FR3110395A1 - Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus - Google Patents

Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus Download PDF

Info

Publication number
FR3110395A1
FR3110395A1 FR2005326A FR2005326A FR3110395A1 FR 3110395 A1 FR3110395 A1 FR 3110395A1 FR 2005326 A FR2005326 A FR 2005326A FR 2005326 A FR2005326 A FR 2005326A FR 3110395 A1 FR3110395 A1 FR 3110395A1
Authority
FR
France
Prior art keywords
camphorate
compound
ascorbo
zinc
composition according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
FR2005326A
Other languages
English (en)
Inventor
Aurèle Henri Mannarini
Bernard GOMBERT
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
M G B Pharma
MGB Pharma
Original Assignee
M G B Pharma
MGB Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by M G B Pharma, MGB Pharma filed Critical M G B Pharma
Priority to FR2005326A priority Critical patent/FR3110395A1/fr
Priority to PCT/FR2021/050897 priority patent/WO2021234299A1/fr
Publication of FR3110395A1 publication Critical patent/FR3110395A1/fr
Priority to US17/991,581 priority patent/US20230114627A1/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/315—Zinc compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/341—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide not condensed with another ring, e.g. ranitidine, furosemide, bufetolol, muscarine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/375—Ascorbic acid, i.e. vitamin C; Salts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • A61K9/0036—Devices retained in the vagina or cervix for a prolonged period, e.g. intravaginal rings, medicated tampons, medicated diaphragms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4808—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate characterised by the form of the capsule or the structure of the filling; Capsules containing small tablets; Capsules with outer layer for immediate drug release

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

L’invention concerne une composition comprenant au moins un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement préventif et/ou curatif d’une infection impliquant au moins un papillomavirus, notamment au moins un papillomavirus humain.

Description

Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus
La présente invention se rapporte à un médicament pour utilisation dans le traitement d’une infection causée par au moins un virus de la famille desPapillomaviridae, en particulier les papillomavirus humains (HPV).
L’invention concerne plus particulièrement une utilisation dans les traitements préventifs ou curatifs des infections virales impliquant les papillomavirus humains dits à haut risque cancérigène (HR-HPV) tels que les génotypes HPV-16 ou HPV-18 qui sont les principaux papillomavirus impliqués dans le développement de tumeurs malignes.
Les papillomavirus humains (HPV) sont des virus qui appartiennent à la famille desPapillomaviridae. Plus d’une centaine sont aujourd’hui identifiés. On distingue les HPV dits à bas risque qui sont à l’origine de condylomes externes, et les HPV dits à haut risque (en particulier HPV16 ou HPV18) qui sont impliqués notamment dans les lésions précancéreuses et des cancers cutaneo-muqueux, et en particulier du col de l’utérus, ou plus généralement de la région ano-génitale.
Les papillomavirus sont abondamment étudiés et décrits dans la littérature scientifique.
Ce sont tous des virus épithéliotropes qui sont responsables, sur le plan clinique, de lésions ou tumeurs bénignes ou malignes.
Structurellement, les papillomavirus sont de petits virus, non enveloppés, dont la capside est constituée de 72 capsomères comprenant la protéine majeure L1 et la protéine L2.
Les HPV infectent les cellules souches de l’épithélium pluristratifié des kératinocytes cutanéo-muqueux (comme la lame basale de l’exocol).
Le cycle de multiplication complet des HPV comporte plusieurs phases qui prennent place au cours de la différenciation et la desquamation épithéliale.
Après l’infection des cellules par le virus, l’ADN viral demeure sous forme latente pendant plusieurs années sous forme épisomale (circulaire) dans le noyau de la cellule hôte.
Des cofacteurs endogènes et exogènes entrainent l’activation de l’ADN viral, qui se scinde et s’intègre au génome de la cellule hôte. Il y a alors expression séquentielle des gènes viraux, ce qui permet la réplication de l’ADN viral puis la production de nouveaux virions infectieux. Cet évènement conduit à la surexpression des deux oncoprotéines virales, E6 et E7, dont l’action combinée est nécessaire à l’immortalisation, puis à la transformation de la cellule. Les cellules cancéreuses entrainent des dysplasies qui peuvent évoluer dans le pire des cas jusqu’au cancer.
Les papillomavirus possèdent un génome constitué d’un ADN bicaténaire, circulaire d’environ 8 000 paires de bases.
L’ADN des HPV comporte deux phases ouvertes de lectures (POL) codant les protéines L1 et L2 des capsomères. Lorsque la POL L1 est expriméein vitro, seule ou en association avec L2, les protéines correspondantes s’auto-assemblent en pseudo-particules virales, désignées couramment sous l’acronyme anglais VLP ( Virus Like Particles) , dites aussi pseudovirions ou pseudovirus (notés PsV), dont la morphologie et les propriétés antigéniques sont similaires à celles des virions natifs.
Les pseudo-particules virales (VLP) sont à la base des vaccins prophylactiques actuels contre les papillomavirus. On peut par exemple se reporter à la demande internationale de brevet WO1999/015630A1 ayant pour objet des pseudo-virus dérivés de papillomavirus utilisables dans le cadre d’une thérapie génique ou d’une immunisation génique. Les vaccins prophylactiques développés à partir de VLP assurent une protection excellente contre les lésions induites par les deux génotypes HPV-16 et HPV-18 impliqués dans 70% des cancers du col utérin. Toutefois la fabrication de ces vaccins est assez complexe.
Actuellement les moyens pour traiter une infection virale par HPV reposent sur des traitements d’ordre chirurgical de la partie corporelle infectée suite à un diagnostic du risque cancéreux ou d’un cancer invasif, ou sur des vaccins prophylactiques.
Il n’existe pas donc pas de médicaments hors vaccins, disponibles sur le marché, pour des traitements préventifs ou curatifs des infections par les papillomavirus.
Il subsiste donc un besoin de pouvoir disposer de médicaments utilisables dans les traitements préventifs ou curatifs des infections par un virus de la famille des papillomavirus, en particulier des HPV, et notamment ceux oncogènes, dits aussi à haut risque (notamment HPV-16 ou HPV-18).
L’invention a pour but de répondre à ce besoin.
A cet effet, l’invention propose une composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement préventif ou curatif d’une infection impliquant au moins un papillomavirus, notamment au moins un papillomavirus humain (HPV).
Plus particulièrement l’invention propose une composition comprenant undit composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement préventif ou curatif d’une infection impliquant au moins un papillomavirus oncogène, en particulier du génotype HPV-16 ou du génotype HPV-18.
Avantageusement ledit composé ascorbo-camphorate métallique est soluble dans un solvant aqueux.
De préférence selon l’invention, undit composé ascorbo-camphorate métallique est un composé tetra-ascorbo-camphorate métallique.
De préférence undit composé ascorbo-camphorate métallique comprend un ion métallique choisi parmi ceux des métaux du groupe comprenant le zinc, le cuivre et le magnésium. De préférence encore ledit ion est un ion du zinc.
De préférence selon l’invention, undit composé est le tetra-ascorbo-camphorate de zinc.
Ce composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc, dérivé d’un terpène modifié, est de préférence formé par le camphorate de zinc et de l’acide ascorbique, dans un rapport molaire acide ascorbique/camphorate de zinc égal à 4. Le composé ainsi obtenu présente l’avantage d’être stable et de pouvoir être totalement dissous en milieu aqueux.
La partie active dudit composé repose sur le dérivé terpénique de base qu’est le camphorate, mais la partie du composé provenant de l’acide ascorbique peut favoriser le transfert dudit composé à travers le virus lui-même pour atteindre une cible déterminée, par exemple son matériel génétique, où l’élément actif peut provoquer sa destruction. De plus l’ion métallique, notamment dans le cas du zinc, peut aussi contribuer à promouvoir l’action anti-virale dudit composé de dérivé terpénique.
Dans un mode particulier de l’invention, ladite composition comprend un solvant aqueux physiologiquement acceptable. Plus particulièrement ledit solvant est constitué par de l’eau (physiologiquement acceptable), de sorte que ledit composé est sous forme dissoute.
Dans un mode particulier de l’invention, ladite composition est conditionnée dans une forme galénique apte à une application sur la peau et/ou les muqueuses.
En particulier, ladite composition comprend un excipient physiologiquement acceptable pour la conditionner sous une forme galénique de type gel ou pommade pour une application sur la peau et/ou les muqueuses.
Dans un autre mode particulier de l’invention, ladite composition est conditionnée sous une forme galénique solide. La composition peut comprendre seulement ledit composé ascorbo-camphorate métallique. Cette forme galénique solide peut être à dissoudre dans l’eau ou à ingérer, par exemple avec un liquide aqueux. Ladite forme galénique peut être ainsi des comprimés, des gélules ou des sachets contenant undit composé ascorbo-camphorate métallique en poudre. La poudre sera alors à avaler avec un grand verre d‘eau, ou sera ajoutée à de l’eau potable pour être dissoute avant que le patient l’absorbe oralement, ou encore sera mise en solution dans de l’eau pour un usage par application externe.
Dans un autre mode avantageux de l’invention, ladite composition comprend au moins un excipient physiologiquement acceptable adapté à un conditionnement dans une forme galénique pour un usage par voie vaginale, en particulier en un ovule ou une capsule Ce conditionnement convient particulièrement au traitement curatif ou préventif des infections causées par les HPV, notamment ceux du génotype HPV-16 ou HPV-18 très fréquents, impliqués principalement dans les infections transmises par voie sexuelle pouvant conduire aux cancers notamment du col utérin.
En thérapeutique humaine, ledit composé ascorbo-camphorate métallique peut être en quantité pour une posologie d’environ 3 g par jour, par prises fractionnaires éventuellement, chez un être humain adulte.
Selon un autre aspect de l’invention, ledit composé ascorbo-camphorate métallique est le composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc qui est obtenu par un procédé de préparation dans lequel on mélange de l’acide ascorbique à du camphorate de zinc par ajout du camphorate de zinc sous forme de poudre à une solution aqueuse d’acide ascorbique dans un rapport molaire acide ascorbique/camphorate de zinc égal à 4, le mélange étant effectué en milieu dilué correspondant à une quantité d’eau comprise entre 20 et 40 équivalents mL/mmol, en particulier entre 20 et 30 équivalents mL/mmol, par rapport au camphorate de zinc, le mélange étant maintenu sous agitation, et de préférence sous atmosphère inerte et à l’abri de la lumière, jusqu’à dissolution totale du camphorate de zinc. On peut ensuite récupérer ledit composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc sous forme solide en extrayant la partie aqueuse de préférence à froid et sous vide.
Optionnellement mais préférentiellement, on prépare dans une étape préalable le camphorate de zinc à partir de l’acide camphorique solubilisé dans un solvant polaire à base d’éthanol ou de l’alcool à 90°, additionné d’un peu d’eau, et on ajoute cette solution camphorique à une solution aqueuse laiteuse d’oxyde de zinc dans un rapport molaire acide camphorique /oxyde de zinc égal à 1/1, et on récupère le précipité de camphorate de zinc par extraction du solvant.
L’invention concerne aussi un médicament comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique tel que décrit précédemment pour son utilisation dans les traitements préventifs ou curatifs des infections virales impliquant au moins un papillomavirus, notamment un papillomavirus humains (HPV), et plus particulièrement un papillomavirus oncogènes, en particulier du génotype HPV-16 ou du génotype HPV-18.
Pour plus de détails sur la fabrication d’undit composé ascorbo-camphorate métallique, on peut aussi se référer à la demande de brevet FR2908660. Dans cette demande de brevet, on a décrit des préparations de compositions de dérivés terpéniques, notamment de composés ascorbo-camphorate métalliques, utilisables comme agent anti-microorganisme, mais aucune utilisation destinée aux traitements des infections impliquant les papillomavirus n’a été décrite.
D’autres particularités et avantages de l’invention ressortiront à la lecture de la description faite ci-après d’un exemple particulier selon l’invention comprenant la synthèse d’un composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc formé par du camphorate de zinc en mélange avec de l’acide ascorbique, et des tests de cytotoxicité et des résultats expérimentaux pré-cliniques avec le composé obtenu, donnés à titre indicatif mais non limitatif, et à l’aide des figures 1 à 3 annexées décrites plus loin.
Exemple de préparation d’un composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc :
Une préparation à base d’acide ascorbique, d’acide camphorique et de zinc a été réalisée dans des conditions ambiantes de température et de pression, soit sensiblement 298,15 °K et 105Pa. Néanmoins, dans certaines phases les mélanges sont légèrement chauffés et agités.
Dans le procédé on part du camphre. Le camphre est généralement obtenu à partir de l’alpha-pinène contenu dans l’essence de térébenthine, laquelle est obtenue à partir du suc résineux qui s’écoule du pin maritime. Ainsi, on transforme l’alpha-pinène en camphre en passant par différents intermédiaires, et notamment, le chlorure de bornyl, le camphène et l’ester organique de l’isobornéol.
On prépare, par oxydation du camphre, l’acide camphorique répondant à la formule chimique suivante :
On prépare le camphorate de zinc de la manière qui suit. Ainsi, 200 mg d’acide camphorique sont solubilisés dans 1 g d’éthanol à 90°. Ensuite, une quantité de 0,5 g d’eau ultra pure est additionnée au mélange. Puis, le mélange d’acide camphorique est associé à un oxyde de zinc en solution. Pour cela, 81,3 mg d’oxyde de zinc sont mélangés à 1 g d’eau ultra pure qui, après agitation, forment une solution laiteuse. Le mélange d’acide camphorique précité est lentement versé dans la solution laiteuse. L’ensemble est agité modérément et par intermittence. En outre, entre chaque phase d’agitation, il est légèrement chauffé, par exemple à l’étuve, afin d’accélérer la réaction. Il se forme alors un précipité, le camphorate de zinc, qui est récupéré par extraction du solvant, soit par chauffage soit par lyophilisation.
On prépare ensuite le composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc de la manière qui suit. On mélange 288 mg (1,09 mMol, 1 éq.) de camphorate de zinc précédemment obtenu, à une solution de 22 mL (20 éq) d’eau pure contenant 770 mg (4,38 mMol, 4 eq.) d’acide ascorbique répondant à la formule chimique suivante :
De préférence, le mélange s’effectue à une température inférieure à 298,15 °K (soit 25°C), et modérément agité, sous atmosphère inerte (sous gaz argon) et à l’abri de la lumière afin d’éviter l’oxydation de l’acide ascorbique. Au bout d’une heure on ajoute 10 mL (10 éq.) d’eau pour achever la dissolution du camphorate de zinc en laissant le mélange sous agitation modérée encore pendant 2 heures.
Les quantités exprimées en « éq. » correspondent aux équivalents molaires ou mL/mmol par rapport au camphorate de zinc.
Durant l’agitation, soit au total pendant 3 heures, la totalité du camphorate de zinc se dissout et réagit avec l’acide ascorbique dissout pour former alors un composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc en solution.
Ledit composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc dissout est récupéré sous forme de poudre par lyophilisation à froid, c’est-à-dire en extrayant le solvant (eau) sous vide et à froid.
Une récupération par chauffage et évaporation du solvant est à proscrire pour éviter l’oxydation de l’acide ascorbique.
Le composé obtenu est à conserver à l’abri de la lumière.
Ledit composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc sera mentionné simplement sous le terme « ascorbo-camphorate» ou sous l’abréviation « AC » dans la suite de la description de l’exemple.
La proportion moléculaire de la partie du composé provenant de l’acide ascorbique par rapport à celle provenant du camphorate peut être déterminée par exemple par des analyses RMN du proton1H. Ces analyses par RMN du proton1H de la poudre récupérée montrent que quatre moles d’acide ascorbique pour une mole de camphorate de zinc conduisent à un composé stable présentant un signal vers 4,65ppm qui lui est typique.
représente une molécule de camphorate de zinc et une molécule d’acide ascorbique dont les atomes respectifs notamment de carbone porteurs de protons H sont numérotés en référence à l’analyse RMN 1H dudit composé décrite ci-après.
Les spectres RMN ont été réalisés sur un spectromètre BRUCKER Avance DPX-300 (aimant de 7,05 Tesla) équipé d’une sonde de mesure QNP 1H/13C/31 de 5 mm de diamètre, avec gradient Z et lock2H.
L’analyse RMN du proton1H a été conduite sur une solution de 15 mg de produit dans 500 µL de D2O (eau deutérée à 99,8%).
Le tableau 1 suivant répertorie les déplacements chimiques des protons1H (en ppm) pour des échantillons de l’acide camphorique et de l’acide ascorbique seuls, et du composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc obtenu, étudiés par RMN du proton1H à 27°C, les numéros des atomes indiqués dans la première colonne du tableau correspondant respectivement à un atome de carbone lié au proton considéré, selon la numérotation portée sur les structures des molécules respectives de l’acide ascorbique (déplacements en deuxième colonne du tableau) et de l’acide camphorique (déplacements en troisième colonne du tableau) représentées sur la figure 1. Les déplacements pour le composé « AC » sont mentionnés en quatrième colonne du tableau en lien avec les atomes issus des molécules d’acide ascorbique et d’acide camphorique.
N° des atomes δppm
Acide ascorbique		 δppm
Acide camphorique		 δppm
Composé « AC »
5 4,85, d, 1H
4,65
6 3,95, td, 1H 3,95
7 3,64, d, 2H 3,65
- - - -
5 2,83, dd, 1H 2,78
3 2,31, d, d, d, 1H 2,30
4 1,82, m, 2H 1,82
3 1,46, d, d, d, 1H 1,44
10 1,17, s, 3H 1,14
8 1,14, s, 3H 1,11
9 0,76, s, 3H 0,73

s :singulet ; d : doublet ; dd : doublet de doublet ; ddd doublet de doublet de doublet, ; td : triplet de doublets.
Le signal vers 4,65ppm est typique du composé « AC ».
On peut vérifier le nombre de molécules d’acide ascorbique ayant interagit avec une molécule de camphorate de zinc, c’est-à-dire le rapport molaire acide ascorbique/camphorate, en calculant un rapport d’intégration par comparaison de la valeur d’intégration correspondant au proton H de l’acide ascorbique donnant un signal à 3,95 ppm, intégrant pour un proton (proton unique porté par le carbone numéroté 6 de l’acide ascorbique sur la figure 1, à la valeur d’intégration du groupe méthyle donnant un signal vers 0,73 ppm du camphorate intégrant pour trois protons (protons portés par le carbone numéroté 9 de l’acide camphorique sur la figure 1).
Ainsi compte tenu des incertitudes expérimentales, quand le rapport molaire acide ascorbique/camphorate est déterminé par analyse RMN du proton1H par calcul dudit rapport d’intégration (H à 3,95 ppm de l’acide ascorbique ; 3H du camphorate vers 0,73ppm) comme décrit ci-dessus, on considère que le composé obtenu est comme présentant un rapport molaire acide ascorbique/camphorate égal à 4, et donc conforme, si ce rapport d’intégration est compris entre environ 3,5 et 4,5.
Différents essais en lien avec des analyses par RMN du proton1H comme indiquées ci-dessus ont de plus montré que la synthèse du composé « AC » lors du mélange de l’acide ascorbique avec le camphorate de zinc est favorisée en milieu relativement dilué, soit préférentiellement pour un volume d’eau situé entre 20 et 40 équivalents mL/mmol , en particulier entre 20 et 30 équivalents mL/mmol, par rapport au camphorate de zinc. On obtient alors directement, sans la nécessité d’une étape de purification ultérieure, un composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc stable par réaction de quatre moles d’acide ascorbique pour 1 mole de camphorate de zinc.
Le composé peut néanmoins former un certain nombre d’hydrates.
Cytotoxicité du composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc obtenu:
La cytotoxicité dudit composéascorbo-camphorate de zincest contrôlée grâce au test au MTT de la société Sigma. L’étude de cytotoxicité est conduite d’une part avec des cellules Vero, et d’autre part avec des cellules diploïdes humaines MRC5 (de type fibroblastes embryonnaires humains). Des cultures de ces cellules sont traitées avec des compositions contenant ledit ascorbo-camphorate en solution dans l’eau, à différents taux de dilution, et le réactif MTT est alors ajouté à chacune des solutions. Ce dernier forme des cristaux avec les cellules vivantes hautement métaboliques. L’absorbance à 490 nm des cristaux dissous correspond au nombre de cellules vivantes. Par comparaison avec des cellules de même lignée, cultivées mais non traitées, on obtient un pourcentage de survie révélant la toxicité dudit composé ascorbo-camphorate.
Pour cela on réalise une solution mère ayant une molarité de 0,05155 M en dissolvant 0,5 g dudit ascorbo-camphorate obtenu ci-dessus dans 10ml d’eau.
On dilue ladite solution mère à différents taux, de un dixième à un milliardième de sorte qu’on obtient une série de solutions diluées ayant des molarités respectives comprise entre 5,15.10-5µM et 5155 µM.
Dans une première série de tests, on vérifie la cytotoxicité dudit ascorbo-camphorate sur des cellules Vero avec ces solutions à des taux de dilution allant du dixième au milliardième.
Les tests sur la viabilité des cellules Vero montrent que le pourcentage de cellules vivantes restantes est supérieur ou égal à 50 % pour une dilution au cinquantième. Les solutions tolérables par les cellules Vero sont donc celles ayant un taux de dilution compris entre un cinquantième et un milliardième (valeur incluse), ou autrement dit les solutions ayant une molarité en ledit ascorbo-camphorate comprise entre 5,15.10-5µM (valeur incluse) et 1031 µM (valeur exclue).
Dans une deuxième série de tests, on vérifie la cytotoxicité dudit ascorbo-camphorate sur des cellules MRC5 avec les solutions à des taux de dilution allant de 0 au 100 millionièmes.
Les tests sur la viabilité des cellules MRC5 montrent que le pourcentage de cellules vivantes restantes est supérieur ou égal à 50 % pour une dilution au dixième. Les solutions tolérables par les cellules MRC5 sont donc celles ayant un taux de dilution compris entre un dixième et 100 millionièmes (valeur incluse), ou autrement dit les solutions ayant une molarité en ledit ascorbo-camphorate comprise entre 5,15.10-4µM (valeur incluse) et 5155 µM (valeur exclue).
Evaluation pré-clinique de l’activité antivirale in vitro dudit tetra-ascorbo-camphorate de zinc obtenu contre le virus HPV-16:
L’évaluation de l’activité antivirale dudit composé de dérivé terpénique « AC »in vitrocontre le virus papillomavirus HPV-16, est réalisée par des tests de neutralisation de l’entrée des pseudo-particules virales (VLP-16), du virus HPV-16 qui seront inoculées à des cellules Cos-7, prétraitées ou traitées contemporainement à l’inoculation des VLP16 par des solutions de concentrations croissantes en ledit composé ascorbo-camphorate (AC).
Les solutions aqueuses dudit composé ascorbo-camphorate qui ont été décrites ci-dessus, présentant une cytotoxicité tolérable, ayant un taux de dilution compris entre 1/102(un centième) et 1/108(100 millionièmes), c’est-à-dire ayant une molarité en ledit ascorbo-camphorate comprise entre 5,15.10-4µM (valeur incluse) et 515,5 µM (valeur incluse), sont retenues pour cette évaluation.
Les virus HPV-16 ne se cultivant pas, il est connu d’utiliser des pseudovirions pour tester de potentiels agents anti-viraux. La méthodologie de production de ces vecteurs est connue en soi, et ne fait pas l’objet de la présente invention.
La production des VLP peut par exemple s’effectuer comme décrit dans l’art antérieur [ voir par exemple Buck CB, Thompson CD.Production of papillomavirus-based gene transfer vectors. Curr Protocol Cell Biol. 2007 Dec; Chapter 26:Unit 26.1.] en utilisant le protocole de production de vecteurs (pseudovirions) à base de papillomavirus, édité par le Laboratoire d'oncologie cellulaire du Centre de recherche sur le cancer (National Cancer Institute, National Institute of Health, Rockville Pike, Bethesda, Maryland, USA), ( voir par exemple le site internet : https://ccrod.cancer.gov/confluence/display/LCOTF/PseudovirusProduction). En bref selon ce protocole, des cellules 293TT sont transfectées avec chacun des vecteurs plasmidiques que forment les protéines structurales L1/L2, et incubées pendant 72 heures à +37°C. Les cellules sont ensuite lysées dans un tampon (0,5% Nonidet™ P 40 Substitute/1X PBS, Sigma-Aldrich, Saint-Louis, Missouri, USA) avant d'être soniquées trois fois pendant des cycles de 15 secondes pour briser la membrane nucléaire et libérer ainsi les VLP. Les extraits nucléaires obtenus sont urifiés par ultracentrifugation à 30 500 tr/min (rotor SW 32 Ti Swinging-Bucket, Beckman Coulter, Inc., Brea, CA, USA) pendant 26 heures à +4°C dans un gradient de chlorure de césium (ClCs). La fraction contenant les VLP est récupérée et diluée dans 300µL de solution saline tamponnée au phosphate (DPBS) de Dulbecco (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) et stockée à +4°C avant d'être utilisée pour des analyses sérologiques.
Les pseudovirions peuvent en outre s’acheter directement auprès de laboratoires connus dans le métier.
Dans le cas des présents tests, les pseudovirions ont été produits à l’Université François Rabelais de Tours (France), sous la direction du Professeur A. Touzet. En résumé, les pseudo-particules virales VLP-16 ont été produites par transfection de plasmides purifiées contenant les protéines structurales L1 et L2 des capsomères du HPV-16, et transportant un gène codant pour la luciférase, gène marqueur, sur culture de cellules de la lignée cellulaire 293. Les VLP-16 ont été recueillis par lyse des noyaux, leur purification s’effectuant par ultracentrifugation en gradient de CeCl2.
Le contrôle positif du test de neutralisation utilise un inoculum de VLP-16 purifié, pré-incubé avec des anticorps purifiés contre les HPV (incubation pendant 1 heure dudit lysat nucléaire des VLP dans une solution d’anticorps anti-HPV en milieu de culture DMED). Ces anticorps anti-HPV servent de contrôle positif dans le test de neutralisation en plaque de l’infection des cellules Cos-7 par des VLP-16.
La culture des cellules de la lignée cellulaire Cos-7 est réalisée sur microplaque 96 puits, 5%CO2 et 98%H2O, à 37°C.
On réalise l’inoculation des cellules Cos-7 comme suit: le mélange formant l’inoculum est ajouté dans les puits contenant les nappes confluentes de Cos-7, avec mise en incubation pendant 72 heures à 37°C, 5%CO2 et 98%H2O, puis on lave et on élimine le surnageant de ce mélange.
On récupère les cellules Cos-7 ayant éventuellement internalisé les VLP exprimant la luciférase. Les cellules Cos-7 sont alors lysées ; puis le substrat (lucéférine) du gène rapporteur (luciférase) est ajouté avec incubation à l’obscurité, pour lecture en utilisant un luminomètre.
On révèle ainsi l’efficacité du traitement par luminométrie (mesure de la densité optique, du fait de la réaction de bioluminescence due à la luciférase, cette méthode étant connue en soi. L’absorbance (densité optique) diminue proportionnellement à l’efficacité de la neutralisation par le composé ascorbo-camphorate.
Les témoins positifs consistent i) en des puits pourvus de Cos-7 qui seront exposés à des VLP-16 sans pré-incubation avec le principe actif à tester « AC ; et ii) en une molécule du laboratoire de type lectine connue pour inhiber l’infection des cellules Cos-7 par des VLP.
est un diagramme à barres verticales regroupant les résultats de neutralisation des pseudo-virions VLP-16 (notés aussi PsV-16) par le composé « AC » testé sur des cellules Cos-7, les cellules Cos-7 ayant été pré-traitées par ledit composé « AC » avant inoculation des VLP-16; et par comparaison à des contrôles sur cellules témoins T, par mesure de la densité optique DO sur les pseudo-virions exprimant la luciférase, et en fonction de la dilution dudit composé « AC ». A noter que pour plus de clarté de lecture sur le diagramme les dilutions du composé « AC » sont écrites avec l’inverse du quantième du taux de dilution, par exemple une dilution au centième est écrite 10². Les taux de dilution de la solution du composé « AC » vont de 1/108 à 1/10².
L’inhibition de l’internalisation des VLP-16 par le composé ascorbo-camphorate comprend une phase de plateau caractérisée par un effet neutralisant assez faible mais constant, avec l’augmentation de la concentration du composé ascorbo-camphorate dans le milieu, puis on observe une inhibition totale de l’internalisation des VLP-16 à la dilution du composé ascorbo-camphorate de 1/10² (soit une molarité de 515,5 µM en composé « AC »).
Ces résultats montrent clairement que la neutralisation en plaque des cellules Cos-7 a très bien fonctionné (témoin lectine inhibiteur positif). ors du prétraitement des cellules Cos-7 avec le composé « AC » avant inoculation des VLP-16, ledit composé « AC » inhibe de 30 à 40% la pénétration des VLP-16 dans les cellules Cos7 par rapport aux contrôles des cellules témoin Cos-7 infectées par des VLP-16 non traités par le composé « AC ».
est un diagramme à barres verticales regroupant les résultats de neutralisation des pseudo-virions VLP-16 (notés aussi PsV-16) par le composé « AC » testé sur des cellules Cos-7, l’inoculation des cellules Cos-7 par les VLP-16 étant réalisée de façon contemporaine à l’ajout dudit composé « AC », et par comparaison à des contrôles sur cellules témoins T, par mesure de la densité optique DO sur les PsV-16 exprimant la luciférase, et en fonction de la dilution dudit composé « AC ». A noter que pour plus de clarté de lecture sur le diagramme les dilutions du composé « AC » sont écrites avec l’inverse du quantième du taux de dilution, par exemple une dilution au centième est écrite 10². Les taux de dilution de la solution du composé « AC » vont de 1/108 à 1/10² .
Ces résultats montrent que l’inoculation des cellules Cos-7 par les VLP-16 de façon contemporaine à l’ajout du composé « AC » permet d’obtenir une inhibition jusqu’à 33% de la pénétration des VLP-16 dans les cellules Cos-7, par rapport aux contrôles des cellules Cos 7 infectées par des VLP-16 non traités par le composé « AC », les 33% étant obtenus pour une concentration dudit composé ascorbo-camphorate à la dilution 1/103 (molarité de 51,5µM en composé). On observe une inhibition totale de l’internalisation des VLP-16 à la dilution du composé ascorbo-camphorate de 1/10² (soit une molarité de 515,5 µM en composé « AC »).
Cette inhibition par ajout du composé « AC » de façon contemporaine à l’inoculation paraît moins importante que lors du prétraitement des cellules Cos-7 avec le composé « AC » avant inoculation des VLP-16, ce qui suggère un mécanisme d’inhibition très précoce de la pénétration des pseudo-particules virales dans les cellules Cos-7.
De plus selon l’invention, la stabilité dudit composé tetra-ascorbo-camphorate de zinc permet de fournir un composé qui comprend une quantité active fiable et répétitive du principe actif, notamment du principe majeur qui repose sur le camphorate.

Claims (11)

  1. Composition comprenant au moins un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement préventif et/ou curatif d’une infection impliquant au moins un papillomavirus, notamment au moins un papillomavirus humain.
  2. Composition selon la revendication 1, pour son utilisation dans le traitement préventif ou curatif d’une infection impliquant au moins un papillomavirus oncogène, en particulier du génotype HPV-16 ou du génotype HPV-18.
  3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit composé ascorbo-camphorate métallique est soluble dans un solvant aqueux.
  4. Composition selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit composé ascorbo-camphorate métallique est un composé tetra-ascorbo-camphorate métallique.
  5. Composition selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ledit composé ascorbo-camphorate métallique comprend un ion métallique choisi parmi ceux des métaux du groupe comprenant le zinc, le cuivre et le magnésium.
  6. Composition selon les revendications 4 et 5, caractérisée en ce que ledit composé est le tetra-ascorbo-camphorate de zinc.
  7. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisée en ce que ladite composition comprend un solvant aqueux physiologiquement acceptable, en particulier ledit solvant est constitué par de l’eau.
  8. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu’elle comprend un excipient physiologiquement acceptable adapté pour la conditionner sous une forme galénique pour une application sur la peau et/ou les muqueuses.
  9. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 ou 8, caractérisée en ce qu’elle est conditionnée sous une forme galénique solide.
  10. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 9 caractérisée en ce qu’elle comprend au moins un excipient physiologiquement acceptable adapté pour la conditionner dans une forme galénique pour un usage par voie vaginale, en particulier en un ovule ou une capsule.
  11. Composition selon la revendication 6 ou la revendication 6 et l’une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisée en ce que ledit composé est obtenu en mélangeant de l’acide ascorbique à du camphorate de zinc par ajout du camphorate de zinc sous forme de poudre à une solution aqueuse d’acide ascorbique dans un rapport molaire acide ascorbique/camphorate de zinc égal à 4 , le mélange étant effectué en milieu dilué correspondant à une quantité d’eau comprise entre 20 et 40 équivalents mL/mmol par rapport au camphorate de zinc, en particulier entre 20 et 30 équivalents mL/mmol, le mélange étant maintenu sous agitation, et de préférence sous atmosphère inerte et à l’abri de la lumière, jusqu’à dissolution totale du camphorate de zinc.
FR2005326A 2020-05-20 2020-05-20 Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus Pending FR3110395A1 (fr)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR2005326A FR3110395A1 (fr) 2020-05-20 2020-05-20 Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus
PCT/FR2021/050897 WO2021234299A1 (fr) 2020-05-20 2021-05-20 Composition comprenant un compose ascorbo-camphorate metallique pour son utilisation dans le traitement des infections causees par papillomavirus
US17/991,581 US20230114627A1 (en) 2020-05-20 2022-11-21 Composition comprising a metal ascorbo-camphorate compound and method for prevention and/or treatment of papillomavirus infections

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR2005326 2020-05-20
FR2005326A FR3110395A1 (fr) 2020-05-20 2020-05-20 Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
FR3110395A1 true FR3110395A1 (fr) 2021-11-26

Family

ID=72088316

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR2005326A Pending FR3110395A1 (fr) 2020-05-20 2020-05-20 Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20230114627A1 (fr)
FR (1) FR3110395A1 (fr)
WO (1) WO2021234299A1 (fr)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999015630A1 (fr) 1997-09-22 1999-04-01 Inserm (Institut National De La Sante Et De Virus artificiels derives de papillomavirus, et leurs utilisations, notamment en therapie genique
FR2908660A1 (fr) 2006-11-17 2008-05-23 Gombert Bernard Lucien Composition terpenique anti-microorganisme

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999015630A1 (fr) 1997-09-22 1999-04-01 Inserm (Institut National De La Sante Et De Virus artificiels derives de papillomavirus, et leurs utilisations, notamment en therapie genique
FR2908660A1 (fr) 2006-11-17 2008-05-23 Gombert Bernard Lucien Composition terpenique anti-microorganisme
WO2008068427A2 (fr) * 2006-11-17 2008-06-12 Gombert, Bernard, Lucien Composition terpénique anti-microorganisme

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANONYMOUS: "7 th World Conference on Pharmaceutical Science and Drug Manufacturing - Bioleagues", 18 March 2020 (2020-03-18), pages 1 - 85, XP055766729, Retrieved from the Internet <URL:https://bioleagues.com/downloads/book/Pharma-Dubai-UAE.pdf> [retrieved on 20210119] *
BUCK CBTHOMPSON CD: "Curr Protocol Cell Biol.", December 2007, article "Production of papillomavirus- based gene transfer vectors"
SAÃ DI HÃ LA ET AL: "Pre-clinical development as microbicide of zinc tetra-ascorbo-camphorate, a novel terpenoid derivative: Potent in vitro inhibitory activity against both R5- and X4-tropic HIV-1 strains without significant in vivo mucosal toxicity", AIDS RESEARCH AND THERAPY, BIOMED CENTRAL, LONDON, GB, vol. 5, no. 1, 3 June 2008 (2008-06-03), pages 10, XP021038176, ISSN: 1742-6405 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20230114627A1 (en) 2023-04-13
WO2021234299A1 (fr) 2021-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Vuong et al. Improved SARS-CoV-2 Mpro inhibitors based on feline antiviral drug GC376: Structural enhancements, increased solubility, and micellar studies
CN103450199B (zh) 茶氨酸修饰的咔啉酰氨基酸苄酯、其制备、抗肿瘤活性和应用
ES2829388T3 (es) Derivados de cis 3,4-dihidroxi-2-(3-metilbutanoil)-5-(-3-metilbutil)-4-(4-metilpentanoil)cyclopent-2-en-1-ona, composiciones sustancialmente puras enantioméricamente y métodos
TW201119651A (en) Pharmaceutical composition comprising indole compound
CN104869991B (zh) 防风草酸的药物组合物及其应用
FR2801216A1 (fr) Utilisation de derives d&#39;indirubine pour la fabrication de medicaments
TW201247199A (en) Compounds from mycelium of Antrodia cinnamomea and use thereof
WO2019222349A1 (fr) Composés pour le traitement d&#39;une infection par le virus de la dengue et d&#39;autres infections
FR3110395A1 (fr) Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par papillomavirus
CN113735814B (zh) 桃金娘酮类化合物及其在制备抗流感病毒药物中的应用
Gomez-Paloma et al. Chemistry and biology of anti-inflammatory marine natural products. Phospholipase A2 inhibitors
KR20150099655A (ko) 벤조일옥시신남알데히드-폴리에틸렌글리콜 결합 마이셀에 아연 프로토포르피린을 담지한 pH 감응형 항암 전구약물 및 이의 제조방법
WO2021234295A1 (fr) Composition comprenant un composé ascorbo-camphorate métallique pour son utilisation dans le traitement des infections causées par herpèsvirus
US20200283632A1 (en) Process for preparing indigo carmine
JP3333916B2 (ja) エイズ治療剤
KR101546802B1 (ko) 붕산, 구연산, 아연, 알부민 및 비타민 c를 포함하는 파필로마 바이러스에 대한 항바이러스 피부외용제 조성물
WO2019119298A1 (fr) Utilisation du cannabidiol ou d&#39;un extrait de cannabis dans la préparation de produits de blanchiment de la peau
EP3237015B1 (fr) Derives hydroxybisphosphoniques hydrosolubles de la doxorubicine
CH637650A5 (fr) Procede de preparation d&#39;un acide chromone carboxylique.
CN113666895B (zh) 卤代2-苯并[c]呋喃酮类化合物及其应用
FR3062793A1 (fr) Utilisation de 2,5-dicetopiperazines en tant qu&#39;agents cosmetiques
WO2023185763A1 (fr) Composé peptidomimétique, procédé de préparation, composition pharmaceutique et utilisation associée
WO2022228581A1 (fr) Application de sorbitol 1,5-déshydraté dans la préparation de médicaments pour le traitement et la prévention de maladies provoquées par le virus du sars-cov-2
EP1509520B1 (fr) Utilisation de derives des benzo(c)quinoliziniums pour le traitement des pathologies liees aux phenomenes de constriction des cellules musculaires lisses
EP2854758A1 (fr) Composition pharmaceutique d&#39;un inhibiteur du virus du papillome

Legal Events

Date Code Title Description
PLFP Fee payment

Year of fee payment: 2

PLSC Publication of the preliminary search report

Effective date: 20211126

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 3

RX Complete rejection

Effective date: 20230706