FR2567758A1

FR2567758A1 - Compositions therapeutiques a base de ginkgolides pour le traitement ou la prevention des maladies provoquees par l'acether du facteur d'activation des plaquettes (paf-acether)

Info

Publication number: FR2567758A1
Application number: FR8510993A
Authority: FR
Inventors: Pierre G Braquet
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1984-07-19
Filing date: 1985-07-18
Publication date: 1986-01-24
Anticipated expiration: 2005-07-18
Also published as: JPH0529009B2; US4734280A; BE901915A; BE902874A; DE3514054A1; FR2567758B1; GB2162062A; DE3514054C2; MY102586A; SG85988G; GB8418424D0; JPS6137726A; HK60189A; GB2162062B; GB8517577D0

Abstract

L'INVENTION CONCERNE DES COMPOSITIONS THERAPEUTIQUES POUR LE TRAITEMENT OU LA PREVENTION DES MALADIES PROVOQUEES PAR LE PAF-ACETHER CONTENANT, DANS UN SUPPORT THERAPEUTIQUEMENT ACCEPTABLE, 1 A 50MGKG D'UN GINKGOLIDE OU D'UN DE SES DERIVES.

Description

La présente invention concerne de nouvelles compositions thérapeutiques à

base de ginkgolides pour le traitement ou la prévention des maladies provoquées par l'acéther du facteur d'activation des plaquettes, bien connu sous le nom de PAF-acéther. Ce traitement consiste à administrer une quantité efficace d'un ou plusieurs ginkgolides ou leurs dérivés, seuls ou en mélange avec un support ou un diluant pharmaceutiquement

acceptable.

Le PAF-acéther est un phospholipide connu qui peut être la cause de maladies chez les animaux et l'être humain. Comme indiqué par Benveniste et Col., le PAF-acéther provoque l'agrégation des plaquettes, ainsi que la libération de leurs amines vaso-actives. Comme l'indique également Benveniste, il stimule également les leucocytes neutrophiles pour agréger et libérer leur teneur pro-inflammatoire (voir J. BENVENISTE, C. BOULLET, C. BRINK et C. LABAT, Brit. J. Pharmacol, The action of PAF Acether on guinea-pig isolated heart preparation,

:81-3 (1983)).

Il est communément entendu qu'une libération du PAF-acéther est provoquée chez les animaux et les êtres humains sous l'effet de différents types de chocs tels que les chocs anaphylactiques, les brûlures, les chocs septiques, les chocs par irradiation et les traumas. Il se produit une forte libération du PAF-acéther dans les heures qui suivent le choc, ce qui conduit par la suite à une suppression des réactions immunitaires suite à l'épuisement des moyens de défense de l'organisme. Bien que l'on ait essayé d'utiliser de nombreux composés pour le traitement ou la prévention des maladies provoquées par le PAF-acéther, le taux d'efficacité n'a pas été

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très élevé. Ces traitements sont décrits plus amplement dans

les exemples ci-après.

A présent, la Demanderesse a trouvé que l'on pouvait traiter efficacement les maladies provoquées par le PAF-acéther en administrant un ginkgolide ou un dérivé de ginkgolide. Dans de nombreux cas, les ginkgolides sont étonnamment plus efficaces pour le traitement des maladies provoquées par le PAF-acéther que les composés utilisés actuellement pour le traitement de ces maladies. Un avantage égal ou supérieur réside dans la nature hautement sélective des ginkgolides. Bien qu'ils soient hautement efficaces contre l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther, ils n'exercent virtuellement aucune inhibition contre l'agrégation des plaquettes provoquée par d'autres facteurs. En particulier, ils n' interviennent pas dans les agrégations provoquées par l'adénosinediphosphate (ADP), la thrombine, le collagène, l'adrénaline, l'histamine, le LTB4- et la sérotonine. La découverte de la Demanderesse concernant cette nature hautement sélective de l'inhibition, par les ginkgolides, de l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther, est des plus importantes. Les ginkgolides sont connus depuis de nombreuses années. On les a trouvés dans certains extraits de Ginkgo Biloba mais, jusqu' à ce jour, on n'a trouvé aucune activité thérapeutique pour ce groupe de composés. Ces composés peuvent être obtenus comme décrit par KOJI NAKANISHI, "Pure and Applied Chemistry", 14 (1967) 89. Leurs structures sont également décrites par MARUYAMA et al., "Tetrahedron Letters" (1967) 299, 303. Les ginkgolides dérivent de l'arbre gymnospermé Ginkgo Biloba. Les ginkgolides habituellement disponibles englobent le Ginkgolide A, le Ginkgolide B, le Ginkgolide C et le Ginkgolide M. On a trouvé que chacun de ces ginkgolides était efficace pour le traitement des maladies provoquées par le

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PAF-acéther. Parmi ces quatre ginkgolides, on a trouvé que le

Ginkgolide B était le plus efficace.

On connaît également des dérivés des ginkgolides. Les dérivés courants englobent les dérivés mono-acétate, tri-acétate, tétrahydro et acétyle (voir K. OKABE, K. YAMADA, S. YAMAMURA et S. TAKADA, Ginkgolides, J. Chem. Soc. (C), 1967,

2201-2206.

Dans le traitement des maladies provoquées par le PAF-acéther les ginkgolides peuvent être avantageusement administrés par voie orale ou rectale, par voie intraveineuse (y compris par perfusion), localement ou par inhalation d'une pulvérisation à des doses de 1 à 50 mg/kg. Outre le fait qu'ils sont utilisés dans le traitement des maladies provoquées par le PAF-acéther, les ginkgolides peuvent également être employés pour prévenir, dans des situations à haut risque, l'agrégation

des plaquettes due au PAF-acéther.

L'action antagoniste de l'administration des ginkgolides contre l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther entraîne, ipso facto, un raccourcissement de la période qui suit le trauma et au cours de laquelle les moyens

immunitaires de l'organisme sont diminués ou supprimés.

Ces avantages de la présente invention ainsi que

d'autres, seront mieux compris à la lecture de la description

ci-après concernant l'efficacité des composés lors du traitement des maladies provoquées par le PAF-acétherg comparativement aux composés mentionnés dans la littérature

pour le même traitement.

Dans les dessins annexés: - la figure 1 donne- une comparaison des effets des Ginkgolides A, B, C et M et de la kadsurénone (solution de diméthylsulfoxyde) sur lagrégation des plaquettes provoquée

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chez le lapin par le PAF-acéther (2,5 nM); - la figure 2 est un diagramme illustrant l'inhibition, par le Ginkgolide B, de l'agrégation des plaquettes provoquée chez le lapin par le PAF-acéther; - la figure 3 donne une comparaison des effets du Ginkgolide B et de la kadsurénone (solution de diméthylsulfoxyde) sur l'agrégation des plaquettes provoquée chez l'être humain par le PAF-acéther (100 nM); - la figure 4 illustre 1' inhibition, par les Ginkgolides, de l'agrégation de plaquettes humaines lavées, provoquée par le PAF-acéther (0,1 pM); - la figure 5 est un diagramme illustrant l'inhibition in vivo par perfusion de Ginkgolide B (10-4M) et de kadsurénone (10-4 M), (dispositif opto-électronique) de la thrombose provoquée dans l'artère mésentérique de cobaye par le

PAF-acéther (10-5M).

I. Détermination de la fixation L'opposition de la fixation alternée du PAF-acéther ou d'un des ginkgolides a été mise en évidence par des déterminations radio-actives en utilisant une préparation de plaquettes de membrane de lapin (témoin 100 % = PAF-acéther 3H

seul). A 10-4M, le Ginkgolide M a réduit la fixation de 79 %.

A 10-5M, les Ginkgolides A et C ont réduit la fixation respectivement de 67 et de 83 %. A 10-6M, le Ginkgolide B a

réduit la fixation de 94 %.

La valeur CI50 (concentration inhibitrice à 50 %) déterminée dans ces conditions pour le Ginkgolide B était égale

à 5,75 10-7M.

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Afin d'éprouver la spécificité de l'action de ces composés sur un récepteur de PAF-acéther, on a également contrôlé la fixation des ginkgolides sur d'autres types de récepteurs: Hl, H2, 5-HT, 5HT2, al, l 2' ' 2' etc...: on n'a observé aucune fixation appréciable, ce qui démontre leur

spécificité d'action.

II. Inhibition de l'agrégation des Plaquettes 1. Agrégation des plaquettes chez le lapin 1.1. Etude in vitro: On a étudié l'inhibition de l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther sur des plaquettes de lapin riches en plasma. On a utilisé deux doses de PAFacéther (2,5 nM et 5 nM). On a ajouté le composé soumis à l'essai au milieu 3 minutes avant le PAF-acéther et on a suivi l'agrégation en contrôlant les changements survenant dans 1' impédance électrique (agrégomètre de sang complet - chrono-Log); en même temps, on a soumis la kadsurénone à un essai en guise de composé de référence et l'on a calculé les doses molaires CI50 en ng/ml des Ginkgolides A (340), B (80), C (690), et M (900) ainsi que de la kadsurénone (340) sur l'agrégation des plaquettes provoquée chez le lapin par le PAF-acéther

(plaquettes riches en plasma).

Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau ci-après (valeurs moyennes pour 10 titrages pour chaque dose) ainsi qu'en figure 1 o sont donnés les pourcentages d'aggrégation par rapport aux témoins en fonction de la

concentration du produit testé, en ng/ml.

La figure 2 donne, pour le Ginkgolide B le pourcentage d'inhibition à l'agrégation des plaquettes, en fonction des

concentrations du produit par rapport au témoin (T).

-6 - Pour les doses de PAF-acéther (en nM) Doses CI50 de (M)

2,5 5

Ginkgolide A 8,32 10-6 1,32 10-5 Ginkgolide B 1,88 10-6 3,20 10-6 Ginkgolide C 1,53 10-5 2,54 10 5 Ginkgolide M 1,22 10- 2,02 10-5 Kadsurénone 9,94 10-6 1,40 10-5 Les Ginkgolides A et B sont de puissants inhibiteurs de l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther et ils sont plus puissants que le composé de référence, à savoir la kadsurénone, ainsi que les Ginkgolides C et M. Les Ginkgolides A, B, C et M sont totalement inefficaces contre l'agrégation provoquée par d'autres agents connus tels que 1'ADP, la thrombine, l'ionophore de calcium A 23187, le collagène et l'adrénaline. Ce résultat démontre la

haute spécificité d'action des ginkgolides.

1.2. Etude ex vivo: On a administré les médicaments par voie orale (2,5 et 10 mg/kg) ou par voie intraveineuse (0,5, 1, 2 mg/kg) et on a prélevé des échantillons de sang à différents moments afin de vérifier l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther (2,5 et 5 nM) (voir le tableau ci-après dans lequel les chiffres expriment le rapport vis-à-vis du témoin avec le

solvent utilisé, c'est-à-dire le diméthylsulfoxyde).

2567758'

- 7 -

INHIBITION, PAR LE GINKGOLIDE B. DE L' AGREGATION DES

PLAQUETTES PROVOQUEE CHEZ LE LAPIN PAR LE PAF-ACETHER (% du témoin) (z) Mode d'administration PAF-acéther (mg/kg) 2,5 nM 5,0 nM 0,5 h 1 h 2 h 0,5 h 1 h 2 h Par voie orale

2 23 37 54 34,5 47,8 71,2

0 7 10 6 11,4 27,1

10 0 0 O O 0 O

Par voie intraveineuse

0,5 0 7,4 11,2 0 9,4 14,5

1 0 0 4,1 0 1,1 7,2

2 O 0 0 00 0

(x) Valeurs moyennes pour un groupe de 5 titrages.

2. Agrégation des plaquettes chez l'être humain 2.1 Etude in vitro: 2.1.1 Plaquettes riches en plasma: L'inhibition de l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther a été étudiée sur des plaquettes humaines riches en plasma. On a utilisé le même protocole que celui

adopté ci-dessus pour le lapin.

Doses CI (M) Dose de PAF-acéther de 100 (nM) Ginkgolide A 9 10- 5 Ginkgolide B 5,6 10-5 Ginkgolide C 1,5 104 Kadsurénone 1,3 10- 4 Tous les ginkgolides étaient plus efficaces que la kadsurénone. La figure 3 donne, en pourcentage par rapport au témoin, une comparaison de l'inhibition (CI50) obtenue avec le ginkgolide le plus puissant (GK B) et le produit de référence

(kadsurénone): valeurs respectives 0,25 et 4,6 pg/ml.

2.1.2 Plaquettes lavées: On a également expérimenté le pourcentage, par rapport au témoin, de l'inhibition de l'agrégation des plaquettes provoquée par le PAF-acéther en utilisant des plaquettes

humaines lavées avec les Ginkgolides A,B et C (Figure 4).

Le meilleur chiffre pour la valeur CI50 a été obtenu

avec le Ginkgolide B (GK B): valeurs moyennes de 5 titrages.

2.2. Etude ex vivo (Ginkgolides A, B et C).

Chez l'homme, on a adopté le même protocole que celui décrit ci-dessus pour le lapin avec une dose seulement de -9- chaque ginkgolide (par voie intraveineuse, 25 mg) et avec deux prélèvements de sang (0,5 heure et 1 heure). Les résultats

sont donnés dans le tableau ci-après.

PAF-acéther (100 nM) Temps écoulé avant le prélèvement de sang 0,5 1,0 (heures) % d'agrégation vis-à- GK A 0 5,7 vis du témoin GK B 0 3,4

GK C 0 10,6

3. Observation opto-électronique de l'interaction

plaquettes/parois des vaisseaux.

Dans cette étude expérimentale, on a utilisé 20 cobayes. Les détails techniques concernant le mode opératoire, l'induction de la déendothélialisation focale et la méthodologie des procédés de microprojection à commande électronique ont été décrits antérieurement en détail (Bourgain, R., et six, F. (1974): a continuous registration

method in experimental arterial thrombosis in the rat. Thromb.

Reg. 4:599-607). En résumé, ce procédé consiste à disséquer, sur une distance de 2 à 3 mm, une branche de l'artère mésentérique après avoir extrait doucement une boucle de 1U intestin grêle. Par transillumination, 1' image de ce segment artériel est projetée sur un jeu de résistances dépendant de la lumière disposées en deux colonnes de 15 éléments chacune. Un élément de résistance dépendant de la lumière possède la

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propriété de modifier sa résistance interne en fonction d'une variation survenant dans 1' intensité lumineuse. Chaque résistance dépendant de la lumière est raccordée dans son propre pont de Wheatstone, tandis que les changements survenant dans l'intensité lumineuse suite à un thrombus sont enregistrés sous forme de variations survenant dans les potentiels électriques et ils sont enregistrés comme tels via un

dispositif multiplexeur.

Dans les études concernées ici, on enregistre plusieurs paramètres de discrimination: (a) l'intervalle t1 ou le temps de retard (c'est-à-dire le laps de temps s'écoulant entre le début de la superfusion de PAF- acéther et les premiers symptômes de formation de thrombus); (b) 1' intervalle td est la durée du phénomène thrombotique; (c) la courbe O(t) indique le nombre d'éléments de résistance dépendant de la lumière couverts par l'image du thrombus; (d) la courbe D(t) représente, au cours de chaque intervalle de 30 x 1/9 x 10-2 sec, la plus forte déviation de potentiel sur un des éléments de résistance dépendant de la lumière couverts par l'image du thrombus; (e) la courbe T(t) représente la sommation des potentiels enregistrés sur les éléments de résistance dépendant de la lumière au cours d'un laps de temps de 30 x 1/9 x 10-2 sec, la courbe TTV (t) résultant de l'intégration des valeurs T(t) en fonction du temps; (f) mD, mT et mO correspondent aux valeurs maximales enregistrées respectivement sur les courbes D(t), T(t) et O(t); (g) TTV est la valeur maximale de la courbe TTV(t), tandis que TVM est la valeur de cette courbe

jusqu'au point o mT est atteint.

Dans une première série d'expériences (10 animaux), on étudie l'effet de la superfusion locale avec le PAF-acéther

(10-4 M)

Dans une deuxième série d'expériences (10 animaux), on a comparé les effets du Ginkgolide B et de la kadsurénone du

point de vue préventif et du point de vue curatif.

- 11'-

La superfusion de PAF-acéther a provoqué un thrombus important et occlusif. Seule la superfusion de prostacycline en même temps que la superfusion de PAF-acéther pourrait inhiber partiellement ce phénomène. De plus, jusqu'à ce jour, on ne connaît aucun médicament exerçant une action curative contre un thrombus préformé, tandis qu'avec le Ginkgolide B ou la kadsurénone (en superfusion avec le PAF-acéther), on ne voit apparaître aucun thrombus, ce qui démontre l'efficacité de ces agents. De façon étonnante, comme illustré en figure 5, le Ginkgolide B et la kadsurénone ont été à même de désagréger ce thrombus préformé, mais avec un net avantage pour le Ginkgolide si l'on prend le temps en considération (environ 4,30 minutes pour la disparition du thrombus avec la kadsurénone contre 2,30 minutes pour le Ginkgolide B). La figure 5 donne les résultats obtenus après la troisième superfusion du PAF-acéther dans l'artère mésentérique de cobaye; les trois flèches orientées en bas, vers la droite indiquent l'apparition des trois thrombus tandis que les trois flèches orientées en bas vers la

gauche indiquent leur disparition.

III. Organes isolés 3.1. Contraction d'une bande parenchymale de poumon en superfusion, provoquée par le PAF-acéther. L'effet antagoniste de la superfusion préventive de 30 pg/ml de chacun des ginkgolides contre la contraction provoquée par le PAF-acéther (3 ng) dans une bande parenchymale de poumon de cobaye (références: Giovanni CAMUSSI, Giuseppe MONTRUCCEHIO, Camillo ANTRO, Federico BUSSOLINO, Ciro TETTA et Giorgio EMANUELLI, "platelet-activating Factor-mediated Contraction of Rabbit Lung Strips: Pharmacologic Modulation, Immunopharmacology 6: 87-96 (1983) a été déterminé en utilisant un transducteur isométrique

raccordé àun enregistreur de Gould.

Les résultats donnés dans le tableau ci-après illustrent une inhibition très significative de la contraction

provoquée par le PAF-acéther.

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Contraction provoquée par le PAF-acéther (3ng) (unités arbitraires) x Témoin 39,82 + 8,24 Diméthylsulfoxyde (solvant) 37,90 + 6,24 Ginkgolide A (30 pg/ml) 10,30 + 2,33 (- 72,8 %)xX Ginkgolide B (30 pg/ml) 8,05 + 2,16 (- 78,8 %)xx Ginkgolide C (30 pg/ml) 11,08 + 2,42 (- 70,8 %)xx Valeur moyenne de 10 déterminations xx p < 0,001 Les ginkgolides n'ont exercé aucun effet significatif sur les contractions provoquées par l'histamine, le LTB4- ou le

LTD4-.

3.2. Veine porte isolée de rat.

On a effectué des expériences in vitro sur des bandes longitudinales isolées de veine porte de rat que l'on a maintenues dans un milieu de KrebsHenseleit à 37 C avec

circulation d'un gaz riche en oxygène (95 % d'O2 - 5 % de CO2).

On a laissé s'équilibrer les préparations pendant une heure dans des conditions -isotoniques avec une tension de 500 mg et on les a rincées toutes les 15 minutes. Lorsque l'activité myogène a été établie, on a ajouté le PAF-acéther

- 13 -

(10-7M). Ce dernier a provoqué un accroissement du tonus de

base et de la fréquence de l'activité myogène.

Le Ginkgolide B (soumis à l'essai à raison de 1 à g/ml), ajouté 30 minutes avant le PAF-acéther, a exercé un effet antagoniste en relation avec la dose sur l'accroissement du tonus de base avec une valeur CI50 = 6,8 lig/ml. Le médicament a été sans effet sur l'activité myogène, ce qui démontre qu'il n'a exercé aucune activité antagoniste vis-à-vis

du calcium.

3.3. Coeur isolé de Langendorff.

L'effet néfaste du PAF-acéther sur le coeur isolé de Langendorff a été décrit antérieurement par J. BENVENISTE, C. BOULLET, C. BRINK et C. LABAT, Brit. J. Pharmacol. The action of PAF-Acéther on guinea pig isolated heart preparation, 80:

81 - 3 (1983).

Le PAF-acéther (100 pM) a provoqué une diminution de la force contractile (-30 %) et une diminution du flux coronaire

(-50 %)

Le Ginkgolide B (2.10 4M) a totalement inhibé ces phénomènes. Cet effet était dépendant de la dose (disparition

de l'activité protectrice avec une dose < 10-7M).

IV. Activité antianaphYlactique et effet protecteur contre les

chocs et les pertes de fluide.

4.1. Hyperperméabilité vasculaire cutanée provoquée

par le PAF-acéther chez le rat.

Méthode: L'injection intradermique de 25 ng de PAF-acéther dans la région dorsale du rat avec injection simultanée (par voie intraveineuse) du colorant bleu d'Evans (60 mg/kg/5 ml) provoque une hyperperméabilité vasculaire et la formation de papules. (Pour les détails, voir Basran GS, Page CP, Paul W. et Morley J - Cromoglycate inhibits responses to

- 14 -

platelet-activating factor (PAF Acether) in man: an

alternative mode of action for DSG in asthma - Eur. J. Pharma.

(1983) 86 143 - 144).

On a mesuré ces papules (surface en mm2) sur le côté intérieur de la peau 30 minutes apres les injections, on les a prélevées, déposées dans 4 ml de formamide et incubées à 65 C pendant 24 heures afin d'extraire le colorant et de mesurer la

coloration des papules (densité optique à 620 nm).

On a utilisé des groupes de 6 rats "Sprague-Dawley" pesant 200 g et chaque rat a reçu des injections intradermiques à deux endroits du dos. On a effectué l'expérience en comparaison avec un composé de référence, à savoir le D 600

(méthoxy-verapamil), qui est un agent bloqueur du calcium.

Traitements: Les composés soumis aux essais ont été administrés par voie intraveineuse en les injectant une fois simultanément avec le colorant. Les résultats obtenus sont

repris dans le tableau ci-après.

- 15 -

HYPERPERMEABILITE VASCULAIRE PROVOQUEE PAR LE PAF-ACETHER CHEZ

LE RAT (p<0,001 pour toutes les expériences).

Papule provoquée par le Dose PAF-acéther mg/kg Produits par Surface Coloration voie

intra- mm2 Pourcen- DO Pourcen-

veineuse- tage de tage de

diminu- diminu-

tion tion

Témoin - 102,7 - 1,149 -

+ 4,46 +0,086

D 600 (deux sujets 1 62,6 - 39 0,664 - 42 morts / 6) + 7,07 +0,099 Ginkgolide A 1 64,3 - 37 0,631 -

+ 4,2 +0,054

I Ginkgolide B 1 58,5 - 43 0,628 -

+ 4,85 +0,048

Ginkgolide C 1 68,1 - 34 0,701 - 39

+ 6,24 +0,066

Les ginkgolides n'ont exercé aucun effet sur l'hyperperméabilité provoquée par la 5-hydroxytryptamine, lOng. 4.2. Choc provoqué chez le lapin par le PAF-acéthero

- 16 -

Méthode: L'injection intraveineuse de PAF-acéther du facteur d'activation des plaquettes chez des lapins non anesthésiés de Nouvelle-Zélande pesant 2-2,5 kg provoque l'accroissement de la perméabilité vasculaire conduisant à un choc et à des pertes de plasma: à la dose la plus élevée, certains animaux manifestent un bronchospasme et des convulsions et meurent (pour les détails, voir M.

SANCHEZ-CRESPO, F. ALONSO, P. INARREA, V. ALVAREZ et J. EGIDO -

Vascular actions of Synthetic PAF Acether in the rat: Evidence for a platelet independant mechanism Immunopharmacology 1982,

4, 173-185).

Des injections de PAF-acéther (3 - 4 nmoles/kg) ont été effectuées dans la veine de l'oreille (dans 1 ml/kg de NaC1

0,9 % contenant 10 mg/ml du colorant bleu Trypan).

L'extravasation a été quantifiée après 30 minutes en mesurant la concentration en colorant dans le plasma (densité optique à 590 nm) après prélèvement de sang de l'artère

centrale de l'oreille.

Traitement: Les composés soumis aux essais (Ginkgolides A, B et C) ou le véhicule ont été perfusés dans la veine de l'oreille dans 45 ml de NaCl 0, 9 % pendant 1 heure avant l'injection de PAF-acéther. Le véhicule était constitué de 1,5 ml de propylène-glycol complété à 45 ml par un tampon isotonique de NaCl; les ginkgolides ont été administrés à la dose de 2 mg/kg par voie intraveineuse; les chiffres mentionnés dans le tableau ciaprès sont les valeurs moyennes

des 10 animaux de chaque groupe.

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EFFET PROTECTEUR DES GINKGOLIDES SUR LE CHOC PROVOQUE CHEZ LE

LAPIN PAR LE PAF-ACETHER

PAF-acéthe Extrava-

Traitement (nmoles/kg) sation Comportement

(D.O.)

Témoin (véhicule) - 0,896 Témoin (facteur 2 0,991 1 animal est mort d'activation (convulsions)

des plaquet-

tes) 4 1,051 7 animaux sont morts (convulsions, bronchospasme) Ginkgolide A 2 0,903

4 0,881

__ _ Pas de mortalité Ginkgolide B 2 0,827 Aucune modification 4 0,880 du comportement Ginkgolide C 2 0,910

4 0,875

4.3. Bronchoconstriction provoquée chez le cobaye

anesthésié par le PAF-acéther.

Méthode: (Pour les détails, voir B.B. VARGAFTIG, J. LEFORT, F. WAL, M. CHIGNARD et M.C. MEDEIROS - Non-steroidal

- 18 -

anti-inflammatory drugs of combined with anti-histamine and antiserotonin agents interfere with the bronchial and platelet

effects of PAF-Acether - Enr. J. Pharm. (1982) 82 121 - 130).

On a anesthésié des cobayes mâles "Hartley" (400 - 500 g) avec 2 g d'uréthane/kg par voie intraperitonéale, on les a soumis à une trachéotomie et on les a ventilés au moyen d'une pompe respiratoire: 70 80 courses / minute, volume de course: ml; on a pratiqué un pneumothorax pour abolir la respiration spontanée. On a introduit un cathéter dans la veine jugulaire

de droite et on a utilisé cette dernière pour les injections.

On a maintenu la résistance initiale constante à une pression de 10 cm de H20 suivant la méthode de Konzett et R8ssler et on a mesuré la voie respiratoire inondée avec un transducteur de bronchospasme UGO BASILE raccordé à un enregistreur "GEMINI" d'UGO BASILE. On a contr8ôlé la sensibilité bronchique de l'animal avec l'acétyl-choline (10-40 ng Kg-1 par voie intraveineuse) et, après avoir obtenu une réponse constante, on a injecté (par voie intraveineuse) tout d'abord le propylène-glycol et, 5 minutes plus tard, 60 ng/kg de PAF-acéther, ce qui a donné la bronchoconstriction témoin exprimée par le pourcentage de bronchoconstriction maximale obtenue en pinçant la trachée. Quarante minutes plus tard, on a administré les composés soumis aux essais par injection intraveineuse et, 5 minutes plus tard, on a administré 60 ng/kg de PAF-acéther par la même voie. Cette expérience a été effectuée sur trois groupes de 10 animaux chacun: le premier groupe, pour le Ginkgolide A, le deuxième groupe, pour le Ginkgolide B et le dernier groupe, pour le Ginkgolide C, tous à la dose de 1 mg/kg. Les chiffres du tableau ci-après sont les valeurs moyennes pour les 10 animaux

de chaque groupe.

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Pourcentage de Pourcentage

Charge bronchoconstric-

tion d'inhibition Solvant 83,6 Ginkgolide A 13,3 84,1 Solvant 80,2 Ginkgolide B 6,2 92,3 Solvant 79,4 Ginkgolide C 17,0 78,6 Essais cliniques préliminaires en cas de choc On a effectué une étude libre sur 13 patients atteints de blessures thermiques (surface totale brûlée > 50 %), patients que l'on a traités par le Ginkgolide B. Il a été démontré récemment que le leucotriene et le PAF-acéther semblaient être en cause dans les pertes de fluide, l'oedème et l'anergie caractérisant les blessures thermiques (BRAQUET Monique et al., Lancet, sous presse; Compte- rendus de

l'Académie des Sciences sous presse).

Le Ginkgolide B a été administré par perfusion (5 mg par heure pendant 6 heures, puis 2 mg par heure pendant les 48 heures suivantes). Il a été observé que ce traitement conduisait a un rétablissement plus rapide (diminution de l'oedème, diminution des pertes de plasma et amélioration de

l'issue clinique).

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TOXICITE

La valeur DL50 (= dose léthale à 50 %) n'a pas été atteinte à la dose de 600 mg/kg par voie orale chez la souris et le rat; ces composés ont une très faible toxicité, en particulier si cette valeur est comparée aux doses à utiliser.

PRESENTATION - POSOLOGIE

En vue de leur utilisation pour les êtres humains, ces composés peuvent être présentés en comprimés et en gélules pour utilisation orale, suppositoires pour l'administration rectale, lotions et gels pour applications locales, collyres et pommades en ophtalmologie, pâtes gingivales en stomatologie, en fioles pour l'administration par voie intraveineuse ou en pulvérisation pour -l'inhalation. Les chiffres ciaprès

indiquent les doses quotidiennes.

a) Par voie orale: En thérapie humaine, lorsqu'on utilise le plus actif de ces composés, à savoir le Ginkgolide B, les doses orales se situent entre 10 et 150 mg; si l'on utilise le Ginkgolide A ou le Ginkgolide C, les doses correspondantes sont de 20 à 250 mg et si l'on emploie le Ginkgolide M, les doses se situent entre

et 300 mg.

La forme préférée pour l'administration par voie orale est constituée de gélules contenant 20 mg de Ginkgolide B ou

des doses correspondantes des autres Ginkgolides.

b) Par voie rectale: Les suppositoires contiennent de 0,001 à 0,010 g de

ginkgolide par unité.

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c) Application locale: Les lotions, gels, suspension, collyres, pommadeset pâtes gingivales sont dosés à 0,01 à 0,1 % en poids de ginkgolide. d) Par voie intraveineuse: En thérapie humaine, lorsqu'on utilise le plus actif de ces composés, à savoir le Ginkgolide B, les doses pour l'administration par voie intraveineuse se situent entre 1 et mg; si l'on utilise le Ginkgolide A ou le Ginkgolide C, les doses correspondantes sont comprises entre 2 et 50 mg et si l'on utilise le Ginkgolide M, la dose se situe entre 5 et mg. Lorsqu'on utilise le Ginkgolide B, le dosage préféré se présente sous forme de fioles de 2 ml d'une solution isotonique contenant 2 mg de ce Ginkgolide (des doses correspondantes des Ginkgolides A, C ou M peuvent être substituées aux 2 mg de

Ginkgolide B).

e) Par pulvérisation: En thérapie humaine, lorsqu'on utilise le plus actif de ces composés, à savoir le Ginkgolide B, la cartouche prévue pour 200 pulvérisations peut contenir 200 mg de Ginkgolide en association avec le gaz propulseur approprié; si l'on utilise les Ginkgolides A ou C, la cartouche de pulvérisation doit contenir 250 mg de Ginkgolide et si l'on utilise le Ginkgolide

M, elle doit en contenir 400 mg.

Ci-après sont données les formulations d'un certain

nombre de préparations selon la présente invention.

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A - VOIE TRANSCUTANEE:

1 Lotion GINKGOLIDE 0,100 g Alcool éthylique à 95c 35,000 ml Monopropylèneglycol 40,000 ml Glycérine 10,000 ml Eau purifiée qsp 100, 000 ml 2 Lotion GINKGOLIDE 0,050 g Monopropylèneglycol 50,000 ml Méthylal 15,000 ml Alcool. éthylique à 95c 10,000 ml Ether polyglycolique de l'huile de ricin 1,000 ml Eau purifiée qsp 100,000 ml 3 Lotion anhydre GINKGOLIDE 0,075 g Myristate d'isopropyle 15,000 ml Alcool éthylique 25, 000 ml Glycéride oléique polyoxyéthylèné 30,000 ml Méthylal qsp 100,000 ml 4 Gel hydroalcoolique GINKGOLIDE 0,200 g Carbomer 941 2,000 g

Ether monoéthylique du diéthylène-

glycol 25,000 ml Alcool éthylique à 95c 55,000 ml Eau purifiée qsp 100, 000 ml

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Pansement occlusif GINKGOLIDE 0,020 g Glycérides saturés de C12 à C18 polyoxyéthylènés 0,530 g Isostéarate de propylèneglycol 0,050 g (sur support adhésif)

B - VOIE OCULAIRE

-1 Collyre (solution) GINKGOLIDE 0,003 g Polyoxyéthylèneglycol 400 0,300 g Polyoxyéthylèneglycol 4000 0,250 g Mercurothiolate sodique 0,0001 g Eau purifiée qsp 1,000 ml 2 Collyre (suspension) GINKGOLIDE (micronisé) 0,003 g Polysorbate 80 0,003 g Carboxyméthylcellulose sodique 0,006 g Chlorure de sodium 0,005 g Digluconate de Chlorhexidine 0,0002 g Eau purifiée qsp 1,000 ml 3 Collyre (suspension) GINKGOLIDE (micronisé) 0,001 g Polyvinylpyrrolidone 0,010 g Dextran 0,050 g Laurylsulfate de sodium 0, 001 g Bromure de cétrimonium 0,00005 g Eau purifiée qsp 1,000 ml

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4 Collyre (suspension) GINKGOLIDE (micronisé) 0,003 g Hydroxylpropylméthylcellulose 0,007 g Chlorure de sodium 0,006 g Sel disodique de l'acide éthylènediamine tétracétique 0,0005 g Chlorure de benzalkonium 0,0001 g Eau purifiée qsp 1,000 ml Pommade ophtalmique en capsules unitaires GINKGOLIDE (micronisé) 0,003 g Huile de vaseline 0,057 g Vaseline 0,120 g Pour 1 capsule composée de gélatine, de glycérine de sorbitol, d'eau et (éventuellement) de colorant(s) contenant

180 mg de pommade ophtalmique.

6 Pommade ophtalmique en tube GINKGOLIDE (micronisé) 0,001 g Huile de vaseline 0,400 g Lanoline hydrogénée qsp 1,000 gramme

C -VOIE RECTALE

1 Suppositoires GINKGOLIDE 0,001 g Huile neutre 0,100 g Bromure de cetrimonium 0,0005 g Mélange de glycérides semi-synthétiques qsp 2,000 grammes

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2 Suppositoires GINKGOLIDE 0,005 g Acide silicique 0,005 g Lanoline 0,500 g Mélange de glycérides semi-synthétiques qsp 3,000 grammes 3 Suppositoires GINKGOLIDE 0,002 g Parahydroxybenzoate de méthyle 0,002 g Cire blanche 0,100 g cholestérol 0,020 g Beurre de cacao qsp 2,000 g 4 Suppositoires GINKGOLIDE 0,003 g Glycérine 0,050 g Polyoxyéthylèneglycol 4000 1,000 g Polyoxyéthylèneglycol 6000 qsp 2,300 g Pommade rectale GINKGOLIDE 0,100 g Lanoline 40,000 g Huile de vaseline 15,000 g Vaseline qsp 100,000 g

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D - PATES GINGIVALES

Exemple n 1:

GINKGOLIDE 0,100 g Silicate d'Aluminium et de Magnésium colloidal 1,000 g Carboxyméthylcellulose sodique 0,500 g Glycérine 30,000 g Phosphate dicalcique 50,000 g Laurylsulfate de sodium 2,000 g Parahydroxybenzoate de méthyle 0,120 g Parahydroxybenzoate de propyle 0,030 g Essence de menthe 0,020 g Eau purifiée qsp 100,000 g

Exemple n 2:

GINKGOLIDE 0,010 g Acide silicique 1,000 g Ester propylèneglycolique de l'acide alginique 1,000 g Laurylsulfate de sodium 0,500 g Glycérine 30, 000 g Lactate d'aluminium 0,500 g Fluorure de sodium 0,002 g Parahydroxybenzoate de méthyle 0,150 g

Arôme q.s.

Eau purifiée qsp 100,000 g

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Exemple n 3

GINKGOLIDE 0,050 g Carbomer 934 2,000 g Dioxyde de titane 2,000 g Laurylsulfate de sodium 0,100 g Menthol 0,005 g Glycérine 10,000 g Acide sorbique 0,025 g Solution d'hydroxyde de sodium q.s. pour pH 5 Eau purifiée qsp 100,000 g

E - FORME ORALE

1 Comprimé GINKGOLIDE 0,015 g Lactose 0,042 g Cellulose microcristalline 0,030 g Amidon de mais 0,010 g Stéarate de magnésium 0,003 g Pour 1 comprimé pesant: 0,100 g 2 Comprimé

GINKGOLIDE 0,005 g-

Mannitol 0,055 g Carboxyméthylamidon 0,010 g Talc 0,030 g Pour 1 comprimé pesant: 07100 g

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3 Capsule dure GINKGOLIDE 0,020 g Lactose 0,035 g Talc 0,035 g Pour 1 gélule composée de gélatine et de dioxyde de

titane (taille 4 ou E) contenant 90 milligrammes de poudre.

* 4 Capsule dure GINKGOLIDE 0,010 g Acide silicique 0,003 g Sulfate de calcium 0,050 g Amidon de froment 0,025 g Stéarate de magnésium 0,002 g Pour 1 gélule composée de gélatine, de dioxyde de titane et (éventuellement) de colorant(s) (taille 4 ou E)

contenant 90 milligrammes de poudre.

Capsule molle GINKGOLIDE (micronisé) 0,020 g Polyoxyéthylèneglycol 400 0, 211 g Glycérine 0,008 g Acide sorbique 0,001 g Eau purifiée 0,010 g Pour 1 capsule composée de gélatine, de glycérine, de sorbitol, d'eau et (éventuellement) de colorant(s) contenant

250 milligrammes de pâte.

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F - ABROSOL

Formule n 1: GINKGOLIDES A + B (micronisé) 0,020 g Trioléate d'éthyle 0, 020 g Myristate d'isopropyle 0,200 g Dichlorofluorométhane qsp 5,000 ml Conditionnement en flacon pressurisé avec valve doseuse

de 50 microlitres.

Formule n 2 GINKGOLIDES A + B (micronisé) 0,010 g Acide oléique 0,005 g Palmitate d'isopropyle 0,700 g Saccharine 0,002 g Dichlorofluorométhane qsp 5,000 ml Conditionnement en flacon pressurisé avec valve doseuse de 50 microlitres;

G - FORME INJECTABLE

Formule n 1 (solution prête à l'emploi) GINKGOLIDE B 0,010 g Monopropylèneglycol rectifié 2,400 g Eau pour préparations injectables qsp 3,000 ml

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Formule n 2 (solution prête à l'emploi) GINKGOLIDE B 0,002 g Alcool éthylique à 95c (exprimé en alcool pur) 0,200 ml Monopropylèneglycol rectifié 0,500 ml Eau pour préparations injectables qsp 1,000 ml Formule n 3 (solution prête à l'emploi) GINKGOLIDE B 0,001 g Ether polyglycolique de l'huile de ricin 0,400 g Eau pour préparations injectables qsp 2,000 ml Formule n 4 (2 ampoules à mélanger extemporanément ou seringue mélangeuse à 2 compartiments) Soluté "a": GINKGOLIDE B 0,003 g Alcool benzylique 0,005 g Lactate d'éthyle rectifié qsp 0,5 ml Soluté "b": Alcool benzylique. 0,005 g Eau pour préparations injectables qsp 0,5 ml

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Formule n 5 (suspension aqueuse) GINKGOLIDE B (micronisé) 0,005 g Carboxyméthylcellulose sodique 0,005 g Polyvinylpyrrolidone 0,025 g Alcool benzylique 0,010 g Eau pour préparations injectables qsp 1,000 ml Formule n 6 (Suspension huileuse): GINKGOLIDE B (micronisé) 0,005 g Trioléate d'éthyle 0,0025 g Huile neutre qsp 1,000 ml

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Claims

REVENDICATIONS

1. Composition thérapeutique comprenant, associé à un excipient pharmaceutiquement acceptable et un ginkgolide ou un de ses dérivés, le ginkgolide étant présent en une quantité

efficace pour traiter une maladie provoquée par le PAF-acéther.

2. Composition thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ginkgolide est choisi parmi le groupe comprenant le Ginkgolide A, le Ginkgolide B, le Ginkgolide C et le Ginkgolide M.

3. Composition thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ginkgolide est le Ginkgolide B, la composition est adaptée pour l'administration par voie orale et

le Ginkgolide B est présent en une quantité de 10 à 150 mg.

4. Composition thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ginkgolide est le Ginkgolide B, la composition est adaptée pour une administration par voie intraveineuse et le Ginkgolide B est présent en une quantité de

1 à 20 mg par unité de dosage.

5. Composition thérapeutique selon la revendication 1 destinée à l'application locale, caractérisée en ce que le ginkgolide est présent dans la composition au dosage pondéral

de 0,01 à 0,1%.

6. Composition thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ginkgolide est le Ginkgolide B, la composition est adaptée pour une inhalation par pulvérisation et le Ginkgolide B est présent en une quantité d'environ 1 mg

par dose de pulvérisation.