FR2942227A1 - Utilisation de tampons pour la complexation de radionucleides - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un procédé de complexation d'un chélate par un radionucléide, avantageusement le Gallium la complexation étant réalisé, avantageusement à température ambiante sans chauffage, en additionnant le radionucléide au chélate dans une solution tampon, le tampon de cette solution comprenant entre deux et cinq fonctions de coordination avec le radionucléide, chaque fonction de coordination étant indépendamment choisie parmi une fonction acide carboxylique et une fonction hydroxy, à la condition que le tampon comprenne au moins une fonction acide carboxylique et au plus deux fonctions acide carboxylique. Elle concerne également la solution injectable obtenue.

Description

L'invention concerne des compositions améliorées d'agents de contraste et un procédé de préparation de telles compositions. L'invention concerne en particulier des produits pour l'imagerie PET (tomographie par émission de positons), et notamment des produits contenant un radionucléide pour l'imagerie PET, de préférence le gallium 68. Le document WO 2007/042504 au nom du demandeur explique en détail l'intérêt de l'imagerie PET, en particulier au gallium 68 (Ga68) très avantageux car ne nécessitant pas l'utilisation à proximité ou au sein de l'hôpital d'un cyclotron très encombrant et très coûteux. Le Ga68 produit par un générateur dédié de petite taille est couplé à un chélate vectorisé (indifféremment appelé kit froid dans la présente demande) non encore marqué, la réaction de coordination (complexation du radionucléide par le kit froid) fournissant un chélate vectorisé radiomarqué (indifféremment appelé chélate vectorisé complexé dans la présente demande) au Ga68 et qui est administré au patient pour une imagerie PET. Plus précisément, très avantageusement le chélate vectorisé comprend une partie de ciblage (indifféremment appelé agent de ciblage ou biovecteur dans la présente demande) d'une cible biologique spécifique (récepteur cellulaire par exemple), en particulier d'une zone pathologique d'intérêt diagnostique, reliée typiquement par un lien chimique (liaison covalente par tout groupe de liaison approprié) au chélate constituant la partie signal. Ce chélate est capable de complexer le radionucléide (par exemple un chélate macrocyclique de type DOTA, NOTA, PCTA). Plus précisément la solution de Ga 68 radioactif, éluat du générateur de gallium, est mélangée dans une zone dédiée et protégée de l'hôpital (zone désignée radiopharmacie), avec une solution de chélate vectorisé préparée à l'avance (le kit froid) fournie par le fabricant de produit de contraste.

Avantageusement, le mélange se fait dans un automate dans lequel sont introduites d'une part la dose de Ga68 éluat du générateur et d'autre part la dose de chélate vectorisé (non encore radiomarqué par le Ga68). Compte tenu de la durée de vie courte du radionucléide (68 minutes pour le gallium 68) dans la pratique clinique, on cherche toujours à améliorer les conditions de préparation de l'agent de contraste radiomarqué, et en particulier à obtenir une complexation très rapide, simple, et avec un haut niveau de pureté du chélate radiomarqué. Plus précisément on cherche à obtenir une complexation dans un temps très court, avec un rendement et une pureté du chélate radiomarqué d'au moins 90%, de préférence d'au moins 95%. Pour la technologie gallium, l'art antérieur a tout d'abord décrit une complexation du gallium réalisée en chauffant à une température de l'ordre de 75°C à 95°C, pendant au moins 15 minutes. Un niveau de pureté satisfaisant a été atteint à ces températures en utilisant les tampons HEPES (dérivé acide sulfonique) ou acétate. Mais cette durée de chauffage est par contre relativement longue comparée à la courte vie de l'isotope Gallium68, et nécessite un appareillage approprié. Ces tampons étaient reconnus jusqu'à présent à la connaissance du demandeur comme les seuls utilisés par l'homme du métier de la complexation du gallium, du fait vraisemblablement de leur efficacité avérée, dans les conditions physico-chimique souhaitées pour cette complexation, en particulier l'obtention d'un pH compris entre 3,5 et 4,5, et de leur usage courant en biochimie de composés PET. Toutefois, ces tampons présentent les inconvénients suivants : -leur utilisation nécessite des conditions physico-chimiques très spécifiques (notamment de concentration et de pH). Ainsi, ils ne permettent pas d'obtenir une large gamme de pH d'utilisation pour la complexation, ce qui est très limitant pour l'utilisateur. En particulier, cela fige les conditions d'utilisation avec des risques de non conformité réglementaires, ce qui est bien entendu un problème majeur pour le produit pharmaceutique. Par exemple si la solution éluat de Ga68 issu générateur est plus acide, le tampon utilisé risque de ne plus avoir le pouvoir tampon requis, ce qui risque de perturber la complexation et/ou d'altérer le biovecteur, et ainsi de rendre non conforme le produit par rapport aux spécifications qu'il doit obligatoirement remplir pour être injecté au patient. - le tampon HEPES ne figure pas dans la pharmacopée, ce qui pose des problèmes complexes en clinique humaine de réglementation pharmaceutique.

Afin d'améliorer le procédé de complexation, la recherche de l'art antérieur 10 n'a pas porté sur les solutions tampons utilisables, mais uniquement sur le mode de chauffage ou la nécessité d'un tel chauffage.

Ainsi, l'art antérieur a ensuite décrit dans le document WO2004/089425 un procédé de coordination plus rapide par microondes destiné à éviter l'étape de 15 chauffage tout en utilisant toujours les mêmes tampons. Or cette étape de microondes entraîne également des contraintes pour l'utilisateur, et représente un risque d'altération et/ou de dégradation du chélate vectorisé, les biovecteurs pharmacologiques étant en effet souvent sensibles à ce traitement, en particulier les peptides, les pharmacophores organiques, les vitamines et 20 les protéines. Pour éviter ces difficultés, la publication Velikyan et al, Bioconjugate Chem, 2008, 19, 569-573 décrit un procédé de coordination à température ambiante et sans microondes, mais utilisant les tampons déjà utilisés auparavant, plus exactement les tampons HEPES ou acétate de sodium, à certaines valeurs très 25 spécifiques de concentration et de pH. Plus précisément le tampon HEPES est décrit comme efficace à pH de 4,6-4,8 et 1 M, et le tampon acétate est décrit comme efficace à pH de 4,6-4,8 et 0,4 M. Ainsi, au global, l'art antérieur enseigne que la complexation, en particulier à température ambiante nécessite l'utilisation uniquement de certains tampons 30 (HEPES, acétate) et dans des conditions physico-chimiques très spécifiques.

Ainsi au vu de l'art antérieur, seules certaines conditions physicochimiques très particulières assez strictes permettent l'utilisation de ces tampons à température ambiante.

De façon surprenante, le demandeur a constaté que la complexation, en particulier à température ambiante, sans étape de chauffage ni microondes, est obtenue avec succès notamment sur le plan de la rapidité de la complexation (en moins de 15 minutes, de préférence en moins de 10 minutes, encore de préférence en 3 à 10 minutes, par exemple 5 à 8 minutes) et de la qualité des chélates radiomarqués, grâce à l'utilisation pour la réaction de complexation de certains tampons appropriés de la Pharmacopée différents du HEPES et de l'acétate dans des conditions physicochimiques de complexation (concentrations et pH notamment) moins strictes et limitantes que dans l'art antérieur. Des résultats très satisfaisants ont en particulier été obtenus dans le cas de plusieurs chélates (notamment le NOTA et le PCTA), et dans le cas de plusieurs tampons dont le demandeur a constaté qu'ils présentent des caractéristiques physico-chimiques comparables. Ces résultats ont même pu être obtenus à température ambiante, sans chauffage ou micro-onde, ce qui est particulièrement surprenant au vu de l'art antérieur. Il est précisé que a fortiori, puisque ces tampons peuvent être utilisés à température ambiante, les tampons de la Pharmacopée du demandeur peuvent être utilisés avec chauffage ou micro-ondes ce qui peut être souhaité pour certains biovecteurs par exemple (ou si l'automate qui effectue la complexation inclut cette programmation automatiquement).

Les tampons du demandeur permettent une complexation satisfaisante, avec un taux de complexation adapté, avantageusement au moins 92, 95, 97%, et une pureté suffisante (au moins 92, 95, 97%) et de préférence sans formation de précipité à éliminer. Plus précisément le demandeur a obtenu des résultats très avantageux avec les 30 tampons comprenant au moins deux fonctions de coordination avec le Gallium 68 décrits ci-dessous et comme décrit dans les exemples détaillés.

A cet effet l'invention concerne selon un premier aspect un procédé de complexation (indifféremment appelé procédé de radiomarquage dans la présente demande) d'un chélate par un radionucléide, avantageusement le gallium, la complexation étant réalisée, avantageusement à température ambiante sans chauffage, en additionnant le radionucléide au chélate dans une solution tampon, le tampon de cette solution comprenant entre deux et cinq fonctions de coordination avec le radionucléide, chaque fonction de coordination étant indépendamment choisie parmi une fonction acide carboxylique et une fonction hydroxy, à la condition que le tampon comprenne au moins une fonction acide carboxylique et au plus deux fonctions acide carboxylique.

Ainsi le demandeur a fait un choix judicieux des tampons de manière que la cinétique de complexation soit suffisamment rapide pour permettre des conditions d'utilisation (en particulier des conditions de pH et de chauffage) variées et souples.

Dans la demande, on entend par fonction de coordination acide carboxylique toute fonction acide carboxylique COOH et les fonctions équivalentes à COOH du point de vue de la complexation du Ga68, et en particulier : une fonction acide incluse dans un cycle comme par exemple de O. O formule suivante : - le groupe fonctionnel isostère, par exemplePO3H2 (comme démontré avec l'acide phosphorique notamment).

Dans la présente demande, les tampons peuvent porter la fonction hydroxy directement sur le carbone du groupe C=0 de la fonction acide carboxylique, (comme dans le cas du tampon carbonate) ou sur le P du groupe P=0 (comme dans le cas tampon phosphate), ou encore sur un autre carbone de la chaîne carbonée (d'où des alpha, béta ... oméga hydroxy acides carboxyliques). L'invention couvre le cas d'une fonction poly acidobasique ayant plusieurs pKa compris entre 2 et 13 liés au même groupe fonctionnel (cas du tampon acide phosphorique notamment). Par ailleurs la complexation est encore meilleure lorsque, dans le cas où le tampon contient deux fonctions acide carboxylique, il contient en outre au moins une fonction hydroxy (complexation meilleure, sans besoin de filtrer de précipité après la complexation. Ainsi de manière préférée, l'invention concerne un procédé de radiomarquage caractérisé en ce que le tampon comprend en outre une fonction hydroxy.

Selon des réalisations, les tampons utilisés comprennent avantageusement d'une part deux fonctions acide carboxylique et d'autre part au moins une fonction hydroxy et notamment une ou deux fonctions hydroxy. Selon des réalisations, les tampons utilisés comprennent avantageusement au moins une fonction acide carboxylique et au moins une fonction hydroxy.

Avantageusement, le tampon est choisi parmi les tampons suivants : lactate, tartrate, malate, ascorbate, carbonate, phosphate et leur mélanges. (Dans la demande on appelle indifféremment tampon phosphate et tampon acide phosphorique ).De façon avantageuse le tampon est un acide monocarboxylique en C1-C10 mono hydroxylée éventuellement di, tri ou tétrahydroxylé ou un acide dicarboxylique en Ci-Cio, optionnellement mono di ou trihydroxylé. Ces tampons doivent appartenir à la pharmacopée. Très avantageusement, le tampon est choisi parmi les tampons suivants : lactate, tartrate, malate ou leurs mélanges.

Il est rappelé ici que : le tartrate possède deux fonctions acide carboxylique et deux fonctions hydroxy le lactate possède une fonction acide carboxylique et une fonction 5 hydroxy Il est rappelé que 1'HEPES et l'acide acétique comprennent respectivement zéro et une seule fonction acide carboxylique. Le tableau 1 rappelle les formules des tampons. Tampon Formule pKa lactate ~ 3,8 HO OH tartrate H ~ ~COOH 3,04 et 4,37 HOOC OH malate COOH 3,46 et 5,10 / HOOC OH ascorbate HO 4,05 HO O O HO OH HEPES 0 3 et 7,55 /Nn/S\ J OH HON carbonate o 6,35 et 10,33 HOOH citrate 000H 3,15 ; 4,77 et 6,4 HOOC OH COOH acétate ~ ~ 4,75 OH Phosphate O HO-P-OH 1 OH 2,12 ; 7,21 et 12,67 Le pH de la solution de complexation en utilisant les tampons de l'invention est avantageusement compris entre 1 et 14, typiquement entre 3 et 11, avantageusement entre 3et 7.

Plus précisément, il est rappelé que le pouvoir tampon est la valeur pKa +/-1, ce qui signifie par exemple 3,75-5,75 pour l'acétate. Grâce aux tampons du demandeur la fourchette est beaucoup plus large, par exemple [2,04-5,37] pour le tartrate, [5,35-11,33] pour le carbonate, [1,12-13,67] pour le phosphate. On peut aussi combiner plusieurs tampons en association (mélanges de tampons) notamment pour optimiser les gammes de pouvoir tampons et le choix des chélates et des biovecteurs, étant précisé que tous les chélates n'ont pas nécessairement la même complexation selon le tampon considéré. Ainsi par exemple le NOTA est particulièrement avantageux pour les tampons lactate, carbonate, tartrate.

Les mécanismes exacts ne sont pas connus mais le demandeur fait l'hypothèse pour expliquer ces résultats a posteriori, que les tampons très efficaces sont ceux qui contiennent : suffisamment de fonctions de coordination pour suffisamment complexer le gallium : l'acétate qui ne contient qu'une seule fonction ne serait pas suffisamment complexant pour obtenir une efficacité pour des conditions variées de complexation (concentration, pH) ; 1'HEPES qui contient une fonction sulfonate et un groupe hydroxy ne serait également pas suffisamment complexant mais pas trop de fonctions de coordination pour ne pas trop complexer le 25 gallium : le citrate qui contient trois fonctions acide carboxylique s'avère être trop complexant Par extension l'invention concerne le cas de tampons tels que la valeur log K Ga68 soit comprise entre 3 et 6, de préférence entre 3 et 5. Le demandeur s'est rendu compte que la constante de complexation par le tampon du Ga68 (log K Ga68 du tampon comprenant entre 2 et 4 fonctions de coordination) est très avantageusement comprise entre 2 et 6, et très avantageusement entre 3 et 5, de préférence de l'ordre de 4 (entre 3,5 et 4,5 notamment). D'une certaine manière le demandeur est allé contre un préjugé d'utiliser des composés organiques tels que le lactate ou le citrate connus comme des agents complexant du gallium, ces composés étant utilisés en thérapeutique comme médicament anticancéreux ou en agent d'imagerie tumorale. Selon des réalisations, le tampon est une association d'au moins deux des tampons indiqués ci-dessus, par exemple un mélange de tampon lactate et tartrate. Toutes les combinaisons sont possibles avec par exemple les proportions suivantes entre les tampons de la présente invention: 90/10, 80/20, 60/40, 50/50 pour deux tampons, et 80/10/10, 60/20/20 pour trois tampons. On pourrait également utiliser un mélange par exemple d'un tampon très efficace selon l'invention type lactate pour un chélate donné et d'un tampon moins efficace pour ce chélate, On peut aussi utiliser de façon moins avantageuse un mélange de tampon très efficace selon l'invention (lactate par exemple) avec un tampon non efficace seul (citrate en particulier), mais à la condition d'utiliser une proportion suffisamment faible du tampon non efficace seul pour ne pas altérer la complexation. Le chélate utilisable dans le cadre de la présente invention est un chélate libre (c'est-à-dire non vectorisé) ou un chélate vectorisé, le chélate étant capable de complexer le radionucléide. Avantageusement il s'agit d'un chélate vectorisé. On entend au sens de la présente invention par chélate vectorisé tout chélate sur lequel est lié (par l'intermédiaire d'un lien chimique) une partie de ciblage d'une cible biologique spécifique, en particulier d'une zone d'intérêt diagnostique. Ainsi avantageusement, le chélate est vectorisé par un agent de ciblage d'une cible biologique spécifique, en particulier d'une zone d'intérêt diagnostique. Avantageusement la partie chélate du chélate vectorisé est bien connue de l'homme du métier, et de préférence il s'agit d'un des chélates préférés pour la complexation du Ga 68 tels que le NOTA ou le PCTA.

Ainsi, le chélate vectorisé est avantageusement choisi parmi le NOTA vectorisé, PCTA vectorisé et le DOTA vectorisé, avantageusement le dideaza-NOTA ou le folate PCTA.

Le demandeur a obtenu des résultats particulièrement avantageux pour : 10 - un tampon lactique, tartrique, carbonique pour le NOTA. - un tampon lactique ou carbonique pour le PCTA. Pour la partie chélate du produit, un grand nombre de chélates peuvent être utilisés, notamment un chélate de formule général suivante : M~ 3+ Ga R 15 avec : M-M l -M2 forme un noyau pyridine ou Ml et M2 sont absents et M représente une liaison ou M est N-R et Ml et M2 représentent un atome d'hydrogène ou un méthyle avec R est choisi indépendamment parmi CH2CO2- ou H ou CHXûCO2-, avec 20 au moins un R étant CHXCO2- et X étant L(Linker)ûB (Biovecteur) ; et en particulier un chélate linéaire choisi parmi : EDTA, DTPA diéthylènetriaminopentaacétique acide, N- [2- [bis(carboxyméthyl)amino] -3-(4-ethoxyphenyl)propyl] -N- [2- [bis(carboxyméthyl)amino] éthyle] -L-glycine (EOB-DTPA), N,N-bis [2- [bis (carboxyméthyl)amino ]éthyle] -L- glutamique 25 acide (DTPA-GLU), N,N-bis [2- [bis (carbo xyméthyl) amino ] éthyle] -L- lysine (DTPA-LYS), des dérivés mono- ou bis-amide du DTPA, tels que N,N-bis[2-[carboxyméthyl[(méthylcarbamoyl)méthyle]amino]éthyle ] glycine (DTPABMA), 4-carboxy-5,8, 1 1 -tris(carboxyméthyl)- 1 -phenyl-2-oxa-5 ,8, 1 1 - triaz atride can-13-o ic acide (BOPTA), On pourra utiliser notamment un chélate macrocyclique parmi 1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetraacetic acide (DOTA), 1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triacetic acide (DO3A), 10-(2-hydroxypropyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododec an- 1,4 ,7-triacetic acide (HPDO3A) 2-methyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetraacetic acide (MCTA), ( alpha , alpha', alpha ", alpha '")-tetramethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecan- 1,4,7,10-tetraacetic acide (DOTMA), 3,6,9,15-tetraazabicyclo[9.3.1]pentadeca-1(15), 1 1,13-triene-3,6,9-triacetic acide (PCTA). On pourra aussi utiliser des dérivés dans lesquels un ou plusieurs groupes carboxyliques sont sous forme d'un sel, ester, amide correspondant ; ou un composé correspondant dans lequel un ou plusieurs groupes carboxyliques sont remplacés par un groupe phosphonique et/ou phosphinique tel que 4-carboxy-5 , 1 1 -bis(carboxyméthyl) - 1 -phényl- 12- [(phénylméthoxy)méthyl] -8-(phosphonométhyl)-2-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-oic acide, N,N'- [(phosphonométhylimino)di-2,1-ethanediyl]bis [N-(carboxyméthyl)glycine], N,N'-[(phosphonométhylimino)di-2,1-ethanediyl]bis[N- (phosphonométhyl)glycine], N,N'-[(phosphinométhylimino)di-2,1- ethanediyl]bis [N-(carboxyméthyl)glycine], 1,4 ,7,10-tetraazacyc lo do decane- 1 ,4 ,7,10-t etrakis [méthylen(méthylpho sphonique) ] acide, or 1,4,7,10- tetraazacyclododecane-1,4,7,10- tetrakis[méthylen(méthylphosphinique)]acide. On peut aussi utiliser un chélate parmi : DOTA gadofluorines, DO3A, HPDO3A, TETA, TRITA, HETA, DOTA-NHS, M4DOTA, M4DO3A, PCTA et leurs dérivés 2-benzyl-DOTA,alpha- (2-phenethyl) 1,4,7,10 tetraazacyclododecane-1-acetic-4,7,10-tris (méthylacétique) acide, 2benzyl- cyclohexyldiethylenetriaminepentaacetic acide, 2-benzyl-6methyl-DTPA, A' E N '.,A3 1E6 6,6"-bis [N, N, N", N"tétra (carboxyméthyl)aminométhyl)-4'- (3-amino-4-methoxyphenyl)- 2,2' : 6', 2"-terpyridine, N,N'-bis-(pyridoxal-5-phosphate) éthylènediamine- N, N'-diacétique acide (DPDP) et éthylènedinitrilotétrakis (méthylphosphonic) acide (EDTP).

De manière plus large, le ou les chélates formant l'entité signal pourront répondre à la formule du document 2007/042504 (incorporé par référence pour le formules et les définitions associées), et du document WO01/60416 suivantes: A3 E3 A ù+_A4 °~--A >iy 7 ~5 i8 A3 A5 as \ , y E6 A6 A' Ag10 Y Y ,,N , N ' a~Tl~ x o YN > (Y/'-o ~~N 1 C :) o oo L x x X O o x ~--o ox ~o x `N X,~j0 Zr N X f N ~ Z \[ J J R~N ~,! Rt,,N R ~/N NY! Y L \ J( avec X un groupe capable de coordiner un cation métallique (de préférence O-, OH, NH2, OPO3-, NHR avec R une chaîne aliphatique), Y un groupe de liaison capable d'être lié à un biovecteur.

On peut utiliser avantageusement des composés NOTA désignés C-fonctionnalisés (au moins un groupe Y greffé sur un atome de carbone du NOTA permet le couplage au biovecteur) et des composés NOTA portant au moins un groupe CH2supplémentaire dans le cycle. On pourra aussi utiliser les chélates désignés P730 du demandeur, en particulier de formule V et VI du document EP661279 (US5919432), notamment ovo o~o /--~ N N C OH N /N O O OH O '%o dont la préparation est décrite précisément notamment page 26 à 32 de ce 5 document, et les chélates à squelette PCTA décrits par le demandeur notamment dans US6440956. On pourra aussi utiliser les chélates suivants : HO OH HO HOOCù\ / \ /ùCOOH N N HOOC-\ / \ N--, COOH HOù OH HO/OH OH HO HBED PLED //y or ct;onn: ; t o. CN N HOC OH -000H COOH COOH COOH HOOCù\ N HOOCù N N TAM E-Hex TAC N-H P N N 7 \ NH 2 HD 0 HO 0 COOH o 15 o n OH rF 1 : NEEA rF 2 : N3PA O O HO HO HO NCS OH NCS SCN OH Composé 7 NE3TA ------- HO,)C"N NCO2H H02C N N.,) r;;= f-: , . ,

CO,H Composé 6 .-i.--- ' H02C ,(.N Composé 8 --- H02C N. CO2H NETA NBTA-Bn HD C\ H02C H020 / N'"'' K1H N ,,02L, N-cn H02C' , ".) . ' H /1- 2 i '-H )---, ;META C,NESTA- NB des chélates DIP-LICAM ou dérivés (DIP-LICAMS et TIP-LICAMS) pour 5 lesquels la présence de la fonction acide sulfonique peut faire évoluer MESTA NO2 l'excrétion vers les reins plutôt que vers le foie. c HN: -exe*,g osa Ho....r-,-.. H. EHP et,14 ene e,e: t butyl SE D Me. He- CH* H C H8,MA SHBE:D. 014 ,Ha,, PL ------ t.,il-4 HCDOC ,.,,ii.1 Li .COOH --- Hs,j( --- SH HS' fia;ùAlù1E. 2 (EC) x$' ~Kl1t ...ù..000 , NH HW.. ,,N N. SM (5SS) (6SS). 7 (T.AC.N-TM). (NS6) On peut aussi utiliser de manière générale tout chélate capable de former une 5 cage suffisamment stable autour de Ga,3+, notamment toute amine aliphatique, macrocyclique ou linéaire, macrocycle amine avec amines tertiaires.

Avantageusement la partie de ciblage du chélate vectorisé est un biovecteur de ciblage d'une zone pathologique d'intérêt diagnostique, le biovecteur étant avantageusement un acide aminé, un peptide, avantageusement comprenant 4 à 15, ou 4 à 10 acides aminés, un polypeptide, une vitamine, un mono ou poly saccharide, un anticorps, un acide nucléique, un bicyclam ou un aptamère. I1 peut également être un biovecteur ciblant des récepteurs cellulaires (en particulier tous les récepteurs décrits ci-dessous), un pharmacophore (molécule organique à activité pharmacologique), un biovecteur de ciblage de l'angiogenèse, un biovecteur de ciblage de MMP, un peptide de ciblage de tyrosine kinase, un peptide de ciblage de la plaque d'athérome, un biovecteur de ciblage de plaques amyloïdes.

De manière plus large, le ou les biovecteurs sont par exemple choisis parmi la liste suivante (les documents et références entre parenthèses sont des exemples et non une liste limitative) : 1) Les biovecteurs ciblant des récepteurs VEGF et angiopoiétine (décrits dans WO 01/97850), les polymères tels que polyhystidine (US 6,372,194), les polypeptides ciblant la fibrine (WO 2001/9188), les peptides de ciblage d'intégrines (WO 01/77145, WO 02 26776 pour alphav beta3, WO 02/081497, par exemple RGDWXE), les pseudopeptides et peptides de ciblage de métalloprotéases MMP (WO 03/062198, WO 01/60416), les peptides ciblant par exemple le récepteur KDR/Flk-1, ou les récepteurs Tie-1 et 2 (WO 99/40947 par exemple), les glycosides de sialyl Lewis (WO 02062810 et Müller et al, Eur. J. Org. Chem, 2002,3966-3973), les antioxydants tels que l'acide ascorbique (WO 02/40060), les biovecteurs de ciblage de la tuftsine (par exemple US 6,524,554), de ciblage de récepteurs à protéine G GPCR en particulier la cholécystokinine (WO 02/094873), les associations entre antagoniste d'intégrine et mime de la guanidine (US 6 489 333), les quinolones ciblant alphav beta3 ou 5 (US 6,511,648), les benzodiazépines et analogues ciblant des intégrines (US A 2002/0106325, WO01/97861), les imidazoles et analogues (WO 01/98294), les peptides RGD (WO 01/10450), les anticorps ou fragments d'anticorps (FGF, TGFb, GV39, GV97, ELAM, VCAM, inductible par TNF ou IL (US 6,261,535), les molécule de ciblage modifiées par interaction avec la cible (US 5,707,605), les agents de ciblage de dépôts amyloïdes (WO 02/28441 par exemple), les peptides clivés cathepsines (WO 02/056670), les mitoxantrone ou quinone (US 6,410,695), les polypeptides ciblant des cellules épithéliales (US 6,391,280), les inhibiteurs de cystéines protéases (WO 99/54317), les biovecteurs décrits dans : US 6,491,893 (GCSF), US 2002/0128553, WO 02/054088, WO 02/32292, WO 02/38546, WO20036059, US 6,534,038, WO 0177102, EP 1 121 377, Pharmacological Reviews (52, n°2, 179 ; facteurs de croissance PDGF, EGF, FGF...), Topics in Current Chemistry (222, W.Krause, Springer), Bioorganic & Medicinal Chemistry (11, 2003, 1319-1341 ; dérivés tétrahydrobenzazépinones ciblant alphav beta3). 2) Les inhibiteurs d'angiogenèse, notamment ceux testés en essais cliniques ou déjà commercialisés, notamment : - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des récepteurs FGFR ou 20 VEGFR tels que SU101, SU5416, SU6668, ZD4190, PTK787, ZK225846, des composés azacycles (WO 00244156, WO 02059110) ; - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des MMP tels que le BB25-16 (marimastat), le AG3340 (prinomastat), le solimastat, le BAY12-9566, le BMS275291, le metastat, le neovastat ; 25 - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des intégrines tels que le SM256, le SG545, des molécules d'adhésion bloquant le EC-ECM (tels que le EMD 121-974, ou la vitaxine) ; - des médicaments à mécanisme d'action antiangiogenèse plus indirect tels que le carboxiamidotriazole, le TNP470, la squalamine, le ZD0101 ; 30 - les inhibiteurs décrits dans le document WO 99/40947, les anticorps monoclonaux très sélectifs pour la liaison au récepteur KDR, les analogues de la somatostatine (WO 94/00489), les peptides de liaison à la sélectine (WO 94/05269), des facteurs de croissance (VEGF, EGF, PDGF, TNF, MCSF, interleukines); des biovecteurs de ciblage de VEGF décrits dans Nuclear Medicine Communications, 1999, 20 ; - les peptides inhibiteurs du document WO 02/066512. 3) Des biovecteurs capables de cibler des récepteurs : CD36, EPAS-1, ARNT, NHE3, Tie- l , 1/KDR, Fit-1, Tek, neuropiline- l , endogline, pléientropine, endosialine, Axl., alPi, a2ssl, a4Pl, a5pl, eph B4 (éphrine), récepteur laminine A, récepteur neutrophiline 65, récepteur leptine OB-RP, récepteur chimiokine CXCR-4 (et autres récepteurs cités dans le document WO99/40947), bombésine/GRP, récepteurs gastrine, VIP, CCK. 4) Des biovecteurs de type inhibiteurs de tyrosine kinase. 5) Les inhibiteurs du récepteur GPIIb/IIIa connus choisis parmi : (1) le fragment fab d'un anticorps monoclonal du récepteur GPIIb/IIIa, Abciximab, (2) les petites molécules peptidiques et peptidomimétiques injectées en intraveineuse telles que l'eptifibatide et le tirofiban. 6) Des peptides antagonistes de récepteurs au fibrinogène (EP 425 212), des peptides ligands de récepteurs IIb/IIIa, des ligands du fibrinogène, des ligands de la thrombine, des peptides capables de cibler la plaque d'athérome, les plaquettes, la fibrine, des peptides à base d'hirudine, des dérivés à base de guanine ciblant le récepteur IIb/IIIa. 7) D'autres biovecteurs ou fragments biologiquement actifs de biovecteurs connus de l'homme du métier comme médicaments, à action anti- thrombotique, anti agrégation plaquettaire, antiathérosclérotique, antiresténotique, anticoagulante. 8) D'autres biovecteurs ou fragments biologiquement actifs de biovecteurs ciblant av(33, décrits en association avec des DOTA dans le brevet US 6 537 520, choisis parmi les suivants : mitomycine, tretinoine, ribomustine, gemcitabine, vincristine, etoposide, cladribine, mitobronitol, methotrexate, doxorubicine, carboquone, pentostatine, nitracrine, zinostatine, cetrorelix, letrozole, raltitrexed, daunorubicine, fadrozole, fotemustine, thymalfasin, sobuzoxane, nedaplatin, cytarabine, bicalutamide, vinorelbine, vesnarinone, aminoglutethimide, amsacrine, proglumide, elliptinium acetate, ketanserin, doxifluridine, etretinate, isotretinoine, streptozocine, nimustine, vindesine, flutamide, drogenil, butocin, carmofur, razoxane, sizofilan, carboplatine, mitolactol, tegafur, ifosfamide, prednimustine, picibanil, levamiso le, teniposide, improsulfan, enocitabine, lisuride, oxymetho lone, tamoxifen, progesterone, mepitiostane, epitiostanol, formestane, interferon- alpha, interferon-2 alpha, interferon-beta, interferon-gamma, colony stimulating factor-1, colony stimulating factor-2, denileukin diftitox, interleukin-2, leutinizing hormone releasing factor. 9) certains biovecteurs ciblant des types particuliers de cancers, par exemple des peptides ciblant le récepteur ST associé au cancer colorectal, ou le récepteur tachykinine. 10) des biovecteurs utilisant des composés de type phosphines. 11) des biovecteurs de ciblage de P-sélectine, E-sélectine ; par exemple, le peptide de 8 acides aminés décrit par Morikawa et al, 1996, 951, ainsi que différents sucres. 12) l'annexine V ou des biovecteurs ciblant les processus apoptotiques. 13) tout peptide obtenu par des technologies de ciblage telles que le phage display, modifié éventuellement par des acides aminés non naturels (http//chemlibrary.bri.nrc.ca), par exemple des peptides issus de banques phage display : RGD, NGR, KGD, RGD-4C, . 14) d'autres biovecteurs peptidiques connus de ciblage de plaques d'athérome, cités notamment dans le document WO 2003/014145. 15) des vitamines, notamment l'acide folique et ses dérivés connus capables de cibler les récepteurs au folate. 16) des ligands de récepteurs hormonaux dont les hormones et les stéroïdes. 17) des biovecteurs ciblant des récepteurs opioïdes. 18) des biovecteurs ciblant des kinases, par exemple des tyrosine kinase 19) des antagonistes LB4 et VnR. 20) des composés nitriimidazoles et benzylguanidines. 21) des biovecteurs rappelés dans Topics in Current Chemistry, vol.222, 260-274, Fundamentals of Receptor-based Diagnostic Metallopharmaceuticals, notamment : - des biovecteurs de ciblage de récepteurs peptidiques surexprimés dans les tumeurs (récepteurs LHRH, bombésine/GRP, récepteurs VIP, récepteurs CCK, récepteurs tachykinine par exemple), notamment les analogues de somatostatine ou de bombésine, des peptides dérivés octréotide éventuellement glycosylés, les peptides VIP, les alpha-MSH, les peptides CCK-B - des peptides choisis parmi : des peptides cycliques RGD, des peptides de ciblage de la fibrine, de la tuftsine, des peptides fMLF (récepteur : laminine). 22) des oligosaccharides, des polysaccharides et des dérivés d'oses, des dérivés ciblant les récepteurs Glut (récepteurs d'oses) ou des transporteurs de glutamine. 23) des biovecteurs utilisés pour des produits de type smart. 24) des marqueurs de la viabilité myocardique (par exemple tétrofosmine et hexakis2méthoxy-2méthylpropylisonitrile). 25) des traceurs du métabolisme des sucres et des graisses. 26) des ligands de récepteurs de neurotransmetteurs (récepteurs D, 5HT, 25 Ach, GABA, NA, NMDA). 27) des oligonucléotides, et des aptamères . 28) le facteur tissulaire 29) des biovecteurs décrits dans WO 03/20701, en particulier le PK11195 ligand du récepteur périphérique aux benzodiazépines. 30 30) des peptides liant la fibrine, notamment les séquences peptidiques décrites dans WO 03/11115. 31) des inhibiteurs d'agrégation de plaques amyloïdes décrits par exemple dans WO 02/085903. 32) des composés de ciblage de la maladie d'Alzheimer, en particulier les composés comprenant les squelettes de type benzothiazoles, benzofuranes, styrylbenzoxazoles/thiazoles/imidazoles/quinoline, styrylpiridines et leurs dérivés connus. 33) des agents de ciblage de récepteurs de chimiokines, et notamment de ciblage de CXCR4 Dans un mode de réalisation particulier, le biovecteur est un agent de ciblage de récepteurs de chimiokines, et notamment de ciblage de CXCR4 Pour le ciblage de CXCR4 on utilisera en particulier avantageusement des bicyclam (par exemple tous les dérivés décrits dans WO2006032704), et des peptides (notamment des peptides cycliques) notamment des peptides de 3 à 10 acides aminés, de préférence 3 à 8 acides aminés, par exemple 4 à 6 acides aminés. Avantageusement on utilisera un peptide parmi les suivants : a) Cyclo(D-Tyr-X-Arg-Nal-Gly) X IC50 (nM) Trans-4- 10 guanidinoPro Trans-4- 9,9 guanidinoPro Om 19 Lys 97 gDab 24 gLys 33 b) Cyclo(D-Tyr-: r i-Arg-Nal-Gly) c) Cyclo(D-Tyr-Arg-Arg-X-Gly) 23 X IC50 (nM) 13 18 Tr p Bt h Avec Bth : OH NH2 d) Cyclo(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-D-Ma : IC50 = 1 lnM) e) Cyclo(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-D-As i , Cyclo(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-DG u), Cyclo (D - Tyr-Arg-Arg-Nal-D-L y s) , Cyclo (D - Tyr-Arg-Arg-Nal-Gl.y) N H2N,eNH NH cydo(1 Tyr-2Arg-3Arg-4Nal-5D-Lys) peptide ou non cyclo(Tyr-2Arg3Arg-4Nal-5D-Asp) cyclo(lTyr-2Arg-3Arg-4Nal-5D-Glu) On pourra utiliser tout composé connu de type pseudo peptidique pour le ciblage de CXCR4, par exemple : H2N 24 W= Me, OMe ou X= C ou N ou Y= NO2, OMe ou Z= F, OMe H2N H2N Selon des réalisations avantageuses le biovecteur est un biovecteur de ciblage de récepteurs au folate, tel que l'acide folique ou tout dérivé connu de l'acide folique, et notamment un dérivé de formule du document W02004112839 (El) : /(K2 - Lf) r x J ou (E2) : - Lf) r x dans laquelle : * représente l'endroit où le biovecteur est lié au chélate a) G1 est choisi indépendamment dans le groupe constitué par : halo, Rf2, ORf2, SRf3, NRf4Rf5 ; de préférence G1 est choisi NH2 ou OH b) G2 est choisi indépendamment dans le groupe constitué par : halo, Rf2, ORf2, SRf3, and NRf4Rf5 ; c) G3, G4 représentent des groupes divalents choisis indépendamment dans le groupe constitué par -(Rf6')C=,-N=,-(Rf6')C(Rf7')-, -N(Rf4')- ; de préférence G3 est -N=(acide folique) ou ûCH- (composés décrits plus loin : CB3717, raltitrexed, MAI) lorsque le cycle comprenant G3 est aromatique, et G3 est ûNH- ou -CH2- (composés décrits plus loin : AG-2034, lometrexol) lorsque le cycle comprenant G3 est non aromatique ; de préférence G4 est ûCH- ou ûC(CH3)- lorsque le cycle comprenant G3 est aromatique, et ûCH2- ou -CH(CH3)- lorsque le cycle comprenant G3 est non aromatique ; e) G5 est absent (composé pemetrexed) ou choisi parmi -(Rf6')C=,-N=, -(Rf6')C(Rf7')-, -N(Rf4')- ; f) J est un cycle aromatique hétérocyclique ou non à 5 ou 6 sommets, les atomes du cycle pouvant être C, N, O, S ; g) G6 est N ou C (composé décrit plus loin : 3-deaza-ICI-198,583) h) Kl et K2 sont choisis indépendamment dans le groupe constitué par -C(Zf)-, -C(Zf)O-, -OC(Zf)-, -N(Rf4")-, -C(Zf)-N(Rf4), -N(Rf4")-C(Zf), - O-C(Zf)-N(Rf4")-, -N(Rf4")-C(Zf)-O-, N(Rf4")-C(Zf)-N(Rf5")-, -0-, -S-, - S(0)-, -S(0)2-, -N(Rf4")S(0)2- -C(Rf6")(Rf7")-, -N(C = CH)-, - N(CH2-C = CH)-, C1-C12 alkyle et C1-C12 alcoxy; dans lequel Zf est O ou S ; de préférence Kl est ûN(Rf4")- ou -C(Rf6")(Rf7")- avec Rf4", Rf6", Rf7" étant H ; A2 étant ou non lié de manière covalente à un acide aminé; i) Rf 2, Rf 3, Rf 4, Rf4', Rf 4", Rf 5, Rf 5", Rf 6" et Rf 7" sont choisis indépendamment dans le groupe constitué par : H, halo, C1-C12 alkyle, C1-C12 alcoxy, C1-C12 alkanoyle, C2-C12 alcényle, C2-C12 alcynyle, (C1-C12 alcoxy)carbonyle, et (C,-C, 2 alkylamino) carbonyle; h) Rf6' et Rf7' sont choisis indépendamment dans le groupe constitué par : H, halo, C1-C12 alkyle, C1-C12 alcoxy ; ou Rf6' et Rf7' forment ensemble 0= ; i) Lf est un lien divalent incluant le cas échéant un acide aminé naturel ou un poly acide aminé naturel, lié à K2 ou à Kl par son groupement alpha-amino par une liaison amide ; j) p, r et s sont indépendamment 0 ou 1. k) x est un nombre entier compris entre 1 et 5, avantageusement égal à 1. La formule (E) inclut les formes tautomériques, par exemple des composés pour lesquels G1 est OH, SH ou NH. Pour les composés de l'invention dans lesquels au moins un des groupes K1, 10 K2, Rfl Rf2, Rf3, Rf4 Rf4' Rf4" Rf5, Rf5", Rf6 Rf7", Rf6, Rf7, Rf6' et Rf7' comprend un groupe alkyle, alcoxy, alkylamino, alkanoyle, alcényle, alcynyle, alcoxy carbonyle, alkylamino carbonyle, le groupe comprend de préférence 1 à 6 atomes de carbone (C1-C6), encore de préférence 1 à 4 15 atomes de carbone (C1-C4). Parmi les composés énoncés ci-dessus, les inventeurs se sont notamment intéressés aux dérivés a) o 20 R1 R2 R3 R1 R2 R3 MTX NH2 N CH3 2-dAMT H N H 2-dMTX H N CH3 2-CH3-AMT CH3 N H 2-CH3-MTX CH3 N CH3 Edatrexate NH2 C C2H5 AMT NH2 N H X = propargyl R1 R3 R4 R5 CB3717 NH2 N OH Glu H ICI-198,583 CH3 N OH Glu H 3-deaza-ICI- CH3 CH OH Glu H 198,583 4-H-ICI-198,583 CH3 N H Glu H 4-OCH3-ICI- CH3 N OCH3 Glu H 198,583 Gluù>Val-ICI- CH3 N OH Valine H 198,583 Gluù*Sub-ICI- CH3 N OH Suberate H 198,583 7-CH3- ICI- CH3 N OH Glu CH3 198,583 X = méthyle Rl R2 R3 R4 R5 raltitrexed CH3 N OH Glu H 2-NH2-ZD 1694 NH2 N OH Glu H Ainsi avantageusement, le biovecteur est un folate ou un dérivé de folate. Les dérivés folates incluent ainsi les composés suivants : acide ptéropolyglutamique, ptéridines capables de cibler le récepteur au folate 10 (tétrahydroptérines, tetrahydrofolates, dihydrofolates notamment). Les dérivés folates incluent aussi les composés suivants : aminoptérine, améthoptérine (méthotrexate), N-méthylfolate, 2-déamino-hydroxyfolate ; et leurs dérivés déaza tels que la 1-déazamethoptérine ou 3-déazaméthoptérine, b) 5 le 3',5'-dichloro-4-amino-4-deoxy-Nùméthylptéroylglutamique acide (dichlorométhotrexate). Les dérivés folates incluent les composés deaza ou dideaza. Les termes "deaza" et "dideaza" font référence aux dérivés connus n'ayant pas des atomes d'azote G3, G5, G6 de l'acide folique. Par exemple les dérivés deaza incluent les dérivés 1 -deaza, 3-deaza, 5-deaza, 8-deaza, l0-deaza. Les brevets WO2007042504 et WO2004112839 (incorporés par référence) du demandeur illustrent de nombreux exemples de couplage chimique entre différents biovecteurs et différents chélates, typiquement à l'aide de liens (linkers) chimiques. A titre d'exemples on citera les linkers suivants : 1) les acides aminés 2) des liens L capables d'interagir avec au moins un groupe fonctionnel de biovecteur et au moins un groupe fonctionnel du chélate. L inclut notamment des chaînes alkyles substituées ou non, saturées ou non, droites ou ramifiées, des peptides, des polyéthylènes glycols et des polyoxyéthylènes. On citera notamment : 3) a.l) (CH2)2-phényl-NH , (CH2)3-NH, NH-(CH2)2-NH, NH-(CH2)3-NH, rien ou une simple liaison, (CH2)n, (CH2)ri CO-, -(CH2)äNH-CO- avec n = 2 à 10 , (CH2CH2O)q(CH2)rCO- , (CH2CH2O)q(CH2)rNH-CO- avec q = 1- 10 et r=2-10, (CH2)ri CONH ù , (CH2)ri CONH ù PEG, (CH2)ri NH-, (CH2)n \ N H (CH2)n\

N~ N H H N PEG (CH2)n H , avec n=1 à 5 et avantageusement n=4 ou 5, HOOC-CH2-O-(CH2)2-0-(CH2)2-O-CH2-COOH ; HOOC-(CH2)2-CO2-(CH2)2-OCO-(CH2)2-COOH ; HOOC-CH(OH)-CH(OH)-COOH; HOOC-(CH2)ri COOH; NH2-(CH2)ri NHz, avec n=0-20; NHz-(CH2)ri CO2H ; NH2-CH2 - (CHz-O-CH2)ri CO2H avec n=1 à 10, des linkers désignés A8 à A32 du document WO 2006/095234, pages 104 et 105. a.2) P1-1-P2, identiques ou différents, Pl et P2 étant choisis parmi O, S, NH, rien, CO2, NHCO, CONH, NHCONH, NHCSNH, SO2NH-, NHSO2-, squarate avec 1 = alkyle, alcoxyalkyle, polyalkoxyalkyle (PEG), alkyle interrompu par un ou plusieurs squarates ou par un ou plusieurs aryles, avantageusement phényles, alcényle, alcynyle, alkyle interrompus par un ou plusieurs groupes choisis parmi -NH-, -0-, -CO-, -NH(CO)-, -(CO)NH-, -O(CO)-, ou -(OC)OL aura par exemple un poids moléculaire compris entre 300 et 2000 g/mol, notamment entre 300 et 1000 g/mol. Pl et P2 sont ainsi des groupes de couplage du linker avec d'une part le 10 chélate et d'autre part le biovecteur. 4) des liens décrits dans le brevet US 6 264 914, capables de réagir avec les groupes fonctionnels (du biovecteur et du chélate) amino, hydroxyle, sulfhydryle, carboxyle, carbonyle, carbohydrates, thioéthers, 2-aminoalcohols, 2-aminothiols, guanidinyle, imidazolyle, phénolique ; et avec les rappels de 15 définition du WO 2007/042504. 5) certains liens décrits dans le brevet US 6 537 520 de formule (Cr6r7)g (W)h-(Cr6ar7a)g'-(Z)k-(W)h'-(Crgr9)g -(W)h -(Cr8ar9a)g avec les définitions de ce document. 6) certains liens décrits dans le document WO02/085908, par exemple une 20 chaîne linéaire ou ramifiée de linker choisis parmi : - CR6"'R7"'-, - (R6"')C=C(R7"')=, -CC-, -C(0)-, -0-, -5-, -S02-, -N(R3"')-, - (R6"')C=N-, -C(S)-, -P(OO(OR3"')-, -P(0)-(OR3"')O-, avec R"'3 un groupe capable de réagir avec un azote ou un oxygène - Une région cyclique (cycloalkyles divalents, hétérocycles divalents) 25 - Des polyalkylènes, polyalkylènes glycols 7) des linkers du document WO03/011115 pages 124-125 notamment mNH2 H2N NH2 H2N R 1 H2N N~,ä--N,NH2 H2NH2N NH2 n NH HNNH F M\ \ / OH H2N NH2 NH2 H9N Le choix des liens (structure et taille) pourra se faire notamment de manière à contrôler notamment la charge, la lipophilie, l'hydrophilie du produit en fonction de l'indication diagnostique recherchée, pour optimiser le ciblage biologique, la biodistribution. On pourra en particulier utiliser des linkers biodégradables in vivo, des linkers PEG ou mini-PEG.

A titre d'exemples, les produits vectorisés et radiomarqués, et mis en solution tampon en utilisant les tampons du demandeur (lactate, tartrate, malate 10 notamment) forment des complexes métalliques de gallium de formule : biovecteur avec les définitions précédentes des termes linkers et biovecteurs indiquées ci-dessus.

L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'un produit de contraste radiomarqué comprenant les étapes : préparation d'une solution de radionucléide, avantageusement le gallium 68 préparation d'un chélate vectorisé mélange, dans une solution tampon selon la présente invention, avantageusement à température ambiante sans chauffage et sans micro-ondes, et en moins de 15 minutes, de préférence en moins de 10 minutes, encore de préférence en moins de 7 minutes, de la solution de radionucléide et du chélate vectorisé.

Avantageusement le tampon est choisi parmi : les tampons lactate, tartrate, malate, ascorbate, carbonate, phosphate et leurs mélanges, encore plus avantageusement parmi les tampons lactate, tartrate, carbonate et leurs mélanges L'homme du métier comprend que dans la pratique courante, différentes variantes sont possibles pour ce mélange. Typiquement, le chélate vectorisé (non encore radiomarqué) est apporté sous forme de solution aqueuse concentrée avant l'introduction de la solution tampon, et l'éluat acide (pH autour de 2) de Ga68. Par exemple, comme illustré plus loin, on ajoute un volume de 0,4 ml de solution de Ga68 0,6nM au réacteur qui contient 1 ml de solution tampon et 20 pl de solution de chélate vectorisé 1,2 M. Mais on comprend que toutes les variantes donnant un résultat équivalent pour la complexation sont incluses dans la présente invention. Par exemple, on peut apporter une quantité de solution de Ga68 plus importante en dilution appropriée. Par exemple, pour des raisons de conservation du biovecteur, le chélate marqué est apporté en solution tampon et non en solution aqueuse différente du tampon. L'invention concerne aussi les différents produits intermédiaires le cas échant requis pour la complexation dans les solutions tampon de l'invention, et 10 notamment : -un éluat de Ga68 (l'éluat étant produit par un générateur de Ga68) en solution dans 98% d'acétone, HCL 0,05M - une solution tampon choisie parmi les tampons de la présente demande, avantageusement lactique, tartrique, succinique, ascorbique, phosphorique, carbonique, et leurs associations 15 - un chélate vectorisé, non encore complexé avec le radionucléide Ga68, en solution tampon ou dans l'eau , le tampon étant choisi parmi les tampons de la présente demande, avantageusement lactique, tartrique, succinique, ascorbique, phosphorique, carbonique, et leurs associations. On peut aussi utiliser comme solution tampon de complexation une 20 association de tampons, en particulier une combinaison d'au moins deux tampons cités ci-dessus, par exemple un tampon mixte lactique-succinique ou lactique-tartrique, en proportions avantageusement 90/10, 80/20, 70/30, 60/40, 50/50 pour des combinaisons de deux tampons. Selon un autre aspect l'invention concerne une solution injectable comprenant 25 un tampon et un chélate complexé par un radionucléide, le tampon comprenant entre deux et cinq fonctions de coordination avec le radionucléide, chaque fonction de coordination étant indépendamment choisie parmi une fonction acide carboxylique et une fonction hydroxy, à la condition que le tampon comprenne au moins une fonction acide carboxylique et au 30 plus deux fonctions acide carboxylique.

Les caractéristiques du tampons et du chélates sont telles que définies ci-dessus. Avantageusement la solution tampon est une solution à de 0,05 à 1,5 M en tampon, préférentiellement de 0,1M à lm en tampon.

Avantageusement la concentration du chélate vectorisé radiomarqué dans la solution tampon injectable est comprise entre 0,1 et 100 M par exemple 0,5 à 20 M, notamment 1 à 10 M. Avantageusement la solution administrée au patient comprend en outre au moins un excipient approprié pour limiter la radiolyse, c'est à dire la dégradation du composé diagnostique administré. Cela est avantageux notamment lorsque l'on prépare une solution diagnostic de type multidose/multipatient qui implique de pouvoir bien conserver le produit. Des agents anti-radiolyse sont connus de l'homme du métier et rappelés notamment dans WO2007042504 et W02005009393 (exemples : bloqueurs de radicaux libres, dithiocarbamates, PDTC, composés avec sélénium solubles tels que la sélénométhionine, la sélénocystéine avec le cas échéant du sodium ascorbate, des dérivés capables de réduire des acides aminés oxydés tels que la méthionine, notamment des dérivés thiol de la cystéine, le mercaptoéthanol, le dithiolthréotol). On pourra aussi utiliser des formulations arginine, lysine, Les produits du demandeur en solution tampon ont le gros avantage d'être utilisables sans chauffage, mais pourront le cas échéant, si la radiopharmacie n'est pas ponctuellement équipée d'un appareil de complexation sans dispositif de chauffage, être utilisés dans un appareil avec dispositif de chauffage.

Selon un autre aspect l'invention concerne un appareil (système de complexation), de préférence automatique, sans dispositif de chauffage, comprenant au moins un compartiment de mélange d'une solution de radionucléide fournie par un générateur de radionucléide, plus spécialement de Ga68, d'une solution de chélate vectorisé non complexé et d'une solution tampon, choisi parmi les lactate, tartrate, malate, ascorbate, carbonate, phosphate et leurs mélanges. Tout dispositif approprié est préparé en conséquence. Par exemple le Ga68 fourni est une solution stérile séparée en doses uniques par l'automate à l'aide d'un dispositif répartiteur de l'automate, ou avant l'automate avec utilisation de contenants mono-dose introduits dans l'automate. L'automate comprend par exemple un compartiment de mélange capable de préparer plusieurs doses de produit radiomarqué injectable pour un ou plusieurs patients. L'automate peut aussi comprendre plusieurs sous-compartiments de mélange, chaque compartiment étant apte à mélanger une dose de radionucléide Ga68 en particulier et une dose de produit vectorisé. L'automate peut être automatique. L'automate, le cas échéant programmable, peut aussi préparer plusieurs produits injectables différents, avec des biovecteurs identiques ou différents, des doses et concentrations différentes, le cas échéant en fonction du type de produit à fabriquer, du mode d'injection (injection manuelle ou automatique).

On pourra de plus utiliser les différents produits, procédés et appareils de la demande, pour toutes modalités d'imagerie appropriées, en particulier l'imagerie TEP, des imageries multimodales et le cas échant multi-injections de produits, en particulier TEP/IRM, TEP/scanner, TEP/scanner/IRM, imagerie optique, avec les méthodes d'analyses et de traitement d'images.

L'invention concerne ainsi toute installation d'imagerie médicale comprenant un appareil de complexation tel que décrit dans la demande, en association avec un équipement IRM et/ou scanner RX, et/ou optique. On pourra de manière plus globale utiliser tout équipement de l'art antérieur (rappelé notamment dans WO2007/042504 adapté pour les composés et conditions de complexation de l'invention. Les exemples détaillés qui suivent démontrent l'efficacité des tampons du demandeur Exemple 1 : complexation comparée avec les tampons Les tampons sont préparés à pH4. Ils sont obtenus par mélange de l'acide faible à 0,1M et de la base faible à 0,1M Mode opératoire : 50mg de NOTA ou de PCTA (0.16 mmol) sont dissous dans 5m1 de tampon 0,1M. 0,5m1 d'une solution à 0,5M de 69GaC13 (1,5 eq) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante. Des prélèvements sont effectués régulièrement pendant 15 minutes et sont analysés en LC/MS.

Pour le NOTA : Tampon observation résultats lactique Complexation complète (monopic en HPLC) en < l5min à TA tartrique Complexation complète (monopic en HPLC) en < l5min à TA carbonique Complexation complète (monopic en HPLC) en < l5min à TA phosphorique Présence d'un Complexation complète (monopic en HPLC) en < précipité l5min à TA ascorbique Complexation complète (absence de ligand) < 15min à TA citrique Beaucoup de ligand, un peu de complexe Pour le PCTA :15 Tampon observation résultats lactique Complexation complète (monopic en HPLC) en < l5min à TA carbonique Complexation complète (monopic en HPLC) en < l5min à TA ascorbique Présence d'un Complexation complète (absence de ligand) < 15min précipité à TA citrique Beaucoup de ligand un peu de complexe Exemple 2 : Synthèse du Dideaza-NOTA : Poids Moléculaire =338,21 Formule moléculaire =C14H16BrN3O2 Int 1Poids Moléculaire =165,19 Formule moléculaire =C9H11NO2

Int 2Poids Moléculaire =422,49 Formule moléculaire=C23H26N404 Int 3 xDOJ~ H Hz Poids Moléculaire =345.44 Formule moléculaire =C16H31N305 Int 5 P1169-Int6Poids Moléculaire =310,31 Formule moléculaire =016H 14N403 Int 4 DCC/ NHS N II H~NY o o Poids Moléculaire=637.74 Formule moléculaire =C32H43N707 Int 6 Poids Moléculaire =481.52 Formule moléculaire =C23H27N705 o'\ Formule moléculaire =C27H49N308 Ho ° rL\ DCC/NHS o r ° Int 8 o °~°H H v ~{ H o Int 9 Poids Moléculaire =1007.21 Formule moléculaire =C50H74N10012 H2N Poids Moléculaire =543.71 H2N TFA H2N Poids Moléculaire =838.88 Int 10 Formule moléculaire=C38HSON10012 Etape 1 : 0,5g d'intermédiaire 2 sont mis en solution dans 20 ml de CH3CN, en présence de 0,6g de K2CO3. Une suspension du dérivé bromé (int.l) dans 20 ml de CH3CN y est ajoutée. Le milieu réactionnel est maintenu au reflux, sous argon avec une bonne agitation magnétique pendant 18 H. Après retour à température ambiante, le milieu réactionnel est filtré. L'insoluble est repris dans 20 ml d'eau puis filtré. Le filtrat est évaporé sous la pression. Le résidu obtenu est repris dans l'Et2O puis est filtré. 1,2g de produit sont obtenus. [M+H]+ = 423.16 Etape 2 : 0,6g de l'intermédiaire obtenu à l'étape précédente sont mis en suspension dans 2,4m1 d'éthanol. La dissolution est totale après l'addition de 6m1 de NaOH 1M. Le milieu réactionnel est agité pendant 1H30 à 70°C. Après retour à température ambiante, le milieu est amené à pH 1 par addition d'HC16N. La suspension obtenue est filtrée puis lavée abondamment à l'eau et ensuite avec de l'éthanol. Après séchage on obtient 0,35g de produit (rendement = 80%). [M+H]+ = 311.10 Etape 3 : L'Int.4 (1,8mmol) et l'Int.S (1,8mmol) sont mis en solution dans le DMF, à température ambiante, à l'abri de l'humidité ambiante (garde à CaC12). On ajoute au milieu réactionnel 1,4eq d'HOBT (2,Smmol) puis 1,4eq EDCI (2,Smmol). Après 1 nuit de réaction à température ambiante, le milieu réactionnel est précipité dans 250m1 d'eau. Après filtration, le résidu est lavé à l'eau puis séché sous vide, on obtient 0.85g de cristaux jaune avec un rendement de 81%. [M+H] + = 638.3030 Etape 4 : 0.266 mmol d'intermédiaire obtenu à l'étape précédente est mis en solution dans 1,8 ml de TFA. Le milieu réactionnel est laissé 1H à température ambiante puis est évaporé. Le produit est obtenu par cristallisation dans 25m1 d'Et2O. On obtient 180mg de cristaux jaunes qui sont purifiés en colonne ouverte sur silice RP2 avec une élution eau (TFA 0,05%) / CH3CN. Après lyophilisation, on obtient 50mg de produit blanc (rendement 31%). BP : [M+H] + = 482.22, [M+2H] 2+= 241.68 Etape 5 Formation de l'ester activé : Après la mise en solution de 75mg de NOTA(tBu)3 dans 2m1 de CH2C12, on ajoute l5mg (leq) de NHS puis 28mg (leq) de DCC. Après 1/2 H de réaction à température ambiante, le DCU formé est filtré sur Whatman et le filtrat est concentré jusqu'à un volume final de 0.5m1, environ. Amidification : 50mg d'intermédiaire obtenu à l'étape précédente sont dissous dans 2,5m1 de DMSO en présence de 2éq de NEt3 (4O0. L'ester activé, en solution dans le CH2C12 y est ajouté. Après 1H de réaction, le milieu réactionnel est précipité dans 25 ml d'Et2O. Le produit obtenu est engagé dans la purification par flash (cartouche de silice Merck SVF D26-RP18 25-401um-31g), après mise en solution dans 50/50 (Phase éluante aqueuse (TFA pH2,8) /CH3CN). Après lyophilisation, on obtient 24mg de cristaux blancs (rendement 28,4%). BP : [M+M] += 1007.5, [M+2H]2+ = 504.44 Etape 6 24mg d'intermédiaire obtenu à l'étape précédente sont mis en solution dans lml de TFA. Après 6h de réaction à température ambiante, le milieu réactionnel est évaporé et repris dans 25m1 d'Et2O. On a 10mg de cristaux.

Exemple 3 : Synthèse du PCTA-folate : Poids Moléculaire=1246.48 Formule moléculaire=C61H91N13015 Int.10 Poids Moléculaire =1078.16 Formule moléculaire=C49H67N13015 Int.1 Int.2 Int.3 HN NH ~H Poids Moléculaire =206.29 Formule moléculaire=C11H18N4 NH, OOH ~( vXI IOHI IOHI NH O O

CI,C0 o o KBr,HBr,NaNO2 BF3OEt2 Poids Moléculaire =357.25 Formule moléculaire =C16H21BrO4 Poids Moléculaire =301.14 Formule moléculaire =C12H13BrO4 Poids Moléculaire =237.26 Formule moléculaire=C12H15NO4 Poids Moléculaire =620.79 Formule moléculaire =C32H52N408 Débenzylation Int.4 Br Poids Moléculaire=710.92 Formule moléculaire =C39H58N408 Int.6 Int.8 Int.9Poids Moléculaire=482.63 Formule moléculaire =C27H38N404 Int.5 HO O --.É IIN /~i 0 /~0 0 NHz Poids Moléculaire=643.71 Formule moléculaire =C29H41 N908 o Int.7 TFA Les deux premières étapes sont décrites dans Bioorganic & Medecinal Chemistry Letters 10 (2000) 2133-2135.

Etape 3 : 0.88g de Py-cyclen (Int.4) et 1.5g d'int.2 (1,5eq) sont mis en suspension dans 20m1 d'un mélange CH3CN/H2O (17/3). 0,9m1 de triéthylamine (2.3eq) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est porté au reflux pendant 24heures. Il est ensuite évaporé puis repris dans l'éther avant d'être filtré. Le résidu est repris dans du dichloro méthane puis lavé à l'eau. La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée et évaporée. On obtient 0.34g m/z = 483,5 (ES+)

Exemple 4 : chélates vectorisés par un peptide

On utilise le procédé de couplage peptidique décrit dans les exemples de 15 WO2007/042504 pages 41-77.

Claims (10)

1. REVENDICATIONS1. Procédé de complexation d'un chélate par un radionucléide, avantageusement le Gallium la complexation étant réalisé, avantageusement à température ambiante sans chauffage, en additionnant le radionucléide au chélate dans une solution tampon le tampon de cette solution comprenant entre deux et cinq fonctions de coordination avec le radionucléide, chaque fonction de coordination étant indépendamment choisie parmi une fonction acide carboxylique et une fonction hydroxy, à la condition que le tampon comprenne au moins une fonction acide carboxylique et au plus deux fonctions acide carboxylique.
2. 2. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le tampon 15 comprend au moins une fonction hydroxy.
3. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que le radionucléide est le gallium. 20
4. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le tampon est choisi parmi les tampons lactate, tartrate, malate, ascorbate, carbonate, phosphate et leurs mélanges, avantageusement parmi les tampons lactate, tartrate, carbonate et leurs mélanges. 25
5. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que le chélate est un chélate vectorisé, avantageusement par un agent de ciblage d'une zone pathologique d'intérêt diagnostique, choisi parmi un acide aminé, un peptide, un polypeptide, une vitamine, un mono ou poly saccharide,un anticorps, un acide nucléique, un bicyclam ou un aptamère.
6. 6 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que le chélate vectorisé est choisi parmi le NOTA vectorisé, PCTA vectorisé et le DOTA, vectorisé, avantageusement le dideaza-NOTA ou le folate PCTA.
7. 7. Solution injectable comprenant un tampon et un chélate complexé par un radionucléide, le tampon comprenant entre deux et cinq fonctions de coordination avec le radionucléide, chaque fonction de coordination étant indépendamment choisie parmi une fonction acide carboxylique et une fonction hydroxy, à la condition que le tampon comprenne au moins une fonction acide carboxylique et au plus deux fonctions acide carboxylique.
8. 8. Solution selon la revendication 7 caractérisée en ce que le radionucléide est le gallium.
9. 9. Solution selon l'une quelconque des revendications 7 ou 8, caractérisée en ce que le tampon est choisi parmi les tampons lactate, tartrate, malate, ascorbate, carbonate, phosphate et leurs mélanges, avantageusement parmi les tampons lactate, tartrate, carbonate et leurs mélanges.
10. 10. Solution selon l'une quelconque des revendications 7 à 9 caractérisée en ce que le chélate est un chélate vectorisé, avantageusement par un agent de ciblage d'une zone pathologique d'intérêt diagnostique, choisi parmi un acide aminé, un peptide, un polypeptide, une vitamine, un mono ou poly saccharide, un anticorps, un acide nucléique, un bicyclam ou un aptamère.11. Solution selon l'une quelconque des revendications 7 à 10 caractérisée en ce que le chélate vectorisé est choisi parmi le NOTA vectorisé, PCTA vectorisé et le DOTA vectorisé, avantageusement le dideaza-NOTA ou le folate PCTA.