HRP960357A2 - Process for the preparation of lovastatin - Google Patents
Process for the preparation of lovastatin Download PDFInfo
- Publication number
- HRP960357A2 HRP960357A2 HRP960357A HRP960357A2 HR P960357 A2 HRP960357 A2 HR P960357A2 HR P960357 A HRP960357 A HR P960357A HR P960357 A2 HRP960357 A2 HR P960357A2
- Authority
- HR
- Croatia
- Prior art keywords
- lovastatin
- fermentation
- aureus
- aspergillus terreus
- procedure
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 7
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 49
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 title description 49
- 229960004844 lovastatin Drugs 0.000 title description 47
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 47
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 25
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 12
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 36
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 241000131967 Aspergillus aureoterreus Species 0.000 description 12
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 12
- 241000813221 Aspergillus terreus ATCC 20542 Species 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 11
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 11
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 9
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 8
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 7
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 6
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 6
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 6
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 6
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 6
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 4
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 102100029077 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase Human genes 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 3
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 3
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 3
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000895 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Proteins 0.000 description 2
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 2
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 2
- KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N (R)-mevalonic acid Chemical compound OCC[C@](O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- 101710158485 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241001084790 Aspergillus neoafricanus Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241001520138 Cephalotrichum nanum Species 0.000 description 1
- VGMFHMLQOYWYHN-UHFFFAOYSA-N Compactin Natural products OCC1OC(OC2C(O)C(O)C(CO)OC2Oc3cc(O)c4C(=O)C(=COc4c3)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C(O)C1O VGMFHMLQOYWYHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N DL-mevalonic acid Natural products OCCC(O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241001136487 Eurotium Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000031003 Monascus ruber Species 0.000 description 1
- 241000228145 Penicillium brevicompactum Species 0.000 description 1
- 241000228168 Penicillium sp. Species 0.000 description 1
- 241001207509 Phoma sp. Species 0.000 description 1
- 241000222350 Pleurotus Species 0.000 description 1
- 235000007685 Pleurotus columbinus Nutrition 0.000 description 1
- 240000001462 Pleurotus ostreatus Species 0.000 description 1
- 235000001603 Pleurotus ostreatus Nutrition 0.000 description 1
- 241000392433 Pleurotus sapidus Species 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N Pravastatin Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N SJ000286063 Natural products C12C(OC(=O)C(C)(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N SJ000287055 Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001136486 Trichocomaceae Species 0.000 description 1
- 241000223262 Trichoderma longibrachiatum Species 0.000 description 1
- 241001304120 Trichoderma pseudokoningii Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000007273 lactonization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N mevastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=CCC[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N 0.000 description 1
- BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N mevastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C21 BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940098377 penicillium brevicompactum Drugs 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229960002965 pravastatin Drugs 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N pravastatin Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@H](O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N simvastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)C(C)(C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N 0.000 description 1
- 229960002855 simvastatin Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000001052 yellow pigment Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D309/30—Oxygen atoms, e.g. delta-lactones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
Područje tehnike u koje spada izum
Izum se odnosi na postupak dobivanja lovastatina i njegovih derivata, odnosno prije svega na postupak koji uključuje upotrebu specifičnog mikroorganizma.
Kemijski spoj lovastatin postoji u 2 oblika, kao laktonski i odgovarajući kiselinski oblik. Kemijsko ime laktonskog oblika je 1,2, 6,7,8,8a-heksahidro-β,δ-dihidroksi-2,6-dimetil-8-(2-metil-1-oksobutoksi)-1-naftalenheptanonska kiselina-δ-lakton (spoj I), a ime kiselinskog oblika je 1,2,6,7,8,8a-heksahidro-β,δ-dihidroksi-2, 6-dimetil-8-(2-metil-1-oksobutoksi) -1-naftalenheptanonska kiselina (spoj I). Strukturne formule su slijedeće:
[image]
Spoj I: Strukturna formula lovastatina u laktonskom obliku
[image]
Spoj I: Strukturna formula lovastatina u kiselinskom obliku
Lovastatin, kao također i neki drugi srodni spojevi, npr. kompaktin, simvastatin i pravastatin su poznati kao snažni inhibitori 3-hidroksi-3-metilglutaril - koencim A reduktaze (HMG-CoA reduktaze), ključnog enzima biosinteze holesterola (J.A. Tobert, G. Hitzenberger, W.R. Kuhovatz, I.B. Holmes, K.H. Jones, Atherosclerozis 41, 61-65, 1982).
In vivo, lovastatin prelazi iz oblika laktona (spoj I) u oblik odgovarajuće kiseline (spoj II), koji je aktivan oblik lovastatina. Inhibicijom HMG-CoA reduktaze djeluje kao kompetitivni inhibitor u biosintezi mevalonske kiseline, koja je jedna od stupnjeva u biosintezi holesterola (G. Zubay, Biochemistry, Addison Wesley Publishing Company 584, 1984).
Lovastatin se upotrebljava kao lijek kod hiperholesterolemije i sprečava ishemične bolesti srca. Iz literature je poznato da lovastatin u organizmu smanjuje koncentraciju ukupnog LDL (lipoprotein niske gustoće) i VLDL (lipoprotein vrlo niske gustoće) holesterola (S.M. Grundy, G. L. Vega, Journal of Lipid Research 26, 1464-1475, 1985).
Tehnički problem
Tehnički problem koji se rješava ovim izumom sastoji se u slijedećem: kako rješiti postupak pripreme lovastatina upotrebom mikroorganizama koji daju zadovoljavajuće prinose i koji koristi uzgajalište za visoku produkciju lovastatina bez dohranjivanja u postupku fermentacije da bi se izbjegla kontaminacije fermentacijske kaše.
Stanje tehnike
Postupci pripreme lovastatina su poznati u stanju tehnike. U DE-A-30 06 216 (Sankvo) je opisana priprema djelotvornog sredstva koji je metabolit gljive Monascus ruber i znan je kao monacolin K. Malo nakon toga ustanovljeno je da su monacolin K i lovastatin po strukturi identični spojevi.
EP-B-22 478 također opisuje postupak pripreme lovastatina. U tom postupku je opisana kultivacija gljive vrste Aspergillus terreus, odnosno dva soja te gljive deponirane kao Aspergillus terreus ATCC 20541 i Aspergillus terreus ATCC 20542.
B. Buckland i ostali su objavili u Novel Microbial Products for Medicine and Agriculture, Elsevier, Amsterdam, str. 161-169, 1989, poboljšani postupak dobivanja lovastatina s reizolatom Aspergillus terreus ATCC 20542. Međutim postupak pripreme reizolata nije opisan.
Lovastatin i ostele srodne spojeve produciraju i neke druge gljive: Penicillium brevicompactum, Pvthium ultimum, Hvmices chrysospermus, Pacylomyces sp., Eupenicillium sp., Trichoderma longibrachiatum, T. pseudokoningii, Phoma sp., Doratomyces nanus, Gvmnoascus umbrinus (A. Endo, K. Hasumi, A. Yamada, R. Shimoda, H. Takeshima, J. Antibiot. 49, 1609-10, 1986); Aspergillus obscurus (HU-A-208 997), transformant A. oryzae/A. terreus (US-A-5,362, 638) , Pleurotus ostreatus, Pleurotus saća i Pleurotus sapidus (N. Gunde-Cimerman, FEMS Microbiology Letters l±, 203-206, 1993).
Većina postupaka pripreme lovastatina, upotrebom različitih mikroorganizama opisanih u stanju tehnike, ima odgovarajuće nedostatke. Kao prvo, ti mikroorganizmi ne daju zadovoljavajuće prinose lovastatina. Pored toga, između kultivacija je često potrebno dohranjivanje s izabranim izvorima ugljika, koji imaju negativan utjecaj na produkciju lovastatina radi visoke početne koncentracije izvora ugljika u uzgajalištu. Osim toga dohranjivanje između postupaka fermentacije može uzrokovati kontaminacije fermentacije kaše.
Opis rješenja tehničkog problema
Predloženim izumom otklonili smo ranije navedene nedostatke. Izum s odnosi na postupak pripreme lovastatina u laktonskom obliku (spoj I) i kiselinskom obliku (spoj II) definiranih slijedećim formulama:
[image]
ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli ili alkilnih estera dobijenih kultivacijom mikroorganizama vrste Asperillus terreus var. aureus u odgovarajućem hranjivom mediju i izolacijom dobijenih produkata.
Upotrebom Aspergillus terreus var. aureus dobiveni su iznenađujuće visoki prinosi lovastatina, ukoliko je na poćetku fermentacijskog postupka u mediju vrlo visoka koncentracija izvora vodika. Tom postupku radi toga nije potrebno dohranjivanje.
Rod Aspergillus, koja uključuje također vrstu Aspergillus terreus koja je upotrebljena kod ovog izuma, vrlo je velika i heterogena taksonomska kategorija. Dodatno se dijeli na podrodove, sekcije ili skupine i specifične varietete. U literaturi je poznato više varieteta gljive Aspergillus terreus kao što su: A. terreus var. globosus, A. terreus var. terreus, A. terreus var. aureus, A. terreus var. africanus, (B.K. Raper and D. Fenell: The genus Aspergillus, Williams and Wilkins Batimore, 1965) i druge. U međunarodnim zbirkama mikroorganizama postoje takozvani tipski sojevi ("type strains") za sve navedene varietete.
Ustanovili smo da je gljiva određena kao Aspergillus terreus var. aureus, proizvodi vrlo mnogo lovastatina. Gljiva je deponirana u belgijskoj zbirci mikroorganizama Mycotheque de l' Universite Catholique de Louvain (MULC) pod imenom Aspergillus terreus var. aureus MULC 38997.
U postupku taksonomske identifikacije mikroorganizma upotrebijenog u predloženom izumu su upotrebijeni tipski sojevi, deponirani u zbirkama, koji djeluju u skladu s budimpeštanskom konvencijom, kao i raspoloživa literatura, između ostalog: B.K. Raper and D. Fenell: The genus Aspergillus, Williams and Wilkins Baltimore (1965), R.R.M. Paterson and F. D. Bridge: Biochemical Techniques for Filamentous Fungi, IMI Technical Handbooks, No. 1, Cab International (1994) i M.J. Carlile and S.C. Watkinson: The Fungi, Academic Press (1994).
Uzgoj mikroorganizama, upotrebijenog u predloženom izumu, na minimalnom krutom uzgajalištu Czapek agar (CZA) traje 14 dana kod temperature 28°C. Nakon 14 dana su kolonije promjera 5 do 7 cm, micelij je blijedo žut s intenzivnom ili slabom sporulacijom. Glave konidiofora su duge, okrugle, kompaktne, dužine 110 do 250 μm i promjera 35 do 60 μm. Konidiofori su više ili manje iskrivljeni, glatki, bezbojni do blijedo žuti, dužine 300 do 400 μm, promjera 4 do 7 μm. Vezikule su hemisferične. Sterigme su kod dvije vrste: primarne dužine 5.5 do 7 μm, promjera 1 do 2 μm i sekundarne dužine 5 do 7 μm, promjera 1.5 do 2 μm. Konidije su okrugle do blago elipsaste, glatke, promjera 1.9 do 2.4 μm. Kod uzgoja na različitim supstratima, dolazi do spuštanja pigmenata u uzgajalište. Dobijeni pigment je žut do zeleno smeđe boje.
Ustanovili smo u fazi taksonomske identifikacije da gljiva spada u razred Ascomvcetes - više gljive, skupina Eurotiaceae, rod Eurotium, odnosno konidijski oblik Aspergillus, vrsta Aspergillus terreus var. aureus.
Obzirom na to da je za produkciju lovastatina najjčešće navođen soj Aspergillus terreus ATCC 20542, naš smo soj, pored već opisane identifikacije, dodatno usporedili s tim mikroorganizmom. Rezultat opsežne usporedbene analize, koja se temelji na morfološkoj analizi, fiziologiji rasta na različitim uzgajalištima, analizi pigmenata, nedvosmisleno pokazuju, da je naš soj koji producira lovastatin, Aspergillus terreus var. aureus MUCL 38997 bitno drugačiji od soja Aspergillus terreus ATCC 20542. Svi usporedbeni pokusi uzgoja oba soja na krutom uzgajalištu su provedeni kod temperature 30°C, 10 do 12 dana u tami.
Pregled rezultata usporedbe su prikazani u tabeli 1 i tabeli 2.
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
Kako je vidljivo iz rezultata uzgoja (Tabela 1 i 2)sojevi se razlikuju prema obojenosti kolonija i prodiranju nastalog pigmenta u uzgajalište.
Kod većine supstrata je aeralni micelij gljive Aspergillus terreus var. aereus MUCL 38997 bijele do svijetlo žute boje, dok je supstratni micelij blijedo smeđi. Intenzivno žuti pigment je opažen ako kao izvor ugljika upotrijebimo arabinozu ili ramnozu. Kod istih uvjeta je obojenost mikroorganizama Aspergillus tereus ATCC 20542 smeđkasto smeđa. Kod usporedbe veličine kolonija u ovisnosti od izvora ugljika, kod većine testiranih izvora ugljika (ksiloza, saharoza, maltoza, ramnoza, riboza, fruktoza, arabinoza) veličina kolonija gljive Aspergillus terreus var. aureus MUCL 38997 je promjera 9 cm. Kod soja Aspergillus terreus ATCC 20542 su kod istih uvjeta uzgoja kolonije u većini primjera promjera 5 do 8 cm.
Upotreba natrijevog citrata kao izvora ugljika prekida rast soja Aspergillus terreus var. aureus MUCL 38997. Suprotan utjecaj natrijevog citrata je kod soja Asperillus terreus ATCC 20542, jer stimulira rast i nakon 12 dana uzgoja izrastu kolonije u više ili manje napravilne oblike, smeđe boje, samtaste strukture.
Stimulativan utjecaj na rast kolonija Aspergillus terreus var. aureus MUCL 38997 je opažen kod upotrebe različitih izvora dušika kao na primjer: asparagin, glutaminska kiselina, valin, leucin, L-izoleucin, arginin, alanin, tirozin, NH4Cl, kalcijev nitrat. Kolonije su pravilnog oblika, s dobro razvijenim aeralnim i supstartnim micelijem. U primjeru Aspergillus terreus ATCC 20542, kod upotrebe asparagina i tirozina kao izvora dušika, dolazi do prestanka rasta.
Nadalje, kod mikroorganizam Aspergillus terreus vat. aureus MUCL 38997 kod gledanja mikroskopom ne opažaju se takozvane "hulla" stanice, što je tipično za aureus. Jednom su "hulla" stanice prisutne u primjeru Aspergillus terreus ATCC 20542.
Iz navedenih rezultata je vidljivo, da su MUCL 38997, upotrebljen u izumu, i ATCC 20542 potpuno različiti mikroorganizmi.
Mikroorganizam, koji je predmet ovog izuma, uzgajamo u vodenom mediju, kao u primjeru dobivanja drugih fermentacijskih proizvoda. Biosinteza protječe u uzgajalištu koje sadrži razgradijive izvore ugljika i dušika te mineralne tvari. Obično je to supmerzni postupak, pod aerobnim uvjetima uzgoja, kod kojih je intenzivan rast mikroorganiza. Posebno je važno napomenuti, da izabrani mikroorganizam podnosi vrlo velike početne koncentracije ugljika u produkcijskom medije, čime je nepotrebno dohranjivanje između fermentacije (fed-batch). Početne koncentracije izvora ugljika u produkcijskom mediju su obično ≥6%, povoljno ≥9%, još povoljnije ≥11% i najpovoljnije ≥15% (težinski).
Primjeri primjenjivih sastava hranilišta su opisani npr. u patentu EP-B-22 478. Povoljni izvori ugljika su laktoza, glukoza, saharoza, ječmeno brašno, a povoljni izvori dušika su kazein-pepton, tekućina za močenje (CSL-corn steep liquor), soja-protein, ekstrat kvasca i pivski kvasac.
Od mineralnih tvari je poželjna prisutnost MgCl2, K2HPO4, NaH2PO4, MnSO4, (NH4)2HPO4. Hranjivo uzgajalište može sadržavati i druge potrebne komponente kao što je sredstvo protiv pjenjenja.
Biosinteza protječe obično u temperaturnom području od 20 do 33°C, povoljno kod 28°C. Vrijednost pH medija održavamo u području od 6.0 do 8.0, povoljno 5.8 do 6.8. Fermentacija obično traje 6 dana. Kod postupka biosinteze prema opisanom postupku nastaje lovastatin prvenstveno u kiselinskom obliku, pogotovo kada je koncentracija laktona u fermentacijskoj kaši cijelo vrijeme fermentacije bitno niža. Lovastatin izoliramo prema poznatim postupcima. Tipična izolacija obuhvaća ekstrakciju pomoću organskih otapala, laktonizaciju i kristalizaciju. Dobijenu supstancu analiziramo i definiramo odgovarajućim tehnikama analize kao što su: IR-spektroskopija, masena spektroskopija, NMR i UV spektroskopija.
Kiselinski oblik lovastatina (spoj II) laktoniziramo u odgovarajući laktonski oblik (spoj I) prema poznatim postupcima koji su opisani npr. u EP-A-351 918, EP-B22 478 ili WO-94/29292. Izolirani lovastatin možemo pretvoriti u farmaceutski prihvatljive soli ili alkilne estere prema poznatim postupcima, koji su opisani u patentu EP-B-22 478. Ustanovljeno je, da je prema postupku koji je opisan u izumu, dobijeno više lovastatina u usporedbi s postupkom opisanim u stanju tehnike. Kako su početne koncentracije izvora ugljika vrlo visoke, mikroorganizam opisan u tom izumu, pokazuje višu produktivnost. Zbog toga je pojednostavimo izvođenje samog postupka, jer u industrijskom izvođenju protječe bez dohranjivanja između fermentacija. Time isključujemo povećanu opasnost kontaminacije postupka.
Prednost izuma objašnjavamo slijedećim primjerima izvođenja, koji izum ne ograđuju.
Primjeri
Primjer 1
vanjski postupak
Upotrebljena je gljiva Aspergillus terreus var. aureus, koja je deponirana pod brojem MUCL 38997 u obliku žute kulture na prikladnom agaru (krompirov dekstrozni agar - PDA) . Dobro sporuliranu kulturu uzgojenu na PDA agaru upotrijebimo za pripremu suspenzije spora, kojom cijepimo vegetativnu fazu. Uzgajalište za vegetativnu fazu sadrži tekućinu za močenje (corn steep liquor-CSL), ječmeno brašno, kazein pepton, pivski kvasac, {NH4)2HPO4, sredstvo protiv pjenjenja i vodu za piće. Vrijednost pH uzgajališta je 6.4. Prije inokulacije sa suspenzijom spora, uzgajalište steriliziramo 20 minuta kod 121°C, zatim ohladimo na 25 do 35°C, povoljnije na 28°C.
Razvoj predfermentorske (vegetativne) faze traje 20 do 35 sata kod temperature 28°C uz odgovarajući protok zraka i miješanje.
Dobro razvijen inokulum (l do 2% vol.) sterilno prenesemo u produkcijsko uzgajalište. Produkcijsko uzgajalište ja sastavljeno iz izvora ugljika i kompleksnih izvora dušika te mineralnih tvari (MgCl2, K2HPO4, NaH2PO4, MnSO4) i vode. Uvjeti uzgoja su: temperatura 28°C, protok zraka, broj okretaja je ovisan od koncentracije otopljenog kisika. Između postupka održavamo vrijednost pH u području 5.8 do 6.8. Za korekciju vrijednosti pH upotrebljavamo 30% H2SO4 i 10% NaOH.
Koncentraciju lovastatina u fermentacijskoj kaši sakupljamo između postupka biosinteze pomoću HPLC postupka. Uzorak fermentacijske kaše zakiselimo na vrijednost pH 4 s 10% Hcl, ekstrahiramo metanolom, homogeniziramo 5 minuta na homogenizator Ultra Turax T25 (Janke und Kunkel, I KA Labortechnik), odfiltriramo i filtrat upotrijebimo za HPLC analizu {aparat Pharmacia LKB sistem), kolona: Chrompack Chromspher C 18, 5μm, temperatura 45°C; mobilna faza:
acetonitril i 0.1% vodena otopina fosforne kiseline (vol. odnos 48:52); UV detekcija.
Između postupka biosinteze prema opisanom postupku stvara se prije svega kiselinski oblik lovastatina, ako je koncentracija laktona u fermentacijskoj kaši cijelo vrijeme fermentacije bitno niska.
Postupak biosinteze traje oko 6 dana i po završetku fermentacije izoliramo lovastatin prema postupku opisanom u WO-94/29292. Izolirani lovastatin identificiramo s IR-spektometrijom, masenom spektometrijom, NMR, UV spektroskopijom i drugim postupcima.
Primjer 2
Suspenziju spora pripremimo u 0.1% vol. otopini Tween 80. Za tu namjenu potrgamo 10 do 14 dana stari micelij gljive Aspergillus etrreus var. aureus MUCL 38997 uzgjen na krumpirovom dekstroznom agaru (PDA-agar). S 200 ml prefiltrirane suspenzije spora inokuliramo 30 l vegetativnog uzgajališta slijedećeg sastava:
Sastav vegetativnog uzgajališta:
CSL 5.0 g
ječmeno brašno 15.0 g
kazein pepton 5.0 g
pivski kvasac 1.2 g
(NH4)2HPO4 the. 0.015 ml
voda za piće do 1000 ml
vrijednost pH podloge prije sterilizacije namjestimo na pH 6.4. Sterilizacija traje 20 minuta kod 121°C. Razvoj vegetativne faze traje uz miješanje i prozračivanje 20 do 35 sati kod temperature 28°C.
Razvijen vegetativni inokulum u količini 1% vol. sterilno prenesemo u fermentacijsko uzgajalište (100 l), ranije navedeno kao produkcijsko uzgajalište, slijedećeg sastava:
Sastav fermentacijskog uzgajališta:
laktoza 60 g
izvor organskog dušika 13.8 g
CSL 1.95 g
MgCl2 . 6 H2O 1.0 g
NaH2PO4 1.2 g
K2HPO4 0.5 g
MnSO4 . H2O 0.02 g
sredstvo protiv pjenjenja 0.5 g
voda za piće do 1000 ml
Vrijednost pH produkcijskog medija prije starilizacije namjestimo na vrijednost 6.4. Sterilizacija traje 20 minuta kod 121°C. Postupak biosinteze traje 6 dana kod 28°C, iz miješanje i prozračivanje. Produkciju aktivne komponente (lovastatina) prikupimo pomoću HPLC postupka. Nakon okončanja fermentacije, dobijeni lovastatin izoliramo kako je opisano u primjeru 1. Koncentracija lovastatina na kraju fermentacije je iznad 500 Hm/ml u obliku kiseline.
Primjer 3
Ponovimo postupak opisan u primjeru 2 do stupnja završetka rasta vegetativne faze.
S 2% vol. tako dobivene vegetativne kaše inokuliramo 100 l fermentacijskog uzgajališta slijedećeg sastava:
Sastav fermentacijskog uzgajališta:
laktoza 90 g
izvor organskog dušika 22.15 g
CSL 2.93 g
MgCl2 . 6 H2O 1.0 g
NaH2PO4 1.2 g
K2HPO4 0.5 g
MnSO4 . H2O 0.02 g
sredstvo protiv pjenjenja 0.5 g
voda za piće do 1000 ml
Vrijednost pH uzgajališta prije starilizacije namjestimo na vrijednost 6.4. Sterilizacija traje 20 minuta kod 121°C. Gljivu uzgajamo na temperaturi 28°C, iz miješanje i prozračivanje. Fermentacija je završena nakon 6 dana. Nakon okončanja fermentacije, dobijeni lovastatin izoliramo kako je opisano u primjeru 1. Koncentracija lovastatina na kraju fermentacije je iznad 700 pm/ml u obliku kiseline.
Primjer 4
Ponovimo postupak opisan u primjeru 2 do stupnja završetka rasta vegetativne faze.
S 2% vol. tako dobivene vegetativne kaše inokuliramo 100 l fermentacijskog uzgajališta slijedećeg sastava:
Sastav fermentacijskog uzgajališta:
laktoza 117 g
izvor organskog dušika 28.8 g
CSL 3.81 g
MgCl2 . 6 H2O 1.0 g
NaH2PO4 1.2 g
K2HPO4 0.5 g
MnSO4 . H2O 0.02 g
sredstvo protiv pjenjenja 0.5 g
voda za piće do 1000 ml
Vrijednost pH uzgajališta prije starilizacije namjestimo na vrijednost 6.4. Sterilizacija traje 20 minuta kod 121°C. Gljivu uzgajamo na temperaturi 28°C, iz miješanje i prozračivanje. Fermentacija je završena nakon 6 dana. Nakon okončanja fermentacije, dobijeni lovastatin izoliramo kako je opisano u primjeru 1. Koncentracija lovastatina na kraju fermentacije je iznad 1000 nm/ml u obliku kiseline.
Primjer 5
Ponovimo postupak opisan u primjeru 2 do stupnja završetka rasta vegetativne faze.
S 2% vol. tako dobivene vegetativne kaše inokuliramo 100 l fermentacijskog uzgajališta slijedećeg sastava:
Sastav fermentacijskog uzgajališta:
laktoza 150 g
izvor organskog dušika 35.14 g
CSL 4.65 g
MgCl2 . 6 H2O 1.0 g
NaH2PO4 1.2 g
K2HPO4 0.5 g
MnSO4 . H2O 0.02 g
sredstvo protiv pjenjenja 0.5 g
voda za piće do 1000 ml
Vrijednost pH podloge prije starilizacije namjestimo na vrijednost 6.4. Sterilizacija traje 20 minuta kod 121°C. Gljivu uzgajamo na temperaturi 28°C, iz miješanje i prozračivanje. Fermentacija je završena nakon 6 dana. Nakon okončanja fermentacije, dobijeni lovastatin izoliramo kako je opisano u primjeru 1. Koncentracija lovastatina na kraju fermentacije je iznad 1200 nm/ml u obliku kiseline.
Primjer 6
(usporedba)
Usporedba produktivnosti sojeva Aspergillus terreus ATCC 20542 i Aspergillus terreus var. aureus MUCL 38997.
Usporedba sojeva je izvršena s izabranim mikroorganizmom prema postupku koji je predmet te prijave i mikroorganizmom koji je opisan u stanju tehnike Aspergillus terreus ATCC 20542 u laboratorijskim mjerilima.
Kod svih pokusa ja sastav vegetativnog uzgajališta jednak kao u primjeru 2. Da bi utvrdili utjecaj različite koncentracije izvora ugljika, upotrebijen je sastav produkcijskog medija kako je opisano u primjeru 2, 3 i 4. Mediji sadrže 6% (primjer 2), 9% (primjer 3) i 11.7% (primjer 4) laktoze. Sterilizacija uzgajališta traje 20 minuta kod 120°C. Inokulacija vegetativne faze je načinjena kako je opisano u primjeru 2. Razvoj vegetativne faze protekao je na vibratoru kod temperature 28°C i broja okretaja 220 o/min. (ekscentar 5 cm). 2% vol. razvijenog inokuluma sterilno prenesemo u 500 ml erlenmajer tikvice s 60 ml produkcijskog medija. Biosinteza traje 140 sati kod temperature 28°C. Broj okretaja je 220 o/min, (ekscentar 5 cm). Produkcija lovastatina je mjerena pomoću HPLC postupka. Dobijeni prinosi lovastatina (μm/ml) su prikazani u tabeli.
[image]
Dobijeni rezultati sigurno pokazuju da kod istih uvjeta uzgoja višu produktivnost ima soj koji je predmet prijave u odnosu na mikroorganizam opisan u stanju tehnike. Osim toga, upotrebijeni soj producira veću koncentraciju lovastatina u primjerima gdje su početne koncentracije ugljika vrlo visoke u odnosu na produkciju soja opisanog u stanju tehnike.
Rezultat testa sigurno pokazuje očiglednu prednost mikroorganizma koji je predmet izuma.
Primjer 7
(usporedba)
Usporedba produktivnosti sojeva Aspergillus terreus ATCC 20542 i Aspergillus terreus var. aureus MUCL 38997.
Eksperiment je izveden u laboratorijskom mjerilu, prema postupku opisanom u patentu EP-B-22478, primjer 5.
Kao mikroorganizmi za testiranje upotrebijeni su Aspergillus terreus ATCC 20542 i Aspergillus terreus var. aureus MUCL 38997, ostali uvjeti su jednaki kao u navedenom patentu. Prinosi lovastatina (pm/ml) su prikazani u tabeli.
Sastav vegetativne i produkcijske podloge
je jednak kao u primjeru 5 EP-B-22 478
[image]
Rezultati pokazuju da u usporedbi tih uvjeta uzgajanja, soj koji je predmet izuma postiže veću produktivnost od soja opisanog u stanju tehnike.
Claims (4)
1. Postupak pripreme spoja I i spoja II definiranih slijedećim formulama:
[image]
ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli ili alkilnih estera, naznačen time, da uzgajamo mikroorganizam vrste Asperillus terreus var. aureus u hranjivom mediju i izoliramo željeni produkt.
2. Postupak prema zahtjevu 1, naznačen time, da je upotrebijeni mikroorganizam Asperillus terreus var. aureus deponiran u belgijskoj zbirci mikroorganizama Mycotheque de l'Universite Catholique de Louvain pod brojem MULC 38997.
3. Postupak prema zahtjevu 1 i 2, naznačen time, da je koncentracija izvora ugljika u uzgajalištu ≥6%, povoljnije ≥9% (tež.)
4. Postupak prema zahtjevu 3, naznačen time, da je koncentracija izvora ugljika u uzgajalištu ≥11%, povoljnije ≥15% (tež.)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI9500238A SI9500238A (en) | 1995-07-27 | 1995-07-27 | Procedure for the production of lovastatin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HRP960357A2 true HRP960357A2 (en) | 1998-04-30 |
| HRP960357B1 HRP960357B1 (en) | 2004-10-31 |
Family
ID=20431662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HR960357A HRP960357B1 (en) | 1995-07-27 | 1996-07-25 | Process for the preparation of lovastatin |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0842290B1 (hr) |
| JP (1) | JP3689429B2 (hr) |
| AU (1) | AU6326396A (hr) |
| HR (1) | HRP960357B1 (hr) |
| SI (1) | SI9500238A (hr) |
| WO (1) | WO1997005269A1 (hr) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR9807362A (pt) * | 1997-02-20 | 2000-04-18 | Dsm Nv | Produção fermentativa de compostos úteis em escala industrial usando meios quimicamente definidos |
| KR100234976B1 (ko) * | 1997-08-01 | 1999-12-15 | 김충환 | 세룰레닌 및 엘-메치오닌 유사체에 동시 내성을 갖는 아스퍼질 러스속 미생물 및 그를 이용한 메비놀린산의 제조방법 |
| SK281320B6 (sk) * | 1997-10-13 | 2001-02-12 | Biotika, A. S. | Kmeň aspergillus terreus a fermentácia lovastatínu týmto produkčným kmeňom |
| SI9800057A (sl) | 1998-02-26 | 1999-08-31 | Krka, Tovarna Zdravil, D.D. | Postopek za pripravo simvastatina in njegovih derivatov |
| IL132822A0 (en) * | 1998-03-20 | 2001-03-19 | Biogal Gyogyszergyar | Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid |
| HU226966B1 (en) * | 1998-03-20 | 2010-03-29 | Teva Gyogyszergyar Zartkoeruee | Fermentation process |
| CN102621238A (zh) * | 2011-02-01 | 2012-08-01 | 北京北大维信生物科技有限公司 | 一种测定HMG-CoA还原酶抑制剂浓度的方法 |
| CN114958625B (zh) * | 2022-07-07 | 2023-12-19 | 福安药业集团烟台只楚药业有限公司 | 一种发酵生产洛伐他汀的土曲霉的培养与保存方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4342767A (en) * | 1980-01-23 | 1982-08-03 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products |
| US5250435A (en) * | 1991-06-04 | 1993-10-05 | Merck & Co., Inc. | Mutant strains of Aspergillus terreus for producing 7-[1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hydro-2(S),6(R)-dimethyl-8(S)-hydroxy-1(S)-naphthyl]-3(R),5(R)-dihydroxyheptanoic acid (triol acid),I) |
| HU208997B (en) * | 1992-06-17 | 1994-02-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Microbiological method for producing mevinoline |
-
1995
- 1995-07-27 SI SI9500238A patent/SI9500238A/sl not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-07-16 EP EP96922367A patent/EP0842290B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-16 JP JP50753097A patent/JP3689429B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-07-16 AU AU63263/96A patent/AU6326396A/en not_active Abandoned
- 1996-07-16 WO PCT/SI1996/000016 patent/WO1997005269A1/en active IP Right Grant
- 1996-07-25 HR HR960357A patent/HRP960357B1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU6326396A (en) | 1997-02-26 |
| HRP960357B1 (en) | 2004-10-31 |
| EP0842290B1 (en) | 2004-01-28 |
| SI9500238A (en) | 1997-02-28 |
| EP0842290A1 (en) | 1998-05-20 |
| JP2000500642A (ja) | 2000-01-25 |
| WO1997005269A1 (en) | 1997-02-13 |
| JP3689429B2 (ja) | 2005-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Calhoun et al. | Metabolites toxic to spruce budworm from balsam fir needle endophytes | |
| US5403728A (en) | Microbial process for preparing mevinolin by a strain of aspergillus | |
| HRP960357A2 (en) | Process for the preparation of lovastatin | |
| DE60003424T2 (de) | Hydroxylierung von compactin zu pravastatin unter verwendung von micromonospora bakterien | |
| Devi et al. | Batch culture fermentation of Penicillium chrysogenum and a report on the isolation, purification, identification and antibiotic activity of citrinin | |
| DE60019898T2 (de) | Mikrobielles verfahren zur herstellung von pravastatin | |
| US20180142270A1 (en) | Streptomyces psammoticus and methods of using the same for vanillin production | |
| AU666467B2 (en) | Fungicidally active compounds | |
| EP1266967B1 (en) | Process for the production of pravastatin and lovastatin | |
| US5641804A (en) | Fungicidal compound comprising a cyclic polylactone | |
| CN103864733B (zh) | 一种丁烯酸内酯类代谢产物及其应用 | |
| DE69631425T2 (de) | Prozess für die präparation von lovastatin | |
| SI9300047A (en) | Microbiological method for preparation of lovostatin and/or mevinoline acid | |
| US5596015A (en) | Fungicidally active compounds | |
| Ali et al. | Biological activities of the Alkaloid Quinazoline extracted from Aspergillus nomius | |
| US2805185A (en) | Antibiotic and production thereof | |
| SU269821A1 (ru) | ОАТЕНТЙО- -t, *" ТЬЗСЙЙЧЕСКЛЯ ' ЕМБЛЕОТЕКА | |
| US5112858A (en) | Antibiotic, aranorosin, a microbiological process for the preparation thereof, and the use thereof as a pharmaceutical | |
| WO1994000013A1 (en) | Fungicidal and insecticidal compounds and compositions derived from fungal strains of prenophora teres | |
| STABLER et al. | Lachnumon and lachnumol A, new metabolites with nematicidal and antimicrobial activities from the ascomycete Lachnum papyraceum (Karst.) Karst. I. Producing organism, fermentation, isolation and biological activities | |
| ElKichaoui | Strain improvement of Aspergillus niger to increase lovastatin production | |
| DE19630980A1 (de) | Etnangien, Herstellung, Verwendung und Produktionsstamm | |
| BG108752A (bg) | Ферментационен метод за получаване на компактин | |
| WO1999019458A1 (en) | A method of fermentation preparation of lovastatin by an aspergillus terreus strain and the strain for performing the method | |
| WO1993022444A1 (en) | Fungicidally active compounds |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1OB | Publication of a patent application | ||
| AIPI | Request for the grant of a patent on the basis of a substantive examination of a patent application | ||
| B1PR | Patent granted | ||
| ODRP | Renewal fee for the maintenance of a patent |
Payment date: 20050719 Year of fee payment: 10 |
|
| PBON | Lapse due to non-payment of renewal fee |
Effective date: 20060726 |