FR2868701A1 - Composition cosmetique et/ou pharmaceutique, a action regulatrice de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes et/ou a action regulatrice de la differenciation adipocytaire - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à action régulatrice de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes et/ou à action régulatrice de la différenciation adipocytaire, comprenant au moins un composé de dihydroflavonol de formule I, sous forme libre, et/ou un de ses sels et/ou dérivés,L'invention concerne aussi l'utilisation d'un dihydroflavonol de formule I, de ses sels et/ou de ses dérivés, dans la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique pour le traitement de la cellulite, la réduction de la proportion de graisse dans les adipocytes et la différentiation adipocytaire.

Description

OR 3 OR5

Formule I

1 DESCRIPTION

Composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à action régulatrice de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes et/ou à action régulatrice de la différenciation adipocytaire Domaine technique de l'invention La présente invention se rapporte à une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à action régulatrice de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes et/ou à action régulatrice de la différenciation adipocytaire. L'invention se rapporte également à l'utilisation de la composition.

État de la technique antérieure Le tissu adipeux est un type particulier de tissu conjonctif dans lequel prédominent largement les cellules adipeuses qui constituent des réserves de graisse. Les cellules adipeuses se trouvent seules ou en petits groupes dans le tissu conjonctif même si la plupart d'entre elles est réunie dans le tissu adipeux qui est réparti tout le long du corps.

Par "graisse", l'on entend l'ensemble des substances insolubles dans l'eau et solubles dans les dissolvants organiques. Au sein de l'organisme, en tant que substrats énergétiques, l'on trouve les graisses qui se présentent sous forme d'acides gras libres ("Free fatty acids" FFA) et de triglycérides (TG), la forme de stockage des FFA.

La régulation des niveaux d'acides gras libres et des triglycérides est effectuée par le biais de l'équilibre des deux voies métaboliques appelées la lipogenèse ou fabrication des lipides, et la lipolyse ou dégradation des lipides.

La lipogenèse se produit essentiellement dans le foie et dans le tissu adipeux et consiste en la synthèse des triglycérides réalisée à partir de sources lipidiques telles que les acides gras issus des lipides alimentaires qui sont amenés vers les tissus par les chylomicrons et les lipoprotéines de très faible densité (VLDL) ; ou bien à partir de sources non lipidiques tels les glucides alimentaires et les aminoacides.

Les triglycérides alimentaires sont hydrolysés en acides gras 2868701 2 libres par le biais de la lipoprotéine lipase (LPL) située sur la paroi des capillaires du tissu adipeux. Ces acides gras libres sont captés par les adipocytes à travers des processus de transport actif effectués par des protéines transporteuses d'acides gras spécifiquement. Une fois à l'intérieur de la cellule, les acides gras sont à nouveau estérifiés pour former des triglycérides. Dans ce processus, les niveaux d'insuline jouent un rôle important en activant la lipoprotéine lipase.

La lipolyse consiste en la dégradation graduelle des triglycérides TG dans leurs composants, c'est à dire le glycérol et les acides gras jusqu'à CO2 et H2O. Une fois la lipolyse réalisée, les produits résultants vont suivre des voies différentes en vue de leur utilisation postérieure. L'agent principal favorisant la dégradation des triglycérides est la demande d'énergie. Les triglycérides du tissu adipeux se dégradent, mais également ceux du tissu musculaire. Si le régime alimentaire est pauvre en calories, c'est à dire en glucides et en lipides, la dégradation desdits triglycérides s'en trouve favorisée. Les mécanismes qui interviennent à court terme sont la disponibilité de substrat, la modification allostérique et la modification covalente des enzymes impliquées. Les niveaux de glucagon et d'adrénaline, cette dernière via les récepteurs 13-adrénergiques, ont une grande influence pour produire un effet favorisant l'activité de la lipase hormonosensible (HSL).

L'enzyme HSL liée au contrôle de l'entrée des acides gras dans la mitochondrie, sont les principaux responsables du contrôle de la lipolyse. La lipase hormono-sensible présente un mécanisme de modification covalente, la forme active étant la forme phosphorylée. L'enzyme devient phosphorylée lorsque la quantité intracellulaire d'AMP cyclique (AMPc) augmente.

La graisse est principalement stockée sous forme de triglycéride (TG) dans le tissu adipeux (sous-cutané et viscéral profond) et en petites quantités d'autres tissus. Le corps possède une grande capacité à stocker la graisse et c'est pour cela que le pourcentage de graisse contenu dans notre organisme est relativement élevé pour varier en moyenne entre 5 et 50%.

Le tissu adipeux est très dynamique et varie énormément. Ces variations sont essentiellement dues à l'équilibre ou au déséquilibre 2868701 3 entre les apports et les dépenses en calories, ce qui fait que les carences alimentaires et un exercice physique excessif provoqueront la diminution de la taille des adipocytes réduisant ainsi la quantité de graisse. Un apport calorique excessif produira un agrandissement des adipocytes, en raison du fait qu'ils absorbent des acides gras libres et qu'ils les stockent sous forme de TG.

La cellulite est une altération du tissu cellulaire sous-cutané associée à des modification dans la microcirculation du tissu conjonctif, donnant lieu à des modifications morphologiques, histochimiques et biochimiques du tissu. La cellulite et l'obésité sont deux problèmes différents qui peuvent être liés ou pas mais qui généralement sont réunis. Chez les femmes, la cellulite se localise généralement sur les cuisses et les fesses, sur la partie supérieure des bras et sur la zone inférieure de l'abdomen. Chez les hommes, elle est beaucoup moins fréquente, mais lorsqu'elle est présente, elle se situe sur la nuque, sur la zone inférieure de l'abdomen et sur la partie supérieure des bras. L'on ignore les origines de la cellulite mais l'on connaît un ensemble de facteurs qui la prédispose.

Le terme cellulite a été employé pour la première fois en 1920 pour décrire une altération esthétique de la surface cutanée. Depuis lors, d'autres noms ont été proposés comme la liposclérose nodulaire, la panniculopathie oedémato-fibro-sclérotique, la panniculose, la lipodystrophie, entre autres. Etymologiquement, la cellulite se définit comme un trouble local du métabolisme du tissu sous-cutané qui provoque une altération de la forme de la femme. Au cours de ce processus, sont réunis l'hyperpolimérisation du tissu conjonctif, l'altération primaire des tissus graisseux et la microcirculation.

Des facteurs de prédisposition (génétiques), des facteurs hormonaux et les conditions de vie (activité physique, apports alimentaires,...) agissent sur quatre unités fonctionnelles du tissu graisseux, lesquelles sont décrites ci-dessous.

L'unité de la matrice interstitielle est composée de cellules, surtout des fibroblastes, responsables de la synthèse des macromolécules de la matrice extracellulaire. Celles-ci comprennent le tissu fibreux (collagène, fibres élastiques et réticulaires) et la substance fondamentale (protéoglycanes, glycoprotéines et acide 2868701 4 hyaluronique). Alors que le tissu fibreux est responsable de la résistance et du support, la substance fondamentale permet la diffusion des nutriments, des métabolites et des hormones depuis le système circulatoire à travers le tissu interstitiel. Les glycosaminoglycanes possèdent des propriétés hydrophiliques et favorisent le maintien de la pression interstitielle osmotique. Les protéoglycanes jouent un rôle dans la production de collagène pour les fibroblastes, ainsi que dans leur distribution tridimensionnelle.

L'unité microcirculatoire comprend cinq composants: les artérioles, les vénules, les capillaires, les vaisseaux lymphatiques et le tissu interstitiel. Il existe normalement un équilibre entre le filtre capillaire artériel et l'absorption veineuse capillaire. Une altération de cet équilibre peut se produire à la suite d'une augmentation de la pression capillaire, d'une diminution de la pression osmotique plasmatique, d'une augmentation de la pression liquide interstitielle ou d'une diminution du flux lymphatique susceptible d'entraîner un oedème intercellulaire. Les facteurs à même d'influencer la microcirculation peuvent être endogènes (système nerveux central, système nerveux adrénergique sympathique, facteurs humoraux) et exogènes (médicaments, vêtements serrés, etc.).

L'unité neurovégétative est composée de l'innervation sympathique du derme et du tissu sous-cutanée. Le premier agit sur les récepteurs a et (3 pour provoquer une réponse à travers le système de l'adénylcyclase. Il est en mesure de modifier la relation AMPc/GMPc régulant les fibroblastes, la microcirculation et la différenciation des adipocytes. Les traitements cosmétiques et dermo-pharmaceutiques habituels pour remodeler et affiner la silhouette agissent principalement sur la voie des récepteurs adrénergiques et activent le métabolisme des graisses, d'une part par le biais de l'augmentation de l'AMPc, et par conséquent de l'augmentation des niveaux de lipase, ce qui facilitera l'hydrolyse des triglycérides; et d'autre part, par le biais de l'inhibition de la phosphodiestérase, qui entraînera l'augmentation des processus lipolytiques.

L'unité énergie-graisse est constituée des séries d'adipocytes, 35 nourris par des artérioles et entourés d'une cloison de tissu conjonctif. Chaque adipocyte est associé à une couche faite de glycoprotéine, de 2868701 5 fibrilles réticulées et d'autres cellules (fibroblastes, mastocytes et macrophages), ainsi que des capillaires adjacents. Le tissu graisseux est réparti en deux couches séparées par une couche de tissu conjonctif superficiel. La couche externe (en contact avec le derme) est appelée strate aréolaire et est formée par des adipocytes globulaires étendus situés à la verticale: les vaisseaux sanguins sont fragiles et très nombreux. Au niveau de la strate la plus profonde, appelée strate lamellaire, les cellules son fusiformes, de petite taille et sont réparties horizontalement; les vaisseaux sont plus étendus. Cette deuxième strate, dont l'épaisseur augmente au fur et à mesure que les personnes prennent du poids, est principalement due à l'augmentation du volume des adipocytes susceptibles d'envahir la couche de tissu conjonctif superficiel. La taille relative des deux couches varie en fonction de l'épaisseur de la peau, de la zone corporelle, du sexe et de l'âge de la personne.

Les facteurs hormonaux peuvent jouer un rôle dans la prédisposition ou amplifier le processus de formation de la cellulite, particulièrement au cours de l'adolescence. Les oestrogènes sont les hormones qui sont le plus souvent responsables de l'apparition, de l'extension et de la permanence de la cellulite.

Les oestrogènes agissent par la voie des nucléotides cycliques et stimulent la prolifération des fibroblastes afin qu'ils produisent de la collagénase et qu'ils influencent la modification des macromolécules. Les oestrogènes amplifient la réponse des adipocytes face aux récepteurs a antilipolytiques et stimulent de la sorte la lipoprotéine lipase, principale enzyme responsable de la lipogenèse, laquelle provoque une hypertrophie adipocytaire qui entraîne la formation de nodules. L'effet conjoint de l'action de la collagénase et de l'activation de la lipogenèse dans les tissus graisseux entraîne l'affaiblissement des structures et l'apparition de zones caractéristiques de dépôts de graisse, autrement dits de cellulite.

A l'appui des connaissances selon lesquelles les phytoestrogènes (flavones et isoflavones) peuvent interagir avec les récepteurs d'oestrogènes, la demande de brevet US 2002/0106388 Al, fait état d'une composition à base de flavones et d'isoflavones pour le traitement de la cellulite. Comme hydroxyflavone, l'on utilise de 2868701 6 préférence le composé de quercétine et de fisétine, et comme isoflavone, l'on utilise de préférence la génistéine. Une composition comme celle décrite vise à ce que les phytoestrogènes bloquent l'activité des récepteurs d'oestrogènes pour ensuite bloquer l'action de ces derniers.

Les flavones et les isoflavones appartiennent au groupe des composés chimiques appelés flavonoïdes. Lesdits composés comprennent un groupe étendu de métabolites secondaires de plantes, dans de nombreux cas responsables de la coloration de celles-ci et qui sont également utilisés comme capteurs de radicaux libres, comme filtres de rayons UV ou comme antioxydants. Un sous-groupe au sein des flavonoïdes est celui des dihydroflavonols de structure générale X: Formule X- Dihydroflavonol Parmi ces dihydroflavonols, l'on trouve la dihydromyricétine dont la formule générale Y est:

OH

Formule Y- Dihydromyricétine La dihydromyricétine est employée dans les compositions servant au traitement de l'obésité en raison des effets qu'elle produit sur l'appareil digestif. Un exemple en est le brevet CN 1393443, où l'on décrit une méthode d'extraction de la dihydromyricétine et où l'on explique qu'elle est utile dans le traitement de l'obésité entre autres pathologies. Dans US 4321262, l'on décrit une composition réalisée avec de la dihydromyricétine de nature antiarthritique. Ledit composé figure également dans la bibliographie comme antioxydant pour les produits cosmétiques. Ainsi, dans le brevet JP 63208506, l'on décrit une composition réalisée avec de la dihydromyricétine antioxydante qui absorbe les rayons UV. Dans JP 2002065201, la dihydromyricétine 2868701 7 est employée comme antioxidant dans les produits alimentaires. Dans toutes ces compositions et pour tous ces usages, la dihydromyricétine peut être d'origine synthétique ou provenir d'extraits d'espèces végétales, l'espèce végétale la plus employée étant la Myrica cerifera et Ampelopsis grossedentata.

Dans la présente invention, l'on décrit une nouvelle composition et de nouveaux usages pour la dihydromyricétine et ses dérivés, qui ne figurent pas dans l'état de la technique et dont les effets sont surprenants.

Explication de l'invention La composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à action régulatrice de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes selon l'invention se caractérise en ce qu'elle comprend au moins un composé de dihydroflavonol de formule I et/ou un de ses sels et/ou dérivés, Formule I où R1 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2) nCH(NH2)000H; R2 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)000H; R3 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)000H; R4 peut être H, C1_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)000H, un sucre comme par exemple le glucose, la rhamnose, le rutinose, le galactose, le fructose, ou d'autres sucres acceptables; R5 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2) COOH; y R6 peut être H, C1_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)000H, un comme par exemple le glucose, la rhamnose, le rutinose, le galactose, le fructose, ou d'autres sucres acceptables; et où n est compris entre 0 et 10.

2868701 8 Selon une autre caractéristique de l'invention, la proportion en poids de dihydroflavonol de formule I, ses sels et/ou dérivés est comprise entre 0,01% et 10%.

Selon une autre caractéristique de l'invention, la composition est caractérisée en ce que le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme libre.

L'invention a également pour objet une composition cosmétique et/ou pharmaceutique dans laquelle le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme de sel.

La composition se caractérise également en ce que le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme de glucoside.

La composition cosmétique et/ou pharmaceutique se caractérise également en ce qu'elle comprend, en outre, un ou plusieurs composés sélectionnés parmi la caféine, la xanthine, la théophyline et/ou la théobromine.

Selon une autre caractéristique de l'invention, la composition se présente sous forme de gel, de crème, de pommade, de savon, de lotion, de microcapsules ou sous forme solide applicable aux tissus.

L'invention est aussi caractéristique en ce qu'elle est adaptée à l'administration par voie orale.

L'invention se rapporte également à l'utilisation d'au moins un composé de dihydroflavonol de formule I, de ses sels et/ou dérivés, dans la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique servant à réguler la proportion de graisse contenue dans les adipocytes.

Une autre caractéristique de l'invention tient en l'utilisation de la dihydromyricétine sous forme libre et/ou sous forme de sels et/ou dérivés pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique servant à réguler la proportion de graisse contenue dans les adipocytes.

Selon une autre caractéristique de l'invention, la réduction de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes consiste en l'inhibition de la lipogenèse induite par l'insuline.

Selon une autre caractéristique de l'invention, la réduction de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes consiste en 2868701 9 l'inhibition de l'adipogénèse.

Selon une autre caractéristique de l'invention, la réduction de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes consiste en l'activation de la lipolyse dans lesdites cellules.

L'utilisation d'au moins un composé du dihydroflavonol de formule I, ses sels et/ou dérivés dans la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique servant à réguler la différenciation adipocytaire, est également caractéristique de l'invention.

L'utilisation d'au moins un composé du dihydroflavonol de formule I dans la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique servant à réguler la différenciation adipocytaire, se caractérise également en ce que le dihydroflavonol de formule I est du dihydromyricétine sous forme libre et/ou sous la forme de ses sels et/ou dérivés.

L'utilisation d'au moins un composé de dihydroflavonol de formule I, se caractérise également en ce que ledit composé est employé dans la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique servant au traitement de la cellulite.

Brève description des dessins

Dans l'objectif d'illustrer les effets du composé de dihydroflavonol de formule I et son utilisation dans la fabrication de compositions contre la cellulite à action régulatrice de la différenciation adipocytaire et/ou de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes, on joint des figures allant de 1 à 6 qui présentent les résultats des différents tests effectués en laboratoire.

La Fig. 1 est un graphique représentant la viabilité de cellules 3T3-L1 brièvement exposées à différentes concentrations de dihydromyricétine libre; la Fig.2 est un schéma représentant la viabilité des cellules 3T3L1 suite à une longue exposition à différentes concentrations de dihydromyricétine libre; la Fig. 3 est un graphique illustrant les nanomoles de glycérol libéré des cellules, ledit effet étant stimulé par de la dihydromyricétine; la Fig. 4 est un graphique détaillant l'effet de la dihydromyricétine sur la voie lipogénique dans les cellules 3T3-L1; la Fig. 5 correspond aux résultats des analyses réalisées pour 2868701 10 déterminer l'effet de la dihydromyricétine sur la voie de signalisation de l'insuline la Fig. 6 correspond aux photographies au microscope montrant le contraste des différentes phases de culture de 3T3-L1, avec traitement à la dihydromyricétine (B) ou sans traitement (A); et la Fig. 7 correspond aux résultats de "western blots" réalisés pour déterminer la présence de protéines caractéristiques de la différenciation de cellules adipocytaires.

Description détaillée de l'invention

Par le biais de cette invention, le requérant a découvert de manière surprenante que les composés dihidroflavonoles de formule I produisent d'importants effets sur les tissus graisseux, en particulier sur les adipocytes, inhibant l'accumulation de graisse sur ces derniers, ce qui réduit l'effet anti-esthétique que l'on connaît sous le nom de cellulite. Les inventeurs ont découvert que principalement les effets desdits dihydroflavonoles sont dérivés de leur action sur la voie de signalisation de l'insuline dans les adipocytes.

Dans la présente invention, par graisse , l'on entend n'importe quelle accumulation de triglycérides et/ou dérivés lipidiques dans les structures des cellules destinées à cette fonction, principalement dans les structures des adipocytes connues sous le non de gouttes de graisse.

La composition cosmétique et/ou pharmaceutique, objet de l'invention, comprend, comme dihydroflavonol de formule I préférentiel, de la dihydromyricétine. Dans cette composition, la dihydromyricétine est utilisée sous forme libre, ou sous celle de l'un de ses dérivés tels que les sels ou les glucosides. La dihydromyricétine sous forma libre est représentée par la formule I lorsque les substituants R1, R2, R3, R4, R5, et R6 correspondent à un atome d'hydrogène (H). Par glucosides de dihydromyricétine, l'on entend ces composés de formule I dans lesquels R6 est un sucre et où R1 à R5 correspondent aussi à un atome d'hydrogène (H).

Ci-dessous, et à titre d'exemple non restrictif, sont détaillés différents types de compositions selon l'invention. Dans tous ces exemples, les proportions des composés entrant dans les formulations sont exprimées en pourcentage en poids.

Exemple 1. GEL DE BAIN Exemple 2. SAVON LIQUIDE Eau Éther laurique de sulfate de sodium28% Conservateur PEG-4 Rapessedamida Cocamidopropyl bétaïne 30% PEG-7 Cocoate de glycéryle Dihydromyricétine (Extrait de Myrica cerifera) Parfum Triéthanolamine 99% CI 16035 CI 19140 Chlorure de sodium 24,7% 55,0 0,05 0,3 16,0 1,0 0,5 0,06 0,04 0,2 0,15 Eau Chlorure de Hydroxypropyl Guar Hydroxypropyltrimonium Acide citrique TEA sulfate laurique 40% Conservateur Cocamidopropyl bétaïne 30% Diméthicone copolyol PEG-7 Cocoate de glycérile Decyl polyglucose 50% Parfum Dihydromyricétine (Extrait de Amelopsis grossedentata) 55,87% 0,2 0,03 0,5 8,0 0,5 0,5 2,0 0,4 2,0 2868701 12 Exemple 3. CRÈME SOLAIRE SPF 20 Exemple 4. LAIT SOLAIRE PROTECTION MOYENNE PEG-100 Stéarate 50%; stéarate de glycéryle 50% Pétrolatum Alcool cétylique Paraffine liquide Méthoxicinnamate d'octyle Benzophénone-3 Triticum vulgare

BHT Eau

Propylène glycol Conservateur Parfum Dihydromyricétine Dioxyde de titane 6,0% 5,0 2,5 9,0 9,0 3,5 1,5 0,1 55,4 2,0 0,7 0,3 2,0 3,0 Stéarate de glycéryle; Ceteth-20 Alcool stéarylique; Steareth 7 Steareth 10 Alcool cétylique Triglycéride caprylique/caprique BHT Triticum vulgare Benzophénone-3 Paraffine liquide Méthoxicinnamate d'octyle Eau Parfum Conservateur Dihydromyricétine 3,0% 2,5 1,0 4,0 0,1 3,0 1,0 7,0 4,0 72,35 0,7 1,0 2868701 13 Exemple 5. CRÈME HYDRATANTE-ANTICELLULITIQUE

Exemple 6. GEL-CRÈME

Alcool stéarique Steareth-2 1 PEG-15 Éther stéarylique Paraffine liquide Conservateur Alcool cétylique Benzofenona-3 Triticum vulgare

BHT

Cera alba Propylèneglycol Eau Diméthicone copolyol Parfum Dihydromyricétine (glucoside dihydromyricétine) de 2,4% 1,6 4,0 3,0 0,6 3,0 0,5 1,0 0,1 1,0 2,5 75,9 2,0 0,4 2,0 Glycérine Eau Acrylates C/ 10-30 Alkyl-Acrylate polymère croisé Carbomer Conservateur

BHT

Cocoate d'octyle Diméthicone copolyol Triglycéride caprylique/caprique Triticum vulgare Parfum Triéthanolamine (99%) Dihydromyricétine 2,5 77,3 0,4 0,35 0,5 0,1 6,0 1,0 3,0 3,0 0,2 0,65 2868701 14 Exemple 7. BRUMISATEUR D'EAU Exemple 8. GEL-RAFFERMISSANT-ANTICELLULITIQUE Eau Acrylates C/ 10-30 Alkyl-Acrylate polymère Conservateur Quarternium-15 Parfum PEG- 40 Huile de castor hydrogénée Eau Dihydromyricétine Diméthicone copolyol Triéthanolamine (99%) 91,4% 0,05 0,05 0,05 0,2 1,1 1,0 5,0 0,4 0,75 Carbomer Eau Triéthanolamine 99% Diméthicone copolyol Glycérine Alcool Denat.

Extrait d'hydrocotyle asiatique (Centella asiatica) Dihydromyricétine Parfum Conservateur c.s. 100,0 c.s. pH=5,5 1,5 2,0 20,0 5,0 c.s. c.s.

2868701 15 Exemple 9. GEL ANTICELLULITIQUE-ACTIVATEUR DE LA CIRCULATION Exemple 10. GEL ANTICELLULITIQUE Dans tous les exemples, la quantité de dihydromyricétine libre et/ou sous forme de sel et/ou sous forme de glucoside, est comprise entre 0,01% et 10 % du poids.

L'on peut voir que la dihydromyricétine, comme agent anticellulitique ou comme réducteur de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes est de préférence utilisée sous forme libre.

I1 est prévu d'ajouter à ces compositions un ou plusieurs Hydroxiéthylcellulo se Alcool éthylique Eau Alcool éthylique Glycérine Diméthicone copolyol Extrait de petit houx H.G. Dihydromyricétine Parfum Conservateur 1,8 3,0 c.s. 100,0 10,0 2,5 2,5 3,0 5,0 c.s. c.s.

Carbomer Eau Triéthanolamine 99% Diméthicone copolyol Glycérine Alcool dénat. Dihydromyricétine Gel à l'Aloe Vera Parfum Conservateur c.s. 100,0 c.s. pH=5-5,5 1,5 2,0 20,0 5,0 2,0 c.s. c.s.

2868701 16 composés sélectionnés parmi la xanthine, la caféine, la théophyline et/ou la théobromine ou parmi d'autre composés connus comme activateurs de la lipolyse et de la microcirculation dans le tissu adipeux, pour leur effet inhibiteur de la phosphodiestérase dans les adipocytes. Il est aussi possible d'utiliser des extraits végétaux contenant ces composés tels que l'extrait de café, l'extrait de thé, l'extrait de cacao, l'extrait de maté ou de guarana, etc. Dans la même idée, il est possible d'utiliser des composés dérivés des saponines, lesquelles stimulent la circulation du sang dans le tissu adipeux. Des exemples de saponines sont la ruscogénine, l'escine, l'hédérine, etc. L'on utilise également des composés flavonoïdes dont la fonction est d'améliorer la perméabilité capillaire pour ainsi réduire l'oedème.

Les exemples décrits peuvent en plus contenir n'importe quel actif communément utilisé en cosmétique pour réaffirmer les tissus, comme par exemple les composés piégeurs de radicaux libres, les composés hydratants, etc. Bien entendu, pour la formulation des compositions décrites dans les exemples, l'on utilise les excipients et composés connus par l'expert en la matière.

Il est prévu que la composition objet de l'invention pourra être appliquée sur une surface en tissu telle que bas, chemises ou chaussettes, le composé de dihydromyricétine étant absorbé pendant que l'usager enfile le vêtement en tissu mentionné. Dans ce cas, le principe actif est généralement présenté sous forme de microcapsules qui sont adaptées pour être absorbées par les fibres de la matière textile, et l'on utilise les composés, excipients et conservateurs les plus communément utilisés dans ce type de formulations.

De la même manière, une composition comme celle décrite dans l'invention peut être présentée sous forme de comprimé ou capsule administré oralement comme complément alimentaire. Dans ce cas, les excipients et conservateurs utilisés sont les produits habituellement employés dans ce type de formulations et avec lesquels les experts en la matière sont amplement familiarisés.

Le dihidroflavonol de formule I est utilisé dans la préparation des compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques pour le traitement de la cellulite, son effet provenant de sa capacité à réguler 2868701 17 la proportion de graisse contenue dans les adipocytes et à réguler la différenciation des cellules adipocytaires dans les adipocytes matures, lesquels, à leur tour, contribuent à la formation des rugosités caractéristiques de la cellulite.

De manière concrète, il a été démontré que les dihidroflavonoles de formule I, et concrètement la dihydromyricétine, agissent sur les cellules qui composent les tissus de réserve de graisse au moins à trois différent niveaux. En premier lieu, il a été démontré que l'effet anticellulitique et la réduction de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes sont causés par l'action de la dihydromyricétine et/ou de l'un de ses dérivés par la voie de la lipolyse, agissant comme un activateur puissant de celle-ci. La cellulite et les proportions de graisse contenue dans lesadipocytes peuvent également être réduits par l'effet inhibiteur de l'adipogénèse ou la différenciation des cellules potentielles en adipocytes. Finalement, la dihydromyricétine est également utilisée dans des compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques anticellulitiques pour son effet inhibiteur de la lipogenèse induite par l'insuline.

Ci-dessous sont exprimés en détails les tests réalisés dans le but d'étudier l'action de la dihydromyricétine ayant, contre toute attente, démontré l'efficacité des nouveaux usages des dihidroflavonoles de formule I. Test N 1. Détermination de la fourchette de concentrations auxquelles la dihydromyricétine n'est pas nuisible dans le cadre d'études aiguës menées sur des adipocytes isolés de rat.

Cet test évalue la fourchette de concentrations auxquelles la dihydromyricétine de formule I ne produit pas d'effets toxiques sur les cellules adipeuses. À cette fin, l'on utilise des adipocytes isolés de rat (200 000 adipocytes sur 1 ml de tampon d'incubation) incubés de manière aiguë (120 minutes) en présence de dihydromyricétine libre 1mM, 500 M, 250 M,100 M, 50 M, 25 M et 10 M. Au cours des 60 dernières minutes, las cellules sont incubées en présence du marqueur MTT (3,[4,5diméthylthiazole-2-il]2,5,-diphényltetrazoliumbromure) (on ajoute 100 gl d'une solution 5 mg/ml). Le MTT est un sel soluble donnant lieu à une coloration jaune; toutefois, à l'intérieur de la cellule, le MTT se transforme en dérivé insoluble de couleur 2868701 18 pourpre. L'intensité de coloration du dérivé pourpre soluble sur du DMSO (diméthylsulfoxyde) nous permet d'estimer le nombre de cellules viables présentes dans le test. À la fin de l'incubation, le milieu est aspiré et les adipocytes sont lysés dans du DMSO. Après avoir centrifugé le lysat à 16.000 g 15 min, l'on mesure le facteur d'absorption à 570 nm et à 630 nm, la différence entre les deux lectures étant proportionnelle à la quantité de MTT transformé. Comme illustré dans le Tableau 1 et dans la Figure 1, l'incubation avec de la dihydromyricétine libre ne réduit pas la quantité de MTT transformé. Par conséquent, ces résultats indiquent que, dans la fourchette de concentrations étudiée (de 10 pM à 1 mm) et pour une incubation d'une durée de 2 heures (étude aiguë), la dihydromyricétine libre ne réduit pas la viabilité cellulaire.

Tableau 1: Effet aigu de la dihydromyricétine sur la viabilité cellulaire dans des adipocytes de rat Conditions Moyenne erreur Pvaleur (différence de facteur (par rapport au d'absorption à 570 nm et à 630 contrôle) nm).

Contrôle 100 4,056 M 111,84 9,29 0,1538 M 119,74 6,59 0,0316 * M 128,94 4,85 0,0051 ** 100gM 114,91 0,53 0,0109* 250 pM 141,44 6,154 0,0025 ** 500 gM 125,87 8,97 0,0292 * 1mM 158,55 10,51 0,0042 ** Test N 2. Détermination de la fourchette de concentrations auxquelles la dihydromyricétine n'est pas nuisible dans le cadre d'études à plus long terme sur des adipocytes isolés de rat.

Lors de ces tests, des adipocytes 3T3-L1 ont été incubés (7 jours après la fin du protocole de différenciation) avec différentes concentrations de dihydromyricétine libre (2mM, 1mM, 500 M, 250 M, 100 M, 50 M, 25 M et 10 M) pendant 24 heures. À l'issue de cette période, les cellules sont incubées en présence de MTT (0,5 2868701 19 mg/ml en DMEM incolore- 10% FBS) pendant 60 min. À la fin de l'incubation avec le MTT, les cellules se solubilisent dans de l'isopropanol acidique (O.1N C1H en isopropanol absolu) et l'on mesure le facteur d'absorption à 570 nm et à 630 nm. Après avoir centrifugé le lysat à 16,000 g 15 min, l'on mesure le facteur d'absorption à 570 nm et à 630 nm, la différence entre les deux lectures étant proportionnelle à la quantité de MTT transformé. Comme l'indique la Figure 2, l'incubation avec de la dihydromyricétine 2 mM réduit de forme significative (p<_ 0.05) la quantité de MTT transformé, la réduction de MTT transformé à partir de 500 gM étant notable.

Test N 3. Étude de l'effet lipolytique de la dihydromyricétine dans des adipocytes de rats isolés.

Un composé peut avoir une activité anticellulitique si la vitesse de dégradation des triglycérides dans les cellules adipeuses augmente.

En ce sens, ce test évalue si le principe actif en question exerce une action rapide (60 minutes d'incubation) sur la dégradation des triglycérides dans des adipocytes de rat.

Ce test se base sur le fait selon lequel la stimulation de la lipolyse entraîne une augmentation de la libération cellulaire de glycérol, lequel est déterminé sous forme spectrophotométrique. Lors de cet test, des adipocytes isolés de rat sont incubés à 37 C (200 000 adipocytes sur 1 ml de tampon d'incubation) en absence ou en présence de quatre concentrations de dihydromyricétine libre (500 M, 250 M, 100 M et 50 M) et, parallèlement, en présence de 100 nM d'adrénaline (stimulant de la lipolyse utilisé comme contrôle positif du test). Après 60 minutes d'incubation, l'on obtient les milieux d'incubation et après les avoir déprotéinés, l'on détermine la concentration de glycérol. Selon le Tableau 2 et la Figure 3, la dihydromyricétine libre provoque la lipolyse, cet effet pouvant se remarquer (plus de 6 fois plus) à 100 M.

2868701 20 Tableau 2. Lipolyse dans des adipocytes de rat Conditions Moyenne erreur Pvaleur (facteur d'absorption à (par rapport 340 nm) au contrôle) Contrôle 0,054 0 pM 0,278 0,088 0,0716 M 0,338 0,043 0,0058 ** 250 M 0,478 0,043 0,0023 ** 500 M 0,631 0,017 <0,0001 *** Adrénaline 100 3,439 0,198 <0,0005 *** nM Test N 4. Effet de la dihydromyricétine sur la lipogenèse. 5 Un composé peut avoir une activité anticellulitique la vitesse de synthèse des acides gras et, en définitive, des triglycérides dans les cellules adipeuses diminue. En ce sens, ce test évalue si le principe actif en question exerce une action rapide sur la synthèse des acides gras à partir de glucose dans des adipocytes de rat. Ces tests sont réalisés en absence ou en présence de quatre différentes concentrations de dihydromyricétine libre et en présence d'1 nM d'insuline.

L'insuline est un polypeptide secrété par les cellules du pancréas dont la mission est de réduire les niveaux de glucose dans le sang, provoquant un ensemble de réactions biochimiques qui produisent l'introduction des molécules de glucose à l'intérieur des cellules. L'action de l'insuline est déclenchée lorsque l'insuline entre en contact avec son récepteur situé dans la membrane des cellules. Ce récepteur est une protéine à activité tyrosine kinase. L'activation du récepteur de l'insuline stimule à son tour d'autres protéines. L'une d'entre elle est la protéine IRS-1, ou substrat du récepteur d'insuline-1, qui présente un nombre élevé de centres de phosphorylation en résidus de tyrosine. La phosphorylation ou activation de IRS-1 lui permet en conséquence d'avoir des affinités lui permettant de s'unir à d'autres protéines impliquées dans la transduction du signal de l'insuline. L'une d'elles 2868701 21 est la phosphatidylinositol 3-kinase (o PI 3-kinase). À son tour, cette protéine permet d'activer d'autres protéines importantes, parmi lesquelles l'on retiendra la protéine kinase B ou PK-B, qui, entre autres, intervient dans la régulation de la voie de synthèse de l'AMP cyclique (cAMP), entraînant concrètement la diminution du cAMP, ce qui bloque la lipolyse ou la dégradation des triglycérides. De manière alternative, l'activation de la phosphatidylinositol 3-kinase permet aux récepteurs de glucose GLUT- 4 d'être transportés vers la membrane afin de pouvoir faire pénétrer le glucose à l'intérieur de la cellule, ce qui provoque la stimulation de la voie lipogénique, ou la synthèse des lipides et des acides gras.

Ce test se base sur le fait que le glucose est le principal substrat pour la synthèse des acides gras, de sorte qu'il est possible de marquer radioactivement le "pool" intracellulaire des acides gras présents dans les triglycérides lorsque les cellules sont incubées en présence de glucose radioactif (D-[U-14C]-glucose). Pour ce faire, l'on incube des adipocytes isolés de rat (200 000 cellules/ml) dans des tubes en plastique à 37 C dans un tampon Krebs-Ringer, pH 7,4, contenant 3% BSA, 10 mM Hepes, 0.5 Ci de D-[U-14C]glucose (activité spécifique de 11,8 GBq/mmol, Amersham) et 5,56 mM de glucose non marqué en absence ou en présence d'l nM d'insuline et de quatre différentes concentrations de dihydromyricétine libre (500 M, 250 M, 100 M et 50 MM). Les incubations sont réalisées pendant 90 min à 37 C et après ce laps de temps, la réaction cesse au moyen de l'adition de 5 ml de solution d'extraction de Dole (isopropanol:heptane:l N H2SO4 40:10:1, v/v). Les tubes sont agités et l'on ajoute ensuite 2 ml de H2O et 3 ml d'heptane. Après l'agitation, les échantillons de la phase supérieure sont transférés dans des fioles à scintillation où l'on détermine la radioactivité qui correspond.

Comme l'indique la Figure 4, la dihydromyricétine libre ne modifie, pour les concentrations testées, la lipogenèse en absence d'insuline. Cependant, lorsque l'on réalise l'analyse de la lipogenèse en présence d'l nM d'insuline, celle-ci apparaît nettement stimulée et la dihydromyricétine provoque une réduction qui varie en fonction de la concentration.

Test N 5. Effet de la dihydromyricétine sur la lipogenèse 2868701 22 (traitement de 24 heures) Un test identique à celui décrit au Test N 4 a été réalisé mais où les adipocytes ont incubé avec la dihydromyricétine pendant 24 heures. Selon le Tableau 3 ci joint.

Tableau 3. Effet lipogénique du traitement des adipocytes 3T3-L1 avec de la dihydromyricétine pendant 24 heures.

Conditions Moyenne Pvaleur Conditions Moyenne Pvaleur erreur (par avec 1 nM erreur (par nmols rapport d'insuline nmols gluc/ rapport gluc/ au 90min au 90min contrôle) puits contrôle) puits Contrôle 11,8 1,3 Contrôle 60 4 pM 22,8 0,3 *** 50 M 50 4 M 27,6 1,3 *** 100 pM 34 2 ** 250 pM 22 0,9 ** 250 M 22 2 *** Les données fournies dans le Tableau 3 indiquent que différentes concentrations de dihydromyricétine entraîne modérément la lipogenèse (autour de 2.5 fois plus) en absence d'insuline. L'insuline multiplie par six l'activité de lipogenèse et dans ces conditions, la dihydromyricétine inhibe, en fonction de la concentration, l'effet stimulant provoqué par l'insuline, de telle sorte qu'à 250 M de dihydromyricétine, l'effet de l'insuline est complètement inhibé.

Pour déterminer à quels niveaux la dihydromyricétine affecte la lipogenèse induite par l'insuline, l'on étudie l'effet de la dihydromyricétine libre sur le récepteur de l'insuline dans des adipocytes; l'activation du substrat du récepteur d'insuline IRS-1; le degré d'association de la phosphatidylinositol 3-kinase à IRS-1 et l'activation de la protéine kinase B. Étude 1. Détermination de l'effet de la dihydromyricétine sur l'activation du récepteur de l'insuline dans des adipocytes 3T3-L1.

2868701 23 L'étude consiste à cultiver des adipocytes 3T3-L1 pendant 24 heures en présence de 250pM de dihydromyricétine. Cette concentration, comme l'indique le Tableau 3, bloque l'action de l'insuline sur la lipogenèse. Ce laps de temps écoulé, les cellules sont incubées pendant 30 minutes en absence ou en présence de 100 nM d'insuline. Les cellules sont ensuite lysées et les extraits sont soumis à une immunoprécipitation avec un anticorps anti-phosphotyrosine. Les éléments immunoprécipités sont soumis à un test Western blot révélé avec un anticorps anti- récepteur d'insuline.

Les résultats obtenus sont représentés dans la Figure 5A. Le groupe de cellules correspondant aux cellules traitées avec de l'insuline préalablement à l'incubation et avec 250 pM de ihydromyricétine après l'incubation, présente une précipitation moindre du récepteur d'insuline par rapport au groupe de cellules traitées avec de l'insuline et sans incubation de dihydromyricétine. Ceci indique que l'exposition préalable en présence de dihydromyricétine entraîne une nette diminution de la phosphorylation du récepteur d'insuline.

Étude 2. Détermination de l'effet de la dihydromyricétine sur 20 l'activaciôn du IRS-1 dans des adipocytes de rat.

L'on cultive des adipocytes 3T3-L1 pendant 24 heures en présence de 250pM de dihydromyricétine. Ce laps de temps écoulé, les cellules sont incubées pendant 30 minutes en présence ou en absence de 100 nM d'insuline. Les cellules sont ensuite lysées et les extraits sont soumis à une immunoprécipitation avec un anticorps anti-IRS-1 et les éléments immunoprécipités sont soumis à un Western blot révélé avec de l'antiphosphotyrosine.

Les résultats obtenus sont représentés dans la Figure 5C. Le groupe correspondant aux cellules traitées avec de l'insuline préalablement à l'incubation et avec 250 31M de dihydromyricétine après l'incubation, présente une précipitation moindre du IRS-1 par rapport au groupe de cellules traité avec de l'insuline et sans incubation de dihydromyricétine. Ceci indique que l'exposition préalable en présence de dihydromyricétine entraîne une nette diminution de la phosphorylation du substrat du récepteur d'insuline IRS-1.

2868701 24 Étude 3. Détermination de l'effet de la dihydromyricétine sur l'interaction des protéines phosphatidylinositol 3-kinase i IRS-1 dans des adipocytes de rat.

L'étude consiste à cultiver des adipocytes 3T3-L1 pendant 24 heures en présence de 250pM de dihydromyricétine. Cette concentration, comme l'indique le Tableau 3, bloque l'action de l'insuline sur la lipogenèse. Ce laps de temps écoulé, les cellules sont incubées pendant 30 minutes en présence ou en absence de 100 nM d'insuline. Les cellules sont ensuite lysées et les extraits sont soumis à une immunoprécipitation avec un anticorps anti-sous-unité p85 de la protéine phosphatidylinositol 3kinase. Les éléments immunoprécipités sont soumis à Western blot révélé avec un anticorps antiphosphotyrosine.

Les résultats obtenus sont représentés dans la Figure 5B. Le groupe correspondant aux cellules traitées avec de l'insuline préalablement à l'incubation et avec 250 pM de dihydromyricétine après l'incubation, présente une précipitation moindre de la sous-unité p85 par rapport au groupe de cellules traité avec de l'insuline et sans incubation de dihydromyricétine. Ceci indique que l'exposition préalable en présence de dihydromyricétine entraîne une nette diminution de l'activation de la sous-unité p85 par le IRS-1, alors qu'il est prouvé que l'insuline exerce une puissante stimulation de l'association des deux protéines.

Étude 4. Détermination de l'effet de la dihydromyricétine sur l'activation de la protéine quinasa B dans des adipocytes de rat.

L'étude consiste à mettre des adipocytes 3T3-L1 en culture pendant 24 heures en présence de 250pM de dihydromyricétine. Cette concentration, selon le Tableau 3, bloque l'action de l'insuline sur la lipogenèse. Ce laps de temps écoulé, les cellules sont incubées pendant 30 minutes en absence ou en présence de 100 nM d'insuline. Par la suite, les cellules sont lysées et les extraits sont soumis à un Western blot révélé avec un anticorps anti-phosphoSer473 de la protéine kinase B. Les résultats apparaissent dans la Figure 5D. L'on peut voir que 35 l'insuline stimule fortement la phosphorylation de la protéine kinase B en adipocytes contrôles C. Cependant, l'on peut voir que l'exposition 2868701 25 préalable à de la dihydromyricétine provoque une nette diminution de la phosphorylation, et, par conséquent, une non activation, de la protéine kinase B. Test N 6. Effet inhibiteur de la dihydromyricétine de formule I 5 sur l'adipogénèse dans des adipocytes de rat.

Un composé peut avoir une activité anticellulitique s'il empêche la différenciation des préadipocytes en adipocytes matures. Ce type d'effet peut être testé en employant des préadipocytes 3T3-L 1 de souris qui, lorsqu'ils sont incubés dans des conditions déterminées, se différentient en adipocytes ayant la capacité d'accumuler des triglycérides.

Des cellules 3T3-L1 sont incubées et différenciées en présence de plusieurs concentrations de dihydromyricétine libre (1mM, 500 M, 250 M, 100 M, 50 M, 25 M et 10 M). La différenciation débute sur des fibroblastes deux jours après la post-confluence. L'on utilisera à cette fin un mélange d'isométhylbutylxanthine/dexametasona/insuline (moyenne dl) pendant 3 jours et ensuite avec de l'insuline (moyenne d2) pendant 2 jours et en présence de dihydromyricétine. Les cellules sont encore cultivées pendant 4 jours en DMEM FBS 10%.(moyenne d3) en absence de stimulants de la différenciation. Les différentes concentrations de dihydromyricétine sont testées pendant 9 jours. Cette période écoulée, l'on détermine la morphologie des cellules par contraste de phases après les avoir teint avec de l'Oil Red O (Figure 6) ainsi que la concentration de triglycérides à l'intérieur des cellules (Tableau 4). La morphologie des cellules est étudiée moyennant la méthode colorimétrique Triglyceride Enzymatic Trinder test (Biotrol Diagnostic).

2868701 26 Tableau 4. Concentration cellulaire des triglycérides dans des cellules 3T3-L1.

Conditions Moyenne erreur Pvaleur (pg de triglycérides (par rapport au TGA dans les cellules) contrôle) Contrôle 175,48 20,99 pM 168,25 19,83 0,4027 pM 168,63 19,99 0,4081 50;Al 176,87 22,58 0,4822 uM 128,23 15,65 0,0450 * 250 M 65,76 6,74 <0,0001 *** 500 pM 9,48 0,73 <0,0001 *** 1mM 20,99 1,28 <0,0001 *** Les chiffres obtenus à l'issus de ce test N 6 révèlent que la dihydromyricétine à concentrations de 100 M et 250 pM réduit de manière significative la différenciation des fibroblastes 3T3L1, aussi bien lorsque l'on détermine la concentration cellulaire des triglycérides ou lorsque l'on visualise les cellules différentiées au moyen de l'analyse morphologique de la Figure 6.

Afin de déterminer à quels niveaux la différentiation adipocytaire affect la dihydromyricétine, l'on mène des études ayant pour objectif de déterminer la concentration des protéines impliquées dans les processus biochimiques critiques pour l'adipocyte mature.

Étude 5. Détermination de la concentration du transporteur de glucose GLUT-4.

D'après le Test N 6, la dihydromyricétine bloque la différenciation adipogénique à des concentrations allant de 100 à 250pM.

Des cellules 3T3-L1 cultivées pendant 2 jours post-confluence sont traitées avec un mélange d'isométhylebutylexanthine/dexaméthasone/insuline pendant 2 jours. Ensuite, l'on incube avec davantage d'insuline pendant 2 jours et, finalement, les cellules sont cultivées quatre jours supplémentaires sans molécules de stimulation de la différenciation cellulaire. Pendant les 10 jours que dure l'expérience, les cellules sont exposées à une concentration de 2868701 27 dihydromyricétine de 100pM. Ce laps de temps écoulé, l'on détermine la morphologie des cellules qui sont lysées et l'on détermine l'expression du transporteur de glucose GLUT-4 au moyen d'un Western blot réalisé avec des anticorps spécifiques.

Les résultats figurant dans la Figure 7B indiquent qu'en présence de 100 pM de dihydromyricétine, l'expression du GLUT-4 (45kDa) dans les cellules 3T3-L1 est plus réduite qu'en l'absence de dihydromyricétine.

Étude 6. Analyse de la protéine périlipine.

Les cellules 3T3-L1 ont été cultivées de manière identique à l'étude 5. Après 10 jours de culture avec 100pM de dihydromyricétine, les cellules sont lysées et l'on effectue un Western blot avec des anticorps antipérilipine.

Comme le montre la Figure 7A, en présence de 100 pM de dihydromyricétine, l'expression de la périlipine (57kDa) dans les cellules 3T3-L1 est plus réduite qu'en l'absence de dihydromyricétine.

Étude 7. Analyse de l'expression de la protéine cavéoline-1 en présence de dihydromyricétine.

Les cellules 3T3-L1 ont été cultivées de manière identique à l'étude 5. Après 10 jours de culture avec 100pM de dihydromyricétine, les cellules sont lysées et l'on détermine l'expression de la cavéoline-1 par l'intermédiaire d'un Western blot avec des anticorps spécifiques.

Comme le montre la Figure 7C, en présence de 100 pM de dihydromyricétine, l'expression de la cavéoline-1 (22kDa) dans les cellules 3T3-Ll est plus réduite qu'en l'absence de dihydromyricétine.

Les tests allant du N 1 au N 7, de même que les études respectives allant de 1 à 7, révèlent que, dans les cellules de réserve des lipides ou des adipocytaires, la dihydromyricétine agit au cours des premières phases des réactions provoquées par l'insuline, ce qui indique certainement qu'en raison du blocage des voies intracellulaires initiales, le reste des effets induits par l'insuline se trouve également bloqué. En ce qui concerne l'effet de la dihydromyricétine dans la différentiation cellulaire des adipocytes, les tests démontrent que celle-ci inhibe la différentiation au niveau du transporteur GLUT-4, ou de la périlipine et de cavéoline, ce qui prévient de la formation de cavéoles à la surface des cellules, lesquelles permettent de localiser les 2868701 28 transporteurs GLUT-4.

Dans toutes les compositions et pour tous les usages décrits dans l'invention, la dihydromyricétine et/ou ses sels ou dérivés, provient de la synthèse chimique ou d'un extrait végétal, les extraits les plus employés étant les espèces Myrica cerifera et Ampelopsis grossedentata. Dans les cas où l'on utilise un extrait végétal, il est nécessaire d'analyser au préalable son contenu en dihydromyricétine en vue de s'assurer que, dans la composition cosmétique et/ou pharmaceutique finale, celle-ci soit présente dans la proportion en poids établie afin qu'elle exerce les effets désirés décrits plus haut.

Une composition comme celle décrite est applicable aux cosmétiques destinés à l'affinement de la silhouette ou à la réduction de l'effet anti-esthétique produit par les accumulations de graisse dans les zonas inférieures de l'épiderme.

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Claims (15)

REVENDICATIONS

1.- Composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à action régulatrice de la proportion de graisse contenue dans les adipocytes et/ou à action régulatrice de la différenciation adipocytaire, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de dihydroflavonol de formule I et/ou un de ses sels et/ou dérivés, Formule I dans laquelle R1 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, 10 (CH2)nCH(NH2)COOH; R2 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)COOH; R3 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)COOH; R4 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)COOH, un sucre comme par exemple le glucose, la rhamnose, le rutinose, le galactose, le fructose, ou d'autres sucres acceptables; R5 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)COOH; et R6 peut être H, Cl_nalkyl, COC1_nalkyl, (CH2)nCH(NH2)COOH, un sucre comme par exemple le glucose, la rhamnose, le rutinose, le galactose, le fructose, ou d'autres sucres acceptables et où n est compris entre 0 et 10.

2.- Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que la proportion en poids de dihydroflavonol de formule I, de l'un de ses sels et/ou dérivés, est comprise entre 0,01% et 10%.

3.- Composition selon l'une quelconque des revendications allant 25 de 1 à 2, caractérisée en ce que le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme libre.

4.- Composition selon les revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme de sel.

2868701 30 5.- Composition selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme de glucoside.

6.- Composition cosmétique et/ou pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications antérieures, caractérisée en ce qu'elle comprend un ou plusieurs composés sélectionnés parmi la caféine, la xanthine, la théophyline, et/ou la théobromine.

7.- Composition cosmétique et/ou pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications antérieures 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de gel, crème, pommade, savon, lotion, microcapsules ou sous forme solide applicable aux tissus.

8.- Composition cosmétique et/ou pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle est adaptée à l'administration orale.

9.- Utilisation d'au moins un composé de dihydroflavonol de formule I, ses sels et/ou dérivés, dans la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique servant à réguler la proportion de graisse dans les adipocytes.

10.- Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme libre et/ou sous forme de sels et/ou dérivés.

11.- Utilisation selon les revendications 9 ou 10, caractérisée en ce que la réduction de la proportion de graisse dans les adipocytes consiste en l'inhibition de la lipogenèse induite par l'insuline.

12.- Utilisation selon les revendications 9 ou 10, caractérisée en ce que la réduction de la proportion de graisse dans les adipocytes consiste en l'inhibition de l'adipogénèse.

13.- Utilisation selon les revendications 9 ou 10, caractérisée en ce que la réduction de la proportion de graisse dans les adipocytes consiste en l'activation de la lipolyse.

14.- Utilisation d'au moins un composé de dihydroflavonol de formule I, ses sels et/ou dérivés, dans la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique servant à réguler la différentiation adipocytaire.

15.- Utilisation selon la revendication 14, caractérisée en ce que le dihydroflavonol de formule I est de la dihydromyricétine sous forme 2868701 31 libre et/ou sous forme de sels et/ou dérivés.

16.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 9 à 15, caractérisée en ce que le dihydroflavonol de formule I, ses sels et/ou dérivés est destinée à la préparation d'une composition 5 cosmétique et/ou pharmaceutique servant au traitement de la cellulite.