HU188077B - Process for producing new bmg162-af2 of anibiotic activity - Google Patents
Process for producing new bmg162-af2 of anibiotic activity Download PDFInfo
- Publication number
- HU188077B HU188077B HU812518A HU251881A HU188077B HU 188077 B HU188077 B HU 188077B HU 812518 A HU812518 A HU 812518A HU 251881 A HU251881 A HU 251881A HU 188077 B HU188077 B HU 188077B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- bmg162
- antibiotic
- strain
- agar
- weight
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
- C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
- C07C279/14—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás az új, az (I) képlettel jellemezhető BMG162-aF2 antibiotikum előállítására. Az antibiotikus hatású (I) képletű vegyület tumor kezelésére hasznosítható melegvérűeknél.
Az (I) képletű vegyület a Bacillus laterosporus specieszhez tartozó valamelyik, a BMG162-aF2 termelésére képes mikroorganizmustörzs alkalmas táptalajon végzett tenyésztése, majd a kapott tenyészetből elkülönítés útján állítható elő.
Az (I) képletű vegyület termelésére képes Bacillus-nemzetségbeli törzsekre példaképpen megemlíthetjük a Bacillus BMG162-aF2 törzset, amelyet jelen bejelentésünk feltalálói Japánban a Tochigi megyében található Taihei hegységben vett talajmintából izoláltak. További ilyen törzs a Bacillus laterosporus OUT 8139.
A BMG162-aF2 törzs tenyésztési és taxonómiai jellemzői a következők:
1) Mikroszkopikus morfológia
A BMG162-aF2 törzs nem állandó Gram-reakciót mutat, spórái vannak és pálcikaalakú egyedeinek mérete 0,6-0,8 · 2-3,5 mikron. Laterális flagellával, vagyis egyik végéhez kapcsolódó ostorral rendelkezik és aktív mozgékonyságot mutat. Spórái elliptikusak, a domináns pozíciójuk centrális, méretük 0,5-0,7- 1,0-1,5 mikron. A pálcikák jól láthatóan duzzadtak. A spórák egyik oldalán egy olyan rész (úgynevezett parasporális test) van, amely jól megfesthető kenu-alakban kristályibolyával és ugyanakkor hőálló tulajdonságú. A spórák nem festhetők meg saválló festékekkel.
2) Különböző táptalajokon a növekedés jellemzői
A zselatinból álló kenettől eltekintve mindegyik inkubálást 37 °C-on hajtjuk végre.
(1) Agar-agarból álló lemezen:
A telepek színe opak, fakó, alakjuk kerek és szélük szabálytalan, barnásfehér.
(2) Agar-agarból álló ferde tenyészeten:
A növekedés szétterjedő és sokszorosodó a tenyészet felületén, ugyanakkor a telepek felülete opak és száraz. A tenyészet színe bamásfehér.
(3) Folyékony táptalajon:
Á tenyészet teljes egészében zavarossá válik az inkubálás első napján. A második napon a felületen hártya kezd növekedni. A harmadik napon a hártya elfedi a felületet és a közeg tisztábbá válik, ugyanakkor a kísérleti kémcső fenekén micélium kicsapódása észlelhető.
(4) Zselatinból álló keneten:
Ha 20 °C-on inkubálást végzünk, az első napon a kenet hossza mentén szaporodás észlelhető. A második napon a szaporodó szakaszon depreszszió kezdődik. A közegben a zselatin közel a hatodik napon kezd elfolyósodni. Másrészt viszont ha az inkubálást 30 °C-on végezzük, akkor a második napon hártya kezd növekedni és a táptalaj a negyedik napon kezd elfolyósodni. A zselatin elfolyósodása a hetedik napon válik teljessé.
(5) Bróm-krezoivöröst tartalmazó tejen:
Az inkubálásnak közel az ötödik napjától kezdődően a bróm-krezolvörös kékké változik és közel a 12. naptól peptonizáció kezdődik.
(6) Sabouraud-féle dextróztartalmú agar-agaron és Sabouraud-féle dextróztartalmú folyékony táptalajon:
Sabouraud-féle agar-agarból (10 g peptonból, 40 g dextrózból, 15 g agar-agarból és 1000 ml ionmentesített vízből a pH beállítása nélkül állítjuk elő) álló ferde tenyészeten és Sabouraud-féle folyékony táptalajon (az előbbivel azonos összetételű, de agar-agart nem tartalmaz) 30 °C-on, illetve 37 ’Con a folyékony tenyészetben növekedés nem észlelhető, míg a ferde tenyészeten annak alsó részén gyenge növekedés tapasztalható.
3) Fiziológiai tulajdonságok
Hacsak kifejezetten másképpen nem jelezzük, az inkubálási hőmérséklet 37 ’C.
(1) Nitrát redukálása g hús-extraktumból, 10 g peptonból, 5 g nátrium-kloridból, 1 g kálium-nitrátból és 1000 ml ionmentesített vízből álló, 7,2-es pH-jú táptalajon az inkubálás első, harmadik és ötödik napján a tenyészet teljes mennyiségét vizsgálatnak vetjük alá nitrit kimutatása céljából. Az ötödik napon kifejezetten jelentkező reakció figyelhető meg és ha egy megfelelő reagenst adunk a tenyészethez, vörösesbarna csapadék válik ki.
(2) Denitrifikációs reakció
Ha a Komagata és munkatársai által leírt módszer (lásd: Hasegawa, T.: „Taxonomy and Identification of Microorganisms”, 223. oldal; a könyv a The University ofTokyo Press kiadó gondozásában 1975-ben jelent meg) szerint denitrifikációs reakcióra végzünk kísérletet, akkor az eredmény negatív.
(3) Metilvörös-teszt g glükózból, 7 g peptonból, 5 g nátrium-kloridból és 1000 ml ionmentesített vízből álló, 30 ’C-on
7,5-es pH-jú táptalajon a tenyésztés első, második és ötödik napján metilvörös-tesztet végrehajtva mindannyiszor pozitív eredményt kapunk.
(4) Voges-Proskauer teszt g glükózból, 7 g peptonból, 5 g nátrium-kloridból és 1000 ml ionmentesített vízből álló, 30 ’C-on
7,5-es pH-jú táptalajon a tenyésztés első, második és ötödik napján a Voges-Proskauer tesztet végrehajtva mindannyiszor negatív eredményt kapunk.
(5) Indol képzése g polipeptonból, 5 g nátrium-kloridból és 1000 ml ionmentesített vízből álló, 7,4-es pH-értékű táptalajon a tenyésztés első és második napján nem figyelhető meg, míg az ötödik napon megfigyelhető az indol képződése.
(6) Hidrogén-szulfid képződése g marhahús-extraktumból, 3 g élesztő-extraktumból, 15 g peptonból, 5 g proteóz-peptonból, 10 g laktózból, 10 g szacharózból, 1 g dextrózból, 0,2 g vas(II)-szulfátból, 5 g nátrium-kloridból, 0,3 g nátrium-tioszulfátból, 12 g agar-agarból és 0,024 g fenolvörösből desztillált vízzel. 1 literre feltöltés útján készült, 7,2-es pH-értékű táptalajon 7 napos inkubálás után sem észlelhető hidrogén-szulfid képződése.
(7) Keményítő hidrolízise
0,2% oldható keményítőt tartalmazó agar-agarból készült lemezen végzett kenéses tenyésztés során jód-kálium-jodid rendszerrel végzett tesztelést hajtunk végre a tenyésztés első, második, harma-21
188 077 dik, ötödik, hatodik, tizenharmadik és tizenötödik napján. Egyik esetben sem észlelhető a keményítő lebomlása.
(8) Citromsav hasznosítása nap elteltével sem a Koser-féle citrát-táptalajon, sem a Christensen-féle agar-agar táptalajon nem figyelhető meg növekedés.
(9) Szervetlen nitrogénforrások hasznosítása a növekedéshez g glükózból, 1 g kálium-dihidrogén-foszfátból, 0,5 g magnézium-szulfát-heptahidrátból, 0,2 g kálium-kloridból és 1000 ml ionmentesitett vízből álló, 7,2-es pH-értékű alap táptalajhoz 1 g nátriumnitrátot, 0,78 g ammónium-szulfátot vagy 1,7 g nátrium-glutamátot adagolunk. Egyik vizsgált szervetlen nitrogénforrást tartalmazó táptalajon sem észlelhető növekedés.
(10) Pigment képződése
Egy éjszakán át tartó inkubálás után a King-féle A agar-agaron (20 g peptonból, 1,4 g magnéziumkloridból, 10 g ammónium-szulfátból és 15 g agaragarból desztillált vízzel 1 literre való feltöltéssel készült, 7,2-es pH-értékü táptalaj) szobahőmérsékleten 6 napon át, illetve a King-féle B agar-agaron (20 g peptonból, 1,5 g kálium-dihidrogén-foszfátból, 1,5 g magnézium-szulfátból és 15 g agar-agarból desztillált vízzel 1 literre való feltöltéssel készült, 7,2-es pH-értékű táptalaj) szobahőmérsékleten 6 napon át tartó állást követően egyik tenyészet esetén sem figyelhető meg oldható pigment.
(11) Ureáz képződése g peptonból, 30 g karbamidból, 5 g nátriumkloridból, 9 g kálium-hidrogén-foszfátbói, 3 g nátrium-dihidrogén-foszfátból és 0,01 g fenolvörösből desztillált vízzel 1 literre való feltöltéssel készült,
6,2-es pH-értékű táptalajon 24 órás tenyésztést követően sem mutatható ki ureáz.
(12) Oxidáz képződése
Agar-agar alapú ferde tenyészetben 1 éjszakán át végzett tenyésztést követően a még frissen Cytoch· romé márkanevű, oxidáz kimutatására alkalmas papírral (gyártója Nissui Co. japán cég) végzett teszt pozitív oxidáz reakciót mutat.
(13) Kataláz képződése
Agar-agar alapú ferde tenyészetben 1 éjszakán át végzett tenyésztést követően habszerű képződmény tapasztalható, amely 3%-os vizes hidrogén-peroxid-oldattal végrehajtott kataláz-tesztben pozitív eredményt ad.
(14) Növekedési körülmények
Sterilizálás után 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 6,8, 7,8, 8,2 és
8,8 pH-értékű táptalajokon 24 órán át végzett tenyésztést követően növekedés észlelhető 5,0 és 8,2 pH-értékek között. A növekedés szempontjából optimális pH-tartomány 6,0 és 7,8 közötti. 9 ’C-on, 15 °C-on, 20 °C-on, 24 °C-on, 27 °C-on, 30 °C-on 37 °C-on, 40 °C-on, 45 °C-on és 50 °C-on 24 órár át tartó inkubálást végezve növekedés észlelhető 15 °C és 40 °C között. Az optimális hőmérséklet a növekedés szempontjából 37 °C körüli.
(15) Oxigén hatása
Ha a tenyészetet 1% glükózt tartalmazó agaragarban szuszpendáljuk, majd a szuszpenziót vastag rétegben megszilárdítjuk, akkor a réteg felületein kifejezetten jó növekedés észlelhető. Anaerob körülmények között 7 g növényi extraktumból, 5 g élesztő-extraktumból, 3 g hús-extraktumból, 10 g peptonból, 10 g triptonból, 3 g szója-peptonból, 3 g dextrózból, 2,5 g kálium-hidrogén-foszfátbói, 2 g nátrium-kloridból, 0,3 g L-cisztein-hidrokloridból, 0,3 g nátrium-tioglikolátból és 14 g agar-agarból desztillált vízzel 1 literre történő feltöltéssel készült,
7,2-es pH-értékű táptalajon is észlelhető növekedés.
(16) Hugh-Leifson teszt és O-F teszt
Mindkét esetben aerob és anaerob körülmények között egyaránt glükóz lebomlása és sav képződése észlelhető.
(17) Szénforrások hasznosítása
Ha a szénvegyületek hasznosítását Iizuka és Komagata módszerével (lásd: Hasegawa, T.: „Taxonomy and Identification of Microorganisms”, 230. oldal; a könyv a The University of Tokyo Press kiadó gondozásában 1975-ben jelent meg) vizsgáljuk, akkor megállapítható, hogy a glükóz, a glicerin és a nátrium-szukcinát a növekedés céljaira hasznosul, míg a nátrium-acetát, nátrium-citrát és a 4-hidroxi-benzoesav-nátriumsó nem.
(18) Sav és gáz képződése cukrokból
A BMG162-aF2 törzset felkenjük olyan ferde tenyészetekre, amelyeket úgy készítünk, hogy 1 g ammónium-hidrogén-foszfátból, 0,2 g nátriumkloridból, 0,2 g magnézium-szulfát-heptahidrátból, 0,2 g élesztő-kivonatból, 15 g agar-agarból, 4 ml 0,2%-os vizes brómkrezol-bíbor oldatból és 1000 ml ionmentesített vízből készült, 7,2-es pH-értékű alap táptalajhoz steril körülmények között előzetesen sterilizált különböző cukorféléket adunk, koncentrációjukat a táptalajban 1%-ra beállítva, majd ezután koagulálást végzünk. 40 napos kísérleti időszak alatt vizsgáljuk sav képződését. Sav képződik D-glükózból, D-mannózból, D-fruktózból, D-mannitból, maltózból, trehalózból és glicerinből, nem képződik viszont D-xilózból, L-arabinózból, D-glaktózból, ramnózból, D-szorbitból, inozitból, laktózból, szacharózból, rafFinózból és keményítőből.
Másrészt vizsgáljuk a gázfejlődést Durhamcsövet használva úgy, hogy az előző bekezdésben ismertetett módon különböző cukrokat adunk 10 g peptonból, 5 g nátrium-kloridból, 0,008 g brómtimol-kékből és 1000 ml ionmentesített vízből álló,
7,2-es pH-értékű táptalajhoz. Egyik vizsgált cukorból sem képződik gáz.
(19) Oxidációs teszt glükonsawal g kálium-hidrogén-foszfátbói, 0,5 g magnézium-szulfátból, 5 g nátrium-kloridból, 0,5 g ammónium-szulfátból, 10 g kálium-glükonátból és 1 liter desztillált vízből készült, 6,3-es pH-értékű táptalajjal végzett kísérletben negatív eredményt kapunk.
(20) Dihidroxi-aceton képződése g élesztő-kivonatot, 20 g glicerint, 15 g agaragart és 1000 ml ionmentesített vizet tartalmazó, 7,0 pH-értékű táptalajon 3, 5, 10 és 24 napon át végzett inkubálást követően egyetlen esetben sem figyelhető meg dihidroxi-aceton képződése Fehling-féle reagenssel vizsgálva. ; (21) Nátirum-kloriddal szembeni ellenállóképesség g triptikázból (Trypticase, BBL) és 1000 ml ionmentesített vízből álló, 7,0 pH-értékű alap táp3
188 077 talajhoz nátrium-kloridot adunk olyan mennyiségben, hogy koncentrációja 2, 5 vagy 7% legyen. Ezután a táptalajokat a törzzsel beoltjuk, majd a törzs szaporodását a tenyészet felületén 4 napon át figyeljük. A 2% nátrium-kloridot tartalmazó tenyészetben szaporodás figyelhető meg, míg a 2%-nál több nátrium-kloridot tartalmazó tenyészeteknél már nem.
(22) Hippursav lebontásával kapcsolatos teszt
1000 ml szív-infúziós táptalajhoz (a Difco amerikai egyesült államokbeli cég terméke) 10 g hippursav-nátriumsót adunk, majd az így kapott, 7,4-es pH-értékű táptalajt beoltjuk a törzzsel és ezután 4 napon át inkubálást végzünk. Ezt követően a hippursav lebomlása észlelhető vas(III)-klorid-oldattal.
(23) Fenil-piroszőlősavval végzett teszt g élesztő-kivonatból, 2 g D,L-fenil-alaninból, g nátrium-hidrogén-foszfátból, 5 g nátriumkloridból, 12 g agar-agarból és 1000 ml ionmentesített vízből álló, 7,3-es pH-értékű ferde tenyészetet sűrűn beoltunk, majd 24 órán át inkubálást végzünk. Ezt követően a 10%-os vas(III)-klorid-oldattal fenil-pirosszőlősavra végzett vizsgálat eredménye negatív.
(24) Tirozin oldásával kapcsolatos kísérlet
1000 ml agar-agar alapú táptalajból és 5 g tirozinból álló, 7,2-es pH-értékű táptalajon 30 °C-on és 37 °C-on végzett inkubálás során 2-4 napos inkubálást követően a tirozin oldódása figyelhető meg.
A fentiekben felsorolt tulajdonságok tehát a következőképpen foglalhatók össze:
A BMG162-aF2 törzs olyan bacillus, amely fakultatíve anaerob, nem állandó Gram-reakciót mutat, mozgékonyságot tanúsít és spórája, valamint ostora van. A spóra centrális elliptoid, amelynek olyan rész (parasporális test) van, amely kristályibolyával kenu-alakban jól festhető és hővel szemben ellenálló. A pálcikák jól láthatóan duzzadtak és nem savállók, továbbá a törzs szétterjed és szaporodik agar-agar táptalajon és hártyát képez folyékony táptalajban. Elfolyósítja a zselatint és peptonizálja a bróm-krezolvöröst tartalmazó tejet, a színezék színét kékre változtatva. Sabouraud-féle dextróztartalmú folyékony táptalajon nem, míg Sabouraud-féle dextróztartalmú agar-agaron gyengén növekszik. Redukálja a nitrátokat, de denitrifikációs reakciója negatív. Metilvörös-tesztje pozitív és Voges-Proskauer tesztje negatív. Indol tenyésztése ötödik napján kimutatható és hidrogén-szulfidot nem képez. Nem bontja le a keményítőt és nem hasznosítja a citromsavat. Az ureáz, oxidáz és kataláz tesztek eredménye negatív, pozitív, illetve negatív. Növekedés figyelhető meg 5,0 és 8,2 közötti pH-tartományban, az optimális tartomány pedig 6,0 és 7,8 közötti. A növekedés megfigyelhető 15 °C és 40 °C között, 37 °C körüli optimummal. A növekedés észlelhető aerób körülmények között is. Lebontja a glükózt oxidatív és fermentatív körülmények között és savat képez. D-glükózból, D-mannózból, D-fruktózból, D-mannitból, maltózból, trehalózból és glicerinből savat képez, gázt viszont nem. Nem oxidálja a glükonsavat és dihidroxiacetont sem képez. Nem bontja le a hippursavat és a fenil-alanínt és oldja a tirozint. Nem növekszik
2%-nál több nátrium-kloridot tartalmazó táptalajon.
A BMG162-aF2 törzs fenti jellemzői alapján megállapítható, hogy a törzs a Bacillus gesuszhoz, de elsősorban a Bacillus firmus, Bacillus laterosporus, Bacillus brevis vagy Bacillus sphaericus specieszekhez tartozik. Ezek olyan specieszek, amelyeknek közös tulajdonságaik vannak, mégpedig kataláz-pozitívak és nem képeznek dihidroxi-acetont (lásd a Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology 8. kiadásának 542. oldalán; a könyv Buchanan, R. R. és Gibbons, N. E. gondozásában a The Williams and Williams Company baltimore-i kiadó gondozásában 1974-ben jelent meg). E négyféle speciesszel összehasonlításban a BMG162-aF2 törzs jellemzőit az 1. táblázatban foglaljuk össze.
1. táblázat
A BMG162-aF2 törzs összehasonlítása rokon specieszekkel
| B. firmus | B. laterosporus | |
| Spóra | ||
| alak | Ea | E |
| megkülönböztethetően | - | + |
| sporangiumot felfúvó | ||
| domináns pozíció | C | C |
| Glükózból a következők képzése: | ||
| sav | + (hét) | + |
| gaz | — | — |
| acetoin | — | — |
| Pálcikák | ||
| szélesség (pm) | 0,6-0,9 | 0,5-0,8 |
| hossz (pm) | 1,2-4 | 2-5 |
| Gram-reakció | + | d és v |
| A spóra egyik oldalához | - | + ( + )b |
| kapcsolódó könnyen festhető test | ||
| Mozgékonyság | d | + |
| Növekedési hőmérséklet (°C) | 40-45 | 35-50 |
| maximum | ||
| minimum | 5-20 | 15-20 |
| Savképződés: | ||
| arabinózból és xilózból | d | - |
| mannitból | + | + |
| Keményítő hidrolizálása Növekedés: | + | — |
| anaerob agar-agaron | — | + |
| 7% nátrium-kloridot | + | — |
| tartalmazó táptalajon | ||
| Sabouraud-féle destróz- | - | - (±)b |
| tartalmú folyékony táptalajon | ||
| Sabouraud-féle dextróz- | — | |
| tartalmú agar-agaron | ||
| Bázikus reakció Voges | — | . — |
| Proskauer tesztben | ||
| Indol képzése | — | d |
| NO3 NOj -vé redukálása | + | + |
| Kazein lebontása | + | + |
| Tirozin lebontása | d | + |
| Fenil-alanin dezaminálása | d | — |
188 077 a: E = elliptikus vagy hengeres; S = gömbalakú vagy megközelítően az; C = centrális; T = terminális vagy szubterminális; CT = centrális és terminális közötti, törzsön belül vagy törzsek közötti variáció; + = a törzsek 90-100%-a esetén pozitív; - = a törzsek 90-100%-a esetén negatív; d = a reakciók eltérőek, a törzsek 11-89%-a esetén pozitívak; v = a jellemző egy adott törzsben nem állandó b: kísérleti eredmény
| B. brevis | B. sphaericus | BMG162- aF2 |
| E | S | elliptikus |
| + | + | + |
| CT | T | C |
| + vagy - | '+ | |
| 0,6-0,9 | 0,6-1 | 0,6-0,8 |
| 1,5-4 | 1,5-5 | 2-3,5 |
| d és v | d és v | d és v |
| - | - | + |
| + | + | + |
| 40-60 | 30-45 | 40 ' |
| 10-35 | 5-15 | 15 |
| d | - | + |
| — | + | |
| - | d | - |
| d | d | ± |
| + | + | — |
| + 5 napos tenyészet | ||
| d | + | |
| + | d | + |
| + | - | + |
| — | + | — |
összehasonlítottuk a BMG162-aF2 törzset a National Institute of Animál Health (Nemzeti Állategészségügyi Intézet) japán közintézmény által rendelkezésünkre bocsátott B. laterosporus törzszsel, és arra a megállapításra jutottunk, hogy mindkét törzsnek kenu-alakú teste van (azaz kenu-alakban megfestődő része, úgynevezett parasporális teste) a spórák egyik oldalán, ami megkülönböztető jellemző. Ugyanakkor Sabouraud-féle dextróztartalmú agar-agaron a kétféle törzs növekedése egymással koincidenciában van. így megállapítható, hogy a BMG162-aF2 törzs a Bacillus laterosporus specieszhez tartozik és ezért a Bacillus laterosporus BMG162-aF2 megnevezést viselheti.
A BMG162-aF2 törzset 1979. október 12-én a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology nevű japán törzsgyűjteményben (Inage, Chiba-City, Japán) FERMP 5230 számon, illetve 1981. július 31-én az American Type Culture Collection amerikai törzsgyűjteményben (Parklawn Drive, Rockville, Maryland állam) ATCC-31 932 szám alatt deponáltuk.
A leíráshoz csatolt rajzokon látható ábrák közül az 1. ábra a BMG162-aF2 antibiotikum hidrokloridjának ’H-NMR-spektruma, amelyet 100 MHzen De-DMSO-ban belső standardként tetrametilszilánt használva vettünk fel. A 2. ábrán ugyanezen vegyület 13C-NMR-spektruma látható, amelyet 25 MHz-en deutérium-oxidban külső standardként teframetil-szilánt használva vettünk fel. A 3. ábrán ugyanezen vegyület 15N-NMR-spektruma látható, amelyet 10 MHz-en deutérium-oxidban külső standardként NH415NO3-ot használva vettünk fel. A 4. ábrán ugyanezen vegyület infravörös spektruma látható, amelyet kálium-bromid pasztillában vettünk fel.
A BMG162-aF2 antibiotikum tehát a találmány értelmében a Bacillus genuszhoz tartozó, BMG162aF2 antibiotikumot termelni képes törzs vagy mutánsa spóráinak vagy pálcikáinak aeorob körülmények között tápanyagokat tartalmazó táptalajon végzett tenyésztése útján állítható elő. Általában a találmány szerinti eljárás megvalósítása céljából a szokásos baktériumok tenyésztésére rendszerint alkalmazott táptalajok komponenseit hasznosíthatjuk. így például nitrogénforrásként kereskedelmi forgalomban kapható pepton, hús-extraktum, kukoricalekvár, gyapotmagliszt, földimogyoróliszt, szójababliszt, élesztő-extraktum, N-Z amin, kazein hidrolizátum, nátrium-nitrát, ammónium-nitrát vagy ammónium-szulfát hasznosítható. Ugyanakkor szénforrásként például kereskedelmi forgalomban kapható glicerin, szacharóz, keményítő, glükóz, maltóz, melasz és más szénhidrogének, valamint zsírok és olajok hasznosíthatók. Á fenti komponenseken túlmenően a táptalaj só-komponenseként például nátrium-klorid, foszfátok, kálciumkarbonát, magnézium-szulfát és más szervetlen sók alkalmazhatók. Más fémsók és egyéb komponensek is alkalmazhatók, feltéve, hogy a BMG162-aF2 antibiotikumot termelő törzs hasznosítja őket és jelenlétük nem hátrányos a BMG162-aF2 antibiotikum képződése szempontjából. Más szavakkal, a találmány szerinti eljárásban bármely olyan tápanyag hasznosítható, amelyet egy, BMG162-aF2 antibiotikumot termelni képes törzs asszimilálni tud az antibiotikum előállítása céljára.
Ipari méretű antibiotikum-termelés céljára a folyékony táptalajon végrehajtott tenyésztést tartjuk előnyösnek. A tenyésztés során bármely olyan hőmérsékleten dolgozhatunk, amelyen egy, BMG162aF2 antibiotikumot termelni képes törzs növekedni és így az említett antibiotikumot termelni képes, de különösen előnyösen 20 ’C és 35 ’C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre a szükséges inkubálást. A táptalaj pH-értéke 5,0 és 8,2, előnyösen 6,0 és 7,8 között változhat. A tenyésztést annyi időn át folytatjuk, míg a tenyészetben kielégítő mennyiségű antibiotikum képződik, illetve akkumulálódik. így például egy napos inkubálást követően a BMG162aF2 antibiotikum képződése és akkumulációja figyelhető meg, ha 2,0% glicerinből, 2,0% glükózból, 1,0% peptonból, 0,3% élesztő-extraktumból és 0,2% kalcium-karbonátból a leginkább célszerűen 7,4 körüli pH-értékű táptalajt állítunk elő, majd a táptalajt sterilizáljuk és beoltjuk a BMG162-aF2 törzs ferde tenyészetéből elkülönített spórákkal és pálcikákkal, ezt követően pedig forgatás és rázatás
188 077 közben 27 °C-on aerob körülmények között tenyésztést végzünk.
A BMG162-aF2 kimutatását kísérleti mikroorganizmusként a Bacillus subtilis PCI-219 törzset használva azzal a szabványosított csészés-lemezes módszerrel végezhetjük, amelyet szokásos módon használtak ismert antibiotikumok kimutatására.
A Bacillus genuszhoz tartozó, BMG162-aF2 antibiotikumot termelni képes törzs korábban említett rázatásos tenyésztésen túlmenően ipari méretekben tenyészthető üvegedényes-fermentoros vagy tartályos tenyésztéssel is, mely utóbbi módszereket a levegőztetéses-keveréses tenyésztésekhez hasznosítanak. Ipari méretekben történő előállításnál tehát a korábban említett összetételű folyékony táptalajt 20-40 órán át rázatás közben tenyésztjük, és beoltását az oltótenyészetből 0,5-2,0 térfogat%-os mennyiségekkel hajtjuk végre.
A tenyésztést követően a tenyészetet szűrjük, majd a szűrletből a BMG162-aF2 antibiotikumot elkülönítjük oszlopkromatografálással, oszloptöltetként aktív csoportként karboxilcsoportot tartalmazó, gyenge kationos ioncserélő gyantát hasznosítva. Gyenge kationos ioncserélő gyantára példaképpen említhetjük a Rohm and Haas Co. amerikai cég által Amberlite IRC-50 és CG-50 márkanév alatt forgalmazott ioncserélő gyantákat (aktív csoportként kizárólag karboxilcsoportokat tartalmaznak), a Bayer NSZK-beli cég által Lewatit CNP márkanév alatt forgalomba hozott ioncserélő gyantát (aktív csoportokként karboxilcsoportokat és szulfonsavcsoportokat tartalmaz) vagy a Pharmacia Fine Chemicals svéd cég által CM-Sephadex márkanév alatt forgalmazott ioncserélő gyantát (karboxi-metil-dextrán). Ezek a gyanták felhasználhatók hidrogén-, nátrium- vagy ammóniumformában vagy pedig ezek alkotta vegyes formában. A gyantán adszorbeálódott BMG162-aF2 antibiotikumot egy sav, például sósav vagy ecetsav vizes oldatával vagy pedig egy só, például nátriumklorid vizes oldatával eluálhatjuk. A termék antibiotikum további tisztítása céljából extrahálási, szeparálási és tisztítási módszerekként például gélszűrési vagy az említett gyantákat hasznosító ultraszűrési módszereket vagy ezek megfelelő kombinációit hasznosíthatjuk.
Tekintettel arra, hogy szabad bázis formájában nem stabil, a BMG162-aF2 antibiotikumot hidrokloridsója alakjában nyerjük ki. A só higroszkópos és hidrátot képez. A BMG162-aF2-hidrokloridhidrát fizikai-kémiai jellemzői a következők:
1. Extrém higroszkóposságára tekintettel olvadáspontját lehetetlen megmérni.
2. Fajlagos forgatóképessége [α]θ = -1Γ (c= 1,0%, víz).
3. Elemzési eredmények a
C,7H37N7O4 · 3 HC1 · 2 H2O képlet alapján: számított:
C% = 37,20, H% = 8,08, N%= 17,86,
Cl%= 19,38; talált:
C% = 37,55, H% = 7,89, N% = 17,52, Cl%= 18,61.
4. Az ’H-NMR-spektrum az 1. ábrán látható.
5. A 13C-NMR-spektrum a 2. ábrán látható.
6. A 15N-NMR-spektrum a 3. ábrán látható. A spektrumban hét nitrogénatom figyelhető meg (a guanidilcsoport három nitrogénatomja kétcsúcsú jelként jelentkezik).
A BMG162-aF2-hidroklorid jól oldódik vízben és metanolban, azonban rosszul oldódik vagy oldhatatlan etanolban, etil-acetátban, kloroformban és benzolban. Pozitív ninhidrin-, Sakaguchi- és Rydon-Smith-reakciót ad. Hordozóanyagként Avicel márkanevűt (mikrokristályos cellulóz) és futtatószerként butanol, etanol és víz 4 : 1 : 2 térfogatarányú elegyét használva vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatban a BMG162-aF2 hidroklorid egyetlen foltot ad Rf=0,14 és Rf=0,20 értékekkel. Hangyasav, ecetsav és víz 1 : 3 : 36 térfogatarányú elegyével végrehajtott nagyfeszültségű papírelektroforézises vizsgálatban (3500 V, 15 perc) a BMG162-aF2 viszonylagos, 1,70-1,74 értékű mozgékonyságot mutat, az alaninét 1,0-nak véve.
A következőkben a BMG162-aF2 biológiai tulajdonságait ismertetjük. Miként a későbbiekből kitűnik, a BMG162-aF2-hidroklorid csak gyenge gátló aktivitást mutat Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokkal szemben, ugyanakkor a gyógyításban és a túlélési időszak meghosszabbításában jelentős hatást fejt ki egereknél a leukémia L1210, EL-4, Ehrlich aszcitesz-tumor és a Sarcoma 180 megbetegedések esetén. Nyilvánvaló tehát, hogy ez az antibiotikum elsősorban mint rákos megbetegedések elleni ágens hasznosítható.
(1) A BMG162-aF2 antibakteriális aktivitása
A BMG162-aF2 antibiotikumnak gyenge az antibakteriális aktivitása. Agar-agaron különböző baktériumokkal szembeni minimális gátlási koncentrációit a 2-1-2-3. táblázatokban adjuk meg. A táblázatokban megadott eredményeket olyan kísérletekben kaptuk, amelyeket BMG162-aF2hidrokloriddal az agar-agar hígításos módszer szerint végeztük el. Látható a 2-1. táblázatból, hogy a BMG162-aF2 gyengén gátolja a Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok fejlődését.
2-1. táblázat
Antibakteriális aktivitás
| Kísérleti mikroorganizmus | Minimális gátlási koncentráció (ucg/ml) |
| 1. Staphylococcus aureus FDA209P | 100 |
| 2. Staphylococcus aureus Smith | 12,5 |
| 3. Micrococcus flavus FDA16 | 25 |
| 4. Micrococcus lysodeikticus IFO3333 | 100 |
| 5. Sarcina lutea PCI 1001 | 100 |
| 6. Bacillus anthracis | 25 |
| 7. Bacillus subtilis NRRL B-558 | 100 |
| 8. Bacillus subtilis PCI219 | 6,25 |
| 9. Bacillus cereus ATCC10702 | 100 |
| 10. Corynebacterium bovis 1810 | 50 |
| 11. Escherichia coli NIHJ | 100 |
| 12. Escherichia coli K-12 | 100 |
| 13. Escherichia coli ML 1629 | 100 |
| 14. Shigella dysenteriae JS11910 | 100 |
| 15. Shigella flexneri 4bJSl 1811 | 100 |
188 077
2-1. táblázat folytatása Antibakteriális aktivitás
| Kísérleti mikroorganizmus | Minimális gátlási koncentráció (ucg/ml) |
| 16. Shigella sonnei JS11746 17. Salmonella typhi T-63 18. Salmonella enteritidis 19. Proteus vulgáris 0X19 20. Proteus mirabilis IFM OM-9 21. Proteus rettgeri GN311 22. Proteus rettgeri GN466 23. Serratia marcescens 24. Pseudomonas aeruginosa A3 25. Klebsiella penumoniae PCI602 26. Mycobacterium smegmatis ATCC607 | 100 100 100 12,5 100 100 100 100 100 100 100 |
| felhasznált táptalaj agar-agar hőfok = 37 °C | |
| 2-2. táblázat Antibakteriális aktivitás | |
| Kísérleti mikroorganizmus | Minimális gátlási koncentráció (ucg/ml) |
| 1. Aeromonas punctata IÁM 1646 2. Aeromonas salmonecida ATCC14174 3. Aeromonas sp. (KT-444) 4. Vibrio anguillarum NCBM6 5. Pseudomonas fluorescens 6. Pseudomonas lachrymans 7. Erwinia aroideae | 100 100 100 50 100 50 50 |
| felhasznált táptalaj: agar-agar hőfok = 27 ’C | |
| 2-3. táblázat Antibakteriális aktivitás | |
| Kísérleti mikroorganizmus | Minimális gátlási koncentráció (ucg/ml) |
| 1. Candida tropicalis F-l 2. Candida pseudotropicalis NI7494 3. Candida albicans 3147 4. Candida Yu-1200 5. Candida krusei NI7492 6. Saccharomyces cerevisiae 7. Cryptococcus neogormans 8. Helminthosporium oryzae 9. Pyricularia oryzae 10. Pellicularía filamentosa sasakii 11. Xanthomonas oryzae 12. Xanthomonas oryzae 13. Aspergillus niger 14. Trichophyton asteroides 429 15. Trichophyton mentagrophytes | 100 100 100 ' 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 |
felhasznált táptalaj agar-agar+ 1% glükóz hőfok = 27 ’C (2) A BMG162-aF2 rákelleni hatása (a) Egér L1210 leukémiája elleni hatás (intraperitoneális-intraperitoneális rendszer)
6-7 hetes nőstény CDF,-törzsbeli egerek közül nyolcat intraperitoneálisan 105 sejt (0,25 ml) egér koncentrációban beoltunk az L1210 leukémia sejtjeivel. 24 óra elteltével fiziológiás sóoldatban oldott BMG162-aF2-hidrokloridot adagolunk intraperitoneálisan kilenc egymást követő napon át naponta egyszer intraperitoneálisan, miközben meghatározzuk a letalitást és a túlélési időszak meghosszabbodásának mértékét. Miként a 3. táblázatból látható, a BMG162-aF2 gyógyító hatást és a túlélési időszak meghosszabbodását mutatja egér L1210 leukémiája esetén.
3. táblázat
BMG162-aF2 hatása egér L1210 leukémiájára (i.p. - i.p. rendszer)
| Dózis [mg/kg/nap] | Kezelt állatok átlagos túlélési napja Kontroll állatok θθ átlagos túlélési napja | 60 nap elteltével a még élő egerek száma |
| kísérleti egerek száma | ||
| 50 | 295 + | 0/8 |
| 25 | 334 | 0/8 |
| 12,5 | 586 | 4/8 |
| 6,25 | 732 | 8/8 |
| 3,13 | 441 | 3/8 |
| 1,56 | 301 | 1/8 |
| 0,78 | 107 | 0/8 |
+ toxicitás jelei mutatkoznak a kontroll állatok esetén az átlagos túlélési nap: 8,2 (b) Egér L1210 leukémiája elleni hatás (szubkután-intraperitoneális rendszer)
6-7 hetes nőstény CDF,-törzsbeli egerekből ötös csoportoknak a hasi oldalon szubkután 105 sejt/ 0,25 ml/egér dózisban L1210 leukémia sejteket injektálunk, majd 24 óra elteltével napi egyszeri beadással intraperitoneálisan 9 napon át fiziológiás konyhasóoldatban oldott BMG162-aF2-hidrokloriddal kezeljük a csoportokat, miközben a letalitást és a túlélési időszak meghosszabbodásának mértékét megállapítjuk. Miként a 4. táblázatból látható, a BMG162-aF2 erős terápiás hatást és túlélési időszak meghosszabbodását mutatja, az (a) kísérlethez hasonlóan.
4. táblázat
BMG162-aF2 hatása egér L1210 leukémiájára (s.c. - i.p. rendszer)
| Dózis [mg/kg/nap] | Kezelt állatok átlagos túlélési napja lnn Kontroll állatok átlagos túlélési napja | 60 nap elteltével. a még élő egerek száma |
| kísérleti egerek száma | ||
| 50 | 309 | 5/5 |
| 25 | 309 | 5/5 |
| 12,5 | 309 | 5/5 |
| 6,25 | 240 | 3/5 |
| 3,13 | ’ 120 | 0/5 |
| 1,56 | 105 | 0/5 |
188 077
A kontroll állatoknál az átlagos túlélési napok száma: 9,7 nap (c) Egér EL-4 leukémiája elleni hatás 10 hetes nőstény CJ7BL/6-törzsbeli egerekből ötös csoportoknak intraperitoneálisan 105 sejt/0,25 ml/egér dózisban EL-4 leukémia sejteket adunk be, majd 24 óra elteltével fiziológiás konyhasóoldatban oldott BMG162-aF2-hidrokloridot adunk be naponta egyszer 9 egymást követő napon intraperitoneálisan, miközben a letalitást és a túlélési időszak meghosszabbodásának mértékét megállapítjuk. Miként az az 5. táblázatból látható, a BMG162aF2 erős terápiás hatást és a túlélési időszak meghosszabbodását mutatja.
5. táblázat
BMG162-aF2 hatása egér EL-4 leukémiájára
| Dózis | Kezelt állatok átlagos túlélési napja |
| [mg/kg/nap] | Kontroll állatok átlagos túlélési napja |
| 5 | 193 |
| 2,5 | 164 |
| 1,25 | 159 |
| 0,625 | 130 |
| 0,313 | 131 |
A kontroll állatok átlagos túlélési napja: 11,0 (d) Egér Ehrlich-féle aszciteszes tumorjával szembeni hatás hetes nőstény ICR-törzsbeli egerekből négyes csoportokat intraperitoneálisan 2 106 sejt/0,25 ml/egér dózisban beoltunk Ehrlich-féle aszciteszes tumor-sejtekkel, majd 24 óra elteltével naponta egyszer 9 egymást követő napon át intraperitoneális injektálással fiziológiás konyhasóoldatban oldott BMG162-aF2-hidrokloridot adunk be. A túlélési időszak meghosszabbodásának mértékét rögzítjük. Miként a 6. táblázatból kitűnik, a BMG162-aF2 hatásos rákellenes hatóanyag Ehrlich-féle aszciteszes tumor esetén.
6. táblázat
BMG162-aF2 hatása egér Ehrlich-féle aszciteszes tumorjával szemben
Dózis Kezelt állatok átlagos túlélési napja
| 50 | 54+ |
| 25 | 72 + |
| 12,5 | 170+ |
| 6,25 | 236 |
| 3,13 | 188 |
| 1,56 | 133 |
| + toxicitás jelei mutatkoznak | |
| a kontroll állatoknál | az átlagos túlélési nap: 13,8 |
(e) Sarcoma 180 elleni hatás 6 hetes nőstény ICR-törzsbeli egerekből négyes csoportokat intraperitoneálisan 2 · 10® sejt/0,25 ml/egér dózisban beoltunk Sarcoma 180 sejtekkel, majd 24 óra elteltével naponta egyszer 9 egymást követő napon át intraperitoneális injektálással fiziológiás konyhasóoldatban oldott BMG162aF2-hidrokloridot adunk be. A túlélési időszak meghosszabbodásának mértékét rögzítjük. Miként a 7. táblázatból kitűnik, a BMG162-aF2 hatásos rákellenes hatóanyag Sarcoma 180 esetén.
7. táblázat
BMG162-aF2 hatása egér Sarcoma 180 megbetegedése ellen
| Dózis | Kezelt állatok átlagos túlélési napja |
| [mg/kg/nap] | Kontroll állatok átlagos túlélési napja |
| 50 | 53+ |
| 12,5 | 279+ |
| 6,25 | 181+ |
| 3,13 | 243 |
| 1,56 | 220 |
+ toxicitás jelei mutatkoznak a kontroll állatoknál az átlagos túlélési nap: 13,8 (3) BMG162-aF2 akut toxicitása
Négyhetes nőstény ICR-törzsbeli egereknek a BMG162-aF2-hidrokloridot intravénásán beadva az LD50 értéke több, mint 80 mg/kg.
A BMG162-aF2 fizikai-kémiai és biológiai tulajdonságait a fentiekben részletesen ismertettük. Annak a ténynek következtében, hogy a spermidin mindannyiuk molekulájának közös alkotóeleme, a BMG162-aF2 hasonlít a Streptomyces verticillus által termelt bleomicinre, a Nocardia genuszba tartozó specieszek által termelt LL-BM123/?, y, és y2 antibiotikumra, a Bacillus brevis által termelt edeninre és a Bacillus által termelt laterosporaminra. Tekintettel arra, hogy a BMG162-aF2 szerkezetét - miként korábban már leírtuk - meghatároztuk, biztonsággal állíthatjuk, hogy eltérő a bleomicintől, az LL-BM123/J, y, és y2 antibiotkumoktól, valamint az edenintől, mely vegyületek szerkezeté szintén ismert. A The Journal of Antibiotics, 29. 390-393 (1976) szakirodalmi helyen ismertetett laterosporamintól megkülönböztethető infravörös spektruma, alkoholban való oldékonysága és antibakteriális spektruma alapján, továbbá annak a ténynek alapján, hogy a laterosporamin egyik komponense, egy C6H13N3 összegképletű, Sakaguchitesztben pozitív anyag nem található meg a BMG162-aF2 bomlástermékei között. Mindezek a tények összefoglalóan megerősítik, hogy a BMG162-aF2 új antibiotikum.
A fentiekben ismertetett farmakológiai kísérleti eredmények alapján megállapítható, hogy a BMG162-aF2 jellegzetes rákellenes hatású melegvérűek - beleértve az embert - leukémiás megbetegedései, továbbá szarkoma és más típusú tumorok kezelésében. Ugyanakkor a BMG162-aF2 toxicitása viszonylag csekély. Ezért a BMG162-aF2 kiváló rákellenes hatóanyagnak tekinthető.
Ami a BMG162-aF2 gyógyászati alkalmazásához felhasználható gyógyászati készítményeket illeti, ezek ismert módon állíthatók elő. így például előállíthatunk injektálással, orálisan vagy rektálisan beadható készítményeket, mint például injekci-81
188 077 ót, port, szemcsés készítményt, tablettát vagy kúpot.
Ezekhez a gyógyászati készítményekhez a gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és segédanyagokat, például szilárd hordozóanyagokat, folyékony hordozóanyagokat, stabilizátorokat, antiszeptikumokat, fájdalomcsillapítókat és emulgeálószereket hasznosíthatunk, feltéve, hogy a BMG162-aF2 vonatkozásában kémiailag közömbösek. Az injektálható készítmények előállítása során a gyakorlatban úgy járunk el, hogy a BMG162aF2 antibiotikumot - előnyösen vízoldható sója, például hidrokloridja formájában - és cukrokat, például mannitot feloldunk desztillált vízben, majd az így kapott oldatot fiolákba töltjük, vagy pedig az oldatot liofilizáljuk és beadást megelőzően oldjuk fel fiziológiás konyhasóoldatban vagy desztillált vízben.
A gyógyászati készítményekben az egyes komponensek aránya a készítmény jellegétől függően széles határok között változhat, általában azonban a BMG162-aF2 mennyisége 0,01 súly%és 100súly%, előnyösen 0,1 súly% és 70 súly% között változhat, míg a többi anyag összmennyisége 0-99,99 súly.%, előnyösen 30-99,9 súly%. Injektálásra alkalmas készítmény esetén a komponensek mennyisége a kővetkező*
BMG162-aF2 0,1-95,0 súly% cukrok 5,0-99,1 súly% nátrium-klorid 0-94,9 súly%
Bár a konkrét esetben beadott BMG162-aF2 mennyisége a szimptómáktól függően változhat, felnőttek esetében a napi dózisa rendszerint 0,01-800 mg, előnyösen 0,1-600 mg. Amennyiben hosszabb időn át folyamatosan szükséges alkalmazása, akkor a napi dózist csökkenteni kell.
A BMG162-aF2 antibiotikumot tartalmazó gyógyászati készítményekben az antibiotikumot rendszerint gyógyászatilag elfogadható sói, például hidrokloridsói formájában alkalmazzuk.
A találmányt közelebbről a következő kiviteli példákkal kívánjuk megvilágítani.
1. példa
500 ml térfogatú Sakaguchi-palackokba 125 125 ml-es mennyiségekben összesen 5 liter olyan folyékony táptalajt töltünk, amely 2,0% glicerint, 2,0 dextrint, 1,0% szója-peptont (a Difco Laboratories amerikai egyesült államokbeli cég Bacto-soytone márkanévvel forgalmazza), 0,3% élesztő-kivonatot (a Daigo-Eiyko-Kagaku Co., Ltd. japán cég terméke), 0,2% ammónium-szulfátot és 0,2% kalciumkarbonátot tartalmaz, továbbá pH-értéke 7,4-re van beállítva. Sterilizálást követően a palackokba 1% mennyiségben olyan oltóanyagot adagolunk, amelyet előzetesen a Bacillus laterosporus BMG162-aF2 FERM-P 5230 (illetve ATCC31932) törzzsel azonos összetételű táptalajban agar-agar ferde tenyészeten 2 napon át végzett tenyésztéssel kaptunk. A beoltás után a palackokat 28 °C-on 5 napon át inkubáljuk. Ezt követően a tenyészetek szűrése útján kapott 4900 ml szűrletet felvisszük egy olyan 500 ml-es és 5,2 cm átmérőjű oszlopra, amely a Rohm and Haas Co. amerikai egyesült államokbeli cég által Amberlite 1RC-50 márkanéven forgalmazott gyanta Na+-formájú és H+-formájú alakjának 7 : 3 súlyarányú keverékével van töltve. Az oszlopon az aktív komponens adszorbeálódik. Az oszlopot ezután vízzel mossuk, majd 2000 ml 1 n sósavoldattal eluáljuk és az eluátumot 10 n nátrium-hidroxid-oldattal pH 6-íg semlegesítjük. A semlegesített eluátumot vízzel négyszeresére hígítjuk, majd olyan 400 ml-es és 4,3 cm átmérőjű oszlopra felvisszük, amely a Pharmacia Fine Chemicals svéd cég által CM-Sephades C-25 márkanév alatt forgalmazott és vízzel végzett előkezelés eredményeképpen duzzasztott gyantát tartalmaz. Az aktív komponens a gyantán adszorbeálódik. Az aktív komponenst ezután 0,3 mólos vizes nátrium-klorid-oldattal eluáljuk, majd az eluátumot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml metanolban oldjuk a nátriumklorid kristályok szűrés ut ján \ ló Itávolítása céljából. !. zurletet felvisszuk olyan 445 ml térfogatú és 2,6 cm átmérőjű oszlopra, amely a Pharmacia Fien Chemicals áltál Sephadex LH-20 márkanév alatt forgalmazott, szerves oldószerrel gélszűrésre alkalmazható, dextrán alapú és metanollal végzett előkezelés útján duzzasztott gyantával van töltve. Az eluálást metanollal végezzük, majd az aktív komponenst tartalmazó eluátumfrakciókat csökkentett nyomáson bepároljuk, fehér porként 460 mg mennyiségben tiszta BMG162-aF2-hidrokloridot kapva.
2. példa literes kapacitású, rozsdamentes acélból készült tartályba bemérünk 10 liter mennyiségben olyan folyékony táptalajt, amely 2,0% glicerint, 2,0% dextrint, 1,0% az 1. példában említett minőségű szója-peptont, 0,3%, az 1. példában említett minőségű élesztő-extraktumot, 0,2% ammóniumszulfalót, 0.2% kalcium-karbonátot és 0,03%, habzásgátló hatású szihkonolajat tartalmaz, továbbá pH értéke 7,4-re van beállítva. Ezután 120 °C-on 20 percen át sterilizálást végzünk. Ezt követően a lehűtött tartályban lévő táptalajt aszeptikus körülmények közölt beoltjuk az 1. példában említett törzs 48 órás rázott tenyészetéből 125 mí-rel, majd keverés és levegőztetés mellett 28 °C-on tenyésztést végzünk. A levegőztetést először 15 liter/perc sebességgel 350 fordulat/perc keverési sebesség mellett, majd 16 óra elteltével ugyanilyen keverési sebesség mellett 10 liter/perc sebességgel végezzük. 40 óra elteltével 9500 ml szűrletet nyerünk ki a tenyészetből, majd a szürletet lényegében az 1. példában ismertetett módon Amberlite IRC-50 és CMSephadex C-25 gyantákat tartalmazó oszlopokon kezeljük. Az utóbb említett gyantát tartalmazó oszlopot 4 liter 0,3 mólos vizes nátrium-klorid-oldattal eluáljuk, 290 cseppből álló frakciókat szedve. Két aktív frakciót különítünk el, mégpedig az I. frakciót (a 14-63. eluátum-frakciókból áll) és a II. frakciót (a 64-154. eluátum-frakciókból áll). A II. frakció (amely nem tartalmaz olyan anyagot, mely 280 nm-en abszorbeálna) 1660 ml-nyi mennyiségéhez
188 077 g aktív szenet adunk az aktív komponens adszorbeálása céljából. Az aktív szén vizes mosása után a BMG162-aF2 antibiotikumot 500 ml 0,05 n, 80% metanolt tartalmazó vízzel készült sósavoldattal eluáljuk. Az eluátumot a Rohm and Haas cég által Amberlite IR-45 márkanév alatt forgalmazott, OH -formájú gyantával semlegesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk, 305 mg mennyiségben BMG162-aF2-hidrokloridot kapva. Az I. frakciót (amely tartalmaz olyan anyagot, mely 280 nm-en adszorbeál) szárazra pároljuk, majd a maradékot metanollal extraháljuk és ezután 1 liter ionmentesített vízben oldjuk. A kapott oldatot olyan 400 ml-es és 4,3 cm átmérőjű oszlopon újrakromatografáljuk, amely CM-Sephadex C-25 gyantával van töltve. Gradiens-eluálást végzünk összesen 4 liter, 0 és 1 mól közötti koncentrációjú nátriumklorid-oldattal. Az aktív frakciókat szárazra pároljuk, majd metanollal extraháljuk és az extraktumot olyan 780 ml-es 2,8 cm átmérőjű oszlopra visszük fel, amely Sephadex LH-20 gyantával van töltve. Az oszlopot metanollal eluáljuk a terméknek nátrium-kloridtól való megtisztítása céljából. Az eluátum bepárlásakor 670 mg mennyiségben kapunk tiszta BMG162-aF2-hidrokloridot. Az összhozam tehát 975 mg BMG162-aF2-hidroklorid.
3. példa
A 2. példában kapott BMG162-aF2-hidrokloridból 150 mg 1 ml metanollal készült oldatához hozzáadunk 1 ml, pikrinsawal telített metanolt, majd az így kapott keveréket forrásig melegítjük. Bepárlás után a maradékot benzollal és etanollal mossuk a fölös pikrinsav eltávolítása céljából. Víz és etanol elegyéből végzett kristályosítás után kristályos alakban BMG162-aF2-pikrátot kapunk.
4. példa
Injektálható készítmény
Az 1. példában ismertetett módon előállított BMG162-aF2-hidrokloridból 30 súlyrészt feloldunk 970 ml súlyrész tisztított vízben, majd a kapott oldatot csíramentesre szűrjük GS-típusú Millipore szűrőn. A szűrletet 10 ml-es fiolákba töltjük és liofilizáljuk, fiolánként 30 mg fagyasztva szárított BMG162-aF2-hidrokloridot tartalmazó injektálható készítményt kapva.
5. példa
Szemcsés készítmény súlyrész, az 1. példában ismertetett módon előállított BMG162-aF2-hidrokloridot, 600 súlyrész laktózt, 330 súlyrész kristályos cellulózt és 20 súlyrész hiroxi-propil-cellulózt alaposan összekeverünk, majd a kapott keveréket Roller-Compactor márkanevű forgó sajtolóban sajtoljuk és szemcsésre törjük, a körülbelül 1 mm és 0,25 mm közötti lyukméretű szitákon áteső frakciót elkülönítve.
6. példa Tabletta súlyrész, az 1. példában ismertetett módon előállított BMG162-aF2-hidrokloridot, 20 súlyrész kristályos laktózt, 147 súlyrész kristályos cellulózt és 3 súlyrész magnézium-sztearátot V-alakú keverőt használva összekeverünk, majd tablettázunk.
7. példa kz 1. példában ismertetett módon a Bacillus laterosporus OUT 8139 standard tenyészetével 4,4 liter mennyiségű tenyészet-szűrletet készítünk. Tekintettel arra, hogy ez a törzs a BMG162-aF2 antibiotikum mellett olajban oldható antibiotikumokat is termel, az először említett antibiotikumot a következőképpen különítjük el, illetve tisztítjuk. Az említett tenyészet-szűrletet felvisszük egy olyan oszlopra, amely a Rohm and Haas Co. amerikai egyesült államokbeli cég által Amberlite IRC-50 márkanéven forgalmazott, Na+-formájú gyantából 310 ml-t tartalmaz. Ezután az oszlopot vízzel mossuk, majd a hatóanyagot 0,5 normál sósavoldattal eluáljuk. Az aktív frakciókat (vagyis azokat a frakciókat, amelyek antimikrobiális hatást mutatnak Bacillus subtilis PCI 219 törzzsel szemben) összegyűjtjük, majd a kapott 1480 ml oldatot először 1 normál nátrium-hidroxid-oldattal semlegesítjük és ezután 4,4 g aktívszénnel elegyítjük. A kapott keveréket 30 percen át állni hagyjuk, majd az aktívszént kiszűrjük. Az aktívszént 30 ml 50 térfogat%-os vizes acetonnal keverjük a hatóanyag 2,0 pH-értéken történő extrahálására. Ugyanezt az extrakciós műveletet még kétszer megismételjük. Az extraktumokat összegyűjtjük, majd csökkentett nyomáson 45 ml térfogatra betöményítjük. A koncentrátum pH-értékét 7,8-re beállítjuk, majd 45 ml n-butanolt keverünk hozzá és rázás közben extrahálásnak vetjük alá. A vizes fázist elválasztjuk, pH-értékét 5-re beállítjuk és vízzel elegyítjük, hogy 200 ml térfogatú oldatot kapjunk. Az oldatot fel visszük egy olyan oszlopra, amely a Pharmacia Fine Chemicals svéd cég által CM-Sephadex C 25 márkanevű gyantából 100 ml-t tartalmaz Na+-formában. Az oszlopot vízzel mossuk, majd gradiens eluálásnak vetjük alá 0 és 1,2 mól között lineárisan növekvő koncentrációjú nátrium-klorid-oldattal. Az eluálódott aktív frakciókat összegyűjtjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, fehér port kapva. Ezt azután metanollal extraháljuk, majd a metanolos oldatot felvisszük egy olyan oszlopra, amely az említett svéd cég Sephadex 2LH-20 márkanevű gyantájából 55 ml-t tartalmaz metanolban szuszpendálva. Az oszlopot metanollal eluáljuk. A kapott aktív frakciókat összegyűjtjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, 5,8 mg mennyiségben fehér színű viszkózus anyagot kapva. Ez az anyag ugyanolyan HNMR- és infravörös spektrumú, mint a BMG162aF2.
Claims (8)
1. Eljárás az új (I) képletű BMG162-aF2 antibiotikum és gyógyászatilag elfogadható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, a Bacillus laterosporus specieszhez tartozó törzset táptalajon tenyésztünk és az antibiotikumot elkülönítjük, adott esetben gyógyászatilag elfogadható só formájában.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy törzsként Bacillus laterösporus BMG162- 10 aF2 FERM-P 5230 (ATCC-31932) törzset vagy Bacillus laterosporus OUT 8139 törzset használunk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy táptalajként nitrogén- és szénforrást, to- 15 vábbá szervetlen sókat tartalmazó táptalajt használunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tenyésztést aerob körülmények között folyékony táptalajon 15 ’C és 40 ’C közötti hőmér- 20 sékleten, továbbá 5,0 és 8,2 közötti pH-értéken végezzük.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a BMG162-aF2 elkülönítését oszlopkromatografálással, aktív csoportként karboxilcso- 25 portot tartalmazó gyenge kationos ioncserélő gyantával végezzük.
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gyantán adszorbeálódott BMG162-aF2 5 antibiotikumot sav vagy só vizes oldatával eluáljuk.
7. Eljárás rákellenes hatású gyógyászati készítmény, előnyösen injekció, por, szemcsés készítmény, tabletta vagy kúp előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított BMG162-aF2 antibiotikumot vagy gyógyászatilag elfogadható sóját 0,1-96 súly% mennyiségben véve a gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és/vagy segédanyagokkal - ezeket 5-99,9 súly% mennyiségben véve - összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
8. A 7. igénypont szerinti eljárás injektálásra alkalmas oldat készítésére szolgáló készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy 0,1-95,0 súly% BMG162-aF2 antibiotikumot vagy gyógyászatilag elfogadható vízoldható sóját, 5,0-99,9 súly% cukrot, előnyösen mannitot és 0-94,9 súly% nátriumkloridot desztillált vízben oldunk, a kapott oldatot kisméretű tartályba töltjük és ott liofilizáljuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55123585A JPS5748957A (en) | 1980-09-08 | 1980-09-08 | Novel antibiotic bmg 162-af2, its preparation and carcinostatic agent comprising it as active ingredient |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU188077B true HU188077B (en) | 1986-03-28 |
Family
ID=14864227
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU812518A HU188077B (en) | 1980-09-08 | 1981-09-01 | Process for producing new bmg162-af2 of anibiotic activity |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4416899A (hu) |
| JP (1) | JPS5748957A (hu) |
| KR (1) | KR870001373B1 (hu) |
| AT (1) | AT376239B (hu) |
| AU (1) | AU523222B2 (hu) |
| BE (1) | BE890229A (hu) |
| CA (1) | CA1175763A (hu) |
| CH (1) | CH655498B (hu) |
| CS (1) | CS226036B2 (hu) |
| DE (1) | DE3134353C2 (hu) |
| DK (1) | DK157890C (hu) |
| ES (1) | ES505256A0 (hu) |
| FR (1) | FR2489819A1 (hu) |
| GB (1) | GB2084999B (hu) |
| HU (1) | HU188077B (hu) |
| IT (1) | IT1209896B (hu) |
| NL (1) | NL8104069A (hu) |
| SE (1) | SE450836B (hu) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57192347A (en) * | 1981-05-18 | 1982-11-26 | Microbial Chem Res Found | N-(4-(3-aminopropyl)aminobutyl)-2,2-dihydroxyethanamide and its synthesis |
| JPS57185254A (en) * | 1981-05-11 | 1982-11-15 | Microbial Chem Res Found | Novel carcinostatic substances and their preparation |
| JPS5862152A (ja) * | 1981-10-08 | 1983-04-13 | Microbial Chem Res Found | Ｎ−〔４−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２−（ω−グアニジノ脂肪酸アミド）−２−ヒドロキシエタンアミドおよびその誘導体ならびにその製造法 |
| JPS5942356A (ja) * | 1982-09-02 | 1984-03-08 | Microbial Chem Res Found | スパガリン関連化合物およびその製造法 |
| JPS60185758A (ja) * | 1984-03-02 | 1985-09-21 | Microbial Chem Res Found | フエニレン基を有するスパガリン関連化合物およびその製造法 |
| US4851446A (en) * | 1984-11-13 | 1989-07-25 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Immunosuppressing method |
| JPS61134312A (ja) * | 1984-12-06 | 1986-06-21 | Microbial Chem Res Found | 移植免疫抑制剤並びに抗アレルギ−剤 |
| JPS61165322A (ja) * | 1985-01-14 | 1986-07-26 | Microbial Chem Res Found | スパガリン類の注射用凍結乾燥製剤 |
| ES2039213T3 (es) * | 1986-04-04 | 1993-09-16 | Microbial Chemistry Research Foundation | Procedimiento para producir nuevos compuestos relacionados con espergualina. |
| JP2873340B2 (ja) * | 1988-04-29 | 1999-03-24 | 武田薬品工業株式会社 | 抗生物質ｔａｎ―１０５７，その製造法および用途 |
| JPH0776204B2 (ja) * | 1988-07-01 | 1995-08-16 | 寳酒造株式会社 | スパガリン類の精製法 |
| JPH0263181U (hu) * | 1988-10-27 | 1990-05-11 | ||
| US4990536A (en) * | 1989-04-03 | 1991-02-05 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Immunopotentiator and spergualin-related compound therefor |
| US5162581A (en) * | 1989-05-29 | 1992-11-10 | Takaru Shuzo Co., Ltd. | Crystalline deoxyspergualin, process for its preparation and suppository containing the same |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2998438A (en) * | 1958-03-31 | 1961-08-29 | Merck & Co Inc | Eulicin and process for production |
| US3617448A (en) * | 1967-10-03 | 1971-11-02 | Research Corp | Antibiotic and methods of producing and using it |
| US3743580A (en) * | 1970-04-28 | 1973-07-03 | Microbial Chem Res Found | Antibiotic,negamycin,and processes for the preparation thereof |
| US4163796A (en) * | 1977-12-14 | 1979-08-07 | The Dow Chemical Company | Stabilized aqueous amide antimicrobial composition |
| US4328229A (en) * | 1978-03-29 | 1982-05-04 | Taiho Pharmaceutical Company Limited | Anti-cancer composition for delivering 5-fluorouracil to cancer tissues |
| US4226808A (en) * | 1979-08-17 | 1980-10-07 | Schering Corporation | 1-Aryl-2-dihalogenodeuterioalkanoylamido-1,3-propanediol antibacterial agents |
-
1980
- 1980-09-08 JP JP55123585A patent/JPS5748957A/ja active Granted
-
1981
- 1981-08-26 GB GB8126019A patent/GB2084999B/en not_active Expired
- 1981-08-27 SE SE8105079A patent/SE450836B/sv not_active IP Right Cessation
- 1981-08-28 US US06/297,458 patent/US4416899A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-08-31 DE DE3134353A patent/DE3134353C2/de not_active Expired
- 1981-09-01 HU HU812518A patent/HU188077B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-09-02 NL NL8104069A patent/NL8104069A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-09-02 AU AU74892/81A patent/AU523222B2/en not_active Ceased
- 1981-09-03 CH CH567881A patent/CH655498B/de unknown
- 1981-09-04 KR KR1019810003293A patent/KR870001373B1/ko active
- 1981-09-04 BE BE0/205871A patent/BE890229A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-09-04 FR FR8116856A patent/FR2489819A1/fr active Granted
- 1981-09-04 CA CA000385239A patent/CA1175763A/en not_active Expired
- 1981-09-04 IT IT8149237A patent/IT1209896B/it active
- 1981-09-07 ES ES505256A patent/ES505256A0/es active Granted
- 1981-09-07 AT AT0386081A patent/AT376239B/de not_active IP Right Cessation
- 1981-09-07 CS CS816592A patent/CS226036B2/cs unknown
- 1981-09-07 DK DK394281A patent/DK157890C/da active
-
1982
- 1982-08-20 US US06/410,160 patent/US4474880A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL8104069A (nl) | 1982-04-01 |
| DK157890C (da) | 1990-07-23 |
| SE450836B (sv) | 1987-08-03 |
| US4416899A (en) | 1983-11-22 |
| FR2489819B1 (hu) | 1985-02-15 |
| CA1175763A (en) | 1984-10-09 |
| ES8302090A1 (es) | 1983-01-01 |
| FR2489819A1 (fr) | 1982-03-12 |
| GB2084999B (en) | 1984-06-13 |
| ES505256A0 (es) | 1983-01-01 |
| ATA386081A (de) | 1984-03-15 |
| IT1209896B (it) | 1989-08-30 |
| BE890229A (fr) | 1982-01-04 |
| SE8105079L (sv) | 1982-03-09 |
| KR870001373B1 (ko) | 1987-07-24 |
| AU523222B2 (en) | 1982-07-15 |
| JPS5748957A (en) | 1982-03-20 |
| CH655498B (hu) | 1986-04-30 |
| DK394281A (da) | 1982-03-09 |
| AT376239B (de) | 1984-10-25 |
| DK157890B (da) | 1990-02-26 |
| AU7489281A (en) | 1982-03-18 |
| DE3134353C2 (de) | 1986-03-13 |
| KR830007834A (ko) | 1983-11-07 |
| JPS6316380B2 (hu) | 1988-04-08 |
| US4474880A (en) | 1984-10-02 |
| CS226036B2 (en) | 1984-03-19 |
| GB2084999A (en) | 1982-04-21 |
| IT8149237A0 (it) | 1981-09-04 |
| DE3134353A1 (de) | 1982-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4322343A (en) | Pseudo-aglycone of actaplanin | |
| US4904585A (en) | Novel antibiotic NK84-0218 and process for the production of the same | |
| HU188077B (en) | Process for producing new bmg162-af2 of anibiotic activity | |
| US4229436A (en) | Antibiotic G-6302 | |
| US5428175A (en) | Physiologically active compound | |
| US4409210A (en) | Antibiotic compound | |
| US4296106A (en) | Istamycins and production thereof | |
| DE2730952C2 (de) | Antibiotikum Sporamycin, Verfahren zu seiner Herstellung und diese Verbindung enthaltendes Arzneimittel | |
| US4575489A (en) | Streptomyces albulus subsp. ochragerus subsp. nov. culture for making peptide | |
| US4420473A (en) | Antibiotic, MF266 substance and production thereof | |
| US3953293A (en) | Process for the preparation of xylostasin | |
| US4376778A (en) | Antibiotic substances and processes for production thereof | |
| EP0668358B1 (en) | Antibiotic WAP-8294A, method for preparing the same and antibacterial composition | |
| FR2517697A1 (fr) | Nouveaux aminoglycosides antibiotiques appeles saccharocines et leur production | |
| DE3003624A1 (de) | Antibiotica c-19393 s tief 2 und h tief 2 | |
| US4283389A (en) | Novel antibiotic, BN-183B substance | |
| US4108724A (en) | Method for preparing antibiotic P-2563 using Pseudomonas fluorescens | |
| US4380581A (en) | Istamycins and streptomyces culture for the production thereof | |
| US3928317A (en) | Antibiotic BM408{60 | |
| DE3341571A1 (de) | Neue antibiotika, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung als arzneimittel und zwischenprodukte zu ihrer herstellung | |
| EP0024206A2 (en) | Antitumor substance, composition comprising it and process for preparing said substance | |
| DE2326943C3 (de) | Xylostatsin Verfahren zu dessen Herstellung und Xylostatsin enthaltende Arzneimittel | |
| JPS6143036B2 (hu) | ||
| Kawaguchi et al. | GLYSPERIN, A NEW ANTIBIOTIC COMPLEX OF BACTERIAL ORIGIN I. PRODUCTION, ISOLATION AND PROPERTIES | |
| JPS6029476B2 (ja) | シトフアギンおよびその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |