, A-chome, Higashifurumatsu, Okayama-shi, Okayama, Japan i-Japan(JP) (72) Kaname Sugimoto, Okayama, Japani-Japan(JP) (7^) Berggren Oy Ab (5*0 Menetelmä ΐ hm is interferon in valmistamiseksi - Förfarande för framstä11 ning av människointerferon
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää valmistaa ihmiselle soveltuvaa interferonia ihmisen leukosyyteistä.
Kuten on esitetty julkaisussa; Shigeyasu Kobayashi, "Interferon", julkaisijana Kodansha Co. Ltd., Tokyo, Japan (1975), D.A.J.
Tyrell, "Interferon and Its Clinical Potential", julkaisijana William Heineman Medical Books Ltd. (London) (1976), ja "Protein, Nucleic Acid and Enzyme", vol. 21, n:o 4 (1976), interferonilla tarkoitetaan proteiinipitoista ainetta, joka on intra- tai ekstrasellulaarisesti aikaansaatu saattamalla elävät solut interferoni-indusorin, esimerkiksi virusten, bakteerien, protozoan, riketsian, nukleiinihapon, endotoksiinin tai polysakkaridin vaikutuksen alaiseksi, ja joka ei-spesifisesti estää eri virusten lisääntymisen soluissa. Johtuen mainitusta vaikutuksesta interferonia on sen keksimisestä saakka pidetty lupaa-vana ennalta ehkäisevänä ja/tai terapeuttisena aineena virusten aiheuttamia tauteja vastaan. Viime aikoina on osoitettu, että interferoni toimii kasvainten muodostumista estävänä aineena virusperäisten kasvainten lisäksi myös ei-virusperäisten kasvainten kohdalla, ja siksi interferonin saamiseksi lääkkeeksi kohdistuu suuria odotuksia.
2 721 43
Termi interferoni käsittää tunnetusti tyyppiä I olevan interferonin eli klassisen interferonin, joka tuotetaan saattamalla eläviä soluja virusten tai nukleiinihappojen vaikutuksen alai- 4 seksi ja jonka molekyylipaino on noin 1-3 x 10 ja tyyppiä II olevan interferonin tai immuuni-interferonin, joka tuotetaan elävissä soluissa mitogeenien stimulaation tai antigeenien 4 avulla ja jonka molekyylipaino on noin 4-7 x 10 .
L.B. Epsteinin mukaan "Texas Reports on Biology and Medicine", voi. 35, pp. 41-56 (1977), julkaisijana University of Texas Medical Branch, Galveston, Texas, USA, tiedetään, että tyyppiä II oleva interferoni ei ole yhtä stabiili kuin lajia I oleva interferoni voimakkaissa olosuhteissa, pH:n ollessa alle 2 tai yli 10, ja/tai lämpötilan ollessa yli 56°C. Koska tyyppiä II olevalla interferonilla on kuitenkin läheinen yhteys immuno-reaktioihin, sillä odotetaan olevan paljon paremmat terapeuttiset ja suojaavat vaikutukset interferoniherkissä sairauksissa kuin tyyppiä I olevalla interferonilla.
Yllä mainittujen tosiasioiden perusteella esillä olevan keksinnön tekijät tutkivat menetelmiä tuottaa suuria määriä ihmisen interferonia käyttämällä ihmisen leukosyyttejä ihmisen elävinä lähtösoluina. Tämä johti siihen havaintoon, että tuotetun interferonin aktiivisuus voidaan helposti lisätä saattamalla ihmisen leukosyyttejä alttiiksi sekä interferonia tyyppiä I että II indusoivalle aineelle. Tarkemmin sanoen, tuotetun interferonin aktiivisuus voidaan lisätä käsittelemällä ihmisen leuko-syyttisuspensiota kummallakin indusoivalla aineella noin 2-20 kertaiseksi kuin mitä saadaan vain yhdellä näistä indusoivista aineista.
Keksinnössä käytettäväksi soveltuva ihmisen leukosyyttilähtöaine saadaan tavallisesti sentrifugoimalla veripankista saatua ihmisen ääreisverenkierron verta. "Buffy coat", jota myös saadaan veripankeista, vesivatsaa ja luuydintä, jotka sisältävät suuria määriä leukosyyttejä voidaan myös käyttää keksinnössä. Yllä mainittujen aineiden lisäksi keksinnössä voidaan käyttää leukosyyttejä, joita saadaan viljelemällä ihmisen kestosolu-leukosyyttejä in vitro.
Il 3 721 43
Solususpensiota, joka valmistetaan suspendoimalla ihmisen leukosyyttejä fysiologiseen suolaliuokseen tai ravintoväli- 4 8 aineeseen solukonsentraatioon 10 -10 solua/ml ja inkuboi-malla suspensio 20-45°C:ssa, käytetään sitten interferonin tuottamiseen.
Keksinnössä voidaan käyttää mitä tahansa interferonityyppiä I indusoivaa ainetta; erityisesti esimerkiksi viruksia kuten Sendai virusta ja Newcastlen sairauden aiheuttavaa virusta, kak-sisäikeistä RNA:ta tai jotain aminohappoa.
Mitä tulee keksinnössä käytettäviin interferonityyppiä II indusoiviin aineisiin voidaan käyttää mitä tahansa interferoni-tyyppiä II indusoivaa ainetta; edullisesti esimerkiksi lektii-nejä kuten kasvihemagglutiniinia jaconcanavaliini-A:ta, mitogee-nejä kuten "Pork weed" mitogeeni, ja immunopotentiaattoreita kuten lentinaania, Streptococcus pyrogeeniainetta, tuberkuliini PPD:tä ja KS-2:ta. Lisäksi antigeenejä voidaan edullisesti käyttää keksinnössä, koska antigeenit toimivat herkistetyissä soluissa tyyppiä II olevan interferonin tuottajana.
Menetelmässä, jossa ihmisen leukosyyttejä saatetaan alttiiksi tyyppiä I ja II olevaa interferonia indusoiville aineille, voidaan soveltaa menettelyä, jossa kumpaakin interferonia indusoivaa ainetta lisätään yhtä aikaa tai jossa nämä aineet lisätään perätysten.
Interferonia indusoivan aineen pitoisuus voi olla mikä tahansa kunhan se on riittävän suuri interferonin tuotantoon, ja edullisesti pitoisuus on välillä noin 0,001 yUg - 10 mg/ml. Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetelmässä voidaan soveltaa "priming"-menetelmää käyttämällä ihmiselle spesifistä interferonia ja superinduktiomenetelmää käyttämällä metaboliittista inhibiittoria, jotka kummatkin menetelmät vielä lisäävät tuotetun interferonin aktiivisuutta.
Tällä tavoin saatu interferoni puhdistetaan ja erotetaan tavanomaisin menetelmin kuten saostamalla, dialysoimalla, suodattamalla, konsentroimalla, sentrifugoimalla ja pakkauskuivaamalla.
______ — TT- 4 72": 43
Kun halutaan vielä puhtaampi interferonivalmiste saadaan tämä helposti soveltamalla sellaisia menetelmiä kuten desorptio-ioninvaihtoa, geelisuodatusta, affiniteettikromatografiaa, isoelektriseen pisteeseen perustuvaa erottamista ja elektroforeesia yhdistettynä edellä mainittuihin menetelmiin. Täten saadaan helposti erotettua ja otettua talteen erittäin puhdas-ta tyyppiä I ja II olevaa interferonia.
Tällä tavoin saatua interferonivalmistetta voidaan edullisesti käyttää sellaisenaan tai yhdessä muiden sellaisten aineiden kanssa, joita käytetään ihmisen interferonille herkkien tautien hoitamiseen kuten virusperäiset sairaudet,tarttuva sarveis-sidekalvon tulehdus, rokahtunut sarveiskalvon tulehdus, influenssa, vihurirokko ja maksatulehdus ja ei-virusperäiset sairaudet, kuten leukemia ja luusarkooma.
Yllä mainittujen interferonille herkkien sairauksien hoitoon tarkoitetut interferonia sisältävät ennalta ehkäisevät ja terapeuttiset aineet voidaan valmistaa annettavaksi eri muodoissa niiden käytön mukaan, esimerkiksi liuoksena sarveiskalvolle, silmätippoina, nenätippoina, kurlausnesteenä ja ruiskeena, tahnamaisena valmisteena, kuten voiteena ja kiinteänä valmisteena kuten jauheena, rakeena tai tablettina.
Erittäin ihmisspesifisten tyyppiä I ja II olevien interferonien aktiivisuudet määritettiin ihmisen amnionsolujen avulla julkaisun "Protein, Nucleic Acid and Enzyme", 20:6 (1975) 616-634, mukaan, tavanomaisella plakkien vähenemiseen perustuvalla menetelmällä .
Hemagglutinaatiotiitteri määritettiin menetelmällä, jonka on esittänyt J.E. Salk, "Journal of Immunology", _49 (1944) 87-98.
Seuraavissa esimerkeissä kuvataan tarkemmin keksinnön mukaista menetelmää.
5 721 43
Menetelmä 1
Valmistettiin solususpensio ihmisen leukosyyteistä suspendoi-malla näitä seerumivapaaseen RPMI 1640 väliaineeseen (pH 7,2) g kunnes saatiin solukonsentraatio 1 x 10 solua/ml ja pidettiin suspensiota 37°C:ssa. Suspensioon lisättiin kasvihemaggluti-niinia (noin 100 yug/ml) tyyppiä II olevaa interferonia indusoivana aineena,ja saatua solususpensiota inkuboitiin mainitussa lämpötilassa kahden päivän ajan. Sitten lisättiin Sendai virusta (noin 30 hemagglutinaatiotiitteriä/ml) tyyppiä I olevaa interferonia indusoivana aineena, ja seosta inkuboitiin mainitussa lämpötilassa vielä yhden päivän ajan keksinnön mukaisen interferonin tuottamiseksi.
Suoritettiin 1-4 tarkistuskoetta tuoreelle solususpensiolle seuraavasti: 1) Tarkistuskoe 1: Inkuboitiin yllä mainittua koetta vastaava määrä tuoretta solususpensiota, johon oli lisätty noin 100 ,ug/ml O ' kasvihemagglutiniinia 37 C:ssa noin kahden päivän ajan, mutta ei lisätty Sendai virusta ja yhden päivän lisäinkubointi jätettiin myös pois. Näin saatiin tarkistuskoe 1.
2) Tarkistuskoe 2: Toistettiin kaksi kertaa kasvihemaggluti- niinin lisääminen (noin 100 ^ug/ml) solususpensioon ja solu-suspension inkubointi 37°C:ssa kahden päivän ajan, mutta ei lisätty Sendai virusta eikä suoritettu tämän jälkeistä yhden päivän inkubointia. Näin saatiin tarkistuskoe 2.
3) Tarkistuskoe 3: Tuoreeseen solususpensioon lisättiin noin 30 hemagglutinaatiotiitteriä/ml Sendai virusta ja inkuboitiin 37°C:ssa yhden päivän ajan, mutta ei lisätty kasvihemagglutiniinia ja sitä seuraava kahden päivän inkubaatio jätettiin myös pois. Näin saatiin tarkistuskoe 3.
4) Tarkistuskoe 4: Toistettiin kaksi kertaa Sendai viruksen lisääminen (noin 30 hemagglutinaatiotiitteriä/ml) solususpensioon ja solususpension inkubointi 37°C:ssa yhden päivän ajan, mutta ei lisätty kasvihemagglutiniinia ja sitä seuraava kahden päivän inkubaatio jätettiin myös pois. Näin saatiin tarkistuskoe 4.
Näin saadut interferonivalmisteet sentrifugoitiin ja saadut liuos-faasit konsentroitiin ultrasuodattamalla suodattimena, joka 6 72143 päästi läpi molekyylipainoa noin 6000 ja sen alle olevat molekyylit. Konsentraatin komponentit erotettiin molekyylipainon-sa perusteella geelisuodattamalla käyttäen dekstraanigeeliä, jolloin saatiin tyyppiä I olevaa interferonia sisältävä fraktio, molekyylipaino noin 25 000, ja tyyppiä II olevaa interferonia sisältävä fraktio, molekyylipaino noin 50 000. Kummankin inter-feronityypin aktiivisuus määritettiin ja laskettiin aktiivisuus inkuboidun solususpension ml:aa kohden. Tulokset on esitetty taulukossa 1.
Taulukko 1
Tarkistus- Interferonia indu- Interferonin aktiivisuus näyte soiva aine
Tyyppi I Tyyppi II Tyyppi I Tyyppi II Yhteensä 1 PX 0 500 500 2 P + P 0 600 600 3 SX 2000 0 2000 4 S + S 2500 0 2500
Esillä oleva S P 10000 5000 15000 keksintö χ
Huomautus: S tarkoittaa Sendai virusta ja P kasvihemagglutinii- nia.
Kuten taulukosta nähdään lisäsi Sendai viruksen käyttäminen tyyppiä I olevaa interferonia indusoivana aineena yhdessä kasvi-hemagglutiniinin kanssa tyyppiä II olevaa interferonia indusoivana aineena tuotetun interferonin aktiivisuutta huomattavasti verrattuna siihen mitä saadaan käyttämällä Sendai virusta tai kasvihemagglutiniinia erikseen.
Esillä olevan keksinnön avulla saadaan interferonin aktiivisuus nousemaan noin 6-8 kertaa suuremmaksi kuin käyttämällä vain Sendai virusta, ja noin 25-30 kertaa suuremmaksi kuin käyttämällä vain kasvihemagglutiniinia.
Lisäksi käytetty yhdistelmä lisäsi tyyppiä I olevan interferonin aktiivisuuden noin 4-5 kertaa suuremmaksi kuin mitä saadaan käyttämällä vain tyyppiä I olevaa interferonia indusoivaa ainetta, ja saadun tyyppiä II olevan interferonin aktiivisuus oli li 721 43 7 noin 8-10 kertaa suurempi kuin mitä saadaan käyttämällä vain tyyppiä II olevaa interferonia indusoivaa ainetta. Yllä mainitut seikat osoittavat esillä olevan keksinnön yhteydessä esille tulleen hämmästyttävän keksinnössä käytettyjen indusoivien aineiden synergistisen vaikutuksen. Tämä yhdistelmä on hyvin edullinen tuotettaessa interferonia, erityisesti tyyppiä II olevaa interferonia.
Esillä olevalla keksinnöllä ihmisen interferonin valmistamiseksi, jossa ihmisen leukosyyttejä saatetaan alttiiksi yhtä aikaa tai peräkkäin sekä tyyppiä I että II olevaa interferonia indusoivalle aineelle, tulee epäilemättä olemaan tärkeä sijansa ihmis-interferonin tuotannossa ja myös arvokkaan vesilähtöai-neen tehokkaammassa hyväksikäytössä, jonka interferonin potentiaaliset käyttömahdollisuudet on tunnustettu samalla kun sen saanti on rajoittunut.
Esimerkki 1 1000 ml:n solususpensioon, joka valmistettiin suspendoimalla ihmisen leukosyyttejä Eaglen MEM väliaineeseen (pH 7,2) solu-konsentraatioon noin 5 x 10 solua/ml (pidettiin 37°C:ssa), lisättiin (noin 100 yksikköä/ml) osittain puhdistettua, erittäin ihmis-spesifistä tyyppiä II olevaa interferonia, ja seosta inku-boitiin noin yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen solususpensioon lisättiin concanavaliini A: ta (500 yug/ml), ja saatua seosta inkuboitiin mainitussa lämpötilassa vielä kahden päivän ajan, jonka jälkeen lisättiin noin 100 hemagglutinaatiotiitteriä/ml Sendai virusta ja inkuboitiin vielä 20 tunnin ajan. Näin saatua interferonia sisältävää tuotetta sentrifugoitiin (1000 x g) 4°C:ssa kiintoaineen kuten solufragmenttien poistamiseksi, ja saatua liuosfaasia dialysoitiin 24 tuntia fysiologista suolaliuosta vastaan, joka liuos oli puskuroitu 0,01 M fosfaattipuskurilla pH-arvoon 7,2, ja tämän jälkeen liuos "milipore" suodatettiin. Interferonia sisältävä suodos konsentroitiin ja kylmäkuivattiin jauheeksi.
Jauhemainen interferonivalmiste sisälsi noin 1,2 x 107 yksikköä tyyppiä I olevaa interferonin aktiivisuutta ja noin 4,0 x 10^ yksikköä tyyppiä II olevaa interferonin aktiivisuutta.
8 72143
Esimerkki 2
Valmistettiin 1000 ml:n solususpensio suspendoimalla ihmisen leukosyyttejä RPMI 1640 väliaineeseen (pH 7,4), jossa oli 10 % (til./til.) vasikanseerumia, kunnes saavutettiin solukonsentraa-tio 2 x 107 solua/ml ja pidettiin suspensiota 35°C:ssa. Suspensioon lisättiin noin 200 mg/1 kasvihemagglutiniinia ja seosta inkuboitiin mainitussa lämpötilassa 3 päivän ajan. Solususpen-sioon lisättiin tämän jälkeen noin 300 hemagglutinaatiotiitte-riä/ml Newcastlen sairautta aiheuttavaa virusta, jota virusta oli ennalta inaktivoitu UV-säteilyllä, ja saatua seosta inkuboitiin vielä 24 tunnin ajan. Interferonia sisältävä tuote sentri-fugoitiin (1000 x g) 4°C:ssa kiintoaineen, kuten solufragmenttien poistamiseksi, ja saatua liuosta dialysoitiin 20 tunnin ajan fysiologista suolaliuosta vastaan, joka liuos oli puskuroitu 0,01 M fosfaattipuskurilla pH-arvoon 7,2, jota seurasi "milipore" suodatus. Interferonia sisältävä suodos konsentroitiin.
Konsentraatti sisälsi interferonivalmistetta, jossa tyyppiä I
7 olevan interferonin aktiivisuus oli noin 7,0 x 10 yksikköä ja tyyppiä II olevan interferonin aktiivisuus oli noin 2,3 x 107 yksikköä.
Esimerkki 3
Valmistettiin 2000 ml:n solususpensio suspendoimalla "buffy coat":ia seerumista vapaaseen RPMI 1640 väliaineeseen (pH 7,2) 5 kunnes saavutettiin solukonsentraatio noin 5 x 10 solua/ml ja ja pidettiin suspensiota 38°C:ssa. Solususpensioon lisättiin noin 1 ^ug/ml Maruyama rokotetta ja noin 20 hemagglutinaatio-tiitteriä/ml Sendai virusta ja saatua seosta inkuboitiin mainitussa lämpötilassa kahden päivän ajan. Interferonia sisältävä tuote puhdistettiin ja kylmäkuivattiin jauheeksi kuten esimerkissä 1 on esitetty.
Jauhemaisessa interferonivalmisteessa oli tyyppiä I olevan interferonin aktiivisuus noin 5,0 x 10^ yksikköä ja tyyppiä II olevan interferonin aktiivisuus noin 1,0 x 10^.
li 72143 9
Esimerkki 4
Valmistettiin 1000 ml:n solususpensio suspendoimalla "buffy coat":ia Eacrlen MEM väliaineeseen (pH 7,2), johon väliaineeseen oli lisätty 5 % (til./til.) ihmisen seerumia, kunnes saatiin solukonsentraa-tio noin 1 x ic7 solua/ml ja suspensiota pidettiin lämpötilassa 37°C. Suspensioon lisättiin 10 ^ug/ml tuberkeliini PPD:tä ja saatua seosta inkuboitiin mainitussa lämpötilassa kahden päivän ajan, jonka jälkeen lisättiin synteettistä polyinosiinihap-poa ja polysytidyylihappoa suhteessa 1:1 (5 ^,ug/ml) ja inku-bointia jatkettiin vielä 10 tunnin ajan. Interferonia sisältävä tuote puhdistettiin ja konsentroitiin kuten esimerkissä 2 on esitetty.
Interferonia sisältävän valmisteen tyyppiä I olevan interfero- 7 nin aktiivisuus oli noin 6,0 x 10 yksikköä ja tyyppiä II ole- g van interferonin aktiivisuus oli noin 6,0 x 10 yksikköä. Esimerkki 5
Valmistettiin 1000 ml:n solususpensio suspendoimalla ihmisen leukosyyttejä RPMI 1640 väliaineeseen (pH 7,2), joka väliaine sisälsi vielä 5 % (til./til.) ihmisen seerumia, kunnes saavutettiin solukonsentraatio noin 1 x 10^ solua/ml ja pidettiin suspensiota 37°C:ssa. Suspensioon lisättiin KS-2:ta, joka on Lentinus edodes myseelistä saatu immunopotentiaattori, ja seosta inkuboitiin mainitussa lämpötilassa kahden päivän ajan, jonka jälkeen lisättiin noin 50 hemagglutinaatiotiitteriä/ml Sendai virusta ja inkuboitiin vielä 20 tuntia. Interferonia sisältävä tuote puhdistettiin ja kylmäkuivattiin jauheeksi kuten esimerkissä 1 on esitetty.
Jauhemaisen interferonivalmisteen tyyppiä I olevan interferonin aktiivisuus oli noin 3,0 x 10^ yksikköä ja tyyppiä II olevan g interferonin aktiivisuus noin 1,5 x 10 yksikköä.
Claims (4)
1. Menetelmä ihmisinterferonin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että suspendoidaan ihmisen leukosyyttejä in vitro kasvatusalustaan, valmistettu suspensio saatetaan alttiiksi sekä tyyppiä I että tyyppiä II olevaa interferonia indusoiville aineille interferonin tuottamiseksi, ja tuotettu interferoni puhdistetaan ja otetaan talteen.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu käsittely indusoivilla aineilla suoritetaan yhtä aikaa tai peräkkäin käyttäen interferonia indusoivien aineiden pitoisuuksia välillä 0,001 ug-10 mg/ml 4 8 / ja leukosyyttipitoisuuksia välillä 10 - 10 solua/ml läm- o Potilassa 20-45 C.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ihmisen leukosyyttien lähteenä käytetään materiaalia, joka on saatu ääreisverenkierron verestä, "buffy coat":sta, vesivatsasta, luuytimestä, ja ihmisen leukosyyteistä kasvattamalla ihmisen pysyviä leukosyyttejä in vitro.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittuna tyyppiä I olevaa interferonia indusoivana aineena käytetään Sendai-virusta, New-cast Ien sairautta aiheuttavaa virusta, kaksisäikeistä RNA:ta tai nukleiinihappoa ja mainittuna tyyppiä II olevaa interferonia indusoivana aineena käytetään lektiiniä kuten kasvihem-agglutiniinia ja concanavaliini-A:ta, mitogeeneja kuten "pork weed" -mitogeeni tai immunopotentiaattoreita kuten lentinaani, Maruyama-rokote, Streptococcus-pyrogeeniaine ja tuberkuliini PPD ja KS-2.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6321079 | 1979-05-24 | ||
| JP6321079A JPS55154919A (en) | 1979-05-24 | 1979-05-24 | Preparation of interferon |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI801668A FI801668A (fi) | 1980-11-25 |
| FI72143B true FI72143B (fi) | 1986-12-31 |
| FI72143C FI72143C (fi) | 1987-04-13 |
Family
ID=13222601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI801668A FI72143C (fi) | 1979-05-24 | 1980-05-22 | Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4296025A (fi) |
| JP (1) | JPS55154919A (fi) |
| DE (1) | DE3019847C2 (fi) |
| FI (1) | FI72143C (fi) |
| FR (1) | FR2457103B1 (fi) |
| GB (1) | GB2051820B (fi) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2473971A1 (fr) * | 1980-01-18 | 1981-07-24 | Amfg Ste Nle Expl Procedes | Reservoir de liquide de freinage pour vehicules automobiles |
| JPS6045849B2 (ja) * | 1980-08-25 | 1985-10-12 | 林原 健 | ヒトエリトロポエチンの製造方法 |
| SE8204382L (sv) * | 1981-07-21 | 1983-01-22 | Hayashibara Biochem Lab | Sett att framstella malcellysfaktor och anvendning derav |
| US5702699A (en) * | 1982-09-23 | 1997-12-30 | Cetus Corporation | Process for the recovery of lipophilic proteins |
| US4485038A (en) * | 1982-10-19 | 1984-11-27 | Health Research (Roswell Park Division) | Method for the production and purification of human leukocyte interferon |
| ATE52693T1 (de) * | 1982-10-25 | 1990-06-15 | Genentech Inc | Synergistische humaninterferonaktivitaet. |
| US4599306A (en) * | 1983-04-15 | 1986-07-08 | Amgen | Monoclonal antibodies which specifically bind to human immune interferon |
| US4723000A (en) * | 1983-07-05 | 1988-02-02 | Biospectrum, Inc. | Human interferon gamma and interleukin-2 |
| US4745053A (en) * | 1983-07-08 | 1988-05-17 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyojo | Process for producing human interferon and method for assaying the interferon productivity of blood |
| HU192254B (en) * | 1983-12-13 | 1987-05-28 | Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar | Process for producing human leucocite and human gamma interferons in consecutive steps |
| US4499014A (en) * | 1984-02-07 | 1985-02-12 | Interferon Sciences, Inc. | Method for purifying gamma-interferon |
| US4658017A (en) * | 1984-02-14 | 1987-04-14 | Health Research, Inc. (Roswell Park Division) | Method for the large scale purification of human fibroblast interferon |
| DE3482092D1 (de) * | 1984-09-21 | 1990-06-07 | Vnii Osobo Cistych Biopreparat | Verfahren zur gewinnung menschlichen leukozyten-interferons. |
| US4784946A (en) * | 1984-12-30 | 1988-11-15 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Method for assaying the gamma-interferon productivity of blood |
| JPH0765996B2 (ja) * | 1984-12-30 | 1995-07-19 | 株式会社林原生物化学研究所 | 血液のインターフェロン−γ産生能測定方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3800035A (en) * | 1971-12-07 | 1974-03-26 | Smithkline Corp | Production of interferon from human leukocytes in the absence of serum |
| FR2282910A2 (fr) * | 1974-08-26 | 1976-03-26 | Anvar | Procede de fabrication a l'echelle industrielle de preparations d'interferon de titre eleve |
| US3975344A (en) * | 1974-10-02 | 1976-08-17 | G. D. Searle & Co. | Interferon purification |
| JPS5598118A (en) * | 1979-01-18 | 1980-07-25 | Hayashibara Takeshi | Preparation of type-2 interferon and drug containing the same |
-
1979
- 1979-05-24 JP JP6321079A patent/JPS55154919A/ja active Granted
-
1980
- 1980-05-13 US US06/149,533 patent/US4296025A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-05-22 FI FI801668A patent/FI72143C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-05-22 GB GB8016993A patent/GB2051820B/en not_active Expired
- 1980-05-23 FR FR8011507A patent/FR2457103B1/fr not_active Expired
- 1980-05-23 DE DE3019847A patent/DE3019847C2/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2457103B1 (fr) | 1985-10-25 |
| JPS55154919A (en) | 1980-12-02 |
| FI801668A (fi) | 1980-11-25 |
| JPS6154040B2 (fi) | 1986-11-20 |
| DE3019847A1 (de) | 1981-01-29 |
| FR2457103A1 (fr) | 1980-12-19 |
| FI72143C (fi) | 1987-04-13 |
| DE3019847C2 (de) | 1986-10-16 |
| GB2051820A (en) | 1981-01-21 |
| US4296025A (en) | 1981-10-20 |
| GB2051820B (en) | 1983-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI72143B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon | |
| FI68519C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av interferon | |
| US4276282A (en) | Interferon and preparations containing interferon | |
| US4376821A (en) | Production of human IFN-gamma (immune) interferon | |
| JPH11511324A (ja) | 細胞培養でインターフェロン産生を高める方法 | |
| Burke | The purification of interferon | |
| US4376822A (en) | Production of human IFN- γ (immune) interferon | |
| US4266024A (en) | Process for the production of human interferon | |
| US3800035A (en) | Production of interferon from human leukocytes in the absence of serum | |
| US4124702A (en) | Polynucleotides active as inducers of interferon production in living animal cells | |
| JPH0550273B2 (fi) | ||
| Matsuo et al. | Production and purification of human leukocyte interferon | |
| Stewart et al. | Interferoids: In vitro and in vivo conversion of native interferons to lower molecular weight forms | |
| EP0048283B1 (en) | Virus-inhibiting substance and process for preparing the same | |
| NO173144B (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av interferongamma | |
| US4480032A (en) | Natural mixture of Type I and Type II interferons | |
| US5563120A (en) | Cytokine preparation for immunotherapy | |
| JPS6019720A (ja) | ヒト内来性癌制御因子およびその製造法 | |
| JP2787220B2 (ja) | ウィルス感染防御剤 | |
| JPS63164895A (ja) | 培養細胞由来のレクチン様蛋白質及びその製法並びに該物質を主成分とする抗腫瘍剤 | |
| IL29066A (en) | Pharmaceutical preparations containing multi-chain poly-nucleotides to encourage interferon production in humans, animals or cell cultures | |
| WO1984002912A1 (en) | Protein with oncostatic effect, process for its preparation, and oncostatic drug containing it | |
| JP3061376B2 (ja) | インフルエンザウィルス感染防御剤 | |
| JPS60243018A (ja) | ヒト内来性癌制御因子 | |
| AT391482B (de) | Verfahren zur industriellen herstellung von hochreinem menschlichem leukozyteninterferon |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: HAYASHIBARA, KEN |