FR2488409A1 - Procede d'analyse par immunofluorescence a polarisation utilisant une source de lumiere flash - Google Patents
Procede d'analyse par immunofluorescence a polarisation utilisant une source de lumiere flash Download PDFInfo
- Publication number
- FR2488409A1 FR2488409A1 FR8110699A FR8110699A FR2488409A1 FR 2488409 A1 FR2488409 A1 FR 2488409A1 FR 8110699 A FR8110699 A FR 8110699A FR 8110699 A FR8110699 A FR 8110699A FR 2488409 A1 FR2488409 A1 FR 2488409A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- polarization
- light
- sensors
- sample
- filter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000010287 polarization Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 5
- 239000003990 capacitor Substances 0.000 claims description 3
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 11
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 11
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 11
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 9
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UVTNFZQICZKOEM-UHFFFAOYSA-N disopyramide Chemical compound C=1C=CC=NC=1C(C(N)=O)(CCN(C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 UVTNFZQICZKOEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005669 field effect Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940088938 norpace Drugs 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6445—Measuring fluorescence polarisation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/805—Optical property
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
L'INVENTION CONCERNE UN PROCEDE D'ANALYSE PAR IMMUNOFLUORESCENCE A POLARISATION UTILISANT UNE SOURCE DE LUMIERE FLASH. POUR DETERMINER LE POURCENTAGE DES SUBSTANCES PARTICIPANT A UNE IMMUNOREACTION, ON UTILISE UN PROCEDE D'ANALYSE PAR IMMUNOFLUORESCENCE A POLARISATION METTANT EN OEUVRE UNE SOURCE DE LUMIERE FLASH, DONT LA LUMIERE TRAVERSE UN FILTRE D'EXCITATION 2, UN FILTRE DE POLARISATION 3 ET TOMBE SUR UNE CUVETTE DE MESURE 5 CONTENANT UN ECHANTILLON A ANALYSER, EN DELIVRANT UNE LUMIERE DE FLUORESCENCE A DES MULTIPLICATEURS PHOTONIQUES 9, 13 DONT LES SIGNAUX SONT COMPARES DANS UN DISPOSITIF D'EXPLOITATION ET D'AFFICHAGE 14. APPLICATION NOTAMMENT A L'ETUDE DES IMMUNOREACTIONS ET A L'ANALYSE MEDICALE.
Description
i Actuellement on détermine de façon quantitative de nombreuses substances
biologiques en utilisant des
procédés immunologiques. Le procédé d'analyse radio-
immunologique, qui s'est imposé en tant que premier procédé d'analyse d'une nouvelle génération de procédés de détermination de traces avec sa sensibilité s'étendant jusque dans le domaine moléculaire, est aujourd'hui supplanté dans une large mesure par des procédés non radio- actifs de détection, qui possèdent une sensibilité à peu près équivalente. L'un de ces procédés est désigné sous le nom
d'analyse par immunofluorescence.
L'utilisation de la lumière flash ou lumière éclair pour la technique d'analyse par immunofluorescence (analyse impulsionnelle par immunofluorescence ou PFIA), du type décrit dans la demande de brevet allemand publiée sous le numéro provisoire P 25 23 209.1, présente de nombreux avantages par rapport à d'autres procédés d'immuno-analyse
non isotopiques.
L'objet de la présente invention est d'utiliser une lumière flash et la polarisation de fluorescence pour la
technique de l'immuno-analyse.
D'après la littérature (Parker, CW "Weir, manuel d'immunologie expérimentale", troisième édition, volume 1, pages 18.1 et suivantes), on sait que des molécules, aptes à fournir une fluorescence et excitées par une lumière polarisée, émettent une énergie lumineuse dont les valeurs de polarisation dépendent de façon décisive de la taille des molécules, mais, à part cela, également d'autres paramètres (par exemple du nombre et du type de ces molécules, de l'état des molécules - fixées dans une position
ou bien non fixées -).
Dans toutes les immunoréactions, la taille des molécules est modifiée lors de la formation du complexe antigène-anticorps. Par conséquent, sous l'effet de l'immunoréaction, les caractéristiques de polarisation de fluorescence d'une substance immunologique marquée par
fluorescence subissent une modification.
L'évaluation de l'intensité de la fluorescence à polarisation dans les plans de polarisation permet-- même dans le cas o l'on ne prend pas en compte les valeurs obtenues sans lumière polarisée -, de détecter de façon simple des immunoréactions. L'utilisation de la lumière flash permet alors, par rapport à des sources usuelles de lumière ininterrompue intense, d'utiliser de façon impulsionnelle des quantités de lumière extrêmement intenses pour réaliser l'excitation de la fluorescence et de ne progresser en général par conséquent que jusqu'aux limites de la sensibilité théoriquement possible, et ce, sans que l'échantillon soit endommagé par un développement excessif de chaleur associée, ou sans que la valeur mesurée soit influencée d'une manière mesurable par
l'effet de blanchiment fluorophotographique.
A titre d'exemple, on a décrit ci-dessous et illustré schématiquement aux dessins annexés une forme de réalisation d'un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé
selon l'invention.
La figure 1 représente une forme de réalisation du dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon - l'invention; et La figure 2 montre un diagramme reproduisant les résultats obtenus dans le cas d'un exemple de réalisation
pratique.
Ci-après, en référence à la figure 1, on va décrire la constitution et expliciter le fonctionnement d'une forme de réalisation simple, éprouvée et confirmée d'un -ppa-ril pour la mise en oeuvre uu procédé d'analyse par
immuno-fluorescence à polarisation selon l'invention.
La lumière parvenant d'une source de lumière flash ou éclair 1 (dans le cas le plus simple une lampe au xénon) est mise sous forme monochromatique par le filtre d'excitation 2 (dans le cas le plus simple, un filtre interférentiel), est polarisée par le filtre de polarisation
3 et atteint la cuvette 5 après avoir traversé une fente 4.
Suivant une direction située d'un câté et décalée à 900 de la direction d'incidence du rayonnement, la lumière fluorescente traverse une fente 6, un filtre interférentiel 7 conçu en fonction de la longueur d'onde d'émission, et un filtre de polarisation 8 et atteint ensuite un multiplicateur
photonique 9.
Suivant une direction située de l'autre côté et décalée à 900 de la direction d'incidence du rayonnement, la
lumière fluorescente traverse la fente 10, un filtre inter-
férentiel 11 conçu en fonction de la longueur d'onde d'émission, et un filtre de polarisation 12 et ensuite le
multiplicateur photonique 13.
Les signaux délivrés par les multiplicateurs photoniques 9 et 13 sont comparés entre eux dans le système
d'exploitation 14 et sont finalement évalués et affichés.
Un commutateur 15 permet de débrancher l'un des deux multiplicateurs photoniques, de-sorte que - pour une orientation correspondante du filtre de polarisation 3 -, l'appareil peut être utilisé sous la forme d'un simple fluorimètre à polarisation ne déterminant pas une différence, ou bien sous la forme d'un fluorimètre non polarisé dans le
cas o ce filtre est pivoté.
Dans le système d'exploitation 14, les
impédances des signaux impulsionnels provenant des multi-
plicateurs photoniques 9 et 13 sont d'abord réduites selon une technique classique connue pour les amplificateurs opérationnels à gain unité, puis les signaux sont convertis, dans des amplificateurs opérationnels respectifs montés en
intégrateurs, en une tension dépendant de l'énergie impul-
sionnelle, et sont utilisés pour charger des condensateurs respecrLjL. Les tensions, qui aepenaent ces signaux et sont appliquées aux deux condensateurs, sont introduites dans un amplificateur opérationnel équipé d'une entrée à transistor à effet de champ FET. A la sortie de l'amplificateur opérationnel apparaît une tension dont l'amplitude dépend linéairement de la différence des signaux reçus par les
multiplicateurs photoniques.
Les filtres analyseurs de polarisation 7 et 11 sont pivotés de façon appropriée de 900 l'un par rapport à l'autre; le filtre de polarisation 3 est monté de façon appropriée de manière à pouvoir pivoter dans le trajet d'incidence du rayonnement d'excitation, afin de pouvoir garantir une utilisation optimale de l'appareil même dans le cas du passage d'une utilisation à une autre - uniquement grâce à un réglage correspondant des filtres.
On va décrire ci-après un exemple d'utilisation.
De nombreux médicaments modernes puissants ont pour défaut de ne présenter qu'un domaine d'action biologique réduit et une demi-vie biologique variant fortement d'un
patient à un autre.
Des contrôles permanents du taux sanguin sont obligatoires dans le cas de ces médicaments afin de pouvoir effectuer d'une manière aussi précoce que possible des corrections de dose afin d'obtenir une protection vis-à-vis d'effets secondaires fatals intervenant, conditionnés par des taux sanguins trop élevés. Quelques-unes de ces substances sont par exemple connues sous les noms de
DIGOXINE, NORPACE, AMIKACINE, KANAMYCINE et GENTAMICINE.
La détermination du taux sanguin de gentamicine peut être effectuée, conformément à la présente invention, d'une manière simple, rapide, fiable et moyennant une précision extrêmement élevée 1). A respectivement 2 ml d'une solution de
gentamicine, marquée à la fluorescéine possédant une concen-
tration appropriée dans un liquide tampon TRIS possédant une molarité égale à 0,05 et possédant une valeur du pH réglée à la valeur de 7,1, on ajouteé: pl (Pl = microlitre) A; d'an sérum de patient B) d'un sérum témoin ne comportant pas de gentamicine C) d'un sérum témoin comportant 1 pg de gentamicine/ml D) d'un sérum témoin comportant 2 pg de gentamicine/ml E) d'un sérum témoin comportant 4 pg de gentamicine/ml F) d'un sérum témoin comportant 8 pg de gentamicine/ml
G) d'un sérum témoin comportant 16 pg de gentamicine/ml.
et on soumet l'ensemble à l'incubation pendant 10 minutes à
la température ambiante.
2). On introduit les échantillons successivement
dans une cuvette de mesure 5 située dans l'appareil.
Au moyen d'un flash ou éclair on détermine et on
lit la valeur différentielle de fluorescence.
3). On compare la valeur différentielle de fluorescence du sérum de patient à la courbe étalon formée par les sérums témoins B à G; de ce fait, on obtient
aussitôt la teneur en gentamicine du sérum de patient. -
Lors du présent essai, on a obtenu les valeurs suivantes: A. Sérum de patient 6,513 V B. Sérum témoin à 0 Pg/ml 9,144 V C. Sérum témoin à 1 pg/ml 7,974 V D. Sérum témoin à 2 pg/ml 7,037 V E. Sérum témoin à 4 Pg/ml 6,045 V F. Sérum témoin à 8 lg/ml 4,665 V G. Sérum témoin à 16 Pg/ml 4, 534 V Sur la figure 2, on a représenté graphiquement
les valeurs sur un papier semi-logarithmique. La représenta-
tion graphique reproduit la courbe étalon.
D'après la courbe étalon, il ressort que le taux en gentamicine dans le sérum du patient était égale à
2,8 Pq/ml.
Ci-après, on va indiquer les possibilités
d'utilisation du procédé.
Tous les immunocomplexes caractérisés par une substance de marquage fluorescente peuvent être évalués en utilisant le procédé d'immunofluorescence à polarisation. Ce procédé peu.t cre utilise auSSi oien pour i'immuno-analyse
compétitive que pour l'immuno-analyse "en sandwich".
L'utilisation de l'immuno-analyse à polarisation peut être appliquée notamment à la détection et à la détermination quantitative, lors desquelles des éléments participant à l'immunoréaction et présentant des molécules de taille réduite et moyenne jouent un rôle et o l'on attache une valeur importante à une manipulation simple et surtout à une exécution extrêmement rapide des déterminations, lorsque l'on s'efforce d'obtenir une sensibilité et une précision
élevées et même extrêmement élevées.
La nécessité de séparer les participants liés d'une immunoréaction par rapport aux participants non liés de
l'immunoréaction, ce qui est l'un des plus grands inconvé-
nients de toutes les immuno-analyses hétérogènes, est supprimée dans le cas de la présente immuno-analyse homogène, lors de laquelle la taille des molécules influe sur le signal de mesure; en effet, les substances immunologiques, dont les molécules possèdent une taille réduite, sont, dans des liquides, soumises beaucoup plus fortement au mouvement
moléculaire brownien que les molécules de grande taille.
Par conséquent, la disposition spatiale de petites molécules varie déjà au cours du bref intervalle de temps entre l'excitation de la fluorescence et l'émission de la lumière fluorescente et il apparaît par conséquent des molécules beaucoup moins polarisées que les grosses molécules, dont la disposition spatiale et par conséquent, la direction de polarisation d'émission varient seulement de
façon minimale pendant cet intervalle de temps.
Une solution de substances immunologiques constituées par de petites molécules fluorescentes qui, en lumière non polarisée, est entièrement équivalente à une solution de grosses molécules fluorescentes de substances immunologiques, du point de vue de leurs propriétés de fluorescence, possède, conformément à la lumière polarisée, une polarisation seulement minimale par rapport à la solution des grosses molécules. Cependant, dès que -par exemple, par suite d'une immunoréaction - les petites molécules se
réunissent à d'autres substances (- pour former un immuno-
complexe -) et par conséquent augmentent de taille, elles sont beaucoup moins soumises au mouvement moléculaire brownien et peuvent par conséquent être détectées de façon simple - et d'une manière quasiment quantitative -dans la
lumière de polarisation.
On va décrite ci-après les avantages du procédé
conforme à l'invention.
Le procédé d'analyse par immunofluorescence à polarisation conforme à la présente invention présente un nombre important d'avantages par rapport à des procédés
usuels d'immuno-analyse.
Grâce à la technique de la lumière flash et à la technique différentielle, ce procédé réduit de plusieurs ordres de grandeur le fond par rapport aux meilleurs procédés classiques d'immuno-analyse et atteint par conséquent aisément leurs niveaux de sensibilité. Ce procédé n'est pas entaché des risques et
d'autres inconvénients des procédés d'analyse radio-
immunologique. Il peut être mis en oeuvre moyennant une dépense extrêmement faible et de façon correspondante sans difficultés, et ce, rapidement et avec une précision très élevée. Il peut être utilisé également sans difficulté, à la place de déterminations de fins de réaction, pour des déterminations cinétiques et, par conséquent, pour la
détermination de la vitesse de l'immunoréaction.
L'un des avantages les plus importants par rapport à la plupart des procédés immunologiques usuels est
son aptitude à être utilisé en tant que procédé d'immuno-
analyse homogène.
Pour de nombreuses déterminations, on peut utiliser le procédé conforme à l'invention en évitant la l'opération pénible et très critique, extrêmement complexe, qui nécessite beaucoup de temps et qui est habituellement nécessaire avant la mesure, en vue de séparer des substances immunologiques liées par l'immunoréaction de substances
immunologiques non liées par cette réaction.
2488409-
Claims (5)
1. Procédé pour déterminer la portée d'une immunoréaction et par conséquent le pourcentage des partenaires prenant part à l'immunoréaction, au moyen d'un procédé d'analyse par immunofluorescence à polarisation, caractérisé en ce qu'on utilise comme source de lumière (1) une lumièreéclair ou un flash électronique produit par
exemple par une lampe éclair au xénon.
2. Procédé de détermination d'immunoréactions dans des solutions selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on détermine le niveau de la valeur de fluorescence d'un échantillon (en 5) au moyen de deux capteurs de lumière (9, 13), disposés de manière à faire chacun un angle par
rapport à la direction du rayon lumineux polarisé d'excita-
tion mis sous forme monochromatique (en 2) et tombant sur l'échantillon (en 5), et équipés chacun d'un filtre coloré (7, 11) et d'un filtre analyseur de polarisation (8, 12) pouvant être réglé dans son plan, à savoir par exemple des multiplicateurs photoniques, en tenant compte de la différence des valeurs mesurées par les deux
capteurs (9, 13).
3. Procédé de détermination d'immunoréactions
selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que
l'on utilise, à la place de deux capteurs réglables (9, 13), dans des plans respectifs de polarisation différents l'un de l'autre, un seul capteur de lumière équipé d'un filtre coloré et d'un filtre de polarisation, par exemple un multiplicateur photonique, et que l'on fait pivoter ce filtre analyseur de polarisation ou bien le tiltre ae polarisation situé dans le faisceau de lumière d'excitation, d'une certaine valeur entre les mesures et qu'on tire de la différence des valeurs de mesures provoquée par la rotation, des conclusions concernant l'échantillon.
4. Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé
selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé
en ce que la lumière polarisée, mise sous forme mono-
chromatique, traverse la cuvette (5) contenant l'échantillon sur une distance comptée longitudinalement, qui est égale à un multiple du diamètre de la cuvette, tandis que les capteurs sont disposés sur les côtés et déterminent, avec un grand champ angulaire, les informations de fluorescence disponibles sur des surfaces étendues situées sur les côtés de la cuvette.
5. Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé
selon l'une quelconque des revendications 1, 2 et 4,
caractérisé en ce qu'un transformateur d'impédance, un intégrateur et un condensateur pour la mémorisation des valeurs de mesure maximum sont branchés en série et en aval de chaque capteur (9, 13) et qu'un seul dispositif (14) d'affichage de valeurs différentielles permettant d'établir les différences entre les données de polarisation est branché
en série et en aval des deux capteurs (9, 13).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3020730 | 1980-05-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2488409A1 true FR2488409A1 (fr) | 1982-02-12 |
| FR2488409B1 FR2488409B1 (fr) | 1986-06-06 |
Family
ID=6103670
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR8110699A Expired FR2488409B1 (fr) | 1980-05-31 | 1981-05-29 | Procede d'analyse par immunofluorescence a polarisation utilisant une source de lumiere flash |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4419583A (fr) |
| JP (1) | JPS5761947A (fr) |
| AU (1) | AU7117381A (fr) |
| CA (1) | CA1182659A (fr) |
| FR (1) | FR2488409B1 (fr) |
| GB (1) | GB2087547B (fr) |
| IT (1) | IT1142529B (fr) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0223427A1 (fr) * | 1985-10-25 | 1987-05-27 | Alta Diagnostics Machines Ltd | Méthode et appareil de détermination du contenu d'anticorps dans le sang |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3208919A1 (de) * | 1982-03-12 | 1983-09-22 | Gesellschaft für Strahlen- und Umweltforschung mbH, 8000 München | Anordnung zur messung der fluoreszenzpolarisation |
| US4564598A (en) * | 1982-07-12 | 1986-01-14 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Limited volume method for particle counting |
| JPS59182341A (ja) * | 1983-03-31 | 1984-10-17 | Horiba Ltd | 試料発光の異方性測定装置 |
| JPS6061634A (ja) * | 1983-09-14 | 1985-04-09 | Omron Tateisi Electronics Co | 温度測定装置 |
| JPS62863A (ja) * | 1985-06-26 | 1987-01-06 | Nippon Tectron Co Ltd | 自動分析装置 |
| JPS62239058A (ja) * | 1986-04-11 | 1987-10-19 | Nippon Tectron Co Ltd | 自動分析装置 |
| JPS6259841A (ja) * | 1985-09-10 | 1987-03-16 | Res Dev Corp Of Japan | 直線偏光を用いる免疫反応の測定方法および装置 |
| AT387860B (de) * | 1985-09-16 | 1989-03-28 | Optical Sensing Technology | Verfahren und vorrichtung zur tumordiagnose mittels sera |
| EP0241268A3 (fr) * | 1986-04-11 | 1989-02-08 | Sclavo Inc.West Coast | Fluorimètre à lumière pulsée |
| US4750837A (en) * | 1986-04-11 | 1988-06-14 | Sclavo Inc. | Fluorometer with reference light source |
| US5270788A (en) * | 1986-05-27 | 1993-12-14 | Boris Cercek | Apparatus for measuring polarization of bathochromically shifted fluorescence |
| GB8700061D0 (en) * | 1987-01-05 | 1987-02-11 | Whatman Reeve Angel Plc | Light absorption analyser |
| JPH0737986B2 (ja) * | 1988-03-29 | 1995-04-26 | 松下電器産業株式会社 | 免疫的検出方法 |
| US5061076A (en) * | 1989-01-31 | 1991-10-29 | Enzo Diagnostics, Inc. | Time-resolved fluorometer |
| US5302349A (en) * | 1989-06-13 | 1994-04-12 | Diatron Corporation | Transient-state luminescence assay apparatus |
| US5308581A (en) * | 1990-12-12 | 1994-05-03 | Avl Medical Instruments Ag | Substance of an optical fluorescence measuring arrangement for measuring the pH of a sample and optical sensor with such an indicator substance |
| DE4309328C2 (de) * | 1993-03-18 | 1998-03-12 | Volker Ost | Verfahren zur Differenzierung, Konzentrationsbestimmung und Sortierung von Erythrozyten, Thrombozyten und Leukozyten |
| US6140653A (en) * | 1998-03-27 | 2000-10-31 | Vysis, Inc. | Large-field fluorescence imaging apparatus |
| US6320196B1 (en) | 1999-01-28 | 2001-11-20 | Agilent Technologies, Inc. | Multichannel high dynamic range scanner |
| US6964809B2 (en) * | 2002-02-15 | 2005-11-15 | Pedro M. Buarque de Macedo | Large high density foam glass tile |
| US6970241B1 (en) | 2004-08-24 | 2005-11-29 | Desa Richard J | Device for enabling slow and direct measurement of fluorescence polarization |
| US11360028B2 (en) | 2019-06-20 | 2022-06-14 | Cilag Gmbh International | Super resolution and color motion artifact correction in a pulsed hyperspectral, fluorescence, and laser mapping imaging system |
| US11276148B2 (en) | 2019-06-20 | 2022-03-15 | Cilag Gmbh International | Super resolution and color motion artifact correction in a pulsed fluorescence imaging system |
| US11793399B2 (en) | 2019-06-20 | 2023-10-24 | Cilag Gmbh International | Super resolution and color motion artifact correction in a pulsed hyperspectral imaging system |
| US11288772B2 (en) | 2019-06-20 | 2022-03-29 | Cilag Gmbh International | Super resolution and color motion artifact correction in a pulsed fluorescence imaging system |
| US11398011B2 (en) | 2019-06-20 | 2022-07-26 | Cilag Gmbh International | Super resolution and color motion artifact correction in a pulsed laser mapping imaging system |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3971952A (en) * | 1973-09-14 | 1976-07-27 | Yeda Research & Development Co. Ltd. | Method of detecting abnormal behavior of mammalian cells |
| DE2523209A1 (de) * | 1975-05-26 | 1976-12-16 | Noeller Hans Guenter Dr Med | Elektrooptische, substanzschonende erfassung von nicht zellgebundenen immunostoffen |
| US4115699A (en) * | 1977-06-16 | 1978-09-19 | Kabushiki Kaisha Nihon Kotai Kenkyujo | Apparatus for sensitive detection and quantitative analysis of biological and biochemical substances |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3679309A (en) * | 1970-05-04 | 1972-07-25 | Japan Spectroacopic Co Ltd | Instruments for measuring molecular orientations with the aid of fluorescence |
| DE2408646A1 (de) * | 1974-02-22 | 1975-08-28 | Max Planck Gesellschaft | Reaktionskinetisches messgeraet |
| JPS5282722A (en) * | 1975-12-26 | 1977-07-11 | Kotai Kasei Kk | Immunologically measuring method and apparatus |
| IL49130A (en) * | 1976-03-02 | 1979-07-25 | Elscint Ltd | Method for rapid diagnosis of fetus maturity |
| US4295199A (en) * | 1979-10-22 | 1981-10-13 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Automatic fluorometer and data processor for performing fluorescent immunoassays |
-
1981
- 1981-05-26 US US06/266,968 patent/US4419583A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-05-29 FR FR8110699A patent/FR2488409B1/fr not_active Expired
- 1981-05-29 IT IT48575/81A patent/IT1142529B/it active
- 1981-05-29 CA CA000378659A patent/CA1182659A/fr not_active Expired
- 1981-05-29 AU AU71173/81A patent/AU7117381A/en not_active Abandoned
- 1981-05-29 GB GB8116406A patent/GB2087547B/en not_active Expired
- 1981-05-30 JP JP56083695A patent/JPS5761947A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3971952A (en) * | 1973-09-14 | 1976-07-27 | Yeda Research & Development Co. Ltd. | Method of detecting abnormal behavior of mammalian cells |
| DE2523209A1 (de) * | 1975-05-26 | 1976-12-16 | Noeller Hans Guenter Dr Med | Elektrooptische, substanzschonende erfassung von nicht zellgebundenen immunostoffen |
| US4115699A (en) * | 1977-06-16 | 1978-09-19 | Kabushiki Kaisha Nihon Kotai Kenkyujo | Apparatus for sensitive detection and quantitative analysis of biological and biochemical substances |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CLINICAL CHEMISTRY vol. 19, no. 8, 1973; R.D. SPENCER et al. "Design, construction, and two applications for an automated flow-cell polarization fluorometer with digital read out : Enzyme-inhibitor (Antitrypsin) assay and antigen-antibody (Insulin-insulin Antiserum) assay", pages 838-844 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0223427A1 (fr) * | 1985-10-25 | 1987-05-27 | Alta Diagnostics Machines Ltd | Méthode et appareil de détermination du contenu d'anticorps dans le sang |
| US4889815A (en) * | 1985-10-25 | 1989-12-26 | Alta Diagnostic Machines Limited | Nephelometric method for determination of an antigen or antibody content in whole blood |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2087547A (en) | 1982-05-26 |
| JPS5761947A (en) | 1982-04-14 |
| US4419583A (en) | 1983-12-06 |
| CA1182659A (fr) | 1985-02-19 |
| FR2488409B1 (fr) | 1986-06-06 |
| AU7117381A (en) | 1981-12-10 |
| IT8148575A0 (it) | 1981-05-29 |
| IT1142529B (it) | 1986-10-08 |
| GB2087547B (en) | 1985-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FR2488409A1 (fr) | Procede d'analyse par immunofluorescence a polarisation utilisant une source de lumiere flash | |
| US4058732A (en) | Method and apparatus for improved analytical fluorescent spectroscopy | |
| US4521521A (en) | Particle reagent size distribution measurements for immunoassay | |
| EP0760952B1 (fr) | Methode et dispositif pour la determination d'un analyte, notamment d'une bacterie, par voie magnetique | |
| JP4201058B2 (ja) | 中間統計データに基づいて試料を特徴付けする方法 | |
| Mayo et al. | Immunoassay based on surface plasmon oscillations | |
| JPH07146295A (ja) | ラマン分光測定による免疫分析方法及び装置 | |
| Roth et al. | Improving the sensitivity of fluorescence‐based immunoassays by photobleaching the autofluorescence of magnetic beads | |
| US5750410A (en) | Method of and apparatus for immune analysis | |
| EP0115532A1 (fr) | Dispositif et procedes d'analyse immunologique | |
| CH621628A5 (en) | Process for nephelometric analysis | |
| BE1012241A3 (fr) | Procede de depistage d'analyte et trousse pour la mise en oeuvre d'un tel procede. | |
| US4799796A (en) | Method and apparatus for measuring immunological reaction with the aid of phase-modulation of light | |
| WO2014140468A1 (fr) | Nouvelle méthode de dosage en flux d'un objet d'intérêt | |
| FR2491624A1 (fr) | Procede pour le fonctionnement d'un appareil d'analyse automatique | |
| EP2171459B1 (fr) | Procede de dosage d'un analyte dans un milieu liquide | |
| EP0086170A1 (fr) | Procédé de granulométrie interférentielle globale applicable notamment à des particules biologiques polydispersées | |
| FR2777656A1 (fr) | Procede d'amplification de la formation de complexes ligands-recepteurs et ses utilisations | |
| EP2596338B1 (fr) | Procede d'estimation de la quantite d'entites deposees sur des microparticules en suspension dans une solution, dispositif associe et utilisation de ce dispositif. | |
| Wammes et al. | Surface plasmon resonance (SPR) sensors for detecting allergens in food | |
| US7993855B2 (en) | Use of additives to lower the rate of a binding reaction | |
| JPS62116263A (ja) | 直線偏光の多重散乱を用いる免疫反応の測定方法および装置 | |
| FR2627286A1 (fr) | Procede et appareil pour l'examen d'un echantillon en immunologie | |
| WO2003058244A2 (fr) | Procede d'obtention d'un systeme d'etalonnage | |
| FR2366571A1 (fr) | Procede de determination quantitative d'antigenes ou d'anticorps |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |