FR2974580A1

FR2974580A1 - CONTAINER FOR IN VITRO CULTIVATION OF PLANT MATERIAL IN STERILE CONDITIONS BY TEMPORARY IMMERSION

Info

Publication number: FR2974580A1
Application number: FR1153642A
Authority: FR
Inventors: Herve Etienne; Frederic Georget; Benoit Bertrand
Original assignee: CT DE COOPERATION INTERNATIONALE EN RECH AGRONOMIQUE POUR LE DEV C I R A D; Centre de Cooperation Internationalel en Recherche Agronomique pour le Development CIRAD
Current assignee: CT DE COOPERATION INTERNATIONALE EN RECH AGRONOMIQUE POUR LE DEV C I R A D; Centre de Cooperation Internationalel en Recherche Agronomique pour le Development CIRAD
Priority date: 2011-04-28
Filing date: 2011-04-28
Publication date: 2012-11-02
Anticipated expiration: 2031-04-28
Also published as: BR112013027846B8; BR112013027846B1; MX357396B; AR086142A1; WO2012146872A1; FR2974580B1; BR112013027846A2; MX2013012473A

Abstract

La présente invention concerne un récipient pour la culture in vitro de matériel végétal en conditions stériles, par immersion temporaire, lequel récipient (1) comprend, d'une part, une chambre supérieure (3), destinée à contenir ledit matériel végétal (M) à cultiver, et une chambre inférieure (4), destinée à contenir un liquide nutritif (L) et, d'autre part, des moyens (5) pour le transfert temporaire d'au moins une partie dudit liquide nutritif (L) depuis ladite chambre inférieure (4) jusqu'à ladite chambre supérieure (3). Selon l'invention, la face inférieure (3c) de la chambre supérieure (3), destinée à porter ledit matériel végétal, présente une surface horizontale (S) comprise entre 0,02 et 0,07 m , et la face latérale (3a) de la chambre supérieure (3) présente une hauteur (H) comprise entre 40 et 130 mm. Cette combinaison de caractéristiques structurelles permet d'éviter les phénomènes de compactage et de stratification lors de la culture du matériel végétal.The present invention relates to a container for the in vitro culture of plant material under sterile conditions, by temporary immersion, which container (1) comprises, on the one hand, an upper chamber (3), intended to contain said plant material (M) to cultivate, and a lower chamber (4) for containing a nutrient liquid (L) and secondly means (5) for the temporary transfer of at least a portion of said nutrient liquid (L) from said lower chamber (4) to said upper chamber (3). According to the invention, the lower face (3c) of the upper chamber (3), intended to carry said plant material, has a horizontal surface (S) of between 0.02 and 0.07 m, and the lateral face (3a ) of the upper chamber (3) has a height (H) of between 40 and 130 mm. This combination of structural characteristics makes it possible to avoid the phenomena of compaction and stratification during the cultivation of the plant material.

Description

L'invention concerne la culture de matériel végétal, et particulièrement un récipient pour la culture in vitro de matériel végétal, par immersion temporaire, en conditions stériles. La multiplication des végétaux par culture in vitro, en conditions stériles, est une pratique courante dans le domaine de l'horticulture et de l'agriculture. Cette pratique offre de nombreux avantages, mais génère un coût de main d'oeuvre relativement élevé qui est lié à la fréquence des manipulations nécessaires et à leur haute technicité. Les techniques de culture in vitro en milieu nutritif liquide permettent de limiter cette charge. Ce type de culture présente de nombreux avantageuses, malheureusement contrebalancés par des inconvénients importants, essentiellement liés à des problèmes d'asphyxie de la culture et/ou de forces de friction lorsque le matériel végétal est en permanence immergé. The invention relates to the cultivation of plant material, and particularly a container for the in vitro culture of plant material, by temporary immersion, under sterile conditions. The multiplication of plants by in vitro culture under sterile conditions is a common practice in the field of horticulture and agriculture. This practice offers many advantages, but generates a relatively high labor cost which is related to the frequency of the necessary manipulations and their high technicality. In vitro culture techniques in a liquid nutrient medium make it possible to limit this charge. This type of culture has many advantages, unfortunately counterbalanced by significant disadvantages, mainly related to problems of asphyxiation of the crop and / or friction forces when the plant material is permanently immersed.

Pour pallier à ces inconvénients, il a été développé une technique dite d'« immersion temporaire », qui consiste, comme son nom le suggère, à immerger de façon temporaire le matériel végétal en culture (expiants, cellules, tissus, etc.) dans un milieu nutritif. Compte-tenu de phénomènes de flottaison ou de phénomènes de croissance, cette immersion dans le milieu nutritif peut être partielle ou totale. Pendant la phase de repos, qui constitue la plus longue période, le matériel cultivé est émergé et sans mouvement ; mais un film de milieu nutritif, retenu sur le matériel végétal par des tensions de surface à l'issue de la phase précédente d'immersion, maintient ce matériel humidifié. To overcome these drawbacks, a so-called "temporary immersion" technique has been developed, which consists, as its name suggests, in temporarily immersing the plant material in culture (explants, cells, tissues, etc.) in a nutrient medium. Given flotation phenomena or growth phenomena, this immersion in the nutrient medium can be partial or total. During the rest period, which is the longest period, the cultivated material is emerged and without movement; but a film of nutrient medium, retained on the plant material by surface tensions at the end of the previous immersion phase, keeps this material moistened.

Ce procédé permet ainsi de bénéficier des avantages de la culture in vitro en milieu liquide, tout en évitant les problèmes d'asphyxie et de friction. Il permet aussi d'obtenir une qualité de développement de la culture qui est particulièrement intéressante en comparaison de celle obtenue par d'autres procédés de culture in vitro. This method thus makes it possible to benefit from the advantages of in vitro culture in a liquid medium, while avoiding problems of asphyxiation and friction. It also makes it possible to obtain a quality of development of the culture which is particularly interesting in comparison with that obtained by other in vitro culture methods.

Un récipient adapté pour cette technique de culture par immersion temporaire est par exemple décrit dans le document FR-2 730 743, commercialisé à ce jour sous la dénomination « RITA ». Le récipient RITA comprend deux chambres superposées, à savoir : une chambre supérieure destinée à recevoir le matériel végétal, et une chambre inférieure destinée à contenir le milieu nutritif sous une forme liquide. Les dimensions de la chambre supérieure confèrent à cette dernière une forme allongée verticalement, avec une hauteur et un diamètre de l'ordre de 60 mm et 108 mm, respectivement ; le rapport surface horizontal (en m2)/ hauteur (en m) est ainsi de l'ordre de 0,15. Ce récipient comprend un corps unitaire formant une pièce extérieure fermée par un couvercle, et un panier pour la séparation des deux chambres. Une entrée située sur le couvercle permet l'alimentation d'une surpression conduite dans la chambre inférieure par un tube débouchant dans une cloche. La surpression provoque une remontée d'une partie du milieu nutritif depuis la chambre inférieure jusqu'à la chambre supérieure, assurant une immersion et un brassage du matériel végétal ; l'arrêt de la surpression permet le retour, par gravité, du milieu nutritif dans la chambre inférieure. L'immersion du matériel végétal est ainsi réalisée par déplacement du milieu nutritif, poussé par une surpression, et non par le déplacement mécanique du panier support. Cette absence de mouvements mécaniques accroît la fiabilité du dispositif. A suitable container for this temporary immersion culture technique is for example described in document FR-2,730,743, marketed to date under the name "RITA". The RITA container comprises two superimposed chambers, namely: an upper chamber for receiving the plant material, and a lower chamber for containing the nutrient medium in a liquid form. The dimensions of the upper chamber give the latter a vertically elongated shape, with a height and a diameter of about 60 mm and 108 mm, respectively; the ratio of horizontal surface area (in m2) to height (in m) is thus of the order of 0.15. This container comprises a unitary body forming an outer part closed by a lid, and a basket for separating the two chambers. An inlet on the lid allows the supply of a positive pressure conducted in the lower chamber by a tube opening into a bell. The overpressure causes a rise of a portion of the nutrient medium from the lower chamber to the upper chamber, ensuring immersion and mixing of the plant material; stopping the overpressure allows the return, by gravity, the nutrient medium in the lower chamber. The immersion of the plant material is thus achieved by displacement of the nutrient medium, pushed by an overpressure, and not by the mechanical movement of the support basket. This absence of mechanical movements increases the reliability of the device.

Ce récipient permet une culture in vitro en conditions stériles, limitant le risque d'infection, tout en assurant une bonne fiabilité de la culture durant un nombre important de cycles d'immersion. Un tel récipient est également intéressant sur le plan de l'entretien, du démontage et du lavage ; il est notamment facilement stérilisable entre deux cycles d'utilisation. This container allows in vitro culture in sterile conditions, limiting the risk of infection, while ensuring good reliability of the culture during a significant number of immersion cycles. Such a container is also interesting in terms of maintenance, disassembly and washing; it is particularly easily sterilizable between two cycles of use.

Cependant, en pratique, les inventeurs ont observé que, dans la chambre supérieure, le matériel végétal est présent sous une forme relativement compacte, ce qui est défavorable au brassage et à une bonne exposition à la lumière. However, in practice, the inventors have observed that in the upper chamber, the plant material is present in a relatively compact form, which is unfavorable to stirring and good exposure to light.

Cette biomasse a en plus tendance à se développer d'une manière hétérogène sur la hauteur de la chambre supérieure, entraînant un phénomène de stratification. En particulier, la partie supérieure de la biomasse, plus exposée à la lumière et peu contrainte physiquement, se développe plus vite que la partie centrale de cette biomasse, comprimée physiquement et gênée pour son accès à la lumière. Pour ces raisons, le matériel végétal évolue différemment suivant sa position dans la biomasse, ce qui crée une stratification avec un gradient de développement croissant du bas vers le haut. This biomass also tends to develop in a heterogeneous manner over the height of the upper chamber, resulting in a stratification phenomenon. In particular, the upper part of the biomass, more exposed to light and little physical constraint, develops faster than the central part of this biomass, physically compressed and hindered for its access to light. For these reasons, the plant material evolves differently according to its position in the biomass, which creates a stratification with a gradient of development from bottom to top.

Or, les inventeurs sont parvenus à déterminer que, de manière surprenante, ces phénomènes de compactage et de stratification sont liés à la forme et au volume inadaptés de la chambre supérieure du récipient de l'état de la technique. Pour remédier à ces inconvénients, les inventeurs ont développé un récipient dont la chambre supérieure est significativement plus large que la chambre supérieure équipant le récipient de l'art antérieur décrit dans le document FR-2 760 743 précité, tout en conservant une hauteur similaire. Dans ce contexte, la demanderesse propose une nouvelle structure pour un récipient de culture in vitro de matériel végétal, par immersion temporaire, fonctionnant d'une manière similaire à celle décrite dans le document FR-2 730 743. Le récipient correspondant comprend deux chambres superposées, à savoir - une chambre supérieure, destinée à contenir lesdits tissus végétaux à cultiver, et - une chambre inférieure, destinée à contenir un liquide nutritif, lesquelles chambres sont chacune délimitées par une face latérale, par une face supérieure et par une face inférieure, lequel récipient comporte encore des moyens pour le transfert temporaire d'au moins une partie (avantageusement de la quasi-totalité ou de la totalité) dudit liquide nutritif depuis ladite chambre inférieure jusqu'à ladite chambre supérieure. Et conformément à la présente invention, la face inférieure de la chambre supérieure, destinée à porter le matériel végétal, présente une surface horizontale comprise entre 0,02 et 0,07 m2 ; en outre, la face latérale de la chambre supérieure présente une hauteur comprise entre 40 et 130 mm. Le rapport surface horizontale (en m2)/ hauteur (en m) de la chambre supérieure de récipient selon l'invention est ainsi compris entre, environ, 0,50 et1,75. Par « surface horizontale » de la face inférieure de la chambre supérieure, on entend la surface délimitée par le contour de cette face inférieure, cela sur un plan horizontal passant par ce contour. Cette surface horizontale correspond encore à l'encombrement horizontal de cette face inférieure de la chambre supérieure. Cette surface horizontale est, de préférence, comprise entre 0,03 et 0,04 m2, et de préférence encore de l'ordre de 0,037 m2. Un tel récipient permet un étalement optimal de la biomasse dans la chambre supérieure, avec moins de concurrence pour l'accès à la lumière. However, the inventors have managed to determine that, surprisingly, these compaction and lamination phenomena are related to the unsuitable shape and volume of the upper chamber of the container of the state of the art. To overcome these drawbacks, the inventors have developed a container whose upper chamber is significantly wider than the upper chamber equipping the container of the prior art described in document FR-2,760,743 mentioned above, while maintaining a similar height. In this context, the Applicant proposes a new structure for an in vitro culture container of plant material, by temporary immersion, operating in a manner similar to that described in document FR-2 730 743. The corresponding container comprises two superimposed chambers. , namely - an upper chamber, intended to contain said plant tissues to be cultivated, and - a lower chamber, intended to contain a nutritive liquid, which chambers are each delimited by a lateral face, an upper face and a lower face, which container further comprises means for the temporary transfer of at least a portion (preferably substantially all or all) of said nutrient liquid from said lower chamber to said upper chamber. And according to the present invention, the underside of the upper chamber, intended to carry the plant material, has a horizontal surface between 0.02 and 0.07 m2; in addition, the lateral face of the upper chamber has a height of between 40 and 130 mm. The ratio of horizontal surface (in m2) to height (in m) of the upper container chamber according to the invention is thus between about 0.50 and 1.7. By "horizontal surface" of the lower face of the upper chamber is meant the surface delimited by the contour of this lower face, that on a horizontal plane passing through this contour. This horizontal surface still corresponds to the horizontal size of this lower face of the upper chamber. This horizontal surface is preferably between 0.03 and 0.04 m2, and more preferably of the order of 0.037 m2. Such a container allows optimal spreading of the biomass in the upper chamber, with less competition for access to light.

Ce récipient permet également un développement homogène et synchrone du matériel végétal, supprimant ainsi les phénomènes habituels de stratification. Selon une forme de réalisation préférée, la chambre supérieure présente une forme générale cylindrique, dont : - la face inférieure présente un rayon compris entre 75 et 150 mm, de préférence de l'ordre de 100 à 120 mm, et de préférence encore de l'ordre de 110 mm (c'est-à-dire un diamètre compris entre 150 mm et 300 mm, de préférence de l'ordre de 200 à 240 mm, et de préférence encore de l'ordre de 220 mm), et - la face latérale présente une hauteur comprise entre 50 et 90 mm, de préférence encore de l'ordre de 60 à 70 mm. This container also allows a homogeneous and synchronous development of the plant material, thus eliminating the usual phenomena of stratification. According to a preferred embodiment, the upper chamber has a generally cylindrical shape, of which: the lower face has a radius of between 75 and 150 mm, preferably of the order of 100 to 120 mm, and more preferably order of 110 mm (i.e. a diameter of between 150 mm and 300 mm, preferably of the order of 200 to 240 mm, and more preferably of the order of 220 mm), and the lateral face has a height of between 50 and 90 mm, more preferably of the order of 60 to 70 mm.

Dans le cas d'une telle face inférieure de contour circulaire, on peut encore utiliser le rapport diamètre / hauteur de la chambre supérieure pour définir l'élargissement de la chambre supérieure du récipient. En l'occurrence, ce rapport est avantageusement bien supérieur à 1, de préférence compris entre 1,6 (150/90) et 6 (300/50), de préférence encore entre 2,2 (200/90) et 4,8 (240/50), et encore entre 3,14 (220/70) et 3,66 (220/60). Selon une caractéristique de réalisation, la surface de la face inférieure de la chambre supérieure est supérieure à la surface de la face 1 o inférieure de la chambre inférieure et à la surface de la face supérieure de la chambre inférieure. Selon une forme de réalisation avantageuse, le récipient comporte une enveloppe extérieure délimitée par une bordure inférieure à laquelle se raccorde un élément de fond et par une bordure supérieure délimitant une 15 ouverture obturée hermétiquement par un couvercle amovible ; l'enveloppe extérieure comporte deux parties, l'une inférieure et l'autre supérieure, séparées par une paroi intérieure intercalaire, lesdites parties inférieure et supérieure formant, respectivement, les faces latérales de la chambre inférieure et de la chambre supérieure, et ladite paroi intérieure intercalaire 20 formant la face supérieure de la chambre inférieure et au moins une partie, de préférence la quasi-totalité ou encore la totalité, de la face inférieure de la chambre supérieure. Dans ce cas, la paroi intérieure intercalaire appartient avantageusement à une pièce intérieure rapportée, coopérant de manière 25 hermétique avec l'enveloppe extérieure associée. Cette pièce intérieure rapportée comporte avantageusement une paroi latérale s'élevant depuis le contour de la paroi intérieure intercalaire pour former ensemble une structure en forme de panier, ladite paroi latérale épousant l'enveloppe extérieure sur au moins une partie, de préférence la 30 quasi-totalité ou encore la totalité, de la hauteur de sa partie supérieure. In the case of such a lower face of circular contour, it is still possible to use the diameter / height ratio of the upper chamber to define the widening of the upper chamber of the container. In this case, this ratio is advantageously well greater than 1, preferably between 1.6 (150/90) and 6 (300/50), more preferably between 2.2 (200/90) and 4.8 (240/50), and again between 3.14 (220/70) and 3.66 (220/60). According to an embodiment characteristic, the surface of the lower face of the upper chamber is greater than the surface of the lower face 1 o of the lower chamber and the surface of the upper face of the lower chamber. According to an advantageous embodiment, the container comprises an outer envelope delimited by a lower border to which a bottom element is connected and by an upper edge delimiting an opening closed hermetically by a removable cover; the outer casing has two parts, one lower and the other upper, separated by an intermediate inner wall, said lower and upper parts forming, respectively, the lateral faces of the lower chamber and the upper chamber, and said wall; inner insert 20 forming the upper face of the lower chamber and at least a portion, preferably substantially all or all, of the lower face of the upper chamber. In this case, the intermediate inner wall advantageously belongs to an inner insert, cooperating hermetically with the associated outer casing. This inner insert advantageously comprises a side wall rising from the contour of the intermediate inner wall to form together a basket-like structure, said side wall conforming to the outer casing on at least a portion, preferably substantially all or all of the height of its upper part.

Les parties supérieure et inférieure de l'enveloppe extérieure sont avantageusement reliées par une partie formant épaulement ; et une bande périphérique de la paroi intérieure intercalaire de la pièce intermédiaire rapportée repose sur ladite partie épaulement par le biais de moyens d'étanchéité. Selon encore une caractéristique de réalisation avantageuse, les moyens pour le transfert temporaire du liquide nutritif comportent - au moins un passage pour le raccordement hydrique des chambres supérieure et inférieure, et - des moyens pour l'introduction d'un gaz dans ladite chambre inférieure, de sorte à générer, d'une part, un cheminement d'une partie au moins (de préférence la quasi-totalité ou encore la totalité) du liquide nutritif depuis ladite chambre inférieure jusqu'à ladite chambre supérieure par une surpression en gaz dans ladite chambre inférieure et, d'autre part, un retour par gravité dudit liquide nutritif dans ladite chambre inférieure lors de l'arrêt de ladite surpression en gaz. Dans ce cas, le passage de raccordement entre les chambres consiste avantageusement en un conduit s'étendant sur la hauteur de la chambre inférieure, lequel conduit est muni d'au moins un orifice inférieur débouchant à proximité de la face inférieure de ladite chambre inférieure et d'au moins un orifice supérieure débouchant au niveau de la face inférieure de la chambre supérieure. Une partie au moins de la face inférieure de la chambre supérieure est alors avantageusement constituée par un organe de filtration obturant une réservation dans laquelle débouche le ou les orifices supérieurs du conduit de raccordement ; cet organe de filtration comporte avantageusement une pluralité d'orifices, pour la répartition du liquide nutritif, et le cas échéant du gaz de surpression, cheminant en direction de la chambre supérieure ; et la paroi intérieure intercalaire comporte avantageusement une partie centrale concave, ouverte du côté de la chambre supérieure et au niveau de laquelle est rapporté l'organe de filtration pour former la réservation. The upper and lower portions of the outer casing are advantageously connected by a shoulder portion; and a circumferential strip of the inner wall of the insert inserted resting on said shoulder portion by means of sealing means. According to another advantageous embodiment, the means for the temporary transfer of the nutritive liquid comprise - at least one passage for the water connection of the upper and lower chambers, and - means for introducing a gas into said lower chamber, so as to generate, on the one hand, a path of at least a portion (preferably almost all or all) of the nutrient liquid from said lower chamber to said upper chamber by a gas overpressure in said lower chamber and, secondly, a gravity return of said nutrient liquid in said lower chamber when stopping said gas overpressure. In this case, the connection passage between the chambers advantageously consists of a duct extending over the height of the lower chamber, which duct is provided with at least one lower orifice opening near the lower face of said lower chamber and at least one upper opening opening at the lower face of the upper chamber. At least a portion of the lower face of the upper chamber is then advantageously constituted by a filter member closing a reservation in which opens or the upper openings of the connecting duct; this filtering member advantageously comprises a plurality of orifices, for the distribution of the nutritive liquid, and optionally the booster gas, moving towards the upper chamber; and the intermediate inner wall advantageously comprises a concave central portion, open on the side of the upper chamber and at which the filter member is attached to form the reservation.

Ce conduit de raccordement se termine avantageusement par au moins deux orifices supérieurs, régulièrement répartis sur la périphérie dudit conduit. Encore selon cette caractéristique avantageuse, les moyens d'introduction de gaz dans la chambre inférieure consistent en un conduit débouchant au travers de sa face latérale et ménagé du côté de sa face supérieure. Selon une autre caractéristique de réalisation avantageuse, le récipient comporte (i) un couvercle muni d'au moins deux ailettes d'accrochage rentrantes, réparties sur sa périphérie, et (ii) une ouverture 1 o supérieure munie sur sa périphérie de portions de collerette. Ce couvercle rapporté sur ladite ouverture est manoeuvrable en rotation entre - une position verrouillée, dans laquelle chacune desdites ailettes d'accrochage se positionne en-dessous de l'une desdites portions de collerette, et - une position déverrouillée, dans laquelle lesdites ailettes 15 d'accrochage sont dissociées desdites collerettes. La présente invention est encore illustrée, sans aucunement être limitée, par la description suivante d'une forme de réalisation particulière, en relation avec les dessins annexés dans lesquels : - la figure 1 est une vue générale et en perspective du récipient selon 20 l'invention ; - la figure 2 représente schématiquement le récipient de la figure 1, selon un plan de coupe vertical ; - la figure 3 représente le récipient de la figure 1, d'une manière éclatée ; - la figure 4 montre de manière agrandie le détail IV de la figure 2, 25 correspondant à l'extrémité supérieure du conduit de raccordement hydrique située entre les chambres supérieure et inférieure ; - la figure 5 illustre de manière agrandie le détail V de la figure 2, correspondant aux moyens d'étanchéité ménagés entre l'enveloppe extérieure et le panier rapporté ; - la figure 6 représente de manière agrandie le détail VI de la figure 2, correspondant aux moyens d'étanchéité ménagés entre l'enveloppe extérieure et le couvercle amovible ; - les figures 7 et 8 illustrent le fonctionnement du récipient selon l'invention, avec une phase de repos dans laquelle le liquide nutritif se situe au niveau de la chambre inférieure (figure 7) et une phase d'immersion temporaire dans laquelle le liquide nutritif est déplacé dans la chambre supérieure pour submerger / noyer le matériel végétal (figure 8). Le récipient 1, représenté de manière générale sur les figures 1 à 3, 1 o constitue un dispositif qui est adapté pour la culture in vitro de matériel végétal par immersion temporaire, en conditions stériles. Ce récipient 1 consiste en un dispositif unitaire, ici en forme générale de fût. Tel qu'illustré par la figure 2, ce récipient 1 comprend deux chambres 15 3 et 4 superposées, ici chacune en forme générale de cylindre circulaire droit, à savoir : - une chambre supérieure 3, destinée à contenir le matériel végétal M à cultiver (figures 7 et 8), et - une chambre inférieure 4, destinée à contenir un liquide nutritif L (figures 7 20 et 8). Ces chambres 3 et 4 sont chacune délimitées par une face latérale annulaire 3a et 4a, par une face supérieure en forme générale de disque 3b et 4b, et par une face inférieure également en forme générale de disque 3c et 4c. 25 Ce récipient 1 comporte encore des moyens 5 pour le transfert temporaire d'au moins une partie (de préférence la quasi-totalité ou encore la totalité) du liquide nutritif depuis la chambre inférieure 4 jusqu'à la chambre supérieure 3, qui seront décrits par la suite en relation avec les figures 2 et 3. Tel que développé ci-après en relation avec les figures 7 et 8, les 30 moyens 5 pour le transfert temporaire du liquide nutritif L, sont structurés pour générer, d'une part, un cheminement de ce liquide nutritif L depuis la chambre inférieure 4 jusqu'à la chambre supérieure 3 par une surpression en gaz dans ladite chambre inférieure 4 et, d'autre part, un retour par gravité dudit liquide nutritif dans ladite chambre inférieure 4 lors de l'arrêt de cette surpression en gaz. This connection duct is advantageously terminated by at least two upper orifices regularly distributed over the periphery of said duct. Again according to this advantageous characteristic, the gas introduction means in the lower chamber consist of a duct opening through its side face and formed on the side of its upper face. According to another advantageous embodiment, the container comprises (i) a lid provided with at least two reentrant gripping fins distributed over its periphery, and (ii) an upper opening provided with flange portions on its periphery. . This cover attached to said opening is operable in rotation between - a locked position, wherein each of said attachment fins is positioned below one of said flange portions, and - an unlocked position, wherein said fins 15 hooking are dissociated from said collars. The present invention is further illustrated, without being limited, by the following description of a particular embodiment, in relation to the accompanying drawings in which: - Figure 1 is a general and perspective view of the container according to invention; - Figure 2 schematically shows the container of Figure 1, in a vertical sectional plane; - Figure 3 shows the container of Figure 1, an exploded manner; FIG. 4 shows enlarged detail IV of FIG. 2, corresponding to the upper end of the water connection duct situated between the upper and lower chambers; - Figure 5 illustrates in an enlarged manner the detail V of Figure 2, corresponding to the sealing means formed between the outer casing and the basket insert; - Figure 6 shows an enlarged detail VI of Figure 2, corresponding to the sealing means formed between the outer casing and the removable cover; FIGS. 7 and 8 illustrate the operation of the container according to the invention, with a resting phase in which the nutritive liquid is located at the level of the lower chamber (FIG. 7) and a temporary immersion phase in which the nutritive liquid is moved to the upper chamber to submerge / drown the plant material (Figure 8). The container 1, shown generally in Figures 1 to 3, 1 o is a device that is suitable for in vitro culture of plant material by temporary immersion, under sterile conditions. This container 1 consists of a unitary device, here in the general shape of barrel. As illustrated in FIG. 2, this container 1 comprises two superimposed chambers 15 3 and 4, each here in the general shape of a right circular cylinder, namely: an upper chamber 3 intended to contain the plant material M to be cultivated ( Figures 7 and 8), and - a lower chamber 4 for containing a nutrient liquid L (Figures 7 and 8). These chambers 3 and 4 are each delimited by an annular lateral face 3a and 4a, by an upper face in the general shape of disk 3b and 4b, and by a lower face also in the general shape of disk 3c and 4c. This container 1 further comprises means 5 for the temporary transfer of at least a portion (preferably almost all or all) of the nutrient liquid from the lower chamber 4 to the upper chamber 3, which will be described 2 and 3. As developed below with reference to FIGS. 7 and 8, the means 5 for the temporary transfer of the nutritive liquid L are structured to generate, on the one hand, a path of this nutritive liquid L from the lower chamber 4 to the upper chamber 3 by a gas overpressure in said lower chamber 4 and, secondly, a gravity return of said nutrient liquid in said lower chamber 4 at the stopping this gas overpressure.

Selon l'invention, la chambre supérieure 3 est dimensionnée pour limiter les phénomènes de stratification et de compactage du matériel végétal cultivé M, et aussi pour optimiser l'accès à la lumière de ce matériel. A cet effet, la face inférieure circulaire 3c de la chambre supérieure 3, destinée à porter les tissus végétaux, présente ici un contour circulaire 3cl dont le rayon R est de l'ordre de 110 mm. De manière générale, ce rayon R est avantageusement compris entre 75 et 150 mm, et de préférence entre 100 et 120 mm. Ce contour 3cl s'étend dans un plan horizontal P, perpendiculaire à l'axe général 1' du récipient 1, sur lequel il délimite une surface ou une aire horizontale S (figure 2) de l'ordre de 0,037 m2. De manière générale, cette surface horizontale S est comprise entre 0,02 m2 et 0,07 m2. La face latérale 3a présente quant à elle une hauteur H de l'ordre de 60 à 70 mm. According to the invention, the upper chamber 3 is dimensioned to limit the phenomena of stratification and compaction of cultivated plant material M, and also to optimize access to light of this material. For this purpose, the circular lower face 3c of the upper chamber 3, intended to carry the plant tissues, here has a circular contour 3cl whose radius R is of the order of 110 mm. In general, this radius R is advantageously between 75 and 150 mm, and preferably between 100 and 120 mm. This contour 3cl extends in a horizontal plane P, perpendicular to the general axis 1 'of the container 1, on which it delimits a surface or a horizontal area S (Figure 2) of the order of 0.037 m2. In general, this horizontal surface S is between 0.02 m2 and 0.07 m2. The side face 3a has a height H of the order of 60 to 70 mm.

De manière générale, cette hauteur H est avantageusement comprise entre 40 et 130 mm, de préférence encore entre 50 et 90 mm. Cette chambre supérieure 3 présente ainsi une forme générale cylindrique relativement aplatie. La chambre inférieure 4 présente quant à elle un rayon de l'ordre de 78 à 87 mm, de préférence de l'ordre de 82 mm (correspondant au rayon de ses faces inférieure 4c et supérieure 4b), et une hauteur de l'ordre de 75 mm. La surface de la face inférieure 3c de la chambre supérieure 3 est ainsi supérieure à la surface de la face inférieure 4c de la chambre inférieure 4 et à la surface de la face supérieure 4b de la chambre inférieure 4. In general, this height H is advantageously between 40 and 130 mm, more preferably between 50 and 90 mm. This upper chamber 3 thus has a generally cylindrical shape relatively flattened. The lower chamber 4 has a radius of the order of 78 to 87 mm, preferably of the order of 82 mm (corresponding to the radius of its lower faces 4c and 4b upper), and a height of the order 75 mm. The surface of the lower face 3c of the upper chamber 3 is thus greater than the surface of the lower face 4c of the lower chamber 4 and the surface of the upper face 4b of the lower chamber 4.

Pour constituer ces chambres 3 et 4, le récipient 1 se compose d'un assemblage de différentes pièces qui sont décrites en détails ci-dessous en relation avec les figures 2 et 3. Le récipient 1 comporte, tout d'abord, une pièce extérieure monobloc 6, comportant une enveloppe extérieure latérale 7 qui est délimitée par : - une bordure inférieure 8, à laquelle se raccorde un élément de fond 9 en forme de disque, et - une bordure supérieure 10, délimitant une ouverture 11 destinée à être obturée hermétiquement par un couvercle amovible 12. 1 o L'enveloppe extérieure 7 comporte ici trois parties annulaires réparties sur sa hauteur, à savoir une partie supérieure tubulaire 7a, une partie inférieure tubulaire 7b et une partie de jonction 7c constituant un épaulement annulaire en forme de couronne. Ces différentes parties 7a, 7b et 7c s'étendent toutes coaxialement à 15 un même axe vertical 7', formant l'axe de l'enveloppe extérieure 7. Les parties supérieure 7a et inférieure 7b de l'enveloppe extérieure 7 présentent chacune un diamètre constant, ou au moins approximativement constant, sur leurs hauteurs respectives. La partie supérieure 7a de l'enveloppe extérieure 7 présente de plus 20 un diamètre supérieur par rapport au diamètre de la partie inférieure 7b ; les parties supérieure 7a et inférieure 7b de l'enveloppe extérieure 7 sont ainsi reliées, au niveau de leurs bordures en regard, par la partie formant épaulement 7c. Les parties supérieure 7a et inférieure 7b de l'enveloppe extérieure 7 25 présentent en plus une hauteur identique, ou au moins approximativement identique, par rapport à la chambre supérieur 3 et à la chambre inférieur 4, respectivement. En particulier, la partie supérieure 7a de l'enveloppe extérieure 7 présente avantageusement une hauteur comprise entre 50 et 90 mm, de préférence 30 encore de l'ordre de 60 à 70 mm. To form these chambers 3 and 4, the container 1 consists of an assembly of different parts which are described in detail below with reference to FIGS. 2 and 3. The container 1 comprises, first of all, an external part. monobloc 6, comprising a lateral outer casing 7 which is delimited by: - a lower edge 8, which is connected to a bottom element 9 in the form of a disc, and - an upper edge 10, delimiting an opening 11 intended to be hermetically sealed by a removable cover 12. 1 o The outer casing 7 here comprises three annular parts distributed over its height, namely a tubular upper portion 7a, a tubular lower portion 7b and a connecting portion 7c constituting a crown-shaped annular shoulder . These different parts 7a, 7b and 7c all extend coaxially to the same vertical axis 7 ', forming the axis of the outer casing 7. The upper parts 7a and 7b of the outer casing 7 each have a diameter constant, or at least approximately constant, on their respective heights. The upper portion 7a of the outer shell 7 has a larger diameter with respect to the diameter of the lower portion 7b; the upper parts 7a and 7b of the outer casing 7 are thus connected at their edges opposite, by the shoulder portion 7c. The upper and lower portions 7a and 7b of the outer shell 7 additionally have an identical height, or at least approximately the same height, with respect to the upper chamber 3 and the lower chamber 4, respectively. In particular, the upper part 7a of the outer casing 7 advantageously has a height of between 50 and 90 mm, more preferably of the order of 60 to 70 mm.

La partie inférieure 7b de l'enveloppe extérieure 7 et l'élément de fond 9 forment, respectivement, la face latérale 4a et la face inférieure 4c de la chambre inférieure 4. Cette partie inférieure 7b de l'enveloppe 7 est munie d'un conduit latéral 15, pour l'introduction de gaz (par exemple de l'air) directement dans la chambre inférieure 4. Un filtre à air hydrophobe F1, représenté très schématiquement sur la figure 1, est avantageusement fixé à ce conduit latéral 15 afin d'assurer la stérilité à l'intérieur du récipient 1. 1 o Le conduit latéral 15 débouche au travers de la face latérale 4a de la chambre inférieure 4, et il est ménagé du côté de sa face supérieure 4b. L'axe longitudinal 15' de ce conduit latéral 15 est orienté selon une pente ascendante vers la périphérie, pour limiter le risque d'écoulement du liquide nutritif L au travers de ce conduit latéral 15 vers l'extérieur et ainsi éviter que 15 le filtre associé F1 ne soit mouillé. La partie formant épaulement 7c sert d'appui à une pièce intérieure rapportée 16, en forme de panier, qui est destinée à séparer les deux chambres 3 et 4 du récipient 1 et qui est destinée à former au moins une partie des faces de la chambre supérieure 3. 20 Cette pièce intérieure rapportée 16 comporte : - une paroi de fond 16a en forme de disque, destinée à séparer les deux chambres 3 et 4 du récipient 1, et - une paroi latérale tubulaire 16b, s'élevant depuis le contour de cette paroi de fond 16a. 25 La paroi latérale tubulaire 16b double intérieurement la partie supérieure 7a de l'enveloppe périphérique 7, pour former ensemble la face latérale 3a de la chambre supérieure 3. Cette paroi latérale tubulaire 16b épouse l'enveloppe extérieure 7 sur la hauteur de sa partie supérieure 7a ; le diamètre de la surface extérieure de 30 la paroi latérale 16b correspond ainsi, au jeu près, au diamètre de la surface intérieure de la partie supérieure 7a de l'enveloppe extérieure 7. The lower part 7b of the outer casing 7 and the bottom element 9 form, respectively, the lateral face 4a and the lower face 4c of the lower chamber 4. This lower part 7b of the casing 7 is provided with a lateral duct 15, for introducing gas (for example air) directly into the lower chamber 4. A hydrophobic air filter F1, shown very schematically in FIG. 1, is advantageously fixed to this lateral duct 15 in order to The lateral duct 15 opens out through the lateral face 4a of the lower chamber 4, and it is arranged on the side of its upper face 4b. The longitudinal axis 15 'of this lateral duct 15 is oriented along an upward slope towards the periphery, to limit the risk of flow of the nutrient liquid L through this lateral duct 15 to the outside and thus to prevent the filter F1 partner gets wet. The shoulder portion 7c serves to support a basket-shaped insert 16, which is intended to separate the two chambers 3 and 4 of the container 1 and which is intended to form at least a portion of the faces of the chamber This internal insert 16 comprises: a disc-shaped bottom wall 16a intended to separate the two chambers 3 and 4 of the container 1, and a tubular side wall 16b, rising from the contour of this bottom wall 16a. The tubular side wall 16b internally doubles the upper portion 7a of the peripheral casing 7, to form together the lateral face 3a of the upper chamber 3. This tubular side wall 16b matches the outer casing 7 over the height of its upper part. 7a; the diameter of the outer surface of the side wall 16b thus corresponds, with clearance, to the diameter of the inner surface of the upper part 7a of the outer casing 7.

La paroi de fond 16a constitue une paroi intérieure intercalaire qui forme la face supérieure 4b de la chambre inférieure 4 et une partie de la face inférieure 3c de la chambre supérieure 3. Une bande périphérique 16a1 de cette paroi de fond 16a repose sur la partie épaulement 7c de l'enveloppe extérieure 7, par le biais de moyens d'étanchéité 17 (figure 5). Ces moyens d'étanchéité 17 consistent par exemple en un joint torique ou carré, réalisé en un matériau du type silicone. Cette paroi de fond 16a présente une forme de disque, très légèrement tronconique, de manière à définir une pente descendante de la périphérie vers le centre. Cette forme est utile pour assurer une collecte optimale du liquide nutritif L par gravité, à la fin de la phase d'immersion temporaire décrite par la suite. Cette paroi de fond 16a comporte encore une partie centrale concave 16a2, ouverte du côté de la chambre supérieure 3 et munie d'un orifice central traversant 16a3, pour recevoir une partie des moyens 5 pour le transfert du liquide nutritif entre les chambres 3 et 4. Les moyens de transfert 5 comportent un organe de filtration 18, en forme de disque, qui est rapporté au niveau de cette partie centrale concave 16a2, de manière à délimiter ensemble une réservation 19 pour le cheminement des fluides (liquide nutritif et gaz). L'organe de filtration 18 constitue la partie centrale de la face inférieure 3c de la chambre supérieure 3. Cet organe de filtration 18 consiste en une sorte de tamis comportant une toile 18a collée sur une pièce d'armature plastique 18b. La pièce d'armature plastique 18b comporte des bras radiaux 18b1 dans chacun desquels sont ménagés des orifices 18b2 (ici trois orifices distant d'un centimètre l'un de l'autre), pour la répartition du liquide nutritif L, et le cas échéant du gaz de surpression, cheminant en direction de la chambre supérieure 3 (figures 2 et 3). Ces moyens de transfert 5 comportent encore : - une pièce centrale rapportée 20 comportant un tronçon inférieur 20a constituant un conduit de raccordement, assurant la liaison hydrique entre les deux chambres 3 et 4, et - le conduit latéral 15 précité, pour l'introduction du gaz directement dans la chambre inférieure 4. La pièce centrale 20 est rapportée au travers de l'orifice central 16a3 de la paroi de fond 16a du panier rapporté 16. Elle comporte un axe longitudinal 20' qui s'étend coaxialement par rapport l'axe vertical 7' de l'enveloppe extérieure 7. The bottom wall 16a constitutes an intermediate inner wall which forms the upper face 4b of the lower chamber 4 and part of the lower face 3c of the upper chamber 3. A peripheral band 16a1 of this bottom wall 16a rests on the shoulder portion 7c of the outer casing 7, by means of sealing means 17 (Figure 5). These sealing means 17 consist for example of an O-ring or square, made of a material of the silicone type. This bottom wall 16a has a disc shape, very slightly frustoconical, so as to define a downward slope from the periphery to the center. This form is useful for ensuring optimal collection of the nutrient liquid L by gravity, at the end of the temporary immersion phase described later. This bottom wall 16a further comprises a concave central portion 16a2, open on the side of the upper chamber 3 and provided with a through central orifice 16a3, to receive a portion of the means 5 for the transfer of the nutrient liquid between the chambers 3 and 4 The transfer means 5 comprise a disk-shaped filter member 18 which is attached at the level of this concave central portion 16a2, so as to delimit together a reservation 19 for the flow of fluids (nutrient liquid and gas). The filtering member 18 constitutes the central part of the lower face 3c of the upper chamber 3. This filtering member 18 consists of a kind of screen comprising a web 18a bonded to a plastic reinforcement piece 18b. The plastic reinforcement piece 18b comprises radial arms 18b1 in each of which are formed orifices 18b2 (here three orifices spaced one centimeter apart from each other), for the distribution of the nutrient liquid L, and where appropriate booster gas, traveling towards the upper chamber 3 (Figures 2 and 3). These transfer means 5 further include: - a central insert 20 having a lower section 20a constituting a connecting pipe, ensuring the water connection between the two chambers 3 and 4, and - the lateral duct 15 above, for the introduction of the gas directly into the lower chamber 4. The central piece 20 is attached through the central hole 16a3 of the bottom wall 16a of the basket 16. It has a longitudinal axis 20 'which extends coaxially with respect to the axis vertical 7 'of the outer casing 7.

Son conduit de raccordement 20a permet une remontée immédiate et totale du milieu nutritif L. Pour cela, ce conduit de raccordement 20a s'étend sur toute la hauteur de la chambre inférieure 4. Les extrémités de ce conduit de raccordement 20a sont munies d'orifices, à savoir : - un orifice axial inférieur 20a1, débouchant à proximité de la face inférieure 4c de la chambre inférieure 4 (ou autrement dit la face supérieure de l'élément de fond 9), et - deux orifices supérieurs latéraux 20a2, débouchant au sein de la réservation 19 de la chambre supérieure 3. Les orifices supérieurs 20a2 du conduit de raccordement 20 sont diamétralement opposés ; ils s'étendent selon un axe radial 20a2', perpendiculaire à l'axe longitudinal 20' de cette pièce centrale 20 (figures 2 et 4). Its connecting duct 20a allows an immediate and total recovery of the nutrient medium L. For this, this connecting duct 20a extends over the entire height of the lower chamber 4. The ends of this connecting duct 20a are provided with orifices. , namely: - a lower axial orifice 20a1, opening near the lower face 4c of the lower chamber 4 (or in other words the upper face of the bottom element 9), and - two upper lateral openings 20a2, opening at within the reserve 19 of the upper chamber 3. The upper openings 20a2 of the connecting pipe 20 are diametrically opposed; they extend along a radial axis 20a2 ', perpendicular to the longitudinal axis 20' of this central piece 20 (Figures 2 and 4).

Cette dernière caractéristique structurelle, en combinaison avec la pluralité d'orifices 18b2 de l'organe de filtration 18, permet notamment une répartition optimale du liquide nutritif L lors de sa remontée depuis la chambre inférieure 4 jusqu'à la chambre supérieure 3 et participe à l'amélioration du brassage du matériel végétal M. This last structural feature, in combination with the plurality of orifices 18b2 of the filtering member 18, allows in particular an optimal distribution of the nutrient liquid L during its ascent from the lower chamber 4 to the upper chamber 3 and participates in improving the brewing of plant material M.

Pour être complet, cette pièce centrale 20 comporte un prolongement axial 20b, poursuivant le conduit de raccordement 20a du côté des orifices supérieurs 20b. Ce prolongement axial 20b est destiné à venir s'étendre sur la hauteur de la chambre supérieure 3 et à être poussé axialement vers l'élément de fond 9 par le couvercle 12 rapporté. Pour rapporter le couvercle 12, la bordure supérieure 10 de l'enveloppe extérieure 7 est munie, sur sa périphérie, de quatre portions de collerette 10a définissant entre elles quatre ouvertures périphériques 10b (figure 3). Pour son assemblage, le couvercle 12 est muni quant à lui de quatre ailettes d'accrochage rentrantes 12a, régulièrement réparties sur sa périphérie, destinées à venir chacune se loger (i) par une translation verticale, au travers de l'une des ouvertures périphériques 10b puis (ii) par un mouvement de rotation horaire, en-dessous de l'une des portions de collerette 10a (figures 2 et 6). L'étanchéité du couvercle 12 assemblé sur l'enveloppe extérieure 7 est assurée par des structures annulaires complémentaires du genre nervure / rainure 21 ménagés sur les surfaces en appui de ce couvercle 12 et de la bordure supérieure 10 de l'enveloppe périphérique 7, en combinaison avec un joint d'étanchéité 22 (figure 6). Ce couvercle 12 est encore équipé d'organes saillants 12b, pour la manoeuvre manuelle en rotation sur la bordure supérieure 10 de l'enveloppe extérieure 7 (figures 2 et 3). To be complete, this central piece 20 comprises an axial extension 20b, continuing the connecting duct 20a on the side of the upper openings 20b. This axial extension 20b is intended to extend over the height of the upper chamber 3 and to be pushed axially towards the bottom element 9 by the cover 12 reported. To bring back the cover 12, the upper edge 10 of the outer casing 7 is provided on its periphery with four flange portions 10a defining between them four peripheral openings 10b (FIG. 3). For its assembly, the cover 12 is provided with four reentrant gripping fins 12a, regularly distributed on its periphery, intended to each be housed (i) by a vertical translation, through one of the peripheral openings 10b then (ii) by a clockwise rotational movement, below one of the flange portions 10a (Figures 2 and 6). The tightness of the lid 12 assembled on the outer casing 7 is provided by complementary annular structures of the rib / groove type 21 formed on the bearing surfaces of this cover 12 and the upper edge 10 of the peripheral casing 7, combination with a seal 22 (Figure 6). This cover 12 is again equipped with projecting members 12b, for the manual operation in rotation on the upper edge 10 of the outer casing 7 (FIGS. 2 and 3).

Ces organes saillants 12b forment également ensemble une surface de réception, sur laquelle peut être posé l'élément de fond 9 d'un récipient 1 superposé à des fins de stockage. Un évent 12c, situé sur le couvercle 12, permet le passage du gaz entre l'intérieur et l'extérieur du récipient 1 dans un sens comme dans l'autre. These projecting members 12b also together form a receiving surface on which the bottom element 9 of a superimposed container 1 can be placed for storage purposes. A vent 12c, located on the cover 12, allows the passage of gas between the inside and the outside of the container 1 in one direction as in the other.

Cet évent 12c est avantageusement raccordé à un filtre stérilisant hydrophobe F2, représenté très schématiquement sur la figure 1. This vent 12c is advantageously connected to a hydrophobic sterilizing filter F2, shown very schematically in FIG.

Cet évent 12c permet ainsi, lors de la remontée du liquide nutritif, dans un premier temps l'évacuation du gaz contenu dans la chambre supérieure 3, poussé par le liquide nutritif, puis dans un second temps, d'évacuer la surpression continuant d'être alimentée. This vent 12c thus enables the evacuation of the gas contained in the upper chamber 3, pushed by the nutrient liquid, in a first step, and then, in a second step, to evacuate the overpressure that continues to flow. to be fed.

Le couvercle 12 rapporté sur l'ouverture 11 est manoeuvrable par rotation sur un secteur angulaire (ici d'un huitième de tour), selon deux sens inverses pour obtenir deux positions de fin de course : - une position verrouillée (figures 1 et 2), dans laquelle chacune des ailettes d'accrochage 12a se positionne en-dessous de l'une des portions de 1 o collerette 10a, assurant ainsi quatre zones de serrage, et - une position déverrouillée (figure 3), dans laquelle les ailettes d'accrochage 12a sont dissociées des collerettes 10a et viennent se positionner au travers des ouvertures périphériques 10b. Dans la position verrouillée, le couvercle 12 vient exercer une force 15 d'appui dirigée vers l'élément de fond 9 sur, d'une part, le prolongement axial 20b de la pièce centrale 20 (figure 2) et, d'autre part, la bordure supérieure libre 16b1 de la paroi latérale tubulaire 16b du panier intérieur 16 (figure 6). Le couvercle 12 constitue ici la face supérieure 3b de la chambre supérieure 3 du récipient 1. 20 La pièce extérieure 6, le panier intérieur 16, la pièce centrale 20 et le couvercle 12, constitutifs du récipient 1, sont avantageusement réalisés chacun dans un matériau plastique transparent autoclavable, par exemple en polycarbonate à usage clinique. La transparence de ce matériau va permettre d'optimiser la luminosité 25 apportée à la matière végétale cultivée. De plus, ces différentes pièces 6, 16, 20 et 12 sont assemblées par simple emboîtement de formes complémentaires, sans moyens de liaison supplémentaires, ce qui facilite, d'une part, les opérations de renouvellement de milieu nutritif entre deux sub-cultures, et d'autre part, les opérations de 30 montage et de démontage lors des opérations de nettoyage, mais aussi de stérilisation intervenant entre deux opérations de culture. The lid 12 attached to the opening 11 is operable by rotation on an angular sector (here of an eighth of a turn), in two reverse directions to obtain two end-of-travel positions: - a locked position (FIGS. 1 and 2) , in which each of the attachment fins 12a is positioned below one of the flange portions 10a, thus providing four clamping zones, and - an unlocked position (FIG. 3), in which the blades fastening 12a are dissociated from the flanges 10a and are positioned through the peripheral openings 10b. In the locked position, the lid 12 exerts a bearing force directed towards the bottom element 9 on the one hand, the axial extension 20b of the central piece 20 (FIG. 2) and, on the other hand , the upper free edge 16b1 of the tubular side wall 16b of the inner basket 16 (Figure 6). The lid 12 here constitutes the upper face 3b of the upper chamber 3 of the container 1. The outer part 6, the inner basket 16, the central piece 20 and the lid 12, constituting the container 1, are advantageously each made of a material autoclavable transparent plastic, for example polycarbonate for clinical use. The transparency of this material will make it possible to optimize the brightness provided to the cultivated plant material. In addition, these different parts 6, 16, 20 and 12 are assembled by simply interlocking complementary shapes, without additional connecting means, which facilitates, on the one hand, nutrient medium renewal operations between two sub-cultures, and on the other hand, assembly and disassembly operations during cleaning operations, but also sterilization occurring between two culture operations.

Le fonctionnement de ce récipient 1 est développé ci-dessous en relation avec les figures 7 et 8. Tout d'abord, les différentes pièces 6, 16, 18, 20 et 12 constitutives du récipient 1 sont convenablement stérilisées. The operation of this container 1 is developed below in connection with Figures 7 and 8. First, the various parts 6, 16, 18, 20 and 12 constituting the container 1 are suitably sterilized.

Le matériel végétal à cultiver M est déposé sur la paroi de fond 16a du panier intérieur 16 qui est ensuite introduit dans la pièce extérieure 6 de sorte à reposer sur la partie de jonction 7c de son enveloppe externe 7. Ce matériel végétal M consiste par exemple en des tissus végétaux cultivés in vitro, tels que des micro-tiges et des microboutures, du cal ou des 1 o embryons somatiques. Le positionnement du couvercle 12 sur l'enveloppe externe 7 permet ensuite de fermer hermétiquement la pièce extérieure 6. Ce couvercle 12 vient en plus exercer une poussée sur la bordure supérieure libre 16b1 de la paroi latérale 16b du panier 16, ce qui provoque 15 l'écrasement des moyens d'étanchéité 17 de la partie de jonction 7c de l'enveloppe externe 7 par la paroi de fond 16a du panier intérieur 16, définissant ainsi les deux chambres 3 et 4 du récipient 1 (figure 7). Comme évoqué précédemment, le couvercle 12 exerce également un appui sur l'extrémité supérieure attenante du prolongement axial 20b de la pièce 20 centrale 20. S'il a été préalablement stérilisé, le milieu nutritif L, sous forme liquide, est rapporté dans la chambre inférieure 4, par exemple au travers du conduit latéral 15 (de manière alternative, il peut être rapporté dans le récipient 1 avant sa stérilisation, pour leur stérilisation concomitante). 25 Ce milieu nutritif consiste par exemple en un milieu contenant les sels minéraux de Murashige et Skoog (1962) ou des formules dérivées de cette formulation, du sucre, des vitamines et des hormones végétales, de façon à assurer la multiplication et/ou la croissance du matériel végétal. Dans la phase de repos (figure 7), ce milieu nutritif L se situe ainsi 30 dans la chambre inférieure 4. The plant material to be cultivated M is deposited on the bottom wall 16a of the inner basket 16 which is then introduced into the outer part 6 so as to rest on the joining part 7c of its outer shell 7. This plant material M consists, for example plant tissues cultured in vitro, such as micro-stems and microboutures, callus or somatic embryos. The positioning of the cover 12 on the outer casing 7 then allows the outer part 6 to be hermetically sealed. This cover 12 additionally exerts a thrust on the free upper edge 16b1 of the side wall 16b of the basket 16, which causes the pressure of the outer casing 16. crushing the sealing means 17 of the junction portion 7c of the outer casing 7 by the bottom wall 16a of the inner basket 16, thereby defining the two chambers 3 and 4 of the container 1 (Figure 7). As mentioned above, the cover 12 also bears on the adjoining upper end of the axial extension 20b of the central part 20. If it has been previously sterilized, the nutrient medium L, in liquid form, is returned to the chamber lower 4, for example through the lateral duct 15 (alternatively, it can be returned to the container 1 before sterilization, for their concomitant sterilization). This nutrient medium consists for example of a medium containing the mineral salts of Murashige and Skoog (1962) or formulas derived from this formulation, sugar, vitamins and plant hormones, so as to ensure the multiplication and / or growth plant material. In the resting phase (FIG. 7), this nutritive medium L is thus located in the lower chamber 4.

En phase active (figure 8), une surpression est appliquée dans la chambre inférieure 4, par l'introduction d'un gaz (par exemple de l'air) au travers du conduit latéral 15. Ce gaz est ici stérilisé lors du passage au travers du filtre hydrophobe F1 fixé à ce conduit latéral 15. In the active phase (FIG. 8), an overpressure is applied in the lower chamber 4, by the introduction of a gas (for example air) through the lateral duct 15. This gas is here sterilized during the transition to through the hydrophobic filter F1 attached to this lateral duct 15.

Cette surpression pousse le milieu nutritif L, provoquant ainsi sa remontée au travers du conduit de raccordement 20a puis au travers de l'organe de filtration 18, depuis la chambre inférieure 4 jusqu'à la chambre supérieure 3. Lors de ce cheminement, le liquide nutritif se répartit efficacement au 1 o travers des orifices supérieurs débouchants 20a2 du conduit de raccordement 20, puis de l'organe de filtration 18, assurant un brassage efficace de matériel végétal M. Le maintien de l'alimentation de la surpression permet de maintenir le milieu nutritif L dans la chambre supérieure 3 du récipient 1, pour une 15 immersion efficace du matériel végétal M. Avantageusement, la surpression est appliquée durant une période supérieure à celle strictement nécessaire à la remontée du liquide nutritif L. La surpression peut, par exemple, être appliquée pendant une durée de une à deux minutes, toutes les deux ou quatre heures. 20 Cela provoque un bullage dans ce liquide nutritif L situé dans la chambre supérieure 3, améliorant son brassage et l'immersion du matériel végétal M. Ce maintien de la surpression provoque également un renouvellement de l'atmosphère contenue à l'intérieur du récipient 1. Cette aération est particulièrement intéressante car elle permet d'éviter l'effet néfaste d'une 25 accumulation de gaz à l'intérieur du récipient 1 (notamment d'éthylène et de gaz carbonique). Ce phénomène de bullage est ici optimisé par la structure particulière des orifices supérieurs débouchants 20a2 du conduit de raccordement 20a, associés à l'organe de filtration 18, et à la forme étalée de la chambre 30 supérieure 3. This overpressure pushes the nutrient medium L, thus causing it to rise through the connecting pipe 20a and then through the filtering member 18, from the lower chamber 4 to the upper chamber 3. During this path, the liquid Nutrient is distributed effectively through the upper through holes 20a2 of the connecting duct 20, then the filter member 18, ensuring efficient mixing of plant material M. Maintaining the supply of the pressure allows to maintain the nutrient medium L in the upper chamber 3 of the container 1, for an effective immersion of the plant material M. Advantageously, the overpressure is applied for a period greater than that strictly necessary for the rise of the nutrient liquid L. The overpressure may, for example , be applied for a duration of one to two minutes, every two or four hours. This causes bubbling in this nutritive liquid L located in the upper chamber 3, improving its mixing and immersion of the plant material M. This maintenance of the overpressure also causes a renewal of the atmosphere contained inside the container 1 This aeration is particularly interesting because it avoids the detrimental effect of a buildup of gas inside the container 1 (especially ethylene and carbon dioxide). This bubbling phenomenon is here optimized by the particular structure of the outgoing upper orifices 20a2 of the connecting pipe 20a, associated with the filtering member 18, and the spreading shape of the upper chamber 3.

Le bullage énergique ainsi obtenu participe un brassage efficace de la biomasse, qui est propice à un développement homogène et synchrone du matériel végétal M. De façon préférentielle, la surpression est obtenue par l'introduction d'air comprimé. Ce dernier est fourni par une pompe délivrant de l'air comprimé exempt d'huile. Afin de protéger l'environnement interne stérile du récipient 1, l'entrée d'air est protégée par le filtre stérilisant hydrophobe F1. L'arrêt de l'alimentation de la surpression entraîne le retour, par gravité, du milieu nutritif L depuis la chambre supérieure 3 jusqu'à la 1 o chambre inférieure 4. Le liquide nutritif L subit alors un cheminement inverse, en passant successivement au travers de l'organe de filtration 18, de la cavité 19 et du conduit de raccordement 20a. Ce retour provoque une entrée d'air au travers de l'évent 12c du couvercle 15 12 ; afin de protéger l'environnement interne stérile du récipient 1, cette entrée d'air 12c est protégée par le filtre stérilisant hydrophobe F2. La programmation des cycles d'immersion, et le fonctionnement de l'ensemble du récipient 1, de façon autonome, peuvent être réalisés de façon simple à l'aide d'un programmateur ou d'une prise électrique programmable.The energetic bubbling thus obtained contributes to efficient mixing of the biomass, which is conducive to a homogeneous and synchronous development of the plant material M. Preferably, the overpressure is obtained by the introduction of compressed air. The latter is supplied by a pump delivering oil-free compressed air. In order to protect the sterile internal environment of the container 1, the air inlet is protected by the hydrophobic sterilizing filter F1. Stopping the supply of the overpressure causes the return, by gravity, of the nutrient medium L from the upper chamber 3 to the 1 o lower chamber 4. The nutrient liquid L then undergoes a reverse path, passing successively to through the filter member 18, the cavity 19 and the connecting pipe 20a. This return causes an air inlet through the vent 12c of the cover 12; in order to protect the sterile internal environment of the container 1, this air inlet 12c is protected by the hydrophobic sterilizing filter F2. The programming of the immersion cycles, and the operation of the entire container 1, autonomously, can be carried out in a simple manner using a programmer or a programmable electrical outlet.

20 Une telle prise permet de contrôler le fonctionnement de la pompe, et donc le rythme des immersions et leur durée. Pour récupérer la matière végétale M, il suffit à l'opérateur d'ouvrir le récipient 1, par une manoeuvre appropriée du couvercle 12. Le couvercle 12 dissocié, l'opérateur peut accéder à la chambre supérieure 3 25 au travers de l'ouverture supérieure 11 de la pièce extérieure 6, et éventuellement extraire la pièce intérieure 16 en forme de panier. Lorsqu'un cycle de culture est terminé, les différentes pièces 6, 12, 16, 18, 20, constitutives du récipient 1, peuvent être aisément séparées pour leur nettoyage et leur stérilisation en vue d'un cycle ultérieur de culture.Such a plug makes it possible to control the operation of the pump, and therefore the rate of the immersions and their duration. To recover the plant material M, it suffices for the operator to open the container 1, by an appropriate maneuvering of the lid 12. The dissociated lid 12, the operator can access the upper chamber 3 25 through the opening upper 11 of the outer part 6, and optionally extract the inner part 16 basket-shaped. When a culture cycle is completed, the various parts 6, 12, 16, 18, 20 constituting the container 1, can be easily separated for cleaning and sterilization for a subsequent crop cycle.

30 Le récipient 1 selon l'invention est adapté pour être manipulé et transporté par un opérateur. Il est en plus adapté pour être stocké sur des étagères, superposés les uns au-dessus des autres ; il peut également être introduit dans différents dispositifs de laboratoire (autoclave, hotte à flux laminaire, etc.). Ce récipient 1 offre les avantages suivants : - il permet un étalement important du matériel végétal, pour améliorer l'accès à la lumière, et donc la capacité photosynthétique des plantules et leur comportement lors des délicates étapes d'acclimatation ; - il augmente le brassage du matériel végétal lors des immersions temporaires, pour améliorer la synchronisation du développement des 1 o plantes et donc leur homogénéité ; ceci permet de réduire considérablement le travail de manipulation lié à la sélection et au tri du matériel végétal ; - il est très simple de fonctionnement, robuste, facile à transporter et avec un nombre de pièces réduit pour en faciliter l'utilisation au niveau industriel et réduire les coûts de production ; 15 - il facilite les opérations de repiquage du matériel végétal et le changement du milieu nutritif, du fait de son aspect monobloc, léger et facilement manipulable (ouverture facilitée du couvercle et transfert aisé de la biomasse grâce au panier intérieur). Ce récipient est de plus parfaitement adapté aux différents matériels 20 végétaux (cultures cellulaires, organes, plantules). Il trouve une application notamment dans les domaines suivants : - multiplication des espèces végétales par micropropagation, - multiplication des espèces végétales par embryogenèse somatique, - multiplication de « hairy roots » pour la production de métabolites 25 secondaires ou des études de génomique fonctionnelle, et - multiplication de cellules végétales pour la production de métabolites secondaires ou pour l'amplification de matériel embryogène. Container 1 according to the invention is adapted to be handled and transported by an operator. It is also adapted to be stored on shelves, superimposed one above the other; it can also be introduced in different laboratory devices (autoclave, laminar flow hood, etc.). This container 1 offers the following advantages: it allows a large spreading of the plant material, to improve access to light, and thus the photosynthetic capacity of the seedlings and their behavior during the delicate stages of acclimation; - It increases the mixing of plant material during temporary immersions, to improve the timing of the development of 1 o plants and therefore their homogeneity; this considerably reduces the handling work related to the selection and sorting of the plant material; - It is very simple to operate, robust, easy to transport and with a reduced number of parts to facilitate its use at the industrial level and reduce production costs; It facilitates the transplanting operations of the plant material and the change of the nutrient medium, because of its monobloc appearance, light and easy to handle (easy opening of the lid and easy transfer of biomass through the inner basket). This container is moreover perfectly adapted to the different plant materials (cell cultures, organs, seedlings). It finds application particularly in the following areas: - multiplication of plant species by micropropagation, - multiplication of plant species by somatic embryogenesis, - multiplication of "hairy roots" for the production of secondary metabolites or functional genomics studies, and - multiplication of plant cells for the production of secondary metabolites or for the amplification of embryogenic material.

Claims

1.- container for the in vitro culture of plant material under sterile conditions, by temporary immersion, which container (1) comprises two superimposed chambers (3, 4), namely - an upper chamber (3), intended to contain said plant material (M) to be cultivated, and - a lower chamber (4), intended to contain a nutritive liquid (L), which chambers (3, 4) are each delimited by a lateral face (3a, 4a), by a upper face (3b, 4b) and a lower face (3c, 4c), which container (1) further comprises means (5) for the temporary transfer of at least a portion of said nutrient liquid (L) from said lower chamber (4) to said upper chamber (3), characterized in that said lower face (3c) of the upper chamber (3), intended to carry said plant material (M), has a horizontal surface (S) between 0.02 and 0.07 m2, and in that said lateral face (3a) of the upper chamber (3) has a height (H) of between 40 and 130 mm.

2. A container according to claim 1, wherein the upper chamber (3) has a generally cylindrical shape, whose lower face (3c) has a radius (R) of between 75 and 150 mm, and whose side face ( 3a) has a height (H) of between 50 and 90 mm.

3.- container according to any one of claims 1 or 2, wherein said container (1) comprises an outer casing (7) delimited by a bottom edge (8) to which is connected a bottom member (9) and by an upper border (10) delimiting an opening (11) hermetically sealed by a removable cover (12), which outer casing (7) has two parts, one lower (7b) and the other upper (7a), separate by an intermediate inner wall (16a), said lower (7b) and upper (7a) portions forming, respectively, the side faces (3b, 3a) of the lower chamber (4) and the upper chamber (3), and said intermediate inner wall (16a) forming the upper face (4b) of the lower chamber (4) and at least a portion of the lower face (3c) of the upper chamber (3).

4. A container according to claim 3, wherein the intermediate inner wall (16a) belongs to an inner insert (16), cooperating hermetically with the outer casing (7) associated.

5. A container according to claim 4, wherein the insert inner part (16) has a side wall (16b) rising from the contour of the intermediate inner wall (16a) to form together a shaped structure (16). basket, said side wall (16b) conforming to the outer casing 1 o (7) on at least a portion of the height of its upper portion (7a).

6. Container according to any one of claims 4 or 5, wherein the upper portions (7a) and lower (7b) of the outer casing (7) are connected by a junction portion (7c) forming a shoulder, and wherein a peripheral band (16a1) of the intermediate inner wall (16a) of the insert (16) abuts on said shoulder portion (7p) through sealing means (17).

7.- container according to any one of claims 1 to 6, wherein the means (5) for the temporary transfer of the nutrient liquid (L) 20 comprise - at least one passage (20a) for the water connection of the upper chambers ( 3) and lower (4), and - means (15) for introducing a gas into said lower chamber (4), so as to generate, on the one hand, a path of the nutritive liquid (L) since said lower chamber (4) to said upper chamber (3) by a gas overpressure in said lower chamber (4) and, on the other hand, a gravity return of said nutrient liquid (L) to said lower chamber ( 4) when stopping said gas overpressure.

8. A container according to claim 7, wherein the connecting passage (20a) between the chambers (3, 4) consists of a duct (20a) extending over the height of the lower chamber (4), which duct (20a) is provided with at least one lower orifice (20a1) opening near the bottom surface (4c) of said lower chamber (4) and at least one upper opening (20a2) opening at the lower face ( 3c) of the upper chamber (3).

9. A container according to claim 8, wherein at least a portion of the lower face (3p) of the upper chamber (3) is constituted by a filter member (18) closing a reservation (19) in which opens or the upper openings (20a2) of the connecting duct (20a).

10. The container of claim 9, wherein the filter member (18) comprises a plurality of orifices (18b2) for the distribution of the nutrient liquid (L), and optionally the booster gas, running in direction of the upper chamber (3).

11. A container according to any one of claims 9 or 10, taken in combination with any one of claims 3 to 6, wherein the intermediate inner wall (16a) has a concave central portion (16a2), open on the side the upper chamber (3) and at which the filter member (18) is attached to form the reservation (19).

12.- container according to any one of claims 7 to 11, wherein the means (15) for introducing gas into the lower chamber (4) consist of a lateral duct (15) opening through its side face ( 4a) and arranged on the side of its upper face (4b)