FR2730743A1 - IN VITRO CULTURE CONTAINER - Google Patents
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Abstract
Description
L'invention est du domaine de la culture et plus précisément de l'agriculture et de l'horticulture. La présente invention concerne la culture in vitro, et a plus particulièrement pour objet un récipient destiné à la culture in vitro, par immersion temporaire, en conditions stériles. The invention is in the field of culture and more precisely of agriculture and horticulture. The present invention relates to in vitro culture, and more particularly relates to a container intended for in vitro culture, by temporary immersion, under sterile conditions.
La multiplication des végétaux par culture in vitro est devenue une pratique courante dans le domaine de l'horticulture et de l'agriculture. Cette pratique offre de nombreux avantages, mais présente cependant plusieurs inconvénients dont l'un des plus importants est sans doute un coût de la main d'oeuvre élevé lié à la fréquence et à la haute technicité des manipulations nécessaires. The multiplication of plants by in vitro culture has become a common practice in the field of horticulture and agriculture. This practice offers many advantages, but nevertheless has several drawbacks, one of the most important of which is undoubtedly a high labor cost linked to the frequency and high technicality of the manipulations required.
Afin de diminuer cette charge, la culture in vitro en milieu liquide a été développée. Ce type de culture présente de nombreux avantageuses, malheureusement contre-balancés par des inconvénients graves, essentiellement liés à des problèmes d'asphyxie de la culture, lorsque les tissus sont en permanence immergés. Pour profiter des avantages de cette technique, sans en subir les inconvénients, il a été développé des procédés faisant appel, soit à la mise en flottaison des explants sur un radeau, soit à l'utilisation d'un milieu nutritif sous forme de brouillard. I1 a encore été imaginé un procédé dit d'immersion temporaire ou partielle des explants. In order to reduce this charge, in vitro culture in liquid medium has been developed. This type of culture has many advantageous, unfortunately counterbalanced by serious drawbacks, essentially linked to problems of asphyxiation of the culture, when the tissues are permanently submerged. To take advantage of the advantages of this technique, without suffering the disadvantages, processes have been developed which call for either the flotation of the explants on a raft or the use of a nutritive medium in the form of a mist. I1 has also been imagined a process called temporary or partial immersion of explants.
A ce jour, ce procédé trop complexe, peu fiable, et onéreux, n'a pas connu de véritable développement industriel.To date, this overly complex, unreliable, and expensive process has not experienced any real industrial development.
Le procédé d'immersion temporaire consiste, comme son nom l'indique, de mettre en immersion de façon temporaire les explants, tissus ou cellules végétales, de la culture in vitro. Compte-tenu des phénomènes de flottaison, ou des phénomènes de croissance, cette immersion dans le milieu nutritif peut être partielle ou totale. Pendant la phase de repos, qui constitue la plus longue période, les explants sont émergés, mais le film de milieu nutritif, retenu par capillarité depuis la phase précédente d'immersion, les maintient humides. The temporary immersion process consists, as its name suggests, of temporarily immersing explants, tissues or plant cells, from the culture in vitro. Taking into account the phenomena of flotation, or phenomena of growth, this immersion in the nutritive medium can be partial or total. During the rest phase, which constitutes the longest period, the explants are emerged, but the film of nutritive medium, retained by capillarity since the previous phase of immersion, keeps them moist.
Ce procédé permet ainsi de bénéficier des avantages de la culture in vitro en milieu liquide, tout en évitant les problèmes d'asphyxie. Ce procédé permet aussi d'obtenir une qualité de développement de la culture, particulièrement intéressante en comparaison de celle obtenue par d'autres procédés de culture in vitro notamment les procédés utilisant un milieu nutritif solide ou sous forme de gel, ou encore faisant appel à la mise en flottaison sur un radeau, ou à l'utilisation de brouillard nutritif. This process thus makes it possible to benefit from the advantages of in vitro culture in a liquid medium, while avoiding the problems of asphyxiation. This method also makes it possible to obtain a quality of development of the culture, which is particularly advantageous in comparison with that obtained by other in vitro culture methods, in particular the methods using a solid nutritive medium or in the form of a gel, or alternatively using floating on a raft, or using nutritious mist.
La présente invention vise à pallier les inconvénients précédemment cités en proposant un récipient destiné à la culture in vitro, par immersion temporaire, en conditions stériles. The present invention aims to overcome the drawbacks mentioned above by proposing a container intended for in vitro culture, by temporary immersion, under sterile conditions.
Plus particulièrement, un but de l'invention est de disposer d'un récipient permettant la culture in vitro en conditions stériles, limitant le risque d'infection, tout en assurant une bonne fiabilité de la culture durant un nombre important de cycles d'immersion. More particularly, an object of the invention is to have a container allowing in vitro culture under sterile conditions, limiting the risk of infection, while ensuring good reliability of the culture during a large number of immersion cycles. .
Un autre but de l'invention est de disposer d'une surface de drainage maximale, tout en évitant la pollution du milieu nutritif par les tissus végétaux. Another object of the invention is to have a maximum drainage surface, while avoiding pollution of the nutritive medium by plant tissues.
Un autre but de l'invention est encore de proposer un récipient d'entretien, de démontage et de lavage, aisé, et encore pouvant être stérilisé entre deux cycles d'utilisation. Another object of the invention is also to propose a container for maintenance, disassembly and washing, which is easy and which can also be sterilized between two cycles of use.
Un autre but de l'invention est encore de proposer un récipient permettant le changement du milieu nutritif sans démontage. Another object of the invention is also to propose a container allowing the change of the nutritive medium without dismantling.
L'invention concerne un récipient destiné à la culture in vitro, par immersion temporaire, en conditions stériles, comprenant, deux compartiments, une partie haute destinée à recevoir des tissus végétaux et une partie basse pouvant contenir un milieu nutritif sous forme liquide. The invention relates to a container intended for in vitro culture, by temporary immersion, under sterile conditions, comprising, two compartments, an upper part intended to receive plant tissues and a lower part which can contain a nutritive medium in liquid form.
Selon l'invention, le récipient comprend, un corps unitaire formant enveloppe extérieure, fermé par un couvercle, et un panier de séparation desdites deux parties, une entrée située sur le couvercle permettant l'alimentation d'une surpression conduite dans la partie basse par un tube débouchant dans une cloche, ladite surpression provoquant une remontée d'une partie du milieu nutritif de la partie basse dans la partie haute, l'arrêt de la surpression permettant le retour, par gravité, du milieu nutritif dans la partie basse. According to the invention, the container comprises, a unitary body forming an outer envelope, closed by a cover, and a basket for separating said two parts, an inlet located on the cover allowing the supply of an overpressure conducted in the lower part by a tube opening into a bell, said overpressure causing a rise in part of the nutritive medium from the lower part in the upper part, the stopping of the overpressure allowing the return, by gravity, of the nutritive medium in the lower part.
Cette disposition du récipient confère de nombreux avantages. L'immersion des explants, ou tissus végétaux est réalisée par déplacement du milieu nutritif, poussée par une surpression, et non pas par le déplacement mécanique d'un panier support. Cette absence de mouvements mécaniques accroît la fiabilité du dispositif. L'entrée d'air par le dessus permet de regrouper sur une seule pièce l'ensemble des problèmes d'étanchéité entre l'intérieur du récipient (milieu stérile) et l'extérieur. Cette disposition permet ainsi de limiter les phénomènes de fuite, et d'augmenter la fiabilité de l'ensemble du dispositif. This arrangement of the container provides many advantages. The immersion of the explants, or plant tissues, is carried out by displacement of the nutritive medium, pushed by an overpressure, and not by the mechanical displacement of a support basket. This absence of mechanical movements increases the reliability of the device. The air inlet from above makes it possible to group together on a single piece all the sealing problems between the inside of the container (sterile medium) and the outside. This arrangement thus makes it possible to limit the phenomena of leakage, and to increase the reliability of the entire device.
La surpression est appliquée pendant un temps supérieur à celui qui est strictement nécessaire à la montée du liquide. The overpressure is applied for a time greater than that which is strictly necessary for the rise of the liquid.
Il s'ensuit un bullage, production de bulles, ou bouillonnement du milieu, améliorant l'immersion des végétaux, et un renouvellement de l'atmosphère interne du récipient de culture. Cette aération est particulièrement importante car elle permet d'éviter l'effet néfaste d'une accumulation de gaz à l'intérieur du récipient de culture in-vitro. La surpression peut, par exemple, être appliquée pendant une durée de vingt minutes toutes les deux heures.This results in bubbling, production of bubbles, or bubbling of the medium, improving the immersion of the plants, and a renewal of the internal atmosphere of the culture vessel. This aeration is particularly important because it avoids the harmful effect of an accumulation of gas inside the in-vitro culture vessel. The overpressure can, for example, be applied for a period of twenty minutes every two hours.
Dans différents modes de réalisation de l'invention, présentant chacun leurs avantages spécifiques, les caractéristiques suivantes peuvent éventuellement être combinées:
- La cloche forme avec la paroi latérale du corps une chemise annulaire servant de passage latéral au milieu nutritif lors des transferts entre les parties haute et basse. In different embodiments of the invention, each presenting their specific advantages, the following characteristics can optionally be combined:
- The bell forms with the side wall of the body an annular jacket serving as a lateral passage to the nutrient medium during transfers between the upper and lower parts.
- Un évent situé sur le couvercle permet le passage de gaz, entre l'intérieur et l'extérieur du récipient. Cet évent permet aussi l'équilibrage des pressions durant les périodes de repos. - A vent located on the cover allows the passage of gas, between the inside and the outside of the container. This vent also allows pressure balancing during rest periods.
- L'évent est raccordé à un filtre stérilisant hydrophobe. - The vent is connected to a hydrophobic sterilizing filter.
- Le panier de séparation présente des ouvertures destinées au passage du milieu nutritif. - The separation basket has openings for the passage of the nutrient medium.
- Un tamis à mailles calibrées, est disposé au-dessus du panier. - A sieve with calibrated mesh is placed above the basket.
- Le panier de séparation repose sur un épaulement disposé à l'intérieur du récipient, sur la paroi latérale du corps. - The separation basket rests on a shoulder disposed inside the container, on the side wall of the body.
- Le tube se prolonge à l'intérieur de la cloche. Cette disposition permet le transfert, notamment le remplacement, du milieu nutritif sans nécessité de démontage ou d'ouverture du récipient. - The tube extends inside the bell. This arrangement allows the transfer, in particular the replacement, of the nutrient medium without the need to dismantle or open the container.
- Un dispositif de joints assure une étanchéité des tissus végétaux entre la partie haute et la partie basse. - A system of joints ensures a tightness of the plant tissues between the upper part and the lower part.
- La cloche est fixée sur le tube. - The bell is fixed on the tube.
Divers autres caractéristiques, buts et avantages, de l'invention ressortiront de la description suivante, donnée à titre d'exemple et sans caractère limitatif, en regard des dessins annexés sur lesquels:
La Figure 1 est une coupe longitudinale d'un mode de réalisation d'un dispositif selon l'invention.Various other characteristics, objects and advantages of the invention will emerge from the following description, given by way of example and without limitation, with reference to the appended drawings in which:
Figure 1 is a longitudinal section of an embodiment of a device according to the invention.
La Figure 2 correspond au dispositif de la Figure 1, contenant un milieu nutritif en situation de repos. Figure 2 corresponds to the device of Figure 1, containing a nutritious medium in a resting situation.
La Figure 3 correspond au dispositif de la Figure 2, en situation de surpression. Figure 3 corresponds to the device of Figure 2, in an overpressure situation.
La Figure 4 est une vue éclatée d'un autre mode de réalisation du récipient selon l'invention. Figure 4 is an exploded view of another embodiment of the container according to the invention.
La Figure 5 est une demi-coupe axiale du récipient de la Figure 4. Figure 5 is an axial half-section of the container of Figure 4.
La Figure 6 représente, vue de face avec demi-coupe un autre mode de réalisation du récipient selon l'invention. Figure 6 shows, front view with half-section another embodiment of the container according to the invention.
Dans la mesure du possible, les mêmes références numériques sont utilisées pour désigner les éléments analogues dans les différentes réalisations. As far as possible, the same reference numbers are used to designate similar elements in the various embodiments.
En se référant plus particulièrement à la Figure 1, le récipient destiné à la culture in vitro, par immersion temporaire, en conditions stériles, comprend deux compartiments. Une partie haute 4 est destinée à recevoir des tissus végétaux, et une partie basse 5 peut contenir un milieu nutritif 23 sous forme liquide. Un corps 1 unitaire, forme une enveloppe extérieure. I1 est fermé par un couvercle 2. Un panier 3 de séparation, sépare la partie haute 4 de la partie basse 5. Une entrée 8, située sur le couvercle 2, permet l'alimentation d'une surpression. Avantageusement, l'entrée 8 est raccordée à un filtre stérilisant hydrophobe. Après filtration la surpression est conduite dans la partie basse 5 par l'intermédiaire d'un tube 12 débouchant dans une cloche 13. Referring more particularly to FIG. 1, the container intended for culture in vitro, by temporary immersion, under sterile conditions, comprises two compartments. An upper part 4 is intended to receive plant tissues, and a lower part 5 can contain a nutritive medium 23 in liquid form. A unitary body 1 forms an outer envelope. I1 is closed by a cover 2. A basket 3 for separation separates the upper part 4 from the lower part 5. An inlet 8, located on the cover 2, allows the supply of an overpressure. Advantageously, the inlet 8 is connected to a hydrophobic sterilizing filter. After filtration, the overpressure is conducted in the lower part 5 by means of a tube 12 opening into a bell 13.
La cloche 13 forme avec la paroi 6 latérale du corps 1 une chemise annulaire 15. Cette chemise annulaire 15 sert de passage latéral au milieu nutritif, lors des transferts entre les parties haute 4 et basse 5. Cette disposition particulière confère de nombreux avantages. Elle permet un bon brassage du milieu nutritif, et donc d'améliorer son homogénéisation. Elle évite les mouvements trop rapides lors du transfert du milieu nutritif, et permet une bonne répartition de l'arrivée du milieu nutritif dans la partie haute. Dans cette réalisation la cloche 13 repose au fond du récipient. Afin de permettre le passage du milieu nutritif, de l'intérieur de la cloche 13 dans la chemise annulaire 15, au moins une ouverture 20, ou dégagement, est disposée dans le bas de la cloche 13. The bell 13 forms with the side wall 6 of the body 1 an annular jacket 15. This annular jacket 15 serves as a lateral passage for the nutrient medium, during transfers between the upper 4 and lower 5 parts. This particular arrangement confers numerous advantages. It allows good mixing of the nutrient medium, and therefore improves its homogenization. It avoids too rapid movements during the transfer of the nutritive medium, and allows a good distribution of the arrival of the nutritive medium in the upper part. In this embodiment the bell 13 rests at the bottom of the container. In order to allow the passage of the nutritive medium, from the interior of the bell 13 in the annular jacket 15, at least one opening 20, or clearance, is arranged in the bottom of the bell 13.
Un évent 9 situé sur le couvercle permet le passage du gaz entre l'intérieur et l'extérieur du récipient dans un sens comme dans l'autre. Avantageusement cet évent 9 est raccordé à un filtre stérilisant hydrophobe. Cet évent 9 permet ainsi, lors de la remontée du liquide nutritif 23, dans un premier temps l'évacuation du gaz contenu dans la partie haute 4 du récipient, poussé par le liquide nutritif 23, puis dans un deuxième temps, d'évacuer la surpression continuant d'être alimentée. A vent 9 located on the cover allows the passage of gas between the interior and the exterior of the container in one direction as in the other. Advantageously, this vent 9 is connected to a hydrophobic sterilizing filter. This vent 9 thus allows, during the ascent of the nutrient liquid 23, firstly the evacuation of the gas contained in the upper part 4 of the container, pushed by the nutrient liquid 23, then in a second time, to evacuate the overpressure continuing to be supplied.
Les Figures 2 et 3 représentent le récipient de la
Figure 1 dans laquelle a été placé le milieu nutritif 23. Dans la phase de repos, correspondant à la Figure 2, le milieu nutritif 23 est dans la partie basse 5. En phase active, correspondant à la Figure 3, une surpression est appliquée à l'entrée 8, située sur le couvercle 2. Cette surpression est transmise à la partie basse 5 par un tube 12. Dans cette réalisation, l'étanchéité, entre le tube 12 et l'entrée 8 est assurée par un montage conique. Le tube 12 comprend dans sa partie basse un ergot 17. Cet ergot 17 permet de maintenir la cloche 13 dans le fond du récipient en évitant sa remontée.Figures 2 and 3 show the container of the
FIG. 1 in which the nutrient medium 23 has been placed. In the rest phase, corresponding to FIG. 2, the nutrient medium 23 is in the lower part 5. In the active phase, corresponding to FIG. 3, an overpressure is applied to the inlet 8, located on the cover 2. This overpressure is transmitted to the lower part 5 by a tube 12. In this embodiment, the seal between the tube 12 and the inlet 8 is ensured by a conical assembly. The tube 12 comprises in its lower part a lug 17. This lug 17 makes it possible to hold the bell 13 in the bottom of the container while preventing it from rising.
Dans cette réalisation, la cloche 13 et le panier 3 de séparation sont réalisés de façon monobloc, en une seule pièce. La partie supérieure de la cloche 13 est dans cette réalisation, commune avec le panier 3 de séparation. A sa périphérie, le panier 3 de séparation repose sur un épaulement 7, disposé à l'intérieur du récipient, sur la paroi 6 latérale du corps 1. Cette disposition permet d'éviter le transfert d'une partie des tissus végétaux situés dans la partie haute 4, vers la partie basse 5. Elle assure également le centrage de la cloche 13 à l'intérieur du récipient.In this embodiment, the bell 13 and the basket 3 of separation are produced in a single piece, in one piece. The upper part of the bell 13 is in this embodiment, common with the basket 3 of separation. At its periphery, the separation basket 3 rests on a shoulder 7, disposed inside the container, on the side wall 6 of the body 1. This arrangement makes it possible to avoid the transfer of part of the plant tissues located in the upper part 4, towards the lower part 5. It also ensures the centering of the bell 13 inside the container.
Lors de l'application de la surpression, celle-ci est transmise à l'intérieur de la cloche 13. Cette surpression pousse le milieu nutritif 23, provoquant ainsi sa remontée de la partie basse 5 dans la partie haute 4. Dans cette réalisation, la cloche 13 repose au fond du récipient. Des dégagements 20, ou passages sont aménagés dans le bord inférieur de la cloche afin de permettre le passage, du milieu nutritif 23, entre l'intérieur de la cloche et la chemise annulaire 15. Le liquide nutritif remonte latéralement sur les parois extérieures de la cloche. Le panier 3 de séparation présente des ouvertures destinées au passage du milieu nutritif. Le maintien de l'alimentation de la surpression permet de maintenir le milieu nutritif 23, sous forme liquide, dans la partie haute 4 du récipient. When the overpressure is applied, it is transmitted inside the bell 13. This overpressure pushes the nutrient medium 23, thereby causing it to rise from the bottom part 5 into the top part 4. In this embodiment, the bell 13 rests at the bottom of the container. Clearances 20, or passages are arranged in the lower edge of the bell in order to allow the passage, of the nutritive medium 23, between the interior of the bell and the annular jacket 15. The nutritive liquid rises laterally on the external walls of the Bell. The separation basket 3 has openings intended for the passage of the nutrient medium. Maintaining the supply of the overpressure makes it possible to maintain the nutritive medium 23, in liquid form, in the upper part 4 of the container.
Avantageusement, la surpression est appliquée durant une période supérieure à celle strictement nécessaire à la remontée du liquide nutritif 23. Cela provoque un bouillonnement du liquide, situé dans la chemise annulaire 15 et dans la partie haute 4, améliorant, la remontée du liquide, son brassage, et l'immersion des explants en créant un brouillard dans la partie supérieure de la partie haute 4. Ce maintien de la surpression provoque également un renouvellement de l'atmosphère contenue à l'intérieur du récipient. Advantageously, the overpressure is applied for a period greater than that strictly necessary for the ascent of the nutritive liquid 23. This causes the liquid, bubbling, located in the annular jacket 15 and in the upper part 4, improving, the ascent of the liquid, its stirring, and the immersion of the explants by creating a mist in the upper part of the upper part 4. This maintenance of the overpressure also causes a renewal of the atmosphere contained inside the container.
De façon préférentielle, la surpression est obtenue par l'introduction d'air comprimé. Celui-ci est fourni par une pompe délivrant de l'air comprimé exempt d'huile. Afin de protéger le milieu stérile, contenu à l'intérieur du récipient, l'entrée d'air est protégée par un filtre stérilisant hydrophobe. Preferably, the overpressure is obtained by the introduction of compressed air. This is supplied by a pump delivering oil-free compressed air. In order to protect the sterile medium contained inside the container, the air inlet is protected by a hydrophobic sterilizing filter.
L'arrêt de l'alimentation de la surpression entraîne le retour, par gravité, du milieu nutritif 23 de la partie haute 4 dans la partie basse 5. Stopping the supply of the overpressure causes the nutritive medium 23 from the top 4 to return to the bottom 5 by gravity.
La programmation des cycles d'immersion, et le fonctionnement de l'ensemble du dispositif, de façon autonome, peuvent être réalisés de façon simple à l'aide d'un programmateur ou d'une prise électrique programmable. Une telle prise permet de contrôler le fonctionnement de la pompe, et donc du rythme des immersion et de leur durée. The programming of the immersion cycles, and the operation of the entire device, independently, can be carried out in a simple manner using a programmer or a programmable electrical outlet. Such an outlet makes it possible to control the operation of the pump, and therefore the rate of immersion and their duration.
Dans cette réalisation, le tube 12 se prolonge à l'intérieur de la cloche 13 par une partie basse 22. Ce prolongement ne touche pas le fond du récipient et permet ainsi le passage de l'air comprimé. Ce prolongement a pour fonction de permettre l'extraction du milieu nutritif sans nécessité de démontage du récipient. In this embodiment, the tube 12 is extended inside the bell 13 by a lower part 22. This extension does not touch the bottom of the container and thus allows the passage of compressed air. The purpose of this extension is to allow the extraction of the nutrient medium without the need to dismantle the container.
Une pompe d'aspiration branchée sur l'entrée 8 permet de retirer le liquide nutritif 23. L'entrée 8 permettant alors l'alimentation d'un nouveau milieu nutritif 23. Ce remplacement se fait sans démontage du récipient. Compte-tenu de la durée de culture, il est parfois nécessaire de faire appel à des milieux nutritifs successifs, de compositions différentes. De tels changements qui peuvent être relativement fréquents sont facilement réalisés avec le dispositif de l'invention. A suction pump connected to the inlet 8 makes it possible to remove the nutritive liquid 23. The inlet 8 then allowing the feeding of a new nutritive medium 23. This replacement is done without dismantling the container. Given the duration of culture, it is sometimes necessary to use successive nutrient media, of different compositions. Such changes which can be relatively frequent are easily carried out with the device of the invention.
Les Figures 4 et 5 représentent un autre mode de réalisation d'un récipient selon l'invention. Figures 4 and 5 show another embodiment of a container according to the invention.
Ce récipient comporte un corps 1 extérieur unitaire, un couvercle 2, se vissant sur le corps 1 par l'intermédiaire d'un filetage 11, un tube 12 débouchant dans une cloche 13, un panier 3 de séparation, et un tamis 18. This container comprises a unitary external body 1, a cover 2, which is screwed onto the body 1 by means of a thread 11, a tube 12 opening into a bell 13, a basket 3 for separation, and a screen 18.
La fixation du couvercle 2 sur le corps 1 est réalisée par vissage mais peut aussi être réalisée par des moyens équivalents, notamment un système d'agrafe du genre clip. Dans cette réalisation particulière, le tube 12 comprend dans sa partie basse un filetage 14. Ce filetage permet de fixer le panier 3 sur le tube 12. Le fond du panier 3 est strié pour faciliter le drainage, et présente des ouvertures très fines permettant le passage du milieu nutritif 23. The fixing of the cover 2 on the body 1 is carried out by screwing but can also be carried out by equivalent means, in particular a clip type clip system. In this particular embodiment, the tube 12 comprises in its lower part a thread 14. This thread makes it possible to fix the basket 3 on the tube 12. The bottom of the basket 3 is striated to facilitate drainage, and has very fine openings allowing the passage of the nutrient medium 23.
De façon avantageuse, la surface de drainage est la plus importante possible, et correspond sensiblement à une surface comparable à celle de la section horizontale de la partie basse 5. L'utilisation d'une surface de drainage la plus grande possible, confère plusieurs avantages, notamment en fin de la phase immergée, une grande surface de drainage permet d'éviter un phénomène d'entassement ou de trop grande compression du matériel biologique. La forme du panier 3, et plus particulièrement ses bords latéraux remontants, permet une manipulation plus facile lors de la sortie des explants. Advantageously, the drainage surface is as large as possible, and corresponds substantially to a surface comparable to that of the horizontal section of the lower part 5. The use of the largest possible drainage surface confers several advantages , in particular at the end of the submerged phase, a large drainage surface makes it possible to avoid a phenomenon of crowding or of too great compression of the biological material. The shape of the basket 3, and more particularly its rising side edges, allows easier handling when the explants come out.
Pour la culture in vitro de tissus végétaux particulièrement fins, un tamis 18 est ajouté au-dessus du panier 3. Ce tamis 18 est constitué d'un tissu à mailles calibrées, soudé sur un plateau présentant de larges ouvertures. Pour faciliter l'écoulement, un espace est réservé entre le panier 3 et le tamis 18. De préférence, la taille du calibre des mailles est choisie entre 100 et 250 Hm. Ce tamis peut constituer une pièce renouvelable, et ainsi être changé à chaque nouvelle utilisation. Dans cette réalisation, le tamis 18 se fixe sur le tube 12 par vissage. For the in vitro culture of particularly fine plant tissues, a sieve 18 is added above the basket 3. This sieve 18 consists of a calibrated mesh fabric, welded to a tray having large openings. To facilitate the flow, a space is reserved between the basket 3 and the sieve 18. Preferably, the size of the mesh size is chosen between 100 and 250 Hm. This sieve can constitute a renewable part, and thus be changed with each new use. In this embodiment, the screen 18 is fixed to the tube 12 by screwing.
Le tube 12 et la cloche 13 forment un ensemble monobloc d'une seule pièce. La disposition de l'ouverture 8 et du tube 12 permet l'introduction d'une canule. Cette canule permet le transfert du milieu nutritif, c'est-à-dire son remplacement sans avoir à démonter l'ensemble de l'appareil. The tube 12 and the bell 13 form a one-piece assembly in one piece. The arrangement of the opening 8 and the tube 12 allows the introduction of a cannula. This cannula allows the transfer of the nutritive medium, that is to say its replacement without having to dismantle the entire apparatus.
La protection du milieu stérile intérieur est assurée par un joint îOa situé sur le couvercle 2. Ce joint permet d'assurer une bonne étanchéité avec le milieu extérieur. The internal sterile environment is protected by a seal îOa located on the cover 2. This seal ensures a good seal with the external environment.
De façon avantageuse, un dispositif de joints 16a, 16b assure une étanchéité des tissus végétaux entre la partie haute 4 et la partie basse 5. Un premier joint 16a est situé entre le bord du panier 3 et l'épaulement 7, situé dans la partie latérale 6 du corps 1 unitaire. Un deuxième joint 16b est placé entre le panier 3 et la cloche 14. Cette dispositif permet d'assurer le passage du milieu nutritif 23 par les ouvertures situées dans le fond du panier 3, assurant ainsi une bonne utilisation de la surface de drainage. Cet ensemble de joints permet aussi d'éviter la pollution du milieu nutritif 23 par les tissus végétaux. Advantageously, a device for seals 16a, 16b seals the plant tissues between the upper part 4 and the lower part 5. A first seal 16a is located between the edge of the basket 3 and the shoulder 7, located in the part lateral 6 of body 1 unit. A second seal 16b is placed between the basket 3 and the bell 14. This device makes it possible to ensure the passage of the nutritive medium 23 through the openings located in the bottom of the basket 3, thus ensuring good use of the drainage surface. This set of seals also makes it possible to avoid pollution of the nutrient medium 23 by plant tissues.
La Figure 6 représente une autre réalisation préférée du récipient selon l'invention. Figure 6 shows another preferred embodiment of the container according to the invention.
Dans cette réalisation, le tube 12 se prolonge à l'intérieur de la cloche par une partie basse 22. Ce prolongement peut venir en contact avec le fond du récipient. In this embodiment, the tube 12 is extended inside the bell by a lower part 22. This extension can come into contact with the bottom of the container.
I1 est muni de dégagement 21 latéraux. Ces dégagements permettent le passage de l'air comprimé lors des cycles d'immersion. Ils permettent aussi le passage du milieu nutritif, lors de son introduction ou de son remplacement. I1 is provided with lateral release 21. These clearances allow the passage of compressed air during immersion cycles. They also allow the passage of the nutrient medium, during its introduction or replacement.
Ce tube 12 central comporte un filetage 14 permettant de visser la cloche 13. Au-dessus de ce filetage 14, deux ergots 17, 19 permettent le maintien du tamis 18 et du panier 3. Le bord inférieur de la cloche 13 ne vient pas en contact avec le fond du récipient, dégageant ainsi un passage annulaire facilitant les mouvements du milieu nutritif. This central tube 12 has a thread 14 allowing the bell 13 to be screwed. Above this thread 14, two lugs 17, 19 allow the screen 18 and the basket 3 to be held in place. The lower edge of the bell 13 does not come in contact with the bottom of the container, thus clearing an annular passage facilitating the movements of the nutritive medium.
Un joint lOb situé entre le tube 12 et le couvercle 2 améliore encore l'étanchéité et la protection du milieu stérile. A joint 10b located between the tube 12 and the cover 2 further improves the sealing and the protection of the sterile environment.
Avantageusement dans différentes réalisations de l'invention, les différentes pièces constitutives du récipient sont réalisées dans une matière permettant leur stérilisation. Advantageously in different embodiments of the invention, the various constituent parts of the container are made of a material allowing their sterilization.
Cette stérilisation peut être réalisée par autoclavage. Les différentes pièces peuvent être constituées d'une matière transparente. Les ouvertures de drainage disposées dans le fond du panier 3 sont de très fines fentes d'une longueur de 1 mm environ et d'une largeur d'environ 3/10 de mm.This sterilization can be carried out by autoclaving. The different parts can be made of a transparent material. The drainage openings arranged in the bottom of the basket 3 are very fine slots with a length of approximately 1 mm and a width of approximately 3/10 of mm.
Le récipient de culture in vitro a une contenance d'environ 1 litre. La partie basse 5 peut contenir 250 ml de liquide nutritif. Le récipient a une forme sensiblement cylindrique, une hauteur comprise entre 14 et 16 cm, un diamètre dans la partie basse d'environ 10 à 11 cm, et dans la partie haute d'environ 12 à 13 cm. The in vitro culture vessel has a capacity of approximately 1 liter. The lower part 5 can contain 250 ml of nutritive liquid. The container has a substantially cylindrical shape, a height between 14 and 16 cm, a diameter in the lower part of about 10 to 11 cm, and in the upper part of about 12 to 13 cm.
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