HRP990093A2 - Derivatives of phenoxy acetic acid and of phenoxymethyl tetrazole having antitumor activity - Google Patents

Derivatives of phenoxy acetic acid and of phenoxymethyl tetrazole having antitumor activity Download PDF

Info

Publication number
HRP990093A2
HRP990093A2 HR98105726.8A HRP990093A HRP990093A2 HR P990093 A2 HRP990093 A2 HR P990093A2 HR P990093 A HRP990093 A HR P990093A HR P990093 A2 HRP990093 A2 HR P990093A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
group
alkyl
formula
compounds
ppm
Prior art date
Application number
HR98105726.8A
Other languages
English (en)
Inventor
Roberto Di Domenico
Silke Hansen
Brigitte Kaluza
Ernesto Menta
Ralf Schumacher
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of HRP990093A2 publication Critical patent/HRP990093A2/hr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/61—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups
    • C07C45/62—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by hydrogenation of carbon-to-carbon double or triple bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/61—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups
    • C07C45/67—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton
    • C07C45/68—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms
    • C07C45/72—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms by reaction of compounds containing >C = O groups with the same or other compounds containing >C = O groups
    • C07C45/74—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms by reaction of compounds containing >C = O groups with the same or other compounds containing >C = O groups combined with dehydration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C49/00—Ketones; Ketenes; Dimeric ketenes; Ketonic chelates
    • C07C49/76—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring
    • C07C49/82—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring containing hydroxy groups
    • C07C49/83—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring containing hydroxy groups polycyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C49/00—Ketones; Ketenes; Dimeric ketenes; Ketonic chelates
    • C07C49/76—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring
    • C07C49/82—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring containing hydroxy groups
    • C07C49/835—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring containing hydroxy groups having unsaturation outside an aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/76—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C07C59/90—Unsaturated compounds containing keto groups containing singly bound oxygen-containing groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/67—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of saturated acids
    • C07C69/708—Ethers
    • C07C69/712—Ethers the hydroxy group of the ester being etherified with a hydroxy compound having the hydroxy group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Predloženi izum odnosi se na derivate fenoksi octene kiseline i fenoksimetil tetrazola koji imaju anti-tumorska svojstva, koji djeluju kao antagonisti MDM2 aktivnosti. Točnije, ovi spojevi djeluju kao antagonisti interakcije MDM2 s p53, čime dovode do intracelularnog povišenja aktivnosti p53, i time omogućuju proteinu p53 da potiče apostozu u stanicama raka.
Proto-onkoprotein MDM2 (e. mouse double minute 2, humani ekvivalentni protein ponekad se označava kao HDM2) se neprirodno umnaža u brojnim humanim tumorima (Oliner et al. 1992, Nature 358, 80-83; Leach et al. 1993, Cancer Res. 54, 794-799; Ebert et al. 1994, Int. J. Oncol. 5, 1279-1284; Bueso-Ramos et al. 1993, Blood 82, 2617-2623; Chilosi et al. 1994, Blood 84, 4295-4300; Marchetti et al. 1995, Diagn. Mol. Pathol. 4, 93-97; McCann et al. 1995, Brit. J. Cancer 71, 981-985; Cordon-Cardo et al. 1994, Cancer Res. 54, 794-799). MDM2 s proteinom p53 oblikuje negativnu autoregulacijsku petlju vezanjem na njegovu N-terminalnu aktivacijsku domenu (Kussie et al. 1996, Science 274, 948-953), čime inhibira funkcije p53 (Momand et al. 1992, Cell 69, 1237-1245; Oliner et al. 1993, Nature 362, 857-860; Barak et al. 1992, EMBO J. 11, 2115-2121; Finlay 1993, Mol. Cell. Biol. 13, 301-306; Chen et al. 1996, Mol. Cell. Biol. 16, 2445-2452; Haupt et al. 1996, EMBO J. 15, 1596-1606) i potiče proteolitsku degradaciju p53 (Kubbutat et al. 1997, Nature 387, 299-302; Haupt et al. 1997, Nature 387, 296-299; Midgley et al. 1997, Oncogene 15, 1179-1189). Ometanje te autoregulacijske petlje izmedu MDM2 i p53 može se stoga primijeniti za povećanje koncentracije aktivnog p53 unutar stanica sisavaca. U tumorskim stanicama u mnogim je slučajevima ispražnjen aktivan p53, što dovodi do defektnog staničnog ciklusa i regulacije apoptoze. Medutim, samo dio tumorskih stanica nosi mutacijske defekte u p53. Stoga se u preostalom dijelu tumorskih stanica s divljim tipom p53 ravnotežnu koncentracije aktivnog p53 može povisiti ometanjem interakcije MDM2 i p53. Da se pokaže obnavljanje djelovanja p53 primijenjen je peptidni model antagonista MDM2-p53 interakcije in vitro (Bottger et al. 1997, J. Mol. Biol. 269, 744-756) i u stanicama sisavaca (Bottger et al. 1997, Current Biology 7, 860-869). K tome, pokazano je da inhibicija MDM2 ekspresije sa sintetičkim nukleinskim kiselinama dovodi do povišene razine aktivnosti p53 i time do povišene osjetljivosti stanične linije prema citostatičkim lijekovima (Chen et al. 1998, Proc. Natl. Acad. Sci USA 95, 195-200). Nedostatak funkcije p53 je najčešći molekulski defekt koji korelira s otporom tumora prema kemo- ili radioterapiji. Kao uzrok toj pojavi bila je umiješana MDM2 disregulacija (Kondo et al. 1995, Oncogene 10, 2001-2005; Blaydes et al. 1997, Oncogene 14, 1859-1868). Sredstva koja povisuju intracelularnu koncentraciju aktivnog p53 u tumorskim stanicama ometajući interakciju MDM2 s p53 mogu se stoga upotrijebiti terapeutski za senzibilizaciju tumorskih stanica na kemo - ili radioterapiju. U tipovima tumora koji su posebno osjetljivi prema povišenju funkcionalnog p53 (Hansen et al. 1995, Oncogene 11, 2535-2545), sredstva ovog tipa bit će dovoljna da izazovu njihovu vlastitu apoptozu.
Pored spomenutih učinaka preko povišenja intracelularne koncentracije aktivnog p53, MDM2 antagonisti mogu pokazati učinke na ciklus stanične regulacije u stanicama sisavaca, koje su neovisne o p53. MDM2 aktivira transkripciju E2F-ovisnih promotora, pri čemu MDM2 ulazi u interskciju s E2F na istoj strani vezanja i s homolognom epitopom kao p53 (Piette et al. 1997, Oncogene 15, 1001-1010; Brown et al. 1993, Mol. Cell. Biol. 13, 6849-6857). Zbog toga MDM2 općenito potiče proliferaciju pomažući S-fazni prolaz (Leveillard i Wasylyk 1997, J. Biol. Chem. 272, 30651-30661), pobuduje ekspresiju angiogenskih mitogena (Kondo et al. 1996, Oncogene 13, 1773-1779) i inhibira diferencijaciju (Fiddler et al. 1996, Mol. Cell. Biol. 16, 5048-5057). Inhibitori MDM2 će stoga biti terapeutski korisni kod MDM2 disreguliranih tumora neovisno o njihovom stanju p53.
Sada je pronađeno da su O-supstituirani derivati fenola koji nose kiselu jedinicu, povezanu na fenolni atom kisika preko alkilenskog lanca, učinkoviti antagonisti MDM2 djelovanja, posebno antagonisti interakcije MDM2 i p53.
U literaturi je opisano da derivati kalkona s karboksimetoksi supstituentom na jednom ili na dva fenilna prstena djeluju protiv čira (Pol. J. Chem., vol. 65(2-3), 369-75, 1991; DE 3537207, Biorex; Chem. Pharm. Bull., vol. 27(12), 2943-53, 1979; FR 2383157, Biorex; JP 54019948, Taisho), da djeluju baktericidno (Pharmazie, vol. 44(3), 190-1, 1989; Hacettepe Univ. Eczacilik Fak. Derg., vol. 11(1), 1-11, 1991), da imaju hipolipemsko djelovanje (FR 2639043; US 3,994,955, Searle; T’ai-wan Yao Hsueh Tsa Chih, vol. 27(1-2), 12-16, 1975), da djeluju diuretski (Eur. J. Med. Chem.-Chim. Ther., vol. 16(6), 551-5 i 556-62, 1981 i BE 639727), da djeluju pesticidno (CA 904291, Dow Chem.), ili na nižu razinu fubrinogena u krvi (DE 4327365, Boehringer Mannheim). Dosad nije bilo opisano antitumorsko djelovanje.
Prema stanju tehnike, opisani derivati kalkona s antitumorskim djelovanjem ne nose karboksimetoksi ili tetrazolmetoksi skupine na fenolnom prstenu i poznato je da djeluju kao antitubulinska sredstva (US 4,904,697, Merrell Dow).
Predmet predloženog izuma je upotreba spojeva formule
[image]
u kojoj
skupina -O-C(R1) (R2) - (CH2)p-A može biti u orto, meta ili para položaju;
A je odabran između -COOH, -COO-(C1-C4)alkila, -CN ili skupine formule
[image]
u kojoj R' predstavlja vodik ili (C1-C4) alkil;
ili je skupina A-(CH2) p-C (R1)(R2)- odabrana između fenila, benzila ili (indolil)metila, koji može biti supstituiran s R4 skupinama;
p je 0, 1 ili 2;
R1 i R2 su neovisno odabrani između vodika ili (C1-C8) -alkila ili oni zajedno s ugljikovim atomom na kojeg su vezani tvore (C3-C7) cikloalkilnu skupinu;
R4 predstavlja 0 do 2 supstituenta neovisno odabrana između klora, broma, joda, fluora, ravnog ili razgranatog (C1-C8) alkila, hidroksi, (C1-C4) alkoksi, (C1-C4) acilne skupine;
ili je skupina
[image]
u formuli (I) naftilna skupina koja sa svoje strane može biti supstituirana s R4 skupinama;
n je cijeli broj od 1 do 4;
m je 0 ili 1;
B je odabran između ravnog ili razgranatog C1-C10-alkila, -CO-C (R3) =CH-R, -CH=C (R3) -CO-Ar, -CO-CH (R3) -CH2-R ili -CO-CH(R3)=CH2-NR5R6 ako je m nula, ili je -CH=C(R3)-CO-Ar ako m predstavlja 1;
R je odabran između vodika, -Ar ili -CO-Ar;
R3 je vodik ili (C1-C8)alkilna skupina;
R5 i R6 neovisno predstavljaju (C1-C4) alkilnu skupinu ili oni zajedno s dušikovim atomom na kojeg su vezani tvore piperidino, piperazino, (C1-C4)alkilpiperazino, morfolino ili tiomorfolino skupinu:
Ar je fenilna skupina koje može biti nesupstituirana ili je supstituirana s 1 do 3 skupine neovisno odabrane između klora, broma, joda, fluora, ravnog ili razgranatog (C1-C8) alkila, hidroksi, (C1-C4) alkoksi, (C1-C4) acilne skupine,
njihovih stereoizomera ili njihovih soli s farmaceutski prihvatljivim kiselinama ili bazama za proizvodnju lijekova koji imaju MDM2 antagonističko djelovanje, ponajprije za liječenje MDM2 disreguliranih tumora, na primjer sarkoma.
Drugi predmet predloženog izuma su novi spojevi formule (I), definirani kao gore, pod uvjetom da ako je m nula, A je odabran između -COO- (C1-C4) alkila, -CN ili skupine formule
[image]
u kojoj R' predstavlja vodik ili (C1-C4) alkil; a ako je m nula i A je -COO- (C1-C4) alkilna skupina, B može biti samo skupina formule -CO-CH(R3)-CH2-NR5R6.
Prednosni spojevi formule (I) su oni u kojima skupina -O-C(R1) (R2) - (CH2)p-A stoji u para položaju.
Posebno prednosni spojevi formule (I) su oni u kojima R4 predstavlja 1 ili 2 atoma klora ili oni u kojima Ar je fenil supstituiran s 1 do 2 atoma klora.
Još veću prednost daje se spojevima formule (I) u kojima m je 0, R je vodik i A je tetrazolna skupina.
Najveću prednost daje se slijedećim spojevima formule
[image]
[image]
i
[image]
PRIPRAVLJANJE SPOJEVA PREMA IZUMU
Spojevi formule (I) u kojima m je 0 i B je ravna ili razgranata C1-C10-alkilna, -COCH3, -CO-C(R3)=CH-R ili -CH=C(R3)-CO-Ar skupina mogu se proizvesti počevši od intermedijata formule (II):
[image]
u kojoj R4 ima gornje značenje, a B' je ravna ili razgranata C1-C10-alkilna, -COCH3, -CO-C(R3)=CH-R ili -CH=C(R3)-CO-Ar skupina, reakcijom s kiselinskim esterom formule (III):
Hal-C(R1) (R2)-(CH2)p-COO-(C1-C4)alkil (III)
ili s nitrilom formule (III'):
Hal-C(R1) (R2)-(CH2)p-CN (III')
u kojoj R1, R2 i p imaju fornja značenja, a Hal je klor, brom ili jod, ili sa skupinom formule (III'' ):
aril-Hal (III'')
u kojoj Hal je atom klora, broma ili joda, a aril je odabran između benzila, (indolil)metila i fenila aktiviranog sa skupinom koja se nakon reakcije može lako odstraniti, kao što je krom(0)-trikarbonilna skupina.
Reakcija intermedijata formule (II) s intermedijatom formule (III) ili (III') može se provesti u otapalu, ponajprije u aprotonskom dipolarnom otapalu kao što je dimetilformamid ili dimetilsulfoksid, i u prisutnosti baze kao što je karbonat alkalijskog ili zemno alkalijskog metala. Reakcijska temperatura kreće se ponajprije od sobne temperature do 100°C.
Proizvod reakcije intermedijata formule (II), u kojoj B' predstavlja -COCH3, s intermedijatom formule (III) je već spoj formule (I) i hidrolizom esterske skupine može se pretvoriti u drugi spoj formule (I) u kojoj A predstavlja -COOH. Takova reakcija hidrolize može se provesti prednosno u prisutnosti baze kao što je karbonat ili hidroksid alkalijskog ili zemno alkalijskog karbonata u otapalu kao što je alkohol.
Proizvod reakcije intermedijata (II) u kojoj B' nije -COCH3 s intermedijatom (III') pretvori se u spoj formule (I) u kojoj A predstavlja tetrazolilnu skupinu kako je gore opisano, reakcijom s natrijevim azidom u otapalu kao što je dimetilformamid, i po potrebi alkiliranjem dušikovog atoma u položaju 1 ili 2 tetrazolnog prstena pomoću prikladnog alkilacijskog sredstva kao što je dimetilsulfat u prisutnosti baze.
Alternativno, spojevi formule (I) u kojoj A predstavlja tetrazolilnu skupinu kako je gore definirana, m je 0 i B je -COC (R3) =CH-R, gdje R3 predstavlja H, mogu se dobiti postupkom u tri stupnja, koji uključuju
a) reakciju gornjeg intermedijata (II), gdje B' predstavlja -COCH3, s intermedijatom formule (III');
b) reakciju spoja dobivenog u stupnju a) s natrijevim azidom u otapalu kao što je dimetilformamid, i po potrebi alkiliranje dušikovog atoma u položaju 1 ili 2 tetrazolnog prstena pomoću prikladnog alkilacijskog sredstva, kao dimetilsulfata u prisutnsoti baze; i
c) reakciju spoja dobivenog pod b) s aromatskim aldehidom R-CHO u inertnom otapalu i u prisutnosti baze kao hidroksida alkalijskog ili zemno alkalijskog metala pri temperaturama u području od sobne temperature do refluksa.
Alternativno spojevi formule (I) u kojoj A predstavlja tetrazolnu skupinu, m je 0 i B je -CO-C(R3)=CH2, tj. spojevi u kojima R predstavlja vodik, mogu se dobiti iz spojeva formule (II' )
[image]
u kojoj A predstavlja tetrazolinu skupinu opisanu kao gore, a R1, R2, R3, R4 i p imaju gornja značenja, reakcijom s paraformaldehidom. Reakcijom spoja formule II' s paraformaldehidom i hidrokloridnom soli amina formule HNR5R6, u kojoj R5 i R6 imaju gornja značenja, pod uvjetima Mannichove reakcije, i zatim obradom sa slabom bazom, kao što je hidrogenkarbonat alkalijskog ili zemno alkalijskog metala, dobiju se spojevi formule (I), u kojoj B' predstavlja -CO-CH(R3) -CH2-NR5NR6, kao hidrokloridne soli.
Spojevi formule (II), u kojoj B' predstavlja skupinu formule -COC(R3)=CH-R, gdje R predstavlja Ar, ili R predstavlja -CO-Ar, mogu se dobiti iz spojeva formule (IV):
[image]
reakcijom s aldehidom formule Ar-CHO ili Ar-CO-CHO u inertnom otapalu u prisutnosti baze kao što je hidroksid alkalijskog ili zemno alkalijskog metala pri temperaturi između sobne i temperature refluksa.
Analogno, spojevi formule (II) u kojoj B' predstavlja skupinu formule -CH=C(R3)-CO-Ar mogu se dobiti iz spojeva formule Ar-CO-CH2-R3 s aldehidom formule (IV ) :
[image]
Spojevi formula (IV), (IV’), II gdje B’ predstavlja C1-C10-alkil, Ar-CHO, Ar-CO-CHO i Ar-CO-CH2-R3 su poznati spojevi koji se mogu proizvesti u skladu s metodama koje su dobro poznate kemijskom stručnjaku, ili su to čak komercijalni proizvodi.
Spojevi formule (II' ) u kojoj A predstavlja tetrazolnu skupinu mogu se proizvesti iz spojeva formule (IV) reakcijom sa spojevima formule (III') i zatim s natrijevim azidom kako je gore prikazano.
Spojevi formule (I), u kojoj m je 0 i B je skupina -CO-CH(R3)-CH2-R, mogu se proizvesti iz spojeva formule (II), u kojoj B' predstavlja -CO-C(R3)=CHR katalitičkim hidrogeniranjem dvostruke veze i zatim reakcijom s intermedijatima formula (III) ili (III'), kako je gore pokazano. Spoj formule (I), dobiven reakcijom s intermedijatom (III'), može se po potrebi pretvoriti u drugi spoj formule I, u kojoj A predstavlja tetrazolilnu skupinu, reakcijom s natrijevim azidom, kako je gore prikazano.
Spojevi formule (I), u kojoj m je 1 i B je -CH=C(R3)CO-Ar, mogu se dobiti iz spojeva formule (V):
[image]
u kojoj p, n, R1, R2 i R4 imaju gornja značenja, a A' ima značenje dato za A, osim -COOH, reakcijom s intermedijatom formule (VI):
Ar-CO-C(R3)=CH-COOH (VI)
Spojevi u kojima B predstavlja -CO-C(R3)=CH-R ili -CO-CH (R3)-CH2-R, mogu se proizvesti na analogan način.
Takova reakcija provodi se pomoću aktivirane karboksilne skupine spojeva (VI), na primjer preko miješanog anhidrida ili kiselinskog klorida, ili u prisutnosti prikladnog kondenzacijskog sredstva kao što je dicikloheksil karbodiimid. Tako dobiveni spojevi se pretvore u druge spojeve formule (I) hidrolizom esterske skupine u bazičnim uvjetima ako A' predstavlja -COO-(C1-C4) alkil, ili reakcijom s azidom, po gore prikazanom postupku, ako A' predstavlja -CN.
Spojevi formule (V) mogu se proizvesti esterifikacijom odgovarajućih kiselina (u kojima A' je -COOH) u kiselim uvjetima, koje su sa svoje strane proizvedene u skladu s metodom opisanom u članku Synthesis, (1997), 778-782, koji je ovdje ugrađen kao referenca. Prikladni uvjeti za esterifikaciju mogu biti metanol u prisutnosti količine sumporne kiseline koja je dovoljna za pretvorbu amino skupine u sol i kataliziranje reakcije esterifikacije. Zatim se, obradom sa slabom bazom, može ponovno dobiti slobodnu amino skupinu.
Spojevi formule (VI) mogu se proizvesti sukladno metodi opisanoj u članku u Am. Soc., 70, 3359 (1948), koji je ovdje ugrađen kao referenca.
BIOLOŠKO DJELOVANJE SPOJEVA PREMA IZUMU
Spojevi ovog izuma ulaze u interakciju s proteinom MDM2, posebno humanim proteinom MDM2, i inhibiraju interakciju proteina MDM2 s drugim proteinima, posebno interakciju MDM2 s p53. MDM2 ima različite funkcije, od kojih je najvažnija kontrola aktivnosti p53 tijekom staničnog ciklusa (objavili Piette et al. 1997, Oncogene 15, 1001-1010). U svojoj amino-terminalnoj domeni MDM2 proteini tvore hidrofobni džep u koji pristaje peptidna epitopa prisutna na amino kraju peptida p53 ((Kussie et al. 1996, Science 274, 948-953). Ta interakcija između N kraja p53 i N-terminalne domene peptida MDM2 ključni je uvjet da MDM2 pokaže svoju kontrolu nad djelovanjem p53. Stoga spojevi koji se vežu na hidrofobni džep N-terminalne domene MDM2 djeluju kao antagonisti inhibicije i degradacije p53 posredovane s MDM2. Tim se mehanizmom može povisiti razinu aktivnosti p53, što ima za posljedicu, posebno, tumorske stanice osjetljive na indukciju apoptoze posredovane s p53 i zatvaranje staničnog ciklusa. Dosad je bilo dostupno samo nekoliko peptida i proteina koji su pokazivali mogućnost takovog načina intervencije (Bottger et al. 1997, J. Mol. Biol. 269, 744-756; Bottger et al. 1997, Current Biology 7, 860-869). Spojevi ovog izuma sada daju po prvi puta nisko molekulske tvari koje mogu prekinuti interakciju MMD2-p53.
Osim toga, spojevi ovog izuma mogu inhibirati interakciju MDM2 s N-terminalnom domenom drugih proteina koji imaju homologne interakcijske strane, kao što je E2F-1. Spojevi ovog izuma mogu stoga pokazati antiproliferativne ili senzibilizirajuće učinke na tumorske stanice, ovisno o p53 stanju tumorske stanice (primjer 15).
Nadalje, spojevi ovog izuma su posebno specifični za interakciju s MDM2. Unutar stanice sisavca postoji nekoliko proteina s hidrofobnim džepom sposobnim za prihvat spojeva ili hidrofobnih ostataka. Jedan primjer takovih proteina je glutation S-transferaza (GST) (Reinemer et al. 1992, J. Mol. Biol. 227, 214-226; Cameron et al. 1995, Structure 3, 717-727; McTigue et al. 1995, J. Mol. Biol. 246, 21-27). U okviru izuma opaženo je da određeni spojevi mogu stupiti u interakciju kako s MDM2, tako također i s GST. Jedan primjer takovog spoja je etakrinska kiselina, koja je bila prethodno opisana kao inhibitor GST-a, vežući se na hidrofobni džep tog proteina (Oakley et al. 1997, Biochemistry 36, 576-585; Ploemen et al. 1993, Xenobiotica 23, 913-923). U okviru izuma, iznenađujuće je opažena interakcija etakrinske kiseline s MDM2. Ovaj izum omogućuje stoga pokuse za analizu diferencijalnog djelovanja vezanja spojeva na MDM2, odnosno na GST. Ovaj izum daje nadalje tehnologiju za identifikaciju spojeva s visokim afinitetom vezanja za MDM2 i nižim ili prednosno odsutnim afinitetom vezanja za GST. Spojevi s visokim inhibicijskim djelovanjem prema interakciji MDM2-p53 i razmjerno niskom ili bez afiniteta za vezanje GST-a, posebno su prednosni spojevi za izazivanje terapeutskog antitumorskog učinka na osnovi inhibicije MDM2, jer su mnogi tumori izvor populacije tumorskih stanica preotpornih tijekom ciklusa kemoterapije, koje u mnogim slučajevima imaju povišeni enzim GST (Chen i Waxman 1994, Biochem. Pharmacol. 47, 1079-1087; Pickett i Lu 1989, Annu. Rev. Biochem. 58, 743-764). Time će, zbog prevelikog suparništva u interakciji spoja s MDM2 i s GST doći do iscrpljenja spoja sposobnog za inhibiciju MDM2. Spoj ovog tipa je na primjer LSM 83177 (spoj iz primjera 12, nazvan također i spoj E), za koji je u granicama ovog izuma nađeno da je jako senzibilizirajuće sredstvo za tumorske stanice, neovisno o njihovom stanju GST-a (primjer 15). Kemijska struktura spoja LSM 83177 je
[image]
LSM 83177
K tome, malo i nepostojeće GST inhibicijsko djelovanje je poželjno svojstvo terapeutski korisnih MDM2 antagonista, jer toksični sporedni učinci, kao diureza, hiperglikemija i hiperkalcemija, mogu biti povezani s inhibicijom GST-a (O' Dwyer et al. 1991, Cancer Res. 51, 6059-6065; Oakley et al. 1997, Biochemistry 36, 576-585).
Slijedeći primjeri 12-15 prikazuju kako se može odrediti biološko djelovanje spojeva predloženog izuma.
Spojevi predloženog izuma mogu se dati u dozama s rasponom od 0,01 do 0,4 g po kilogramu tjelesne težine dnevno. Da bi se dobili najbolji rezultati prednosni režim doziranja je onaj prema kojem se daje od pribl. 1 do pribl. 50 mg po kilogramu tjelesne težine dnevno, pri čemu se jedinične doze primjenjuju tako da se u 24 sata daje od pribl. 70 mg do pribl. 3,5 g aktivnog spoja pacijentu koji ima približno 70 kg tjelesne težine. Takav režim doziranja može se prilagoditi postizanju najboljeg terapeutskog učinka. Na primjer, doza se može dati tako da se uzme u obzir terapeutsko stanje pacijenta. Aktivan spoj se može dati oralno, intravenski, intramuskularno ili potkožnim putem.
Farmaceutski sastavi predloženog izuma sadrže terapeutski učinkovitu količinu najmanje jednog spoja prema izumu u mješavini s farmaceutski kompatibilnim pomoćnim tvarima.
Oralni sastavi općenito uključuju inertno sredstvo za razrjeđivanje ili jestivi nosač. Oni mogu biti u želatinskim kapsulama ili prešani u tablete. Drugi oblici za oralno davanje jesu kapsule, pilule, napici, suspenzije ili sirupi.
Tablete, pilule, kapsule i slični sastavi (pored aktivnog spoja) mogu sadržavati slijedeće sastojke: vezivo kao mikrokristaliničnu celulozu, tragakant ili želatinu; pomoćno sredstvo kao škrob ili laktozu; sredstvo za dezintegraciju kao alginsku kiselinu, primogel, kukuruzni škrob i slično; lubrikant kao magnezijev stearat; sredstvo za pospješivanje tečenja, kao koloidni silicijev dioksid, sredstvo za zaslađivanje, kao saharozu ili saharin, ili začinsko sredstvo kao miris mente, metil salicilat ili miris naranče. Kad se odabere sastav u obliku kapsula, on dodatno može sadržavati tekući nosač, kao masno ulje. Ostali sastavi mogu sadržavati različite materijale koji mijenjaju njegov fizički oblik, na primjer sredstva za prevlačenje (za tablete ili pilule) kao šećer ili šelak. Materijal upotrijebljen za proizvodnju sastava mora biti farmaceutski čist i netoksičan u upotrijebljenom doziranju.
Za proizvodnju farmaceutskih sastava za parenteralno davanje, aktivan sastojak može se nalaziti u otopini ili u suspenziji, koje osim toga sadrže slijedeće komponente: sterilno sredstvo za razrjeđivanje kao vodu za injekcije, otopinu soli, ulja, polietilen glikole, prolilen glikol ili druga sintetska otapala; antibakterijska sredstva kao benzil alkohol; antioksidante kao askorbinsku kiselinu ili natrijev bisulfit; sredstva za tvorbu helata kao etilen-diaminotetraoctenu kiselinu; pufere kao acetate, citrate ili fosfate i sredstva za podešavanje toničnosti otopine, kao natrijev klorid ili dekstrozu. Parenteralni pripravak može biti se nalaziti u ampuli, bočici koja sadrži jednokratnu dozu, u staklenim ili plastičnim vijalama.
Daljnji cilj predloženog izuma je osigurati sastave koji sadrže najmanje jedan spoj prema izumu u mješavini s farmaceutski prikladnim pomoćnim tvarima.
KEMIJSKI EKPERIMENTALNI DIO
Izum se u nastavku prikazuje pomoću slijedeći priprava i primjera.
Brojčano označavanje položaja kalkonskog prstena je slijedeće:
[image]
Priprava 1
4' -hidroksi-3-klorkalkon
K otopini od 1,36 g 4-hidroksiacetofenona u 14 ml etanola doda se pri sobnoj temperaturi 0,64 g litijevog hidroksid monohidrata i zatim se doda još 6 ml etanola da se olakša miješanje. Doda se 1,17 ml 3-klorbenzaldehida i zatim se reakcijsku smjesu refluktira 7 sati. Otapalo se ispari u vakuumu i ostatak se otopi u 15 ml vode. Otopinu se ohladi na 0°C i doda se 15 ml N solne kiseline. Izlučenu žutu krutu tvar se miješa 1 sat i zatim se odfiltrira i osuši preko noći u vakuumu. Kruta tvar kristalizira iz 2,5 ml 96%-tnog etanola, čime se dobije 0,41 g proizvoda, talište 163-165°C.
1H-NMR u d6-DMSO: 6,90 ppm (d, 2H); 7,4 ppm (m, H) ; 7,6 ppm (d, 1H); 7,8 ppm (m, 1H); 8 ppm (d, 1H); 8,05 ppm (m, 1H) ; 8,1 ppm (d, 2H); 10,45 ppm (s, 1H).
Priprava 2
3',4'-diklor-4-hidroksikalkon
K otopini 4-hidroksibenzaldehida (1,22 g) u 20 ml etanola doda se pri sobnoj temperaturi 0,63 g litijevog hidroksid monohidrata i 1,89 g 3,4-dikloracetofenona, zatim se refluktira 6 sati (nakon 4 sata izluči se tamno crvena kruta tvar) i miješa preko noći pri sobnoj temperaturi. Krutu tvar se odfiltrira, matičnicu se zgusne do suhog i zatim se ostatak otopi u mješavini etil acetata i 1N solne kiseline. Organsku fazu se odvoji, ispere sa zasićenom otopinom NaCl, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog. Ostatak (1,4 g) se ponovno otopi u 30 ml vode i doda se etil acetat i 1N solnu kiselinu dok se dobije kiseli pH. Nakon 30 minuta miješanja organska faza se odvoji, ispere se dva puta s otopinom soli, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog. Ostatak kristalizira iz etil acetata (30 ml) pod refluksom, čime se dobije 0,946 g proizvoda kao žute krute tvari, talište 198-199°C.
1H-NMR u d6-DMSO: 6,85 ppm (d, 2H) ; 7,7-7,9 ppm (m, 5H) ;8,1 ppm (dd, 1H); 8,4 ppm (d, 1H); 10,15 ppm (s, 1H).
Priprava 3
3,4-diklor-4' -hidroksikalkon
K otopini 4-hidroksiacetofenona (5,45 g) u 60 ml etanola doda se 3,36 g litijevog hidroksid monohidrata i 7 g 3,4-diklorbenzaldehida i zatim se refluktira 2 sata. Doda se još 3 g 3,4-diklorbenzaldehida i reakcijsku smjesu se
refluktira još 2 sata i drži preko noći pri sobnoj temperaturi. Krutu tvar se odvoji filtracijom i ponovno otopi u 50 ml vode 50 ml 1N solne kiseline. Izluči se žuta kruta tvar koju se miješa 1 sat, zatim se odfiltrira i suši nekoliko sati u vakuumu pri 40°C, čime se dobije 7,3 g proizvoda koji kristalizira iz mješavine etil acetata (90 ml) i izopropanola (5 ml). Dobiveno je 1,3 g proizvoda. Još 2,4 g dobivena su čišćenjem matičnice kromatografijom na silika gelu i zgušnjavanjem do suhog, talište 190-192°C.
1H-NMR u d6-DMSO: 6,9 ppm (d, 2H); 7,65 ppm (d, H); 7,7 ppm (d, 1H) ; 7,8 ppm (m, 1H); 8,05 ppm (d, 1H); 8,1 (d, 2H); 8,3 ppm (s, 1H); 10,4 ppm (s, IH).
Priprava 4
3,4-diklor-4/-hidroksi-dihidrokalkon
K otopini od 0,6 g 3,4-diklor-4'-hidroksikalkona u 10 ml etanola i 3 ml dioksana doda se 0,14 g 10%-tnog paladija na ugljenu i zatim se hidrogenira 1 sat i 15 minuta. Katalizator se odfiltrira kroz celitni filter i reakcijsku smjesu se zgusne do suhog. Ostatak kristalizira iz dietil etera čime se dobije 0,124 g proizvoda, talište 128-130°C. Još 0,221 g proizvoda dobiveno je čišćenjem matičnice kromatografijom (protočno sredstvo petrol eter/etil acetat 8:2) i zgušnjavanjem do suhog.
1H-NMR u d6-DMSO: 2,9 (t, 2H); 3,3 ppm (t, 2H); 6,8 ppm (d, 2H); 7,25 ppm (d, IH) ; 7,5-7,6 ppm (m, 2H); 7,9 ppm (d, 2H); 10,3 ppm (s, 1H).
Priprava 5
2,3-diklor-4-butiroilfenol
144 g 2,3-dikloranisola otopi se u 288 ml ugljikovog disulfida i doda se 92,3 g butiroil klorida. Uz miješanje i hlađenje ledom u brocima se doda 115 g aluminijevog triklorida, pri čemu se temperaturu drži ispod 25°C. Reakcijsku smjesu se pusti stajati 1 sat pri sobnoj temperaturi i zatim se grije 45 minuta pri 45°C. Doda se 280 ml n-heptana i 115 g aluminijevog triklorida, i reakcijsku smjesu se pusti reagirati preko noći. Zatim se ugljikov disulfid izdestilira i dokaplje se daljnjih 200 ml n-heptana. Krutu izlučenu tvar se grije uz miješanje 3 sata pri 80-90°C i miješa preko noći pri sobnoj temperaturi. Krutu tvar se skupi filtracijom, zatim se pomiješa sa 86 ml koncentrirane solne kiseline i s 1 l vode. Smjesu se ekstrahira tri puta s dietil eterom, organske faze se skupe i isperu sa 750 ml 5%-tne otopine natrijevog hidroksida. Zatim se ekstrakti pomiješaju s koncentriranom solnom kiselinom i izlučeno ulje se pusti kristalizirati uz hlađenje. Dobiveno je 114,7 g proizvoda.
Priprava 6
(2, 3-diklor-4-butiroilfenoksi) acetonitril
45 g 2,3-diklor-4-butiroilfenola pomiješa se s 26,7 g kalijevog karbonata i 16 g kloracetonitrila u 190 ml dimetilsulfoksida i smjesu se uz miješanje grije 2 sata i 30 minuta pri 85°C. Reakcijsku smjesu se zatim pogasi sa 490 g leda. Izlučeno ulje se ekstrahira četiri puta s dietil eteroin, zatim se organsku fazu pomiješa sa 400 ml 5%-tne otopine natrijevog hidroksida i ispere se s vodom. Organsku fazu se zatim osuši preko magnezijevog sulfata i zgusne do suhog, čime se dobije 45,2 g ulja, iz kojeg se, nakon destilacije pri 188°C i 0,8 mmg Hg, dobije 40 g proizvoda.
Priprava 7
5-[ ( (2, 3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metiljtetrazol
40 g (2,3-diklor-4-butiroilfenoksi) acetonitrila pomiješa se s 11,5 g natrijevog azida i 9,5 g amonijevog klorida u 294 ml dimetilformamida. Reakcijsku smjesu se grije uz miješanje 30 minuta pri 120-130°C i zatim se otapalo ispari pod smanjenim tlakom (pri 80°C). Ostatak se uz miješanje pomiješa s 1,3 l vode. Zatim izlučeno ulje kristalizira i skupi se filtracijom. Dobiveno je 44 g sirovog proizvoda koji kristalizira iz mješavine od 400 ml metanola i 200 ml vode. Dobiveno je 34,8 g proizvoda, talište 135-137°C.
Elementarna analiza (% izračunato/nađeno):
C 45,73/45,43; H 3,84/3,73; N 17/78/17,32; Cl 22,50/22,56.
Priprava 8
5-[ ( (2, 3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metil]-l-metiltetrazol i 5-[ ( (2, 3-diklor-4-butiroil) fenoksi)metil]-2-metiltetrazol
8,53 g 5-[((2,3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metil]-tetrazola otopi se u 120 ml vode i 480 ml acetona. Doda se 31,8 g natrijevog karbonata i zatim, kap po kap, 52,8 g dimetil sulfata i reakcijsku smjesu se pusti reagirati 20 sati. Zatim se smjesu prelije u vodu i organsko otapalo se ispari pod smanjenim tlakom pri 90°C. Ulje koje se izluči iz vodene faze kristalizira nakon hlađenja. Krutu tvar se odfiltrira i osuši, čime se dobije 7,93 g 1:1 mješavine naslovnih tetrazola. Krutu tvar se prekristalizira iz mješavine 1:1 benzen/cikloheksana, čime se dobije 2,55 g 5-[ ( (2, 3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metilj-1-metiltetrazola. Filtrat se zgusne do suhog i ostatak kristalizira iz cikloheksana, čime se dobije 3,5 g 5-[((2,3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metil]-2-metiltetrazola.
Priprava 9
4-(cijanometoksi) acetofenon
K otopini 4-hidroksiacetofenona (0,272 g) u DMF-u (8 ml, osušenog preko molekulskih sita), doda se 2-kloraceto-nitril (0,164 ml) i zatim kalijev karbonat (0,636 g) i dobivenu smjesu grije se 1 sat pri 60°C.
Kad se ohladi na sobnu temperaturu razrijedi se s vodom (40 ml), otopinu se namjesti na pH 4 s HCl i zatim se ekstrahira s etil acetatom. Organski sloj se ispere jednom s otopinom soli, osuši preko Na2SO4 i ispari do suhog, čime se dobije 4-(cijanometoksi)acetofenon kao tamna kruta tvar (0,354 g). Taj se materijal upotrebljava kao takav za slijedeći stupanj.
1H-NMR (CDC13): 2,58 ppm (s, 3H); 4,85 ppm (s, 2H); 7,05 ppm (m, 2H); 8,0 ppm (m, 2H).
Priprava 10
4-(5-tetrazolilmetoksi) acetofenon
Natrijev azid (0,165 g) i amonijev klorid (0,107 g) dodaju se k otopini 4-(cijanometoksi)acetofenona (0,349 g) u DMF-u (5 ml osušenog preko molekulskih sita) i dobivenu smjesu se grije 2,5 sata pri 70°C.
Smjesu se ohladi na 0°C i pomiješa s 1N HCl (50 ml) . Nakon miješanja 0,5 sata pri 0°C žućkasti talog se skupi filtracijom i osuši u vakuumu preko noći pri 40°C, čime se dobije 4-(5-tetrazolilmetoksi) acetofenon (0,32 g) kao smeđkasta kruta tvar. Taj se materijal upotrebljava kao takav za slijedeći stupanj.
1H-NMR (DMSO-D6): 2,45 ppm (s, koji se preklapa sa signalom DMSO); 5,6 ppm (s, 2H); 7,15 ppm (d, 2H); 8,0 ppm (d, 2H); 16,9 (široki s, 1H).
Primjer 1
4’-(etoksikarbonilmetoksi)-3-klorkalkon
K otopini 4' -hidroksi-3-klorkalkona (1,3 g) u 24 ml bezvodnog dimetilformamida pri sobnoj temperaturi i u atmosferi dušika doda se 1,73 g kalijevog karbonata i 0,84 ml etil bromacetata. Reakcijsku smjesu se grije 1 sat i 30 minuta pri 60°C, zatim se razrijedi sa 100 ml vode i ekstrahira s etil acetatom (3 x 20 ml). Organski ekstrakti se skupe i isperu s otopinom soli, zatim se organsku fazu osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog, čime se dobije ostatak (1,83 g) koji se očisti kromatografijom na silika gelu (protočno sredstvo petrol eter/etil acetat 7,5:2,5) i dobije se 0,66 g proizvoda, talište 68-70°C.
1H-NMR u CDC13: 1,3 ppm (t, 3H); 4,3 ppm (q, 2H); 4,75 ppm (s, 2H); 7,0 ppm (d, 2H); 7,34 ppm (m, 2H); 7,5 ppm (m, 1H); 7,55 (d, 1H); 7,6 ppm (m, 1H); 7,7 ppm (d, 1H); 8,0 (d, 2H).
Primjer 2
4' -(karboksimetoksi)-3-klorkalkon
K suspenziji od 0,345 g 4’ -(etoksikarbonilmetoksi)-3-klorkalkona u 4 ml etanola i 4 ml vode doda se pri sobnoj temperaturi 0,212 g natrijevog karbonata i drži se preko noći pri sobnoj temperaturi. Doda se daljnjih 1,5 ml etanola i 1,5 ml vode i reakcijsku smjesu se refluktira 1 sat, zatim se ohladi na sobnu temperaturu, pri čemu se izluči žućkasta kruta tvar. Krutu tvar se skupi filtracijom, ponovno se otopi u voda/etil acetatu i s 1N solnom kiselinom se zakiseli toliko da se dobije kiselu reakciju. Organsku fazu se odvoji, ispere s vodom i s otopinom soli, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog. Dobije se 0,29 g žućkaste krute tvari koja kristalizira iz etil acetata (20 ml), čime se dobije 0,12 g proizvoda, talište 180-181°C.
1H-NMR u d6-DMSO: 4,9 ppm (s, 2H); 7,05 ppm (d, 2H); 7,5 ppm (m, 2H); 7,7 ppm (d, 1H); 7,85 (m, 1H); 8,05 ppm (d, 1H); 8,1 ppm (s, 1H); 8,2 ppm (d, 2H); 13,1 ppm (s, 1H).
Primjer 3
3’,4' -diklor-4-(etoksikarbonilmetoksi) kalkon
K otopini 3',4'-diklor-4-hidroksikalkona (0,586 g) u 9 ml bezvodnog dimetilformamida pri sobnoj temperaturi i u atmosferi dušika doda se 0,69 g kalijevog karbonata i 0,334 g etil bromacetata. Reakcijsku smjesu se grije 3 sata pri 60°C, zatim se ohladi na sobnu temperaturu i prelije u mješavinu od 40 ml vode i 20 ml etil acetata. Smjesu se miješa dok se kruta tvar otopi, zatim se organsku fazu odvoji, ispere s etil acetatom, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog. Dobije se 0,737 g proizvoda kao žute krute tvari.
1H-NMR u d6-DMSO: 1,2 ppm (t, 3H); 4,2 ppm (q, 2H); 4,9 ppm (s, 2H); 7,0 ppm (d, 2H); 7,7-8,0 ppm (m, 5H); 8,15 ppm (dd, 1H); 8,4 ppm (d, 1H).
Primjer 4
3', 4' -diklor-4-(karboksimetoksi) kalkon
K suspenziji od 0,38 g 3',4' -diklor-4-(etoksikarbonil-metoksi)kalkona u 4 ml etanola i 4 ml vode doda se 0,212 g natrijevog karbonata i refluktira se 3 sata i 30 minuta. Zatim se reakcijsku smjesu pusti ohladiti na sobnu temperaturu i izlučenu krutu tvar se skupi filtracijom, zatim se podijeli između vode, doda se toliko 1N solne kiseline da se dobije kiselu reakciju, i etil acetata. Organsku fazu se odvoji, ispere s otopinom soli, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog. Ostatak kristalizira iz etil acetata (10 ml) , čime se dobije 0,158 g proizvoda, talište 203-206°C.
1H-NMR u d6-DMSO: 4,8 ppm (s, 2H); 7,0 ppm (d, 2H); 7,7-8/0 ppm (m, 5H); 8,1 ppm (dd, 1H); 8,4 ppm (d, 1H); 13,1 ppm (s, 1H).
Primjer 5
3,4-diklor-4'-(etoksikarbonilmetoksi) kalkon
K suspenziji 3,4-diklor-4'-hidroksikalkona (0,221 g) u 3,5 ml bezvodnog dimetilformamida doda se 0,125 ml etil bromacetata i 0,26 g kalijevog karbonata i zatim se grije 1 sat i 45 minuta pri 60°C. Reakcijsku smjesu se pusti ohladiti na sobnu temperaturu i razrijedi se s 20 ml vode i 20 ml etil acetata. Smjesu se zakiseli s 20 1N solnom kiselinom na pH 3-4, organsku fazu odvoji, ispere s otopinom soli, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog. Dobiveno je 0,268 g proizvoda kao žućkastog ulja.
1H-NMR u CDCl3: 1,3 ppm (t, 3H); 3,0 ppm (t, 2H); 3,2 ppm (t, 2H); 4,25 ppm (q, 2H); 4,6 ppm (s, 2H); 6,9 ppm (d, 2H); 7,05 ppm (dd, 1H); 7,3 ppm (m, 2H); 7,9 ppm (d, 2H).
Primjer 6
3,4-diklor-4' -(karboksimetoksi)-dihidrokalkon
K otopini 0,268 g 3,4-diklor-4'-(etoksikarbonil-metoksi) dihidrokalkona u 3 ml etanola i 3 ml vode doda se 0,15 g natrijevog karbonata i grije se 2 sata pri 70°C. Zatim se reakcijsku smjesu zgusne do suhog, doda se 4 ml vode i 2 ml 1N solne kiseline dok se dobije pH 2-3. Nakon 30 minuta miješanja, krutu tvar se skupi filtracijom, ispere s vodom na filtru i osuši u vakuumu preko noći pri 50°C. Dobiveno je 0,196 g proizvoda kao bijelog praha, talište 148-150°C.
1H-NMR u d6-DMSO: 2,9 ppm (t, 2H); 3,3 ppm (t, 2H); 4,7 ppm (s, 2H); 7,0 ppm (d, 2H); 7,25 ppm (dd, 1H); 7,6 ppm (m, 2H); 7,9 (d, 2H); 13,1 ppm (s, 1H).
Primjer 7
5-[ ((2,3-diklor-4-(2'-metilenbutiroil) fenoksi) metil] tetrazol
39,2 g 5-[((2,3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metil]-tetrazola, 4,33 g paraformaldehida i 11,2 g dimetilamin hidroklorida u 1 ml octene kiseline grije se 2 sata pri 80-90°C. Kad se ohladi na sobnu temperaturu, reakcijsku smjesu se podijeli između vode i dietil etera. Vodenu fazu se pomiješa s natrijevim hidrogenkarbonatom i izlučenu krutu tvar se skupi filtracijom. Krutu tvar se pomiješa s 220 ml vode i 220 ml 2N natrijevog hidroksida i smjesu se grije dok se potpuno otopi i zatim još jedan dodatni sat. Vodenu fazu se zakiseli i ekstrahira s dietil eterom. Organski ekstrakti se skupe, osuše preko magnezijevog sulfata i zgusnu do suhog. Ostatak (7,66 g) kristalizira iz 70 ml benzena. Dobiveno je 5,3 g proizvoda. Elementarna analiza (% izračunato/nađeno):
C 47,72/47,01; H 3,70/3,52; N 17,13/16,78; Cl 21,67/21,43.
Primjer 8
5-[((2,3-diklor-4- (2'-metilenbutiroil) fenoksi) metil]-1-metiltetrazol
9,5 g 5-[((2,3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metil]-1-metiltetrazola, 1,01 g paraformaldehida i 2,53 g dimetil-amin hidroklorida u 5 kapi octene kiseline grije se 2 sata pri 80-90°C. Smjesu se zgusne do suhog i prelije u 100 ml vode. Doda se 200 ml otopine natrijevog hidrogenkarbonata i smjesu se miješa 4 sata dok se izluči kruta tvar. Krutu tvar se odfiltrira čime se dobije 6,3 g sirovog materijala koji se prekristalizira iz 130 ml 1:1 mješavine benzena i cikloheksana. Dobiveno je 5,58 g proizvoda, talište 124-125°C.
Elementarna analiza (% izračunato/nađeno):
C 49,28/49,69; H 4,14/4,33; N 16,42/16,41; Cl 20,79/20,53.
Primjer 9
5-[((2,3-diklor-4- (2' -metilenbutiroil) fenoksi) metil]-2-tetrazol
8 g 5-[( (2,3-diklor-4-butiroil) fenoksi) metil]-2-metil-tetrazola, 0,89 g paraformaldehida i 2,29 g dimetilamin hidroklorida u 4 kapi octene kiseline grije se 2 sata pri 80-90°C. Zatim se smjesu zgusne do suhog i razrijedi s vodom. Izlučenu krutu tvar se skupi filtracijom. Filtrat se pomiješa s otopinom natrijevog hidrogenkarbonata i grije na vodenoj kupelji. Nastalu krutu tvar se skupi filtracijom, čime se dobije 7,76 g ostatka koji kristalizira iz 400 ml cikloheksana. Dobiveno je 4,16 g proizvoda.
Elementarna analiza (% izračunato/nađeno):
C 49,28/49,11; H 4,14/4,55; N 16,42/16,13; Cl 20,79/20,54.
Primjer 10
Etil 2-(4-(2-(3-(4-klorbenzoil) akriloilamino) etil) fenoksi)-2-metilpropionat (spoj D)
K otopini od 10,3 g p-(4-klorbenzoil) akrilne kiseline u 100 ml tetrahidrofurana doda se 7,02 ml trietilamina i ohladi se na -15°C. Kap po kap doda se 5,25 ml etil klor-formata i reakcijsku smjesu se miješa 15 minuta. U reakcijsku smjesu dokaplje se otopinu od 12,6 g etil 2-(4-(2-aminoetil)fenoksi)-2-metilpropionata u 20 ml tetrahidro-furana, koju se zatim drži 30 minuta pri -15°C, 2 sata i 30 minuta pri 0°C i preko noći pri sobnoj temperaturi. Smjesu se zgusne do suhog i ponovno otopi u dietil eteru. Organsku fazu se ispere s 2N solnom kiselinom, zatim s 2N natrijevim hidroksidom i konačno s vodom, zatim se osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog. Iz ostatka, nakon kristalizacije iz malo etera, dobije se 10 g proizvoda, talište 76-77°C.
Elementarna analiza (% izračunato/nađeno) :
C 64,94/64,77; H 5,90/5,59; N 3,15/3,14; Cl 7,98/8,12.
Primjer 11
2-(4-(2-(3-(4-klorbenzoil) akriloilamino) etil) fenoksi)-2-metilpropionska kiselina
20 g etil 2-(4-(2-(3-(4-klorbenzoil)akriloilamino)-etil)fenoksi)-2-metilpropionata otopi se u 70 ml metanola i doda se 100 ml 1N otopine kalijevog hidroksida. Miješanje se nastavi 3 sata uz grijanje pri 45°C. Kad se ohladi na sobnu temperaturu smjesu se zgusne do suhog, ponovno se otopi u dietil eteru i pomiješa s 1N solnom kiselinom. Organsku fazu se odvoji, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog, čime dobije 8 g proizvoda kao smeđe amorfne krute tvari.
Primjer 12
3,4-diklor-4'-(karboksimetoksi) kalkon (spoj E ili LSM 83177)
Otopinu 3,4-diklor-4'-hidroksikalkona (0,586 g)(priprava 3) u 9 ml bezvodnog dimetilformamida pomiješa se pri sobnoj temperaturi i u atmosferi dušika s 0,69 g kalijevog karbonata i s 0,334 g etil bromacetata. Reakcijsku smjesu se grije 3 sata pri 60°C, zatim se ohladi na sobnu temperaturu i prelije u mješavinu od 40 ml vode i 20 ml etil acetata. Smjesu se miješa dok se kruta tvar potpuno otopi, zatim se organsku fazu odvoji, ispere s etil acetatom, osuši preko natrijevog sulfata i zgusne do suhog, čime se dobije 3,4-diklor-4'-(etoksikarbonilmetoksi) kalkon. 3,4-diklor-4'-(etoksikarbonilmetoksi) kalkon se saponificira analogno primjeru 4 u 3,4-diklor-4''-(karboksimetoksi)-kalkon.
Primjer 12A
3,4-diklor-4' -(5-tetrazolilmetoksi) kalkon (spoj F)
U atmosferi dušika k miješanoj suspenziji 4-(4-tetrazolilmetiloksi) acetofenona (0,15 g) u etanolu (2 ml) doda se litijev hidroksid hidrat (0,059 g) i zatim se doda 3,4-diklorbenzaldehid (0,123 g). Dobivenu smjesu grije se 2 sata pod refluksom. Kad se ohladi na sobnu temperaturu talog se odfiltrira i ponovno suspendira u vodi (2 ml). Suspenziju se namjesti na kiseli pH dodatkom 1N HCl i miješa se dva sata. Izlučenu krutu tvar se odvoji filtracijom i prekristalizira iz MeOH, čime se dobije 3,4-diklor-4'-(5-tetrazolilmetoksi) kalkon kao žuti prah (117 mg). Talište >230°C.
1H-NMR (DMSO-D6) : 5,45 ppm (s, 2H) ; 7,25 ppm (d, 2H); 7,65 ppm (d, 1H); 7,78 ppm (m, 1H); 7,88 ppm (m, 1H); 8,10 ppm (d, 1H); 8,20 ppm (d, 2H); 8,35 ppm (m, 1H).
BIOLOŠKI EKSPERIMENTALNI DIO
Primjer 13
Priprava MDM2
Fragment DNA koji kodira humane MDM2 amino kiseline 1-118 dobiven je pomoću PCR i umetnut u modificirani plazmid vektor (pQE40: QIAGEN Inc., Chatsworth CA, SAD) pod kontrolom T5 promotora prikladnog za ekspresiju u E. coli u kombinaciji s pUBS 520 represorom (Brinkmann et al., 1989, Gene, 85, 109-114). Stanice BL21 (E. coli) rasle su u mediju LB pri 37°C i inducirane za ekspresiju dodatkom 1 mM IPTG, zatim >15 sati za akumulaciju proteina MDM2. Stanice su pobrane, otkinute pomoću Frenchove preše i netopivi MDM2 protein pripravljen je po standardnom protokolu. Pripadna MDM2 tijela su zatim solubilizirana i zatim ponovno nabrana u 100 mM Tris, pH 7; 1 mM EDTA; 10 mM DTT (prema Rudolph et al. 1997, Protein Function; A practical approach, 2. dio, IRL Press, 57-99), čime se tipično dobije MDM2 pripravak čistoće >80% prikladan za analizu spojeva. Daljnje čišćenje provedeno je standardnim krornatografskim postupkom (kromatografija hidrofobne interakcije). Dobiven je dulji fragment MDM2 l-213aa koji je očišćen analogno opisanom protokolu.
Primjer 14
BIACORE analiza interakcije između MDM2 i p53
Da bi se brojčano utvrdio učinak odabranih spojeva na svojstva p53 u smislu vezanja proteina MDM2, provedena su biosenzorska mjerenja upotrebom BIACORE-a 2000. BIOCORE je biosentorski sistem kojeg isporučuje tvrtka BIACORE AB. Tehnologija tog biološkog senzora temelji se na optičkoj pojavi rezonancije na površini plazmona (e. surface plasmon resonance, SRP) , koja detektira promjene indeksa refrakcije otopine blizu površine senzorskog čipa. Indeks refrakcije izravno korelira s koncentracijom mase u sloju i povisuje se kad se analit veže na površinu imobiliziranog liganda. Pokusi su provedeni pod neprekidnim uvjetima protoka. SPR odgovor izražen u jedinicama rezonancije (e. resonance units, RU) neprekidno je zapisivan kao funkcija vremena i prikazan u senzogramu. Kad je interakcija potpuna, površina se može regenerirati upotrebom otopina koje odstranjuju vezani analit bez štetnog djelovanja na aktivnost vezanog liganda. N-terminalni biotilinirani peptid (5μM u puferu PBST), koji odgovara amino kiselinama 19 do 32 divljeg tipa humanog p53, dobiven od Genosys Biotechnologies (Cambridge), bio je hvatan pri brzini protoka 5 μl/min tijekom 6 minuta na čipu SA-senzora (čip senzora prethodno je imuniziran sa streptavidinom, BIACORE AB) . 40 μl MDM2 1-213 (100 nM u PBST-u) pomiješano je sa 40 μl uzorka (40 μM u PBST-u s 2% DMSO). Nakon 15 minuta inkubacije pri 10°C, 30 μl mješavine ubrizgano je na senzorski čip s malom brzinom protoka od 10 μl/min. Nakon dodatne 4 minute površina je isprana s puferom PBST i signal je zapisan. Inhibicijski učinci se mogu ocijeniti usporedbom signala uzorka sa signalom pufera. Površina senzora je regenerirana ispiranjem sa 100 mM HCl i 100 mM H3PO4. Slika 1 prikazuje inhibicijske učinke odabranih spojeva na interakciju MDM2 s p53 deriviranim peptidom kao relativne jedinice.
Primjer 15
Spektrofotometrijska analiza GST djelovanja
Humane stanične linije, kao stanična linija HT 29 humanog karcinoma debelog crijeva, rasle su kao monoslojevi pri 37°C u 5% CO2 u DMEM-u nadopunjenom s antibioticima i 10%-tnim fetalnim telećim serumom i propuštane su dva puta tjedno. GST djelovanje određeno je u citosolu prema Habig et al. (Habig, W.H., Pabst, M.J. & Jakoby, W.B., J. Biol. Chem. 249, 7130-7139, 1974) upotrebom l-klor-2,4-dinitro-benzena (CDNB) i glutationa. GST katalizira konjugaciju CDNB-a s glutationom i dobije se proizvod CDNB-glutation s jakom molarnom apsorpcijom pri 340 nm. Promjena apsorpcije promatrana je 5 minuta.
Skupljeno je 1-106 stanica i ispirane su jednom 10 minuta s ledeno hladnom otopinom fosfatnog pufera pri 40C i pri 1000 okr./min. Stanični talog je ponovno suspendiran u 200 μl ledeno hladnog fosfatnog slanog pufera i soniciran 2 minute na ledu. Zatim se sonikat centrifugiran 15 minuta pri 4°C i pri 11750 g u centrifugi Eppendorf i supernatant je ispitan s obzirom na GST aktivnost. Svojstveni inhibicijski učinak etakrinske kiseline (EA) i odabranih MDM2 antagonista na katalitičko djelovanje HT29 citosolnog GST djelovanja ispitano je dodatkom lijekova izravno u stanične esktrakte prije dodatka glutationa.
Tablica 1 prikazuje inhibicijski učinak EA i LSM 83177 na GST aktivnost u ekstraktima HT29 stanica.
Primjer 16
Biološki pokus za radiosenzibilizaciju aktivnosti MDM2 antagonističkih spojeva
Humane tumorske stanične linije koje su sadržavale divlji tip p53 i niske razine GST-a, kao MCF7 (karcinom dojke), ili mutant p53 i visoki sadržaj GST-a, kao MCF7 ADR (adriamicin-rezistentan karcinom dojke) uzgajane su u mediju RPMI nadopunjenom s 10% tetalnog telećeg seruma do polu-konfluentnog stupnja.
Da bi se utvrdilo radiosenzibilizirajuće djelovanje odabranih spojeva na tim stanicama utvrdena je minimalna toksična doza kao 2Gy (gray: J/kg) s izvorom 137Cs pri sobnoj temperaturi. Nakon ozračivanja jednoslojnih stanica u fazi eksponencijalnog rasta s 2 Gy, stanice su inkubirane 2-6 sati s različitim koncentracijama odabranih spojeva. Stanice su tripsinizirane i usađene u odgovarajućim razređenjima u pločice sa po 6 jamica. Preživjele stanice su tripsinizirane nakon 12-13 dana i broj stanica utvrđen je obojenjem s tripan plavim za žive/mrtve stanice. Protokol je utvrđen prema Khil et al., 1996, Int. J. Rad. Oncol. Biol. Phys. 34, 375-380.
Tablica 2 prikazuje različito djelovanje u smislu radiosebzibilizacije dobiveno s odabranim spojevima na staničnim linijama MCF-7 s niskim i s visokim sadržajem GST-a.
U stanicama MCF-7 može se vidjeti radiosebzibilizacija obaju spojeva, etakrinske kiseline i spoja LMS 83177: ozračenosti s lijekom povišena je za faktor 1,5 kad se lijek inkubira 2 sata na stanicama, a za faktor 2 kad se inkubira 6 sati.
Radiosenzibilizirajuće djelovanje neovisno o sadržaju GST-a ciljnih stanica može se vidjeti samo na MDM2 specifičnim spojevima, kao što je LSM 83177. Specifično ciljanje MDM2 dovodi do radiosenzibilizacije u stanicama MSF-7 ADR zbog specifične interakcije MDM2 s E2F i Rb, usprkos činjenici da se mutant p53 ne može aktivirati u toj staničnoj liniji. Etakrinska kiselina ne posreduje nikakvu radiosenzibilizaciju u stanicama MCF-7 ADR.
Tablica 1:
Inhibicija GST djelovanja u stanicama HT29 pomoću potencijalnih inhibicijskih spojeva
[image] Tablica 2
Spojevi su bili inkubirani pri krajnjoj koncentraciji od 20 μg/ml s obzirom na stanice.
A Stanice MCF-7
[image]
B MCF-7 ADR
[image]

Claims (10)

1. Upotreba spojeva formule (I) [image] naznačenih time, da skupina -O-C (R1) (R2) - (CH2) p-A može biti u orto, meta ili para položaju; A je odabran između -COOH, -COO- (C1-C4) alkila, -CN ili skupine formule [image] u kojoj R' predstavlja vodik ili (C1-C4) alkil; ili je skupina A-(CH2) p-C (R1)(R2)- odabrana između fenila, benzila ili (indolil) metila, koji može biti supstituiran s R4 skupinama; p je 0, 1 ili 2; R1 i R2 su neovisno odabrani između vodika ili (C1-C8) -alkila ili oni zajedno s ugljikovim atomom na kojeg su vezani tvore (C3-C7) cikloalkilnu skupinu; R4 predstavlja 0 do 2 supstituenta neovisno odabrana između klora, broma, joda, fluora, ravnog ili razgranatog (C1-C8) alkila, hidroksi, (C1-C4) alkoksi, (C1-C4) acilne skupine; ili je skupina [image] u formuli (I) naftilna skupina koja sa svoje strane može biti supstituirana s R4 skupinama; n je cijeli broj od 1 do 4; m je 0 ili 1; B je odabran između ravnog ili razgranatog C1-C10-alkila, -CO-C(R3)=CH-R, -CH=C(R3)-CO-Ar, -CO-CH(R3)-CH2-R ili -CO-CH(R3)=CH2-NR5R6 ako je m nula, ili je -CH=C(R3)-CO-Ar ako m predstavlja 1; R je odabran između vodika, -Ar ili -CO-Ar; R3 je vodik ili (C1-C8)alkilna skupina; R5 i R6 neovisno predstavljaju (C1-C4) alkilnu skupinu ili oni zajedno s dušikovim atomom na kojeg su vezani tvore piperidino, piperazino, (C1-C4) alkilpiperazino, morfolino ili tiomorfolino skupinu: Ar je fenilna skupina koje može biti nesupstituirana ili je supstituirana s 1 do 3 skupine neovisno odabrane između klora, broma, joda, fluora, ravnog ili razgranatog (C1-C8) alkila, hidroksi, (C1-C4) alkoksi, (C1-C4) acilne skupine, njihovih stereoizomera ili njihovih soli s farmaceutski prihvatljivim kiselinama ili bazama za proizvodnju lijekova koji imaju MDM2 antagonističko djelovanje.
2. Upotreba prema zahtjevu 1, naznačena time, da se ovi spojevi koriste za liječenje tumora.
3. Upotreba prema zahtjevu 2, naznačena time, da je tumor koji se liječi sarkom.
4. Spojevi formule (I) [image] naznačeni time, da skupina -O-C(R1)(R2)-(CH2)p-A može biti u orto, meta ili para položaju; A je odabran između -COOH, -COO- (C1-C4) alkila, -CN ili skupine formule [image] u kojoj R' predstavlja vodik ili (C1-C4) alkil; ili je skupina A- (CH2) p-C (R1) (R2)- odabrana između fenila, benzila ili (indolil)metila, koji može biti supstituiran s R4 skupinama; p je 0, 1 ili 2; R1 i R2 su neovisno odabrani izmedu vodika ili (C1-C8) -alkila ili oni zajedno s ugljikovim atomom na kojeg su vezani tvore (C3-C7) cikloalkilnu skupinu; R4 predstavlja 0 do 2 supstituenta neovisno odabrana izmedu klora, broma, joda, fluora, ravnog ili razgranatog (C1-C8) alkila, hidroksi, (C1-C4) alkoksi, (C1-C4) acilne skupine; ili je skupina [image] u formuli (I) naftilna skupina koja sa svoje strane može biti supstituirana s R4 skupinama; n je cijeli broj od 1 do 4; m je 0 ili 1; B je odabran između ravnog ili razgranatog C1-C10-alkila, -CO-C(R3)=CH-R, -CH=C(R3)-CO-Ar, -CO-CH (R3)-CH2-R ili -CO-CH (R3)=CH2-NR5R6 ako je m nula, ili je -CH=C(R3)-CO-Ar ako m predstavlja 1; R je odabran izmedu vodika, -Ar ili -CO-Ar; R3 je vodik ili (C1-C8) alkilna skupina; R5 i R6 neovisno predstavljaju (C1-C4 alkilnu skupinu ili oni zajedno s dušikovim atomom na kojeg su vezani tvore piperidino, piperazino, (C1-C4) alkilpiperazino, morfolino ili tiomorfolino skupinu: Ar je fenilna skupina koje može biti nesupstituirana ili je supstituirana s 1 do 3 skupine neovisno odabrane između klora, broma, joda, fluora, ravnog ili razgranatog (C1-C8) alkila, hidroksi, (C1-C4) alkoksi, (C1-C4) acilne skupine, njihovi stereoizomeri ili njihove soli s farmaceutski prihvatljivim kiselinama ili bazama, pod uvjetom da, ako je m nula, A je odabran između -COO-(C1-C4) alkila, -CN ili skupine formule [image] u kojoj R' predstavlja vodik ili (C1-C4) alkil; a ako m predstavlja nulu i A je -COO-(C1-C4)alkilna skupina, tada B može biti samo skupina formule -CO-CH(R3)-CH2-NR5RG.
5. Spojevi prema zahtjevu 4, naznačeni time, da m je nula, R je vodik i A je tetrazolna skupina.
6. Spojevi prema zahtjevu 4, naznačeni time, da Ar predstavlja fenil supstituiran s 1 do 2 atoma klora.
7. Spojevi prema bilo kojem zahtjevu od 4 do 6, naznačeni time, da R4 predstavlja 1 do 2 atoma klora.
8. Spojevi prema bilo kojem zahtjevu od 4 do 7, naznačeni time, da skupina -O-C(R1) R(2)-(CH2)p-A stoji u para položaju.
9. Spojevi, naznačeni time, da imaju jednu od slijedećih formula [image] i [image]
10. Farmaceutski sastavi, naznačeni time, da sadrže najmanje jedan spoj prema bilo kojem zahtjevu od 4 do 9 u mješavini s farmaceutski prikladnim pomoćnim tvarima.
HR98105726.8A 1998-03-30 1999-03-29 Derivatives of phenoxy acetic acid and of phenoxymethyl tetrazole having antitumor activity HRP990093A2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP98105726A EP0947511A1 (en) 1998-03-30 1998-03-30 Derivatives of phenoxy acetic acid and of phenoxymethyl tetrazole having antitumor activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP990093A2 true HRP990093A2 (en) 2000-02-29

Family

ID=8231677

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HR98105726.8A HRP990093A2 (en) 1998-03-30 1999-03-29 Derivatives of phenoxy acetic acid and of phenoxymethyl tetrazole having antitumor activity

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0947511A1 (hr)
JP (1) JP2000063340A (hr)
KR (1) KR19990078366A (hr)
CN (1) CN1232028A (hr)
AR (1) AR018170A1 (hr)
AU (1) AU2250299A (hr)
BR (1) BR9901208A (hr)
CA (1) CA2267047A1 (hr)
HR (1) HRP990093A2 (hr)
HU (1) HUP9900804A3 (hr)
ID (1) ID22335A (hr)
IL (1) IL129191A0 (hr)
MA (1) MA26616A1 (hr)
NO (1) NO991526L (hr)
NZ (1) NZ334874A (hr)
PE (1) PE20000341A1 (hr)
PL (1) PL332273A1 (hr)
SG (1) SG81972A1 (hr)
TR (1) TR199900719A2 (hr)
ZA (1) ZA992407B (hr)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2841784B1 (fr) * 2002-07-08 2007-03-02 Composition a base de derives de 1,3-diphenylprop-2en-1-one substitues, preparation et utilisations
FR2841900B1 (fr) 2002-07-08 2007-03-02 Genfit S A Nouveaux derives de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one substitues, preparation et utilisations
FR2857361B1 (fr) * 2003-07-08 2005-09-09 Genfit S A PREPARATION DE DERIVES DE 1,3-DIPHENYPROP-2-¼n-1-one
WO2005063774A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-14 Johns Hopkins University Boronic acid aryl analogs
JP2007297283A (ja) * 2004-07-28 2007-11-15 Santen Pharmaceut Co Ltd 新規桂皮酸関連化合物
SG174107A1 (en) * 2006-08-30 2011-09-29 Univ Michigan New small molecule inhibitors of mdm2 and the uses thereof
DE602007006519D1 (de) 2006-09-21 2010-06-24 Hoffmann La Roche Oxindolderivate als antikrebsmittel
US7638548B2 (en) 2006-11-09 2009-12-29 Hoffmann-La Roche Inc. Spiroindolinone derivatives
US7553833B2 (en) 2007-05-17 2009-06-30 Hoffmann-La Roche Inc. 3,3-spiroindolinone derivatives
US7928233B2 (en) 2009-02-10 2011-04-19 Hoffmann-La Roche Inc. Spiroindolinone pyridine derivatives
US8217051B2 (en) 2009-02-17 2012-07-10 Hoffmann-La Roche Inc. Spiroindolinone derivatives
US8076482B2 (en) 2009-04-23 2011-12-13 Hoffmann-La Roche Inc. 3,3′-spiroindolinone derivatives
US8017607B2 (en) 2009-10-14 2011-09-13 Hoffmann-La Roche Inc. N-substituted-pyrrolidines as inhibitors of MDM2-P-53 interactions
US8088815B2 (en) 2009-12-02 2012-01-03 Hoffman-La Roche Inc. Spiroindolinone pyrrolidines
US8288431B2 (en) 2010-02-17 2012-10-16 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted spiroindolinones
US8217044B2 (en) 2010-04-28 2012-07-10 Hoffmann-La Roche Inc. Spiroindolinone pyrrolidines

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3255241A (en) * 1961-01-19 1966-06-07 Merck & Co Inc (2-alkylidene acyl)phenoxy-and (2-alkylidene acyl)phenylmercaptocarboxylic acids
BE639727A (hr) * 1962-11-13
US3251064A (en) * 1962-11-13 1966-05-10 Everett M Schultz beta-aminoacylphenoxy-and beta-aminoacylphenylmercapto-derivatives of monocarboxylicacids
US3994955A (en) * 1975-01-20 1976-11-30 G. D. Searle & Co. Substituted phenoxydialkylacetic acids and esters
US4904697A (en) * 1987-04-09 1990-02-27 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Controlling the growth of certain tumor tissue with chalcone derivatives
JPH0624975A (ja) * 1992-05-12 1994-02-01 Dainippon Ink & Chem Inc 制癌活性増強剤
DE4327365A1 (de) * 1993-08-14 1995-02-16 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von Phenolen und Phenolderivaten als Arzneimittel mit fibrinogensenkender Wirkung

Also Published As

Publication number Publication date
BR9901208A (pt) 2000-04-25
PE20000341A1 (es) 2000-05-08
TR199900719A2 (xx) 1999-10-21
ID22335A (id) 1999-09-30
JP2000063340A (ja) 2000-02-29
SG81972A1 (en) 2001-07-24
CA2267047A1 (en) 1999-09-30
AR018170A1 (es) 2001-10-31
CN1232028A (zh) 1999-10-20
IL129191A0 (en) 2000-02-17
HUP9900804A3 (en) 2001-08-28
NO991526D0 (no) 1999-03-29
KR19990078366A (ko) 1999-10-25
AU2250299A (en) 1999-10-14
HUP9900804A2 (hu) 1999-11-29
EP0947511A1 (en) 1999-10-06
ZA992407B (en) 1999-09-30
PL332273A1 (en) 1999-10-11
HU9900804D0 (en) 1999-05-28
NZ334874A (en) 2000-08-25
MA26616A1 (fr) 2004-12-20
NO991526L (no) 1999-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HRP990093A2 (en) Derivatives of phenoxy acetic acid and of phenoxymethyl tetrazole having antitumor activity
JP3152434B2 (ja) 新規なアリールエテニレン及びヘテロアリールエテニレン誘導体及びその製法
Draoui et al. Synthesis and pharmacological evaluation of carboxycoumarins as a new antitumor treatment targeting lactate transport in cancer cells
JP2021536428A (ja) 置換インドール及びその使用方法
JP2005534619A (ja) Ｃ−ｊｕｎｎ−末端キナーゼ阻害剤としてのアザインドール
WO2019007293A1 (zh) 用作alk激酶抑制剂的化合物及其应用
SK61594A3 (en) Proteolitic enzyme inhibitors on saccharine derivatives basis
JP5990187B2 (ja) Ｓ−ニトロソグルタチオン還元酵素阻害薬としての新規な置換二環芳香族化合物
JP6456392B2 (ja) ３−アリール−５−置換イソキノリン−１−オン化合物及びその治療的使用
JP2021521243A (ja) Ｓｔａｔ３阻害剤
JP6855505B2 (ja) ブロモドメイン阻害剤としてのカルボリン誘導体
US5232948A (en) Substituted monocyclic aryl compounds exhibiting selective leukotriene b4 antagonist activity
JP3368565B2 (ja) 選択的ロイコトリエンｂ▲４▼拮抗剤活性を示す二重置換アリール化合物
JP2003313168A (ja) Ｂｃｌ−２阻害活性を有する化合物およびその化合物のスクリーニング方法
EP0947494A1 (en) Derivatives of phenoxy acetic acid and phenoxymethyltetrazole having antitumor activity
US9272985B2 (en) Antibacterial hydroxyphenyl compound
HRP20050222A2 (en) 4-(3,5-dicyanophenoxy) pyrazole derivatives for use as reverse transcriptase modulators in the treatment of i.a. hiv
TW319765B (hr)
Lizhuo et al. Synthesis, antibacterial and antifungal evaluation of rhodanine derivatives bearing quinoxalinyl imidazole moiety as ALK5 inhibitors
US8933100B2 (en) Paroxetine derivative
JP2001261654A (ja) キノリン誘導体およびそれを有効成分として含有する核内レセプター作動薬
KR20200115474A (ko) Aldh2 활성화제
MX2008000751A (es) 2-ciano-pirimidinas y -triazinas, como inhibidores de cisteina-proteasa.
US20220143032A1 (en) 2-pyridones and methods of use thereof
KR100265307B1 (ko) 하이드라존의 염

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
OBST Application withdrawn