FR2573873A1 - Moyen de diagnostic rapide pour le groupage sanguin et procede pour sa preparation - Google Patents
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Abstract
L'INVENTION CONCERNE UN MOYEN DE DIAGNOSTIC RAPIDE POUR LE GROUPAGE SANGUIN ET UN PROCEDE POUR SA PREPARATION. LE MOYEN DE DIAGNOSTIC DE L'INVENTION CONSISTE EN REACTIFS ANTI-A, ANTI-B, ANTI A-B ET FACULTATIVEMENT ANTI-D, ANTI-C ET ANTI-E QUI SONT FIXES DANS DES CREUX PRATIQUES SUR UNE FEUILLE D'ALUMINIUM A SURFACE TRAITEE. LE MOYEN DE DIAGNOSTIC RAPIDE EST PREPARE EN DEPOSANT DES GOUTTES DES REACTIFS MENTIONNES CI-DESSUS DANS LES CREUX DE LA FEUILLE D'ALUMINIUM A SURFACE TRAITEE ET EN LES FIXANT SUR LA FEUILLE PAR UN SECHAGE SOUS VIDE EN DEUX TEMPS.
Description
Cette invention concerne un moyen de diagnostic rapide
pour le groupage sanguin et un procédé pour sa prépa-
ration. Le groupage sanguin est une des tâches courantes,mais pas simples, du service de santé, qui est réglementée par des prescriptions rigoureuses. Il existe plusieurs situations (catastrophes, guerres, etc.) o un grand
nombre de groupages sanguins est nécessaire sans qu'il-
y ait le support de laboratoire indispensable (équipe-
ments, appareils, machines stériles, etc.). Dans-cer-
tains pays, plusieurs moyens de diagnostic rapide ont
été mis au point, qui sont utiles dans de telles si-
tuations ainsi que pour le groupage sanguin rapide, de type dépistage, au lit du malade. Le principe commun à ces moyens de diagnostic consiste en ce que les sérums utilisés pour le groupage sont séchés sur un support papier spécial trempé par des agents d'imprégnation. De tels moyens de diagnostic rapide sont, par exemple, les réactifs secs "ABO-D Kit" et
"Eldoncard CDE" commercialisés par le Nordisk Insulin-
laboratorium (Danemark), le "Serafol"' commercialisé
par le Biotest Diagnostics (République fédérale d'Alle-
magne) de même que le "Bed-side ABO" fabriqué par la
Germed, Berlin (République démocratique d'Allemagne).
L'emploi de ces réactifs secs est rapide et simple, un de leurs inconvénients consiste en ce qu'ils ne
sont utilisables que pour un groupage sanguin simple.
Un nouveau moyen de diagnostic rapide a été développé, dont l'emploi est simple et fiable et qui peut être
conservé pendant un temps relativement long.
Ainsi, l'objet de l'invention est un moyen de diagnostic
rapide pour le groupage sanguinqui comprend les réac-
tifs anti-A, anti-B, anti-AB et facultativement anti-
D, anti-C et anti-E qui sont fixés dans les creux pratiqués sur une feuille d'aluminium à surface traitée.
En outre, I'invention concerne un procédé de prépara-
tion du moyen de diagnostic rapide dont il est question plus haut, qui comprend le dépôt de gouttes de réactifs anti-A, anti-B, anti-AB et facultativement anti-D, anti-C et anti-E dans les creux d'une feuille d'aluminium à surface traitée et 1-a fixation des réactifs sur la feuille d'aluminium par un séchage
sous vide en deux temps.
Comme support pour le moyen de diagnostic rapide de l'invention, on utilise une feuille d'aluminium de 0,25 à 0,5 mm d'épaisseur. Sur la feuille, des creux
de 10 à 30 mm de diamètre et de 0,3 à 0,6 mm de pro-
fondeur sont réalisés par pressage. Le nombre de creux à réaliser dépend du nombre désiré de réactifs devant être appliqué sur le support; et un creux supplémentaire est nécessaire pour l'échantillon testé. La feuille support, pressée et coupée aux dimensions voulues, subit un traitement de surface dans un bain
d'hydroxyde de potassium et en rinçant abondam-
ment à l'eau chaude et froide et finalement à l'alcool.
Pour le moyen de diagnostic rapide de l'invention, on utilise les réactifs anti-A, anti-B et anti-AB appartenant aux principaux groupes sanguins ainsi que les réactifs anti-D, anti-C, anti-E, etc., appartenant
au système Rh.
Les réactifs appartenant aux principaux groupes sanguins sont préparés de telle façon que le sérum ou le plasma débarrassé du fibrinogène, respectivement, de sangs appartenant aux groupes sanguins A (anti-B), D (anti-A) et O (anti-AB) ayant une avidité très favorable (déclenchant l'agglutination en 2 à 5 secondes et développant une quadruple agglutination de groupe en 3 minutes) sont mélangés en accord avec chacun des groupes sanguins
dans des conditions aseptiques, inactivés par traite-
ment à la chaleur, stabilisés, additionnés d'un ad-
juvant et filtrés pour les rendre stériles.
L'inactivation est réalisée par un traitement à la
chaleur d'une durée d'environ 30 minutes à 50-60 C.
Les réactifs traités à la chaleur peuvent être stabi-
lisés, par exemple, par l'azide de sodium. Comme agent adjuvant, un additif lyophilisant (auxiliaire), par exemple, du saccharose, peut être ajouté en quantité
d'environ 3,0.
Les réactifs appartenant au système Rh sont préparés à partir de sérum ou de plasma, respectivement, des sangs anti-D, anti-C, anti-E, etc. de la même façon que les réactifs appartenant aux principaux groupes sanguins, cependant, des agents adjuvants accélérant
l'agglutination, par exemple, ficolI, glycine et méthyl-
cellulose, sont aussi ajoutés aux réactifs.
Sur les feuilles préparées, les réactifs sont déposés
en gouttes de 0,03 à 0,05 ml dans des conditions asep-
tiques. A côté des réactifs appartenant au système Rh, des gouttes de 0, 03 à 0,05 ml d'une solution de papaine à 1 % activée par la cystine ou la cystéine sont également déposées pour la détermination par le procédé
enzymatique, puis les réactifs sont fixés sur le sup-
port par un séchage sous vide en deux temps. Ce séchage est effectué dans un équipement (machine) de lyophilisation ou dans un appareil de séchage sous vide. La première étape de séchage est effectuée sous - 300 mm Hg, de préférence à 200 mm Hg, et à une température entre 15 et 25 C, de préférence à 20 C; la seconde étape de séchage est effectuée sous une pression inférieure à 0,5 mm Hg, de préférence sous
une pression entre 0,1 et 0,05 mm Hg et à une tempéra-
ture entre 30 et 50 C, de préférence à 40 C. Toute
la période de séchage dure environ 3 à 5 heures.
Au moment de l'emploi, les réactifs sont dissous avec
une goutte d'eau de robinet chacun et une goutte d'échan-
tillon testé est déposée dans le creux prévu à cet effet. Le groupage sanguin peut être effectué en utilisant des échantillons de sang prélevés directement dans la pulpe d'un doigt, provenant de sang coagulé ou de sang contenant un anticoagulant. L'échantillon testé est mis en contact avec les réactifs à l'aide d'un dispositif approprié, de façon adéquate en mélangeant avec des baguettes en polystyrène emballées avec le moyen de diagnostic. On incline la feuille plusieurs fois, puis on la place sur une surface horizontale
et l'évaluation se fait après 3 minutes.
Le moyen de diagnostic rapide de l'invention présente les avantages suivants. Le support est une feuille d'aluminium à surface traitée, ce qui rend superflus toute imprégnation, un revêtement spécial ou une couche isolante. L'application des réactifs et le groupage
sanguin sont facilités par la réalisation des creux.
L'adhérence (fixation) des réactifs à la surface de la feuille d'aluminium est stable, au moment de l'emploi les réactifs sont solubles dans l'eau de robinet et la dissolution est immédiate. La réaction est parfaite- ment perceptible sur la feuille d'aluminium. Le moyen de diagnostic rapide contient également un réactif anti-AB, ainsi les possibilités d'erreur sont réduites
et le groupage sanguin peut être effectué sans échec.
Le groupage sanguin effectué de cette façon équivaut
au groupage effectué dans les conditions de labora-
toire. Comme conséquence de la capacité de transfert de chaleur de la feuille d'aluminium, la teneur en eau des réactifs peut être réduite au minimum par séchage sous vide, de sorte que le moyen de diagnostic peut être conservé même à température ambiante sans altération de sa qualité pendant un temps relativement
long (2 à 5 ans).
L'invention est illustrée en détail à l'aide de
l'exemple suivant.
Exemple
Préparation des réactifs appartenant aux principaux groupes sanguins Les sérums sanguins avec un titre, respectivement, d'au moins 1:64 anti-A, anti-B ou d'au moins 1:32
anti-AB, ayant une bonne avidité (déclenchant l'aggluti-
nation en 2 à 5 secondes et développant une quadruple agglutination de groupe en 3 minutes) sont mélangés en accord avec chacun des groupes sanguins dans des conditions aseptiques, stabilisés par addition de 0,1%' d'azide de sodium et, après addition de 3% de saccharose, inactivés par traitement à la chaleur à 56 C pendant 30 minutes, puis filtrés sur un filtre clarifiant et stérilisant. Les plasmas sanguins avec un titre respectivement d'au moins 1:128 anti-A, anti-B ou d'au moins 1:64 anti-AB, ayant une bonne avidité, sont mélangés en
accord avec chacun des groupes sanguins dans des con-
ditions aseptiques, stabilisés par addition de 0,1%0 d'azide de sodium et débarrassés du fibrinogène par addition de lévulinate de calcium ou de chlorure de calcium dihydraté, puis traités de la même façon que
les sérums.
Préparation des réactifs appartenant au système Rh Les sérums sanguins avec un titre d'au moins 1:128
anti-D, anti-C, anti-E, etc. sont stabilisés par addi-
tion de 0,1% d'azide de sodium, mélangés en accord avec chacun des groupes sanguins dans des conditions
aseptiques et inactivés à 56 C pendant 60 minutes.
Ensuite les agglutinines irrégulières sont éliminées par absorption, on ajoute 3% de saccharose, 2,% de glycine et, pour favoriser l'agglutination, 0,3 à
0,5% de ficoll de même que 0,01 à 0,02% de méthyl-
cellulose et on filtre pour la stérilisation.
Les plasmas sont stabilisés de la même façon par addi-
tion de 0,1% d'azide de sodium, débarrassés du fibrino-
gène par addition de chlorure de calcium dihydraté ou de thrombine, puis traités de la même manière que
les sérums.
L'avidité d'un réactif est appropriée lorsque la réaction démarre en une minute et augmente jusqu'au maximum en trois minutes. Pour la détection des hémagglutinines incomplètes, une solution de papaine à 1% est également nécessaire,
cette solution étant préparée avec un tampon phos-
phate de 1/15 mole/litre, activé par addition de L-
cystine et L-cystéine sous forme de chlorhydrate et
contenant 0,0125.% de méthylcellulose.
Préparation du support En utilisant les réactifs anti-A, anti-B, anti-AB et anti-D, cinq creux sont formés par pressage sur une
feuille d'aluminium d'une épaisseur de 0,25 à 0,5 mm.
La profondeur de ces creux est de 0,3 à 0,6 mm. Quatre creux sont de 15 mm de diamètre, le cinquième est plus grand, par exemple, de 30 mm de diamètre. Après avoir été pressées et coupées aux dimensions voulues, les feuilles sont maintenues dans une solution d'hydroxyde de potassium à 20% à 90 C pendant 3 minutes, puis
rincées abondamment à l'eau chaude et froide et finale-
ment à l'alcool.
Préparation du moyen de diagnostic Les réactifs anti-A, anti-B et anti-AB sont déposés en gouttes de 0,03 ml dans trois des plus petits creux
de la feuille préparée et dont la surface a été traitée.
Le quatrième petit creux est laissé vide pour recevoir l'échantillon de sang. Dans le plus grand creux on dépose une goutte de 0,03 ml de réactif anti-D et un
peu plus loin 0,05 ml d'une solution-de papaine active.
Le réactif appartenant au système Rh peut également
être appliqué sur une autre feuille.
Ensuite les feuilles sont placées dans un équipement de lyophilisation et le séchage sous vide en deux temps est démarré. On utilise au cours de la première étape un vide modéré (environ 200 mm Hg) et une température basse (20 C), au cours de la seconde étape un vide poussé (0,1 à 0,05 mm Hg) et une température plus élevée (40 C). En utilisant ce procédé, la substance est séchée à une température relativement basse même sans congélation de sorte que l'altération de la structure protéique et la diminution d'activité qui l'accompagne comme conséquences de la congélation peuvent être évitées. Le moyen de diagnostic ainsi préparé est emballé avec des baguettes en polystyrène dans des pochettes
en feuille d'aluminium qui sont fermées hermétiquement.
Claims (5)
1. Moyen de diagnostic rapide pour le groupage
sanguin consistant en réactifs anti-A, anti-B, anti-
AB et facultativement anti-D, anti-C et anti-E qui sont fixés dans des creux formés sur une feuille
d'aluminium à surface traitée.
2. Procédé pour la préparation d'un moyen de
diagnostic rapide pour le groupage sanguin, qui com-
prend le dépôt de gouttes de réactifs anti-A, anti-B, anti-AB et facultativement anti-D, anti-C et anti-E dans les creux d'une feuille d'aluminium à surface traitée et la fixation des réactifs sur la feuille
d'aluminium par séchage sous vide.
3. Procédé selon la revendication 2, qui comprend la réalisation de la première étape de séchage sous
vide sous une pression de 100 à 300 mm Hg à une tem-
pérature de 15 à 25 C et de la seconde étape de séchage sous vide sous une pression inférieure à 0,5 mm Hg
et à une température entre 30 C et 50 C.
4. Procédé selon la revendication 2, qui comprend la préparation des réactifs à partir du sérum ou du plasma débarrassé du fibrinogène, respectivement, de sang contenant anti-A, anti-B, anti-AB, anti-D, anti-C ou anti-E, de telle façon que les sérums ou
les plasmas débarrassés du fibrinogène, respective-
ment, mélangés en accor avec chacun des groupes san-
guins sont-stabilisés, inactivés et, après addition
d'adjuvants, filtrés pour les rendre stériles.
5. Procédé selon la revendication 4, qui comprend l'addition d'adjuvants favor-isant l'agglutination
aux réactifs appartenant au système Rh.
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